ඩෙල්ටා ෆෝස්බී යනු Cck ප්රවර්ධක ක්රියාකාරිත්වය (2010)

මොළයේ රෙස්. 2010 මැයි 6; 1329: 10 - 20.

මාර්ගගතව ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද්දේ 2010 මාර්තු 11. doi:  10.1016 / j.brainres.2010.02.081

PMCID: PMC2876727

ජෝන් එෆ්. එන්රයිට්, III,¹ මේගන් වෝල්ඩ්,¹ මැඩිසන් පැඩොක්,¹ එලිසබෙත් හොෆ්මන්,¹ රේචල් අරී,² ස්කොට් එඩ්වර්ඩ්ස්,² Sade Spencer,² එරික් ජේ. නෙස්ලේලර්,³ සහ කොලීන් ඒ. මැක්ලන්ග්^{2, *}

කතෘ තොරතුරු ප්රකාශන හිමිකම් සහ බලපත්ර තොරතුරු ►

මෙම ලිපියේ ප්‍රකාශකයාගේ අවසාන සංස්කරණය කළ අනුවාදය ලබා ගත හැකිය Brain Res

PMC වෙනත් ලිපි බලන්න නොයෙක්වර උපුටා දක්වන්නේ ප්රකාශිත ලිපියකි.

යන්න:

වියුක්ත

අපයෝජන drugs ෂධවලට නිදන්ගතව නිරාවරණය වීමෙන් ඇතිවන වැදගත් ජෛව රසායනික, ව්‍යුහාත්මක හා චර්යාත්මක වෙනස්කම් සමහරක් ඉතා ස්ථාවර පිටපත් කිරීමේ සාධකය osFosB මගින් මැදිහත් වී ඇති බව පෙනේ. 2 සති සඳහා මීයන් තුළ අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම ස්ට්‍රයිටේටම් හි බොහෝ ජානවල ප්‍රකාශනය වැඩි කිරීමට හේතු වන බව පෙර වැඩවලින් හෙළි වී ඇති අතර, ඒවායින් බොහොමයක් පසුව 8 සති ΔFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව අවතක්සේරු කරනු ලැබේ. CREB නම් පිටපත් කිරීමේ සාධකය ඉක්මවා යමින් මීයන් තුළ මෙම ජාන විශාල ප්‍රමාණයක් නියාමනය කර තිබීම සිත්ගන්නා කරුණකි. කෙසේ වෙතත්, මෙම අධ්‍යයනයෙන් කෙටිකාලීන osFosB CREB හරහා මෙම ජාන නියාමනය කරන්නේද යන්න පැහැදිලි නැත. 2 සති ΔFosB overexpression ස්ට්‍රයිටේටම් හි CREB ප්‍රකාශනය වැඩි කරන බව මෙහිදී අපට පෙනී යයි, මෙය 8 සති වලින් විසුරුවා හරිනු ඇත. මෙම මොළයේ කලාපයේ ඇතැම් ඉලක්කගත ජාන ප්‍රවර්ධකයන් සමඟ CREB බන්ධනය වැඩි කිරීම සමඟ මුල් ප්‍රේරණය සම්බන්ධ වේ. පුදුමයට කරුණක් නම්, පෙර වාර්තා මත පදනම්ව සැක සහිත CREB ඉලක්කයක් වූ එක් ජානයක්, cholecystokinin (Cck), CREB විසින් ස්ට්‍රයැටම් හි පාලනය කර නොමැත. නියාමනය පිළිබඳ වැඩිදුර විමර්ශනය කිරීම සී osFosB overexpression අනුගමනය කිරීමෙන්, කෙටිකාලීන osFosB overexpression දෙකම වැඩි කරන බව අපි තහවුරු කළෙමු සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් සහ ජාන ප්‍රකාශනය. එය CREB බන්ධන අඩවියක (CRE) බන්ධන ක්‍රියාකාරකම් වැඩි කරයි සී ප්‍රවර්ධකයා. කෙසේ වෙතත්, සාමාන්‍ය බාසල් ප්‍රකාශනය සඳහා CRE අඩවිය අවශ්‍ය වේ සී, osFosB ප්‍රේරණය සඳහා එය අවශ්‍ය නොවේ සී. එකට ගත් කල, මෙම ප්‍රති results ලවලින් පෙනී යන්නේ කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රේරණය මඟින් ඇතැම් ජාන ප්‍රවර්ධකයන්ගේ CREB ප්‍රකාශනය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය වැඩි කරන අතර, මෙම තත්වයන් යටතේ ජාන නියාමනය කරන එකම යාන්ත්‍රණය මෙය නොවන බවයි.

ප්රධාන වචන: න්යෂ්ටික සමුච්චය, පිටපත් කිරීම, ඇබ්බැහි වීම

යන්න:

හැදින්වීම

අපයෝජන drugs ෂධ වලට නිරන්තරයෙන් නිරාවරණය වීමෙන් මොළයේ කලාප කිහිපයක ජෛව රසායනික හා ව්‍යුහාත්මක වෙනස්කම් ඇති වේ. මෙම වෙනස්වීම් වලට මෙසොලිම්බික් පද්ධතියේ ජාන ප්‍රකාශන පැතිකඩවල වෙනස්වීම් ඇතුළත් වේ. මෙම පද්ධතිය ඩොපමිනර්ජික් නියුරෝන වලින් සමන්විත වන අතර එය මැද බ්‍රේන්හි ඇති කශේරුකා කලාපයේ (වීටීඒ) සිට න්‍යෂ්ටිය සමුච්චය (එන්ඒසී) (ක්‍ෂත්‍රීය ස්ට්‍රයැටම්) සහ තවත් මොළයේ කලාප ගණනාවක මධ්‍යම ස්පයිනි නියුරෝන දක්වා විහිදේ. පිටපත් කිරීමේ සාධක දෙකක ක්‍රියාකාරිත්වයේ වෙනස්වීම්, CAMP ප්‍රතිචාර මූලද්‍රව්‍ය බන්ධන ප්‍රෝටීන් (CREB) සහ osFosB (ෆොස් පවුලේ ප්‍රෝටීනයක්), අපයෝජන drugs ෂධවලට නිදන්ගතව නිරාවරණය වීමත් සමඟ දක්නට ලැබෙන ජෛව රසායනික, ව්‍යුහාත්මක හා චර්යාත්මක වෙනස්කම් බොහොමයකට මැදිහත් වීමට යෝජනා කර ඇත. විසින් සමාලෝචනය කරන ලදි නෙස්ලේ, 2005).

CREB යනු CREB / ATF පවුලේ සාමාජිකයෙකු වන සර්වප්‍රකාරයෙන් ප්‍රකාශිත පිටපත් කිරීමේ සාධකයකි. CREB සමජාතීයතාවන් බොහෝ ජානවල ප්‍රවර්ධකයන් තුළ දක්නට ලැබෙන CRE අනුක්‍රමයක (සම්මුතිය: TGACGTCA) වෙනස්කම් සමඟ බැඳී ඇත. CREB හි පොස්පරීකරණය (ප්‍රධාන වශයෙන් සෙරීන් 133 හි, වෙනත් අඩවි හඳුනාගෙන ඇතත්) ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහකවල පහළට ඇතුළු සං sign ා කැස්කැඩ් කිහිපයක් මගින් උත්තේජනය කළ හැකිය (කෝල් සහ වෙනත්., 1995). සෙරීන් 133 හි පොස්පරීකරණය කිරීමෙන් පසුව, CREB විසින් CREB බන්ධන ප්‍රෝටීන් (CBP) හෝ ඊට සම්බන්ධ ප්‍රෝටීන බඳවා ගනී. ජොහැන්නෙසන් සහ වෙනත් අය, 2004). අබිං හෝ මනෝ උත්තේජක drugs ෂධ වලට නිදන්ගතව නිරාවරණය වීමෙන් න්යෂ්ටික සමුච්චයේ CREB ක්රියාකාරිත්වයේ අස්ථිර වැඩි වීමක් ඇති කරයි. (බාරෝට් සහ අල්., 2002; ෂෝ ලට්චමන් සහ අල්., 2002, 2003), අනුවර්තනයක් මෙම drugs ෂධවල ප්‍රතිලාභ ගුණාංග අඩු කිරීමට සහ මත්ද්‍රව්‍ය ඉවත් කර ගැනීමේ චිත්තවේගීය තත්වයට දායක වීමට සිතුවේය (නෙස්ලේ, 2005).

Lඅපයෝජන drugs ෂධ සඳහා දිගින් දිගට අනුවර්තනය වීම FosB හි ඉහළ ස්ථායී භේද ප්‍රභේදයක් වන osFosB විසින් මැදිහත් වනු ඇතැයි සැලකේ. (නෙස්ලේටර් සහ අල්., 1999; මැක්ලන්ග් සහ ඇල්., 2004; නෙස්ලේ, 2008). ෆොස් පවුලේ සාමාජිකයන් ජුන් පවුලේ සාමාජිකයන් සමඟ දෙගුණ තෙගුණ කර සක්‍රියකාරක ප්‍රෝටීන 1 (AP-1) සංකීර්ණයක් සාදයි. AP-1 පිටපත් කිරීමේ සංකීර්ණ, පිටපත් කිරීම නියාමනය කිරීම සඳහා AP-1 ප්‍රතිචාර මූලද්‍රව්‍යයේ (සම්මුතිය: TGACTCA) වෙනස්කම් වලට බැඳී ඇත (සමාලෝචනය කරන ලද්දේ චිනෙනොව් සහ කර්ප්පෝලා, 2001). අපයෝජන drugs ෂධවලට දැඩි ලෙස නිරාවරණය වීම ෆොස්-පවුලේ සාමාජිකයින්ගේ කෙටි කාලීන ප්‍රේරණයට (පැය) (CREB ක්‍රියාකාරකම් වැඩි කිරීමට) හේතු වන අතර, නැවත නැවතත් drug ෂධ නිරාවරණය වීමෙන් ඉහළ ස්ථායී osFosB (Hope et al., 1994; පර්රුටි සහ අල්., 2008), ප්‍රකාශනය සති ගණනක් පවතී.

වැඩිහිටි ස්ට්‍රයිටේටම් හි osFosB හෝ CREB යන ද්වි-ට්‍රාන්ස්ජනික් මීයන් අනවශ්‍ය ලෙස අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් සතුන් තුළ දක්නට ලැබෙන ජෛව රසායනික හා චර්යාත්මක සංසිද්ධි බොහෝමයක් නැවත නැවතත් මනෝ උත්තේජක හෝ වෙනත් අපයෝජන drugs ෂධවලට නිරාවරණය වේ. ඒමෙම පාරම්පරික සතුන්ගේ ජාන ප්‍රකාශන වෙනස්වීම් විශ්ලේෂණය කිරීමෙන් කෙටිකාලීන (2 සති) osFosB හි අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම මගින් නියාමනය කරන ලද ජාන ගණනාවක් හඳුනාගෙන ඇත, drug ෂධ විපාකයේ අනුකූල අඩුවීමක් හා සම්බන්ධ වෙනස්කම්. කෙටිකාලීන osFosB සමඟ ජාන ප්‍රකාශනයේ හා චර්යාත්මක ප්‍රතිචාරයේ වෙනස්වීම් 2 හෝ 8 සති සඳහා CREB ඉක්මවා යන සතුන් තුළ දක්නට ලැබෙන ඒවාට බෙහෙවින් සමාන ය (මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003). ඊට හාත්පසින්ම වෙනස්ව, osFosB හි දිගුකාලීන අධික ලෙස පීඩනය (8 සති) මෙම බොහෝ ජානවල ප්‍රකාශනය අඩු වී drug ෂධ විපාක වැඩි කිරීමට හේතු වේ (කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003).

මෙම අධ්‍යයනයන්හි හඳුනාගෙන ඇති එක් ජානයකි cholecystokinin (සී), ස්ට්‍රයැටම් (මොළය) ඇතුළු මොළයේ කලාප කිහිපයක නිපදවන නියුරොපෙප්ටයිඩයකි (හොක්ෆෙල්ට් සහ වෙනත් අය, 1980). CCK හට ඩොපමිනර්ජික් සම්ප්‍රේෂණය මොඩියුලේට් කළ හැකිය (Vaccarino, 1992), drug ෂධ විපාක සහ ශක්තිමත් කිරීම සඳහා සම්බන්ධ වේ (ජොසලින් සහ වෙනත්, 1996; ජොසලින් සහ වෙනත් අය, 1997; හැමිල්ටන්, සහ වෙනත් අය, 2000; බයින්ෆෙල්ඩ් සහ වෙනත් අය, 2002; රොට්සින්ගර් සහ වෙනත් අය, 2002), සහ නිදන්ගත කොකේන් මගින් ස්ට්‍රයැටම් තුළ ප්‍රේරණය වේ (ඩිං සහ මොචෙට්ටි, 1992). මීට අමතරව සී ප්‍රවර්ධකය CREB සහ AP-1 සංකීර්ණ දෙකටම ප්‍රතිචාර දක්වන බව පෙන්වා ඇත (හාන් සහ ඩික්සන්, 1990; ඩෙවාල්, සහ වෙනත් අය, 2000; හැන්සන්, 2001). බොහෝ ජාන (ඇතුළුව) සී) CREB සහ කෙටිකාලීන followingFosB ප්‍රකාශනය යන දෙකින්ම වැඩි ප්‍රකාශනයක් පෙන්නුම් කරන අතර CREB ඉලක්කගත ජාන දන්නා හෝ සැක කරන ලදී (මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003), කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනය මෙම ජාන නියාමනය කිරීමට තුඩු දෙයිද යන්න තීරණය කිරීමට අපට අවශ්‍ය විය (අවධානය යොමු කරමින්) සී) CREB නියාමනය කිරීම හරහා හෝ ජාන නියාමනයේ වඩාත් සංකීර්ණ යාන්ත්‍රණ හරහා.

