Expresia a distribúcia receptora dopamínu sa dynamicky mení v jadrovom nucleus accumbens po vysadení z kokaínovej samoadministrácie. (2010)

Komentáre: Používatelia ťažkej pornografie hlásia po ukončení užívania veľa druhov abstinenčných príznakov. Všetci prežívajú chute. Obnova nie je lineárna v tom, že u niektorých sa môže relaps opakovať alebo mať chuť na zotavenie týždne. Táto štúdia môže odhaliť prečo. Po ukončení užívania kokaínu sa receptory dopamínu (D2) nevrátili na normálnych 45 dní a receptory D3 sa zvýšili - čo môže viesť k silnej chuti.


Kelly L. Conrad, Ph.D.,a,c Kerstin Ford, BS,a,b Michela Marinelli, Ph.D.,b a Marina E. Wolf, Ph.D.a

abstraktné

Dopamínové receptory (DAR) v nucleus accumbens (NAc) sú kritické pre účinky kokaínu, ale povaha úprav funkcie DAR po opakovanej expozícii kokaínu zostáva kontroverzná. Môže to byť čiastočne spôsobené skutočnosťou, že rôzne metódy použité v predchádzajúcich štúdiách merali rôzne súbory DAR. V predloženej štúdii sme na uskutočnenie prvých meraní povrchovej expresie DAR v NAc kokaínových potkanov použili test zosieťovania proteínov. Boli tiež kvantifikované hladiny intracelulárneho a celkového receptora. Potkany si podávali fyziologický roztok alebo kokaín desať dní. Celý NAc alebo subregióny jadra a plášťa sa zhromaždili o jeden alebo 45 dní neskôr, keď je známe, že potkany vykazujú nízku a vysokú hladinu hľadania liečiva vyvolaného tágom. Zistili sme zvýšené D1 DAR na bunkovom povrchu v NAc škrupine prvý deň po prerušení samopodania kokaínu (určený 1. deň vysadenia alebo WD1), ale to sa normalizovalo pomocou WD45. V skupine s kokaínom boli pozorované znížené intracelulárne a povrchové hladiny D2 DAR. V pláne sa obe opatrenia znížili na WD1 a WD45. V jadre sa znížená povrchová expresia D2 DAR pozorovala iba na WD45. Podobne bol WD45, ale nie WD1, spojený so zvýšenou povrchovou expresiou D3 DAR v jadre. Ak vezmeme do úvahy mnoho ďalších štúdií, navrhujeme, aby znížená D2 DAR a zvýšená povrchová expresia D3 DAR na WD45 mohla prispieť k zvýšenému vyhľadávaniu kokaínu po dlhodobom vysadení, aj keď je pravdepodobné, že pôjde o modulačný účinok, vzhľadom na skôr preukázaný sprostredkujúci účinok pre glutamátové receptory typu AMPA.

Kľúčové slová: kokaín, dopamínové receptory, nucleus accumbens, obchodovanie s receptormi

Predpokladá sa, že zmeny v signalizácii dopamínového (DA) receptora (DAR) prispievajú k závislosti (Volkow a kol., 2009). Mnohé štúdie preto skúmali účinky samopodania kokaínu a vysadenia na expresiu D1-podobných (D1 a D5) a D2-podobných (D2, D3 a D4) tried DARs v nucleus accumbens (NAc). Štúdie na ľuďoch a primátoch okrem človeka použili pozitrónovú emisnú topografiu (PET) na poskytnutie nepriameho merania dostupných receptorov na povrchu DAR buniek. V štúdiách na potkanoch sa použili testy viazania alebo in vitro sa použila autorádiografia receptora; tieto techniky merajú DAR v mnohých kompartmentoch, vrátane, ale nie sú obmedzené na, bunkový povrchový pool. Zdá sa, že najmä v štúdiách na hlodavcoch závisia výsledky od režimu liečenia a od načasovania experimentu (Anderson a Pierce, 2005). Ďalšou dôležitou premennou je však použitie rôznych metód, ktoré merajú rôzne skupiny DAR, v kombinácii s nedávno odhalenou komplexnosťou, pokiaľ ide o agregáciu, prenos a signalizáciu DAR. Všetky tieto faktory komplikujú meranie funkčných druhov DAR.

Je dobre známe, že D1-like DARs a D2-like DARs sú pozitívne a negatívne spojené s adenylylcyklázou a že každá rodina môže tiež ovplyvniť iné signálne transdukčné kaskády (Lachowicz a Sibley, 1997; Neve a kol., 2004). Nedávno sa zistilo, že D1, D2 a D3 DAR vytvárajú diméry a komplexy vyššieho rádu (Lee a kol., 2000a; George a kol., 2002; Javitch, 2004). Oligomerizácia, ktorá sa vyskytuje včas v biosyntetickej dráhe na úrovni endoplazmatického retikula, môže byť nevyhnutná na zacielenie DAR a iných receptorov spojených s G-proteínom (GPCR) na povrch bunky (Lee a kol., 2000b; Bulenger a kol., 2005). Oligoméry DAR sú tvorené disulfidovými väzbami, ale aj interakciami hydrofóbnej transmembránovej domény, čo ich robí čiastočne rezistentnými voči redukčným podmienkam a vedú k pozorovaniu pásov monomérov, dimérov a oligomérov v štúdiách Western blot (napr. Lee et al., 2003). DAR tiež obsahujú variabilný počet N-viazaných glykozylačných miest (Missale a kol., 1998), ktoré sa môžu vyžadovať pre D2 DAR pre obchodovanie s bunkovým povrchom (Free et al., 2007). Glykozylácia D2 DAR prispieva k ďalšiemu pásmu ~ 70-75kDa, ktoré sa bežne pozoruje pri Western blotoch (David a kol., 1993; Fishburn a kol., 1995; Lee a kol., 2000b). Ukázalo sa, že DARs tvoria heterogénne oligoméry medzi rôznymi subtypmi DAR a inými GPCR a non-GPCR; aktiváciou DAR v týchto multimérnych komplexoch môžu DA agonisti aktivovať signálne dráhy odlišné alebo zmenené v rozsahu od tých, ktoré sú viazané na jednotlivé DAR (napr. Rocheville a kol., 2000; Ginés a kol., 2000; Scarselli a kol., 2001; Lee et al., 2004; Fiorentini a kol., 2003; 2008; Marcellino a kol., 2008; So a kol., 2009).

U abstinentných užívateľov kokaínu sa zraniteľnosť voči relapsu často zvyšuje po štádiu akútneho vysadenia lieku (Gawin a Kleber, 1986; Kosten a kol., 2005). Analogický fenomén bol pozorovaný po vysadení z rozšíreného prístupu kokaínu u samíc u potkanov (\ tNeisewander a kol., 2000; Grimm a kol., 2001; Lu a kol., 2004a, b; Conrad a spol., 2008). Tieto štúdie ukázali, že cue-indukovaný liek vyhľadáva zvýšenie medzi prvým dňom a dňom 90 abstinenčného obdobia a potom sa vracia k východiskovej hodnote 6 mesiacov. Fáza stúpania sa nazýva „inkubácia“. Cieľom tejto štúdie bolo určiť, či inkubácia túžby vyvolanej cue indukovanej túžby je sprevádzaná zmenami hladín D1, D2 alebo D3 DAR v NAc. Aby sa selektívne merali zmeny vo funkčnej skupine DAR exprimovanej na povrchu bunky, upravili sme proteínový sieťovací test, ktorý predtým používali naše laboratóriá na meranie expresie povrchu glutamátových receptorových buniek po liečbe in vivo (Boudreau a Wolf, 2005; Boudreau a kol., 2007; 2009; Conrad a spol., 2008; Nelson a kol., 2009; Ferrario a kol., 2010). Použitím tohto testu sa stanovili povrchové, intracelulárne a celkové hladiny DAR v alikvótnych častiach tkaniva NAc získaného od potkanov buď 1 deň alebo 45 dní po prerušení podávania kokaínu alebo fyziologického roztoku s predĺženým prístupom.

EXPERIMENTÁLNE PROCEDÚRY

Zvieratá a postupy správania

Experimenty sa uskutočnili v súlade s National Institutes of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 80-23; revidované 1996) a boli schválené našim Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a použitie. Vyvinulo sa všetko, aby sa minimalizoval počet použitých zvierat a ich utrpenie. Predkladaná štúdia analyzovala distribúciu DAR v alikvótnych častiach NAc tkaniva získaného z tých istých potkanov, ktoré boli použité predtým, aby sa demonštrovala inkubácia túžby po kokaíne a súvisiace zmeny v expresii podjednotiek receptora a-amino-3-hydroxy-5-metylizoxazol-4-propionátu (AMPA). po 45 dňoch vysadenia z kokaínovej samosprávy (\ tConrad a spol., 2008). Tkanivo nebolo dostupné pre všetky potkany použité v našej predchádzajúcej štúdii, čo predstavuje niektoré rozdiely v hodnotách N. Použili sa dve kohorty potkanov. Celá NAc (core + shell) bola rozrezaná v prvej, zatiaľ čo jadro a obal boli oddelené oddelene v druhom. Tieto štúdie používali samce potkanov Sprague Dawley (Harlan, Indianapolis, IN) s hmotnosťou 250-275g po príchode a umiestnili sa jednotlivo na reverznom cykle 12h / 12h svetlo-tma (svetlá v čase 0900 hodín). Postupy pre chirurgický zákrok a samoobslužný tréning boli opísané vyššie (Conrad a spol., 2008). V stručnosti, potkanom sa nechal nosiť pokožku, aby si sami podávali kokaín alebo fyziologický roztok po dobu 10 dní (6h / deň) v komorách s vlastným podávaním (MED Associates, St. Albans, VT) v skrinkách tlmiacich zvuk. Vniknutie nosa do aktívneho otvoru priviedlo infúziu fyziologického roztoku alebo kokaínu (0.5 mg / kg / 100μL cez 3s), párované s diskrétnym svetelným tágom 30-u vo vnútri otvoru na nos. Striekanie nosa do neaktívnej diery nemalo žiadne následky. Počas prvej hodiny alebo prvých infúzií 10u (podľa toho, čo nastalo skôr) sa použil časový limit 10u a predĺžil sa na 30s na zostávajúci čas na zabránenie predávkovania kokaínom. Potkany, ktorým sa podával kokaín samostatne, mali priemerne 120 infúzie každý deň (-60mg / kg / deň), zatiaľ čo potkany, ktorým sa podával fyziologický roztok v priemere 20 infúzie každý deň (údaje nie sú uvedené). Jedlo a voda boli vždy prítomné. Po prerušení vlastného podávania fyziologického roztoku alebo kokaínu sa potkany vrátili do svojich domovských klietok na 1 alebo 45 dní predtým, ako sa získalo tkanivo NAc na štúdie sieťového zosieťovania (pozri nasledujúcu časť). Vytvorili sa tak štyri experimentálne skupiny: fyziologické potkany usmrtené v deň ukončenia 1 (WD1-Sal), potkany kokaínu usmrtené na WD1 (WD1-Coc), potkanoch fyziologického roztoku usmrtených na potkanoch WD45 (WD45-Sal) a kokaínových potkanoch zabitých na WD45 (WD45) -COC). Termín „WD“ sa vzťahuje len na počet dní, počas ktorých liek nebol k dispozícii, a neznamená súbor fyziologických symptómov vyplývajúcich z ukončenia chronického užívania liekov.

Proteínové zosieťovanie

Táto metóda bola podrobne opísaná predtým (Boudreau a Wolf, 2005; Ferrario a kol., 2010). Potkany boli dekapitované, ich mozgy boli rýchlo odstránené a celý NAc (alebo jadro a shell subregióny) bol rozrezaný na ľade z koronálneho rezu 2mm získaného pomocou mozgovej matrice. Celok NAc tkanivo sa okamžite nasekalo na rezy 400 μm s použitím mlynčeka na tkanivá McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), zatiaľ čo menšie subregióny jadra a škrupiny boli ručne mleté ​​skalpelom. Tkanivo sa potom pridalo do skúmaviek Eppendorf obsahujúcich ľadovo studený umelý CSF obohatený 2mM bis (sulfosukcinimidyl) suberátom (BS3; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Zosieťovacia reakcia sa nechala prebiehať pri 30 min pri 4 ° C za mierneho miešania a potom sa ukončila pridaním 100mM glycínu (10 min pri 4 ° C). Tkanivo sa peletovalo krátkou centrifugáciou, resuspendovalo sa v ľadovo chladnom lyzačnom pufri obsahujúcom inhibítory proteázy a fosfatázy, sonované na 5 sec a znova sa centrifugovalo. Alikvóty supernatantu boli skladované pri -80 ° C až do analýzy Western blotom.

Western blot analýza DAR v zosieťovanom tkanive

Vzorky (20-30μg celkového proteínu / lyzátu) sa podrobili elektroforéze na géloch 4-15% Tris-HCl (Biorad, Hercules, CA). Proteíny sa preniesli na polyvinylidénfluoridové membrány na imunoblotovanie s použitím konštantného prúdu (1.15mA) pre 1.5 h. Na zabránenie nadmernému zahrievaniu sa použila chladiaca špirála. Úplný prenos agregátov s vysokou molekulovou hmotnosťou sa potvrdil farbením gélov po prenose s Coomassie modrou. Ďalej sme overili, že v stohovacom géli neboli detegované zosieťované DAR proteíny (údaje nie sú uvedené). Po prenose sa membrány premyli v ddH2ON, sušený na vzduchu pre 1 h pri laboratórnej teplote (RT), rehydratovaný s 100% MeOH, premytý v 1x Tris pufrovanom fyziologickom roztoku (TBS) a ponorený do 0.1M NaOH, pH 10 pre 15 min pri RT. Potom boli premyté v TBS, blokované 3% albumínom hovädzieho séra (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) v TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, pre 1 hod pri RT a inkubované cez noc. pri 4 ° C s protilátkami rozpoznávajúcimi D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) a D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4 a D5 DAR neboli analyzované z dôvodu nedostatku protilátok rozpoznávajúcich tak zosieťované, ako aj intracelulárne receptory. Treba poznamenať, že dávky DAR protilátok použité v týchto experimentoch boli zakúpené v 2005-06; súčasné šarže týchto protilátok (2009-10) vykazujú rozdielne vzory pruhov, ktoré nie sú zmenené v tkanive z DAR knockout myší (nepublikované pozorovania). Po inkubácii s primárnou protilátkou sa membrány premyli roztokom TBS-T, inkubovali sa na 60 min s HRP-konjugovaným anti-králičím IgG alebo anti-myším IgG (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY). T, prepláchnuté ddH2O, a ponorený do chemiluminiscenčného detekčného substrátu (Amersham GE, Piscataway, NJ). Po vytvorení blotov sa snímky zachytili pomocou Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). Difúzne hustoty povrchových a intracelulárnych pásov sa určili použitím softvéru Quantity One (Bio-Rad). Hodnoty hladín povrchových, intracelulárnych a celkových (povrchových + intracelulárnych) proteínov boli normalizované na celkový proteín v dráhe stanovenej pomocou Ponceau S (Sigma-Aldrich) a analyzované pomocou TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Povrchový / intracelulárny pomer nevyžadoval normalizáciu, pretože obe hodnoty sa určovali v rovnakom pruhu. Na preskúmanie protilátkovej špecificity sa uskutočnili preabsorpčné štúdie pre DAR protilátky s peptidom použitým na generovanie každej protilátky. Protilátka D1, D2 alebo D3 DAR bola kombinovaná s 10-násobnou koncentráciou peptidu v 500ll TBS, zmiešaná za 4 hodín pri 4 ° C, zriedená na konečný objem 20ml, pridaná k membráne a inkubovaná cez noc pri teplote miestnosti. 4 ° C.

Analýza dát

Dáta sa analyzovali pomocou SPSS s ANOVA s použitím expozície lieku (fyziologický roztok vs. kokaín) a dňa stiahnutia (WD1 vs. WD45) ako faktorov medzi subjektmi, po ktorých nasledoval post hoc Tukeyov test. Dôležitosť bola stanovená na p <0.05.

VÝSLEDKY

DAR analýza s BS3 test sieťovania

Účelom tejto štúdie bolo analyzovať povrch buniek a celkovú expresiu D1, D2 a D3 DAR v alikvótoch tkaniva NAc získaného po prerušení podávania kokaínu (6 h / deň počas 10 dní). Ako je opísané v spôsoboch, skupiny sú navrhnuté WD1 alebo WD45, aby označili počet dní strávených v domácich klietkach bez prístupu ku kokaínu pred analýzou DAR. Nac tkanivo z tých istých potkanov sa predtým použilo na preukázanie, že tvorba receptorov AMPA neobsahujúcich GluR2 nepodlieha expresii inkubovanej túžby kokaínu vyvolanej cue u potkanov vystavených kokaínu na WD45 (Conrad a spol., 2008). Na vyhodnotenie distribúcie DAR sme použili rovnakú BS3 sieťovacieho testu, ktorý sa použil predtým na štúdium distribúcie AMPA receptora. BS3 je proteínové zosieťovacie činidlo nepriepustné pre membránu, a preto selektívne zosieťuje proteíny na povrchu buniek, čím sa vytvárajú agregáty s vysokou molekulovou hmotnosťou. Intracelulárne proteíny nie sú modifikované. Povrchové a intracelulárne pooly konkrétneho proteínu je teda možné rozlíšiť elektroforézou na SDS-polyakrylamidovom géli a Western blotom (Boudreau a Wolf, 2005; Boudreau a kol., 2007; 2009; Conrad a spol., 2008; Nelson a kol., 2009; Ferrario a kol., 2010). Okrem kvantifikácie hladín povrchových a intracelulárnych proteínov sme použili súčet povrchových + intracelulárnych hladín ako mieru celkového receptorového proteínu a pomer povrch / intracelulárny pomer ako mieru distribúcie receptora.

Obr. 1 ilustruje spôsob porovnaním sieťovaného (X) a nezosieťovaného (ne) tkaniva sondovaného pre každý DAR. Povrchové pásy sú prítomné až po zosieťovaní. Vnútrobunkové pásy sa zmenšujú v zosieťovanom tkanive v porovnaní s rovnakým množstvom nezosieťovaného tkaniva, pretože v prvom sa povrchovo exprimovaná časť celkového receptorového poolu teraz nachádza v povrchovom pásme. Celkové hladiny proteínu DAR v nezosietovaných dráhach sú teda približne rovnaké ako súčet hodnôt S a I v sieťovaných dráhach (pozri legendu k Obr. 1; rovnaká ekvivalencia bola pozorovaná vo všetkých ostatných experimentoch). Treba poznamenať, že hoci BS3 poskytuje presné meranie relatívnych rozdielov v pomeroch S / I medzi experimentálnymi skupinami, absolútna úroveň S / I, ktorá sa meria, závisí od experimentálnych podmienok a protilátky. Uvažujme napríklad dva proteíny A a B, ktoré sú podobne rozdelené medzi oddielmi S a I. Ak protilátka proti A rozpoznáva svoju zosieťovanú formu menej náchylne ako nemodifikovaná (intracelulárna) forma, zatiaľ čo protilátka proti B rozpoznáva obe formy rovnako dobre, meraný pomer S / I bude nižší pre A ako B, aj keď podiel každého proteínu na povrch je skutočne rovnaký.

Obr. 1

Meranie povrchovej expresie DAR pomocou proteínového sieťového testu a demonštrácia imunošpecificity preabsorbovaním DAR protilátok s peptidmi použitými na zvýšenie každej protilátky

V prípade D1 a D3 DAR sme kvantifikovali jeden intracelulárny a jeden povrchový pás (Obr. 1a, c). Pre D2 DAR boli detegované tri intracelulárne pásy. V súlade s inými štúdiami (napr. Fishburn a kol., 1995; Kim a kol., 2008), tieto pásy sme identifikovali ako monomérne (~ 55kDa), glykozylované (~ 75kDa) a dimérne (~ 100kDa) D2 DARs (Obr. 1b). Tiež sa zistil povrchový pás. Všetky tri intracelulárne druhy prispeli k povrchovo exprimovanému D2 DAR poolu na základe zníženej intenzity všetkých troch intracelulárnych pásov v zosieťovanom tkanive v porovnaní s nezosieťovanými kontrolami. Všetky tri intracelulárne pásy D2 DAR sa spočítali na vytvorenie intracelulárnej hodnoty použitej na stanovenie celkových hladín D2 DAR (povrch + intracelulárny) a D2 DAR povrch / intracelulárny pomer. Slabý pruh bol tiež detegovaný pri ~ 200kDa, ale jeho imunoreaktivita bola príliš nízka na to, aby sa mohla kvantifikovať (Obr. 1b). Preabsorpčné štúdie uskutočňované s peptidmi použitými na generovanie každej protilátky preukázali imunošpecifickosť všetkých pásov kvantifikovaných v našich experimentoch, vrátane povrchových pásov (Obr. 1d, e, f). Ďalej sme pozorovali podobné modely pruhov, aké sme zistili v predchádzajúcich štúdiách imunoblotovania s použitím rovnakých protilátok (napr. Huang a kol., 1992 - D1 DAR; Boundy a kol., 1993a - D2 DAR; Boundy a kol., 1993b - D3 DAR) a imunohistochemické štúdie s týmito protilátkami odhalili očakávanú anatomickú distribúciu pre D1 DAR (\ tHuang a kol., 1992) a D2 DAR (Boundy a kol., 1993a; Wang a Pickel, 2002; Paspalas a Goldman-Rakic, 2004; Pinto a Sesack, 2008).

D1 DAR

Na WD45 sa nezistili žiadne významné rozdiely medzi skupinami kokaínu a fyziologického roztoku. Avšak účinky samopodania kokaínu boli evidentné na WD1. Analýza celého NAc indikovala významne vyšší D1 DAR / intracelulárny pomer v skupine WD1-Coc v porovnaní so skupinami, ktoré si podávali fyziologický roztok (Obrázok 2a). To bolo možné pripísať miernemu zvýšeniu povrchových D1 DARs v kombinácii s miernym poklesom intracelulárnych D1 DARs (ani jeden z týchto dvoch účinkov nebol štatisticky významný) v neprítomnosti akejkoľvek zmeny v celkových D1 DAR hladinách (povrch + intracelulárny) (Obrázok 2a). V rámci jadra NAc sa nezistil žiadny významný účinok pre žiadne opatrenie D1 DAR (\ tObr. 2b). Avšak, NAc shell zobrazil zmeny, ktoré boli podobné tým, ktoré boli pozorované v celom NAc, ale mierne robustnejšie (Obr. 2c). Pomer povrch / intracelulárny D1 DAR bol zvýšený v skupine WD1-Coc v dôsledku významného zvýšenia povrchovej expresie D1 DAR. Intracelulárne hladiny sa nezmenili, ale bol zaznamenaný trend smerom k zvýšeniu celkových hladín D1 DAR. V súhrne, väčšia časť D1 DAR proteínu bola povrchovo exprimovaná v NAc škrupine WD1-Coc potkanov v porovnaní s WD1-Sal potkanmi. Distribúcia D1 DAR sa vrátila do kontrolného stavu po 45 dňoch vysadenia zo samopodania kokaínu.

Obr. 2

Povrchová expresia D1 DAR bola zvýšená v NAc škrupine po 1 dni po vysadení z kokaínovej samosprávy.

D2 DAR

V celom NAc pozorovaný hlavný účinok bol znížený v expresii D2 DAR u potkanov, ktorý si podával kokaín v porovnaní s kontrolami fyziologického roztoku (\ tObrázok 3a). Toto bolo najvýraznejšie na WD45, keď boli pozorované poklesy v povrchovom pásme, vo všetkých troch intracelulárnych pásmach (~ 55, 75 a 100kDa) av celkových hladinách D2 DAR v porovnaní s kontrolami so soľným roztokom. Pomer povrch / intracelulárny D2 DAR bol mierne, ale významne zvýšený v skupine WD45-Coc, v dôsledku väčšieho poklesu intracelulárnych ako povrchových D2 DARs, čo pravdepodobne naznačuje, že bunky kompenzujú zníženú expresiu D2 DAR distribúciou väčšej časti dostupných D2 DAR na povrch. Je dôležité mať na pamäti, že zvýšený povrchový / intracelulárny pomer nenaznačuje zvýšenie prenosu D2 DAR v tomto konkrétnom prípade, pretože absolútna úroveň povrchovo exprimovaných D2 DARs bola znížená. V skupine WD1-Coc bol jediným významným účinkom zníženie intracelulárnych hladín monoméru D2 DAR (~ 55kDa) v porovnaní so skupinami WD45-Sal a WD1-Sal, aj keď niektoré ďalšie opatrenia tiež mali tendenciu klesať (Obrázok 3a).

Obr. 3

Intracelulárne a povrchové hladiny D2 DAR v NAc sa znížili po 45 dňoch vysadenia zo samokontroly kokaínu.

Celkové zníženie expresie D2 DAR bolo tiež evidentné v subregiónoch jadra a shellu NAc (Obr. 3b a 3c), hoci účinky mali tendenciu byť výraznejšie v škrupine. Povrchové hladiny D2 DAR tak klesli u potkanov kokaínu len na WD45 v jadre, ale na WD1 a WD45 v shell. Celkové D2 DARs sa výrazne znížili len v shell. Poklesy intracelulárnych D2 DAR pásov sa vyskytli v obidvoch dňoch vysadenia ako v jadre, tak v škrupine, aj keď boli rozdiely v odobratí a v oblasti špecifické, v ktorých intracelulárny pás vykazoval štatisticky významný účinok. Súhrnne, hladiny D2 DAR a intracelulárnych proteínov boli znížené v NAc po samopodávaní kokaínu. Niektoré poklesy už boli zjavné u WD1.

D3 DAR

Signifikantné zmeny v distribúcii D3 DAR neboli pozorované na WD1 po samopodávaní kokaínu, ale vyvinuté WD45. V rámci celého NAc skupina WD45-Coc mala vyšší D3 DAR povrchový / intracelulárny pomer ako všetky ostatné skupiny, čo možno pripísať kombinácii mierneho zvýšenia hladín povrchov a mierneho poklesu intracelulárnych hladín (žiadny účinok nebol významný); celkové úrovne D3 DAR sa nezmenili (Obrázok 4a).

Obr. 4

Povrchová expresia D3 DAR bola zvýšená v NAc po 45 dňoch vysadenia zo samopodania kokaínu.

Jadro NAc malo podobné, ale výraznejšie zmeny. Skupina WD45-Coc tak mala vyššie hladiny D3 DAR v porovnaní so všetkými ostatnými skupinami, čo viedlo k vyššiemu povrchu / intracelulárnemu pomeru (Obr. 4b). V NAc škrupine bola jedinou významnou zmenou v porovnaní s kontrolami fyziologického roztoku zvýšenie D3 DAR povrchu / intracelulárneho pomeru (Obr. 4c). V jadre aj v škrupine boli celkové hladiny proteínu D3 DAR vyššie v prípade WD45-Coc v porovnaní s potkanmi WD1-Coc (Obr. 4b, c). Funkčne najvýznamnejšou zmenou je pravdepodobne zvýšená povrchová expresia D3 DAR v NAc na WD45, čo bol najvýraznejší účinok v jadre subregiónu.

DISKUSIA

Analyzovali sme povrchové a intracelulárne hladiny D1, D2 a D3 DAR a intracelulárnych hladín v NAc potkanov na WD1 alebo WD45 po prerušení samostatného podávania predĺženého prístupu kokaínu. Hoci tu nie sú prezentované výsledky správania, predtým sme ukázali, že potkany vystavené tomuto kokaínovému režimu vykazujú inkubáciu túžby kokaínu vyvolanej cue na WD45 (Conrad a spol., 2008). Ďalej sa ukázalo, že rovnaké potkany vystavené kokaínu, ktoré sa použili na získanie tu opísaného tkaniva NAc, vykazovali zvýšené hladiny GluR1 na povrchu buniek na WD45, čo svedčí o tvorbe receptorov AMPA, ktorým chýba GluR2, ktorý sprevádza inkubáciu túžby vyvolanej cue indukovanou cue (Conrad a spol., 2008). Úloha DAR v inkubácii sa doteraz neskúmala. Okrem toho je naša štúdia prvá, ktorá meria povrchovo exprimované DAR v akomkoľvek zvieracom modeli závislosti. Ako je popísané nižšie, hoci všetky tri študované DARs ukázali časovo závislé zmeny po prerušení podávania kokaínu, špekulujeme, že časovo závislé poklesy povrchovej expresie D2 DAR a zvýšenie povrchovej expresie D3 DAR v NAc jadre najviac prispievajú inkubácia vyhľadávaného kokaínu indukovaného cue.

Okrem pozorovania časovo závislých zmien sme pozorovali rôzne zmeny DAR v subregiónoch jadra a shell. Jadro je zapojené do motorickej reakcie na podmienené zosilňovače, zatiaľ čo shell je viac zapojený do spracovania informácií súvisiacich s posilňujúcimi účinkami psychostimulancií (Ito a kol., 2000; 2004; Rodd-Henricks a kol., 2002; Ikemoto, 2003; Fuchs a kol., 2004; Ikemoto a spol., 2005). V súlade s tým je jadro dôležitou súčasťou nervových obvodov, ktoré sú základom inkubácie vyhľadávaného kokaínu vyvolaného cue (Conrad a spol., 2008). To naznačuje, že adaptácia DAR v jadre je pravdepodobnejšia v súvislosti s inkubáciou. Treba však mať na pamäti, že jadro a škrupina sa nedajú posudzovať izolovane, pretože vzájomne pôsobia ako súčasť špirálovitých anatomických slučiek spájajúcich oblasti kortikálnych, limbických a bazálnych ganglií (Haber, 2003). Okrem toho sa tieto slučky okrem DA, ako je glutamát, spoliehajú na mnohé vysielače. Vedenie v pamäti interakcie medzi jadrom a shellom a úloha viacerých systémov vysielačov môžu pomôcť vysvetliť niektoré zjavné rozdiely v literatúre medzi jadrom a shellom. Štúdie funkčnej inaktivácie napríklad poukazujú na jadro, ale nie na škrupinu v kokaínom vyvolanom a cue indukovanom obnovení (McFarland a Kalivas, 2001; Fuchs a kol., 2004). Ako však bude podrobnejšie diskutované nižšie, tak shell ako aj mediálne jadro (ale nie laterálne jadro) sú zahrnuté do regulácie DAR regulácie opätovného zavedenia kokaínu (Anderson a kol., 2003; 2008; Bachtell a kol., 2005; Schmidt a Pierce, 2006; Schmidt a kol., 2006).

Obmedzili sme rozsah nášho prehľadu literatúry tým, že sme sa zamerali skôr na úpravy DAR po samoobsluhe kokaínu ako na nekontinuálnu liečbu kokaínom. Pierce a Kalivas, 1997; Anderson a Pierce, 2005). Podobne sme sa zamerali skôr na štúdie využívajúce intra-NAc injekciu DAR subtypovo selektívnych liekov ako systémové podanie lieku (napr. Self a kol., 1996; De Vries et al., 1999). Je však zaujímavé poznamenať, že po ukončení užívania kokaínu sa zistili časovo závislé zmeny v odpovedi na systémové agonisty DA (De Vries et al., 2002; Edwards a kol., 2007). Tieto zmeny by mohli súvisieť so zmenami expresie DAR uvedenými v tomto dokumente, alebo by mohli odrážať zmeny funkcie DAR v iných oblastiach mozgu.

Povrchová expresia D1 DAR sa prechodne zvyšuje v NAc shell po prerušení podávania kokaínu

Po samopodávaní kokaínu bola D1 DAR povrchová expresia zvýšená v NAc shell na WD1, ale normalizovaná WD45, zatiaľ čo v jadre neboli pozorované žiadne zmeny, čo indikuje prechodné zvýšenie obmedzené na shell. Podobné výsledky sa dosiahli v predchádzajúcich štúdiách s použitím autorádiografie receptora. Ben-Shahar a kol. (2007) zistili zvýšenú D1 DAR hustotu v NAc škrupine potkanov 20 min (ale nie 14 alebo 60 dní) po vysadení rozšíreného prístupu (6 h / deň) kokaínového samoinjikovania, zatiaľ čo žiadne zmeny neboli pozorované v jadre alebo po krátkom prístupe kokaínu. - administrácia (2 h / deň). Nader a kol. (2002) pozorovali malé zvýšenie D1 DAR hustoty v škrupine, ale nie v jadre opíc rhesus, ktoré boli usmrtené po poslednom samovoľnom podaní kokaínu 100. Opice hodnotili 30 dni po vysadení rovnakého režimu ukázali zvýšenú D1 DAR hustotu v rostrálnej NAc av oboch jadrách a škrupinách na viac caudálnych hladinách, ale D1 DAR hustota sa normalizovala o 90 dní (Beveridge a kol., 2009). Všetky tieto výsledky, podobne ako tie naše, poukazujú na prechodné zvýšenie hladín D1 DAR, najmä v škrupine, po prerušení podávania kokaínu. Skoršia štúdia tejto skupiny však ukázala zníženie D1 DAR hustoty v NAc (najsilnejšia v škrupine) opíc rhesus, ktoré mali samo podávaný kokaín počas oveľa dlhšieho časového obdobia (18 mesiacov; Moore a kol., 1998a). Znížená väzba D1 DAR v NAc sa tiež zistila 18 h po vysadení režimu predĺženého prístupu u potkanov, hoci celkový príjem kokaínu v tejto štúdii bol vyšší ako v štúdiách u potkanov diskutovaných vyššie (\ tDe Montis a kol., 1998). Tieto výsledky ukazujú, že úpravy D1 DAR závisia od mnohých aspektov expozície kokaínu. Ďalšou úvahou je, že receptorová autorádiografia meria celkové bunkové receptory, zatiaľ čo naše pokusy s proteínovým zosieťovaním môžu rozlišovať medzi povrchovými a intracelulárnymi receptormi. Je zaujímavé, že imunoblotingová štúdia zistila trend smerom k zvýšeným hladinám D1 DAR v NAc u užívateľov kokaínu (Worsley a kol., 2000).

Je prechodné zvýšenie povrchovej expresie D1 DAR, ktoré sme pozorovali v NAc škrupine, dôležité pre inkubáciu túžby vyvolanej cue vyvolanej cue? Je to ťažké posúdiť, pretože žiadne štúdie neoverili účinok intra-NAc injekcie agonistov alebo antagonistov D1 DAR na vyhľadávanie kokaínu vyvolaného cue po odňatí z domácej klietky (alebo navodenie navodenia kokaínu po tréningu vyvolanom vynútením). Receptory D1 v mediálnom NAc (shell a mediálne jadro) sa však podieľajú na opätovnom uvedení kokaínu po kokaíne po vyhynutí do kokaínu, očividne prostredníctvom mechanizmu, ktorý vyžaduje kooperačnú aktiváciu D1 a D2 DAR (Anderson a kol., 2003; 2008; Bachtell a kol., 2005; Schmidt a Pierce, 2006; Schmidt a kol., 2006). Spolu s našimi výsledkami by to mohlo naznačovať, že neuróny v NAc škrupine sú citlivejšie na D1 DAR-sprostredkovaný kokaín, ktorý sa usiluje o skorý odchod z dôvodu prechodnej regulácie D1R. Pri extrapolácii z opätovného zavedenia na inkubačné štúdie sa však musí použiť opatrnosť, pretože extinkčný tréning a odchod z domácej klietky súvisia s rôznymi neuroadaptáciami v NAc (Sutton a kol., 2003; Ghasemzadeh a kol., 2009; Wolf a Ferrario, 2010). Je dôležité poznamenať, že D1 DARs v bazolaterálnej amygdale a prefrontálnom kortexe sú tiež dôležité pre opätovné navodenie vyhľadávania kokaínu vyvolaného cue (napr. Ciccocioppo a kol., 2001; Alleweireldt a kol., 2006; Berglind a kol., 2006).

Na bunkovej úrovni môžu presynaptické aj postsynaptické DAR modulovať excitabilitu stredných ostnatých neurónov, prevládajúceho bunkového typu a výstupného neurónu NAc (Nicola a kol., 2000; O'Donnell, 2003). Je známe, že opakované podávanie kokaínu, ktoré nie je možné, zvyšuje niektoré účinky aktivácie D1 DAR v NAc. Takže jeden deň až jeden mesiac po ukončení liečby kokaínom sa pozorovala zvýšená schopnosť agonistov D1 DAR inhibovať aktivitu stredných ostnatých neurónov (poháňaných ionoforetickým glutamátom) v celom NAc (Henry a White, 1991; 1995). Je však nepravdepodobné, že by zvýšená povrchová expresia D1 DAR, ktorá je tu uvedená, vysvetlila tieto predchádzajúce výsledky, pretože je obmedzená na shell a bola preukázaná iba na WD1. Jeden deň po expozícii kokaínu podali 10-14 dni po vysadení opakovaných injekcií kokaínu. Beurrier a Maleka (2002) pozorovali zvýšenie DA-sprostredkovanej inhibície excitačných synaptických odpovedí v NAc stredných ostnatých neurónoch, ktoré boli zjavne sprostredkované presynaptickými D1-podobnými DAR na glutamátových nervových zakončeniach. Možné účinky injekčnej injekcie (napríklad pozri Boudreau a kol., 2007 a Kourrich a kol., 2007), v kombinácii s druhovými rozdielmi a nedostatkom záznamov v jadre sťažujú porovnávanie ich zistení s našimi. Treba tiež poznamenať, že DAR agonisty a antagonisty používané Henry a White (1991); 1995) a Beurrier a Malenka (2002) nerozlišuje medzi D1 a D5 DAR.

Hladiny D2 DAR sa znižujú v NAc po prerušení podávania kokaínu

Hlavným účinkom pozorovaným v našej štúdii bol pokles D2 DAR proteínu v NAc jadre aj v škrupine po prerušení podávania kokaínu v porovnaní s kontrolami fyziologického roztoku. Toto bolo výraznejšie v škrupine, kde sa znížili intracelulárne, povrchové a celkové pásy na oboch WD1 a WD45. V jadre bola D2 DAR povrchová expresia znížená len na WD45 a celkové hladiny D2 DAR sa významne neznížili. Niekoľko ďalších štúdií zistilo podobne zníženú expresiu D2 DAR po prerušení podávania kokaínu. U opíc rhesus s rozsiahlymi skúsenosťami so samopodaním kokaínu bola D2 DAR hustota meraná receptorovou autorádiografiou znížená v mnohých striatálnych oblastiach, vrátane NAc jadra a škrupiny, keď sa tkanivo získalo bezprostredne po poslednom zasadnutí (Moore a kol., 1998b; Nader a kol., 2002). Pri použití PET sa tento účinok v bazálnych gangliách zistil v priebehu týždňa 1 po začatí samopodania kokaínu (Nader a kol., 2006). Rýchlosť, ktorou sa hladiny D2 DAR obnovia počas vysadenia, môžu závisieť od celkového príjmu kokaínu. V štúdii autorádiografie sa hladiny D2 DAR v NAc obnovili na kontrolu hodnôt po 30 alebo 90 dňoch vysadenia z 100 sedení kokaínových samopodávok (Beveridge a kol., 2009). V štúdii PET u opíc s dlhšou expozíciou (1 rok) a teda vyšším celkovým príjmom kokaínu však 3 opíc 5 preukázal obnovenie hladín D2 DAR po 90 dňoch, zatiaľ čo opice 2 nevykazovali zotavenie ani po 12 mesiacoch (Nader a kol., 2006). Celkovo tieto výsledky dobre korešpondujú s našimi zisteniami o znížených hladinách D2 DAR počas abstinenčného obdobia.

Štúdie PET pacientov závislých od kokaínu tiež zistili znížené hladiny D2 DAR v mnohých striatálnych oblastiach, vrátane ventrálneho striata, ktoré boli zjavné pri predčasnom ukončení liečby, ako aj po mesiacoch detoxikácie 3-4 (Volkow a kol., 1990, 1993, 1997). Význam pre správanie je však nejasný, pretože dostupnosť D2 DAR nekoreluje s pozitívnymi subjektívnymi účinkami kokaínu alebo s rozhodnutím o užívaní väčšieho množstva kokaínu po úvodnej dávke (Martinez a kol., 2004). Je dôležité poznamenať, že zatiaľ čo túžba po kokaíne vyvolaná cue vykazuje časovo závislý nárast počas vysadenia („inkubácia“), toto sa nevyskytuje pri vyhľadávaní kokaínu vyvolanom kokaínom (Lu a kol., 2004a). Preto, výsledky Martinez a kol. (2004) ponechať otvorenú možnosť, že dostupnosť D2 DAR môže korelovať s vyhľadávaním kokaínu vyvolaným cue, zameraním skúmaného inkubačného modelu. Nízka dostupnosť D2 DAR u ľudí užívajúcich kokaín koreluje so zníženým predným kortikálnym metabolizmom (Volkow a kol., 1993). Spolu s ďalšími zmenami to môže prispieť k strate kontroly, ktorá nastáva, keď sú narkomani vystavení drogám alebo liekom spárovaným podnetom, a väčšiemu významu liekov v porovnaní s odmenami iných ako drogy (Volkow a kol., 2007; Volkow a kol., 2009). Je potrebné poznamenať, že znížené hladiny D2 DAR v štúdii PET môžu naznačovať skôr zvýšené uvoľňovanie DA než znížené hladiny D2 DAR, ale nedávne výsledky argumentujú proti tomuto vysvetleniu v prípade pacientov závislých od kokaínu (Martinez a kol., 2009). Okrem toho postmortemová štúdia u užívateľov kokaínu zistila trend smerom k zníženiu hladín D2 DAR v NAc pomocou imunoblotovania (Worsley a kol., 2000).

Štúdie u ľudí závislých od kokaínu nedokážu určiť, či je znížená dostupnosť D2 DAR predispozíciou alebo dôsledkom vystavenia kokaínu, ale iné výsledky naznačujú, že obe sú pravdivé. Na jednej strane experimenty s ľuďmi, ktorí nepoužívajú drogy, zistili inverznú koreláciu medzi dostupnosťou D2 DAR a hláseniami o „liekovej chuti“ pri podávaní metylfenidátu (Volkow a kol., 1999; 2002). Tieto zistenia naznačujú, že nízka dostupnosť D2 DAR môže zvýšiť zraniteľnosť voči závislosti. Podobný záver podporujú štúdie na opiciach rhesus. U sociálne umiestnených opíc, dosiahnutie sociálnej dominancie zvyšuje dostupnosť D2 DAR v striate a to je spojené s nižšou citlivosťou na zosilňujúce účinky kokaínu v porovnaní s podriadenými opicami (Morgan a kol., 2002). Sociálny status je tiež v korelácii s dostupnosťou striatálneho D2 DAR u dobrovoľníkov bez drog (Martinez a kol., 2010). Na druhej strane, štúdie autorádiografie PET aj receptorov ukazujú, že dlhodobé samopodanie kokaínu znižuje dostupnosť striatálneho receptora D2 DAR u individuálne umiestnených opíc, ako bolo uvedené vyššie (pozri vyššie).Moore a kol., 1998b; Nader a kol., 2002; Nader a kol., 2006). Zdá sa, že chronická kokaínová samospráva tiež znižuje dostupnosť D2 DAR u dominantných sociálne umiestnených opíc (Czoty a kol., 2004). Po dlhodobom samopodávaní kokaínu neboli teda signifikantné rozdiely v dostupnosti D2 receptorov alebo v posilňovaní účinkov kokaínu medzi dominantnými a podriadenými opicami (Czoty a kol., 2004). Zvýšené hladiny D2 DAR však u abstinencie dominovali u opíc, čo korelovalo s dlhšou latenciou v reakcii na novosť, čo je predikciou zníženej citlivosti na zosilňujúce účinky kokaínu (Czoty a kol., 2010).

Tak ako u ľudí a opíc, štúdie na potkanoch naznačujú, že nízka dostupnosť D2 DAR je rizikovým faktorom pre zraniteľnosť kokaínu. Štúdie PET u potkanov s vysokou impulzivitou (vlastnosť spojená so zvýšeným podávaním kokaínu) ukazujú zníženú dostupnosť D2 / D3 DAR vo ventrálnom striate (Dalley a kol., 2007). Hladiny D2 DAR v NAc sú tiež znížené u potkanov, ktoré vykazujú vysokú lokomotorickú odozvu na novosť, ďalšiu vlastnosť spojenú so zraniteľnosťou závislostí (Hooks a kol., 1994). Naše výsledky u potkanov naznačujú, že znížené hladiny D2 DAR v NAc môžu byť tiež dôsledkom opakovanej expozície kokaínu v súlade so štúdiami na opiciach a ľuďoch (vyššie). Avšak dve štúdie autorádiografie na potkanoch zistili výsledky, ktoré sa líšia od našich. Ben-Shahar a kol. (2007) nepozorovali znížené hladiny D2 DAR v NAc po vysadení (20 min, 14 dní 60 dní) z režimu vlastného podávania rozšíreného prístupu kokaínu podobného nášmu (6 h / deň), hoci poklesy boli pozorované v NAc škrupine po režime s obmedzeným prístupom (2 hr / deň) a 14 dní odňatia (Ben-Shahar a kol., 2007). Stéfanski a kol. (2007) nezistili žiadne zmeny v hladinách D2 DAR v jadre alebo škrupine 24 h po vysadení obmedzeného prístupu kokaínu (2 h / deň), aj keď hladiny D2 DAR sa znížili pri kontrolách s kokaínom v jarmokoch. Ako je uvedené vyššie, receptorová autorádiografia meria celkové bunkové receptory, zatiaľ čo PET a proteínové sieťové štúdie merajú receptory na povrchu buniek.

Celkovo štúdie o vzťahu medzi hladinami D2 DAR a samopodaním kokaínu podporujú model, v ktorom D2 DARs normálne obmedzujú samopodávanie kokaínu. Preto navrhujeme, aby znížené hladiny D2 DAR pozorované v našich experimentoch prispeli k vyhľadávaniu kokaínu vyvolaného cue po vysadení kokaínu. Konkrétne skutočnosť, že D2 DAR povrchová expresia v NAc jadre bola znížená na WD45, ale nie WD1, v kombinácii s kľúčovou úlohou NAc jadra v cue-indukovanom vyhľadávaní kokaínu, naznačuje, že časovo závislá D2 DAR downregulácia v NAc jadre môže prispievajú k časovo závislej intenzifikácii vyhľadávania kokaínu vyvolaného cue. To by predpovedalo, že infúzia agonistu D2 intra-NAc počas vysadenia by znížila vyhľadávanie kokaínu vyvolané cue. Žiaľ, žiadne štúdie neskúmali účinky intra-NAc D2 DAR liekov v inkubačnom modeli. Na druhej strane štúdie opätovného uvedenia kokaínu na trh naznačujú, že D1 a D2 DARs v shell a mediálnom jadre spolupracujú na podpore hľadania kokaínu (Anderson a kol., 2003; Bachtell a kol., 2005; Schmidt a Pierce, 2006; Schmidt a kol., 2006). Na základe týchto zistení možno predpokladať, že znížená expresia D2 DAR pozorovaná v našich experimentoch zníži hľadanie kokaínu, to znamená, že vyvolá opačný účinok ako intenzita pozorovaná v závislosti od abstinencie. Tento nesúlad môže odrážať problémy, ktoré prinieslo zovšeobecnenie z reintegrácie kokaínu po ukončení tréningu na cue-navodené kokaínové vyhľadávanie po vysadení.

Časovo závislé zvýšenie povrchovej expresie D3 DAR sa vyskytuje v jadre NAc po prerušení podávania kokaínu.

Štúdie liekov preferujúcich D3 DAR v samoliečivom užívaní kokaínu a paradigmách obnovenia naznačujú, že antagonisty D3 DAR môžu byť užitočné pri liečbe závislosti od kokaínu a najmä v redukcii reaktivity na podnety súvisiace s kokaínom (Heidbreder a kol., 2005; 2008; Le Foll a kol., 2005; Xi a Gardner, 2007). Tieto výsledky naznačujú, že aktivácia D3 DAR endogénnou DA sa môže podieľať na sprostredkovaní vyhľadávania kokaínu vyvolaného cue. Naše výsledky ukazujú, že povrchová expresia D3 DAR v jadre NAc sa na WD1 nezmenila zo samopodania rozšíreného prístupu kokaínu, ale zvýšila sa na WD45 v súvislosti s inkubáciou túžby po kokaíne. Povrchová expresia D3 DAR sa významne nezvyšovala v škrupine, hoci došlo k malému, ale významnému zvýšeniu povrchového / intracelulárneho pomeru. Vzhľadom na úlohu prenosu D3 DAR v reakcii na podnety asociované s kokaínom a na význam jadra pre vyhľadávanie kokaínu vyvolaného cue, je lákavé špekulovať, že zvýšená povrchová expresia D3 DAR v jadre NAc prispela k inkubácii kokaínu indukovaného cue. túžba, ktorá je pozorovaná na WD45. Avšak neurálne miesto, na ktorom D3 DAR antagonisty pôsobia na redukciu hľadania kokaínu, nebolo stanovené. Konkrétne, v žiadnej štúdii sa neskúmal účinok intra-NAc injekcie D3 DAR uprednostňujúceho lieky pri vyhľadávaní kokaínu vyvolanom cue. V inom modeli Schmidt a kol. (2006) zistili, že injekcia agonistu PD3 preferujúceho PD 128,907 do jadra alebo škrupiny nespôsobila opätovné zavedenie kokaínu hľadajúceho po tréningu zániku.

Naše výsledky sú vo všeobecnosti konzistentné so štúdiami autorádiografie receptorov, ktoré merali celkové hladiny D3 DAR v NAc po expozícii kokaínu. Staley a Mash (1996) hlásili, že väzba D3 DAR bola vyššia v NAc obetí predávkovania kokaínom v porovnaní s kontrolami zhodnými s vekom. Po expozícii kokaínu v paradigme podmieneného miesta preferencie a troch dňoch odobratia vykazovali myši zvýšenú väzbu D3 DAR v NAc jadre a shell (Le Foll a kol., 2002). Neisewander a kol. (2004) namerané naviazanie D3 DAR u potkanov s rozsiahlymi skúsenosťami so samoliečbou kokaínom, ktoré boli testované na reintegráciu kokaínu po rôznych obdobiach vysadenia a potom usmrtili 24 h neskôr. Väzba D3 DAR v NAc sa nezmenila na WD1, ale po dlhšom čase sa zvýšila (WD31-32), čo je v súlade s naším pozorovaním časovo závislého zvýšenia. Okrem toho liečba liekmi počas vysadenia, pri ktorej sa znížil počet vyhľadávaných kokaínov, tiež zmiernila zvýšenie väzby D3 DAR, čo naznačuje, že regulácia D3 DAR je funkčne spojená s vyhľadávaním kokaínu. Treba poznamenať, že D3 DAR sa zvyšuje v Neisewander a kol. (2004) boli významné v jadre, zatiaľ čo v škrupine boli pozorované iba trendy, ale subregióny boli analyzované v rostrálnej časti NAc, kde jadro a shell sú menej odlišné. Naša analýza bola vykonaná na jadre a škrupine z rostrálnych a kaudálnych častí NAc.

Kontrastné zmeny v DARNUMX, D1 a D2 DARs po samokontrole kokaínu

Významné rozdiely v obchodovaní a intracelulárnom triedení rôznych podtypov DAR môžu pomôcť vysvetliť naše pozorovanie, že hladiny D2 DAR sú znížené na WD45 po samopodávaní kokaínu, zatiaľ čo hladiny D1 DAR sa nezmenili. Po akútnej expozícii DA agonistu sa všetky DAR internalizujú, ale D1 DARs sa rýchlo recyklujú na povrch, zatiaľ čo D2 DARs sú zacielené na degradáciu (Bartlett a kol., 2005). Ak sa to vyskytne aj po dlhšom vystavení zvýšeným hladinám DA počas samopodania kokaínu, mohlo by to pomôcť vysvetliť naše výsledky prechodného zvýšenia expresie D1 DAR, ale trvalejší pokles expresie D2 DAR. Akumulovanie D3 DARs môže súvisieť s menšou internalizáciou vyvolanou agonistom v porovnaní s D2 DARs (Kim a kol., 2001). Opatrnosť je samozrejme potrebná pri extrapolácii odoziev DAR v expresných systémoch po krátkodobej liečbe agonistami na ich odpovede u dospelých neurónov po dlhodobej liečbe a vysadení kokaínu.

Závery

Uskutočnili sme prvú štúdiu povrchovej expresie DAR po vysadení z opakovaného vystavenia kokaínu, pričom sme použili paradigmu self-administration kokaínu, ktorá vedie k inkubácii túžby po kokaíne. Povrchový výraz D1 DAR sa zvýšil v shell NAc na WD1, ale normalizovaný pomocou WD45. Intracelulárne hladiny D2 DAR sa znížili v NAc jadre a škrupine v obidvoch časoch odstúpenia. Avšak, zatiaľ čo D2 DAR povrchová expresia bola tiež znížená v škrupine v obidvoch časoch odstúpenia, jadro ukázalo zníženú D2 DAR povrchovú expresiu na WD45, ale nie WD1. Kokaínom indukované zmeny D3 DAR povrchu a celková expresia v jadre boli tiež závislé od času; obe opatrenia boli zvýšené na WD45, ale nie na WD1. Funkčné dôsledky týchto zmien je zložité predvídať. Avšak na základe vyššie uvedenej literatúry, vrátane výsledkov, ktoré preukazujú dôležitejšiu úlohu jadra, ako je shell v cue indukovanom vyhľadávaní kokaínu, navrhujeme, aby časovo závislý pokles D2 DAR na povrchu buniek a zvýšenie bunkového povrchu D3 DAR v NAc jadro môže prispieť k inkubácii vyhľadávaného kokaínu vyvolaného cue. Tieto účinky sú však pravdepodobne modulačné vo svetle „sprostredkujúcej“ úlohy receptorov AMPA, ktorým chýba NAc GluR2, na expresiu inkubačnej túžby kokyínu indukovanej cue (Conrad a spol., 2008).

Poďakovanie

Táto práca bola podporená DA009621, DA00453 a NARSAD Distinguished Investigator Award pre MEW, DA020654 pre MM a predoctoral Award National Research Service DA021488 pre KLC

SKRATKY

AMPA
α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazol-4 propionát
BS3
bis (sulfosukcinimidyl) Suberu
VUT v Brne
Dopamínový receptor
Coc
kokaín
GPCR
Receptor spojený s G-proteínom
NAC
Nucleus accumbens
PET
pozitrónová emisná topografia
RT
izbová teplota
Soľ
soľný
SDS
Dodecylsulfát sodný
TBS
Tris pufrovaný fyziologický roztok (TBS)
TBS-T
TBS-Tween-20
WD1
Deň zrušenia 1
WD45
Deň zrušenia 45

poznámky pod čiarou

Zrieknutie sa zodpovednosti vydavateľa: Toto je súbor PDF s neupraveným rukopisom, ktorý bol prijatý na uverejnenie. Ako službu pre našich zákazníkov poskytujeme túto skoršiu verziu rukopisu. Rukopis sa podrobí kopírovaniu, sádzaniu a preskúmaniu výsledného dôkazu skôr, ako sa uverejní vo svojej konečnej podobe. Upozorňujeme, že počas výrobného procesu môžu byť zistené chyby, ktoré by mohli mať vplyv na obsah, a všetky právne zrieknutia sa zodpovednosti, ktoré sa vzťahujú na časopis.

REFERENCIE

  • Alleweireldt AT, Hobbs RJ, Taylor AR, Neisewander JL. Účinky SCH-23390u podané do amygdaly alebo susedného kortexu a bazálnych ganglií na kokaín a samodávkovanie u potkanov. Neuropsychopharmacology. 2006;31: 363-374. [PubMed]
  • Anderson SM, Bari AA, Pierce RC. Podávanie antagonistu dopamínového receptora podobného D1 ako SCH-23390 do prostredia mediálneho jadra accumbens zoslabuje opätovné navodenie navodenia správania u potkanov vyvolaného kokaínom. Psychofarmakológia (Berl) 2003;168: 132-138. [PubMed]
  • Anderson SM, slávny KR, Sadri-Vakili G, Kumaresan V, Schmidt HD, Bass CE, Terwilliger EF, Cha JH, Pierce RC. CaMKII: biochemický most spájajúci akumulátory dopamínu a glutamátu v kokaíne. Nat Neurosci. 2008;11: 344-353. [PubMed]
  • Anderson SM, Pierce RC. Kokaínom indukované zmeny v signalizácii dopamínového receptora: dôsledky pre posilnenie a opätovné zavedenie. Pharmacol a Ther. 2005;106: 389-403. [PubMed]
  • Bachtell RK, Whisler K, Karanian D, Self DW. Účinky intramuskulárneho akumulovania ultrakombinovaných dopamínových agonistov a antagonistov na kokaín a správanie kokaínu pri potkanoch. Psychofarmakológia (Berl) 2005;183: 41-53. [PubMed]
  • Bartlett SE, Enquist J, Hopf FW, Lee JH, Gladher F, Kharazia V, Waldhoer M, Mailliard WS, Armstrong R, Bonci A, Whistler JL. Dopamínová citlivosť je regulovaná cieleným triedením D2 receptorov. Proc Natl Acad Sci USA. 2005;102: 11521-11526. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Ben-Shahar O, Keeley P, Cook M, Brake W, Joyce M, Nyffeler M, Heston R, Ettenberg A. Zmeny hladín receptorov D1, D2 alebo NMDA počas vysadenia z krátkeho alebo predĺženého denného prístupu k IV kokaínu. Brain Res. 2007;1131: 220-228. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Berglind WJ, Case JM, Parker MP, Fuchs RA, pozri RE. Antagonizmus dopamínu D1 alebo D2 receptora v rámci bazolaterálnej amygdaly diferencovane mení získavanie asociácií kokaínových cue, ktoré sú potrebné na opätovné navodenie vyhľadávaného kokaínu vyvolaného cue. Neuroscience. 2006;137: 699-706. [PubMed]
  • Beurrier C, Malenka RC. Zvýšená inhibícia synaptického prenosu dopamínom v nucleus accumbens počas behaviorálnej senzibilizácie na kokaín. J Neurosci. 2002;22: 5817-5822. [PubMed]
  • Beveridge TJ, Smith HR, Nader MA, Porrino LJ. Abstinencia od chronického podávania kokaínu mení striatálne dopamínové systémy u opíc rhesus. Neuropsychopharmacology. 2009;34: 1162-1171. [PubMed]
  • Boudreau AC, Ferrario CR, Glucksman MJ, Wolf ME. Adaptácie signalizačnej dráhy a nové proteínkinázové substráty A súvisiace so senzibilizáciou správania sa na kokaín. J Neurochem. 2009;110: 363-377. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovič M, Wolf ME. AMPA receptory bunkového povrchu v jadrovom nucleus accumbens sa počas stiahnutia kokaínu zvyšujú, ale internalizujú po provokácii kokaínom v spojení so zmenenou aktiváciou mitogén-aktivovaných proteínkináz. J Neurosci. 2007;27: 10621-10635. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Boudreau AC, Wolf ME. Behaviorálna senzibilizácia kokaínu je spojená so zvýšenou expresiou povrchu AMPA receptora v nucleus accumbens. J Neurosci. 2005;25: 9144-9151. [PubMed]
  • Boundy VA, Luedtke RR, Artymyshyn RP, Filtz TM, Molinoff PB. Vývoj polyklonálnych protilátok proti D2 dopamínovým receptorom s použitím sekvenčne špecifických peptidov. Mol Pharmacol. 1993;43: 666-676. [PubMed]
  • Boundy VA, Luedtke RR, Gallitano AL, Smith JE, Filtz TM, Kallen RG, Molinoff PB. Expresia a charakterizácia potkanieho D3 dopamínového receptora: farmakologické vlastnosti a vývoj protilátok. J Pharmacol Exp Ther. 1993b;264: 1002-1011. [PubMed]
  • Bulenger S, Marullo S, Bouvier M. Rozvíjajúca sa úloha homo- a heterodimerizácie pri biosyntéze a dozrievaní receptora spojeného s G-proteínom. Trends Pharmacol Sci. 2005;26: 131-137. [PubMed]
  • Ciccocioppo R, Sanna PP, Weiss F. Kokuínový prediktívny stimul indukuje správanie, ktoré hľadá drogy a neurálnu aktiváciu v limbických oblastiach mozgu po niekoľkých mesiacoch abstinencie: reverziu pomocou D (1) antagonistov. Proc Natl Acad Sci USA. 2001;98: 1976-1981. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Conrad KL, Tseng KY, Uejima JL, Reimers JM, Heng LJ, Shaham Y, Marinelli M, Wolf ME. Tvorba akumulovaných receptorov GluR2-AMPA receptory sprostredkovávajú inkubáciu túžby po kokaíne. Príroda. 2008;454: 118-121. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Czoty PW, Gage HD, Nader MA. Rozdiely v dostupnosti D2 dopamínového receptora a reakcii na novosť u sociálne umiestnených samčích opíc počas abstinencie od kokaínu. Psychopharmacol Epub. 2010 Jan 13;
  • Czoty PW, Morgan D, Shannon EE, Gage HD, Nader MA. Charakterizácia funkcie dopamínového D1 a D2 receptora v spoločensky umiestnených opiciach rodu Cynomolgus, ktorí si sami podávajú kokaín. Psychofarmakológia (Berl) 2004;174: 381-388. [PubMed]
  • Dalley JW, Fryer TD, Brichard L, Robinson ES, Theobald DE, Laane K, Pena Y, Murphy ER, Shah Y, Probst K, Abakumova I, Aigbirhio FI, Richards HK, Hong Y, Baron JC, Everitt BJ, Robbins TW , Nucleus accumbens Receptory D2 / 3 predpovedajú impulzivitu a kokaínové zosilnenie. Science. 2007;315: 1267-1270. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • David C., Fishburn CS, Monsma FJ, