Endogénna neuroplasticita dopamínergných neurónov indukovaná opioidmi vo ventrálnej tegmentálnej oblasti ovplyvňuje prirodzenú a opiátovú odmenu (2014)

KOMENTÁRE: Štúdie spoločnosti DeltaFosB často citujeme všetkých, na ktoré sa zameriavame jadro accumbens (centrum odmien), a zistili, že sex do značnej miery zakazuje rovnaké mozgové mechanizmy ako pervitín a kokaín. Z medznej štúdie toho istého výskumného pracovníka (Zákon o prírodných a drogových odmenách o mechanizmoch spoločnej neurálnej plasticity s DFosB ako kľúčovým mediátorom (2013)):

Prírodné a drogové odmeny sa teda nielenže spájajú na rovnakej nervovej dráhe, ale aj na tých istých molekulárnych mediátoroch a pravdepodobne v rovnakých neurónoch v jadre Nucleus Accumbens ovplyvňujú motiváciu a „chcenie“ oboch druhov odmien.

Prijímanie: met, kokaín a pohlavie robia rovnaké základné veci rovnakých nervových buniek v centrách odmien (nucleus accumbens), bez ohľadu na to, čo môžu urobiť inak v inom mozgu. Toto rozobralo obvyklé rozprávanie, že prírodné odmeny a drogy sa líšia v mechanizmoch a účinkoch.

Táto nová štúdia skúmala, čo robí sex s VTA. VTA je miesto, kde začínajú nervové bunky produkujúce dopamín - a tie sa rozvetvujú do nucleus accumbens, frontálnej kôry a amygdaly. VTA je v zásade zdrojom (wellspring) väčšiny nášho dopamínu. Pozrite si tieto 2 obrázky okruhu odmien: Pic1, Pic2

Výskumníci zistili, že sex (vyvrcholenie) spôsobuje, že bunkové telieska vo VTA sa dočasne zmiznú (u mužov). Bunky a ich dendrity obsahujú šedú hmotu mozgu. To je presne to, čo závisí heroín na VTA (nie jednorazové užívanie heroínu, ale chronické užívanie heroínu). Všimnite si, že toto rovnaké zmrštenie telies VTA buniek vyskytuje u ľudí závislých od heroínu.

Sexuálne indukované zmršťovanie buniek trvá najmenej 7 dní. Zmeny vyvolané pohlavím sa vrátili na normálne dni v 30, ale výskumníci hodnotili len dni 1, 7 a 30.

Zmenšovanie bunkových tiel pri závislosti od heroínu vedie k nižšiemu dopamínu v nucleus accumbens - alebo čo nazývame desenzibilizácia. Vedci podávali potkanom morfín, aby vyhodnotili ich reakciu (po sexe), ale nič sa nestalo. Krysy majú zvyčajne morfín veľmi rady, ale tu boli dočasne znecitlivené. Stručne povedané, okruh odmien po ejakulácii u potkanov nereagoval na nízku hladinu heroínu. Vedci predpokladali, že na vyvolanie „normálnej“ reakcie potkana budú potrebné vyššie dávky.

Zhrnutie - Sex (dočasne) robí vo VTA presne to isté ako závislosť na heroíne: zmenšenie teliesok nervových buniek produkujúcich dopamín. To vedie k nižšiemu dopamínu v centre odmien a menšej reakcii na omamné látky - a zotavenie mozgu potkanov trvá najmenej 7 dní.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36, dva: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

džbány KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

abstraktné

Prirodzená odmena a drogy zneužívania sa zbiehajú na mezolimbickej dráhe a aktivujú spoločný mechanizmus neurálnej plasticity v nucleus accumbens. Chronická expozícia opiátov indukuje plasticitu v dopaminergných neurónoch ventrálnej tegmentálnej oblasti (VTA), ktorá reguluje toleranciu morfínovej odmeny.

Tu testujeme hypotézy, že párenie indukované uvoľňovanie endogénnych opioidov vo VTA spôsobuje morfologické zmeny VTA dopamínových buniek u samcov potkanov, ktoré zase regulujú dlhodobú expresiu skúsenosti vyvolaného posilnenia sexuálneho správania.

Po prvé, sexuálna skúsenosť znížila počet VTA dopamínových sómov 1 a 7 dní, ale nie 30 dní po poslednom párení. Tento účinok bol blokovaný naloxónom pred každým zasadením; teda plasticita dopamínových buniek VTA bola závislá od účinku endogénnych opioidov.

Na druhej strane plasticita VTA bola spojená so zmenenou opiátovou odmenou, pretože sexuálne skúsení muži nevytvárali kondicionovanú preferenciu pre 0.5 mg / kg morfínu.

Ďalej sa stanovilo, či endogénny opiátový účinok sprostredkuje sexuálnu odmenu a pamäť u samcov potkanov liečených naloxónom počas párenia, či už systémovo alebo intra-VTA. Naloxón nezabránil počiatočnému zážitku vyvolanému uľahčeniu sexuálneho správania počas opakovaných párovacích relácií alebo podmienenej preferencie pre párenie. Avšak liečba naloxónom oslabila dlhodobejšie vyjadrenie skúsenosti vyvolaného uľahčenia sexuálneho správania a neurónovej aktivácie v mezolimbických oblastiach indukovaných podmienenými podmienkami spojenými s párovaním.

Tieto údaje spolu dokazujú, že endogénne opioidy počas párenia indukujú neurálnu plasticitu v dopamínových neurónoch VTA, ktoré sa javia ako kritické pre morfínovú odmenu a dlhodobú pamäť pre prirodzené správanie odmien.

 

úvod

Prirodzené odmeňovacie správanie je sprostredkované mezokortikolimbickým systémom (Meisel a Mullins, 2006; Hoebel a kol., 2009; Frohmader a spol., 2010a; Pitchers a kol., 2010a; Young a kol., 2011; Blum a spol., 2012). Zneužívajúce drogy spôsobujú nervové zmeny v tomto systéme, ktoré zase prispievajú k vývoju a prejavu zneužívania návykových látok (Hyman a kol., 2006; Nestler, 2012). Predtým sme zistili, že skúsenosti s prirodzeným odmeňovaním, tj sexuálnymi skúsenosťami u samcov potkanov, tiež spôsobujú neurálnu plasticitu v nucleus accumbens (NAc), vrátane zvýšených dendritických stoniek (Pitchers a kol., 2010a) a deltaFosB (Pitchers a kol., 2013). Na druhej strane táto plasticita vyvolaná pohlavím je rozhodujúca pre účinky sexuálnej skúsenosti na následné párenie, prejavujúce sa ako uľahčenie iniciácie a výkonu sexuálneho správania (Pitchers a kol., 2010b, 2012, 2013). Okrem toho sex skúsenosti menia reakciu na psychostimulanty, vrátane senzibilizácie pohybovej aktivity a zvýšenej odmeny (Frohmader a spol., 2010a; Pitchers a kol., 2010a, 2013).

NAc je jeden cieľový cieľ dopaminergných neurónov vo ventrálnej tegmentálnej oblasti (VTA). VPA dopamínové neuróny sa aktivujú počas párovania a po vystavení podmieneným podnetom predpovedajúcim sexuálnu odmenu (Balfour a spol., 2004; Frohmader a spol., 2010a) prostredníctvom endogénneho opioidného peptidu (EOP) viažuceho sa na μ-opioidných receptoroch (MOR; Matthews a nemecky, 1984; Johnson a Sever, 1992; Klitenick a kol., 1992; Ikemoto a spol., 1997; Balfour a spol., 2004). Preto expozícia podmieneným znameniam predikujúcim sexuálne správanie spôsobuje uvoľnenie aktivácie EOP a VTA dopamínových buniek, čo uľahčuje sexuálnu motiváciu (Mitchell a Stewart, 1990; van Furth a kol., 1995; van Furth a van Ree, 1996) a uvoľňovanie dopamínu v NAc (Fiorino a kol., 1997).

Opakované vystavenie exogénnym opiátom spôsobuje morfologické zmeny VTA (Mazei-Robison a kol., 2011; Mazei-Robison a Nestler, 2012), zníženie soma veľkosti dopamínových neurónov VTA (Sklair-Tavron a kol., 1996; Spiga a kol., 2003; Chu a kol., 2007; Russo a kol., 2007; Mazei-Robison a kol., 2011), znížené hladiny neurofilamentových proteínov (Beitner-Johnson a kol., 1992), zvýšená excitabilita buniek dopamínu a znížená axoplazmatická doprava a dopamínový výstup na NAc (Beitner-Johnson a kol., 1992; Mazei-Robison a kol., 2011). Tieto zmeny VTA dopamínových neurónov spôsobujú toleranciu na odmeňovanie morfínu a sú prechodné, pretože sa rozptýlia počas jedného mesiaca abstinencie lieku (Russo a kol., 2007). V súčasnosti nie je jasné, či plasticita v neurónoch dopamínových VTA je jedinečná pre účinky opiátov, alebo ak sú tiež produkované uvoľňovaním EOP počas prirodzene odmeňujúceho správania.

Tu testujeme hypotézu, že prirodzené odmeňovacie skúsenosti spôsobujú neuroplasticitu podobnú tej, ktorá je spôsobená opiátmi, a teda, že opiáty konvergujú na mechanizmus plasticity, ktorý je rozhodujúci pre prirodzené odmeňovanie a odmeňovanie. Testujeme, či sexuálne skúsenosti s samcami potkanov znižujú veľkosť soma v dopamínových neurónoch VTA prostredníctvom procesu závislého na EOP akcii vo VTA. Ďalej skúmame, či zmeny EOP indukované dopamínovými neurónmi VTA sú spojené s posilnením prirodzeného odmeňovacieho správania a priradením motivácie k podnetom spojeným s prirodzenou odmenou a zároveň spôsobujú krížovú toleranciu morfínovej odmeny.

Materiály a metódy

zver

Dospelé samce potkanov Sprague-Dawley (200-225 g) sa získali od Charles River a umiestnili sa v pároch v umelo osvetlených miestnostiach v cykle 12 h svetlo / tma vo všetkých pokusoch (svetlá boli vypnuté pri 10: 00 AM s výnimkou experimentu s morfínovou toleranciou , zhasne pri 5: 00 PM). Potraviny a voda boli k dispozícii podľa chuti okrem testovania správania. Stimulované samice boli ovariektomizované a subkutánne implantované kapsulami 5% 17-β-estradiolbenzoátu SILASTIC (vnútorný priemer 1.98 mm, dĺžka 0.5 cm, Dow-Corning). Injekcie progesterónu (subkutánne, 500 μg v 0.1 ml sezamového oleja) podali 3-6 h pred testovaním na vyvolanie sexuálnej vnímavosti. Všetky postupy schválili výbory pre starostlivosť o zvieratá University of Western Ontario a University of Michigan a boli v súlade s usmerneniami kanadskej rady pre starostlivosť o zvieratá a usmerneniami národných inštitútov v oblasti zdravia, ktoré zahŕňajú výskumy na stavovcoch.

Časový priebeh zmien VTA dopamínového soma

Denné relácie párenia.

Na štúdium časového priebehu zmien vo veľkosti dopamínového neuronového soma vo VTA boli pokusné a naivné zvieratá zabité na 1, 7 alebo 31 d (n = 5-8 za skupinu) po poslednom dni párenia (skúseného) alebo manipulácie (naivný). Sexuálne skúsené skupiny sa počas záverečného párenia stretli s sexuálnym správaním, ako aj celkový počet ejakulácií počas piatich sedení (priemer 5 pre každú skupinu) a nelíšili sa v žiadnom parametri sexuálneho správania.

Zlučovacie relácie.

Sexuálne naivní muži boli zaradení do jednej z dvoch experimentálnych podmienok: sexuálne naivný alebo sexuálne skúsený. Sexuálne skúsené zvieratá sa nechali päťkrát spojiť po sebe nasledujúcich dňoch s receptami v pravouhlých testovacích klietkach (60 × 45 × 50 cm) až do zobrazenia ejakulácie alebo až do 1 h (podľa toho, čo nastane skôr). Klietky sa dôkladne vyčistili roztokom 70% etanolu a medzi párovacie sedenia sa pridala čerstvá podstielka. Sexuálne správanie bolo vykonané počas tmavej fázy (2-6 h po nástupe tmy). Iba zvieratá, ktoré sa ejakulovali počas najmenej štyroch z piatich párových sedení, boli považované za sexuálne skúsené a zaradené do pokusov. Zaznamenali sa všetky párové relácie a zaznamenalo sa sexuálne správanie. Počet IM (intromissions), latencia pripevnenia (ML, čas od zavedenia ženy do prvej pomoci), latencia intromizácie (IL, čas od zavedenia ženy do prvej intromission) a laaktívnosť ejakulácie (EL; čas od prvého intromisie po ejakuláciu) boli zaznamenané (Agmo, 1997). Naivné zvieratá boli umiestnené do čistej testovacej klietky pre 1 h súčasne s sexuálne skúsenými mužmi, ktorí sa párili v tej istej miestnosti, takže boli vystavené vzdialeným ženským pachom a podobným stupňom narušenia a novinkou životného prostredia ako skúsení muži.

Označenie imunofluorescencie.

Zvieratá boli hlboko anestetizované s použitím pentobarbitalu sodného (270 mg / kg, ip) a perfúziou intrakardiálne s 50 ml fyziologického roztoku 0.9% a potom s 500 ml paraformaldehydu 4% v pufri 0.1 m fosfát sodného (PB). Mozgy boli odstránené a postfixované za 1 h pri izbovej teplote (RT) v rovnakom fixačnom prostriedku a potom ponorené do 20% sacharózy a 0.01% azidu sodného v 0.1 m PB na skladovanie pri 4 ° C. Koronálne rezy boli rezané na 35 μm na mraziacom mikrotóme (H400R, Microm) a boli zhromaždené v štyroch paralelných sériách v roztoku kryoprotektantu (30% sacharózy, 30% etylénglykolu v 0.1 m PB) a potom uložené pri 20 ° C. Všetky inkubácie sa uskutočnili pri laboratórnej teplote s jemným miešaním a bohatým prepláchnutím s 0.1m PBS, pH 7.35, medzi inkubáciami. Časti boli vystavené pôsobeniu 1% H2O2 pre 10 min, aby sa zničili endogénne peroxidázy, potom sa zablokovali v inkubačnom roztoku 1 h (PBS +: PBS obsahujúci 0.4% Triton X-100, Sigma-Aldrich) a 0.1% hovädzí sérový albumín (Jackson Immuno Research Laboratories). Potom boli rezy inkubované cez noc pri RT v myšej tyrozínhydroxylázovej (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Po inkubácii primárnych protilátok boli sekcie inkubované v kozie anti-myšej protilátke konjugovanej s AlexaFluor 555 (1: 100, Invitrogen, Eugene, OR) pre 30 min. Nakoniec boli rezy premyté 0.1 m PB, namontované na sklenených sklíčkach Superfrost Plus, sušené a pokryté gelatolom obsahujúcim protizávadzujúci prostriedok 1,4-diazabicyklo (2,2) oktán (DABCO, 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Analýza údajov: veľkosť neurónu soma.

Obrázky TH-imunoreaktívnych (IR) neurónov vo VTA boli odobraté pri zväčšení 40 × pri troch stupňoch až po kaudálne hladiny (Balfour a spol., 2004). Medzi bunkami na rôznych úrovniach neboli zistené žiadne rozdiely. Veľkosť soma TH-IR neurónov sa analyzovala pomocou ImageJ (National Institutes of Health). Priemerná plocha, obvod a kruhovitosť sa merali podľa popisu Sklair-Tavron a kol. (1996), Bola analyzovaná priemerná hodnota 25 buniek na jedno zviera (kombinované hladiny 3 VTA) a boli zahrnuté iba bunky s jasne viditeľným jadrom. Pre každé zviera sa vypočítali priemerné plochy, obvod a kruhovitosť. Pre štatistickú analýzu bola použitá dvojcestná ANOVA [faktory: sexuálna skúsenosť (sex skúsený alebo naivný pohlavie) a čas (1, 7 alebo 31 d) post hoc porovnania pomocou metódy Holm-Sidak s významovou úrovňou 0.05.

V neprítomnosti zmeny dopamínu

Biweekly párenie zasadnutí.

Aby sa otestovalo, či sa na zníženie veľkosti neurónového soma TH-IR vyžaduje sexuálna skúsenosť počas denného párenia, boli analyzované neuróny dopamínu VTA zo zvierat, ktoré sa párali počas piatich dvojtýždňových relácií. Párové stretnutia boli opísané vyššie, ale počas obdobia 2.5 týždňov. Mozgy boli zhromaždené 7 d po poslednom párení alebo manipulácii.

Označenie imunoperoxidázy.

Okrem toho bolo testované, či použitie citlivých techník farbenia s imunoperoxidázou a chromogénnou detekciou by tiež umožnilo vizualizáciu zmien veľkosti sómu TH-IR. Perfúzia a spracovanie tkaniva bolo vykonané spôsobom opísaným vyššie. Po liečbe 1% H2O2 a PBS +, sekcie boli inkubované cez noc pri teplote miestnosti v myšej polyklonálnej tyrozínhydroxylázovej (TH) protilátke (1: 20 000; Millipore). Po inkubácii primárnych protilátok sa sekcie inkubovali s kozím anti-králičím IgG konjugovaným s biotínom (1 h, 1: 500 v PBS +, Vector Laboratories), avidín-biotín-chrenová peroxidáza (1 h, ABC elita, 1: 1 000 v PBS (3,3 min, 10%, DAB, Sigma-Aldrich) zosilnený síranom nikelnatým v (0.02% v 0.02 m PB) s peroxidom vodíka (0.1%). Segmenty boli dôkladne premyté v 0.015 m PB na ukončenie reakcie a namontované na kódované sklíčka Superfrost plus (Fisher) s 0.1% želatinou v ddH2O. Po dehydratácii boli všetky sklíčka prekryté krytom DPX (dibutylftalát xylén, Sigma-Aldrich).

Analýza údajov: veľkosť neurónu soma.

Bunky TH-IR boli analyzované na plochu, obvod a kruhovitosť, ako je opísané vyššie. Okrem toho sa analyzovali TH-IR bunky v substantia nigra (SN), v rovnakých častiach, ktoré sa použili na analýzu VTA TH-IR buniek. Nakoniec, po analýze VTA a SN TH-IR buniek, boli rezy kontrastne farbené s použitím krezoly fialovej a bunky, ktoré nie sú TH-IR, boli analyzované s použitím rovnakých metód, ako sú opísané vyššie. Rozdiely medzi naivnými a skúsenými skupinami sa porovnávali pomocou dvojstranných Studentov t testy s významnou úrovňou 0.05.

Účinky naloxónu na zmenšenie veľkosti dopamínového soma indukované skúsenosťami

Na určenie toho, či MOR zohrávali úlohu v zmenách dopamínového neurónu soma indukovaných sexuálnymi skúsenosťami, boli MOR počas sexuálneho správania zablokované. Polovica zvierat získala sexuálne skúsenosti, zatiaľ čo druhá polovica bola zaobchádzaná, ale zostala sexuálne naivná. Sexuálne skúseným zvieratám sa umožnilo viazať sa na 5 po sebe idúcich dňoch. V sexuálne skúsených a naivných skupinách boli zvieratá pred zavedením samice (skúsených) alebo pred manipuláciou liečené nesolektívnym antagonistom MOR naloxónom (10 mg / kg, sc, Sigma-Aldrich, rozpustené v fyziologickom roztoku 0.9%) alebo soľným roztokom 30 min (naivné); čím vznikli štyri experimentálne skupiny: sexuálne naivný soľný roztok (Naive Sal), sexuálne naivný naloxón (Naive NLX), sexuálne skúsený soľný salón (Exp Sal) a sexuálne skúsený naloxón (Exp NLX; n = 5-8 v skupine). Liečba naloxónom nemala štatisticky významné účinky na žiadny parameter sexuálneho správania, na ktorejkoľvek skupine liečenej 5 d a naloxónom a soľným roztokom boli v sexuálnych skúsenostiach totožné. Všetky zvieratá boli usmrtené pomocou intracardiálnej perfúzie 7 d po poslednom párení. Segmentácia, imunohistochémia a analýza údajov (dvojcestné ANOVA, faktory: sexuálne skúsenosti a liečebná liečba) pre veľkosť dopamínového soma sa uskutočnili tak, ako je opísané vyššie.

Morphine podmienené miesto preferencie

Experimentálny dizajn.

skôr, Russo a kol. (2007) ukázal, že chronický morfín indukuje toleranciu k odmene morfínu. Keďže sexuálne skúsenosti a chronický morfín spôsobujú podobné zníženie soma veľkosti dopamínových neurónov vo VTA, funkčná relevancia sexuálne indukovaných morfologických zmien bola testovaná na morfínovú odmenu. Sexuálne skúsené a naivné zvieratá boli rozdelené do šiestich rôznych experimentálnych skupín (n = 9-13 na skupinu) na základe sexuálneho správania (sexuálne naivného alebo skúseného) a dávky morfínu (0.5, 5.0 alebo 10.0 mg / kg, ip) a boli testované na preferenciu podmieneného miesta morfínu (CPP).

Morfín-CPP.

Kondicionovanie sa uskutočnilo po poslednom párení na 1 d a skupiny boli zosúladené na sexuálnu výkonnosť počas posledného párenia. Použitá paradigma CPP pozostávala z predbežného testovania, dní kondicionovania a následného testovania a prístrojov Tenk a kol. (2009). Stručne, prístroj CPP (MED Associates) pozostával z troch odlišných komôr. Medzi každou reláciou sa prístroj dôkladne vyčistil 70% roztokom etanolu, aby sa minimalizovali pretrvávajúce čuchové stopy. Na stanovenie individuálnych preferencií sa uskutočnil predbežný test, počas ktorého sa zvieratám umožnil voľný prístup k celému prístroju na 15 minút. Ako skupina zvieratá nevykazovali významnú preferenciu pre konkrétnu komoru, ale každé jednotlivé zviera malo miernu počiatočnú preferenciu. Potkany, ktoré vykazovali významnú preferenciu pre jednu z komôr (rozdiel> 200 s medzi časom stráveným v každej z komôr; <5% zvierat) počas pretestu, boli zo štúdie vylúčené. Počas kondicionovania sa liečivo spárovalo s pôvodne preferovanou alebo nepreferovanou komorou pomocou nezaujatej paradigmy (Tzschentke, 2007) a zvieratá boli uzavreté do komôr pre 30 min. Zvieratám sa ráno podávala fyziologický roztok (ip) (9: 00 AM na 12: 00 PM) a bola uzavretá do komory so slanou páskou (kontrola). Popoludní (1: 00-4: 00 PM) boli zvieratá injikované morfínom (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg alebo 10.0 mg / kg, morfínsulfát rozpustený v fyziologickom roztoku 0.9% Johnson Matthey) do morfínovej párovacej komory. Zvieratá boli podrobené dvom kondicionačným dňom. Nasledujúci deň (3 d po poslednom dni párenia) sa vykonal post-test, procedurálne identický s predbežným testom. Pre štatistickú analýzu bol čas strávený v komore spájanej s morfínom v priebehu testu porovnaný s časom stráveným v saline spárovanej komore počas post-testu pre sexuálne naivné alebo skúsených mužov v rámci každej dávky použitím párovaného t test. p <0.05 sa považovalo za štatisticky významné. Ďalšie kontrolné skupiny sexuálne naivných a skúsených zvierat dostávali fyziologický roztok v párových aj nepárových komorách, aby slúžili ako negatívne kontroly. Ani u jednej skupiny neboli zistené žiadne rozdiely v čase strávenom medzi komorami.