යන්න:

ප්රතිපල

OsFosB අධික ලෙස පීඩනය CREB මට්ටම අස්ථිර ලෙස වැඩි කරයි

OsFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් මීයන්ගේ වර්ධකයේ CREB ප්‍රෝටීන් මට්ටම ඉහළ යයිද යන්න සොයා බැලීමට අපි බටහිර පිපිරුම් භාවිතා කළෙමු. මෙම අධ්‍යයනය සඳහා, අපි එන්එස්ඊ-ටීටීඒ ට්‍රාන්ස්ජීන් සහ ටෙටොප්- os ෆොස්බී ට්‍රාන්ස්ජීන් යන දෙකම රැගෙන යන ද්වි-ට්‍රාන්ස්ජනික් මීයන් (රේඛාව 11A) භාවිතා කළෙමු. ඩොක්සි සයික්ලයින් නොමැති විට, මෙම මීයන් ස්ට්‍රයිටේටම් හි ඩයිනෝරෆින් ධනාත්මක නියුරෝන වල osFosB ප්‍රකාශනයේ ප්‍රබල වැඩිවීමක් පෙන්නුම් කරයි (කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999). ΔFosB අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීමේ මෙම ක්‍රමය පුළුල් ලෙස ලේඛනගත කර ඇති අතර කලාපීය විශේෂිත අධි පීඩනයට ඉඩ සලසයි, එය නිදන්ගත කොකේන් වලට නිරාවරණය වන සතුන් තුළ දක්නට ලැබෙන osFosB ප්‍රේරණයට සමාන්තර වේ.Hope et al., 1994; කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999). 11A මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම ΔFosB හි, CREB ප්‍රෝටීන් මට්ටම් 2 සති ප්‍රකාශනයෙන් පසුව සැලකිය යුතු ලෙස නියාමනය කර ඇති අතර 8 සති ප්‍රකාශනයෙන් පසු මෙම මට්ටම් නැවත මූලික මට්ටමට පැමිණ ඇති බව අපට පෙනී ගියේය.රූපය 1A, n = 8). කෙටිකාලීන osFosB අධික ලෙස පීඩනය සමඟ CREB මට්ටම්වල වෙනස්වීම් වෙනත් පද්ධතියක ප්‍රතිවර්තනය කළ හැකිද යන්න තීරණය කිරීම සඳහා, අපි PC12 සෛලවල osFosB තාවකාලිකව අධික ලෙස පීඩනයට ලක් කළ අතර පාලනයන් හා සසඳන විට CREB මට්ටම් සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි වී ඇති බව සොයා ගත්තෙමු (p <0.05)රූපය 1B, n = 4). මෙම ප්‍රති results ල මගින් පෙන්නුම් කරන්නේ කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනය CREB ප්‍රෝටීන් මට්ටම ඉහළ නංවන බවයි.

රූපය 1

REFosB overexpression සමඟ CREB මට්ටම ඉහළ යයි. සිට ලයිසෙට් පිළිබඳ බටහිර පිපිරුම් විශ්ලේෂණය (ඒ) 11A හෝ 2 සති සඳහා 8A මීයන්ගෙන් ඕෆ් ඩොක්ස් වෙතින් මූසික ස්ට්‍රයිටා හෝ (බී) PC12 සෛල අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම ΔFosB. දත්ත A සසඳන විට ඕෆ් ඩොක්ස් හි ප්‍රතිශත වෙනසක් ලෙස දැක්වේ ...

ΔFosB සහ CREB යන දෙකම කෙටිකාලීන ΔFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් පසුව වර්ධකයේ නිශ්චිත ඉලක්ක ජාන ප්‍රවර්ධනය කරන්නන් සමඟ බැඳී ඇත.

නිශ්චිත ඉලක්කගත ජාන ප්‍රවර්ධකයන් තුළ osFosB හෝ CREB බන්ධනය සිදුවී ඇත්ද යන්න සහ කෙටිකාලීන osFosB අධි පීඩනයෙන් පසුව මෙම බන්ධනය වැඩි කළේද යන්න තීරණය කිරීම සඳහා අපි චිප් (ක්‍රෝමැටින් ප්‍රතිශක්තීකරණ) ස්ට්‍රයිටල් පටක පරීක්‍ෂා කළෙමු. අපි බන්ධනය විශ්ලේෂණය කළෙමු BDNF සහ සී කෙටිකාලීන osFosB overexpression, CREB overexpression හෝ නිදන්ගත කොකේන් ප්‍රතිකාරයෙන් පසුව ජාන දෙකම ඉහළ නියාමනයකට ලක් කර ඇති බැවින් ප්‍රවර්ධකයන් (මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003). අපි බන්ධනය විශ්ලේෂණය කළෙමු CDK5 ප්‍රවර්ධකය, එය osFosB හි සෘජු ඉලක්කයක් බැවින් (චෙන් සහ අල්., 2000; බිබ් සහ අල්., 2001; කුමාර් සහ අල්., 2005). අවසාන වශයෙන්, අපි බන්ධන මැනීම prodynorphin ප්‍රවර්ධකයා, විවිධ අධ්‍යයන යටතේ එය osFosB සහ CREB යන දෙකින්ම බැඳිය හැකි බව පෙර අධ්‍යයනවලින් සොයාගෙන ඇති හෙයින් (ඇන්ඩර්සන් සහ වෙනත් අය, 2001; Zachariou et al., 2006).

CREB හෝ osFosB හඳුනා ගන්නා ප්‍රතිදේහ භාවිතා කරමින් 11A මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන ΔFosB වෙතින් ස්ට්‍රයිටා මත චිප් විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී. සාමාන්‍ය තත්වයන් යටතේ, osFosB බන්ධනය වන බව අපට පෙනී ගියේය CDK5 සහ prodynorphin ප්‍රවර්ධකයන්, හඳුනාගත හැකි බන්ධනයක් නොමැති අතර BDNF or සී ප්‍රවර්ධකයන් (වගුව 1). තවද, osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් osFosB බන්ධනය වැඩි කරයි CDK5 ප්‍රවර්ධකයා, නමුත් එසේ නොවේ prodynorphin ප්‍රවර්ධකයා. අපි ඊළඟට මෙම ප්‍රවර්ධකයන් වෙත CREB බන්ධනය මැන බැලූ අතර CREB බන්ධනය වන බව සොයා ගත්තෙමු CDK5, BDNF සහ prodynorphin ප්‍රවර්ධකයන්, නමුත් එසේ නොවේ සී ප්‍රවර්ධකය, සාමාන්‍ය ස්ට්‍රයැටම් වල, සහ 2 සති සඳහා osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් CREB බන්ධනය වැඩි කරයි BDNF සහ prodynorphin ප්‍රවර්ධකයන්, නමුත් එසේ නොවේ CDK5 ප්‍රවර්ධකයා. එකට ගත් කල, මෙම ප්‍රති results ලවලින් පෙනී යන්නේ osFosB සහ CREB යන දෙවර්ගයම සමහර ජාන ප්‍රවර්ධකයන් සමඟ බැඳිය හැකි බවයි prodynorphin සහ CDK5කෙසේ වෙතත්, CREB බන්ධනය වැනි වෙනත් ප්‍රවර්ධකයන්ට විශේෂිත වේ BDNF. තවද, osFosB අධික ලෙස පීඩනය අපේක්‍ෂා කරන පරිදි ඇතැම් ප්‍රවර්ධකයන් වෙත osFosB බන්ධනය වැඩි කිරීමට හේතු වනවා පමණක් නොව, මෙම අවස්ථාවේදී නිරීක්ෂණය කරන ලද osFosB- මැදිහත් වූ CREB ප්‍රේරණයට අනුකූලව නිශ්චිත ප්‍රවර්ධකයන් සමඟ CREB බන්ධනය වීමට ද හේතු වේ.

වගුව 1

මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම pFosB හි විවිධ ප්‍රවර්ධකයන්ට සති දෙකක කාලයක් සඳහා නියාමන ප්‍රෝටීන බන්ධනය කිරීම.

දීර් work කාලීන os ෆොස්බී අධික ලෙස පීඩනය මගින් ඇති කරන ජාන ප්‍රකාශනයේ වෙනස්වීම් ක්‍රෝමටින් වෙනස් කිරීම් සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති බව පෙර වැඩවලින් පෙන්නුම් කර ඇත, විශේෂයෙන්, විශේෂිත ජාන ප්‍රවර්ධකයන්ගේ හිස්ටෝන් එච්එක්ස්එන්එම්එක්ස් හි ඇසිටිලේෂණය (කුමාර් සහ අල්., 2005). කෙටි කාලීන ΔFosB අධික ලෙස පීඩනය මත ජාන ප්‍රකාශනයේ වෙනස්වීම් සඳහා මෙය හේතු විය හැකිද යන්න තීරණය කිරීම සඳහා, අපි ඇසිටිලේටඩ් හිස්ටෝන් H3 (පිටපත් කිරීමේ සක්‍රීය ක්‍රෝමටින් හා සම්බන්ධ හිස්ටෝන් වෙනස් කිරීමක්) හෝ මෙතිලයිටඩ් හිස්ටෝන් H3 (Lys9) අක්‍රීය ක්‍රෝමටින්). 2 සති සඳහා osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් අධ්‍යයනය කරන ලද ඕනෑම ජාන ප්‍රවර්ධකයෙකුගේ ඇසිටිලේටඩ් H3 බන්ධනයේ කිසිදු වෙනසක් සිදු නොවූ බව අපට පෙනී ගියේය (වගුව 1). මෙතිලයිටඩ් හිස්ටෝන් H3 බන්ධනයේ සැලකිය යුතු අඩුවීමක් අපට හමු විය prodynorphin ප්‍රවර්ධකයා, නමුත් කිසිදු බැඳීමක් නොමැත සී ප්‍රවර්ධකය සහ බන්ධනයේ වෙනසක් නැත CDK5 සහ BDNF ප්‍රවර්ධකයන්, මෙය කෙටිකාලීනව ජාන ප්‍රකාශනය නියාමනය කරන සාමාන්‍ය යාන්ත්‍රණයක් නොවන බව යෝජනා කරයි. අපගේ චිප පරීක්‍ෂණයන්හි වැඩි වීමක් සිදුවිය හැකි කිසිදු වෙනසක් අපට හමු නොවීම ගැන අපි පුදුමයට පත් වූවෙමු සී 11 සති ΔFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව 2A මීයන් තුළ mRNA ප්‍රකාශනය සහ මෙම යාන්ත්‍රණය තවදුරටත් විමර්ශනය කිරීමට තීරණය කළේය.

කෙටිකාලීන osFosB වැඩි වේ සී බහු පද්ධතිවල ප්‍රකාශනය

ස්ට්‍රයිටේටම් හි ද්වි-ට්‍රාන්ස්ජනික් 11A මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන FosB හි මයික්‍රෝආරේ ලක්ෂණ මගින් එය සොයා ගන්නා ලදී. සී 2 සති අධික අධි පීඩනයෙන් පසුව ප්‍රකාශන මට්ටම් ඉහළ යන අතර පසුව osFosB ප්‍රකාශනයේ දීර් period කාල පරිච්ඡේදයන් සමඟ ක්‍රමයෙන් අඩු වේ (රූපය 2A, n = 3). සඳහා අපි මෙම බලපෑම වලංගු කළෙමු සී 2 සහ 8 සතිවලදී වෙනම සතුන් සමූහයක් මත තථ්‍ය කාලීන PCR භාවිතා කිරීම සහ එම අවස්ථා දෙකෙහි ප්‍රති results ල මයික්‍රෝආරේ විශ්ලේෂණයට සමාන බව සොයා ගන්නා ලදි (දත්ත පෙන්වා නැත).

රූපය 2

OsFosB හි කෙටිකාලීන අධික ලෙස පීඩනය වැඩි වේ සී ජාන ප්‍රකාශනය. (A) සී 11, 1, 2, හෝ 4 සති සඳහා 8A මීයන් තුළ osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් පසුව ස්ට්‍රයිටේටම් හි mRNA ප්‍රකාශනය. ස්ට්‍රයිටල් සාම්පල මත මයික්‍රෝආරේ විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී සී මට්ටම් ...

නියාමනය කිරීමට osFosB සතු හැකියාව පිළිබඳ වැඩිදුර විමර්ශනය කිරීම සී ප්‍රකාශනය, අපි a සමඟ අස්ථිරව සම්ප්‍රේෂණය කරන ලද PC12 සෛල භාවිතා කළෙමු සී-ලූසිෆරස් වාර්තාකරු ප්ලාස්මිඩ් සහ ΔFosB ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් හෝ ඊට සමාන pCDNA. OsFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදී ඇති දින දෙක (n = 5-9) සහ දින තුනක් (n = 11-13) යන දෙකම සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය සී-ලූසිෆරස් ප්‍රකාශනය. මීට අමතරව, දින තුනක් osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය සීදින දෙකක අධික ලෙස පීඩනය සමඟ සසඳන විට -ලූසිෆරස් ප්‍රේරණය (රූපය 2B). OsFosB හි අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් ප්‍රවර්ධකයන් රහිත ලුසිෆරස් ඉදිකිරීමක් ප්‍රකාශ කිරීමට පොළඹවා නැත (දත්ත පෙන්වා නැත). කිසිදු ප්‍රතිකාර තත්වයක් යටතේ අඩු කිරීමක් සිදු නොවීය සී-ලූසිෆරස් ක්‍රියාකාරකම් පෙනේ. මෙම ප්‍රති results ලවලින් පෙනී යන්නේ කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනය මඟින් ක්‍රියාකාරිත්වය වැඩි කරන බවයි සී ප්‍රවර්ධකය, සහ දිගු කාලීන osFosB අධික ලෙස පීඩනය මර්දනය කරන යාන්ත්‍රණයට පිළිතුරු නොලැබේ සී ප්රකාශනයකි.

