J Genet Syndr Gene Ther. 2013 februarie 10; 4(121): 1000121. doi: 10.4172 / 2157-7412.1000121
Abstract
După ce a intrat în era genomică cu încredere în viitorul medicinei, inclusiv psihiatria, identificarea rolului asociațiilor ADN și polimorf cu circuitele de recompensare a creierului a dus la o nouă înțelegere a tuturor comportamentelor de dependență. Este demn de remarcat faptul că această strategie poate oferi tratament pentru milioane de oameni care sunt victime ale "Sindromului de deficiență a recompenselor" (RDS), o tulburare genetică a circuitelor de recompensare a creierului. Acest articol se va concentra pe faptul că medicamentele și alimentele sunt dependente de reciprocitate și rolul geneticii dopaminei și al funcției în dependență, inclusiv interacțiunea transportatorului de dopamină și alimentelor de sodiu. Vom examina pe scurt conceptul nostru care se referă la antecedentele genetice ale multiplelor dependente (RDS). Studiile au arătat, de asemenea, că evaluarea unui grup de gene recompensate și a polimorfismelor permite stabilirea unui risc genetic pentru RDS. Panoul se numește "Scorul de risc pentru dependența genetică (GARS)" și reprezintă un instrument pentru diagnosticarea unei predispoziții genetice pentru RDS. Utilizarea acestui test, așa cum a subliniat și alții, ar aduce beneficii comunității medicale prin identificarea persoanelor la risc la o vârstă fragedă. Încurajăm, în profunzime, munca atât în modelele de dependență ale animalelor, cât și ale celor umane. Încurajăm explorarea în continuare a corelațiilor neurogenetice ale comunităților dintre alimentație și dependența de droguri și susținem ipotezele de gândire înainte ca "Ipoteza dependenței alimentare".
Introducere
Dopamina (DA) este un neurotransmițător în creier, care controlează sentimentele de bunăstare. Acest sentiment de bunăstare rezultă din interacțiunea DA și a neurotransmițătorilor, cum ar fi serotonina, opioidele și alte substanțe chimice din creier. Nivelurile scăzute ale serotoninei sunt asociate cu depresia. Nivelurile ridicate ale opioidelor (opiumul creierului) sunt, de asemenea, asociate cu un sentiment de bunăstare [1]. Mai mult, receptorii DA, o clasă de receptori cuplați de proteină G (GPCR), au fost vizați pentru dezvoltarea de medicamente pentru tratamentul tulburărilor neurologice, psihiatrice și oculare [2]. DA a fost numită molecula "antistres" și / sau "plăcere", dar acest lucru a fost recent dezbătut de Salamone și Correa [3] și Sinha [4].
În consecință, am susținut [5-8] că Nucleus accumbens (NAc) DA are un rol în procesele motivaționale și că disfuncția mezolimbică DA poate contribui la simptomele motivaționale ale depresiei, la caracteristicile abuzului de substanțe și la alte tulburări [3]. Deși a devenit obișnuit să se eticheteze neuronii DA drept neuroni recompensa, aceasta este o generalizare exagerată și este necesar să se ia în considerare modul în care diferite aspecte ale motivației sunt afectate de manipulările dopaminergice. De exemplu, DAc DA este implicat în procesele Pavlovian și comportamentul de abordare apreciativă a atitudinii de învățare instrumentală, motivația aversivă, procesele de activare a comportamentului, angajamentul susținut al sarcinii și efortul de efort, deși nu mediază foamea inițială, motivația de a mânca sau apetitul [3,5-7].
Deși este adevărat că NAc DA este implicat în procese motivaționale apetisante și aversive, susținem că DA este, de asemenea, implicat ca un mediator important în motivația alimentară primară sau apetitul similar cu drogurile de abuz. O revizuire a literaturii oferă o serie de lucrări care arată importanța DA în comportamentul de poftă de mâncare și medierea apetitului [6,7]. Aurul a pionierat conceptul de dependență alimentară [5-8]. Avena și colab. [9] argumentează în mod corect că, deoarece medicamentele dependente dau naștere acelorași căi neurologice care au evoluat pentru a răspunde la recompensele naturale, dependența de alimente pare plauzibilă. În plus, zahărul în sine este demn de remarcat ca o substanță care eliberează opioide și DA și, prin urmare, ar putea fi de așteptat să aibă potențial de dependență. În mod specific, adaptările neuronale includ schimbările în legarea DA și receptorul opioid, expresia mRNA de enkefalină și eliberarea DA și acetilcolină în NAc. Dovezile susțin ipoteza că, în anumite condiții, șobolanii pot deveni dependenți de zahăr.
Lucrarea lui Wang et al. [10] implicând studii de imagistică a creierului la om au implicat circuite modulate DA în comportamentele alimentare patologice. Studiile lor sugerează că DA în spațiul extracelular al striatumului este mărit de indicii alimentari, aceasta este o dovadă că DA este implicat potențial în proprietățile motivaționale non-hedonice ale alimentelor. Ei au constatat, de asemenea, că metabolismul cortexului orbitofrontal este mărit de indicațiile alimentare care indică faptul că această regiune este asociată cu motivația pentru medierea consumului alimentar. Există o reducere observată a disponibilității receptorilor DA D2 striatal la subiecții obezi, similar cu reducerea subiecților dependenți de droguri, astfel încât subiecții obezi pot fi predispuși să folosească alimente pentru a compensa temporar sub circuitele de stimulare recompensate [11]. În esență, efectele puternice de întărire ale alimentelor și medicamentelor sunt parțial mediate de creșteri bruște ale DA în centrele mezolimbice de recompensare a creierului. Volkow și colab. [11] subliniază faptul că creșterile bruște ale DA pot suprascrie mecanismele de control homeostatic în creierul persoanelor vulnerabile. Creierul imagistica studii au deliniated disfunctia neurologica care genereaza caracteristicile comune ale dependente de alimente si de droguri. Piatra de temelie a comunității, a cauzelor rădăcinilor dependenței sunt deficiențele în căile dopaminergice care reglementează sistemele neuronale asociate și cu auto-controlul, condiționarea, reactivitatea stresului, sensibilitatea la răsplată și motivarea stimulentelor [11]. Metabolismul în regiunile prefrontale este implicat în controlul inhibitor, la subiecții obezi incapacitatea de a limita aportul de alimente implică ghrelin și poate fi rezultatul scăderii receptorilor DA D2 care sunt asociate cu scăderea metabolismului prefrontal [12]. Regiunile limbice și corticale implicate în motivație, memorie și auto-control sunt activate de stimularea gastrică la subiecții obezi [10] și în timpul poftei de droguri la subiecții dependenți de droguri. O sensibilitate sporită la proprietățile senzoriale ale alimentelor este sugerată de creșterea metabolismului în cortexul somatosenzorial al subiecților obezi. Această sensibilitate crescută față de gustul alimentației cuplate cu reducerea numărului de receptori DA D2 ar putea face ca alimentele să fie considerate întărite pentru consumul compulsiv și riscul de obezitate [10]. Aceste rezultate ale cercetării indică faptul că numeroase circuite cerebrale sunt perturbate în ceea ce privește obezitatea și dependența de droguri și că prevenirea și tratamentul obezității pot beneficia de strategii care vizează îmbunătățirea funcției DA.
Lindblom și colab. [13] a raportat că dieta ca o strategie de reducere a greutății corporale de multe ori eșuează deoarece provoacă poftele alimentare care duc la binging și recâștigarea în greutate. De asemenea, aceștia sunt de acord că dovezile din mai multe linii de cercetare sugerează prezența elementelor comune în reglementarea neuronală a alimentației alimentare și a drogurilor. Lindblom și colab. [13] a cuantificat exprimarea a opt gene implicate în semnalizarea DA în regiuni ale creierului legate de sistemul DA mezolimbic și nigrostriatal la șobolanii masculi supuși restricției cronice a alimentelor utilizând reacția lanțului polimerazei în timp real cantitativ. Ei au descoperit că nivelele mRNA de hidroxilază a tirozinei și transportorul de dopamină în zona tegmentală ventrală au fost puternic crescute prin restricționarea alimentelor și reglarea în sus a DAT la nivel proteic în coaja NAc a fost de asemenea observată prin autoradiografie cantitativă. Că aceste efecte au fost observate după restricția cronică, mai degrabă decât cea acută, sugerând că poate apărea o sensibilizare a căii mezolimbice a dopaminei. Astfel, sensibilizarea posibil datorată clearance-ului crescut al dopaminei extracelulare din coaja NAc poate fi una dintre cauzele care stau la baza poftelor alimentare care împiedică respectarea dietei. Aceste constatări sunt în concordanță cu constatările anterioare ale lui Patterson și colab. [14]. Ei au demonstrat că perfuzia intracerebroventriculară directă a insulinei are ca rezultat o creștere a nivelelor mRNA pentru DAT transporter de recuperare DA. Într-un studiu 24- până la 36-ore de studiu de deprivare a hranei sa utilizat hibridizarea in situ pentru a evalua nivelele de ARNm ale DAT la șobolanii lipsiți de alimente (hipoinsulinemici). Nivelurile au fost în zona tegmentală ventrală / substantia nigra pars compacta scăzând semnificativ sugerând că moderarea funcției DAT striatale poate fi afectată de starea nutrițională, postul și insulina. Ifland și colab. [15] a avansat ipoteza că alimentele procesate cu concentrații ridicate de zahăr și alți îndulcitori rafinați, carbohidrați rafinați, grăsimi, sare și cafeină sunt substanțe dependente. Alte studii au evaluat sarea ca factor important în comportamentul căutării alimentelor. Roitman și colab. [16] subliniaza faptul ca transmiterea crescuta DA in NAc este corelat cu comportamente motivate, inclusiv apetitul Na. Transmisia DA este modulată de DAT și poate juca un rol în comportamente motivaționale. În studiile lor in vivo, scăderi robuste ale absorbției DA prin intermediul DAT la NAc de șobolan au fost corelate cu apetitul Na indus de depleția Na. Activitatea DAT scăzută în NAc a fost observată după in vitro Tratamentul cu aldosteron. Astfel, o reducere a activității DAT, în NAc, poate fi consecința unei acțiuni directe a Aldosteronei și poate fi un mecanism prin care epuizarea Na induce generarea unei transmisii crescute de NAc DA în timpul apetitului Na. Creșterea NAc DA poate fi motivația proprietății pentru șobolanul sărăcit de Na. Sprijinul suplimentar pentru rolul alimentelor sărate ca substanță (hrană) de abuz posibil a dus la "Ipoteza dependenței alimentare", așa cum a propus Cocores și Gold [17]. Într-un studiu pilot, pentru a determina dacă alimentele sărate acționează ca un agonist ușor de opiacee, care conduce la supraîncălzire și creștere în greutate, au descoperit că un grup dependent de opiacee a dezvoltat o creștere a greutății cu 6.6% în timpul retragerii opiaceei, arătând o preferință puternică pentru alimentele sărate. Pe baza acestei și a altor literaturi [18] sugerează că alimentele sărate pot fi o substanță captivantă care stimulează receptorii de opiacee și DA în centrul de recompense și plăcere al creierului. Alternativ, preferința, foamea, indemnul și dorința de alimente gustoase "sărate" pot fi simptome ale retragerii de opiacee și efectul de opiacee al alimentelor sărate. Atât alimentele sărate cât și retragerea de opiacee stimulează pofta de mâncare Na, determinând aportul crescut de calorii, supraalimentarea și bolile legate de obezitate.
Funcția dopaminergică a creierului
Gena receptorului dopaminic D2 (DRD2)
Atunci când sinapticul DA stimulează receptorii DA (D1-D5), indivizii experimentează reducerea stresului și sentimentele de bunăstare [19]. După cum am menționat mai devreme, calea dopaminergică mezocorticolimbică mediază întărirea atît a recompenselor nenaturale, cît și a recompensei naturale. Unitățile naturale sunt unități fiziologice fortificate, cum ar fi foamea și reproducerea, în timp ce recompensele nenaturale implică satisfacerea plăcerilor învățate dobândite, senzațiile hedonice precum cele derivate din droguri, alcool, jocurile de noroc și alte comportamente de asumare a riscurilor [8,20,21].
O gena DA notabilă este gena DRD2 care este responsabilă pentru sinteza receptorilor DA D2 [22]. Forma alelică a genei DRD2 (A1 versus A2) dictează numărul de receptori la punctele post-junctionale și funcția hipodopaminergică [23,24]. O cantitate mică de receptori DA predispune persoanele să caute orice substanță sau comportament care stimulează sistemul dopaminergic [25-27].
Gena DRD2 și DA au fost asociate mult timp cu recompensa [28] în ciuda controversei [3,4]. Deși alela Taq1 A1 a genei DRD2 a fost asociată cu multe tulburări neuropsihiatrice și inițial cu alcoolism sever, este asociată și cu alte dependențe de substanțe și procese, precum și cu sindromul Tourette, cu comportamente de căutare a noutăților înalte, tulburare de hiperactivitate cu deficit de atenție (ADHD), precum și la copii și adulți, cu simptome de tulburare de personalitate asociată cu anomaliile co-morbide [28].
În timp ce acest articol se va concentra asupra dependenței de droguri și alimente, precum și despre rolul geneticii DA și al funcției în dependență, pentru completare vom examina pe scurt conceptul nostru care se referă la antecedentele genetice ale multiplelor dependențe. Sindromul de deficiență de recompensă (RDS) a fost descris pentru prima dată în 1996 ca predictor genetic teoretic al comportamentelor compulsive, dependente și impulsive, realizând că varianta genetică DRD2 A1 este asociată cu aceste comportamente [29-32]. RDS implică mecanismele de plăcere sau recompensă care se bazează pe DA. Comportamentele sau situațiile care sunt consecința rezistenței sau epuizării DA sunt manifestări ale RDS [30]. Deficiența de recompensă biochimică a unui individ poate fi ușoară, rezultatul overindulgence sau stres sau mai severă, rezultatul unui deficit de DA bazat pe machiaj genetic. RDS sau căile anti-recompensare ajută la explicarea modului în care anumite anomalii genetice pot determina comportamente aberante complexe. Poate exista o neurobiologie obișnuită, neuro-circuite și neuroanatomie, pentru o serie de tulburări psihiatrice și multiple dependențe. Este bine cunoscut faptul că .druguri de abuz, alcool, sex, hrană, jocuri de noroc și emoții agresive, într-adevăr, cei mai pozitivi agenți de întărire, provoacă activarea și eliberarea neuronală a creierului DA și pot scădea sentimentele negative. Valorile anormale sunt legate de funcția DA scăzută [33]. Iată un exemplu al modului în care comportamente complexe pot fi produse de antecedente genetice specifice. Deficiența, de exemplu, a receptorilor D2 este consecința obținerii variantei A1 a genei DRD2 [34] pot predispune persoanele la un risc ridicat de poftă care poate fi satisfăcută de mai multe comportamente dependente, impulsive și compulsive. Această deficiență ar putea fi compusă dacă individul ar avea un alt polimorfism în, de exemplu, gena DAT care a dus la eliminarea excesivă a DA din sinapse. În plus, utilizarea de substanțe și comportamente abortive epuizează de asemenea DA. Astfel, RDS poate fi manifestată în forme severe sau ușoare, care sunt o consecință a unei incapacități biochimice de a obține recompensă din activitățile obișnuite, de zi cu zi. Deși multe gene și polimorfisme predispun indivizii la funcția DA anormală, purtătorii alelei Taq1 A1 din gena DRD2 nu dispun de suficiente situsuri DA pentru a obține o sensibilitate adecvată la DA. Acest deficit de DA în locul de recompensă al creierului poate avea ca rezultat poftele nesănătoase și pofta. În esență, ei caută substanțe precum alcoolul, opiaceele, cocaina, nicotina, glucoza și comportamente; chiar și comportamente anormal de agresive despre care se știe că activează căile dopaminergice și determină eliberarea preferențială a DA la NAc. Există acum dovezi că, mai degrabă decât NAc, cortexul cingulat anterior poate fi implicat în luarea deciziilor pe bază de efort [35-37] și un site de recidivă.
Deteriorarea genei DRD2 sau a altor gene ale receptorilor DA, cum ar fi DRD1 implicată în homeostazie și așa-numita funcțiune normală a creierului, ar putea duce, în cele din urmă, la tulburări neuropsihiatrice, incluzând comportamentul aberant al drogurilor și a alimentelor. Abuzul de droguri prenatale la femela gravidă sa dovedit a avea efecte profunde ale stării neurochimice a puilor. Acestea includ etanolul [38]; canabis [39]; heroină [40]; cocaina [41]; și abuzul de droguri în general [42]. Recent, Novak și colab. [43] a furnizat dovezi solide care arată că dezvoltarea anormală a neuronilor striatali face parte din patologia care stă la baza bolilor psihiatrice majore. Autorii au identificat o rețea de gene subdezvoltate (timpuriu) la șobolani care nu au căi importante ale receptorilor striatali (semnalizare). La două săptămâni postnatale, rețeaua este reglată în jos și înlocuită cu o rețea de gene mature care exprimă genele striatale specifice, incluzând receptorii DA D1 și D2 și oferind acestor neuroni identitatea funcțională și caracteristicile fenotipice. Astfel, această schimbare de dezvoltare, atât la șobolan, cât și la om, are potențialul de a fi un punct de susceptibilitate la întreruperea creșterii prin factori de mediu, cum ar fi o overindulgence în alimente, cum ar fi sarea și abuzul de droguri.
Dopamina transportor (DAT)
Transporterul DA (de asemenea, transportator activ DA, DAT, SLC6A3) este o proteină cu membrană care pompează neurotransmițătorul DA din sinapse înapoi în citozol, din care alți transportatori cunoscuți sechestrau DA și norepinefrina în vezicule neuronale pentru depozitare ulterioară și eliberare ulterioară [44].
Proteina DAT este codificată de o genă localizată pe cromozomul uman 5, este de aproximativ 64 kbp lungă și constă din exon codificator 15. Mai specific, gena DAT (SLC6A3 sau DAT1) este localizată la cromozomul 5p15.3. Mai mult decât atât, există un polimorfism VNTR în regiunea non-codificatoare 3 a DAT1. Un polimorfism genetic în gena DAT care afectează cantitatea de proteină exprimată este o dovadă pentru o asociere între tulburările legate de DA și DAT [45]. Este bine stabilit că DAT este mecanismul primar care eliberează DA de sinapse, cu excepția cortexului prefrontal în care recaptarea DA implică norepinefrina [46,47]. DAT termină semnalul DA eliminând DA din cleftul sinaptic și depunându-l în celulele din jur. Este important faptul că câteva aspecte ale recompensei și cunoașterii sunt funcții ale DA și DAT facilitează reglarea semnalizării DA [48].
Este demn de remarcat faptul că DAT este o proteină integrală membranară și este considerat un symporter și un co-transportator care se deplasează DA din cleftul sinaptic de-a lungul membranei celulare fosfolipide prin cuplarea mișcării sale la mișcarea ionilor Na în jos gradientul electrochimic (difuzie facilitat) în celulă.
Mai mult, funcția DAT necesită legarea secvențială și co-transportul a doi ioni de Na și un ion de clor cu substratul DA. Forța motrice pentru recuperarea DA mediată de DAT este gradientul de concentrație de ioni generat de membrana plasmatică Na + / K + ATPază [49].
Sonders și colab. [50] a evaluat rolul modelului larg acceptat pentru funcția de transporter de monoamine. Ei au descoperit că funcția normală de transmițător de monoamine necesită reguli stabilite. De exemplu, ionii Na trebuie să se lege de domeniul extracelular al transportorului înainte ca DA să se poată lega. Odată ce DA se leagă, proteina este supusă unei modificări conformaționale, care permite atât Na cât și DA să se decupleze pe partea intracelulară a membranei. Un număr de studii electrofiziologice au confirmat faptul că DAT transportă o moleculă de neurotransmițător în membrană cu unul sau doi ioni de Na ca și alți transportatori de monoamină. Sunt necesare ioni de clor cu încărcătură negativă pentru a preveni acumularea încărcăturii pozitive. Aceste studii au utilizat DA marcat radioactiv și au arătat, de asemenea, că viteza și direcția de transport sunt în totalitate dependente de gradientul Na [51].
Deoarece este bine cunoscut faptul că multe medicamente de abuz cauzează eliberarea DA neuronală [52], DAT poate avea un rol în acest sens. Datorită cuplării strânse a potențialului membranei și a gradientului Na, schimbările induse de activitate în polaritatea membranei pot influența dramatic ratele de transport. În plus, transportatorul poate contribui la eliberarea DA atunci când neuronul depolarizează [53]. În esență, așa cum a subliniat Vandenbergh și colab. [54] proteina DAT reglează neurotransmisia mediată de DA prin acumularea rapidă de DA care a fost eliberată în sinapse.
Topologia membranei DAT a fost inițial teoretică, determinată pe baza analizei secvenței hidrofobe și a similitudinii cu transportorul GABA. Predicția inițială a lui Kilty et al. [55] dintr-o buclă extracelulară mare între a treia și a patra din cele douăsprezece domenii transmembranare a fost confirmată de Vaughan și Kuhar [56] atunci când au utilizat proteaze, pentru a digera proteine în fragmente mai mici și pentru glicozilarea care apare numai pe bucle extracelulare, pentru a verifica majoritatea aspectelor structurii DAT.
DAT a fost găsit în regiunile creierului unde există circuite dopaminergice, aceste zone includ căi mezocortice, mezolimbice și nigrostriatale [57]. Nucleele care alcătuiesc aceste căi au modele distincte de expresie. DAT nu a fost detectat în nici o cleftă sinaptică care sugerează că recaptarea DA striatală are loc în afara zonelor active sinaptice după ce DA a difuzat din cleștele sinaptice.
Două alele, repetarea 9 (9R) și repetarea 10 (10R) VNTR pot crește riscul comportamentelor RDS. Prezența 9R VNTR a fost asociată cu alcoolismul și tulburarea de utilizare a substanței. Sa demonstrat că se amplifică transcripția proteinei DAT care are ca rezultat o îmbunătățire a clearance-ului DA sinaptic, rezultând o reducere a DA și activarea DA a neuronilor postsynaptici [58]. Reacțiile tandem ale DAT au fost asociate cu sensibilitate la recompensă și risc crescut pentru tulburarea hiperactivității cu deficit de atenție (ADHD) atât la copii, cât și la adulți [59,60]. Alela 10-repeat are o asociere mică dar semnificativă cu simptome de hiperactivitate-impulsivitate (HI)61].
Maparea genelor recompense și RDS
Suport pentru natura impulsivă a persoanelor care posedă variante de gene dopaminergice și alți neurotransmițători (de exemplu DRD2, DRD3, DRD4, DAT1, COMT, MOA-A, SLC6A4, Mu, GABAB) derivă dintr-o serie de studii importante care ilustrează riscul genetic pentru comportamentele care caută consumul de droguri pe baza studiilor de asociere și de legătură care implică aceste alele ca antecedente de risc care au un impact asupra sistemului mezocorticolimbic (Tabelul 1). Laboratorul nostru, în colaborare cu LifeGen, Inc. și Dominion Diagnostics, Inc. efectuează cercetări care implică douăsprezece centre selectate din Statele Unite pentru a valida primul test genetic brevetat pentru a determina riscul genetic al pacientului pentru RDS denumit Risk Score Score ™ GAR) și.
recunoasteri
Autorii apreciaza contributia editorului de la Margaret A. Madigan si Paula J. Edge. Apreciem comentariile lui Eric R. Braverman, Raquel Lohmann, Joan Borsten, BW Downs, Roger L. Waite, Mary Hauser, John Femino, David E Smith și Thomas Simpatico. Marlene Oscar-Berman este beneficiarul subvențiilor de la Institutele Naționale de Sănătate, NIAAA RO1-AA07112 și K05-AA00219 și Serviciul de Cercetări Medicale al Departamentului pentru Afaceri Veteranilor din SUA. De asemenea, recunoaștem intrarea raportului de caz Karen Hurley, director executiv al Institutului Național de Studii de dependență holistică, North Miami Beach Florida. În parte, acest articol a fost susținut de o mare conferință acordată Fundației Path NY de la Life Extension Foundation.
Note de subsol
Acesta este un articol cu acces deschis, distribuit în termenii Creative Commons Attribution License, care permite utilizarea, distribuirea și reproducerea nerestricționată în orice mediu, cu condiția ca autorul și sursa originale să fie creditate.
Conflictul de interese Kenneth Blum, dr., Deține o serie de brevete din SUA și străine legate de diagnosticul și tratamentul RDS, care a fost licențiat exclusiv LifeGen, Inc. Lederach, PA. Dominion Diagnostics, LLC, North Kingstown, Rhode Island împreună cu LifeGen, Inc., sunt implicate activ în dezvoltarea comercială a GARS. John Giordano este, de asemenea, partener în LifeGen, Inc. Nu există alte conflicte de interese și toți autorii au citit și aprobat manuscrisul.
;