Účinky systémového naloxónu na skúsenosti vyvolané uľahčenie sexuálneho správania

Experimentálny dizajn.

Sexuálne skúsenosti vedú k uľahčeniu sexuálneho správania, ktoré sa udržiava minimálne počas mesiaca 1 (Pitchers a kol., 2012). Aby sa analyzoval účinok blokovania MOR na skúsenosti vyvolané uľahčenie sexuálneho správania, sexuálne skúsené zvieratá dostali buď naloxón alebo fyziologický roztok pred piatimi po sebe idúcimi párovými sedeniami (n = 12 každý), ako je opísané vyššie. Jeden týždeň po poslednom párení sa uskutočnil konečný párovací test, počas ktorého sa všetky zvieratá mohli nechať spájať až do jednej ejakulácie alebo do 1 h. Pred oplodnením v poslednom dni testovania nebolo podané žiadne ošetrenie naloxónom alebo soľným roztokom. Parametre párenia boli porovnávané s cieľom určiť, či naloxón ovplyvnil buď sexuálne skúsenosti indukované uľahčenie párenia (deň 1 vs deň 5) alebo udržanie tejto facilitácie (deň 5 verzus test) s použitím dvojsmernej ANOVA [faktory: liečba (fyziologický roztok proti naloxónu ) a deň (deň 1, deň 5 alebo test)] a metódu Holm-Sidak pre post hoc Porovnanie. Pre všetky štatistické testy, p <0.05 sa považovalo za štatisticky významné.

Ďalšie kontrolné pokusy

Systémový naloxón v deň testovania.

Aby sme preukázali, že zmenené sexuálne správanie na konečnom párení nebolo spôsobené absenciou naloxónu, sme v poslednom párežícom dni podali buď naloxón alebo soľný roztok zvieratám, ktoré dostali párenie spárované s naloxónom, zatiaľ čo získali sexuálne skúsenosti. Konkrétne, všetky zvieratá dostali injekciu naloxonu (10 mg / kg, sc) 30 min pred párením na jednu ejakuláciu počas 5 po sebe idúcich dní. V deň testu 7 d neskôr približne polovica zvierat dostala injekciu naloxónu (10 mg / kg, n = 7) alebo soľným roztokom (n = 6) 30 min pred zavedením vnímavého samice. Bolo pozorované a zaznamenané sexuálne správanie. Parametre párenia boli porovnávané s cieľom určiť, či naloxón ovplyvnil buď sexuálne skúsenosti indukované uľahčenie párenia (deň 1 vs deň 5) alebo udržanie tejto facilitácie (deň 5 verzus test) s použitím dvojsmernej ANOVA [faktory: liečba (fyziologický roztok proti naloxónu ) a deň (deň 1, deň 5 alebo test)] a metódu Holm-Sidak pre post hoc Porovnanie. Pre všetky štatistické testy, p <5% sa považovalo za štatisticky významné.

Účinky naloxonu na krátkodobé vyjadrenie uľahčeného sexuálneho správania.

Účinky liečby naloxónom (10 mg / kg, sc) počas párenia sa testovali na následnom sexuálnom správaní počas konečného párovacieho testovacieho dňa, pri ktorom sa uskutočnil iba 1 d po poslednom párení (fyziologický roztok, n = 5; naloxón, n = 4).

Systematické predbežné liečenie naloxónom.

Aby sa zistilo, či opakovaná liečba samotným naloxónom spôsobuje poškodenie sexuálneho správania 7 d po poslednej liečbe, zvieratá, ktoré už nie sú na počiatku liečby, dostali päť denných injekcií naloxónu (10 mg / kg, sc) alebo fyziologického roztoku v nasledujúcich dňoch pred párovým testom 7 d po konečnom naloxóne alebo injekcia soľným roztokom. V tomto poslednom dni testovania zvieratá nedostali žiadnu injekciu. Sexuálne správanie sa pozorovalo a zaznamenávalo, ako je opísané vyššie. Parametre párenia boli porovnané medzi skupinami, ktoré nepárili t Testy. Pre všetky štatistické testy, p <5% sa považovalo za štatisticky významné.

Systémový naloxón a odmena za sex.

Jednou z možností tlmiacich účinkov naloxónu na udržanie uľahčeného sexuálneho správania je to, že naloxón blokuje prospešné účinky sexuálneho správania. Na otestovanie tejto možnosti sa paradigma CPP uskutočnila pre sexuálne správanie bezprostredne po injekcii naloxónu alebo fyziologického roztoku u mužov bez predchádzajúcich sexuálnych skúseností. Postup CPP bol podobný postupu opísanému vyššie pre morfín-CPP, vrátane predčasných, kondicionovacích dní a post-testu.

Pohlavné správanie sa spárovalo s pôvodne nepredanou komorou. Vyrovnaným spôsobom každé zviera dostalo injekciu naloxónu (n = 12) alebo soľným roztokom (n = 11) 30 min pred prijatím prístupu k recepčnej ženici. Priemerná dĺžka relácie párovania bola ~ 13 min. Jednu minútu po ejakulácii sa zviera umiestnilo do párovacej komory pre 30 min. V druhom dni kondicionovania sa zvieratám podala injekcia buď naloxónu alebo fyziologického roztoku (podľa toho, čo dostali pred párením) a boli umiestnené do nepárového priestoru pre 30 min. Ďalej sa vykonal po-test, identický s predbežným testom. Na určenie preferencie komory sa porovnal čas strávený v spárovanej komore počas predbežného testu a po testovaní. Pre štatistické analýzy spárované t testy boli použité na porovnanie hodnôt preferencií a rozdielov a času v spárovanej komore počas predbežného a následného testu, aby sa zistilo, či bola vytvorená významná CPP pre sexuálne správanie. p <0.05 sa považovalo za významné.

Účinky intra-VTA naloxónu na skúsenosti vyvolané uľahčenie sexuálneho správania

Experimentálny dizajn.

Aby sa zistilo, či činnosť EOP špecificky vo VTA bola zodpovedná za účinky zmien sexuálneho správania vyvolaných sexuálnymi skúsenosťami, zvieratá podstúpili lokálnu infúziu naloxónu alebo fyziologického roztoku do VTA pred piatimi dennými reláciami. Behaviorálna paradigma bola podobná systémovému experimentu s naloxónom. Sexuálne skúsené zvieratá sa mohli počas 5 po sebe idúcich dní združiť do jednej ejakulácie alebo do 1 h. Pätnásť minút pred zavedením recepčnej samice dostali samce potkanov dvojstranné infúzie buď naloxónu (10 ug / ul na hemisféru, objem 0.5, rozpustený v soľnom roztoku 0.9%) alebo fyziologický roztok (0.5 μl na hemisféru). Bilaterálne mikroinjekcie boli podávané pri prietokovej rýchlosti 0.5 μl / min v priebehu min. Intervalu 1, po ktorom nasledovala ďalšia 1 min, pričom injekčná kanyla zostala na mieste pre difúziu. Injekčná kanyla bola potom nahradená figurínou kanyly a prachovým viečkom. Jeden týždeň po poslednom dni párenia (deň testovania) sa všetky zvieratá znova spojili s ejakuláciou bez infúzie naloxónu alebo soľného roztoku. Obrázok 3A načrtáva experimentálny dizajn. Analýza údajov bola vykonaná tak, ako je opísané v systémovom experimente s naloxónom.

Operácia kanyly.

Samce potkanov sa anestetizovali intraperitoneálnou injekciou (0.1 ml / kg) ketamínu (0.87 mg / ml) a xylazínom (0.13 mg / ml) a umiestnili sa do stereotaxického zariadenia (Kopf Instruments). Bilaterálne vodiace kanyly 21-gauge (Plastics One) boli spustené cez malé otvory v lebke do mozgu smerom k VTA pri -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML z bregma a -7.8 mm DV z vrcholu lebky podľa Paxinos a Watson (2013), Kanuly boli zabezpečené zubným akrylátom, ktorý priľnul na tri skrutky zasunuté do lebky. Zvieratám sa podával týždenný čas zotavenia v týždni 2 a každý deň sa zaobchádzali s návykmi na manipuláciu a injekčné postupy používané počas testovania správania.

Overenie umiestnenia kanyly.

Umiestnenie kanyly sa skúmalo s použitím imunologickej farby TH na potvrdenie, že VTA bola presne cielená. V analýzach boli zahrnuté iba zvieratá s riadnym umiestnením (konečná veľkosť skupín: skúsený soľný roztok n = 8; skúseného naloxónu n = 6). Tri ďalšie zvieratá, ktoré dostali intra-VTA naloxónové injekcie namierené mimo VTA, boli zoskupené do skupiny "vynechanej" injekcie. Vynechaná skupina bola analyzovaná oddelene, aby slúžila ako anatomické kontroly a Mann-Whitney U test sa použil na porovnanie správania v poslednom dni skúšky s naloxónom a so skúsenými mužmi liečenými soľným roztokom.

Expresívna expresia pERK indukovaná kontextuálnymi kukuricami

Experimentálny dizajn.

Expozícia klebe, v ktorej muži nadobudli skúsenosti s párením, ukázali, že spôsobujú aktiváciu MOR vo VTA a neurálnu aktivitu vo VTA a NAc (Balfour a spol., 2004). Preto párenie prostredia slúži ako podmienená tága predpovedajúca sexuálnu odmenu. V súčasnej štúdii sa testovalo, či je aktivácia MOR počas sexuálnej skúsenosti potrebná pre následnú podmienenú neurónovú aktiváciu indukovanú čiarou. Naloxón alebo fyziologický roztok sa podával systemicky (ip) 30 min pred umiestnením do párovacej arény a zavedením vnímavého samice na párenie (skúsený) alebo pred kontrolnou manipuláciou, ktorá pozostávala z umiestnenia do manipulačnej klietky bez prezentácie samice životné prostredie, naivný). Preto boli vytvorené štyri experimentálne skupiny: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​a Exp NLX. Jeden týždeň po konečnom párení, polovica zvierat v každej skupine bola vystavená párenej klietke (Exp males: pohlavne viazané podmienené podnety) alebo manipulačné klietky (naivné samce: nezodpovedajúce / neutrálne náznaky), zatiaľ čo druhá polovica nebola vystavená akékoľvek znamenia a miesto toho zostali v domácich klietkach (na určenie východiskového pERK expresie). Táto experimentálna paradigma vytvorila skupiny 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 každý okrem Naive NLX-No Cue, n = 3). Zvieratá boli perfundované 10-15 min po expozícii. Kontrolné zvieratá sa odstránili z ich domácich klietok a súčasne sa perfundovali.

