Glucocorticoizi Reglementarea expresiei FosB / ΔFosB indusă de expunerea cronică la opiacee în sistemul de stres creierului (2012)

PLoS Unul. 2012; 7 (11): e50264. doi: 10.1371 / journal.pone.0050264. Epub 2012 Nov 21.
 

Sursă

Grupul de Farmacologie Celulară și Moleculară, Departamentul de Farmacologie, Universitatea de Medicină din Murcia, Spania.

Abstract

Utilizarea cronică a medicamentelor de abuz profund modifică sistemul care răspunde la stres. Expunerea repetată la morfină duce la acumularea factorului de transcripție ΔFosB, în special în zonele creierului asociate cu răsplata și stresul. Efectele persistente ale ΔFosB asupra genelor țintă pot juca un rol important în plasticitatea indusă de medicamentele de abuz. Dovezi recente sugerează că hormonii legați de stres (de exemplu, glucocorticoizi, GC) pot induce adaptări în sistemul de stres creier, care ar putea implica alterarea expresiei genice și a factorilor de transcripție. Acest studiu a examinat rolul GC în reglarea FosB / ΔFosB atât în ​​sistemele de stres creierului hipotalamic cât și în cele extra-hipotalamice în timpul dependenței de morfină. Pentru aceasta, expresia FosB / ΔFosB a fost măsurată la șobolani de control (operațiune simulată) și adrenalectomizată (ADX) care au fost dependenți de opiacee după zece zile de tratament cu morfină. La șobolanii operați în mod fals, FosB / ΔFosB a fost indus după administrarea morfină cronică în toate zonele de stres creierului investigate: nucleul accumbens (coajă) (NAc), nucleul patului stria terminalis (BNST), amigdala centrală (CeA), paraventricularul hipotalamic nucleu (PVN) și nucleul grupului de celule noradrenergice din tractul solitar (NTS-A (2)). Adrenalectomia a atenuat creșterea producției de FosB / ΔFosB observată după expunerea morfinei cronice la NAc, CeA și SNT. Mai mult, ADX a redus exprimarea FosB / ΔFosB în neuronii CRH-pozitivi ai BNST, PVN și CeA. Rezultate similare s-au obținut în neuroni NTS-A (2) TH-pozitivi și NAc pro-dynorfin pozitivi neuroni. Aceste date sugerează că neuroadaptarea (estimată ca acumulare de FosB / ΔFosB) la opiacee în zonele creierului asociate cu stresul este modulată de GC, susținând dovezile unei legături între hormonii stresului cerebral și dependența.

Introducere

Medicamentele opiacee, cum ar fi morfina, sunt agenți analgezici eficienți care sunt utilizați pentru tratarea multor forme de durere acută și cronică. Cu toate acestea, efectele adverse grave, cum ar fi toleranța și retragerea, contribuie la dependența de opiacee și limitează utilizarea acestora. Mai mult, utilizarea nemedicală a opiaceelor ​​(heroină, morfină) a crescut în ultimii ani. Creșterea dovezilor implică diferite mecanisme de reglare a genelor (inclusiv efectele epigenetice, moleculare, celulare și de nivel de circuit) în modificările pe care le induc medicamentele de abuz în creier, indicând o strategie terapeutică potențială pentru terapia de dependență [1]-[4].

O întrebare centrală în domeniul abuzului de droguri a fost identificarea proteinelor care mediază trecerea de la efectele acute la cele pe termen lung ale acestor medicamente. De interes deosebit în studiul dependenței este familia Fos de factori de transcripție. Această familie include c-Fos, Fra-1 și Fra-2, FosB și ΔFosB, o variantă trunchiată de îmbinare a FosB cu lungime întreagă [5]. Spre deosebire de ceilalți membri ai familiei Fos, ΔFosB este indusă modest în creier după administrarea acută a medicamentului, dar din cauza timpului de înjumătățire neobișnuit de lung, acesta persistă timp de săptămâni, chiar luni, după încetarea consumului de droguri. Ca rezultat, Nivelurile ΔFosB se acumulează treptat prin expunerea repetată la medicament [6], [7], sugerând că ΔFosB ar putea reprezenta un mecanism prin care medicamentele de abuz produc schimbări de durată în modelul de exprimare a genelor mult timp după retragerea medicamentului [8].

Sa raportat că expunerea repetată la cocaină, amfetamină, canabinoide sau morfină duce la o creștere a ΔFosB în zonele creierului legate de efectele pozitive de întărire ale medicamentelor, cum ar fi nucleul accumbens (NAc), cortexul prefrontal și striatul dorsal. Această creștere a fost propusă a fi o neuroadaptare care conduce la creșterea sensibilității la medicamente de abuz și vulnerabilitate pentru a dezvolta comportamente caracteristice ale dependenței [9]-[13]. Am arătat recent că ae creșterea nivelurilor FosB / ΔFosB după administrarea cronică de morfină nu se limitează numai la sistemul de recompensare, dar apare și în sistemul de stres creier (care a fost legat de efectele negative de întărire a medicamentelor); precum și în nucleul tractului solitar-A2 Grupa de celule noradrenergice (NTS-A2, principalul sistem noradrenergic inervând neurocircuitul stresului) [14]. În concordanță cu aceste constatări, mai multe forme de stres cronic, de asemenea, induc ΔFosB în NAc și alte regiuni ale creierului [15], [16].

Dependența este o tulburare complexă, deoarece mulți factori contribuie la dezvoltarea și menținerea acestei tulburări neurologice. Un factor este stresul, care a fost implicat în anumite aspecte ale dependenței de droguri [17]-[21]. Atât axa hipotalamus-hipofizo-adrenal (HPA, axa primară a stresului endocrin), cât și sistemul de stres extrahospotalamic (care cuprinde amigdala extinsă și NTS-A2) sunt dysregulate prin administrarea cronică de medicamente cu potențial de dependență [14], [22]. În plus, răspunsul la axa HPA este similar după ambele stimuli stresante și expunerea acută la medicamentele de abuz [23], [24], cu creșterea hormonului de eliberare a corticotropinei (CRH), a hormonului adrenocorticotropic (ACTH) și a eliberării de glucocorticoizi (GC). Trăspunsul său facilitează adaptarea la schimbările acute de mediu, dar poate duce, de asemenea, la patologii comportamentale în timpul stărilor cronice de stres, cum ar fi dependența și depresia [25]. Studiile nu au examinat încă relația dintre inducerea FosB / ΔFosB indusă de dependența de morfină și inducerea FosB / ΔFosB în sistemul de stres creier. Prin urmare, am evaluat influența GC asupra expresiei FosB / ΔFosB după administrarea continuă a morfinei în zonele legate de stresul cerebral. Pentru a aborda această întrebare, am examinat mai întâi efectele adrenalectomiei bilaterale (ADX) asupra imunoreactivității FosB / ΔFosB (IR) în principalele nuclee ale sistemului de stres la șobolanii dependenți de morfină.

Activitatea sistemului de stres creierului este mediată de un număr de neurotransmițători / neuromodulatori. CRH este principala neuropeptidă care reglementează activitatea sistemului de stres și a fost postulată contribuția sa atât la existența unei vulnerabilități preexistente de a consuma droguri, cât și la vulnerabilitatea ulterioară la recădere [26]. EuÎn plus, munca abundentă susține importanța SNT-A2 inervând sistemul de stres creierului în dependența de droguri și rolul central al noradrenalinei (NA) ca neurotransmițător care modulează această neurocirculare [27]. În cele din urmă, dovezi substanțiale sugerează că expresia dynorfinică este activată în striat și amigdală în timpul administrării acute și cronice a medicamentului [28]. Având în vedere aceste fapte, următorul scop al acestui studiu a fost de a identifica rolul GC asupra exprimării FosB / ΔFosB în populații specifice ale sistemului stresului cerebral în timpul dependenței de morfină.

REZULTATE

Efectele adrenalectomiei asupra creșterii în greutate corporală și concentrației plasmatice a ACTH și a corticosteronului la șobolanii dependenți de morfină

Înainte de efectuarea testelor de imunodetecție, am evaluat eficacitatea tratamentului cronic cu morfină. În acest scop, greutatea animalelor a fost înregistrată în ziua implantării peletelor și în ziua uciderii (ziua 10). Anovasa cu două căi a relevat efecte importante semnificative asupra creșterii în greutate corporală pentru adrenalectomie [F (1,47)=13.24, p=0.0007), tratamentul cu morfină [F (1,47)=281.05, p<0.0001] și o interacțiune între ADX și tratamentul cu morfină [F (1,47)=4.13, p=0.0479]. În conformitate cu concluziile anterioare [29], [30], post hoc analiza a arătat că atât grupurile sham, cât și ADX, devenite dependente de morfină, au prezentat o creștere semnificativă (p<0.001) creștere mai mică în greutate (-13.75 ± 5.0 g, n=12; 3.84 ± 2.45 g, n=13) decât cea observată la animalele simulate și ADX care au primit peleți placebo (44.58 ± 1.7 g, n=12; 49.57 ± 2.4 g, n=12, respectiv), care a fost atribuită consumului redus de alimente observat la aceste animale [29].

Pentru a verifica eficacitatea adrenalectomiei, s-au măsurat concentrațiile hormonale în plasmă. Două căi ANOVA care examinează efectele adrenalectomiei și morfinei asupra concentrației plasmatice a ACTH și a corticosteronului au arătat efecte principale semnificative ale adrenalectomiei [ACTH: F (1,18)=68.12, p<0.0001; corticosteron: F (1,45)=10.42, p=0.0023). Cum era de așteptat, lui Newman post hoc testul a arătat (Imaginea S1) că în placebo (n=6) - și morfină (n=4) -ADX concentrațiile plasmatice ale ACTH au fost mai mari (p<0.001) în comparație cu animalele care au funcționat în mod fals pentru cele două tratamente evaluate (placebo, n=6; și morfină, n=6). Nu s-au observat modificări ale concentrației plasmatice de corticosteron între ADX-placebo (n=14) și ADX-morfină (n=13). Concentrația corticosteronului la șobolanii tratați cu ADX-morfină a fost semnificativ (p<0.01) mai scăzute decât cele observate în sham-morfină (nr=10). Nu s-au observat modificări semnificative în grupul tratat cu sham-morfină în comparație cu placebo (n=12).

Adrenalectomia atenuează diferențiat FosB / ΔFosB indusă de dependența de morfină în sistemul de stres creier Subregiuni

La animalele de control (șobolani implantați cu placebo), expresia constitutivă slabă a FosB / ΔFosB-IR a fost identificată în toate zonele sistemului creierului legat de stres. Tratamentul cu morfină cronică a determinat apariția FosB / ΔFosB în toate zonele creierului investigat. În NAc (coajă), ANOVA cu două sensuri a arătat efecte principale semnificative ale adrenalectomiei [F (1,16)=6.44, p=0.0220] și tratamente cronice de morfină [F (1,16)=19.98, p=0.0004]. Testul post-hoc al lui Newman-Keuls a arătat (Fig. 2A-E) că la șobolanii tratați cu morfină a existat o creștere semnificativă (p <0.01) a expresiei FosB / ΔFosB. La șobolanii ADX dependenți de morfină, a existat o reducere semnificativă (p <0.05) a expresiei proteinei FosB / ΔFosB în NAc. ANOVA bidirecțională pentru BNST a arătat efectul principal semnificativ al tratamentului cu morfină cronică [F (1,16)=48.92, p<0.0001]. Analiza post hoc a evidențiat o creștere (p<0.001) în FosB / ΔFosB la ambele animale dependente de șobolan și ADX-morfină, indicând faptul că reglarea FosB / ΔFosB a fost legată de expunerea morfină cronică, indiferent de concentrația de GC (Fig. 2F-J). ANOVA cu două căi pentru FosB / ΔFosB din CeA a arătat efecte semnificative ale adrenalectomiei [F (1,15)=20.51, p=0.0004] și pre-tratamentul cu morfină [F (1,15)=27.52, p<0.0001]. Post hoc testul a arătat o creștere semnificativă (p <0.01) a nivelurilor de FosB / ΔFosB la șobolanii sham-morfină față de șobolanii sham-placebo, care a fost atenuată (p <0.01) în grupul ADX dependent de morfină (Fig. 2K-O). În plus, șobolanii ADX placebo-granulați au prezentat niveluri mai mici (p <0.01) de FosB / ΔFosB decât grupul placebo simulat.

Figura 2  

Adrenalectomia reglementează diferențiat expresia proteinei FosB / ΔFosB în sistemele de stres creierului.

Două căi ANOVA care examinează efectele adrenalectomiei și morfinei asupra expresiei FosB / ΔFosB în PVN (subdiviziunea parvocelulară) au evidențiat un efect semnificativ al tratamentului cu morfină [F (1,16)=16.31, p<0.0001]. Post hoc analiza a arătat oFig. 3A-E) creștere (p<0.05) în FosB / ΔFosB-IR în PVN de la șobolanii tratați cu șobolan și ADX-morfină. În NTS-A2 catecholaminergic, ANOVA cu două căi a relevat un efect principal al tratamentului cu morfină [F (1,11)=76.33, p<0.0001]. Post hoc analiza a arătat oFig. 3F-J) la FosB / ΔFosB-IR la șobolanii de tip sham-morfină comparativ cu grupul placebo (p<0.001), care a fost atenuat (p <0.05) în grupul dependent de morfină ADX.

Figura 3  

Efectele adrenalectomiei asupra expresiei proteinei FosB / ΔFosB în PVN și NTS-A2 de la șobolani dependenți de morfină.

Expunerea morfină cronică induce expresia FosB / ΔFosB în neuroni CRH în PVN, BNST și CeA. Influența glucocorticoizilor

ANOVA cu două căi pentru neuronii FosB / ΔFosB-pozitiv / CRH-pozitiv în BNST a arătat efectul principal al adrenalectomiei [F (1,20)=64.43, p<0.0001] și interacțiunea semnificativă între tratamentul cu adrenalectomie și tratamentul cu morfină [F (1,20)=6.80, p=0.0169]. În PVN, ANOVA cu două sensuri a relevat un efect principal semnificativ al adrenalectomiei [F (1,19)=11.35, p=0.0032]. ANOVA cu două căi pentru neuronii FosB / ΔFosB-pozitiv / CRH-pozitiv în CeA a arătat un efect principal semnificativ al adrenalectomiei [F (1,20)=106.85, p<0.0001], tratamentul cu morfină [F (1,20)=7.33, p=0.0136] și interacțiunea semnificativă între adrenalectomie și pretratamentul medicamentului [F (1,20)=7.07, p=0.0151]. Cifrele 4, , 5,5, ,66 arată imaginile reprezentative ale secțiunilor BNST, PVN și CeA de la șoareci sau ADX-control și șobolanii dependenți de morfină. Post hoc analiza a arătat că un număr semnificativ de neuroni FosB / ΔFosB-pozitivi s-a găsit că co-exprimă CRH în BNST (p<0.01; Fig. 4E), PVN (p<0.05; Fig. 6E) și CeA (p<0.01; Fig. 6E) la șobolanii de tip sham-morfină comparativ cu grupul placebo-placebo. În plus, numărul de neuroni FosB / ΔFosB-pozitivi care exprimă CRH la șobolanii peleți ADX cu placebo și la șobolanii dependenți de morfină a fost semnificativ mai mic în cele trei nuclee în comparație cu tratamentul corespunzător la animalele simulate, așa cum se arată în Cifrele 4, , 5,5, ,66 (BNST: p<0.01 vs. sham plus placebo; p<0.001 vs. sham plus morfină; PVN: p<0.05 vs. sham plus placebo; p<0.001 vs. sham plus morfină; CeA: p<0.001 vs. sham plus placebo și vs sham plus morfină).

Figura 4  

Adrenalectomia a atenuat exprimarea proteinei FosB / ΔFosB în neuronii BNST CRH-pozitivi.
Figura 5  

Adrenalectomia a atenuat exprimarea proteinei FosB / ΔFosB în neuronii PVN CRH-pozitivi.
Figura 6  

Adrenalectomia a antagonizat expresia proteinei FosB / ΔFosB în neuronii CeA CRH-pozitivi.

La nivelul BNST, ANOVA cu două căi pentru numărul de neuroni pozitivi CRH a arătat că a existat un efect principal al ADX [F (1,20)=103.92, p <0.0001], precum și morfină cronică [F (1,20)=4.35, p <0.05]. Așa cum se arată în Tabelul 1, Newman-Keuls post hoc testul a arătat că șobolanii ADX cu placebo și morfină au prezentat neuroni CRH mai mici (p <0.001) decât grupurile placebo sau morfină dependente. La PVN, ANOVA cu două căi a arătat un efect semnificativ al suprarenalectomiei [F (1,19)=11.35, p=0.0032]. ANOVA cu două sensuri pentru neuronii CRH totali la nivelul CeA a evidențiat efecte semnificative ale ADX [F (1,20)=240.09, p <0.0001] și interacțiunea principală între ADX și morfină cronică [F (1,20)=4.49, p=0.0467]. Tabelul 1 arată că a existat o scădere semnificativă a neuronilor CRH la CeA de la șobolanii tratați ADX cu placebo sau cu morfină. Tabelul 1 arată, de asemenea, că expunerea cronică la morfină induce o creștere (p <0.05) a neuronilor CRH pozitivi la nivelurile BNST și CeA.

Tabelul 1  

Tabel 1. Efectele adrenalectomiei asupra numărului de neuroni CRH-pozitivi în neuronii BNST, PVN și CeA, pro-DYN-pozitivi în neuronii NAc și TH-pozitivi în NTS, la animalele peletizate cu placebo sau morfină.

Efectele adrenalectomiei asupra FosB / ΔFosB asupra neuronilor DYN-pozitivi în NAc (Shell)

Nu am observat modificări semnificative ale numărului de celule pro-DYN-pozitive care coexprimă FosB / ΔFosB în NAc (cochilie) după expunerea morfină cronică (Fig. 7) cu privire la grupul placebo. ANOVA cu două căi pentru neuronii FosB / ΔFosB-pozitiv / pro-DYN-pozitiv în NAc (cochilie) a arătat efectul principal al ADX [F (1,19)=10.11, p=0.0049]. Așa cum se arată în Fig. 7C, numărul de neuroni FosB / ΔFosB-pozitivi care co-exprima pro-DYN la șobolanii dependenți de morfină ADX a fost semnificativ (p<0.05) inferior în ceea ce privește tratamentul corespunzător la animalele înșelătoare. Așa cum se arată în Tabelul 1, ADX nu a indus nici o modificare a celulei totale pro-DYN din NAc (shell).

Figura 7  

Efectele adrenalectomiei asupra expresiei proteinei FosB / ΔFosB în neuronii NAC (cochilie) pro-DYN-pozitiv și în neuronii NTS TH-pozitivi de la șobolanii dependenți de morfină.

Adrenalectomia inhibă FosB / ΔFosB induse de dependența de morfină în neuroni TH pozitivi în NTS-A2 Grupul celular noradrenergic

ANOVA cu două căi pentru neuronii FosB / ΔFosB-pozitivi / TH-pozitivi în NTS-A2 a arătat efectul principal al ADX [F (1,15)=64.86, p<0.0001], tratamentul cu morfină [F (1,15)=29.62, p<0.0001] și interacțiunea semnificativă între tratamentul cu adrenalectomie și tratamentul cu morfină [F (1,15)=19.24, p=0.0005]. Newman-Keuls post hoc testul indică faptul că un număr semnificativ de neuroni FosB / ΔFosB-pozitivi au găsit că coexprimă TH în NTS (p<0.001; Fig. 7F) la șobolanii de tip sham-morfină. În plus, numărul de neuroni FosB / ΔFosB-pozitivi co-exprimând TH la șobolanii dependenți de morfină ADX a fost semnificativ mai mic (p<0.001) în comparație cu tratamentul corespunzător la animalele înșelătoare, așa cum se arată în Fig. 7F. Pe de altă parte, așa cum se arată în Tabelul 1, ADX nu a indus nicio modificare a neuronilor TH total pozitivi în SNT.

Discuție

Rezultatele actuale au arătat, pentru prima dată, că semnalul GC de către creier a modulat expresia FosB / ΔFosB indusă de administrarea cronică de morfină indusă în sistemul de stres creier într-o manieră specifică regiunii.

Liniile convergente ale dovezilor indică faptul că stresul crește riscul comportamentelor de dependență [18]. Stimulările stresante persistente modifică sinteza, expresia și semnalizarea în căile legate de stres (de exemplu CRH, GC, NA, etc.). În plus, medicamentele de abuz afectează căile de stres, ceea ce duce la modificarea expresiei genelor, cu efecte de semnalizare asupra moleculelor de răsplată și de stres [31]. Stresul și abuzul de droguri împărtășesc capacitatea de a declanșa suprapunerea modelelor de activare neuronală în sistemul nervos central, ducând la activarea expresiei genetice imediate.

S-a descris pe larg faptul că substanțele dependente și stimulii stresanți cronici măresc exprimarea factorului de transcripție ΔFosB în nucleele principale implicate în efectele lor pozitive de întărire [12], [13], [32], [33], și sa propus ca efectele persistente ale ΔFosB asupra genelor țintă să joace un rol important în dezvoltarea adaptărilor care caracterizează dependența [9], [34]. Cu toate acestea, se cunoaște puține despre expresia ΔFosB în sistemul stresului cerebral după administrarea cronică a medicamentelor de abuz sau a mecanismelor moleculare ale acumulării ΔFosB evocate de morfină în zonele legate de stres.

În studiul de față, am investigat implicarea GC asupra expresiei FosB / ΔFosB indusă de morfină în sistemul de stres hormonal (axa HPA), care este controlată de CRH în PVN, precum și în sistemele de stres extrahospotalamic (care includ amigdala extinsă; [35]), mediată de CRH și alte sisteme legate de stres (incluzând NA și dinorfin; [19]).

Recent, am demonstrat că administrarea cronică de morfină timp de șapte zile a crescut expresia FosB / ΔFosB în amigdala extinsă, PVN și NTS-A2 [14]. În concordanță cu aceste date, rezultatele prezente arată că administrarea cronică de morfină a provocat o creștere a FosB / ΔFosB în CeA, BNST și NAc (cochilie), precum și în PVN și NTS-A2. Amigdala extinsă a fost asociată cu recompensa de droguri. De fapt, toate drogurile majore de abuz activează transmisia dopaminergică de la VTA la NAc (shell) și CeA. Această activare și consecințele pozitive de întărire a substanțelor abuzive s-au dovedit a fi legate de acțiunile GC asupra GR situate în VTA [28]. Susținând această ipoteză, rezultatele noastre arată că FosB / ΔFosB-IR în NAc (cochilie) și CeA a fost atenuat la animalele ADX, ceea ce ar putea indica o interrelație între factorii de transcripție AP-1 și GR în timpul dependenței de morfină [36]. În contrast cu efectele observate ale ADX asupra expresiei FosB în NAc și CeA, rezultatele prezente sugerează că morfina cronică a crescut expresia Fos / ΔFosB în PVN și BNST într-o manieră independentă de GC.

Mai mulți neurotransmițători ai sistemului de stres creierului, cum ar fi CRH, NA și DYN, au fost corelați cu stările aversive caracteristice procesului de dependență [35], [37]-[39]. Constatările actuale au arătat că expunerea cronică la morfină a provocat o creștere semnificativă a exprimării Fos / ΔFosB în neuronii care conțin CRH în BNST, CeA și PVN. Familia Fos de factori de transcripție poate acționa la situsurile elementului de răspuns AMP ciclic (CRE) [40]. Dovezi considerabile indică faptul că ΔFosB poate acționa fie ca represor al transcripției, fie ca activator [40], [41]. Gîn timp ce gena CRH are un motiv CRE în secvența promotorului său, s-ar putea să se propună ca acumularea FosB / ΔFosB în neuronii CRH să medieze modificările induse de morfină în nivelurile CRH, raportate pentru efectele cocainelor [42], în special în CeA și BNST, unde pentru prima dată am raportat o creștere a numărului de neuroni CRH-pozitivi în timpul dependenței de morfină. Susținând această ipoteză, a fost descrisă o creștere a nivelurilor ARNm de ARN în CeA după administrarea cronică de morfină [43]. Cu toate acestea, numărul de neuroni CRH-pozitivi a fost neschimbat în PVN după tratamentul cu morfină cronică. Aceste rezultate sunt în concordanță cu concluziile anterioare care arată că expunerea morfină cronică nu induce modificări în PVN hTRAR [44]. Deoarece expresia PVN CRH este reglată în jos de către GC [45], și având în vedere lucrarea prezentă și altele [29], [44] a arătat că expunerea cronică la opiacee nu a modificat eliberarea de corticosteron, pare logic că administrarea cronică de morfină nu a modificat numărul de celule CRH.

Administrarea periferică a corticosteronei mărește expresia CRN mRNA în CeA și BNST [46], [47]. În plus, ADX a scăzut expresia CRH în CeA [48], [49]. În consecință, am observat că creșterea numărului de neuroni CRH în BNST și CeA în timpul dependenței de morfină a fost eliminată după adrenalectomie. Dat fiind faptul că creșterea Fos / ΔFosB în cadrul neuronilor CRH în timpul dependenței de morfină a fost atenuată la animalele ADX, s-ar putea sugera un rol pentru Fos / ΔFosB în reglarea expresiei CRH de către GC în amigdala extinsă. Pe de altă parte, este bine cunoscut faptul că GC reglează negativ expresia genei CRH în PVN [45]. În concordanță, datele prezente arată clar că adrenalectomia a anulat creșterea Fos / ΔFosB-IR în neuronii care conțin CRH în timpul dependenței de morfină din acest nucleu.

În acest studiu, datele imunochemice au arătat că tratamentul cu morfină cronică a crescut semnificativ colorarea pentru Fos / ΔFosB în NTS-A2, care a scăzut după ADX. Când am examinat populațiile neuronale specifice care au exprimat FosB / ΔFosB, am găsit o creștere robustă a Fos / ΔFosB-IR în neuronii pozitivi ai enzimei TH (enzima de limitare a vitezei în sinteza catecolaminelor). Sa demonstrat că NA joacă un rol principal în dependență [50]. În activitatea anterioară, expunerea la morfină cronică a provocat o creștere a nivelurilor TH în NTS-A2 [14], [29]. Este cunoscut faptul că gena TH are un situs AP-1 în promotorul său [51]. Rezultatele noastre ar putea sugera că FosB / ΔFosB este implicat în creșterea indusă de opiacee a nivelurilor TH în NTS-A2. Grupul de celule noradrenergice din grupul brainstem exprimă nivele ridicate de receptori GC (GR). Sa demonstrat că GC are un rol permisiv în neurotransmisia noradrenergică [29], [30], [52]. În consecință, administrarea antagoniștilor GR a afectat câteva aspecte ale activității NA, incluzând activarea TH și activitatea neuronală [30]. Rezultatele prezente au arătat că, în urma ADX, a existat o scădere a celulelor TH pozitive care exprimă FosB / ΔFosB în NTS-A2. Ținând cont de faptul că adrenalectomia a blocat creșterea nivelurilor de proteine ​​TH în NTS-A2 în timpul dependenței de morfină [29], și că un situs GRE / AP-1 a fost descris în promotorul genei TH [53], datele noastre ar putea indica ΔFosB ca mediator în efectele GC asupra activității noradrenergice în SNT-A2 în timpul dependenței de opiacee.

DYN a fost postulat ca o posibila genă țintă a ΔFosB [54], [55]. Rezultatele noastre arată că expunerea morfină cronică nu a modificat în mod semnificativ exprimarea FosB / ΔFosB în neuronii care exprimă pro-DYN în NAc). Referitor la reglarea ΔFosB a expresiei DYN, Zachariou și colab [33] a raportat o scădere mică, dar semnificativă, a nivelurilor de ARNm ale DYN la NAc de la șoarecii suprapresivi ai ΔFosB, postulând astfel că acest factor de transcripție inhibă expresia DYN. Din datele noastre, nu se poate concluziona că morfina cronică modifică expresia DYN prin activitatea FosB / ΔFosB, având în vedere că rezultatele noastre au fost obținute la nivelul proteinei.

Sa afirmat că sistemul opioid DYN / kappa pare să inducă stări pro-depresive care implică elemente de aversiune. Acest răspuns aversiv poate implica interacțiuni reciproce cu NAc, DA și sistemul CRH extrahospalamic [35]. Cu toate acestea, se știe puțin despre o posibilă reglementare GC a expresiei DYN în NAc. Sa sugerat că ΔFosB în NAc, parțial prin reprimarea expresiei DYN, mărește sensibilitatea la efectele recompensatoare ale morfinei și cocainei și conduce la rezistență la stres [9], [33]. Datele noastre susțin un rol pentru GC în reglarea efectelor pozitive de întărire a morfinei mediate de sistemul DA mezocorticolimbic, dat fiind faptul că numărul de neuroni FosB / ΔFosB / pro-DYN-pozitiv scade în NAc de la șobolani ADX. Aceste efecte ar putea fi mediate direct de GR, care sunt prezente pe toată calea de recompensă mezolimbică sau indirect prin proiecțiile CRH provenite de la CeA și / sau BNST la VTA și NAc, care sunt subactivate în timpul dependenței de morfină la șobolanii ADX.

Pe scurt, acest studiu oferă dovezi că GC sunt implicați critic în acumularea de FosB / ΔFosB în sistemele de stres creier după expunerea morfină cronică, ceea ce ar putea duce la modificări de durată ale modelului de exprimare a genelor în zonele legate de stres. Constatările de față indică, de asemenea, că FosB / ΔFosB poate contribui la modificările dependente de GC asupra plasticității sistemului de stres creier în timpul dependenței de opiacee. Sunt necesare studii suplimentare pentru a determina mecanismele intracelulare prin care opioidele cronice induc FosB / ΔFosB în regiuni legate de stres selectate, precum și mecanismul care este responsabil pentru supresia expresiei FosB / ΔFosB indusă de morfină prin GC.

Metode

materiale

Corticosteronul și colesterolul au fost achiziționate de la Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, USA). Peletele de corticosteron au fost fabricate de Dr. Márton Vajna, (Departamentul de Administrare a Farmaciei, Universitatea de Farmacie, Universitatea Semmelweis, Budapesta, Ungaria). Peleții de bază de morfină (Alcaliber Laboratories, Madrid, Spania) sau lactoza (control) au fost pregătiți în cadrul Departamentului de Farmacie și Farmacie Technology (Scoala de Farmacie, Granada, Spania). Pentobarbitalul a fost achiziționat de la Hospira (Hoofddorp, Olanda). Cetamina clorhidrat și xilazina au fost achiziționate de la Labs. Merial (Lyon, Franța) și Labs. Calier (Barcelona, ​​Spania), respectiv.

animale

Șobolani masculi Sprague-Dawley (220-240 g la începutul experimentului, Harlan, Barcelona, ​​Spania) au fost adăpostiți în perechi în cuști (lungime, 45 cm, lățime, 24 cm, înălțime, 20 cm) cu temperatură controlată (22 ± 2 ° C) și umiditate (50 ± 10%), cu acces liber la apă și hrană (Harlan Teklad, Chow standard, Harlan Interfauna Ibérica, Barcelona, ​​Spania). Animalele au fost adaptate la un ciclu 12 h-lumină standard (luminile pe 08 h 00 min -20 h 00 min) pentru 7 zile înainte de începerea experimentelor. Toate procedurile chirurgicale și experimentale au fost efectuate în conformitate cu Directiva Consiliului 24 din noiembrie 1986 (86 / 609 / EEC) și au fost aprobate de comisiile locale pentru cercetarea pe animale (REGA ES300305440012). Studiul a fost aprobat de comitetul de bioetică al Universității din Murcia (RD 1201 / 2005) și de Ministerio de Ciencia y Tecnología (SAF / FEDER 2009-07178), Spania.

adrenalectomiei

Șobolanii au fost adrenalectomizați bilateral și o peletă de corticosteron a fost implantată pentru a asigura niveluri scăzute dar stabile ale GC [29]. Șobolanii au fost adrenalectomizați bilateral (ADX) printr-o abordare dorsală sub 90 mg / kg ketamină clorhidrat și 8 mg / kg anxietate xilazină (ip) și implantate subcutanat (sc) cu pelete de corticosteron cu eliberare lentă la intervenție chirurgicală. Compoziția peletelor de steroizi (25 mg corticosteron plus 75 mg colesterol) a fost aleasă pentru a furniza o concentrație stabilă de corticosteron corespunzătoare nadirului circadian până la 20 d după implantare [56]. Șobolanii ADX cu înlocuire cu corticosteron (ADX plus corticosteron) nu montează o creștere indusă de provocare a corticosteronei plasmatice [56]. După operație, șobolanii ADX plus corticosteron au avut libertatea de a bea soluție salină izotonică (0.9% NaCl) pentru a înlocui secundarul epuizat de sodiu la pierderea aldosteronului din cauza adrenalectomiei. Șobolanii de control au fost supuși aceleiași proceduri chirurgicale (falsă) fără extirpare suprarenale. Șobolanii și șobolanii ADX plus corticosteron au fost lăsați să se recupereze de la intervenția chirurgicală pentru 5 d înainte de procedura de dependență de morfină. Adrenalectomia bilaterală de succes a fost confirmată de concentrația plasmatică a corticosteronului și ACTH și de examinarea post-mortem a animalelor ADX.

Tratamentul medicamentos și procedura experimentală

Cinci zile după operație, șobolanii au fost implantați cu două pelete de morfină 75 mg sub anestezie ușoară cu eter. Șobolanii de control au primit peleți placebo conținând lactoză. Sa demonstrat că această procedură produce concentrații plasmatice consistente de morfină începând cu câteva ore după implantarea peletelor și un sindrom de retragere completă după injectarea acută de antagoniști ai opioidului [57]. Dependența de morfină este obținută după 24 h după implantarea peletelor și a rămas constantă pentru zilele 15 [58]. La zece zile după implantarea peleților de morfină sau placebo, șobolanii au fost sacrificați. Cele patru condiții experimentale investigate pentru activitatea axei HPA (concentrația plasmatică a corticosteronului și ACTH), expresia FosB / ΔFosB, expresia CRH, expresia DYN, expresia TH și expresia FosB / ΔFosB în neuroni CRH-, DYN- și TH-pozitivi au fost: (i) placebo; (ii) sham-morfină; (iii) ADX-placebo; (iv) ADX-morfină. Creșterea în greutate a șobolanilor a fost verificată în timpul tratamentului pentru a se asigura că morfina a fost eliberată corect din pelete, deoarece se știe că tratamentul pe termen lung cu morfină induce o scădere a creșterii în greutate corporală cauzată de un consum caloric scăzut [29].

Creierul și perfuzia creierului

Șobolanii au fost profund anesteziați cu o supradoză de pentobarbital (100 mg / kg ip) și perfuzate transcardial cu soluție salină urmată de fixativ conținând paraformaldehidă (paraformaldehidă 4% în tampon borat 0.1 M, pH 9.5). După îndepărtarea creierului perfuzat, acesta a fost fixat în același fixativ pentru 3 h și depozitat la 4 ° C în PBS conținând 10% zaharoză până când secțiunile coronale (grosimea 30-μm) au fost tăiate rostrovaudal pe un microtom înghețat (Leica, Nussloch , Germania). Atlasul lui Paxinos și al lui Watson (2007) [59] a fost utilizat pentru a identifica diferite regiuni ale creierului de șobolani: NAc (cochilie), BNST, PVN, CeA și NTS-A2 (Figura 1). Secțiunile au fost crioprotezate și depozitate la -20 ° C până la utilizare.

Figura 1  

Schemele schematice ale secțiunilor coronale care indică zonele creierului (dreptunghiuri) în care nucleele pozitive FosB / ΔFosB au fost numărate în NAc (coajă), BNST, CeA, PVN și NTS [59].

FosB / ΔFosB Imunohistochimie

Secțiunile au fost prelucrate pentru imunohistochimie așa cum este descris de Núñez și colab [29]. Pe scurt, după blocarea cu 0.3% H2O2 și 2% serul normal de capră (Sigma, USA) au fost incubate în antiser primar anti-FosB / ΔFosB (policlonal iepure, # sc-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz,[raport]1000). Anticorpul primar utilizat în acest studiu nu face diferența între FosB și varianta sa de îmbinare stabilă ΔFosB. Expunerea repetată la stimulii inductori ai FosB a demonstrat că desensibilizează inductibilitatea acută FosB [15], [40], [60]. Prin urmare, diferențele dintre colorarea FosB / ΔFosB la șobolanii pre-tratați cu morfină și neprotejați pot fi interpretați ca reflectând în principal diferențele în acumularea ΔFosB. Antigenii au fost vizualizați prin protocolul convențional avidin-biotin-imunoperoxidază (Vectastain ABC Elite Kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, SUA). 3,3'-diaminobenzidină tetrahidroclorură (DAB; Sigma, SUA) a fost intensificată cu sulfat de nichel-amoniu. Secțiunile s-au montat pe diapozitive acoperite cu gelatină cromat-alum, deshidratate și acoperite.

Semnalarea imunohistochimică a nucleelor ​​FosB / ΔFosB-imunoreactive și a neuronilor pozitivi CRH, TH și DYN

Pentru dubla etichetare FosB / ΔFosB-TH, secțiuni de țesut de la fiecare șobolan din fiecare grup de tratament au fost prelucrate pentru imunoreactivitate FosB / ΔFosB utilizând intensificarea nichelului DAB și apoi TH a fost descoperită folosind doar cromogenul DAB. FosB / ΔFosB imunostaining a fost efectuată așa cum s-a descris anterior. După colorarea FosB / ΔFosB, secțiunile au fost clătite în PBS, tratate cu ser de capră normală 2% și apoi incubate peste noapte cu anticorpul policlonal anti-TH de iepure (AB152, Chemicon, USA; 1[raport]6000) la temperatura camerei. Au fost urmate aceleași proceduri imunohistochimice descrise mai sus. Complexul TH de anticorp-peroxidază a fost dezvoltat în DAB. Secțiunile au fost montate pe diapozitive acoperite cu gelatină cromată și acoperite.

Pentru etichetarea dublă FosB / ΔFosB-CRH și FosB / ΔFosB-pro-DYN, procesul a fost același ca cel descris anterior pentru FosB / ΔFosB-TH. Pentru detectarea neuronilor care exprimă DYN în NAc, s-a aplicat o procedură de recuperare a antigenului prin incubarea secțiunilor creierului în tampon citrat (10 mM Acid citric, 0.05% Tween 20, pH 6.0) la 60 ° C pentru 20 min înainte de procedura de blocare. Antiserul primar anti-CRH de iepure a fost furnizat de Wylie W. Vale (Institutul Salk, La Jolla, CA, SUA) și a fost utilizat la 1[raport]500 diluție pentru 72 h la 4 ° C. Anticorpul pro-DYN primar a fost achiziționat de la Neuromics (# GP10110, Neuromics, Edina, MN, SUA) și diluat 1[raport]2000 (72 h, 4 ° C).

Analiza imaginilor

Imaginile au fost capturate cu ajutorul microscopului Leica (DM 4000B; Leica) conectat la o cameră video (DFC290, Leica). FosB / ΔFosB-pozitive nuclee de celule au fost numărate folosind un sistem de analiză de imagine asistată de calculator (QWIN, Leica). Limitele NTS-A2, BNST, CeA, NAc (cochilie) și subdiviziunea parvocelulară a PVN au fost evidențiate, iar numărul profilurilor pozitive a fost înregistrat. Numărul de profile nucleare FosB / ΔFosB în limitele grupurilor de celule de interes a fost evaluat bilateral în patru până la cinci secțiuni de la fiecare șobolan și a fost calculat în medie pentru a obține o singură valoare pentru fiecare șobolan. Pentru a evita părtinirea observatorului, toate secțiunile au fost cuantificate de un investigator orb. Numărătoarea totală pentru regiuni diferite ale creierului este exprimată ca medie ± SEM.

Cuantificarea celulelor pozitive TH-, CRH- și DYN-pozitive și profilelor FosB / ΔFosB Double-stained

Miezurile pozitive pentru imunoreactivitatea FosB / ΔFosB au fost detectate utilizând aceeași microscopie de lumină convențională descrisă mai sus și numărate la mărirea x40. FosB / ΔFosB-pozitive CRH, celulele TH sau DYN au fost identificate ca celule cu depozite citosolice maronii pentru colorarea pozitivă CRH-pozitivă, TH-pozitivă și DYN-pozitivă și colorarea nucleară albastră / întunecată pentru FosB / ΔFosB. Un câmp pătrat (195 μm) a fost suprapus imaginii capturate pentru a fi utilizată ca zonă de referință. Numărul de neuroni marcat cu dublu observat bilateral a fost numărat în patru până la cinci secțiuni de la fiecare animal din PVN, BNST și CeA pentru neuronii CRH, NTS pentru neuronii TH și NAc pentru neuronii DYN. Celulele pozitive CRH, TH și DYN fără un nucleu vizibil (celule FosB / ΔFosB-negativ CRH, TH sau DYN) au fost, de asemenea, incluse în analiză.

radioimunologic

Sângele a fost colectat în tuburi răcite cu gheață conținând 5% EDTA și apoi centrifugat (500 g; 4 ° C; 15 min). Plasma a fost separată, împărțită în două părți alicote și stocată la -80 ° C până când a fost testată pentru corticosteron sau ACTH. Concentrațiile plasmatice ale corticosteronului și ACTH au fost cuantificate utilizând anticorpi specifici de corticosteron și ACTH pentru șobolani ([125I] -CORT și [125I] -ACTH RIA; MP Biomedicals, Orangeburg, NY, SUA). Sensibilitatea testului a fost 7.7 ng / mL pentru corticosteron și 5.7 pg / mL pentru ACTH.

Analiza statistică

Datele sunt prezentate ca medie ± SEM și au fost analizate utilizând pachetul statistic GraphPad Prism (San Diego, CA, SUA). Datele au fost analizate prin analiza bidirecțională a varianței (ANOVA) cu tratament (placebo, morfină) și chirurgie (falsă, ADX) ca variabile independente. Newman-Keuls post hoc testul a fost utilizat pentru comparații individuale de grup. Diferențele cu ap <0.05 au fost considerate semnificative.

informatii justificative

Figura S1

Efectele adrenalectomiei (ADX) asupra concentrațiilor plasmatice ale ACTH (A) și ale corticosteronului (B) la animalele de control și la animalele tratate cu morfină. ADX chirurgical a crescut concentrațiile de ACTH atât la șobolanii tratați cu placebo, cât și la cei tratați cu morfină, în timp ce scăderea concentrației plasmatice a corticosteronului la șobolanii tratați cu morfină. Datele reprezintă media ± SEM a concentrațiilor plasmatice de ACTH și corticosteron la șobolanii tratați anterior cu placebo sau cu morfină pentru zilele 10. *** p<0.001 comparativ cu placebo; ++p<0.01, +++p<0.001 versus sham-morfină.

(TIF)

recunoasteri

Mulțumim Dr. Márton Vajna și Anna Földes, de la Universitatea Semmelweis (Budapesta, Ungaria) pentru prepararea peletelor de corticosteron.

Declarație de finanțare

Această lucrare a fost susținută de următoarele subvenții: Ministerio de Ciencia e Imnovación (SAF / FEDER 2009-07178 și SAF / FEDER 2010-17907), Spania; Red de Trastornos Adictivos (RD06 / 0001 / 1006 și RD06 / 0001 / 1001), Spania; Fundación Séneca, Agenția Regională de Ciencia și Tecnologia Regiunii Murcia (15405 / PI10), Spania. DG-P este susținut de o bursă de la Ministerio de Ciencia e Innovación (AP2009-2379). Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de a publica sau pregătirea manuscrisului.

Referinte

1. Volkow ND, Skolnick P (2012) Medicamente noi pentru tulburări de utilizare a substanțelor: provocări și oportunități. Neuropsychopharmacology 37: 290-292. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
2. Robison AJ, Nestler EJ (2011) Mecanisme transcripționale și epigenetice ale dependenței. Nat Rev Neurosci 12: 623-637. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
3. Hutchison ER, Okun E, Mattson MP (2009) Potențialul terapeutic al micro ARN-urilor în deteriorarea, degenerarea și repararea sistemului nervos. Mediul Neuromolecular 11: 153-161. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
4. Li MD, van der Vaart AD (2011) MicroRNAs în dependență: intermediari ai adaptării? Mol psihiatrie 16: 1159-1168. [PubMed]
5. Mumberg D, Lucibello FC, Schuermann M, Muller R (1991) Alimentarea alternativă a transcriptelor fosB conduce la ARNm diferențiate care codifică proteine ​​antagoniste funcțional. Genele Dev 5: 1212-1223. [PubMed]
6. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Antigenii anti-FOS cronici: Variante stabile ale ΔFosB induse în creier prin tratamente cronice. J Neurosci 17: 4933-4941. [PubMed]
7. Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel AM (1996) Modificări la nivelul rețelei în exprimarea proteinelor Fos-Jun inductibile în Striatum în timpul tratamentului și retragerii cocainei cronice. Neuron 17: 147-156. [PubMed]
8. Chao J, Nestler EJ (2004) Neurobiologia moleculară a dependenței de droguri. Revizuirea anuală a medicinei 55: 113-132.
9. Muschamp JW, Nemeth CL, Robison AJ, Nestler EJ, Carlezon J (2012) ΔFosB sporește efectele benefice ale cocainei în timp ce reduc efectele pro-depresive ale agonistului receptorului Kappa-opioid U50488. Biologice Psihiatrie 71: 44-50. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
10. Gago B, Suárez-Boomgaard D, Fuxe K, Brene S, Reina-Sánchez MD, și colab. (2011) Efectul tratamentului acut și continuu al morfinei asupra expresiei factorului de transcripție în subregiuni ale putamenului caudat de șobolan. Modularea marcată prin activarea receptorului D4. Brain Res 1407: 47-61. [PubMed]
11. Kaplan GB, Leite-Morris KA, Fan WY, Young AJ, Guy MD (2011) Senzitizarea opiaceei induce expresia FosB / ΔFosB în regiunile cerebrale corticale, striate și amigdale prefrontale. PLoS ONE 6: e23574. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
12. Nye HE, Nestler EJ (1996) Inducerea antigenelor cronice legate de fos în creierul de șobolan prin administrarea cronică a morfinei. Mol Pharmacol 49: 636-645. [PubMed]
13. McClung CA, Nestler EJ, Zachariou V (2005) Reglarea exprimării genei prin morfină cronică și retragerea de morfină în zona Locus Ceruleus și zona tegmentală ventrală. J Neurosci 25: 6005-6015. [PubMed]
14. Núñez C, Martín F, Földes A, Laorden ML, Kovács KJ, și colab. (2010) Inducerea FosB / ΔFosB în structurile legate de sistemul de stres creier în timpul dependenței și retragerii morfinei. Jurnalul de Neurochimie 114: 475-487. [PubMed]
15. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, și colab. (2004) Inducerea ΔFosB în structurile cerebrale legate de recompensă după stresul cronic. J Neurosci 24: 10594-10602. [PubMed]
16. Vialou V, Robison AJ, LaPlant QC, Covington HE, Dietz DM, și colab. (2010) ΔFosB în circuitele de recompensare a creierului mediază rezistența la stres și răspunsurile antidepresive. Nat Neurosci 13: 745-752. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
17. Ambroggi FC, Turiault M, Milet A, Deroche-Gamonet V, Parnaudeau S, și colab. (2009) Stresul și dependența: receptorul glucocorticoid la neuronii dopaminoceptivi facilitează căutarea cocainei. Nat Neurosci 12: 247-249. [PubMed]
18. Sinha R (2008) Stresul cronic, consumul de droguri și vulnerabilitatea la dependență. Ann NY Acad Sci 1141: 105-130. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
19. Koob GF, Volkow ND (2010) Neurocircuitarea dependenței. Neuropsychopharmacology 35: 217-238. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
20. Koob G, Kreek MJ (2007) Stresul, disregularea căilor de recompensă a consumului de droguri și tranziția la dependența de droguri. Am J Psihiatrie 164: 1149-1159. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
21. Koob GF, Le Moal M (2008) Mecanisme neurobiologice pentru procese motivaționale opuse în dependență. Phil Trans R Soc B 363: 3113-3123. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
22. Koob GF (2006) Neurobiologia dependenței: o viziune neuroadaptată relevantă pentru diagnosticare. Dependenta 101: 23-30. [PubMed]
23. Carrasco GA, Van de Kar LD (2003) Farmacologie neuroendocrină a stresului. European Journal of Pharmacology 463: 235-272. [PubMed]
24. Piazza PV, Le Moal M (1997) Glucocorticoizii ca substrat biologic de recompensă: implicații fiziologice și patofiziologice. Recenzii creier de cercetare 25: 359-372. [PubMed]
25. Cleck JN, Blendy JA (2008) A face un lucru rau mai rău: efectele negative ale stresului asupra dependenței de droguri. J Clin Invest 118: 454-461. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
26. Goodman A (2008) Neurobiologia dependenței. O revizuire integrată. Biochem Pharmacol 75: 266-322. [PubMed]
27. Dunn AJ, Swiergiel AH (2008) Rolul factorului de eliberare a corticotropinei și al noradrenalinei în răspunsurile legate de stres și relațiile dintre cele două sisteme. European Journal of Pharmacology 583: 186-193. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
28. Koob GF, Le Moal M (2008) Dependența și sistemul antireward al creierului. Ann Rev Physiol 59: 29-53.
29. Núñez C, Földes A, Pérez-Flores D, García-Borrón JC, Laorden ML, și colab. (2009) Nivelurile crescute de glucocorticoizi sunt responsabile pentru inducerea exprimării mRNA a tirozin hidroxilazei (TH), a fosforilării și a activității enzimatice în nucleul tractului solitar (NTS-A2) în timpul retragerii morfinei. Endocrinologie 150: 3118-3127. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
30. Navarro-Zaragoza J, Hidalgo JM, Laorden ML, Milanés MV (2012) Receptorii glucocorticoizi participă la stimularea indusă de opiacee a stimulării activității noradrenergice a șobolanilor NTS și la semnele somatice ale retragerii morfinei. Br J Pharmacol DOI: 10.1111 / j.1476–5381.2012.01918.x .
31. Renthal W, Nestler EJ (2008) Mecanisme epigenetice în dependența de droguri. Tendințe în medicina moleculară 14: 341-350. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
32. Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ și colab. (2011) Efectul supraexprimării ΔFosB asupra semnalizării mediate de receptorul opioid și receptorul canabinoid în nucleul accumbens. Neuropharmacology 61: 1470-1476. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
33. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, și colab. (2006) Un rol esențial al ΔFosB în nucleul accumbens în acțiunea morfinei. Nat Neurosci 9: 205-211. [PubMed]
34. Hyman SE, Malenka RC (2001) Dependența și creierul: Neurobiologia constrângerii și persistența acesteia. Nat Rev Neurosci 2: 695-703. [PubMed]
35. Koob GF (2008) Un rol al sistemului de stres creier în dependență. Neuron 59: 11-34. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
36. Deroche-Gamonet V, Sillaber I, Aouizerate B, Izawa R, Jaber M, și colab. (2003) Receptorul glucocorticoid ca potențial țintă pentru reducerea abuzului de cocaină. J Neurosci 23: 4785-4790. [PubMed]
37. Nestler EJ (2001) Baza moleculară a plasticității pe termen lung care stă la baza dependenței. Nat Rev Neurosci 2: 119-128. [PubMed]
38. Laorden ML, Ferenczi S, Pintér-Kübler B, González-Martín LL, Lasheras MC, și colab. (2012) Hipotalamica Orexin-A Neuroni sunt implicati in raspunsul sistemului de stres de creier la Retragerea morfina. PLoS ONE 7: e36871. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
39. Navarro-Zaragoza J, Núñez C, Ruiz-Medina J, Laorden ML, Valverde O, și colab. (2011) CRF (2) mediază activitatea sporită a noradrenergicului în nucleul paraventricular hipotalamic și starea negativă de retragere a morfinei la șobolani. Br J Pharmacol 162: 851-862. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
40. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, și colab. (2004) DFosB: un comutator molecular pentru adaptarea pe termen lung în creier. Cercetări cerebrale moleculare 132: 146-154. [PubMed]
41. Nestler EJ (2008) Mecanisme transcripționale ale dependenței: rolul DFosB. Phil Trans R Soc B 363: 3245-3255. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
42. Crespo JA, Manzanares J, Oliva JM, Corchero J, Garcia-Lecumberri C, și colab. (2003) Extincția administrării de cocaină autoadministrează modificări ale expresiei genei factorului de eliberare a corticotropinei în nucleul paraventricular al hipotalamusului. Cercetări cerebrale moleculare 117: 160-167. [PubMed]
43. Maj M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B (2003) Influența morfinei și a cocainelor asupra biosintezei CRF în nucleul central al șobolanului amigdalei. neuropeptides 37: 105-110. [PubMed]
44. Núñez C, Foldes A, Laorden ML, Milanes MV, Kovács KJ (2007) Activarea expresiei genei neuropeptide hipotalamatice legate de stres în timpul retragerii morfinei. J Neurochem 101: 1060-1071. [PubMed]
45. Swanson LW, Simmons DM (1989) Diferențial hormon steroid și influențe neuronale asupra nivelurilor ARNm ale peptidelor în celulele CRH ale nucleului paraventricular: un studiu histochimic de hibridizare la șobolan. J. Comp. Neurol 285: 413-435. [PubMed]
46. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Efectele corticosteronului asupra ARNm CRH și conținutul în nucleul patului stria terminalis; comparație cu efectele în nucleul central al amigdalei și a nucleului paraventricular al hipotalamusului. Brain Res 657: 141-149. [PubMed]
47. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Efectele corticosteronului asupra ARNm al hormonului de eliberare a corticotropinei în nucleul central al amigdalei și în regiunea parvocelulară a nucleului paraventricular al hipotalamusului. Brain Res 640: 105-112. [PubMed]
48. Viau V, Soriano L, Dallman MF (2001) Androgenii Alter corticotropina elibereaza ARNmul ​​si arginina Vasopresina mRNA in zonele forebrain cunoscute pentru a reglementa activitatea in Axa Hypothalamic-Pituitary-suprarenale. Jurnalul de Neuroendocrinologie 13: 442-452. [PubMed]
49. Palkovits M, Young WS, Kovács K, Tóth Z, Makara GB (1998) Alterarea expresiei genei hormonului de eliberare a corticotropinei a neuronilor amigdaloidici centrali după leziuni paraventriculare pe termen lung și adrenalectomie. Neuroştiinţe 85: 135-147. [PubMed]
50. Smith RJ, Aston-Jones G (2008) Transmiterea noradrenergică în amigdala extinsă: rol în creșterea consumului de droguri și recadere în timpul abstinenței prelungite a medicamentului. Brain Struct Funct 213: 43-61. [PubMed]
51. Sabban EL, Hiremagalur B, Nankova B, Kvetnanský R (1995) Biologie moleculară a inducerii provocate de stres a enzimelor biosintetice de catecolamină. Ann NY Acad Sci 771: 327-338. [PubMed]
52. Roozendaal B, Okuda S, de Quervain DJF, McGaugh JL (2006) Glucocorticoizii interacționează cu activarea noradrenergică indusă de emoție în influențarea diferitelor funcții ale memoriei. Neuroştiinţe 138: 901-910. [PubMed]
53. Rani CSS, Elango N, Wang SS, Kobayashi K, Strong R (2009) Identificarea unei secvențe de proteine-1 ca activator ca element de răspuns glucocorticoid în gene de hidroxilază a tirozinei de șobolan. Mol Pharmacol 75: 589-598. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
54. Hughes P, Dragunow M (1995) Inducerea genelor imediat imediate și controlul expresiei genelor reglementate de neurotransmițător în sistemul nervos. Pharmacol Rev 47: 133-178. [PubMed]
55. Kovacs GL, Telegdy G (1988) Neuropeptide hipotalamo-neurohidophozice și dependență experimentală de droguri. Brain Res Bull 20: 893-895. [PubMed]
56. Kovács KJ, Földes A, Sawchenko PE (2000) Răspunsul negativ la glucocorticoizi vizează selectiv transcripția vasopresinei în neuronii neurosecretorii parvocelulari. J Neurosci 20: 3843-3852. [PubMed]
57. Frenois F, Cador M, Caille S, Stinus L, Le Moine C (2002) Corelațiile neurale ale componentelor motivaționale și somatice ale retragerii morfinei precipitate de naloxonă. Eur J Neurosci 16: 1377-1389. [PubMed]
58. Gold LH, Stinus L, Inturrisi CE, Koob GF (1994) Toleranță prelungită, dependență și abstinență după implantarea sub formă de peleți de morfină la șobolan. Eur J Pharmacol 253: 45-51. [PubMed]
59. Paxinos G. și Watson C (2007) Creierul șobolanului în coordonate stereotaxice. Amsterdam: Academic Press.
60. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, și colab. (2008) Modele distincte ale inducției FosB în creier prin medicamente de abuz. Synapse 62: 358-369. [Articol gratuit PMC] [PubMed]