Un antagonist al receptorului ghrelin (GHS-R1A) atenuează proprietățile satisfacatoare ale morfinei și crește nivelele de peptide opioide în zonele de recompensare la șoareci (2015)

Eur Neuropsychopharmacol. Octombrie 2015 21. pii: S0924-977X (15) 00329-6. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2015.10.004.

Engel JA1, Nylander I2, Jerlhag E3.

Abstract

Hormonii gut-creier, cum ar fi ghrelinul, au fost recent sugerați că au un rol în reglementarea recompensării. Ghrelin a fost cunoscut în mod tradițional pentru a regla aportul de alimente și homoeostază în greutate corporală. În plus, munca recentă a evidențiat faptul că această peptidă are un rol nou în recompensa indusă de medicament, incluzând creșterea indusă de morfină a nivelurilor extracelulare ale dopaminei acumulate la șobolani. În acest caz, efectul antagonistului receptorului ghrelin (GHS-R1A), JMV2959, asupra activării induse de morfină a sistemului dopaminic mezolimbic a fost investigat la șoareci. În plus, s-au investigat efectele administrării JMV2959 asupra nivelelor de peptide opioide în zone legate de recompensă. În seria actuală de experiment am arătat că administrarea periferică JMV2959, la o doză fără efect per se, atenuează capacitatea morfinei de a provoca stimulare locomotorie, de a crește nivelele extracelulare de dopamină acumbală și de a condiționa preferința locului la șoareci. Administrarea de JMV2959 a crescut semnificativ nivelele de țesut de Met-enkefalină-Arg6Phe7 în zona tegmentală ventrală, dinorfinul B în hipocampus și Leu-enkephalin-Arg6 în striatum. Prin urmare, putem presupune că JMV2959 previne recompensa indusă de morfină prin stimularea peptidelor active receptorilor delta în zonele striatale și ventriculare ale tegumentului. În plus, peptidele hipocampale care activează receptorul kappa pot fi implicate în capacitatea lui JMV2959 de a regla formarea memoriei de recompensă. Având în vedere că dezvoltarea dependenței de droguri depinde, cel puțin parțial, de efectele drogurilor dependente asupra sistemului mezolimbic de dopamină, datele prezente sugerează că antagoniștii GHS-R1A merită să fie elucidați ca strategii noi de tratament a dependenței de opiacee.

 

 

 

 
   

Abstract

Hormonii gut-creier, cum ar fi ghrelinul, au fost recent sugerați că au un rol în reglementarea recompensării. Ghrelin a fost cunoscut în mod tradițional pentru a regla aportul de alimente și homoeostază în greutate corporală. În plus, munca recentă a evidențiat faptul că această peptidă are un rol nou în recompensa indusă de medicament, incluzând creșterea indusă de morfină a nivelurilor extracelulare ale dopaminei acumulate la șobolani. În acest caz, efectul antagonistului receptorului ghrelin (GHS-R1A), JMV2959, asupra activării induse de morfină a sistemului dopaminic mezolimbic a fost investigat la șoareci. În plus, s-au investigat efectele administrării JMV2959 asupra nivelelor de peptide opioide în zone legate de recompensă. În seria actuală de experiment am arătat administrarea periferică JMV2959, la o doză fără efect în sine, atenuează capacitatea morfinei de a provoca stimulare locomotorie, de a crește nivelele extracelulare de dopamină acumbală și de a condiționa preferința locului la șoareci. Administrarea de JMV2959 a crescut semnificativ nivelele de țesut de Met-enkefalină-Arg6Phe7 în zona tegmentală ventrală, dinorfinul B în hipocampus și Leu-enkephalin-Arg6 în striatum. Prin urmare, putem presupune că JMV2959 previne răsplata indusă de morfină de stimularea peptidelor active din receptorul delta în zonele striatale și ventralul tegmental. În plus, peptidele hipocampale care activează receptorul kappa pot fi implicate în capacitatea lui JMV2959 de a regla formarea memoriei de recompensă. Având în vedere că dezvoltarea dependenței de droguri depinde, cel puțin parțial, de efectele drogurilor dependente asupra sistemului mezolimbic de dopamină, datele prezente sugerează că antagoniștii GHS-R1A merită să fie elucidați ca strategii noi de tratament a dependenței de opiacee.

 

 

 

 

1. Introducere

Expunerea acută și cronică a medicamentelor dependente influențează profund sistemul dopaminic mezolimbic, un circuit cheie important al sistemelor de recompensare a creierului (Nestler, 2005). Aceste efecte au fost propuse a sublinia, cel puțin parțial, dezvoltarea dependenței de droguri (Wise, 2004). Dependența de droguri provoacă o gamă largă de efecte dăunătoare atât individului, cât și societății, iar noi intervenții farmacologice, care tratează această problemă majoră de sănătate publică, sunt garantate (Koob și Le Moal, 2001). Prin clarificarea sistemelor de semnalizare care mediază capacitatea medicamentelor de dependență de a activa sistemul dopaminic mezolimbic, pot fi identificate strategii unice de tratament pentru tulburările de utilizare a substanțelor.

Cercetările au arătat că mecanismele neurobiologice comune reglează consumul și recompensa induse de alimente și medicamentele dependente (Morganstern et al., 2011), sugerând că rolul peptidelor gut-creier de reglementare alimentară, cum ar fi ghrelinul, include medierea recompensei. Inițial, s-a arătat că ghrelinul determină eliberarea hormonului de creștere (Kojima și colab., 1999) și induce adipozitatea la șobolani (Tschop și colab., 2000). Până în prezent, este bine cunoscut faptul că ghrelinul mărește aportul de alimente, foamete și stimulează apetitul de circuite hipotalamice (pentru recenzie vezi Egecioglu și colab. (2011)). În plus față de hipotalamus, receptorii de grelină (GHS-R1A) sunt exprimați în zone legate de recompensă, cum ar fi amigdala, striatul, cortexul prefrontal, zona tegmentală ventrală (VTA) și hipocampul (pentru recenzie, a se vedea Engel și Jerlhag (2014)), ceea ce înseamnă că rolul fiziologic al grelinei se extinde dincolo de reglarea energetică a homoeostaziei. Într-adevăr, peptida orexigenă grelin s-a dovedit a fi un activator al sistemului dopaminei mezolimbice, precum și un regulator al recompensei, motivației și consumului de alcool, nicotină, amfetamină și cocaină la șoareci (pentru recenzie, a se vedea Engel și Jerlhag (2014)).

Opioidele, ca și alte medicamente dependente, activează sistemul dopolamin mezolimbic care cauzează eliberarea de dopamină acumulată de (Hirose și colab., 2005, Murakawa și colab., 2004, Yoshida și colab., 1999) și în VTA, probabil prin scăderea GABA - inhibarea neuronilor dopaminergici (Johnson și North, 1992). Mai mult, receptorii k-opioizi stocali reglează activitatea sistemului mezolimbic de dopamină (Chefer și colab., 2005, Spanagel și colab., 1992). Expunerea repetată la opioide produce schimbări adaptive ale mai multor neurotransmițători, inclusiv peptide opioide, în zonele de recompensă, care contribuie la dezvoltarea dependenței (De Vries și Shippenberg, 2002). La șobolani, supresia farmacologică a GHS-R1A atenuează eliberarea de dopamină acumulată indusă de morfină, precum și comportamentele stereotipice (Sustkova-Fiserova și colab., 2014). Scopul primei părți a prezentei serii de experimente a fost de a investiga efectul acut al unui antagonist GHS-R1A, JMV2959, asupra capacității morfinei de a provoca o stimulare locomotoare, eliberarea de dopamină acumbalată și preferința locului condiționat la șoareci. Scopul celei de-a doua părți a acestui studiu a fost de a evalua efectul tratamentului repetat cu JMV2959 sau ghrelin asupra nivelelor de peptide opioide (Met-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP), dinorfinul B (DynB) și Leu-enkefalin-Arg6 (LeuArg)) în zone legate de recompensă, inclusiv amigdala, striatum, cortexul prefrontal, VTA și hipocampus.

 

 

2. Proceduri experimentale

 

 

2.1. animale

Au fost utilizați șoareci NMRI de sex masculin după vârsta post-pubertală adulți (8-12 săptămâni și 25-40 greutate corporală, Charles River, Sulzfeld, Germania). Pe scurt, toți șoarecii au fost grupați și menținuți la un ciclu 12 / 12 h lumină / întuneric (luminile sunt aprinse la șapte dimineața). Apa și mâncarea de la robinet (Chow Normal, Harlan Teklad, Norfolk, Anglia) au fost livrate ad libitum, cu excepția situațiilor în care au fost configurate experimentale. S-au utilizat șoareci noi pentru fiecare test de comportament unic, precum și pentru analiza peptidelor opioide. Experimentele au fost aprobate de Comitetul de etică suedez pentru cercetarea animală din Gothenburg. Au fost depuse toate eforturile pentru a minimiza suferința animalelor și pentru a reduce numărul de animale folosite. Toate animalele au fost lăsate să se aclimatizeze cu cel puțin o săptămână înainte de începerea experimentelor.

 

 

2.2. Droguri

Clorhidratul de morfină (Spote Apoteksbolaget Sahlgrenska, Gothenburg, Suedia) a fost dizolvat în vehicul (soluție 0.9% soluție de clorură de sodiu) și a fost administrat ip la o doză de 20 mg / kg 10 min înainte de inițierea experimentului. Această doză a fost selectată deoarece o doză mai mică (10 mg / kg, ip) nu a provocat o stimulare locomotoare la șoarecii noștri (datele nu sunt prezentate). Doza selectată (6 mg / kg, ip) de JMV2959 (sintetizată la Universitățile Institutul de Biomolecule Max Mousseron (IBMM), UMR5247, CNRS, Montpellier 1 și 2, Franța), un antagonist GHS-R1A nici un efect asupra activității locomotorii, eliberarea de dopamină acumbalată și preferința locului condiționat la șoareci (Jerlhag și colab., 2009). JMV2959 a fost dizolvat în vehicul (soluție 0.9% soluție de clorură de sodiu) și a fost întotdeauna administrat cu douăzeci de minute înainte de expunerea la morfină sau decapitare pentru analiza nivelurilor de peptidă opioidă. Doza selectată de JMV2959 nu a afectat comportamentul brut al șoarecilor în nici un experiment. Pentru testele de comportament, JMV2959 a fost administrat acut, deoarece studiile noastre permeabile arată că o singură injecție de JMV2959 atenuează recompensa indusă de medicamente (pentru revizie vezi Engel și Jerlhag (2014)). JMV2959 a fost administrat subcronic timp de cinci zile pentru analiza peptidelor opioide pentru a spori posibilitatea de a detecta un efect robust. În plus, cu injecții repetate, evitați posibilele efecte confuzive ale stresului injectabil acut asupra peptidelor. A fost diluat în clorură de sodiu 0.9%, iar doza selectată de ghrelin (0.33 mg / kg, ip) sa dovedit a provoca recompensă la șoareci (Jerlhag, 2008). Un design echilibrat a fost folosit pentru toate provocările legate de droguri.

 

 

2.3. Experimente de activitate locomotorie

Studiile anterioare au arătat că morfina provoacă o stimulare locomotorie la rozătoare (Wise și Bozarth, 1987). Activitatea locomotorie a fost înregistrată în opt cutii locomotoare cu zgomot atenuat, ventilat și cu lumină luminată (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mät- och reglerteknik AB; Fjärås, Suedia). Cinci pe cinci rânduri de fascicule fotocelulare, la nivelul podelei casetei, creând detectarea fotocelulelor, permitea unui sistem bazat pe calculator să înregistreze activitatea șoarecilor. Activitatea locomotoare a fost definită ca numărul acumulat de fascicule noi de celule foto întrerupte în timpul unei perioade 60-min. În toate experimentele șoarecii au fost lăsați să se obișnuiască cu caseta de activitate locomotorie cu o oră înainte de provocările cu medicamente. Nu au existat diferențe între habituire în niciunul dintre grupurile de tratament (datele nu sunt prezentate).

În prima serie de experiment au fost investigate efectele JMV2959 (6 mg / kg, ip) asupra stimulării locomotorii induse de morfină (20 mg / kg, ip). JMV2959 a fost administrat 20 min înainte de administrarea morfinei și înregistrarea activității a început la zece minute după ultima injecție. Fiecare șoarece a primit o combinație de tratament (vehicul / vehicul, JMV2959 / vehicul, morfină / vehicul sau JMV2959 / morfină; n= 8 pe combinație de tratament) și a fost supus doar unui experiment experimental.

 

 

2.4. Condiție preferată de locație

Pentru a evalua efectele lui JMV2959 asupra efectelor recompensante ale morfinei la șoareci noi, s-au efectuat teste de preferință pentru localizarea condiționată la șoareci așa cum s-a descris anterior (Jerlhag, 2008). Pe scurt, a fost utilizat un aparat CPP cu două camere, cu iluminare 45 lx și repere vizuale și tactile distincte. Un compartiment a fost definit de pereții dungi negre și albe și de un pardosel laminat întunecat, în timp ce celălalt avea o pardoseală din lemn pictată în alb și pereți de textură din lemn. Procedura a constat în precondiționarea (ziua 1), condiționarea (zile 2-5) și postcondiționarea (ziua 6). La precondiționare, șoarecii au fost injectați ip cu vehicul și au fost plasați în cameră cu acces liber la ambele compartimente în timpul 20 min pentru a determina preferința locului inițial (sau lateral). Condiționarea (20 min per sesiune) a fost făcută utilizând o procedură părtinitoare în care morfina (20 mg / kg) a fost asociată cu compartimentul și vehiculul cel mai puțin preferat cu compartimentul preferat. Toți șoarecii au primit câte o injecție de morfină, precum și de vehicul în fiecare zi, iar injecțiile au fost modificate între dimineața și după-amiaza într-un design echilibrat. La post-condiționarea șoarecilor (n= 16) au fost injectate cu JMV2959 (6 mg / kg, ip) sau un volum egal de soluție vehiculului, iar 20 min plasat mai târziu pe linia mediană dintre cele două compartimente cu acces liber la ambele compartimente pentru 20 min (crearea următoarelor grupuri de tratament; Morph-Veh și Morph-JMV2959).

Condiția de preferință a locației a fost calculată ca diferența în% din timpul total petrecut în perechea de medicamente (de exemplu. cel mai puțin preferat) în timpul perioadei de post-condiționare și de precondiționare.

2.5. In vivo microdializa și măsurătorile de eliberare a dopaminei

Având în vedere că JMV2959 atenuează stimularea locomotorie indusă de morfină și preferința locului condiționat la șoareci, efectul lui JMV2959 (6 mg / kg, ip) asupra eliberării de dopamină acumulată indusă de morfină (20 mg / kg, ip) in vivo microdialysis la șoareci în mișcare liberă. Pentru măsurarea nivelurilor de dopamină extracelulare, șoarecii au fost implantați unilateral cu o sondă de microdializă poziționată în nucleul accumbens. Prin urmare, șoarecii au fost anesteziați cu izofluran (Isofluran Baxter, Univentor 400 Unit de Anestezie, Univentor Ldt., Zejtun, Malta), plasați într-un cadru stereotaxic (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, SUA) hipotermie. În calitate de anestezic local și carprofen (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gothenburg, Suedia) au fost utilizați adrenalina xylocainei (5 pg / ml; Pfizer Inic; Oasele craniului au fost expuse și au fost forate o gaură pentru sondă și una pentru șurubul de ancorare. Sonda a fost alternată la întâmplare fie în partea stângă, fie în partea dreaptă a creierului. Pentru nucleul accumbens (Franklin și Paxinos, 1.5) s-au folosit coordonatele 0.7 mm anterior bregmei, ± 4.7 lateral la linia mediană și 1997 mm sub suprafața creierului. Vârful expus al membranei de dializă (20,000 kDa tăiat cu un / id de 310 / 220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, Suedia) a sondei a fost 1 mm. Toate probele au fost implantate chirurgical cu două zile înainte de experiment. După operație șoarecii au fost ținute în cuști individuale până în ziua testului (Macrolon III).

În ziua testului sonda a fost conectată la o pompă de microperfuzie (U-864 Syringe Pump; AgnThós AB) și perfuzată cu soluție Ringer cu o viteză de 1.5 μl / min. După o oră de obișnuință la configurația de microdializă, probele de perfuzie au fost colectate la fiecare 20 min. Nivelul de bază al dopaminei a fost definit ca media a trei eșantioane consecutive înainte de prima provocare medicamentoasă / vehicul, iar creșterea dopaminei acumbalate a fost calculată ca creșterea procentuală față de valoarea inițială. După probele de bază (-40 min până la 0 min), șoarecii au fost injectați cu JMV2959 sau purtător (la 0 min), urmată de o injecție cu morfină sau vehicul (la 20 min). După administrarea acestor medicamente, au fost colectate încă 8 probe 20 min. În mod colectiv, următoarele grupe de tratament (n= 8 în fiecare grup) au fost create vehicule-vehicul (Veh-Veh), vehicul-morfină (Veh-Morph), vehicul JMV2959 (JMV2959-Veh) și JMV2959-morfină.

Nivelurile de dopamină din dializate au fost determinate prin HPLC cu detecție electrochimică. O pompă (Gyncotec P580A, Kovalent AB, V.Frölunda, Suedia), o coloană cu schimbător de ioni (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μm SA, Skandinaviska GeneTec AB, Kungsbacka, Suedia) și un detector (Antec Decade, Antec Leyden, Zoeterwoude , Olanda) echipate cu o celulă de flux VT-03 (Antec Leyden). Faza mobilă (pH 5.6), constând din acidul sulfonic 10 mM, acidul citric 200 mM, citratul de sodiu 200 mM, 10% EDTA, 30% MeOH, s-a filtrat sub vid folosind un filtru cu membrană 0.2 μm (GH Polypro, PALL Gelman Laboratory; Lund, Suedia). Faza mobilă a fost livrată la o viteză de curgere de 0.2 ml / min care trecea printr-un degazer (Kovalent AB), iar analiza a fost oxidată la + 0.4 V.

După terminarea experimentelor de microdializă, șoarecii au fost decapitați, iar probele au fost perfuzate cu albastru pontamine 6BX pentru a facilita localizarea sondelor. Creierele au fost montate pe un dispozitiv vibroslice (752 M Vibroslice, Campden Instruments Ltd., Loughborough, Marea Britanie) și au tăiat secțiunile 50 μm. Locația sondei a fost determinată prin observarea brută folosind microscopia luminoasă. Poziția exactă a sondei a fost verificată (Franklin și Paxinos, 1997) și numai șoarecii cu plasări corecte au fost utilizați în analiza statistică.

 

 

2.6. Tratamentul și disecția

Au fost investigate efectele tratamentului JMV2959 asupra nivelurilor de MEAP, DynB și LeuArg în zone legate de recompensă. Șoarecii au fost injectați fie cu JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) sau un volum egal de vehicul (ip, n= 8) timp de cinci zile. 20 min după ultima injecție șoarecii au fost sacrificați și creierul de la acești șoareci a fost colectat. Șoarecii separați au fost injectați fie cu ghrelin (0.33 mg / kg, ip, n= 8) sau un volum egal de vehicul (ip, n= 8) timp de cinci zile. Cinci minute după ultima injecție șoarecii au fost sacrificați și creierul de la acești șoareci a fost colectat. Amigdala, striatumul, cortexul prefrontal, VTA și hipocampul s-au disecat rapid și s-au pus imediat pe gheață uscată și apoi s-au păstrat la -80 ° C până la prelucrarea ulterioară.

 

 

2.7. Analiza nivelurilor peptidelor opioide

Procedurile de omogenizare și extracție cu peptide au urmat o procedură standard descrisă în detaliu (Nylander și colab., 1997). Pe scurt, acidul acetic fierbinte (95 ° C) (1 M) a fost adăugat la probele congelate. Probele au fost încălzite într-o baie de apă (95 ° C) timp de 5 min, răcite pe gheață și apoi omogenizate cu un Sonifier Branson (Danbury, CT, SUA). Omogenatul a fost reîncălzit la 95 ° C timp de 5 min și răcit pe gheață înainte de centrifugarea timp de 15 min la 4 ° C și 12,074Xg într-o centrifugă Beckman GS-15R (Fullerton, CA, SUA). Extractele au fost purificate în continuare conform unei proceduri descrise anterior (Nylander și colab., 1997). Au fost colectate două fracții: fracțiunea III (Leu-Arg și MEAP) și fracțiunea V (DynB). Probele au fost uscate într-o centrifugă cu vid (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA USA) și depozitate în congelator (-20 ° C) până la analiza peptidelor.

Nivelurile imunoreactive (ir) ale DynB, LeuArg și MEAP au fost analizate cu teste radioimunologice bine stabilite și protocoalele au fost descrise în detaliu în altă parte (Nylander și colab., 1997). În analiza DynB, IgG de capră anti-iepure (GARGG; Bachem, Bubendorf, Elveția) a fost utilizat pentru a separa peptida liberă și legată de anticorp. Antiserul Dyn (113 +) a fost utilizat într-o diluție finală de 1: 600000. Reactivitatea încrucișată cu Dyn mare a fost 100% și cu DynB (1-29) 1%. Nu s-a observat reactivitate încrucișată cu alte peptide opioide. În testele LeuArg și MEAP, s-a folosit o suspensie de cărbune pentru a separa peptida liberă și legată de anticorp. Pentru antiserul LeuArg (91: 6D +, diluție finală 1: 60000), reactivitatea încrucișată a fost mai mică decât 0.01% pentru Leu-enkefalină și MEAP, 0.02% pentru DynB, 0.04% pentru DynA și 0.08% pentru alfa-neoendorfină. Antiserul MEAP 90: 3D (II) a fost utilizat într-o diluție finală a 1: 160 000. Reactivitatea încrucișată cu Met-enkefalină, Met-enkefalină-Arg6, Met-enkefalin-Arg6Gli7Leu8, Leu-enkefalină și Leu-enkefalină-Arg6 a fost <0.1%

 

 

 

2.8. analize statistice

Datele privind activitatea locomotorie au fost evaluate printr-o ANOVA cu o singură cale urmată de teste post-hoc Bonferroni. Datele privind preferințele pentru locația condițiilor au fost evaluate de un partener necorespunzător t-Test. Experimentele de microdializă au fost evaluate printr-o analiză ANOVA cu două căi, urmată de testul Bonferroni post-hoc pentru comparații între diferite tratamente și în mod specific la momente de timp date. Nivelele de peptide au fost analizate cu un neparat t-Test. Datele sunt prezentate ca medie ± SEM. O valoare a probabilității P<0.05 a fost considerat semnificativ statistic.

 

 

 

3. Rezultate

 

 

3.1. Efectele JMV2959 asupra stimulării locomotorii induse de morfină, eliberării de dopamină acumbalată și preferării locului condiționat la șoareci

Un efect general principal al tratamentului sa constatat asupra activității locomotorii la șoareci după administrarea sistemică a morfinei (20 mg / kg) și JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; n= 8 pentru Veh-Veh, JMV2959-Veh, JMV2959-Morph și n= 7 pentru Veh-Morph). Așa cum se arată în Figura 1A, analiza post-coafă a arătat că tratamentul prealabil cu o singură injecție de JMV2959 (P<0.001) a atenuat semnificativ stimularea locomotorie indusă de morfină (P<0.01 Veh – Veh vs Veh-Morph). Doza selectată de JMV2959 nu a avut niciun efect asupra activității locomotorii în comparație cu tratamentul vehiculului (P> 0.05). Nu a existat nicio diferență în răspunsul la activitatea locomotorie la șoarecii tratați cu vehicul și la șoarecii tratați cu JMV2959-morhpină (P> 0.05).

Fig. 1. Deschide imaginea mare  

Figura 1

Antagonistul GHS-R1A JMV2959 atenuează stimularea locomotorie indusă de morfină, eliberarea de dopamină acumulată și preferința locului condiționat la șoareci. (A) Stimularea locomotorie indusă de morfină (20 mg / kg ip) a fost atenuată printr-o singură injecție cu JMV2959 (6 mg / kg ip) (n= 7-8 în fiecare grup; **P<0.01, ***P<0.001 ANOVA unidirecțională urmată de un test post-hoc Bonferroni). (B) Preferința locului (CPP) indusă de morfină (20 mg / kg ip) a fost atenuată printr-o singură injecție acută de JMV2959 (6 mg / kg ip) la șoareci (n= 8 în fiecare grup, *P<0.05, test t nepereche). (C) Mai întâi am demonstrat un efect semnificativ al morfinei (20 mg / kg ip) pentru a crește eliberarea de dopamină în comparație cu tratamentul vehiculului (interval de timp 40-180 min (P<0.001), Veh – Veh vs Veh-Morph). Așa cum sa arătat în (C) pre-tratamentul cu JMV2959 (6 mg / kg ip) a atenuat creșterea indusă de morfină în eliberarea de dopamină comparativ cu pre-tratamentul vehiculului la intervalul 40-100 și 140-180 min##P<0.01, # # #P <0.001, JMV2959-Morph comparativ cu tratamentul Veh – Morph). Doza selectată de JMV2959 nu a avut niciun efect semnificativ asupra eliberării de dopamină acumulată comparativ cu tratamentul vehiculului la orice interval de timpP> 0.05, Veh – Veh vs JMV2959-Veh). JMV2959 a redus, dar nu a blocat complet, eliberarea de dopamină acumulată de morfină la intervalul de timp 60-140 (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph comparativ cu tratamentul Veh – Morph). Săgețile reprezintă punctele de timp de injectare a JMV2959, vehicul și morfină. Date analizate cu un ANOVA bidirecțional urmat de un test post-hoc Bonferroni (n= 8 în fiecare grup). Veh-veh (Pătrat), Veh-Morph (rhomb), JMV2959-Veh (Triunghi), JMV2959-Morph (cerc). Toate valorile reprezintă media ± SEM.

Condiția preferată a locului condiționat (20 mg / kg) (Morph-Veh) a fost atenuată semnificativ printr-o singură injecție acută de JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959) în ziua post-condiționare (P= 0.025, n= 8 în fiecare grup; Figura 1B).

Măsurătorile de microdializă acompala a dopaminei la șoareci au evidențiat un efect general al tratamentului (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), timp F(11,308) = 7.05, P<0.0001) și tratament × interacțiune în timp (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (Figura 1C; n= 8 în fiecare grup). Morfina a crescut eliberarea de dopamină acumbalată în raport cu tratamentul vehiculului la intervalul de timp 40-180 min (P<0.001). Așa cum se arată în Figura 1C acest efect a fost redus prin pre-tratament cu JMV2959 la intervalul de timp 40-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) și 160-180 min (P<0.001). JMV2959 a redus, dar nu a blocat complet, morfina a indus eliberarea de dopamină acumulată, deoarece a existat o diferență între tratamentul vehiculului și tratamentul cu JMV2959-morfină la intervalul de timp 60-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) și 160 min (P<0.05). Doza selectată de JMV2959 nu a avut niciun efect semnificativ asupra eliberării de dopamină acumulată în comparație cu tratamentul vehiculului la orice interval de timp (P> 0.05).

 

 

 

3.2. Efectele tratamentului sub-cronic JMV2959 sau ghrelin asupra nivelelor de peptide opioide

Nivelurile imunoreactive (ir) ale celor trei peptide din zonele creierului măsurate pot fi găsite în Tabelul 1, Tabelul 2. Tratamentul sub-cronic cu JMV2959 a crescut semnificativ nivelele MEAP în VTA, DynB în hipocampus și LeuArg în striatum (Tabelul 1). Nu au existat diferențe în alte domenii investigate, și anume amigdala și cortexul prefrontal. Tratamentul cu ghrelin subcronic nu a modificat în mod semnificativ nivelurile de MEAP, DynB sau LeuArg (Tabelul 2).

Tabelul 1Sub-cronic de tratament JMV2959 a crescut în mod semnificativ nivelurile de ir de Met5-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP) în zona tegmentală ventrală (VTA), nivelurile ir de Dynorphin B (DynB) în hipocampus (HC), precum și nivelurile ir și Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) în striat (STR), comparativ cu tratamentul vehiculului. Nu au existat diferențe în alte domenii investigate. Toate valorile reprezintă media ± SEM. (amygdala (AMY) și cortexul prefrontal (PFC)).
  JMV2959 Vehicul p-Valoare
  Nivelurile IR MEAP
AMY 14.52 3.91 ± 15.61 4.37 ± 0.838
STR 43.47 5.54 ± 47.60 7.94 ± 0.754
PFC 3.61 0.90 ± 2.94 0.41 ± 0.450
VTA 8.69 0.75 ± 4.63 0.42 ± 0.003
HC 4.52 0.80 ± 2.56 0.23 ± 0.170
  Nivelurile Ir DynB
AMY 2.56 0.41 ± 1.90 0.25 ± 0.759
STR 8.69 0.89 ± 10.17 0.91 ± 0.547
PFC 2.24 0.36 ± 1.60 0.20 ± 0.169
VTA 8.89 0.55 ± 5.98 0.21 ± 0.079
HC 3.70 0.41 ± 2.36 0.19 ± 0.042
  Nivelul Ir LeuArg
AMY 13.46 1.69 ± 11.07 1.45 ± 0.270
STR 14.50 0.89 ± 12.12 0.93 ± 0.046
PFC 11.21 1.32 ± 10.80 1.44 ± 0.776
VTA 12.96 1.63 ± 10.96 1.39 ± 0.245
HC 5.29 0.75 ± 5.67 0.72 ± 0.663
 
Tabelul 2Sub-tratamentul cu ghrelin cronic nu a modificat nivelele de ir de Met5-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP), dinorfinul B (DynB) sau Leu-enkefalin-Arg6 (LeuArg) în oricare dintre domeniile legate de recompensă investigate, de exemplu. zonele tegmentale ventrale (VTA), amigdala (AMY), striatum (STR), cortexul prefrontal (PFC) și hipocampul (HC). Toate valorile reprezintă media ± SEM.
  Grelina Vehicul p-Valoare
  Nivelurile IR MEAP
AMY 12.00 3.91 ± 15.46 3.02 ± 0.517
STR 43.59 7.24 ± 61.15 12.46 ± 0.176
PFC 3.75 0.46 ± 3.17 0.64 ± 0.550
VTA 11.96 1.03 ± 10.60 0.91 ± 0.249
HC 6.75 1.88 ± 5.20 1.01 ± 0.314
  Nivelurile Ir DynB
AMY 3.97 1.09 ± 5.42 2.27 ± 0.488
STR 11.15 0.89 ± 13.03 2.41 ± 0.434
PFC 3.23 0.50 ± 2.38 0.18 ± 0.072
VTA 5.11 0.15 ± 8.25 1.59 ± 0.070
HC 4.32 0.87 ± 3.19 0.29 ± 0.095
  Nivelul Ir LeuArg
AMY 9.67 1.53 ± 9.47 1.29 ± 0.928
STR 8.69 0.87 ± 8.87 0.44 ± 0.875
PFC 4.61 0.47 ± 4.47 0.39 ± 0.921
VTA 8.35 1.04 ± 6.99 0.42 ± 0.407
HC 4.97 0.50 ± 3.47 0.41 ± 0.086
 

 

 

 

4. Discuţie

Studiul prezent susține ipoteza că rolul fiziologic al peptidei orexigenice include reglementarea recompensării. Într-adevăr, am arătat că administrarea periferică a unui antagonist GHS-R1A atenuează capacitatea morfinei de a provoca o stimulare locomotorie, de a crește nivelele de dopamină în NAc și de a induce o preferință a locului condiționat la șoareci. De asemenea, am constatat că tratamentul sub-cronic JMV2959, dar nu și ghrelinul, a crescut nivelele de țesuturi ale MEAP în VTA, DynB în hipocampus și LeuArg în striatum, furnizând prima dovadă că capacitatea semnalizării ghrelinului de a regla armarea poate implica peptide opioide .

Datele prezentate aici arată că antagonismul GHS-R1A afectează capacitatea morfinei de a activa sistemul de dopamină mezolimbică la șoareci. În conformitate sunt constatările care arată că JMV2959 blochează capacitatea morfinei de a crește nivelurile extracelulare de dopamină accumbală și de a provoca un comportament stereotip la șobolani (Sustkova-Fiserova și colab., 2014). Sprijinitor, administrarea centrală a grelinei mărește punctul de întrerupere, dar nu și numărul de apăsări de pârghie active, în programul de întărire a raportului progresiv la șobolani care se auto-administrează heroină (Maric și colab., 2012). Susținerea că semnalizarea grelinei stă la baza dependenței de droguri este susținută în continuare de constatările care arată că JMV2959 reduce aportul, precum și motivația de a consuma alcool la șobolani și că recompensa indusă de amfetamină, cocaină și nicotină este blocată de antagonismul GHS-R1A la rozătoare ( pentru recenzie, vezi Engel și Jerlhag (2014)) și că polimorfismele din genele legate de grelină sunt asociate cu consumul de alcool, fumat și amfetamină (pentru recenzie, vezi Engel și Jerlhag (2014)).

Constatările prezente cu niveluri crescute de peptide opioide în striatum, VTA și hipocampus după tratamentul sub-cronic JMV2959 sugerează pentru prima dată interacțiuni între peptidele opioide și semnalizarea ghrelinelor. Opioidele endogene sunt implicate în efecte de recompensare, nu numai induse de opioide, dar și alte medicamente de abuz și recompense naturale și în procese adaptive observate după expunerea repetată la medicament (Trigo și colab., 2010, Van Ree și colab., 2000). Într-adevăr, activitatea sistemului mesolimbic de dopamină este reglată de opioide endogene atât la nivelul VTA, cât și la NAc (Hirose și colab., 2005, Spanagel și colab., 1992) și acțiunile s-au dovedit a fi fie directe, fie indirecte prin modularea altor transmițătoare (Charbogne și colab., 2014).

Am constatat că tratamentul sub-cronic cu JMV2959 a crescut nivelele de MEAP în VTA. MEAP este derivat exclusiv din proencefalină și a fost utilizat ca marker al peptidelor de proenkefalină care activează în principal receptorii de opioizi β. Sustinem ca nivelurile crescute de MEAP endogene in VTA dupa tratamentul cu JMV2959 pot preveni capacitatea morfinei de a scadea inhibitia GABA a neuronilor dopaminergici mesoaccumbali (Johnson si North, 1992), ceea ce poate contribui la efectele induse de morfina reduse dupa JMV2959. În mod favorabil, GHS-R1A se află pe interneuronii GABAergici din VTA (Abizaid și colab., 2006). Mai mult, studiile anterioare au arătat că perfuzia intra-VTA de JMV2959, de mecanismele necunoscute, atenuează recompensa indusă de ghrelin (Jerlhag și colab., 2011), precum și aportul de zaharoză mediat de ghrelin la rozătoare (Skibicka și colab., 2011), sugerează că GHS-R1A ventriculară tegumentară este importantă pentru reglarea recompensării. În susținerea unei astfel de controverse sunt concluziile care arată că alte peptide care reglează foamea, cum ar fi galanina și orexina, mediază proprietățile satisfacatoare ale morfinei de mecanismele locale din VTA (Narita și colab., 2006, Richardson și Aston-Jones, 2012).

În striatum, am constatat că JMV2959 sub-cronic a crescut nivelele de ir LeuArg, sugerând că abilitatea lui JMV2959 de a atenua preferința locului condiționat condiționat indusă de morfină, eliberarea dopaminei și stimularea locomotorie depinde, cel puțin parțial, activitatea receptorului opioid. Nivelurile crescute de LeuArg pot rezulta din conversia enzimatică crescută a peptidelor dinorfinice în encefaline sau din eliberarea îmbunătățită a Dyn în NAc ca răspuns la creșterea dopaminei, urmată de degradarea în LeuArg. Cu toate acestea, studii anterioare au arătat că activitatea sistemului mesolimbic de dopamină este reglementată de receptorii opioizi k în NAc (Spanagel și colab., 1992) și receptorii endogeni-opioizi furnizează o inhibiție tonică a neurotransmisiei mezoaccumbale a dopaminei și atenuează eliberarea indusă de cocaină a dopaminei în NAc (Chefer și colab., 2005). arată că JMV2959 modifică nivelul ir DynB în striatum. Prin urmare, sunt necesare studii suplimentare privind peptidele de prodynorfină pentru elucidarea interacțiunilor dintre antagonismul GHS-R1A și dinamorfinele.

În studiul de față am arătat, de asemenea, că tratamentul cu JMV2959 crește semnificativ nivelele DynB hipocampale. Ghrelin crește consolidarea memoriei, precum și formarea coloanei vertebrale dendritice, generează potențierea pe termen lung și induce facilitarea memoriei de hipocampal GHS-R1A la rozătoare (Carlini și colab., 2010, Diano și colab., 2006). Mai mult, șoarecii knock-out GHS-R1A afișează o memorie spațială îmbunătățită în testul cu labirinți de apă Morris și o memorie contextuală perturbată în paradigma condiționării frica, comparativ cu șoarecii de tip sălbatic (Albarran-Zeckler și colab., 2012). Peptidele dynorfinice, inclusiv DynB, sunt abundente în hipocampus și atenuează potențarea pe termen lung (Chavkin și colab., 1985, Wagner și colab., 1993), precum și distrugerea învățării spațiale la șobolani (Sandin și colab., 1998). Prin urmare, putem presupune că antagonistul GHR-R1A poate atenua memoria recompensării prin inhibarea potențării pe termen lung a hipocampului de activarea DynB. În mod colectiv, aceste date oferă mecanism potențial nou prin care JMV2959 de peptidele opioide pot modifica armarea. Cu toate acestea, receptorii opioizi sunt larg răspândiți în creier, sugerând că și alte zone, care nu sunt incluse în studiul prezent, pot fi implicate în recompensa indusă de morfină GHS-R1A. De exemplu, consumul de alimente indus de ghrelin, precum și presarea pârghiei pentru zaharoză este redus prin administrarea centrală sau intra-hipotalamică a unui antagonist al receptorilor de opioid-k (Romero-Pico și colab., 2013). Cu toate acestea, rolul peptidelor opioide în alte zone trebuie elucidat în studiile viitoare.

Liganzii endogeni ai receptorilor μ, endomorfinele și beta-endorfina nu au fost analizați aici, așa că nu putem exclude un posibil efect al JMV2959 asupra acestor peptide. Într-adevăr, proprietățile recompensatoare ale morfinei implică receptorii m-opioizi în VTA precum și NAc (Hirose și colab., 2005, Johnson și North, 1992, Murakawa și colab., 2004, Yoshida și colab., 1999). Cu toate acestea, un antagonist al receptorului μ nu atenuează consumul de alimente induse de ghrelin (Naleid și colab., 2005), nici stimularea locomotorie indusă de ghrelin și eliberarea de dopamină acumulată (Jerlhag și colab., 2011), ceea ce implică faptul că capacitatea receptorului GHSR- Antagonistul 1A pentru reglarea armăturii nu include receptorii μ. Pe de altă parte, JMV2959 a afectat peptidele opioide derivate de la proencefalină și prodynorfină, arătând că acestea pot fi implicate în efectele induse de antagoniștii GHSR-1A.

În timp ce studiile anterioare au arătat că administrarea sistemică a ghrelinului provoacă recompensă (Jerlhag, 2008), precum și ameliorarea proprietăților recompensatoare ale medicamentelor dependente (pentru revizuire, vezi Engel și Jerlhag (2014)), aici arată că tratamentul cu ghrelin subcronic nu a modificat nivelurile de țesut ir de opioide peptide în oricare dintre zonele legate de recompensă studiate. Administrarea sistemică a ghrelinului activează expresia c-fos în zone hipotalamice, dar nu în zonele mezolimbice și hipocampice (Pirnik și colab., 2011) și legarea ghrelinului marcat fluorescent este limitată la neuronii regulatori alimentari ai hipotalamusului (Schaeffer și colab., 2013 ). Luate împreună cu constatările care arată că ghrelinul, excluzând cantitățile de urme din hipotalamus, nu poate fi detectat în zonele adânci ale creierului după administrarea ghrelinului periferic (Furness și colab., 2011, Grouselle și colab., 2008, Sakata și colab., 2009 ), ridică posibilitatea ca ghrelinul sistemic să activeze sistemul de recompense de mecanisme indirecte independente de opioide endogene. În mod susținut, eliberarea de dopamină acumulată indusă de ghrelin necesită semnalizare hipotalamică în amonte orexigenă (Cone și colab., 2014), administrarea ghrelinului periferic nu modifică aportul de alcool la șoareci (Lyons și colab., 2008) și că neutralizarea ghrelinului periferic nu atenuează alcoolul - recompensa indusa la soareci sau consumul de alcool la sobolani (Jerlhag et al., in presa). Posibilitatea ca administrarea sub-cronică a ghrelinului să crească nivelele țesuturilor de țesut ale peptidelor opioide trebuie considerată totuși aceasta trebuie investigată în detaliu în studiile viitoare.

Abilitatea medicamentelor de a provoca stimularea, eliberarea dopaminei și inducerea unei preferințe a locului condiționat sunt asociate intim cu proprietățile de întărire a medicamentelor dependente și acești parametri sunt considerați a fi o parte a procesului de dependență (Wise, 2004). Având în vedere că am constatat aici că JMV2959 atenuează acești parametri de recompensă la șoareci, putem presupune că GHS-R1A poate juca un rol important în procesele de dependență și că opioidele endogene sunt implicate în aceste procese. În mod colectiv, aceste date indică faptul că antagoniștii GHS-R1A ar trebui să fie elucidați ca tratament al dependenței de droguri.

Rolul sursei de finanțare

JE și EJ sunt susținute prin granturi de la Consiliul Suedez pentru Cercetare (Granturile nr. 2011-4646, 2009-2782 și 2011-4819), fundația creierului suedez, LUA / ALF (Spitalul Universitar Sahlgrenska, consiliul de cercetare al monopolului suedez de vânzare cu amănuntul a alcoolului și fundațiile lui Adlerbertska, Fredrik și Ingrid Thuring, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten și Ragnar Söderberg, Wilhelm și Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut și Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérs, Jeansons, Åke Wiberg , Societatea suedeză de medicină, Societatea suedeză pentru cercetarea medicală și Fundația de cercetare pentru psihiatrie din Gothenburg. Consiliul de Cercetare al Alcoolului al monopolului suedez de comercializare a alcoolului din Suedia și Consiliul suedez al cercetării (K148251-2012X-61-22090-01) au susținut IN. Sursele de finanțare nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, în colectarea, analiza și interpretarea datelor, în redactarea raportului și în decizia de publicare a datelor

 

 

 

Contribuitori

JAE a proiectat studiul și a scris manuscrisul. În parte efectuată de mâini pe locul de muncă, datele analizate, a scris manuscrisul. EJ a proiectat studiul, a scris protocolul, a căutat literatura de specialitate, a analizat și a efectuat analize statistice și a scris primul proiect al manuscrisului. Toți autori au contribuit și au aprobat manuscrisul final.

 

 

 

 

Conflictul de interese

EJ a primit sprijin financiar din partea Fundației Novo Nordisk. Acest lucru nu modifică respectarea de către autor a oricăror politici de revistă privind schimbul de date și materiale. Autorii rămași nu declară nici un conflict de interese.

 

 

Mulţumiri

Britt-Mari Larsson, Kenn Johannessen, Qin Zhou și Lova Segerström sunt recunoscuți cu recunoștință pentru asistență tehnică de specialitate. Antagonistul GHS-R1A JMV2959 a fost furnizat de Æterna Zentaris. Prof. Jean Martinez și Dr. Jean-Alain Fehrentz sunt recunoscuți pentru sinteza lui JMV2959

 

Referinte

  1. Abizaid, A., Liu, ZW, Andrews, ZB, Shanabrough, M., Borok, E., Elsworth, JD, Roth, RH, Sleeman, MW, Picciotto, MR, TL Ghrelin modulează activitatea și organizarea sinaptică de intrare a neuronilor dopaminergici midbrain în timp ce promovează pofta de mâncare. J. Clin. Investig. 2006; 116: 3229-3239
  2. Albarran-Zeckler, RG, Brantley, AF și Smith, RG Creierul knock-out al receptorului pentru secreția de hormon de creștere (GHS-R1a) prezintă memorie spațială îmbunătățită și deficite în memoria contextuală. Behav. Brain Res. 2012; 232: 13-19
  3. Vezi în articol 
  4. Vezi în articol 
  5. Vezi în articol 
  6. Vezi în articol 
  7. Vezi în articol 
  8. Vezi în articol 
  9. Vezi în articol 
  10. Vezi în articol 
  11. Vezi în articol 
  12. Vezi în articol 
  13. Vezi în articol 
  14. Vezi în articol 
  15. Vezi în articol 
  16. Vezi în articol 
  17. Vezi în articol 
  18. Vezi în articol 
  19. Vezi în articol 
  20. Vezi în articol 
  21. Vezi în articol 
  22. Vezi în articol 
  23. Vezi în articol 
  24. Vezi în articol 
  25. Vezi în articol 
  26. Vezi în articol 
  27. Vezi în articol 
  28. Vezi în articol 
  29. Vezi în articol 
  30. Vezi în articol 
  31. Vezi în articol 
  32. Vezi în articol 
  33. Vezi în articol 
  34. Vezi în articol 
  35. Vezi în articol 
  36. Vezi în articol 
  37. Vezi în articol 
  38. Vezi în articol 
  39. Vezi în articol 
  40. Vezi în articol 
  41. Vezi în articol 
  42. Vezi în articol 
  43. Vezi în articol 
  44. Vezi în articol 
  45. Vezi în articol 
  46. Vezi în articol 
  47. Vezi în articol 
  48. Carlini, VP, Perez, MF, Salde, E., Schioth, HB, Ramirez, OA și de Barioglio, SR Ghrelin indusă de facilitare a memorării implică activarea oxidului nitric sintazei și scăderea pragului pentru a promova LTP în girusul dentat hipocampal. Physiol. Behav. 2010; 101: 117-123
  49. Charbogne, P., Kieffer, BL și Befort, K. Anii 15 de abordări genetice in vivo pentru cercetarea dependenței: Receptorul opioid și gena peptidică knockout în modelele de șoareci de abuz de droguri. Neuropharmacology. 2014; 76: 204-217
  50. Chavkin, C., Shoemaker, WJ, McGinty, JF, Bayon, A. și Bloom, FE Caracterizarea sistemelor de neuropeptide prodynephrin și proenkephalin în hipocampus de șobolan. J. Neurosci. 1985; 5: 808-816
  51. Chefer, VI, Czyzyk, T., Bolan, EA, Moron, J., Pintar, JE și Shippenberg, TS Sistemele endogene de receptori de opiacee kappa reglementează dinamica mezoaccumbală a dopaminei și vulnerabilitatea la cocaină. J. Neurosci. 2005; 25: 5029-5037
  52. Cone, JJ, McCutcheon, JE și Roitman, MF Ghrelin acționează ca o interfață între starea fiziologică și semnalarea dopaminei fazice. J. Neurosci. 2014; 34: 4905-4913
  53. De Vries, TJ și Shippenberg, TS Sisteme neurale care stau la baza dependenței de opiacee. J. Neurosci. 2002; 22: 3321-3325
  54. Diano, S., Farr, SA, Benoit, SC, McNay, CE, da Silva, I., Horvath, B., Gaskin, FS, Nonaka, Jaeger, LB, Banks, WA, Morley, JE, Pinto S., Sherwin, RS, Xu, L., Yamada, KA, Sleeman, MW, Tschop, MH și Horvath, TL Ghrelin controlează densitatea sinapsei coloanei hipocampice și performanța memoriei. Nat. Neurosci. 2006; 9: 381-388
  55. Egecioglu, E., Skibicka, KP, Hansson, C., Alvarez-Crespo, M., Friberg, PA, Jerlhag, E., Engel, JA și Dickson, SL Semnalele hendonice și de stimulare pentru controlul greutății corporale. Rev. Endocr. Metab. Dizord. 2011; 12: 141-151
  56. Engel, JA și Jerlhag, E. Rolul hormonilor intestinali în fiziopatologia alcoolismului: implicații pentru farmacoterapie. Medicamentele CNS. 2014; 28: 875-886
  57. Franklin, KBJ și Paxinos, G. Brainul mouse-ului în coordonatele stereotaxice. Academic Press, San Diego; 1997
  58. Furness, JB, Hunne, B., Matsuda, N., Yin, L., Russo, D., Kato, I., Fujimiya, M., Patterson, M., McLeod, J., Andrews, ZB și Bron , R. Investigarea prezenței ghrelinului în sistemul nervos central al șobolanului și șoarecelui. Neuroscience. 2011; 193: 1-9
  59. Grouselle, D., Chaillou, E., Caraty, A., Bluet-Pajot, MT, Zizzari, P., Tillet, Y. și Epelbaum, J. Pulsul lichidului cefalorahidian și ghrelinul plasmatic în legătură cu secreția hormonului de creștere și cu aportul alimentar la ovine. J. Neuroendocrinol. 2008; 20: 1138-1146
  60. Hirose, N., Murakawa, K., Takada, K., Oi, Y., Suzuki, T., Nagase, H., Cools, AR, și Koshikawa, N. Interacțiunile dintre receptorii opioid mu și delta, în special receptorii opioizi delta1 și delta2, promovează eliberarea de dopamină în nucleul accumbens. Neuroscience. 2005; 135: 213-225
  61. Jerlhag, E. Administrarea sistemică a ghrelinului determină preferința locului condiționat și stimulează dopamina acumbalată. Addict. Biol. 2008; 13: 358-363
  62. Jerlhag, E., Egecioglu, E., Dickson, SL și Engel, JA Reglarea glutamatergică a activării induse de ghrelin a sistemului dopaminic mesolimbic. Addict. Biol. 2011; 16: 82-91
  63. Jerlhag, E., Egecioglu, E., Landgren, S., Salome, N., Heilig, M., Moechars, D., Datta, R., Perrissoud, D., Dickson, Cerința de semnalizare centrală pentru ghrelin pentru recompensă cu alcool. Proc. Natl. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII. 2009; 106: 11318-11323
  64. Jerlhag, E., Ivanoff, L., Vater, A. și Engel, JA Ghrelinul circulant periferic nu mediază recompensa indusă de alcool și consumul de alcool la rozătoare. Alcool. Clin. Exp. Res. 2014; 38: 959-968
  65. Johnson, SW și Nord, RA Opioidele excită neuronii dopaminei prin hiperpolarizarea interneuronilor locali. J. Neurosci. 1992; 12: 483-488
  66. Kojima, M., Hosoda, H., Date, Y., Nakazato, M., Matsuo, H., și Kangawa, K. Ghrelinul este o peptidă acilată eliberată de hormon de creștere din stomac. Natură. 1999; 402: 656-660
  67. Koob, GF și Le Moal, M. Dependența de droguri, dysregularea recompensei și alostasul. Neuropsychopharmacol. Off. Publ. A.m. Coll. Neuropsychopharmacol. 2001; 24: 97-129
  68. Lyons, AM, Lowery, EG, Sparta, DR și Thiele, TE Efectele disponibilității alimentelor și administrarea agenților orexigeni și anorectici asupra consumului ridicat de etanol, asociată cu consumul de alcool în procedurile de întuneric. Alcool. Clin. Exp. Res. 2008; 32: 1962-1968
  69. Maric, T., Sedki, F., Ronfard, B., Chafetz, D. și Shalev, U. Un rol limitat al ghrelinului în administrarea de heroină și refacerea indusă de deprivarea alimentelor de către heroină în cazul șobolanilor. Addict. Biol. 2012; 17: 613-622
  70. Morganstern, I., Barson, JR și Leibowitz, SF Reglarea consumului de droguri și alimentelor gustoase prin sisteme similare de peptide. Curr. Drug Abus. Rev. 2011; 4: 163-173
  71. Murakawa, K., Hirose, N., Takada, K., Suzuki, T., Nagase, H., Cools, AR și Koshikawa, N. Deltorphin II îmbunătățește nivelurile extracelulare ale dopaminei în nucleul accumbens prin intermediul mecanismelor independente de receptorul opioid. Euro. J. Pharmacol. 2004; 491: 31-36
  72. Naleid, AM, Grace, MK, Cummings, DE și Levine, AS Ghrelin induce hrănirea în calea de recompensă mezolimbică între zona tegmentală ventrală și nucleul accumbens. Peptidele. 2005; 26: 2274-2279
  73. Narita M., Nagumo, Y., Hashimoto, S., Narita, M., Khotib, J., Miyatake, M., Sakurai, T., Yanagisawa, M., Nakamachi, T., Shioda, și Suzuki, T. Implicarea directă a sistemelor orexinergice în activarea căii dopaminergice mezolimbice și a comportamentelor asociate induse de morfină. J. Neurosci. 2006; 26: 398-405
  74. Nestler, EJ Există o cale moleculară comună pentru dependență ?. Nat. Neurosci. 2005; 8: 1445-1449
  75. Nylander, I., Stenfors, C., Tan-No, K., Mathe, AA, și Terenius, L. O comparație între iradierea cu microunde și decapitarea: nivelele bazale ale dynorfinului și enkefalinei și efectul tratamentului cu morfină cronică asupra peptidelor dinorfinice. Neuropeptide. 1997; 31: 357-365
  76. Pirnik, Z., Bundzikova, J., Holubova, M., Pychova, M., Fehrentz, JA, Martinez, J., Zelezna, B., Maletinska, L. și Kiss, A. Agoniștii ghrelin au impact asupra expresiei proteinei Fos în zonele creierului legate de reglarea admisiei alimentare la șoarecii masculi C57BL / 6. Neurochem. Int. 2011; 59: 889-895
  77. Richardson, KA și Aston-Jones, G. Lateral neuronii hipotalamici de orexină / ipocretin care se proiectează în zona tegmentală ventrală sunt activate diferențiat cu preferința morfinei. J. Neurosci. 2012; 32: 3809-3817
  78. Romero-Pico, A., Vazquez, MJ, González-Touceda, D., Folgueira, C., Skibicka, KP, Alvarez-Crespo M., Van Gestel MA, Velasquez DA, Schwarzer C., Herzog, H., Lopez, M., Adan, RA, Dickson, SL, Dieguez, C. și Nogueiras, R. Receptorul kapo-opioidic hipotalamic modulează efectul orexigenic al ghrelinului. Neuropsychopharmacol. Off. Publ. A.m. Coll. Neuropsychopharmacol. 2013; 38: 1296-1307
  79. Sakata, I., Nakano, Y., Osborne-Lawrence, S., Rovinsky, SA, Lee, CE, Perello M., Anderson JG, Coppari R., Xiao G. Lowell BB, Elmquist, JK și Zigman, JM Caracterizarea unui nou șoarece reporter de celule ghrelin. Regul. Pept. 2009; 155: 91-98
  80. Sandin, J., Nylander, I., Georgieva, J., Schott, PA, Ogren, SO și Terenius, L. Injecțiile cu dinamorfină B din injecția hipocampală afectează învățarea spațială la șobolani: un efect mediat de receptorul optic-kappa. Neuroscience. 1998; 85: 375-382
  81. Schaeffer, M., Langlet, F., Lafont, C., Molino, F., Hodson, DJ, Roux, T., Lamarque, L., Verdie, P., Bourrier, E., Dehouck, B. , JL, Martinez, J., Mery, PF, Marie, J., Trinquet, E., Fehrentz, JA, Prevot, V. și Mollard, P. Detectarea rapidă a ghrelinului circulant de către neuronii modificatori ai apetitului hipotalamic. Proc. Natl. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII. 2013; 110: 1512-1517
  82. Skibicka, KP, Hansson, C., Alvarez-Crespo, M., Friberg, PA și Dickson, SL Ghrelin vizează direct zona tegmentală ventrală pentru a crește motivația alimentară. Neuroscience. 2011; 180: 129-137
  83. Spanagel, R., Herz, A. și Shippenberg, TS Opoziția sistemelor opioide endogene active tonic modulează calea dopaminergică mezolimbică. Proc. Natl. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII. 1992; 89: 2046-2050
  84. Sustkova-Fiserova, M., Jerabek, P., Havlickova, T., Kacer, P. și Krsiak, M. Antagonismul receptorului ghrelin al eliberării de dopamină accumbens indusă de morfină și stimularea comportamentală la șobolani. Psychopharmacology. 2014; 231: 2899-2908
  85. Trigo, JM, Martin-Garcia, E., Berrendero, F., Robledo, P. și Maldonado, R. Sistemul opioid endogen: un substrat comun în dependența de droguri. Alcoolul de droguri depinde. 2010; 108: 183-194
  86. Tschop, M., Smiley, DL și Heiman, ML Ghrelin induce adipozitatea la rozătoare. Natură. 2000; 407: 908-913
  87. Van Ree, JM, Niesink, RJ, Van Wolfswinkel, L., Ramsey, NF, Kornet, MM, Van Furth, WR, Vanderschuren, LJ, Gerrits, Opioide endogene și recompensă. Euro. J. Pharmacol. 2000; 405: 89-101
  88. Wagner, JJ, Terman, GW și Chavkin, C. Dynorfinele endogene inhibă neurotransmiterea excitațională și blochează inducția LTP în hipocampus. Natură. 1993; 363: 451-454
  89. Înțelept, RA Dopamina, învățarea și motivația. Nat. Rev. Neurosci. 2004; 5: 483-494
  90. Wise, RA și Bozarth, MA O teorie stimulantă psihomotorie a dependenței. Psychol. Rev. 1987; 94: 469-492
  91. Yoshida, Y., Koide, S., Hirose, N., Takada, K., Tomiyama, K., Koshikawa, N. și Cools, AR Fentanilul mărește eliberarea dopaminei în nucleul accumbens de șobolan: implicarea receptorilor opioid mu și delta-2 mezolimbici. Neuroscience. 1999; 92: 1357-1365