Imunohistochémia.

Segmentácia a imunohistochémia sa uskutočnili tak, ako je opísané vyššie. V tomto prípade sme použili králičie polyklonálne protilátky proti p42 a p44 MAP kinázám ERK1 a ERK2 (pERK, 1: 4 000, Cell Signaling Technology). Primárna protilátka bola široko charakterizovaná v literatúre (Roux a Blenis, 2004; Murphy a Blenis, 2006; Frohmader a spol., 2010b). Navyše, vynechanie primárnej protilátky zabránilo všetkej imunoreaktivite a Western blot analýza mozgového tkaniva potkana odhalila dva pásy pri príslušných molekulových hmotnostiach.

Analýza dát.

pERK-imunoreaktívne (-IR) bunky boli spočítané v mnohých oblastiach mozgu s použitím kamery na kreslenie lucidovej kamery pripojenej k Leica DMRD mikroskop: NAc [jadro (C) a škrupina (S); 400 × 600 μm; mediálna prefrontálna kôra; MPFC; predná cingulová oblasť (ACA); prelimbická kôra (PL); infralimbická kôra (IL); 600 × 800 μm], caudate-putamen (CP, 800 × 800 μm) a bazolaterálna amygdala (BLA, 900 × 1200 μm; Balfour a spol., 2004; Frohmader a spol., 2010b; Pitchers a kol., 2010b). Dve rezy sa počítali na oblasť mozgu a počet buniek v štandardných oblastiach analýz sa potom vypočítal ako počet buniek na mm2, Obidva počty boli spriemerované na zviera na výpočet skupinových prostriedkov. Skupinové priemery v rámci sexuálne skúsených alebo naivných skupín sa porovnávali s použitím obojsmernej ANOVA [faktory: liečebná liečba (NLX alebo Sal) a tága (tága alebo žiadna tága)], post hoc porovnania s použitím súhrnných testov Holm-Sidak alebo Mann-Whitney, kde je to vhodné s významnou úrovňou p <0.05. V škrupine NAc sexuálne skúsených zvierat bol silný trend k významnosti faktorov, a preto sa uskutočňovalo párové porovnanie iba na porovnanie skupín so soľným roztokom (Sal-No Cue) a so soľným tágom (Sal + Cue).

Snímky.

Digitálne snímky boli zachytené pomocou CCD kamery (Macrofire, Optronics) pripojenej k a Leica mikroskop (DM5000B) s pevnými nastaveniami fotoaparátu. Obrázky boli importované do softvéru Adobe Photoshop 9.0. Obrázky sa nijako nezmení, s výnimkou úprav jasu a kontrastu.

výsledky

Zmeny vyvolané sexuálnymi skúsenosťami v bunkách dopamínu VTA

Sexuálne skúsenosti viedli k zníženiu veľkosti VTA dopamínového soma (Obr. 1A-C). Sexuálne skúsenosti významne redukovali plochu a obvod sómu VTA TH-IR buniek (plocha: F(1,31) = 23.068, p <0.001; obvod, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Vyskytol sa aj hlavný významný vplyv času (oblasť: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; obvod, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) a významná interakcia medzi skúsenosťou a časom (oblasť: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; obvod, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Z dvojice porovnaní sa zistilo, že oblasť a obvod TH-IR buniek bol po poslednom dni sexuálneho správania u sexuálne skúsených zvierat významne znížený 1 a 7 d v porovnaní s sexuálne naivnými kontrolami [Obr. 1B, plocha: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 dní); C, obvod: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Účinok sexuálneho správania sa rozptýlil, keď nasledovalo obdobie abstinencie odmeny, keď sa veľkosť soma neurónov TH-IR vrátila na východiskovú hodnotu 31 dní po poslednom párení (Obr. 1B, plocha: p = 0.798; C, obvod: p = 0.785). Zmeny vyvolané sexuálnymi skúsenosťami neboli v žiadnom časovom bode zaznamenané v kruhovom stave (Obr. 1D). Zníženie veľkosti dopamínového soma VTA nebolo závislé na každodenných párovaniach, keďže skúsenosti z párenia počas piatich dvojtýždňových párovacích relácií mali tiež zníženú veľkosť VTA dopamínového sómu (Obr. 2A,B, E-H, plocha: p = 0.004; obvod: p <0.001). Naproti tomu skúsenosť so sexom neovplyvnila veľkosť somy TH-IR v substantia nigra (Obr. 2C, I-J, plocha: p = 0.13; obvod: p = 0.16) ani zmenené veľkosti soma v blízkych neurónoch ne-TH-IR (Obr. 2D, E-H, plocha: p = 0.46; obvod: p = 0.45).

Obrázok 1. 

Endogénne zmeny veľkosti soma indukovanej opioidmi v dopamínových neurónoch VTA. A, Reprezentatívne obrazy VTA dopamínových neurónov od sexuálne naivných a skúsených zvierat vykazujúcich zníženie veľkosti soma 7 d po konečnom párení. Stupnica mierky, 5 μm. Kvantitatívne údaje ukazujú, že sexuálne skúsenosti (Exp, čierne pruhy) spôsobili významné zníženie oblasti (B; v μm2) a obvod (C; v μm) VTA dopamínových buniek, 1 d (Naive, Exp; n = 6) a 7 d (Naive, n = 5; exp, n = 6), ale nie 31 d (Naive, n = 6; exp, n = 8) po konečnom párení v porovnaní s sexuálne naivnými kontrolami (naivné, biele pruhy). Plocha bola znížená na 84% u skúsených mužov v porovnaní s naivnými kontrolami na 1 alebo 7 d. Obvod bol znížený na 91.6 a 90% v skúsených skupinách v porovnaní s kontrolou u 1 a 7 d resp. Na kruhovitosť nedošlo k žiadnemu účinku (D). Táto plasticita dopamínových buniek v oblasti (E) a obvod (F) bolo zabránené naloxónom (NLX, n = 8), ale nie soľným roztokom (Sal, n = 7) počas párenia, 7 d po konečnom párení v porovnaní s sexuálne naivnými kontrolami (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Údaje predstavujú priemer ± SEM; * označuje významný rozdiel v porovnaní s sexuálne naivnými kontrolami toho istého dňa (B, C) alebo v porovnaní so sexuálne naivnými kontrolami liečenými soľným roztokom a sexuálne skúsenými mužmi liečenými naloxónom (E, F).

Obrázok 2. 

Sexuálne skúsenosti neznížili veľkosť soma v substanci nigra dopamínových neurónoch alebo VTA nondopamínových neurónoch. Oblasť VTA TH-IR neurónového soma (A; v μm2) a obvod (B; v μm) v sexuálne naivných (bielych) a skúsených (čiernych) zvieratách, ktoré získali skúsenosti spárovaním dvakrát týždenne než v priebehu nasledujúcich dní. Substancia nigra TH-IR oblasť soma (C) a VTA non-TH-IR soma oblasť (D) u sexuálne naivných (bielych) a skúsených (čiernych) zvierat. Údaje predstavujú priemer ± SEM; * označuje významný rozdiel oproti sexuálne naivným kontrolám. Reprezentatívne obrázky ukazujúce TH-IR (hnedé) neuróny vo VTA na sexuálne naivných (E) a skúsených (F) mužov. G, H, Obrázok s väčším zväčšením neurónu označený šípkou v E a F resp. Neuróny farbené Nissl sú na týchto obrázkoch zobrazené modrou farbou. Reprezentatívne obrázky ukazujúce TH-IR neuróny v SN na sexuálne naivných (I) a skúsených (J) mužov. Stupnice: E-J, 20 μm.

Sexuálne skúsenosti indukované zníženie soma veľkosti dopamínových neurónov VTA závisí od aktivácie opioidných receptorov

Zníženie veľkosti VTA dopamínového neurónu soma spôsobené sexuálnymi skúsenosťami bolo blokované nesolektívnym antagonistom MOR naloxónu, ktorý bol podaný pred každým párovaním. Naloxónové ošetrenie pred párovými sedeniami malo významný vplyv na oblasť (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) a mala tendenciu k významnému vplyvu na obvod (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Významná interakcia medzi skúsenosťami a liečbou naloxónom bola zistená pre oblasť (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) a obvod (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Párky porovnania ukázali, že sexuálne skúsenosti so zvieratami ošetrenými fyziologickým roztokom významne redukovali plochu a obvod VPA dopamínových neurónov 7 d po poslednom párení v porovnaní so sexuálne naivnými mužmi liečenými soľným roztokomObr. 1E, plocha: p = 0.018; F, obvod: p = 0.007). Na rozdiel od toho, sexuálne skúsené zvieratá liečené naloxónom sa nelíšili od neliečených neliečených naloxónom (Obr. 1E, plocha: p = 0.483; F, obvod: p = 0.330). Okrem toho sa veľkosť soma skúsených soľných zvierat významne znížila v porovnaní so skúsenými zvieratami z naloxónu (Obr. 1E, plocha: p = 0.002; F, obvod: p = 0.002). Tento účinok naloxónu bol špecifický pre sexuálnu skúsenosť, pretože samotná liečba naloxónom neovplyvnila veľkosť samíc TH-IR buniek soma v sexuálne naivných samcoch liečených naloxónom v porovnaní s kontrolnými zvieratami ošetrovanými soľným roztokomObr. 1E,F). Navyše tento účinok naloxónu na zmenšenie veľkosti soma vyvolanej skúsenosťou nebol spôsobený účinkami naloxónu na sexuálne správanie, keďže správanie párovania sa významne nelíši medzi mužmi liečenými naloxónom a soľným roztokom, s výnimkou dlhšieho času na začatie párenia po ejakulácii (interval po ejakulácii) u mužov liečených naloxónom počas prvého a piateho párenia (p = 0.03 a p = 0.004, v uvedenom poradí). Obaja samičie a naloxónom ošetrené samce kopulovali na ejakuláciu počas každého z piatich párovacích sedení.

Sexuálna skúsenosť vyvolaná tolerancia morfínovej odmeny

Účinky sexuálnej skúsenosti na veľkosť VTA dopamínového soma pôsobením EOP v VTA sú podobné ako v prípade exogénnych opiátov (Sklair-Tavron a kol., 1996; Russo a kol., 2007). Preto bolo testované, či prirodzená odmena vyvolaná VTA dopamínová bunková plasticita ovplyvňuje odmenu opiátového morfínu. Skutočne, sexuálna skúsenosť spôsobila toleranciu morfínovej odmeny, podobne ako účinky chronických opiátov (Russo a kol., 2007). Sexuálne skúsení muži nedokázali vyvinúť CPP pre dávku morfínu 0.5 mg / kg; zatiaľ čo sexuálne naivní muži tvorili CPP pre túto dávku, čo naznačovalo, že v morfínom spárovanej komore strávili viac času v porovnaní s komorou spárovanou soľným roztokom počas post-testu (Obr. 3; p = 0.039). Obe sexuálne naivné a skúsené skupiny strávili v morfínom spárovanej komore výrazne dlhšiu dobu v porovnaní so soľnou párovou komorou s vyššími dávkami morfínu: 5.0 mg / kg (Obr. 3; naivné: p = 0.029; exp: p = 0.012) a 10.0 mg / kg (Obr. 3; naivné: p <0.001; Exp: p = 0.002).

Obrázok 3. 