OsFosB overexpression මඟින් CREB බන්ධන අඩවියක බන්ධනය වැඩි කරයි සී ප්‍රවර්ධකයා

අපගේ විශ්ලේෂණයන් එය සොයා ගත්තේය සී කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව ප්‍රකාශනය වැඩි වේ, කෙසේ වෙතත්, අපගේ ChIP පරීක්ෂණ මගින් CREB හෝ osFosB යන දෙකම බැඳී නැති බව සොයාගෙන ඇත සී ප්‍රවර්ධකයා. දී ප්‍රෝටීන් බන්ධනයේ යම් වෙනසක් තිබේද යන්න තීරණය කිරීම සී osFosB overexpression අනුගමනය කරන ප්‍රවර්ධකයා, අපි CRE වැනි වෙබ් අඩවිය අඩංගු වන පරීක්ෂණයක් සමඟ විද්‍යුත් විච්ඡේදක සංචලතා මාරුවීම් (EMSA) භාවිතා කළෙමු. සී ප්‍රවර්ධකයා. 11A මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන ΔFosB හි 2A සති වලින් න්‍යෂ්ටික නිස්සාරක භාවිතා කරමින්, CRE වෙබ් අඩවියට සම්බන්ධ කිරීමේ වැඩි වීමක් අපට හමු විය. සී ප්‍රවර්ධකයා (රූපය 3 A, C., n = 4). 11A මීයන් 8 සති සඳහා osFosB අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම සිත්ගන්නා සුළුය. සී ප්‍රකාශනය, මෙම වෙබ් අඩවියේ වැඩි බන්ධන පෙන්වයි (රූපය 3B, සී, n = 4). සංසන්දනයක් ලෙස, අපි 2 සති සඳහා මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන FosB හි සම්මුතිගත CRE අඩවියකට බැඳීම පරීක්ෂා කළ අතර, ශක්තිමත් CRE බන්ධන සාරය තුළ බන්ධනය වී ඇති බව සොයා ගත්තෙමු, නමුත් osFosB ප්‍රේරණයෙන් පසුව බන්ධනවල වැඩි වීමක් සිදු නොවීය.රූපය 3F, n = 4). මේ අනුව, මේ මොහොතේ දක්නට ලැබෙන සමස්ත CREB මට්ටම්වල osFosB ප්‍රේරිත වැඩි වීමක් තිබියදීත්, මෙම ප්‍රති results ල අපගේ චිප් පරීක්‍ෂණයට අනුකූල වන අතර එමඟින් සොයා ගනු ලබන්නේ osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් පසු ප්‍රවර්ධකයන් තුළ CREB බන්ධනය වැඩි වීම නිශ්චිත ජානවලට පමණක් සීමා වූවක් වන අතර එය ගෝලීය සංසිද්ධියක් නොවේ . CREB බැඳී තිබේද යන්න තීරණය කිරීම සී අපගේ EMSA විශ්ලේෂණයේ ප්‍රවර්ධකයෙකු වන අපි CREB විශේෂිත ප්‍රතිදේහයක් සමඟ සුපර්ෂිෆ්ට් පරීක්ෂණ සිදු කළෙමු. අපගේ චිප පරීක්‍ෂණයන් සමඟ එකඟව, CREB හි කිසිදු බැඳීමක් අපට හමු නොවීය සී ඊඑම්එස්ඒ පරීක්‍ෂණයන්හි පුටේටිව් සීආර්ඊ වෙබ් අඩවිය අඩංගු පරීක්‍ෂණයක් සිදු කරන අතර, සීආර්ඊබී සම්මුතිගත සීආර්ඊ වෙබ් අඩවිය සැලකිය යුතු ලෙස බන්ධනය කොට අධිපති කර ඇත (රූපය 3D, ඊ, n = 4). දී ඩීඑන්ඒ බන්ධන ක්‍රියාකාරකම් සී ΔFosB අවහිර කිරීම සඳහා පූර්ව අධ්‍යයනයන් කිහිපයක පෙන්වා ඇති කොන්දේසි යටතේ ΔFosB (දත්ත පෙන්වා නැත) සඳහා ප්‍රතිදේහයක් මගින් ප්‍රවර්ධකයාට බලපෑමක් සිදු නොවීය (බලාපොරොත්තුව සහ වෙනත්, 1a, 1994b; චෙන් සහ අල්., 1995, Hiroi et al., 1998). 11 සති ΔFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව අපි 8A සතුන්ගේ ස්ට්‍රයිටා පිළිබඳ චිප් පරීක්‍ෂණයක් සිදු කළ අතර තවමත් CREB හෝ osFosB බන්ධනය කර නොමැත. සී ප්‍රවර්ධකයා (දත්ත පෙන්වා නැත). මේ අනුව, osFosB ප්‍රකාශනය මඟින් ප්‍රෝටීන් බන්ධනය වැඩි වේ සී 2 සහ 8 සති ප්‍රකාශනයෙන් පසු ප්‍රවර්ධකයා; කෙසේ වෙතත්, මෙම සාධකවල අනන්‍යතාවය තවමත් අනාවරණය වී නොමැත.

රූපය 3

දී ප්‍රෝටීන් බන්ධනය සී ප්‍රවර්ධකයා. (ඒ, බී) භාවිතා කරමින් විද්‍යුත් විච්ඡේදක සංචලතා මාරුව සී 2 සති (A) හෝ 8 සති (B) සඳහා osFosB ඉක්මවා යන සතුන්ගෙන් පටක සහිත CRE වැනි වෙබ් අඩවිය. (A) හි, අතිරික්ත ලේබල් නොකරන ලද තරඟකරුවෙකු සමඟ තරඟ කිරීම ...

CRE වෙබ් අඩවිය සී ප්‍රවර්ධකයන්ගේ ක්‍රියාකාරකම් වැඩි කිරීම සඳහා ප්‍රවර්ධකයා වගකිව යුතු නොවේ

අප විසින් කැබැල්ලක් භාවිතා කරමින් ප්‍රෝටීන් බන්ධනවල වැඩි වීමක් සොයා ගත් හෙයින් සී osFosB overexpression අනුගමනය කරමින්, CRE වෙබ් අඩවිය අඩංගු වන ප්‍රවර්ධකය, වැඩි කිරීමට මෙම වෙබ් අඩවිය අවශ්‍ය දැයි තීරණය කිරීමට අපට අවශ්‍ය විය සී osFosB overexpression පහත දැක්වෙන ප්‍රකාශනය. මෙම හැකියාව පරීක්ෂා කිරීම සඳහා, අපි PC12 සෛල a සමඟ සම්ප්‍රේෂණය කළෙමු සී-ලූසිෆරස් ප්ලාස්මිඩ් එහි අඛණ්ඩ CRE වැනි වෙබ් අඩවියක් හෝ CREB සමඟ ඇති ඕනෑම අන්තර්ක්‍රියාකාරිත්වයක් අහෝසි කරන වෙබ් අඩවියේ විකෘතියක් අඩංගු වේ. CRE වැනි වෙබ් අඩවියේ විකෘතිය බාසල් අඩු වීම සිත්ගන්නා කරුණකි සී 32% විසින් ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් (රූපය 4A, n = 9), නමුත් එය බලපා නැත සී osFosB overexpression විසින් ප්‍රවර්ධකයාගේ ප්‍රේරණය (රූපය 4B, n = 11-13). මෙයින් ඇඟවෙන්නේ, එසේ වුවද සී ප්‍රවර්ධකයාට පූර්ණ බාසල් ක්‍රියාකාරකම් සඳහා අඛණ්ඩව CRE වැනි වෙබ් අඩවියක් අවශ්‍ය වේ, osFosB overexpression මගින් වැඩි කරන ලද ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් සඳහා CRE වැනි අනුක්‍රමයක් අවශ්‍ය නොවේ.

රූපය 4

එම සීCRE අඩවියට සමාන නොවේ සී osFosB මගින් ප්‍රේරණය. (A) සී-ලූසිෆරස් ක්‍රියාකාරිත්වය මනිනු ලැබුවේ මාරුවීමෙන් දින 2 දිනකට පසුවය සී-ලූසිෆරස් හෝ CRE වැනි වෙබ් අඩවිය විකෘති කළ එකක්. * p <0.05 (B) සී-ලූසිෆරස් ...

cFos බන්ධනය වේ සී ප්‍රවර්ධකයා

පෙර අධ්යයනයන් එය සොයාගෙන ඇත cFos කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනය සමඟ mRNA වැඩි වේ, කෙසේ වෙතත්, දීර් os osFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව, ස්ට්‍රයිටේටම් හි cFos ප්‍රේරණය කිරීමට කොකේන් ප්‍රතිකාර කිරීමේ හැකියාව අඩු වේ (මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003; රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය, 2008). එබැවින්, වැඩිවීමට cFos දායක විය හැකිය සී කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව ප්‍රකාශනය. අපි CFos සඳහා විශේෂිත ප්‍රතිදේහයක් සමඟ ChIP පරීක්‍ෂා කිරීම් සිදු කළෙමු සී කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනය සමඟ සහ රහිතව ප්‍රවර්ධකයා. CFos සමඟ බැඳී ඇති බව අප සොයා ගත් අතර සී ප්‍රවර්ධකය, osFosB අධි පීඩනයෙන් පසුව මෙම බන්ධනය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි නොවීය (රූපය 5, n = 5). මෙයින් ඇඟවෙන්නේ cFos බන්ධනය වන බැවින් සී ප්‍රවර්ධකයා, එය සාමාන්‍ය නියාමනයට දායක විය හැකිය සී ප්‍රකාශනය, නමුත් එය නියාමනයට සම්බන්ධ නොවේ සී ප්‍රවර්ධකයා osFosB.

රූපය 5

cFos බන්ධනය වේ සී ප්‍රවර්ධකයා. ΔFosB අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන මීයන්ගෙන් ඩොක්ස් මත හෝ 2 සති ඩොක්ස් ඉවත් කිරීමෙන් පසුව ස්ට්‍රයිටල් පටක භාවිතා කරමින් cFos සඳහා නිශ්චිත ප්‍රතිදේහයක් සමඟ ක්‍රෝමැටින් ප්‍රතිශක්තිකරණ පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී. තථ්‍ය කාලීන PCR විශ්ලේෂණය විය ...

යන්න:

සාකච්ඡා

StudyFosB වර්ධකයේ ජාන ප්‍රකාශනය නියාමනය කරන බව පෙන්වන පූර්ව සොයාගැනීම් මත මෙම අධ්‍යයනය සනාථ කරයි. 2 සති අධික අධි පීඩනයෙන් පසුව, ප්‍රකාශනයේ වෙනස්කම් වලට තුඩු දෙන ඇතැම් ජානවල osFosB සෘජුවම ප්‍රවර්ධකයන් සමඟ බන්ධනය වන බව අපි පෙන්වමු (එනම් CDK5). තවද, එය CREB ප්‍රෝටීන් මට්ටම ඉහළ නංවන අතර එය සංස්කෘතික සෛලවල මෙන්ම ස්ට්‍රයිටේටම් වලද දක්නට ලැබෙන අතර එමඟින් අනෙකුත් ජාන ප්‍රවර්ධකයන්ගේ (එනම් ඩයිනෝෆින් සහ BDNF). මීට පෙර කරන ලද අධ්‍යයනයක දී, ස්ට්‍රයිටම් හි osFosB හි කෙටිකාලීන අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම, CREB අධික ලෙස පීඩනයට ලක් වූ විට සොයාගත හැකි එකම ජාන ප්‍රකාශන වෙනස්වීම් වලට තුඩු දෙන අතර කොකේන් මනාප මිනුම් වලදී සමාන චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර වලට තුඩු දෙයි (මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003). මේ අනුව, osFosB CREB ප්‍රේරණයකට මෙන්ම CREB සමහර ජාන ප්‍රවර්ධකයන් සමඟ බැඳීමට ද හේතු වන බව වර්තමාන සොයා ගැනීම, මෙම පිටපත් කිරීමේ සාධක දෙක මගින් ජාන ප්‍රකාශන වෙනස්වීම් බොහොමයක් බෙදාගත්තේ මන්දැයි පැහැදිලි කිරීමට උපකාරී වේ.

REFosB විසින් CREB ප්‍රේරණය කිරීම සිත්ගන්නා සුළුය, මන්ද අපයෝජන drugs ෂධ සෙරීන් 133- ෆොස්ෆරයිලෙටඩ් CREB මට්ටම්වල වෙනස්කම් ඇති කරන බව පෙන්වා දී ඇති හෙයිනි (මැට්සන් සහ අල්., 2005) සහ CRE- මැදිහත් වූ පිටපත් කිරීම වැඩි කරන්න (බාරෝට් සහ අල්., 2002; ෂෝ ලට්චමන් සහ අල්., 2002, 2003), CREB හි සමස්ත මට්ටම් වෙනස් නොකර. CREB මට්ටම්වල වෙනස්වීම් අස්ථිර විය හැකි අතර, එබැවින් වෙනත් අධ්‍යයන වලදී පහසුවෙන් මඟ හැරෙනු ඇත. විශේෂිත අත්හදා බැලීම් වලදී CREB mRNA හි කොකේන් මගින් ඇතිවන වැඩි වීම අපගේ අත්වල දක්නට ලැබේ, කෙසේ වෙතත්, මෙම බලපෑම ඉහළ විචල්‍යතාවයක් (ප්‍රකාශයට පත් නොකළ නිරීක්ෂණ). 11A ට්‍රාන්ස්ජනික් මීයන් සහ PC-12 සෛල දෙකම කෙටිකාලීන osFosB අධි පීඩනයෙන් පසුව CREB ප්‍රේරණය පෙන්වන බැවින්, මෙයින් ඇඟවෙන්නේ CREB සැබවින්ම ΔFosB (හෝ ΔFosB හි ඉලක්කයක්) මගින් ප්‍රේරණය වන අතර ජානවල drug ෂධ මගින් ඇතිවන වෙනස්කම් පැහැදිලි කිරීමට තවත් යාන්ත්‍රණයක් සපයයි. ප්‍රකාශනය.

පුදුමයට කරුණක් නම්, CREB හෝ osFosB යන දෙකම එයට බැඳී නැති බව අපට පෙනී ගියේය සී ප්‍රවර්ධකයා වුවද සී කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනයෙන් පසුව ප්‍රකාශනය පැහැදිලිවම නියාමනය කර ඇත. Cck යනු VTA සහ NAc යන දෙඅංශයෙන්ම ප්‍රකාශිත නියුරොපෙප්ටයිඩයකි (හොක්ෆෙල්ට් සහ වෙනත් අය, 1980) සහ අපයෝජන drugs ෂධ වලට චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර දැක්වීමට සම්බන්ධ විය හැකිය (ජොසලින් සහ වෙනත් අය, 1996; ජොසලින් සහ වෙනත් අය, 1997; හැමිල්ටන්, සහ වෙනත් අය, 2000; බයින්ෆෙල්ඩ් සහ වෙනත් අය, 2002; රොට්සින්ගර් සහ වෙනත් අය, 2002). සෛලීය සංස්කෘතික අධ්‍යයනයන්හි දී සී ප්‍රවර්ධකයා පුළුල් ලෙස සංලක්ෂිතව ඇති අතර CREB සහ AP-1 පවුලේ සාමාජිකයින්ට ප්‍රතිචාර දක්වන බව පෙන්නුම් කර ඇත (සමාලෝචනය කරන ලද්දේ හැන්සන්, 2001). හාන් සහ ඩික්සන් (1990) AP-1 සංකීර්ණ වලට බන්ධනය විය හැකි බව පෙන්වන ලදි සී CRE වැනි වෙබ් අඩවිය කෘතිම දී, පසුව SK-N-MC නියුරෝබ්ලාස්ටෝමා සෛල භාවිතා කරමින්, CRE වැනි වෙබ් අඩවියේ විකෘතිය අධික ලෙස පීඩනයට ලක්වූ cFos / cJun (ප්‍රවර්ධකයන්ගේ ප්‍රතිචාරය) අඩු කරන බව පෙන්වන ලදී.Rourke et al., 1999). ඇත්ත වශයෙන්ම, අපි ද වැඩි වී ඇත සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් (රූපය 2) සහ CRE වැනි මූලද්‍රව්‍යයේ හෝ ඒ වටා බන්ධනය වීම (රූපය 3) තවත් AP-1 පවුලේ සාමාජිකයෙකු වන osFosB හි අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම මත, නමුත් අපට osFosB සමඟ සෘජුවම බැඳී නොමැත. සී ප්‍රවර්ධකයා ඉතින් or කෘතිම දී, එහි අධික ලෙස පීඩනය මත පවා.

