Обнаружение молекулярных изменений в активированных метамфетамином Fos-экспрессирующих нейронах с одной дорзальной полосатой крысы с использованием флуоресцентно-активированной сортировки клеток (FACS) (2013)

Метамфетамин и другие препараты активируют небольшую долю всех нейронов в головном мозге. Ранее мы разработали метод, основанный на флуоресцентной активации клеток (FACS), для характеристики молекулярных изменений, индуцированных селективно в активированных нейронах, которые экспрессируют маркер нейронной активности Fos. Однако этот метод требует объединения образцов от многих крыс. Теперь мы опишем модифицированный метод на основе FACS для характеристики молекулярных изменений в Fos-экспрессирующих дорсальных полосатых нейронах у одной крысы с использованием стратегии мультиплексирования предварительного усиления.

Fos и NeuN (нейронный маркер) иммуногистохимия показывают, что 5-6% дорсальных стриатумных нейронов были активированы 90 мин после острых инъекций метамфетамина (5 мг / кг, ip), тогда как через 0.5% нейронов активировали физиологические инъекции.

Мы использовали FACS для разделения NeuN-меченых нейронов на Fos-позитивные и фос-отрицательные нейроны и оценивали экспрессию мРНК с использованием RT-qPCR всего с пяти Fos-положительных нейронов. Метамфетамин индуцировал 3-20-кратное увеличение немедленных ранних генов arc, homer-2, c-fos, fosB и его изоформ (ΔfosB и новую изоформу ΔfosB-2) в Fos-позитивных, но не фос-отрицательных нейронах. Немедленная ранняя индукция мРНК гена была в 10-кратной нижней или отсутствовала при оценке в несортированных образцах из гомогенатов одиночного дорзального стриатума. Наш модифицированный метод позволяет изучать уникальные молекулярные изменения в нейронах, активированных лекарственными средствами или связанными с лекарственными средствами сигналами в моделях комплексной зависимости.

Метамфетамин и другие препараты активируют небольшую долю всех нейронов в головном мозге. Мы сообщаем об улучшенном методе характеризации молекулярных изменений, индуцированных селективно в активированных нейронах, которые экспрессируют маркер нейронной активности Fos. Мы использовали FACS вместе с целенаправленной предварительной амплификацией ПЦР для оценки выраженной экспрессии генов, индуцированной метамфетамином, всего лишь от 5 Fos-экспрессирующих нейронов с одной дорсальной полосатой крысы. Метамфетамин индуцировал 3-20-кратное увеличение немедленных ранних генов (IEG) в Fos-позитивных, но не фос-отрицательных нейронах. Целевая ПЦР-предварительная амплификация позволяет изучать уникальные молекулярные изменения в нейронах, активированных лекарственными средствами или связанными с лекарственными средствами сигналами в моделях комплексной зависимости.

Опубликован 2013. Эта статья является работой правительства США и находится в общественном достоянии в США.