Účinky sexuálnej skúsenosti na morfinovú odmenu. Doba strávená v komorách so slaným (Sal) alebo morfínom (mor, 0.5, 5 alebo 10 mg / kg telesnej hmotnosti) počas post-testu v sexuálne naivných (Naive, n = 10-13) alebo skúsených (Exp, n = 9-13). Údaje sú prezentované ako priemer ± SEM; * označuje signifikantné rozdiely v porovnaní s Sal spárovanou komorou u rovnakých zvierat. NS, nevýznamné.

Užívanie vyvolané sexuálnym zážitkom pri správe párov závisí od aktivácie opioidného receptora

Zistenia doteraz ukazujú, že EOP pôsobiace vo VTA počas 5 denných krátkych relácií spôsobuje plasticitu dopamínových neurónov VTA, ktorá je podobná účinkom chronického morfínu alebo heroínu samo-podávania (Russo a kol., 2007; Mazei-Robison a kol., 2011). Predpokladali sme, že redukcia veľkosti dopamínového soma vo VTA je rozhodujúca pre odmeňovanie a zvlášť pre sexuálne skúsenosti vyvolané uľahčenie sexuálneho správania z hľadiska motivácie a výkonu. Táto hypotéza bola testovaná blokovaním MOR použitím naloxónu počas párenia a skúmaním účinkov na zjednodušenie sexuálneho správania vyvolaného sexuálnymi skúsenosťami počas piatich denných párovacích zasadnutí. Údaje sú uvedené v Obrázok 4 iba pre prvé a piate párenie, pretože ide o údaje, ktoré najlepšie ilustrujú skúsenosti vyvolané zjednodušenie správania pri páre. Navyše, dlhodobé účinky liečby naloxónom počas párovacej relácie sa testujú na udržiavaní skúsenosti vyvolaného zjednodušenia správania pri párení počas konečného párovacieho testu 1 týždeň neskôr. Obrázok 4A ukazuje experimentálny dizajn. Bol zaznamenaný významný vplyv párenia na všetky parametre sexuálneho správania (latencia: F(2,55) = 11.286, p <0.001; latencia intromisie: F(2,55) = 8.767, p <0.001; latencia ejakulácie: F(2,55) = 10.368, p <0.001) a liečba naloxónom pri latenciách na zvýšenie (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) a intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Porovnanie v dvojiciach ukázalo, že liečba naloxónom ovplyvnila sexuálne správanie počas prvého párenia, pretože naloxónové zvieratá mali výrazne dlhšie latencie na prvom mieste (p = 0.002) a intromission (p = 0.002) v porovnaní so slanými kontrolami v prvý deň párenia. Tento účinok naloxónu na počiatočné sexuálne správanie sa znížil sexuálnymi skúsenosťami a nebol pozorovaný počas žiadneho z nasledujúcich párovacích zasadnutí (Tabuľka 1). Navyše podávanie naloxónu pred každým z piatich párových sedení nezabránilo počiatočnému uľahčeniu sexuálneho správania so sexuálnymi skúsenosťami. V súlade s posilňujúcimi účinkami sexuálnych skúseností, samci liečené samce vykazovali znížené latencie na podporu (Obr. 4B; p = 0.032) intromission (Obr. 4C; p = 0.033) a ejakulácia (Obr. 4D; p <0.001) počas piateho párenia v porovnaní s prvým párením, ktoré naznačovalo uľahčenie sexuálneho správania. Podobne muži liečení naloxónom vykazovali podstatne kratšiu latenciu pri pripájaní (Obr. 4B; p <0.001), intromisia (Obr. 4C; p <0.001) a ejakulácia (Obr. 4D; p = 0.017) v porovnaní s prvým dňom. Navyše, samcami ošetrovanými naloxónom sa nelíšia od kontrolných slaných organizmov v žiadnej z latencií počas piatej relácie párenia.

Obrázok 4. 

Endogénne opiáty zohrávajú rozhodujúcu úlohu pri uľahčovaní sexuálneho správania vyvolaného skúsenosťami. A, Experimentálny dizajn. B-D, Parametre sexuálneho správania pre mužov liečených fyziologickým roztokom (Sal, biele tyčinky, n = 11) alebo naloxónom (NLX, čierne pruhy, n = 12) so systémovým podaním. Zobrazené údaje sú oneskorené pripojenie (B; sekundy), intromisia (C; sekúnd) a ejakulácia (D; sekundy) v dňoch 1 a 5 z piatich po sebe nasledujúcich dní párenia. Okrem toho sú údaje uvedené pre konečný párovací test 7 d po piatej relácii párenia. Údaje sú prezentované ako priemer ± SEM; + označuje významný rozdiel medzi dňami 1 a 5 počas liečby; * označuje významný rozdiel medzi testovaným dňom a dňom 5 počas liečby; # znamená signifikantný rozdiel medzi skupinami naloxónu a fyziologického roztoku počas dňa.

Zobraziť túto tabuľku: 

Tabuľka 1. 

Naloxónové podanie pred párením zvýšilo latencie pri monoterapii a intromízii až v prvý deň párenia

Naproti tomu liečba naloxónom počas sexuálnej skúsenosti narušila udržanie skúsenosti vyvolaného uľahčenia sexuálneho správania v konečnom dni testovania párenia. Skúšobný deň bol vykonaný 7 d po konečnom párení v neprítomnosti injekcie naloxónu. Subjekty s kontrolným účinkom na fyziologický roztok vykazovali očakávané uľahčenie sexuálneho správania vyvolané skúsenosťami. Konkrétne, latencie pri monoterapii, intromízii a ejakulácii sa nelíšia medzi piatym párovým sedením a posledným testovacím dňom (Obr. 4B-D). Zatiaľ čo samce liečené naloxónom vykazovali signifikantný nárast latencií na podporu (Obr. 4B; p = 0.033), intromisia (Obr. 4C; p = 0.036) a ejakulácia (Obr. 4D; p = 0.049) v deň testu v porovnaní s piatym párovým sedením. V deň testovania bolo tiež zistené, že zvieratá naloxónu sú výrazne pomalšie než muži liečené fyziologickým roztokom, ako je to znázornené dlhšími latenciami na uloženie (Obr. 4B; p = 0.017) a intromission (Obr. 4C; p = 0.043). Preto liečba naloxónom blokovala udržiavanie, ale nie počiatočný vývoj skúsenosti vyvolaného uľahčenia sexuálneho správania. Tieto zistenia poukazujú na kritickú úlohu pri plastickej neuronovej dopamínovej VTA indukovanej EOP pri dlhodobom vyjadrovaní posilňovania prirodzeného odmeňovacieho správania.

Bolo vykonaných niekoľko dodatočných kontrolných pokusov, aby sa zistilo, že účinky blokády opioidného receptora na stratu dlhodobého posilňovania sexuálneho správania sa vyskytovali nezávisle od nedostatku podávania naloxónu v konečnom dni párenia (Obr. 5A,B) boli špecifické pre stratu dlhodobej, ale nie krátkodobej udržiavacej podpory párenia (Obr. 5E,F) neboli spôsobené každodennou expozíciou samotnému naloxónu (Obr. 5C,D) a neboli spôsobené stratou sexuálnej odmeny u mužov liečených naloxónom (Obr. 5G,H). Po prvé, aby sa ukázalo, že zmenené sexuálne správanie na konečnom párení nebolo spôsobené neprítomnosťou naloxónu, bol na konečnom párovom testovacom dni podaný buď naloxón, alebo soľný roztok zvieratám, ktoré dostali párenie spárované s naloxónom počas získania sexuálnych skúseností (Obr. 5A). Bol zaznamenaný významný účinok dňa párenia pri latenciách (Obr. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) a intromission (Tabuľka 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Neexistoval žiadny hlavný účinok párenia dňa na latenciu na ejakuláciu (Tabuľka 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Podobne ako je opísané vyššie, liečba naloxónom počas párenia neovplyvnila uľahčenie sexuálneho správania počas počiatočných piatich sexuálnych skúseností. Obe skupiny (ošetrené soľnými a naloxónovými skupinami, ktoré boli určené počas liečby prijatej počas konečného párenia, obaja dostali naloxón počas párenia) preukázali uľahčené sexuálne správanie v deň 5 v porovnaní s dňom 1 a vykazovali signifikantne kratšie latencie na prvý krok (Obr. 5B; fyziologický roztok: p = 0.033; naloxón: p = 0.014) a intromission (Tabuľka 2; fyziologický roztok: p = 0.034; naloxón: p = 0.026). Zvieratá, ktoré dostali buď naloxón, alebo soľný roztok v konečnom párovom testovacom dni, mali dlhšie latencie na uloženie (Obr. 5B; fyziologický roztok: p = 0.018; naloxón: p = 0.029) a intromission (Tabuľka 2; fyziologický roztok: p = 0.019; naloxón: p = 0.020) v porovnaní s piatym dňom párenia. Preto podávanie naloxónu alebo fyziologického roztoku v testovacom dni bezprostredne pred párením neovplyvnilo účinok liečby naloxónom počas sexuálnych zážitkových sedení a zmiernenie dlhodobého uľahčenia sexuálneho správania bolo totožné s útlmom u zvierat, ktoré nedostali žiadnu injekciu v deň konečného párenia (Obr. 4).

Obrázok 5. 

Endogénne opiáty sú dôležité v dlhodobom vyjadrení skúsenosti vyvolaného uľahčenia sexuálneho správania. A, Experimentálny návrh na experiment s účinkom liečby NLX v deň testovania. B, Latencia v dňoch 1 a 5 v piatich po sebe nasledujúcich dňoch párenia a konečného testovacieho dňa (test) po nasýtení soľným (sivým) alebo naloxónovým (čiernym) injekčným roztokom. Údaje predstavujú priemer ± SEM. * označuje významný rozdiel medzi dňom 1 a dňom 5 počas liečby. # znamená signifikantný rozdiel medzi testovaným dňom a dňom 5 počas liečby. C, Experimentálna koncepcia experimentu na overenie účinku samotnej predliečby naloxónom bez sexuálnej skúsenosti na správanie párenia. D, Latencia na konečný testovací deň, 7 dni po 5 dňoch buď fyziologického roztoku alebo injekcie naloxónu v neprítomnosti párenia. Údaje predstavujú priemer ± SEM. EExperimentálny návrh na experiment s cieľom overiť, či liečba naloxónom ovplyvnila krátkodobé zobrazenie uľahčeného sexuálneho správania u sexuálne skúsených zvierat. F, Latenciu pripevnenia v deň 1 a deň 5 z piatich po sebe nasledujúcich dní párenia a konečného párenia, 1 deň po dni 5 za prítomnosti slaného roztoku alebo injekcie naloxónu (čiernou). Údaje predstavujú priemer ± SEM. * označuje významný rozdiel medzi dňom 1 a dňom 5 počas liečby. G, Experimentálny návrh na experiment s cieľom overiť, či liečba naloxónom zablokovala odmeňovacie účinky sexuálneho správania. HČas strávený v spárovaní spárovanej komory (v sekundách) počas predbežného testu (biely) a po teste (čierny) pre zvieratá, ktoré dostávali buď naloxón alebo soľný roztok pred párením. Údaje predstavujú priemer ± SEM; * označuje významný rozdiel v porovnaní s predbežným testom.

Zobraziť túto tabuľku: 

Tabuľka 2. 

Zobrazené údaje sú latencie do intromissionu a ejakulácie (sekundy) z kontrolných experimentov vykonaných s cieľom zistiť, že účinky blokády MOR na stratu dlhodobého posilnenia sexuálneho správania sa vyskytovali nezávisle od nedostatku podávania naloxónu v poslednom dni testovania párenia

Aby sa zistilo, či ide o liečbu naloxónom, keď sa spája so sexuálnymi skúsenosťami a neopakuje sa na samotný naloxón, ktorý spôsobil poškodenie sexuálneho správania 7 d po poslednej liečbe, sexuálne nezaujaté zvieratá dostali buď päť denných injekcií naloxónu alebo injekcií soľným roztokom pred konečným párovým testom 7 d neskôr (Obr. 5C). Neboli zistené žiadne významné rozdiely medzi parametrami párovania medzi skupinami soľným a naloxónovým predliečením (Obr. 5D; latencia pripojenia; latencia intromizácie: soľný roztok 139.7 ± 40.3 vs naloxón 121.83 ± 42.55; latencia ejakulácie: fyziologický roztok 887.9 ± 70.0 vs naloxón 1050.8 ± 327.31). Tieto výsledky naznačujú, že samotný naloxón nie je dostatočný na zmenu následného sexuálneho správania, podobne ako nedostatok účinkov samotného naloxónu na plasticitu neurónov VTA dopamínu.

Predpokladáme, že liečba naloxónom počas akvizície sexuálneho zážitku narúša dlhodobé vyjadrenie sexuálneho správania vyvolaného sexuálnymi skúsenosťami. Na ďalšie testovanie sa účinok liečby naloxónom počas párenia testoval na následnom sexuálnom správaní počas konečného párovacieho testu, ktorý bol vykonaný len po 1 d po poslednom párení (experimentálna konštrukcia; Obr. 5E). Bol zaznamenaný významný vplyv párenia dňa na horu (Obr. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) a latencie intromisie (Tabuľka 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Nezistil sa žiadny významný hlavný účinok dňa na latenciu ejakulácie (Tabuľka 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Podobne, ako bolo opísané vyššie, všetci muži (napriek liečbe soľným roztokom alebo naloxónom) ukázali uľahčenie sexuálneho správania počas piatich sexuálnych zážitkových relácií, ktoré boli signalizované výrazne kratšími latenciami na pripojenie (Obr. 5F; fyziologický roztok: p = 0.002; naloxón: p = 0.018) a intromission (Tabuľka 2; fyziologický roztok: p = 0.006; naloxón: p = 0.009) v deň 5 v porovnaní s dňom 1. Podobne bolo v skúšobnom dni preukázané uľahčené sexuálne správanie v porovnaní s dňom 1 označeným výrazne kratšími latenciami na pripojenie (Obr. 5F; fyziologický roztok: p = 0.001; naloxón: p = 0.020) a intromission (Tabuľka 2; fyziologický roztok: p = 0.004; naloxón: p = 0.009). Ešte dôležitejšie je, že liečba naloxónom počas párenia významne neovplyvnila sexuálne správanie, ktoré bolo spôsobené sexuálnymi skúsenosťami, pri testovaní 1 d po sexuálnej skúsenosti, nezávisle od liečby naloxónom v tomto konečnom dni párenia.

Nakoniec sme testovali možnosť, že tlmiace účinky naloxónu na dlhodobú expresiu uľahčeného sexuálneho správania sú spôsobené blokujúcim účinkom naloxónu na prospešné vlastnosti sexuálneho správania. Naloxón podávaný bezprostredne pred párením však nezmenil tvorbu CPP na párenie (Obr. 5G), čo naznačuje, že liečba naloxónom nezmenila sexuálnu odmenu. Skupiny ošetrené soľným aj naloxónom tvorili významnú CPP pre sexuálne správanie, čo naznačuje výrazne zvýšený čas strávený v komore s párom pohlavných orgánov (Obr. 5H; fyziologický roztok: p = 0.038; naloxón: p = 0.002) počas testu v porovnaní s predbežným testom. Preto naloxón nevyvoláva škodlivý účinok na udržanie uľahčeného sexuálneho správania tým, že zablokuje odmenu spojenú so sexuálnym správaním.

Uľahčenie sexuálneho správania závisí od činnosti EOP vo VTA

Aby sa potvrdilo, že EOP koná konkrétne vo VTA s cieľom podnietiť dlhodobé uľahčenie sexuálneho správania, experimentálny dizajn načrtnutý v Obrázok 3A bola opakovaná s infúziami intra-VTA naloxónu namiesto systémových injekcií. Výsledky boli identické so systémovým podávaním opísaným vyššie. Významný vplyv párenia dňa bol na všetky parametre sexuálneho správania (Obr. 6A, latencia montáže: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, latencia intromizácie: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, latencia ejakulácie: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) a intra-VTA naloxónová liečba na latenciách na podporu (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) a intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloxón nezabránil uľahčeniu počiatočného skúsenosti pri uľahčení sexuálneho správania počas 5 d párenia, pretože muži liečené naloxónom preukázali zníženú latenciu pri držaní (Obr. 6A; p = 0.001), intromisia (Obr. 6B; p <0.001) a ejakulácia (Obr. 6C; p = 0.001) v deň 5 v porovnaní s dňom 1. Naloxónom ošetrené samice sa nelíšili od samcov ošetrených fyziologickým roztokom piateho dňa párenia v ľubovoľnej latencii. Intra-VTA naloxónová liečba, podobne ako pri systémovom podaní, spôsobila významne zvýšený úchylok (Obr. 6A; p <0.001) a latencie intromisie (Obr. 6B; p <0.001) v prvý párovací deň v porovnaní s mužmi ošetrenými soľným roztokom, čo sa nepozorovalo počas nasledujúcich párení (počas ktorých sa muži liečení naloxónom a soľným roztokom nelíšili). Jedným neočakávaným pozorovaním bolo, že v tomto experimente muži liečení soľným roztokom nevykazovali štatisticky významné uľahčenie latencie horenia alebo intromisie (ako sa ukázalo vo všetkých vyššie opísaných experimentoch) a iba piaty deň sa skrátila latencia ejakulácie v porovnaní s prvým dňom (soľný roztok: p = 0.001).

Obrázok 6. 

Endogénne opioidy v VTA sprostredkovávajú skúsenosti vyvolané uľahčenie sexuálneho správania a jeho dlhodobú udržiavanie. Parametre sexuálneho správania u mužov liečených fyziologickým roztokom (Sal, biele tyčinky, n = 8) alebo NLX (čierne pruhy, n = 6) s intravenóznym podaním. Zobrazené údaje sú oneskorené pripojenie (A), intromisia (B) a ejakulácia (C) v dňoch 1 a 5 z piatich po sebe nasledujúcich dní párenia. Okrem toho sú údaje uvedené pre konečný deň testovania, 7 d nasledujúceho dňa 5 v neprítomnosti injekcie s fyziologickým roztokom alebo naloxónom. Údaje predstavujú priemer ± SEM; + označuje významný rozdiel medzi dňami 1 a 5 počas liečby; * označuje významný rozdiel medzi testovaným dňom a dňom 5 počas liečby; # znamená signifikantný rozdiel medzi skupinami naloxónu a Sal počas dňa. Schematické výkresy koronálnych sekcií VTA (H, -4.60, I, -5.00, J, -5.25 z bregma) ukazujú miesta injekcie intra-VTA pre všetky zvieratá v experimente 5 (soľný roztok, biela, naloxón, čierna, pomocou výkresov šablón z kníh motivačného programu Swanson (Swanson, 2004). Kanuly boli bilaterálne, ale miesta injekcie sú jednostranne reprezentované na uľahčenie prezentácie. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lichokopy; SN, substantia nigra.

Liečba naxolónu intra-VTA zablokovala udržiavanie uľahčeného sexuálneho správania pozorovaného u sexuálne skúsených mužov, podobne ako účinky systémového naloxónu. Konkrétne, v poslednom dni testu mali muži liečené naloxónom dlhšiu dobu latencie (Obr. 6A; p = 0.011), intromisia (Obr. 6B; p = 0.010) a ejakulácia (Obr. 6C; p = 0.015) v porovnaní s ich piatym párovým sedením a v porovnaní s mužmi liečenými soľným roztokom v posledný testovaný deň (Obr. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Na rozdiel od toho, zvieratá ošetrené soľným roztokom sa nelíšili od latencií až po montáž a intromizáciu medzi posledným testovaným dňom a dňom 5 párenia. Tieto účinky boli špecifické pre dodávanie naloxónu do VTA, pretože samci s miestami komplikácie kanyláru, ale nehľadiac na VTA (Obr. 6D; n = 3) vykazovali dlhodobé uľahčenie sexuálneho správania podobné kontrolám ošetreným soľným roztokom (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 a významne odlišné v porovnaní s zvieratami naloxónu intra-VTA na konečnom párovom testovacom dni (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

Aktivácia EOP je potrebná pre neurónovú aktiváciu podmienenú sexuálnym podnetom

Na základe doterajších zistení sme predpokladali, že aktivácia EOP vo VTA počas skúseností s párením a následné zníženie veľkosti dopamínového soma VTA je rozhodujúca pre priradenie stimulačných príznakov k páreniu stimulov súvisiacich s odmenou a následne k udržaniu uľahčenia sexuálneho správania. Na testovanie tejto hypotézy sa skúmali účinky blokovania opioidných receptorov počas párenia na nervovej aktivite indukovanej následnou expozíciou podmieneným kontextuálnym znamením predikujúcim sexuálnu odmenu (kontextuálne znamenia spojené s pohlavím). Sexuálne naivné zvieratá boli tiež vystavené environmentálnym podnetom, ale tieto neboli spojené s predchádzajúcou skúsenosťou s párením, a preto boli neutrálne. Napokon, východiskové hladiny pERK boli určené v sexuálne skúsených a naivných kontrolných skupinách, ktoré zostali v domácich klietkach a neboli vystavené žiadnym signálom (-No Cue). Potvrdenie a rozšírenie predchádzajúcich zistení (Balfour a spol., 2004), expozícia kontextuálnym podnetom spojeným s predchádzajúcou sexovou odmenou významne zvýšila expresiu pERK u sexuálne skúsených mužov v NAc (Obr. 7) a mPFC (Obr. 8A-C), ale nespôsobil aktiváciu neurónov v BLA (Obr. 8D) alebo CPu (údaje nie sú zobrazené). V jadre NAc boli hlavné dôsledky expozície tzv.F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) a PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) a liečba naloxónom v jadre NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) a PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). V jadre NAc došlo k významnej interakcii (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) a IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Po prvé, expozícia Cue súvisiaca s párením významne zvýšila pERK u pokusných zvierat s expozíciou (Exp Sal ​​+ Cue) liečených soľným roztokom v porovnaní s kontrolnými zvieratami, ktoré neboli vystavené žiadnym signálom a odobraté z domácej klietky (Exp Sal-No Cue) v jadre NAcObr. 7A; p <0.001) a podoblasti mPFC ACA (Obr. 8A; p = 0.001), PL (Obr. 8B; p = 0.003) a IL (Obr. 8C; p = 0.029). Naproti tomu pri sexuálne naivných zvieratách liečených soľným roztokom nevyvolávalo vystavenie kontextuálnym podnetom, ktoré neboli spojené so sexuálnou odmenou, pERK v žiadnej oblasti mozgu (Naive Sal + Cue v porovnaní s naivným Sal-No Cue; Obr. 7, 8), čo dokazuje, že indukcia pERK je špecifická pre expozíciu podnetov súvisiacich so sexuálnymi skúsenosťami. Navyše samotná sexuálna skúsenosť nezmenila východiskovú expresiu pERK v žiadnej z oblastí mozgu, pretože medzi skupinami, ktoré boli odobraté z domácich klietok, či už sexuálne naivné alebo zažili, neboli upravené soľným roztokom alebo naloxónom.

Obrázok 7. 

Endogénny opiátový účinok je potrebný pre nervovú aktiváciu v NAc indukovanú podmienenými sexuálnymi podnetmi. Počet buniek pERK-IR na mm2 v nucleus accumbens jadre (A) a shell (B) v prípade sexuálne naivných (bielych) a skúsených (Exp; čiernych) zvierat, ktoré boli pred liečbou systémovým NLX alebo fyziologickým roztokom (Sal) počas párenia (Exp males) alebo manipulácie (Naive male). Skupiny boli buď vystavené kontextuálnym podnetom (Cue), ktoré boli spojené s párovými asociáciami u expulzov a neutrálnymi znameniami na naivných zvieratách, alebo boli odobraté z domácich klietok (č. Cue, indikované nedostatkom označenia Cue). Údaje sú prezentované ako priemer ± SEM; * označuje signifikantný rozdiel v porovnaní s kontrolnými zvieratami, ktoré nemajú žiadnu účinnú koncentráciu (Naive Sal-No Cue a Exp Sal-No Cue) predbežne ošetrené soľným roztokom; # označuje signifikantný rozdiel v porovnaní so skupinou Exp expozíciou vystavenou Cue (Exp Sal ​​+ Cue). Reprezentatívne obrázky buniek pERK-IR na mm2 v jadre NAc sexuálne skúsených mužov so Sal (C, D) alebo NLX (E, F), ktoré boli buď odobraté z domácej klietky (No Cue, C, E), alebo vystavené kontextuálnym podnetom spojeným s párovaním (Cue; D, F). N = 4 každá skupina okrem Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, Predošlá komisia. Stupnica mierky, 100 μm.

Obrázok 8. 

Účinky naloxónu na expresiu pERK indukovanej kurie vyvolanej v iných cieľových oblastiach VTA. Počet buniek pERK-IR na mm2 v sexuálne naivných (bielych) a skúsených (Exp; čiernych) zvieratách, ktoré boli pred liečbou systémovým NLX alebo soľným roztokom (Sal) počas párenia a boli vystavené kontextuálnym podnetom (Cue) alebo domácej klietkeA), PL (B), IL (C) a BLA (D). Údaje predstavujú priemer ± SEM; * označuje signifikantný rozdiel v porovnaní s kontrolnými zvieratami, ktoré nemajú žiadnu účinnú koncentráciu (Naive Sal-No Cue a Exp Sal-No Cue) predbežne ošetrené soľným roztokom; # označuje signifikantný rozdiel v porovnaní s sexuálne naivnými kontrolami vystavenými kmeňom vystaveným Salovi (Naive Sal + Cue).

Na podporu našej hypotézy liečba naloxónom počas sexuálnej skúsenosti výrazne oslabila indukciu pERK podmienenými sexuálnymi podnetmi. Expresia pERK u týchto skúsených mužov, ktorí boli vystavení naloxónu (Exp NLX + Cue), sa nelíši od východiskovej expresie pERK v žiadnej zo sexuálne naivných alebo skúsených kontrolných skupín odobratých z domácich klietok (Naive Sal-No Cue alebo Naive NLX- No Cue). Navyše expresia pERK u skúsených mužov s expozíciou liečených naloxónom (Exp NLX + Cue) bola výrazne nižšia v porovnaní so skúsenými zvieratami exponovanými v liečbe so živočíchmi (Exp Sal ​​+ Cue) v jadre NAc (Obr. 7A; p = 0.002) a subregiónov mPFC (Obr. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

V obálke NAc analýza obojsmernej analýzy ANOVA nepriniesla štatisticky významné účinky faktorov exaktnej expozície a liečby naloxónom. Párové porovnanie však dokázalo, že expozícia vyvolaná pľúcami indukovala pERK v sexuálne skúsenej skupine liečenej soľným roztokom (Exp SAL + Cue) v porovnaní s kontrolnou skupinou, ktorá nebola podávaná so salinom,Obr. 7B; Naivný SAL-No Cue: p = 0.0163).

Diskusia

Súčasná štúdia poukazuje na to, že EOP pôsobiace vo VTA počas sexuálneho správania, prirodzené odmeňovanie, spôsobilo silné, ale prechodné zníženie veľkosti soma VTA dopamínových buniek. Zníženie veľkosti soma nebolo pozorované u nepródujúcich VTA neurónov ani v dopamínových neurónoch v blízkej substantia nigra, čo naznačuje, že táto zmena bola špecifická pre VTA dopamínové bunky. Táto plasticita dopamínu VTA sa javí podobná plasticity vyvolanej chronickou expozíciou opiátov (Sklair-Tavron a kol., 1996; Russo a kol., 2007; Mazei-Robison a kol., 2011) a spôsobil podobnú toleranciu voči exogénnej opiáte (morfínu). Ukázali sme, že plasticita dopamínu VTA je rozhodujúca pre dlhodobú (udržiavacie), ale nie krátkodobú (rozvojovú), posilnenie sexuálneho správania a nepriaznivú aktivitu indukovanú kurie (pERK) v cieľových oblastiach VTA: NAc a mPFC. Tieto zistenia naznačujú úlohu VTA dopamínovej plasticity pri dlhodobom vyjadrovaní motivačnej príťažlivosti prediktívnych príznakov prirodzenej odmeny alebo pamäti odmien.

Bolo dobre zdokumentované, že sexuálne skúsenosti vedú k uľahčeniu následného sexuálneho správania, vrátane rýchlejšieho nástupu do začiatku párenia a zvýšeného výkonu (Balfour a spol., 2004; Pitchers a kol., 2010a,b, 2012). Toto uľahčenie alebo posilnenie sexuálneho správania sa udržiava minimálne po 28 d po párení (Pitchers a kol., 2012). Okrem toho sa ukázalo, že sexuálne správanie a kondicionované náznaky predpovedajúce sexuálnu odmenu spôsobujú internalizáciu MOR vo VTA a indukujú neurónovú aktiváciu v celom mezolimbickom systéme, vrátane VTA (dopamínových a nondopamínových neurónov), NAc, PFC a BLABalfour a spol., 2004, 2006). Je dobre známe, že VTA dopamínové neuróny hrajú rozhodujúcu úlohu pri poznávaní a priraďovaní stimulačných prínosov stimulov spojených s odmenou (Berridge a Robinson, 1998; Berridge a kol., 2009; Flagel a kol., 2011) a sú kritické pre odhady odmeny (Schultz, 2010). Súčasné zistenia rozširujú naše súčasné poznatky tým, že preukázali, že neuroplasticita VTA vyvolaná odmeňovaním je pre tieto funkcie rozhodujúca a závisí od aktivácie MOR pomocou EOP vo VTA. V súčasnosti nie je známe, ktorý EOP je MOR ligand, ktorý pôsobí vo VTA počas mužského sexuálneho správania. Hoci obidva β-endorfín a enkefalín sa podieľajú na stimulácii motivácie pre potravinové spevňovače (Hayward a spol., 2002), to zostáva pre mužské sexuálne správanie. Predtým sme ukázali, že ß-endorfínové neuróny nie sú aktivované počas párenia, ani nie sú zvýšené POMC mRNA; čo naznačuje, že β endorfín nemusí byť kritickým EOP pôsobiacim vo VTA počas párenia (Davis a kol., 2007). Táto plasticita pre dopamín VTA bola dôležitá pre nervovú aktivitu v mPFC, NAc a VTA po expozícii sexuálnej odmeny predvídaniu environmentálnych podnetov. Naviac, plasticita dopamínu VTA bola kritická pre dlhodobé vyjadrenie zvýšenej iniciácie a výkonu sexuálneho správania. Naproti tomu neuroplasticita VTA spôsobená sexuálnymi skúsenosťami nebola potrebná pre hedonickú odpoveď, pretože odmena za sex (určená CPP) a krátkodobé uľahčenie sexuálnej motivácie a výkonnosti (počas sexuálnej skúsenosti alebo 1 d neskôr) zostala neporušená aj napriek blokácii MOR počas párenia (Mehrara a Baum, 1990). Namiesto toho dáta naznačujú, že neuroplasticita VTA dopamínu sprostredkováva dlhodobejší (7 d po predchádzajúcom sexuálnom zážitku; Pitchers a kol., 2012) vyjadrenie "chcenia" sexuálnej odmeny a zvýšenej motivovanej reakcie na párenie (Miller a Baum, 1987; Berridge a Robinson, 1998).

Sexuálne skúsené zvieratá preukázali krížovú toleranciu k morfínovej odmene, podobne ako účinky bežiaceho kolesa myší, ďalšie prírodné odmeňujúce správanie, účinok blokovaný liečbou naloxónom (Lett a kol., 2001, 2002) a bolo stanovené, že závisí od plasticity dopamínových buniek VTA (súčasné zistenia). Podobne ako prírodné odmeny, opakovaná expozícia opiátov morfínu alebo heroínu vedie k prechodnému zníženiu veľkosti dopamínového soma VTA (Sklair-Tavron a kol., 1996; Spiga a kol., 2003; Russo a kol., 2007; Mazei-Robison a kol., 2011). Okrem toho expozícia opiátov s krátkymi ochrannými obdobiami spôsobuje toleranciu odmeňovania, čoho dôsledkom sú vyššie dávky lieku, ktoré sú potrebné na vytvorenie odmeňovania (Shippenberg a spol., 1987; Russo a kol., 2007) a spôsobuje, že samice podávajúce zvieratá zvyšujú príjem liekov (Ahmed a kol., 2000; Walker a kol., 2003). Preto EOP a opiáty pôsobia na bežné nervové substráty na vyvolanie tolerancie na odmenu počas skoršieho vysadenia, čo môže odrážať kompenzačný homeostatický mechanizmus na potlačenie stimulácie opakovanou expozíciou (Koob a Le Moal, 2005). Naproti tomu pri dlhodobej abstinencii liekov na opiáty sa tolerancia obráti na citlivosť na odhodlané vlastnosti lieku (Harris a Aston-Jones, 2003; Aston-Jones a Harris, 2004; Harris a Gewirtz, 2004). Zaujímavé je, že sexuálna skúsenosť, po ktorej nasleduje obdobie abstinencie sexu 7-28 d, spôsobuje krížovú senzibilizáciu psychostimulantnej odmeny (Pitchers a kol., 2010a), ktorý je závislý od aktivácie exprimovanej deltaFosB indukovanej párovaním a aktivácie 1 receptora dopamínu v NAc (Pitchers a kol., 2013). Z tohto dôvodu skúsenosť so sexuálnymi odmenami spôsobuje simultánnu toleranciu opiátovej odmeny a senzibilizáciu psychostimulátorov odmeňovania, aj keď dlhodobejšie obdobie abstinencie na toleranciu odmeňovania morfínom zostáva testované. Predpokladáme, že tieto opačné účinky na odmenu lieku môžu byť sprostredkované rôznymi formami neurálnej plasticity v rôznych oblastiach mezolimbického systému: účinnosť VTA EOP a plasticita dopamínu sprostredkovávajú toleranciu na opiátovú odmenu (súčasná štúdia), zatiaľ čo expresia NAc deltaFosB kontroluje psychostimulantnú senzibilizáciu (Pitchers a kol., 2013). Obe tieto udalosti môžu prispieť k eskalácii užívania drog (Ahmed a Koob, 1998, 1999; Ahmed a kol., 2000, 2002, 2003; Walker a kol., 2003).

Molekulárne mechanizmy, ktorými EOP ovplyvňuje dopamínové neuróny VTA počas prirodzenej odmeny, zostávajú neznáme. Trasa IRS2-Akt-mTORC2 je hlavným mediátorom zníženej veľkosti soma vo VTA spôsobenej opakovaným morfínom (Jaworski a kol., 2005; Russo a kol., 2007; Mazei-Robison a kol., 2011). Opakované podávanie morfínu indukované zmeny veľkosti dopamínových neurónov vo VTA sa dá zabrániť intra-VTA infúziou neurotrofného faktora odvodeného z mozgu (BDNF; Sklair-Tavron a Nestler, 1995). BDNF aktivuje túto cestu prostredníctvom signalizácie TrkB (Russo a kol., 2007), receptorovú kinázu s vysokou afinitou pre BDNF a časť dráhy IRS2-Akt (Seroogy a Gall, 1993; Numan a Seroogy, 1999) a exprimovali sa na dopamínových a GABA neurónoch VTA. Downregulácia rôznych zložiek dráhy IRS2-Akt pomocou technológie génového prenosu vírusových vektorov napodobňuje účinky chronickej expozície opiátov. Okrem toho môžu byť účinky opiátovej expozície zachránené obnovením tejto signalizačnej dráhy (Russo a kol., 2007) a nadmerná expresia zložky mTORC2 zabraňuje redukcii dopamínového soma indukovanej morfínom (Mazei-Robison a kol., 2011). Preto predchádzajúca práca skúmajúca účinky chronických opiátov na veľkosť VTA dopamínového soma ukazuje, že morfínom indukovaná downregulácia dráhy IRS2-Akt-mTOR je dostatočná a nevyhnutná na tento účel (Mazei-Robison a Nestler, 2012). Preto je lákavé špekulovať, že účinky sexuálnej skúsenosti na dopamínovú neuroplasticitu VTA sú podobne sprostredkované BDNF a dráhou IRS2-Akt-mTORC2.

Na záver, súčasná štúdia preukázala, že neuroplasticita VTA je spôsobená skúsenosťami s prirodzeným odmeňovaním, najmä opakovaným mužským sexuálnym správaním. Konkrétne EOP pôsobí vo VTA na zníženie veľkosti dopamínového sómu, o ktorej sa predpokladá, že je spojená so zvýšenou nervovou excitabilitou a menším dopamínovým výstupom, čo vedie k hypodopaminergickému systému a mení fungovanie mezolimbického systému ako odozvu na znaky, ktoré predpovedajú sexuálnu odmenu. Navyše, neuroplasticita VTA je rozhodujúca pre stimulačnú motiváciu a odmeňovanie, ale nie pre hedonický dopad sexuálneho správania. Nakoniec, neuroplasticita VTA spôsobená prirodzeným správaním odmien, po ktorej nasleduje krátka doba odmeny odmien, ovplyvňuje opiátovú odmenu a môže preto ovplyvniť zraniteľnosť voči vývoju drogovej závislosti.

poznámky pod čiarou

  • Prijaté január 12, 2014.
  • Revízia bola prijatá v máji 17, 2014.
  • Prijaté máj 20, 2014.

  • Tento výskum bol podporený grantmi od kanadského inštitútu pre výskum zdravia LMC a Rady pre výskum prírodných a technických vied spoločnosti KKP

  • Autori neuvádzajú žiadne konkurenčné finančné záujmy.

  • Korešpondencia by mala byť adresovaná Dr Lique M. Coolen z University of Mississippi Medical Center, Oddelenie fyziológie a biofyziky, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [chránené e-mailom]

Referencie

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Pohlavné správanie samcov potkanov. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Prechod z mierneho až nadmerného užívania liekov: zmena hedonickej žiadanej hodnoty. veda 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Dlhodobé zvýšenie požadovanej hodnoty pre samo-podávanie kokaínu po eskalácii u potkanov. Psychofarmakológiu 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Trvalé zvyšovanie motivácie na užívanie heroínu u potkanov s eskaláciou drog v minulosti. neuropsychofarmakologie 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neurobiologické dôkazy pre hedonickú alostázu spojenú s eskaláciou užívania kokaínu. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Eskalácia samotného podávania kokaínu nezávisí od zmenených hladín dopamínu vyvolaných kokaínom indukovaným jadrom accumbens. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Brainové substráty pre zvýšenie dopytu po drogách počas dlhotrvajúceho stiahnutia. Neuropharmacology 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Sexuálne správanie a environmentálne príznaky spojené s pohlavím aktivujú mesolimbický systém u samcov potkanov. neuropsychofarmakologie 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Potenciálne prínosy eferentov zo strednej prefrontálnej kôry k nervovej aktivácii po sexuálnom správaní u samcov potkanov. Neurovedy 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Neurofilamentové proteíny a mezolimbický dopamínový systém: spoločná regulácia chronickým morfínom a chronickým kokaínom v ventrálnej tegmentálnej oblasti potkanov. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Aká je úloha dopamínu v odmeňovaní: hedonický dopad, odmeňovanie alebo motivácia? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Disekovanie zložiek odmeny: "chuť", "chcenie" a učenie. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Gold M

    (2012) Sex, drogy a rock 'n' roll: hypotéza spoločnej mezolimbickej aktivácie ako funkcia odmeňovania génových polymorfizmov. J psychoaktívnych liečiv 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Periférna elektrická stimulácia zmenila zmenšenie veľkosti buniek a zvýšila hladinu BDNF vo ventrálnej tegmentálnej oblasti u potkanov s chronickým morfínom. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Aktivácia neurónov POMC počas všeobecného vzrušenia, ale nie sexuálneho správania u samcov potkanov. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dynamické zmeny v jadre accumbens dopamínový eflux počas účinku Coolidge u samcov potkanov. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Selektívna úloha dopamínu pri vzdelávaní stimulom a odmeňovaním. príroda 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Džbány KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Potešenie z miešania: prehľad účinkov liekov na sexuálne správanie u ľudí a modely zvierat. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Wise RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamín pôsobí na subpopulácie neurónov regulujúcich sexuálne správanie u samcov potkanov. Neurovedy 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Zvýšený prekvapenie počas stiahnutia z akútneho morfínu: model stiahnutia opiátov a úzkosť. Psychofarmakológiu 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Zmenená motivácia a učenie po abstinencii z opiátov: dôkaz dlhodobej dysregulácie odmeňovania. neuropsychofarmakologie 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Nízka MJ

    (2002) Selektívny deficit odmeňovania u myší bez beta-endorfínu a enkefalínu. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Prirodzená závislosť: behaviorálny a obvodový model založený na závislosti na cukre u potkanov. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Neurálne mechanizmy závislosti: úloha odmeňovania súvisiaceho učenia a pamäte. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) receptorová blokáda v prednej ventrálnej tegmentálnej oblasti zvyšuje extracelulárne hladiny dopamínu v nucleus accumbens potkanov. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Riadenie dendritickej arborizácie fosfosinozitid-3'-kinázou-Akt-cicavčím cieľom rapamycínovej dráhy. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. North RA

    (1992) Opioidy vyvolávajú dopamínové neuróny hyperpolarizáciou lokálnych interneurónov. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Regulácia uvoľňovania somatodendritického dopamínu v ventrálnej tegmentálnej oblasti opioidmi a GABA: štúdia mikrodialýzy in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plasticity odmeňovania neurocircuitry a "tmavá strana" drogovej závislosti. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Zlepšené médium na upevnenie na imunofluorescenčnú mikroskopiu. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloxón zmierňuje kondicionovanú preferenciu miesta vyvolanú kolieskami bežiacimi na potkanoch. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Predchádzajúce skúsenosti s chodom kolies vedú k krížovej tolerancii k odmeňujúcemu účinku morfínu. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Nemecký DC

    (1984) Elektrofyziologické dôkazy pre excitáciu dopamínových neurónov ventrálnej tegmentálnej oblasti potkanov morfínom. Neurovedy 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Veselosť JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) • Role pre signalizáciu mTOR a neuronálnu aktivitu v morfínom indukovaných adaptáciách v dopaminových neurónoch ventrálnej tegmentovej oblasti. Neurón 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiátom indukovaná molekulárna a bunková plasticita ventrálnej tegmentálnej oblasti a neurónov katecholamínu lokusového koeruleusu. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloxón narušuje expresiu, ale nie získanie podmienených odpovedí na miesto prednostnej odozvy u estrálnej samice potkanmi. Psychofarmakológiu 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Sexuálne skúsenosti s hlodavcami: bunkové mechanizmy a funkčné dôsledky. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloxón inhibuje párenie a kondicionovanú preferenciu miesta pre estrusu u samcov potkanov krátko po kastrácii. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Uľahčenie sexuálneho správania u samcov potkanov spojených s injekciami opiátov intra-VTA. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Špecifickosť signálu MAPK: správne miesto v správnom čase. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Transkripčné mechanizmy drogovej závislosti. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Mozg potkana v stereotaxických súradniciach (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Džbány KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplasticita v mezolimbickom systéme indukovaná prirodzenou odmenou a následnou abstinenciou odmeny. Biol Psychiatry 67: 872-879.

  • ↵
    1. Džbány KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB v nucleus accumbens je rozhodujúci pre posilnenie účinkov sexuálnej odmeny. Gény Brain Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Džbány KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Skúsenosť s prirodzenou odmenou mení rozdelenie a funkciu AMPA a NMDA receptorov v nucleus accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Džbány KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Prírodné a drogové odmeny účinkujú na spoločných mechanizmoch neurálnej plasticity s DeltaFosB ako kľúčovým mediátorom. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK a p38 MAPK-aktivované proteínové kinázy: skupina proteínkináz s rôznymi biologickými funkciami. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Vlastné DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) IRS2-Akt dráha v dopamínových neurónoch stredného mozgu reguluje behaviorálne a bunkové odpovede na opiáty. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Viac funkcií dopamínových neurónov. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Expresia neurotrofínov dopamínovými neurónmi stredného mozgu. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Motivačné vlastnosti opioidov: dôkaz, že aktivácia delta-receptorov sprostredkováva procesy posilňovania. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Opačné účinky morfínu a neurotrofínov, NT-3, NT-4 a BDNF, na lokus coeruleus neuróny in vitro. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Chronický morfín indukuje viditeľné zmeny v morfológii mezolimbických dopamínových neurónov. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Abnormality indukované abstinenčným odberom morfínu vo VTA: konfokálna laserová skenovacia mikroskopia. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Mapy mozgu: štruktúra mozgu potkana (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Džbány KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Pohlavné odmeny u samcov potkanov: účinky sexuálnej skúsenosti na podmienených podmienkach miesta spojených s ejakuláciou a intromismi. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Meranie odmeny s paradigmom preferovanej kondície preferencie (CPP): aktualizácia posledného desaťročia. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Sexuálna motivácia: zapojenie endogénnych opioidov do ventrálnej tegmentálnej oblasti. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Regulácia mužského sexuálneho správania: účasť mozgových opioidov a dopamínu. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Chronická expozícia opiátov spôsobuje zvýšené heroínové samoadministrácie u potkanov. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Neurobiológia párového spojenia: poznatky zo sociologicky monogamného hlodavca. Predný neuroendokrinol 32: 53-69.

    •