නියාමනය කිරීමේදී CREB සඳහා බොහෝ කාර්යයන් පෙන්නුම් කර ඇත සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම්. එම සී CRE වැනි වෙබ් අඩවිය පෘෂ් b වංශීන් හරහා සංරක්ෂණය කර ඇත (හැන්සන්, 2001) සහ, සමහර සෛල සංස්කෘතික අධ්‍යයනයන්හි දී, CREB සහ AP-1 සංකීර්ණ දෙකම මෙම වෙබ් අඩවියට බැඳී ඇති අතර ඒවා අවශ්‍ය වේ සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් (හාන් සහ ඩික්සන්, 1990; ඩෙවාල්, සහ වෙනත් අය, 2000; හැන්සන්, 2001). මීට අමතරව, දන්නා සක්‍රියකාරක කිහිපයක් සී ප්‍රකාශනය (bFGF, PACAP, පෙප්ටෝන සහ විස්ථාපනය ඇතුළුව) CREB හරහා ක්‍රියා කරන බව පෙන්වා දී ඇත (හැන්සන්, සහ වෙනත් අය, 1999; Deavall, et al, 2000; බර්නාඩ්, සහ වෙනත් අය, 2001; ගෙව්රි, සහ වෙනත් අය, 2002; හැන්සන්, සහ වෙනත් අය, 2004). අපේ සී-ලූසිෆරස් වාර්තාකරු ජාන දත්ත නියාමනය කිරීමේදී CRE වැනි වෙබ් අඩවිය සඳහා අත්‍යවශ්‍ය කාර්යභාරයක් ඉටු කරයි සී මෙම වෙබ් අඩවියේ විකෘතිය බාසල් අඩු කරන බැවින් ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් සහ සීCREB හි ව්‍යුහාත්මකව ක්‍රියාකාරී වන VP16-CREB විසින් ප්‍රේරණය කරන ලද -ලූසිෆරස් ප්‍රකාශනය මෙම වෙබ් අඩවිය විකෘති වූ විට නැති වී යයි (ප්‍රකාශයට පත් නොකළ නිරීක්ෂණ). මේ අනුව, CREB සමඟ බැඳී ඇති බවක් නොපෙනීම ගැන අපි පුදුමයට පත් වීමු සී CREB මට්ටම් වැඩි කළ විට මූලික හෝ කෙටි කාලීන ΔFosB අධික ලෙස පීඩනය මත ස්ට්‍රයිටල් සාරය ප්‍රවර්ධනය කරන්නා. මෙය තර්ක කරන්නේ CREB මට්ටමයි ලෙසට මෙම වෙබ් අඩවියේ බන්ධන ප්‍රමාණය තීරණය කිරීමේ එකම සාධකය නොවන අතර, අනෙක් අයගේ වැඩ සඳහා මෙය සහාය වේ (චා-මොල්ස්ටැඩ්, සහ වෙනත් අය, 2004). වෙනත්, කලින් හඳුනාගත් CREB ඉලක්කගත ජාන වල ප්‍රවර්ධකයන් වන බැවින් BDNF සහ prodynorphin, CREB බන්ධනය කළාද, CREB එයට බැඳී නැති බව අපගේ සොයා ගැනීම ගැන අපට විශ්වාසයි සී න්‍යෂ්ටික නිස්සාරණ වල ප්‍රවර්ධකය. තවද, ප්‍රේරණය සීosFosB හි -ලූසිෆරස් ක්‍රියාකාරිත්වය අඛණ්ඩව CRE වැනි වෙබ් අඩවිය මත රඳා නොපවතින අතර, යෝජනා කරන්නේ osFosB නියාමනය නොකරන බවයි සී CREB හි සෘජු බන්ධනය නියාමනය කිරීමෙන් ප්‍රකාශනය සී ප්‍රවර්ධකයා.

CREB සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කරන ආකාරය හඳුනා ගැනීමට අපට ඇති නොහැකියාව සී ප්‍රවර්ධකයා විසින් සහාය දෙනු ලැබේ රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය. (2009), නිදන්ගත කොකේන් නිරාවරණයෙන් පසු පොස්පරීකරණය කරන ලද CREB (pCREB) සහ ΔFosB බන්ධනවල ගෝලීය වෙනස්කම් සොයා බැලීමට චිප්-චිප් ප්‍රවේශයක් භාවිතා කළ අය. මෙම අත්හදා බැලීම් වලදී, ඩීඑන්ඒ-ප්‍රෝටීන් සංකීර්ණ osFosB හෝ pCREB ප්‍රතිදේහ සමඟ ප්‍රතිශක්තිකරණයට ලක් කරන ලද අතර ලේබල් කිරීමෙන් පසුව වේගවත් කරන ලද DNA, ප්‍රවර්ධක මයික්‍රෝආරයකට දෙමුහුන් කරන ලදී. මීට පෙර සංලක්ෂිත CREB ඉලක්ක ජාන බොහෝමයක් මෙම ප්‍රවේශය සමඟ හඳුනාගෙන ඇත (උදා. බීඩීඑන්එෆ්, ප්‍රොඩිනෝෆින්), සී හඳුනාගෙන නොමැත. ඊට අමතරව, CREB සම්මුති CRE අඩවියකට බැඳීම සංස්කෘතික සෛල රේඛා අතර බෙහෙවින් වෙනස් වන බව පෙන්නුම් කර ඇත (චා-මොල්ස්ටැඩ්, සහ වෙනත් අය, 2004). සමඟ CREB අන්තර්ක්‍රියා සොයාගත් පෙර කළ සියලුම අධ්‍යයනයන් සී ප්‍රවර්ධකය සෛල සංස්කෘතිය තුළ සිදු කරන ලදි (අපගේ ඊඑම්එස්ඒ සහ චිප් සාම්පල ලබාගත් මොළයෙන් නොවේ) සහ ප්‍රෝටීන්-ඩීඑන්ඒ අන්තර්ක්‍රියා විමර්ශනය කිරීම සඳහා ජෙල් මාරුවීම් පරීක්ෂණ භාවිතා කරන ලදී. ඩීඑන්ඒ අනුක්‍රමයකට බන්ධනය වීමට සාධකයක විභවය තක්සේරු කිරීමට ඊඑම්එස්ඒ ආයතනයට හැකි අතර, චිප් පරීක්ෂණ මගින් මෙම අන්තර්ක්‍රියා පිළිබඳ නව පෙනුමක් ලබා දේ ඉතින්. තවද, බොහෝ දත්ත එක්කෝ ප්‍රේරණය පෙන්නුම් කරයි සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් හෝ CREB බන්ධනය සී පෙප්ටෝන වැනි සාධක මගින් උත්තේජනය කරන ලද සෛල වලින් ප්‍රවර්ධකය ලබා ගන්නා ලදි (බර්නාඩ් සහ අල්., 2001), විස්ථාපනය (හැන්සන්, සහ වෙනත් අය, 2004), හෝ cAMP සහ ERK ඇතුළුව අන්තර් සෛලීය සං sign ා කඳුරැල්ලෙහි විවිධ සක්‍රියකාරක (හැන්සන් සහ වෙනත් අය, 1999). අපගේ අත්හදා බැලීම් වලදී, භාවිතා කරන ලද එකම “උත්තේජනය” වන්නේ osFosB හි අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමයි. සී ප්‍රකාශනය. එකට ගත් කල, මෙයින් ඇඟවෙන්නේ, CREB ට බැඳීමට (සහ විභව නියාමනය කිරීමට) ඇති හැකියාවයි සී ප්‍රවර්ධකයා සෛල වර්ගය සහ විශේෂිත සං sign ා මාර්ග සක්‍රීය කිරීම මත බෙහෙවින් රඳා පවතී. මීට අමතරව සී CRE වැනි ප්‍රවර්ධක මූලද්‍රව්‍යය (අවම වශයෙන් අනවසර PC12 සෛලවල සහ මූසික ස්ට්‍රයිටම් වල) CREB හෝ osFosB හි සෘජු ඉලක්කයක් නොවේ. නියාමනය කිරීම සිත්ගන්නා කරුණකි FosB CREB හි ප්‍රකාශනය සෛල වර්ගයට සහ උත්තේජක වර්ගයට ද විශේෂිත වේ. ඇන්ඩර්සන් විසින් කරන ලද අධ්‍යයනයක් Et al. CREB විෂබීජ නාශක ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ මූසික ස්ට්‍රයිටම් තුළට එන්නත් කිරීම අර්ධ වශයෙන් වලක්වන බව සොයා ගන්නා ලදී FosB පහත දැක්වෙන කොකේන් පරිපාලනය (ඇන්ඩර්සන් සහ වෙනත් අය, 2001). කෙසේ වෙතත්, එල්-ඩෝපාට ඇති කිරීමට ඇති හැකියාව ද ඔවුන් සොයා ගත්හ FosB 6-OHDA-lesioned striatum හි ප්‍රකාශනය CREB විෂබීජ නාශක ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ තිබීම කෙරෙහි බලපා නැත.

CREB සහ osFosB වක්‍රව නියාමනය කරන බව පෙනේ සී ප්‍රවර්ධකය සහ ක්‍රෝමැටින් ව්‍යුහයේ වෙනස්කම් ලේඛනගත කර ඇත්තේ ΔFosB (සන්කෝවා සහ වෙනත් අය, 2004; කුමාර් සහ අල්., 2005; රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය, 2008), ක්‍රොමැටින් ව්‍යුහය වෙනස් කිරීමෙන් osFosB විසින් වක්‍රව ප්‍රවර්ධකයන්ගේ ක්‍රියාකාරකම් වෙනස් කළ හැකි යැයි අපි තර්ක කළෙමු. කෙසේ වෙතත්, 2 සති සඳහා osFosB අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන මීයන් තුළ, හිස්ටෝන් H3 ඇසිටිලේෂනයේ කිසිදු වෙනසක් සිදු නොවීය සී ප්‍රවර්ධකයා (වගුව 1). හි ChIP-chip දත්ත මෙයට සහය දක්වයි රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය. (2009), ඇසිටිලේටඩ් H3 බන්ධනයේ කිසිදු වෙනසක් වාර්තා නොකළ සී නිදන්ගත කොකේන් වලට නිරාවරණය වන මීයන්ගේ ප්‍රවර්ධකය. සිට සී ප්‍රවර්ධකය ස්ට්‍රයැටම් හි ක්‍රියාකාරී වන අතර මර්දනකාරී මෙතිලයිටඩ් හිස්ටෝන් H3 බන්ධනයක් බලාපොරොත්තු නොවීය. සිත්ගන්නා කරුණ නම්, ඇසිටිලේටඩ් H3 බන්ධනයේ osFosB අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම නිසා කිසිදු වෙනසක් අප දුටුවේ නැත. BDNF ප්‍රවර්ධකය (CREB බන්ධනය වැඩි වී ඇති බව පෙන්නුම් කළ) හෝ CDK5 සහ prodynorphin ප්‍රවර්ධකයන් (වැඩි කළ ΔFosB බන්ධනය පෙන්නුම් කරයි). ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරිත්වයේ වෙනස්වීම් හා සම්බන්ධ විවිධාකාර හිස්ටෝන් වෙනස් කිරීම් ඇති බැවින් (සමාලෝචනය කරන ලද්දේ) රැන්ඩෝ සහ චැං, 2009), මෙම ජාන ප්‍රේරණය සමඟ සම්බන්ධ වන වෙනත් ක්‍රෝමටින් වෙනස් කිරීම් තිබේ. ඕනෑම තනි ක්‍රෝමටින් වෙනස් කිරීමක්, බොහෝ විට ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරිත්වයේ මට්ටම ගැන පුරෝකථනය කළද, විශේෂිත ජානයක් සක්‍රිය කිරීමේදී වෙනස් නොවේ. අනාගත කාර්යයේදී, අවට ඇති ක්‍රෝමැටින් ව්‍යුහයේ වෙනත් විභව වෙනස්කම් දෙස බැලීම සිත්ගන්නා සුළු වනු ඇත සී osFosB overexpression අනුගමනය කරන ප්‍රවර්ධකයා. සිත්ගන්නා කරුණ නම්, නිදන්ගත කොකේන් (බොහෝ විට හරහා OsFosB ප්‍රේරණය) නියුරෝන කායික විද්‍යාව, ඊආර්කේ සං sign ාකරණය සහ කොකේන් සඳහා චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර වෙනස් කරන බව පෙනෙන සර්ටුයින් එක්ස්එන්එම්එක්ස් සහ එක්ස්එන්එම්එක්ස්, III පන්තියේ හිස්ටෝන් ඩීසැටිලේස් ප්‍රකාශ කිරීමට පොළඹවන බව පෙන්වා දී ඇත.රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය, 2009). හිස්ටෝන් ඩීසැටිලේස් ප්‍රේරණය කිරීම මගින් ජාන විශාල සංඛ්‍යාවක ප්‍රකාශනය එකවර නියාමනය කිරීමේ හැකියාව ඇත හරහා ක්‍රෝමටින් ව්‍යුහයේ ගෝලීය වෙනස්කම්.

සම්බන්ධ විය හැකි එක් අපේක්ෂකයෙක් සී osFosB overexpression පහත දැක්වෙන නියාමනය වූයේ AP-1 පවුලේ සාමාජික cFos ය. CFos හි ප්‍රකාශනය නියාමනය කරනු ලබන්නේ CREB විසිනිෂෙන්ග් et al., 1990; Impey et al., 2004), සහ cFos overexpression (එහි බන්ධන සහකරු cJun හි අධික ලෙස පීඩනය සමග සමපාත වේ) වැඩි වේ සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම් (Rourke et al., 1999). එබැවින්, කෙටිකාලීන ΔFosB අධික ලෙස පීඩනය නිසා CREB මට්ටම ඉහළ යාම cFos මට්ටම ඉහළ නැංවිය හැකි අතර එමඟින් බන්ධනය වැඩි වේ සී CRE වැනි වෙබ් අඩවිය. cfos සති දෙකක ΔFosB අධි පීඩනයෙන් පසුව mRNA මීයන් තුළ ප්‍රේරණය වේ (මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003) සහ නිදන්ගත කොකේන් හෝ දිගු කාලීන osFosB අධික ලෙස පීඩනයට ලක්වන මීයන්ගේ අඩුවීම (රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය, 2008). මෙහිදී අපට පෙනී යන්නේ cFos කෙලින්ම බන්ධනය වන බවයි සී කෙසේවෙතත්, ස්ට්‍රයිටල් පටක වල ප්‍රවර්ධකය, osFosB අධික ලෙස පීඩනය සැලකිය යුතු ලෙස බන්ධනය වැඩි නොකරයි. මෙයින් ඇඟවෙන්නේ නියාමනය කිරීම සඳහා cFos සම්බන්ධ විය හැකි බවයි සී පොදුවේ ගත් කල, cFos බන්ධනයෙහි වෙනසක් පමණක් ΔFosB නියාමනය කරන යාන්ත්‍රණය නොවේ සී ප්‍රකාශනය. කෙසේ වෙතත්, osFosB විසින් cFos හි පශ්චාත්-පරිවර්තන වෙනස්කම් (උදා: වෙනස් කරන ලද පොස්පරීකරණය) හෝ බන්ධන සහකරුවෙකුගේ (cJun වැනි) හෝ සම-සක්‍රීය ප්‍රෝටීන වල ප්‍රකාශනය ඇති කිරීමට ඉඩ ඇත. කෙසේ වෙතත්, නොවෙනස්ව පවතින CRE වැනි වෙබ් අඩවිය (මීට පෙර AP-1 සංකීර්ණ සඳහා බන්ධන අඩවියක් ලෙස පෙන්වා ඇති බැවින්, බලන්න හාන් සහ ඩික්සන්, 1990) වැඩි කිරීම සඳහා අවශ්‍ය නොවේ සී ΔFosB overexpression (අපගේ වාර්තාකරු ජාන අත්හදා බැලීම් වලදී තක්සේරු කර ඇති පරිදි) සමඟ ඇති ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම්, වෙනත් සංක්‍රාන්ති ක්‍රියාකාරී සාධක ද ​​ΔFosB මගින් නියාමනය කරනු ලැබේ.

එම සී අපගේ ලුසිෆරස් වාර්තාකරු ජාන අත්හදා බැලීම් වලදී භාවිතා කරන ප්‍රවර්ධක කැබැල්ලේ සංරක්‍ෂිත Sp1 බන්ධන අඩවියක් සහ ඊ-පෙට්ටියක් අඩංගු වේ (හැන්සන්, 2002 විසින් සමාලෝචනය කරන ලදි). විශේෂයෙන්, ඊ-බොක්ස් අනුපිළිවෙල පිටපත් කිරීමේ සාධක ගණනාවක් බන්ධනය කර ඇති බව පෙන්වා දී ඇත (සමාලෝචනය කර ඇත ෆොරස්ට් සහ මැක්නමාරා, 2004). PC12 සෛල භාවිතා කරමින්, ඊ-කොටුවේ විකෘතිය අඩු වන බව අපි දැක ඇත්තෙමු සී ප්‍රවර්ධක ක්‍රියාකාරකම්, නමුත් osFosB සඳහා ප්‍රවර්ධකයාගේ ප්‍රතිචාරය වෙනස් නොකරයි (දත්ත පෙන්වා නැත). සිත්ගන්නා කරුණ නම්, අ සීCRE අඩවියේ සහ ඊ-පෙට්ටියේ විකෘති අඩංගු -ලූසිෆරස් වාර්තාකරුට හඳුනාගත හැකි බාසල් ක්‍රියාකාරකමක් නොමැති අතර ΔFosB අධික ලෙස පීඩනයට (ප්‍රකාශයට පත් නොකළ නිරීක්ෂණ) ප්‍රතිචාර නොදක්වයි. OnFosB ක්‍රියාවෙහි තවත් විභව මැදිහත්කරුවෙක් සී ප්‍රවර්ධකයා යනු ATFs වන අතර, ඒවායින් සමහරක් නිදන්ගත මනෝ උත්තේජක නිරාවරණ මගින් ස්ට්‍රයිටේටම් තුළ ප්‍රේරණය වන බව දන්නා කරුණකි (ග්රීන් සහ ඇල්., 2008). කෙසේ වෙතත්, මෙම ATFs ΔFosB ප්‍රේරණය සඳහා කිසිදු සාක්ෂියක් අප සොයාගෙන නැත (දත්ත පෙන්වා නැත), සහ ATFs විකෘති වූ CRE වැනි වෙබ් අඩවියට බැඳීමට අපේක්ෂා නොකරනු ඇත. සී ප්‍රවර්ධකයා.

මෙම අධ්‍යයනයේ එක් අවවාදයක් නම්, අපි osFosB ඉක්මවා යෑමට ද්වි-පාරජම්බුල පද්ධතියක් භාවිතා කරන අතර, එබැවින් මෙම ආදර්ශය සහ නිදන්ගත කොකේන් පරිපාලනය අතර සමාන්තරයන් ඇඳීමේදී යමෙකු ගතානුගතික විය යුතුය. කෙසේ වෙතත්, අධික ලෙස පීඩනය මෙම මොළයේ කලාපයට පමණක් සීමා වී ඇති හෙයින්, ස්ට්‍රයිටේටම් හි ΔFosB හි නිශ්චිත බලපෑම් දෙස බැලීමේ සුවිශේෂී අවස්ථාව 11A ට්‍රාන්ස්ජනික් මීයන්ට ඇත.චෙන් සහ අල්., 1998), කොකේන් පරිපාලනය මගින් විවිධාකාර මොළයේ කලාපවල වෙනස්කම් ඇති කරන අතර එමඟින් ස්ට්‍රයිටම් වලට වක්‍රව බලපායි. තවද, නිදන්ගත කොකේන් සමඟ ප්රතිකාර කරන ලද පාරම්පරික නොවන සතුන් හා සසඳන විට 11A මීයන් තුළ සමාන චර්යාත්මක හා අණුක ෆීනෝටයිපයන් අධ්‍යයන කිහිපයක් විසින් වාර්තා කර ඇත.කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003; රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය, 2009). අමතරව, බිබ් සහ වෙනත් අය. (2001) සමාන මට්ටම්වල වර්ධක වාර්තා කර ඇත Cdk5 කොකේන් ප්‍රතිකාර කළ, පාරජම්බුල නොවන පැටවුන් හා සීඩීකේඑක්ස්එන්එම්එක්ස් ඉලක්කවල සමාන වෙනස්කම්, පීඑක්ස්එන්එම්එක්ස් සහ ඩාර්පීපී-එක්ස්එන්එම්එක්ස් සමඟ සසඳන විට එම්ආර්එන්ඒ සහ ප්‍රෝටීන් ප්‍රේරණය මෙම එක්ස්එන්එම්එක්එස්ඒ වික්‍රියා වල පවතී.

අවසාන වශයෙන්, කෙටිකාලීන osFosB ප්‍රකාශනය බහුවිධ යාන්ත්‍රණ හරහා ස්ට්‍රයිටේටම් හි ජාන ප්‍රේරණයට තුඩු දෙන බව අපට පෙනී යයි. මෙයට සෘජු ප්‍රවර්ධක බන්ධනය, CREB ප්‍රෝටීන් හා ක්‍රියාකාරිත්වය ප්‍රේරණය කිරීම, ක්‍රෝමටින් වෙනස් කිරීම, තවම නිශ්චය කර නොමැති මාර්ග වලට අමතරව වේ.

යන්න:

පරික්ෂාකාරී ක්රම

සතුන්

මෙම අධ්‍යයනයේදී පිරිමි ද්වි-ට්‍රාන්ස්ජනික් 11A සතුන් (NSE-tTA x TetOP-osFosB) භාවිතා කරන ලද අතර ඒවා සංලක්ෂිත වේ කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999. OssFosB ඉක්මවා යාම සඳහා, සති 3 සහ 6 අතර ඩොක්සි සයික්ලයින් වලින් මීයන් ඉවත් කරන ලද අතර පාලක මීයන් ඩොක්සි සයික්ලයින් මත නඩත්තු කරන ලදී. සියලුම මීයන් 12: 12 ආලෝකය / අඳුරු චක්‍රය, 7 am හි විදුලි පහන් සහ 7 ප.ව. දැන්වීම් ලිබ් ආහාර සහ ජලය සඳහා ප්‍රවේශය. සියලුම මූසික අත්හදා බැලීම් ඩලස් හි ටෙක්සාස් විශ්ව විද්‍යාලයේ නිරිතදිග වෛද්‍ය මධ්‍යස්ථානයේ සත්ව රැකවරණය හා භාවිතය පිළිබඳ කමිටුව විසින් අනුමත කරන ලද ප්‍රොටෝකෝලයන්ට අනුකූල විය.

වාර්තාකරු සහ ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ්

වල් ටයිප් (WT) සී ප්‍රවර්ධක-ලුසිෆරස් වාර්තාකරු සකස් කරන ලද්දේ දළ වශයෙන් 200 bp PCR කැබැල්ලක් pGL3-luc දෛශිකයට (Promega) ඇතුළත් කිරීමෙනි. මෙම කොටස මූසික ප්‍රවේණික ඩීඑන්ඒ වෙතින් ලබාගෙන ඇත (ප්‍රාථමික: 5 'TATCCTCATTCACTGGGACGC 3' උඩුමහල, සහ 5 'TACCTTTGGATGGGGAAATCG 3' පහළට) සහ මුලින් pGEM-T පහසු දෛශිකයට (Promega, #AXNUM) ඇතුළත් කර ඇත. ප්‍රවර්ධක කැබැල්ල පසුව PGL1360-luc හි Kpn1 / Xho1 සීමා කිරීමේ එන්සයිම අඩවි වලට ක්ලෝන කරන ලදී.

හි CRE ලක්ෂ්‍ය විකෘතියක් නිර්මාණය කිරීම සඳහා සී ප්‍රවර්ධකය, කලින් වාර්තා කරන ලද CRE වැනි වෙබ් අඩවියකට එරෙහිව යොමු කරන ලද විකෘති ප්‍රයිමර් . මෙය වාර්තා කරන ලද CRE වැනි වෙබ් අඩවිය (ACTGCGTCAGC) ACTGAGCTCC බවට පරිවර්තනය කරයි. සියලුම වාර්තාකරු ප්ලාස්මිඩ් ඩීඑන්ඒ අනුක්‍රමණය මගින් තහවුරු කරන ලදී. OsFosB ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩයේ සම්පූර්ණ දිග ΔFosB අනුක්‍රමයක් pCDNA 5 හි බහු ක්ලෝනකරණ අඩවියට ඇතුළත් කර ඇති අතර එය කලින් විස්තර කර ඇත (උලරි සහ නෙස්ලර්, 2007).

සෛල සංස්කෘතිය සහ ඩී.එන්.ඒ.

ඩල්බෙකෝ හි නවීකරණය කරන ලද ඊගල් මාධ්‍යයේ එෆ් -12 හි මීයන් ෆියෝක්‍රොමොසිටෝමා (පීසී 12) සෛල නඩත්තු කරන ලද අතර 10% අශ්ව සේරම්, 5% භ්‍රෑණ බෝවින් සේරම් සහ 1 ° C දී 37% පෙනිසිලින් / ස්ට්‍රෙප්ටොමයිසින් සහ 5% CO₂. 360 μL දී බීටීඑක්ස් 350 ඉලෙක්ට්‍රොපෝරේටරයක් ​​(0V, ඕම්, සහ 850 μF) භාවිතා කරමින් සෛල සම්ප්‍රේෂණය කරන ලදී. ඩල්බෙකෝගේ පොස්පේට් මිලිමීටර 800 ක පරතරයකින් යුත් සේලයින් වල සේලයින් බෆර් කරන ලද අතර වාර්තාකරු 4 μg සහ ප්‍රකාශන 10 μg වේ. හිස් දෛශික ප්ලාස්මිඩ් (pCDNA) මුළු DNA ප්‍රමාණය සාමාන්‍යකරණය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. බද්ධ කිරීමෙන් පසු, සෛල මි.මී. 5 කොලජන් ආලේපිත පිඟන් කෝප්ප මත වගා කරන ලද කාලය සඳහා වගා කරන ලදී.

ලුසිෆරස් පරීක්ෂණ

බද්ධ කිරීමෙන් දින දෙක තුනකට පසුව, ඩල්බෙකෝගේ පොස්පේට් බෆර් කරන ලද සේලයින් වල සෛල 3 වතාවක් සේදීම, ලයිසයිඩ් කිරීම (ග්ලයිසයිල්ග්ලයිසීන් 25 mM, 15 mM MgSO භාවිතා කිරීම)₄, 4 mM EGTA, 1% Triton X-100, pH 7.8, 1 mM DTT), එකතු කර කේන්ද්‍රාපසාරීකරණයෙන් ඉවත් කර ඇත. 30 lyL ලයිසෙට් 140 lL ලුසිෆරස් තක්සේරු බෆරය (25 mM ග්ලයිසයිල්ග්ලයිසීන්, 15 mM MgSO) සමඟ සංයුක්ත විය.₄, 4 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 1 mM පොටෑසියම් පොස්පේට්, 1 mM coenzyme A, pH 7.8). එක් ළිඳකට 800 μL 40 mM ලුසිෆරින් ස්වයංක්‍රීයව එන්නත් කිරීමෙන් පසුව FLx-1 මයික්‍රොපෝලේට් ප්‍රතිදීප්ත කියවනය භාවිතා කරමින් ලුමිනිසෙන්ස් ක්‍රියාකාරිත්වය මනිනු ලැබීය. බයෝරාඩ් ප්‍රෝටීන් තක්සේරුවක් මගින් තීරණය කරන පරිදි ලුසිෆරස් ක්‍රියාකාරිත්වය සමස්ත ප්‍රෝටීන් අන්තර්ගතයට සාමාන්‍යකරණය කරන ලදි.

විද්‍යුත් භෞතික සංචලතා මාරුව තක්සේරුව

ද්වි-ට්‍රාන්ස්ජනික් 11A මීයන්ගෙන් ලබාගත් ස්ට්‍රයැටම් පෙති වලින් න්‍යෂ්ටික නිස්සාරණය (2 හෝ 8 සති සඳහා ඩොක්සි සයික්ලයින් මත හෝ අක්‍රීයව පවත්වා ගෙන යනු ලබන) ()මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003) අනුව සකස් කරන ලදී හුවාං සහ වෝල්ටර්ස් (1996). ³²පී-ලේබල් කරන ලද ද්විත්ව පටි සහිත ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ් ප්‍රෝබ්ස් ප්‍රොමේගා ජෙල් ෂිෆ්ට් ඇසේ පද්ධති ප්‍රොටෝකෝලය (#E3300) භාවිතයෙන් සකස් කරන ලද අතර රොචේ ක්වික් ස්පින් තීරු භාවිතයෙන් පරීක්ෂණ පිරිසිදු කරන ලදී. සම්මුති CRE සහ AP-1 පරීක්ෂණ අනුපිළිවෙල ප්‍රොමේගා (පිළිවෙලින් #E328A සහ E320B) සහ සී CRE අනුපිළිවෙලවල් (Cck-CRE sense: CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGTGCA; Cck-CRE antisense: CCCAGTGCTGACGCAGTCCAGAGCTCGCTAGCTTT).

Promega Gel Shift Assay පද්ධති ක්‍රියාපටිපාටියේ (#E3300) වෙනස් කිරීම් භාවිතා කරමින් බන්ධන ප්‍රතික්‍රියා සහ ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරසිස් සිදු කරන ලදී. 50,000 සීපීඑම් ලේබල් කරන ලද පරීක්ෂණ 10 strg ස්ට්‍රයිටල් න්‍යෂ්ටික නිස්සාරණය සමඟ සංයුක්ත විය. රේඩියෝ ලේබල් කරන ලද ප්‍රොබ්ස් හඳුන්වාදීමට පෙර සීතල තරඟකරු ඩීඑන්ඒ හෝ ප්‍රතිදේහ එකතු කරන ලදී. සුපර්ෂිෆ්ට් අත්හදා බැලීම් සඳහා, CREB ප්‍රතිදේහයේ 2 (g (Upstate Biotechnology # 06-083) භාවිතා කරන ලදී. ප්‍රතික්‍රියා 4% පොලිකාක්‍රයිලමයිඩ් ජෙල් මත විද්‍යුත් විච්ඡේදනය කර වියළන ලද සහ පටලයට නිරාවරණය විය (1 පැය සිට 2 දින දක්වා තීව්‍ර වන තිර භාවිතා කරමින්).

ප්රතිශක්තිකරණ අවහිර කිරීම

පීසී 12 සෛල සඳහා, අයිස් සීතලෙන් මි.මී. 35 තහඩු සෝදා සෝදා ඩල්බෙකෝගේ පොස්පේට් බෆර් කරන ලද සේලයින් සහ අයිස් සීතල RIPA ලයිසිස් බෆරයේ (50 mM Tris pH 7.4, 5 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% deoxycholate, 1% ප්‍රෝටියේස් නිෂේධක අඩංගු% ට්‍රයිටන් එක්ස් -100, 0.1% සෝඩියම් ඩොඩෙසිල් සල්ෆේට්). Sonication, Clearing සහ බ්‍රැඩ්ෆර්ඩ් ප්‍රෝටීන් තක්සේරු කිරීමෙන් පසුව, ලයිසෙට් සම්පූර්ණයෙන් අවලංගු කරන ලද අතර සෑම සාම්පලයකින් 50 μg 10% SDS පොලිඇක්‍රයිලමයිඩ් ජෙල් මත විද්‍යුත් විච්ඡේදනය කරන ලදී. ප්‍රෝටීන පීවීඩීඑෆ් පටලයට මාරු කරන ලද අතර, ට්‍රයිස්-බෆර්ඩ් සේලයින් වල 1% අතර -3 (ටීබීඑස්-ටී කිරි) අඩංගු 0.1% මේද නොවන වියළි කිරිවල පැය 20 ක් අවහිර කරන ලද අතර ප්‍රාථමික ප්‍රතිදේහ (CREB- 4: 06 ට භාවිතා කරන අප්ස්ටේට් ජෛව තාක්ෂණය # 083-1; GAPDH- සිග්මා # G1,000, 8795: 1 ට භාවිතා වේ) TBS-T කිරි වල තනුක කර ඇත. ටී.බී.එස්-ටී හි සේදීමෙන් පසු, ක්ෂාරීය පොස්පේටස්-සංයුක්ත ද්විතියික ප්‍රතිදේහ (සිග්මා) භාවිතා කරමින් කාමර උෂ්ණත්වයේ දී පැයක් පැල්ලම් පරීක්ෂාවට ලක් කරන ලදී. ට්‍රයිස්-බෆර්ඩ් සේලයින් වල සේදීමෙන් පසු, බයෝරාඩ් (# 80,000-1) උපදෙස් අනුව වර්ණ ප්‍රතික්‍රියාව සිදු කරන ලදී. පටල එක රැයකින් වියළන ලද අතර පැතලි නිදන ස්කෑනරයක් මත ස්කෑන් කරන ලද අතර ImageJ භාවිතයෙන් සිදු කරන ලද dens නත්වමිතිකය (පහත බලන්න).

ස්ට්‍රයිටල් සාරය සඳහා, කලින් ප්‍රකාශයට පත් කළ පරිදි බටහිර පිපිරුම් පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී (Hope et al., 1994). පටක දිරාපත් වූ මීයන්ගෙන් ඉවත් කර අයිස් මත තබා මොළයේ අනුකෘතියක් මත 1 මි.මී. පටක පන්ච් පසුව භාවිතා කරන තෙක් -80 at C දී ශීත කළ. පොස්පේටේස් සහ ප්‍රෝටියේස් නිෂේධක (රොචේ, සිග්මා) යන දෙකම අඩංගු නවීකරණය කරන ලද ඩිටර්ජන්ට් පාදක බෆරයක පටක අයිස් මත sonicated. Sonication කිරීමෙන් පසුව, සාම්පල උතුරන වතුරෙන් නිරූපණය කරන ලද අතර 15,000 මිනිත්තු 15xg හි කේන්ද්‍රාපසාරී විය; සුපර්නැටන්ට් පසුව එකතු කර සකස් කරන ලදී; ප්‍රෝටීන් සාන්ද්‍රණ ප්‍රමාණය බ්‍රැඩ්ෆර්ඩ් තක්සේරුවක් (බයෝ-රැඩ්) භාවිතයෙන් ගණනය කරන ලදී. සාම්පල 10% ඇක්‍රිලමයිඩ් / බයිසැක්‍රයිලමයිඩ් ජෙල් මත ධාවනය කර, පීවීඩීඑෆ් පටලයකට මාරු කර, 5% කිරි වල අවහිර කර ප්‍රාථමික ප්‍රතිදේහ සමඟ පුරවා ඇත (CREB, Upstate, Lake Placid, NY). කෙමිලුමිනිසෙන්ස් පද්ධතියක් (පියර්ස්) භාවිතයෙන් බ්ලොට් පසුව දර්ශනය විය. සියලුම සාම්පල GAPDH (Fitzgerald, Concord, MA) වෙත සාමාන්‍යකරණය කරන ලදි. අප තක්සේරුකරණයේ රේඛීය පරාසය තුළ සිටින බව සහතික කිරීම සඳහා සම්මත වක්‍ර ධාවනය විය.

ඩෙන්සිටෝමෙට්‍රි විශ්ලේෂණය

PC12 immunoblots සඳහා, රොඩ්බාර්ඩ් ක්‍රමාංකනය සමඟ ImageJ භාවිතා කරමින් dens නත්වමිතික විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී. එක් එක් මිනුම් වලින් සාමාන්‍ය පසුබිම් සං signal ාව අඩු කරන ලද අතර එක් එක් නියැදිය සඳහා CREB හි අනුපාතය GAPDH සං signal ාව ගණනය කරන ලදී. ස්ට්‍රයිටල් ඉමියුනොබ්ලොට් සහ ඊඑම්එස්ඒ විශ්ලේෂණය සඳහා, පසුබිම් අඩු කිරීම සමඟ Scion Image 1.62c භාවිතා කරන ලදී.

Chromatin Imunoprecipitation (ChIP)

චිප් පරීක්ෂණ සිදු කරනු ලැබුවේ ක්‍රමවේදයන්ට අනුව ය සන්කෝවා සහ වෙනත් අය. (2004) සහ කුමාර් සහ වෙනත් අය. (2005). කෙටියෙන් කිවහොත්, ඩොක්සි සයික්ලයින් මත හෝ ඉන් පිටත නඩත්තු කරන ලද 11A මීයන්ගෙන් ද්විපාර්ශ්වික ස්ට්‍රයිටල් සාම්පල 1% ෆෝමල්ඩිහයිඩ් සමඟ හරස් සම්බන්ධ කර ඇති අතර ග්ලයිසීන් සමඟ හරස් සම්බන්ධතාවය නිවාදැමීය (අවසාන සාන්ද්‍රණය 0.125 M). මෙම සාම්පල බාහිකය ඉවත් කර න්‍යෂ්ටික සමුච්චයේ මට්ටමින් ගත් සමස්ත මොළ පෙති වලින් විය. ක්‍රෝමැටින් දළ වශයෙන් 0.2 සිට 1 kb දක්වා කොටස් වලට sonication හරහා කපා, ප්‍රෝටීන් ජී පබළු (තාප විද්‍යාත්මක # 22852) වලින් ඉවත් කර, ආදාන සාම්පල -80 at C දී ශීත කළ. එක් එක් වර්ෂාපතනය සඳහා ක්‍රෝමටින් 60 ත් 100 μg ත් අතර ප්‍රමාණයක් භාවිතා කරන ලදී. සෑම ප්‍රාථමික ප්‍රතිදේහයකින් 5-10 μg භාවිතා කරන ලදි (CREB: Upstate Biotechnology # 06-863, osFosB: සැන්ටා ක ru ස් ජෛව තාක්ෂණය # SC-48x, ඇසිටිලේටඩ් H3: අප්ස්ටේට් ජෛව තාක්ෂණය # 06-599, මෙතිලයිට් H3 (LYS9): සෛල සං Sign ා තාක්ෂණය, cFos: සැන්ටා ක ru ස් ජෛව තාක්ෂණය # SC-7202x). නිෂ්පාදනයේ උපදෙස් අනුව ප්‍රතිදේහ-ක්‍රෝමැටින් සංකීර්ණ ප්‍රෝටීන් ජී ප්ලස් පබළු සමඟ ප්‍රතිශක්තිකරණයට ලක් කරන ලදී (තාප විද්‍යාත්මක # 22852). ආදාන සහ වේගවත් සාම්පල වල ප්‍රතිලෝම හරස් සම්බන්ධතාවයෙන් පසුව, සෑම නියැදියක්ම ප්‍රමාණාත්මක PCR (qPCR) වලට යටත් කරන ලදී. ChIP සඳහා මෙම සියලු ප්‍රතිදේහ භාවිතය පුළුල් ලෙස වලංගු කර ඇත (සන්කෝවා සහ වෙනත් අය, 2004; කුමාර් සහ අල්., 2005; රෙන්ටාල් සහ වෙනත් අය, 2009).

QPCR (ව්‍යවහාරික ජෛව පද්ධති (ABI) ප්‍රිස්ම් 7700, ෆොස්ටර් සිටි, සීඒ) මගින් සම්බන්ධිත ඩීඑන්ඒ ප්‍රමාණය මැනීම මගින් උනන්දුවක් දක්වන සෑම ජාන ප්‍රවර්ධකයෙකුගේම ප්‍රෝටීන් බන්ධන මට්ටම තීරණය කරන ලදී. SYBR Green (ව්‍යවහාරික ජෛව පද්ධති, CA) ඉදිරියේ ආදාන හෝ සම්පූර්ණ ඩීඑන්ඒ (ප්‍රතිශක්තිකරණ නොවන) සහ ප්‍රතිශක්ති ප්‍රතිරෝධක ඩීඑන්ඒ තුන් ගුණයකින් වැඩි කරන ලදී. එක් එක් නියැදියෙන් Ct අගයන් ලබා ගත්තේ අනුක්‍රමික අනාවරකය 1.1 මෘදුකාංගයෙනි. අච්චු ඩීඑන්ඒ හි සාපේක්ෂ ප්‍රමාණකරණය tCt ක්‍රමය භාවිතයෙන් සිදු කරන ලදී (සන්කෝවා සහ වෙනත් අය, 2004). භාවිතා කරන ප්‍රාථමිකයන්: BDNF ප්‍රවර්ධක 4: CTTCTGTGTGCGTGAATTTGCT; AGTCCACGAGAGGGCTCCA CDK5 ප්‍රවර්ධකයා: GCTGAAGCTGTCAGGAGGTC; GTGCCCCGCTCTTGTTATTA Cck ප්‍රවර්ධකයා: CTTGGGCTAGCCTCATTCACTG; TTAAATAGCTCCTCCCGGTTCG ප්‍රොඩිනෝර්ෆින් ප්‍රවර්ධකයා: GGCTTCCTTGTGCTTCAGAC; GCGCTGTTTGTCACTTTCAA.

සංඛ්යාන විශ්ලේෂණය

සියලුම දත්ත මාධ්‍යයන් ලෙස ඉදිරිපත් කෙරේ ± මධ්‍යන්‍යයේ සම්මත දෝෂයකි. සංඛ්යානමය වෙනස තීරණය කරනු ලැබුවේ ශිෂ්යයාගේ වලිග දෙකේ ටී-පරීක්ෂණය (p <0.05) විසිනි. බහුවිධ සැසඳීම් කළ විට, බොන්ෆෙරෝනි නිවැරදි කිරීම මඟින් p- අගයන් සකස් කරන ලදී.

යන්න:

ස්තූතියි

ප්‍රයෝජනවත් සාකච්ඡා සඳහා විල් රෙන්ටාල් සහ අරවින්ද් කුමාර්ට අපි ස්තූතිවන්ත වෙමු. මෙම අත්හදා බැලීම් සඳහා අරමුදල් සැපයීම පිළිබඳව අපි NIDA ට ස්තූතිවන්ත වෙමු.

යන්න:

පාද සටහන්

ප්‍රකාශකයාගේ වියාචනය: මෙය ප්රකාශයට පත් කර ඇති අනු පිටපතේ ලියවිල්ලක් වන PDF ගොනුවකි. අපගේ ගනුදෙනුකරුවන්ට සේවාවක් වශයෙන් අපි මෙම අත්පිටපතේ මුල් පිටපත සපයයි. අත් පිටපත එහි අවසන් ආකෘතියෙන් ප්රකාශයට පත්කිරීමට පෙර පිටපත් කිරීම, මුද්රණය කිරීම සහ සමාලෝචනය සිදුකිරීමට නියමිතය. නිෂ්පාදන ක්රියාවලිය අතරතුර අන්තර්ගතයට බලපෑම් කළ හැකි දෝෂයන් සොයා ගත හැකි වන අතර, ජර්නලයට අදාල වන සියලුම නීතිමය කරුණු නොසලකා හැරීමක් සැලකිල්ලට ගන්න.

වර්ගීකරණ නියමයන්:

කොටස: #1 ස්නායු පද්ධතියේ සෛලීය හා අණුක ජීව විද්‍යාව

යන්න:

ආශ්රිත

1. ඇන්ඩර්සන් එම්, කොන්රාඩි සී, සෙන්සි එම්ඒ. cAMP ප්‍රතිචාර මූලද්‍රව්‍ය-බන්ධන ප්‍රෝටීන අවශ්‍ය වන්නේ ඩොපමයින් මත යැපෙන ජාන ප්‍රකාශනය සඳහා නොවෙනස්ව පවතින නමුත් ඩොපමයින්-අවලංගු කරන ලද ස්ට්‍රයැටම් නොවේ. ජේ නියුරෝසි. 2001; 21: 9930 - 43. [PubMed]
2. බැරට් එම්, ඔලිවියර් ජේඩී, පෙරෝටි එල් අයි, ඩිලෝන් ආර්ජේ, බර්ටන් ඕ, අයිෂ් ඒජේ, ඉම්පේ එස්, ස්ටෝම් ඩීආර්, නෙව් ආර්එල්, යින් ජේසී, සැකරියෝ වී, නෙස්ලර් ඊජේ. න්යෂ්ටියේ CREB ක්රියාකාරිත්වය චිත්තවේගීය උත්තේජක වලට චර්යාත්මක ප්රතිචාර දැක්වීම පාලනය කරයි. Proc Natl Acad Sci US A. 2002; 99: 11435 - 40. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
3. බයින්ෆෙල්ඩ් එම්.සී., කොනොලි කේ.ජේ, පියර්ස් ආර්.සී. කොකේන් ප්‍රතිකාරය න්‍යෂ්ටියේ බාහිර සෛලීය කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් (සීසීකේ) වැඩි කරයි, නිදහසේ චලනය වන මීයන්, කොකේන් වලට චර්යාත්මකව සංවේදී වන මීයන් තුළ වැඩි දියුණු කරන ලද බලපෑමකි. ජේ නියුරෝචෙම්. 2002; 81: 1021 - 7. [PubMed]
4. බර්නාඩ් සී, සූටර් ඒ, වින්සන් සී, රැටිනෝ සී, චයිවියල් ජේ, කෝඩියර්-බුසාට් එම්. පෙප්ටෝන චක්‍රීය ඇඩෙනොසින් මොනොපොස්පේට් ප්‍රතිචාර මූලද්‍රව්‍ය බන්ධන සාධක හරහා බඩවැල් කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් ජාන සම්ප්‍රේෂණය උත්තේජනය කරයි. අන්තරාසර්ග විද්‍යාව. 2001; 142: 721 - 9. [PubMed]
5. බිබ් ජේඒ, චෙන් ජේ, ටේලර් ජේආර්, ස්වේනිංසන් පී, නිෂි ඒ, ස්නයිඩර් ජීඑල්, ​​යාන් ඉසෙඩ්, සාගාවා ඉසෙඩ්කේ, ඔයිමෙට් සීසී, නයිරන් ඒසී, නෙස්ලර් ඊජේ, ග්‍රීන්ගාර්ඩ් පී. සොබාදහම. 5; 2001: 410 - 376. [PubMed]
6. චා-මොල්ස්ටාඩ් එච්, කෙලර් ඩීඑම්, යොචුම් ජීඑස්, ඉම්පේ එස්, ගුඩ්මන් ආර්එච්. CREP, CAMP- ප්‍රතිචාර මූලද්‍රව්‍යයට සම්ප්‍රේෂණ සාධකය සෛල වර්ගයට විශේෂිත බන්ධනය කිරීම. Proc Natl Acad Sci US A. 2004; 101: 13572 - 7. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
7. චෙන් ජේ, නයි එච්ඊ, කෙල්ස් එම්බී, හිරෝයි එන්, නැකබෙප්පු වයි, හෝප් බීටී, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. විද්‍යුත් විච්ඡේදනය සහ කොකේන් ප්‍රතිකාර මගින් ඩෙල්ටා ෆොස්බී සහ ෆොස්බී වැනි ප්‍රෝටීන නියාමනය කිරීම. මෝල් ෆාමකොල්. 1995; 48: 880 - 9. [PubMed]
8. චෙන් ජේ, කෙල්ස් එම්බී, සෙන්ග් ජී, සකායි එන්, ස්ටෙෆන් සී, ෂොකට් පීඊ, පිකියෝටෝ එම්ආර්, ඩුමන් ආර්එස්, නෙස්ලර් ඊජේ. මොළයේ ප්‍රේරණය කළ හැකි, ඉලක්කගත ජාන ප්‍රකාශනයක් සහිත පාරම්පරික සතුන්. මෝල් ෆාමකොල්. 1998; 54: 495 - 503. [PubMed]
9. චෙන් ජේ, ෂැං වයි, කෙල්ස් එම්බී, ස්ටෙෆන් සී, ඇන්ග් ඊඑස්, සෙන්ග් එල්, නෙස්ලර් ඊජේ. නිදන්ගත විද්‍යුත් විච්ඡේදනය මගින් හිපොකැම්පස් හි සයික්ලින් මත යැපෙන කයිනාස් එක්ස්එන්එම්එක්ස් ප්‍රේරණය: ΔFosB හි භූමිකාව. ජේ නියුරෝසි. 5; 2000: 20 - 8965. [PubMed]
10. චිනෙනොව් වයි, කර්ප්පෝලා ටී.කේ. බොහෝ වර්ගවල සමීප හමුවීම්: පිටපත් කිරීමේ නියාමන නිශ්චිතතාවයට මැදිහත් වන ෆොස්-ජුන් අන්තර්ක්‍රියා. ඔන්කොජීන්. 2001; 20: 2438 - 52. [PubMed]
11. කෝල් ආර්එල්, කොන්රාඩි සී, ඩග්ලස් ජේ, හිමාන් එස්ඊ. ඇම්ෆෙටමින් සහ ඩොපමයින් වලට නියුරෝන අනුවර්තනය: මීයන් ස්ට්‍රයැටම් හි ප්‍රොඩිනෝෆින් ජාන නියාමනයේ අණුක යාන්ත්‍රණ. නියුරෝන. 1995; 14: 813 - 23. [PubMed]
12. ඩෙවාල් ඩී.ජී., රේචෝවරි ආර්, ඩොක්රේ ජී.ජේ, ඩිමලයින් ආර්. එස්.ටී.සී.-එක්ස්එන්එම්එක්ස් සෛල තුළ පීඒසීඒපී විසින් සීසීකේ ජාන පිටපත් කිරීම පාලනය කිරීම. ඇම් ජේ ෆිසියෝල් ගැස්ට්‍රොයින්ටෙස්ට් අක්මා භෞතවේදය. 1; 2000: G279 - 605. [PubMed]
13. ඩිං එක්ස්ඉසඩ්, මොචෙට්ටි අයි. මීයන් ස්ට්‍රයැටම් හි කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් එම්ආර්එන්ඒ අන්තර්ගතය ඩොපමිනර්ජික් නියාමනය කිරීම. මොළයේ රෙස් මෝල් මොළයේ රෙස්. 1992; 12: 77 - 83. [PubMed]
14. ෆොරස්ට් එස්, මැක්නමාරා සී. අයිඩී පවුල පිටපත් කිරීමේ සාධක සහ සනාල තුවාල ඇතිවීම. ධමනි තෙරොම් වාස් බයෝල්. 2004; 24: 2014 - 20. [PubMed]
15. ජෙව්රි ජේ.සී., කෝඩියර්-බුසාට් එම්, නාමොස්-ගයිලාර්ඩ් ඊ, චයිවියල් ජේඒ, ඇබෙලෝ ජේ. ප්‍රෝටීන් හයිඩ්‍රොයිසයිට් මගින් කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් ජානය සම්ප්‍රේෂණය කිරීම සඳහා චක්‍රීය AMP- සහ කැල්සියම් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනස් වල සම-අවශ්‍යතාවය. ජේ බයෝල් කෙම්. 2002; 277: 22407 - 13. [PubMed]
16. ග්‍රීන් ටීඒ, අලිබායි අයිඑන්, උන්ටර්බර්ග් එස්, නෙව් ආර්එල්, ගොස් එස්, ටම්මින්ගා සීඒ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. න්යෂ්ටික සමුච්චය තුළ සක්රිය කිරීමේ පිටපත් කිරීමේ සාධක (ATFs) ATF2, ATF3 සහ ATF4 ප්‍රේරණය කිරීම සහ ඒවායේ චිත්තවේගීය හැසිරීම නියාමනය කිරීම. ජේ නියුරෝසි. 2008; 28: 2025 - 32. [PubMed]
17. හැමිල්ටන් එම්ඊ, රෙඩොන්ඩෝ ජේඑල්, ෆ්‍රීමන් ඒඑස්. උග්ර drug ෂධ පරිපාලනයට ප්රතිචාර වශයෙන් මීයන්ගේ න්යෂ්ටීන් සමුච්චය තුළ ඩොපමයින් හා කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් පිටාර ගැලීම. උපාගම. 2000; 38: 238 - 42. [PubMed]
18. හැන්සන් ටීවී, රෙෆෙල්ඩ් ජේඑෆ්, නීල්සන් එෆ්සී. මයිටොජන්-සක්‍රීය ප්‍රෝටීන් කයිනාස් සහ ප්‍රෝටීන් කයිනාස් චක්‍රීය ඇඩෙනොසින් 3 ′, 5′-මොනොපොස්පේට් ප්‍රතිචාර මූලද්‍රව්‍ය බන්ධන ප්‍රෝටීන සක්‍රීය කිරීම මගින් සං aling ා මාර්ගයක් කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් පිටපත් කිරීම උත්තේජනය කරයි. මෝල් එන්ඩොක්‍රිනෝල්. 1999; 13: 466-75. [PubMed]
19. හැන්සන් ටීවී, නීල්සන් එෆ්.සී. නියුරෝන කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් ජාන පිටපත් කිරීම නියාමනය කිරීම. ස්කෑන්ඩ් ජේ ක්ලින් ලැබ් ආයෝජන සැපයුම්. 2001; 234: 61 - 7. [PubMed]
20. හැන්සන් ටීවී. Cholecystokinin ජාන පිටපත් කිරීම: ප්‍රවර්ධක මූලද්‍රව්‍ය, පිටපත් කිරීමේ සාධක සහ සං aling ා මාර්ග. පෙප්ටයිඩ. 2001; 22: 1201 - 11. [PubMed]
21. හැන්සන් ටීවී, රෙෆෙල්ඩ් ජේඑෆ්, නීල්සන් එෆ්සී. කේ.ආර්.එල් සහ ෆෝස්කොලින් සී.ආර්.ඊ.බී සහ සම-සක්‍රිය සී.බී.පී. සම්බන්ධීකරණ සක්‍රීය කිරීම හරහා කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් ජාන ප්‍රකාශනය සමමුහුර්තව නියාමනය කරයි. ජේ නියුරෝචෙම්. 2004; 89: 15 - 23. [PubMed]
22. හෝන් ආර්එස්, ඩික්සන් ජේ. මීයන්ගේ කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් ජානය ප්‍රකාශ කිරීම සඳහා අත්‍යවශ්‍ය වන පිටපත් කිරීමේ වර්ධකයක් මිනිස් සී-ෆොස් ජානයේ -296 මූලද්‍රව්‍යයට සමාන අනුක්‍රමයක් අඩංගු වේ. ජේ බයෝල් කෙම්. 1990; 265: 15455 - 63. [PubMed]
23. හිරෝයි එන්, මාරෙක් ජීජේ, බ්‍රවුන් ජේආර්, යේ එච්, සෞදූ එෆ්, වෛද්‍ය වීඒ, ඩුමන් ආර්එස්, ග්‍රීන්බර්ග් එම්ඊ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. නිදන්ගත විද්‍යුත් විච්ඡේදක රෝග වල අණුක, සෛලීය හා චර්යාත්මක ක්‍රියාවලියේදී ෆොස්බී ජානයේ අත්‍යවශ්‍ය කාර්යභාරය. ජේ නියුරෝසි 1998. 1998; 18: 6952 - 62. [PubMed]
24. හොක්ෆෙල්ට් ටී, රෙෆෙල්ඩ් ජේඑෆ්, ස්කිර්බෝල් එල්, අයිවර්මාර්ක් බී, ගෝල්ඩ්ස්ටයින් එම්, මාකී කේ. මෙසෝ-ලිම්බික් නියුරෝන වල ඩොපමයින් සහ සීසීකේ සහජීවනය සඳහා සාක්ෂි. සොබාදහම. 1980; 285: 476 - 8. [PubMed]
25. හෝප් බීටී, කෙල්ස් එම්බී, ඩුමන් ආර්එස්, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. නිදන්ගත විද්‍යුත් විච්ඡේදක අල්ලා ගැනීම (ඊසීඑස්) ප්‍රතිකාරයේ ප්‍රති results ලයක් ලෙස වෙනස් වූ සංයුතිය හා ලක්ෂණ සහිත මොළයේ දීර් AP කාලීන AP-1 සංකීර්ණයක් ප්‍රකාශ වේ. ජේ නියුරෝසි. 1994; 14: 4318 - 28. [PubMed]
26. හෝප් බීටී, නයි එච්, කෙල්ස් එම්, ඩීඑෆ් ඩබ්, ඉඩාලෝලා එම් ජේ, නකබෙප්පු යූ, ඩුමන් ආර්ස්, නෙස්ලේ ඊ. දිගු කල් පවතින AP-1 සංඝටකයක් නිදන්ගත කොකේන් සහ වෙනත් නිදන්ගත ප්රතිකාර මගින් මොළයේ ඇති ෆොස්-සමාන ප්රෝටීන වලින් සමන්විතය. නියුරෝන. 1994; 13: 1235-44. [PubMed]
27. හුවාං කේඑක්ස්, වෝල්ටර්ස් ජේ.ආර්. මීයන් ස්ට්‍රයිටේටම් හි AP-1 පිටපත් කිරීමේ සාධකය DNA බන්ධන ක්‍රියාකාරිත්වයේ ඩොපමිනර්ජි නියාමනය. ස්නායු විද්යාව. 1996; 75: 757 - 75. [PubMed]
28. ඉම්පේ එස්, මැකෝර්කල් එස්ආර්, චා-මොල්ස්ටාඩ් එච්, ඩ්වේර් ජේඑම්, යොචුම් ජීඑස්, ලොක්කා ජේඑම්, මැක්වීනී එස්, ඩන් ජේ, මැන්ඩෙල් ජී, ගුඩ්මන් ආර්එච්. CREB රෙගුලානය නිර්වචනය කිරීම: පිටපත් කිරීමේ සාධක නියාමන කලාප පිළිබඳ ජානමය වශයෙන් පුළුල් විශ්ලේෂණයක්. කොටුව. 2004; 119: 1041 - 54. [PubMed]
29. ජොහැන්නෙසන් එම්, ඩෙල්ගාන්ඩි පාර්ලිමේන්තු මන්ත්‍රී මොයින්ස් යූ. ක්‍රෙබ් ක්‍රියාත්මක වන්නේ කුමක් ද? සෛල සං Sign ාව. 2004; 16: 1211 - 27. [PubMed]
30. ජොසලින් එස්ඒ, වැකරිනෝ එෆ්.ජේ. මීයන් තුළ කොන්දේසි සහිත ක්‍රියාකාරකම් වර්ධනය කිරීම සඳහා CCK (A) සහ CCK (B) විරුද්ධවාදීන්ගේ ප්‍රතිවිරුද්ධ බලපෑම්. බෙහව් ෆාමකොල්. 1996; 7: 505 - 512. [PubMed]
31. ජොසලින් එස්ඒ, ඩි ක්‍රිස්ටෝෆාරෝ ඒ, වැකරිනෝ එෆ්.ජේ. මීයන් තුළ කොකේන් විසින් නිපදවන ලද කොන්දේසි සහිත ක්‍රියාකාරකම් අත්පත් කර ගැනීම සඳහා CCK (A) ප්‍රතිග්‍රාහක මැදිහත්වීම සඳහා සාක්ෂි. මොළයේ රෙස්. 1997; 763: 93 - 102. [PubMed]
32. කෙල්ස් එම්බී, චෙන් ජේ, කාල්සන් ඩබ්ලිව්ඒ, කනිෂ් ,, විස්ලර් කේ, ගිල්ඩන් එල්, බෙක්මන් ඒඑම්, ස්ටෙෆන් සී, ෂැං වයි ජේ, මාරෝටි එල්, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, ටකාච් ටී, බරනාස්කාස් ජී, සුර්මියර් ඩීජේ, නෙව් ආර්එල්, ඩුමන් ආර්එස්, පික්චියෝ එම්ආර් , නෙස්ලර් ඊ.ජේ. මොළයේ ඇති ඩෙල්ටා ෆොස්බී නම් පිටපත් කිරීමේ සාධකය ප්‍රකාශ කිරීම කොකේන් වලට සංවේදීතාව පාලනය කරයි. සොබාදහම. 1999; 401: 272 - 6. [PubMed]
33. කුමාර් ඒ, චෝයි කේඑච්, රෙන්ටාල් ඩබ්ලිව්, සන්කෝවා එන්එම්, තියෝබෝල්ඩ් ඩීඊ, ට ru ං එච්ටී, රුසෝ එස්ජේ, ලැප්ලන්ට් කියු, සාසාකි ටීඑස්, විස්ලර් කේඑන්, නෙව් ආර්එල්, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, නෙස්ලර් ඊජේ. ක්‍රෝමැටින් ප්‍රතිනිර්මාණය යනු ස්ට්‍රයිටේටම් හි කොකේන් ප්‍රේරිත ප්ලාස්ටික් බව යටින් පවතින ප්‍රධාන යාන්ත්‍රණයකි. නියුරෝන. 2005; 48: 303 - 14. [PubMed]
34. මැට්සන් බීජේ, බොසර්ට් ජේඑම්, සිමන්ස් ඩීඊ, නොසාකි එන්, නාගර්කාර් ඩී, ක්‍රියුටර් ජේඩී, හෝප් බීටී. කොකේන්-සංවේදී මීයන්ගේ න්යෂ්ටික සමුච්චයයන්හි කොකේන්-ප්රේරිත CREB පොස්පරීකරණය සක්‍රීය කරනුයේ බාහිර සෛලීය සං signal ා ආශ්‍රිත කයිනස් වැඩි දියුණු කිරීමෙනි, නමුත් ප්‍රෝටීන් කයිනාස් ඒ. ජේ. 2005; 95: 1481 - 94. [PubMed]
35. මැක්ලන්ග් සීඒ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. CREB සහ DeltaFosB විසින් ජාන ප්‍රකාශනය සහ කොකේන් විපාකය නියාමනය කිරීම. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208 - 15. [PubMed]
36. මැක්ලන්ග් සී.ඒ., උලරි පී.ජී., පෙරොට්ටි එල්එල්, සෙකාරුවා V, බර්ටන් ඕ, නෙස්ලේ ඊ. ඩෙල්ටා ෆෝස්බී: මොළයේ දිගුකාලීන අනුවර්තනයක් සඳහා අණුක ස්විචයක්. Brain Res M Molin Res. 2004; 132: 146-54. [PubMed]
37. නෙස්ලර් ඊ.ජේ, කෙල්ස් එම්බී, චෙන් ජේ.එස්. Os ෆොස්බී: දිගුකාලීන ස්නායුක හා චර්යාත්මක ප්ලාස්ටික් වල අණුක මැදිහත්කරුවෙක්. මොළයේ රෙස්. 1999; 835: 10 - 17. [PubMed]
38. නෙස්ලර් ඊ.ජේ. ඇබ්බැහි වීම සඳහා පොදු අණුක මාර්ගයක් තිබේද? Nat Neurosci. 2005; 8: 1445 - 9. [PubMed]
39. නෙස්ලර් ඊ.ජේ. ඇබ්බැහි වීමේ පිටපත් කිරීමේ යාන්ත්‍රණ: ඩෙල්ටා ෆොස්බී හි භූමිකාව. ෆිලෝස් ට්‍රාන්ස් ආර් සොක් ලොන්ඩ් බී බයෝල් ස්කී. 2008; 363: 3245 - 55. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
40. පෙරෝටි එල් අයි, වීවර් ආර් ආර්, රොබිසන් බී, රෙන්ටාල් ඩබ්ලිව්, මේස් අයි, යස්දානි එස්, එල්මෝර් ආර්ජී, නැප් ඩීජේ, සෙලී ඩී, මාටින් බීආර්, සිම්-සෙලි එල්, බැච්ටෙල් ආර්කේ, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, නෙස්ලර් ඊජේ. අපයෝජන drugs ෂධ මගින් මොළයේ ඩෙල්ටා ෆොස්බී ප්‍රේරණයේ වෙනස් රටාවන්. උපාගම. 2008; 62: 358 - 69. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
41. රැන්ඩෝ ඕ.ජේ, චැං එච්.වයි. ක්‍රෝමටින් ව්‍යුහයේ ජානමය වශයෙන් පුළුල් අදහස්. Annu Rev Biochem. 2009; 78: 245 - 71. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
42. රෙන්ටාල් ඩබ්ලිව්, කාලේ ටීඑල්, ​​මේස් අයි, කොවිංටන් එච්ඊ, එක්ස්එන්එම්එක්එස්ඩී., ට ru වොන් එච්ටී, අලිබායි අයි, කුමාර් ඒ, මොන්ට්ගොමරි ආර්එල්, ඕල්සන් ඊඑන්, නෙස්ලර් ඊජේ. නිදන්ගත ඇම්ෆෙටමින් නිරාවරණයෙන් පසුව ඩෙල්ටා ෆොස්බී සී-ෆොස් ජානය එපජෙනෙටික් අවතක්සේරු කිරීම මැදිහත් කරයි. ජේ නියුරෝසි. 3; 2008: 28 - 7344. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
43. රෙන්ටාල් ඩබ්ලිව්, කුමාර් ඒ, ෂියාඕ ජී, විල්කින්සන් එම්, කොවිංටන් එච්ඊ, එක්ස්එන්එම්එක්එක්ස්, මේස් අයි, සික්ඩර් ඩී, රොබිසන් ඒජේ, ලා ප්ලාන්ට් කියු, ඩියට්ස් ඩීඑම්, රුසෝ එස් ජේ, වියාලූ වී, චක්‍රවර්ති එස්, කොඩඩෙක් ටී ජේ, ස්ටැක් ඒ, කබ්බාජ් එම්, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. කොකේන් විසින් ක්‍රෝමටින් නියාමනය පිළිබඳ ජානමය වශයෙන් විශ්ලේෂණය කිරීමෙන් සර්ටූයින් සඳහා භූමිකාවක් අනාවරණය වේ. නියුරෝන. 3; 2009: 62 - 335. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
44. රොට්සින්ගර් එස්, බුෂ් ඩීඊ, වැකරිනෝ එෆ්.ජේ. මෙසොලිම්බික් ඩොපමයින් ක්‍රියාකාරිත්වයේ කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් මොඩියුලේෂන්: අභිප්‍රේරිත හැසිරීම නියාමනය කිරීම. ෆාමකොල් ටොක්සිකෝල්. 2002; 91: 404 - 13. [PubMed]
45. රූක් අයි.ජේ, හැන්සන් ටීවී, නර්ලොව් සී, රෙෆෙල්ඩ් ජේඑෆ්, නීල්සන් එෆ්.සී. කොලෙස්ටිස්ටොකිනින් ජාන ප්‍රවර්ධකයේ විස්ථාපිත ඊ-පෙට්ටිය සහ සීඒඑම්පී / ටීපීඒ ප්‍රතිචාර දක්වන මූලද්‍රව්‍ය අතර සෘණ සහයෝගීතාව. FEBS Lett. 1999; 448: 15 - 8. [PubMed]
46. ෂෝ-ලච්මන් ටීඑස්, බැරට් එම්, වොලස් ටී, ගිල්ඩන් එල්, සැකරියෝ වී, ඉම්පේ එස්, ඩුමන් ආර්එස්, ස්ටෝම් ඩී, නෙස්ලර් ඊජේ. නල්ට්‍රෙක්සෝන්-අවිනිශ්චිත මෝෆින් ඉවත් කර ගැනීමේදී CRE- මැදිහත් වූ පිටපත් කිරීමේ කලාපීය හා සෛලීය සිතියම්කරණය. ජේ නියුරෝසි. 2002; 22: 3663 - 3672. [PubMed]
47. ෂෝ-ලච්මන් ටීඑස්, ඉම්පේ එස්, ස්ටෝම් ඩී, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. ඇම්ෆෙටමින් මගින් මූසික මොළයේ CRE- මැදිහත් වූ පිටපත් කිරීම නියාමනය කිරීම. උපාගම. 2003; 48: 10 - 7. [PubMed]
48. ෂෙන්ග් එම්, මැක්ෆැඩන් ජී, ග්‍රීන්බර්ග් එම්ඊ. පටල විස්ථාපනය හා කැල්සියම් මගින් CREB පිටපත් කිරීමේ සාධකය පොස්පරීකරණය කිරීම මගින් සී-ෆොස් පිටපත් කිරීම සිදු කරයි. නියුරෝන. 1990; 4: 571 - 82. [PubMed]
49. සන්කෝවා එන්.එම්, කුමාර් ඒ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. උග්‍ර හා නිදන්ගත විද්‍යුත් විච්ඡේදනයෙන් පසු මීයන් හිපොකැම්පස් හි ජාන ප්‍රවර්ධක කලාපවල හිස්ටෝන් වෙනස් කිරීම්. ජේ නියුරෝසි. 2004; 24: 5603 - 10. [PubMed]
50. උලරි පී.ජී., නෙස්ලර් ඊ.ජේ. Ser27 පොස්පරීකරණය මගින් ඩෙල්ටා ෆොස්බී පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාකාරකම් නියාමනය කිරීම. යුරේ ජේ නියුරෝසි. 2007; 25: 224 - 30. [PubMed]
51. වැකරිනෝ එෆ්.ජේ. මනෝවිශ්ලේෂණ විපාක සහ ඒ ආශ්‍රිත හැසිරීම් වල න්‍යෂ්ටික සමුච්චය ඩොපමයින්-සීසීකේ අන්තර්ක්‍රියා. නියුරෝසි බයෝබෙහව් පියතුමා 1992; 18: 207 - 14. [PubMed]
52. සැකරියෝ වී, බොලානෝස් සීඒ, සෙලී ඩී, තියෝබෝල්ඩ් ඩී, කැසිඩි එම්පී, කෙල්ස් එම්බී, ෂෝ-ලච්මන් ටී, බර්ටන් ඕ, සිම්-සෙලි එල්ජේ, ඩිලියොන් ආර්ජේ, කුමාර් ඒ, නෙස්ලර් ඊජේ. OsFosB: ΔFosB සඳහා අත්‍යවශ්‍ය කාර්යභාරයක් න්‍යෂ්ටිය තුළ මෝෆින් ක්‍රියාකාරිත්වයේ සමුච්චය වේ. නේචර් නියුරෝසි. 2006; 9: 205 - 11. [PubMed]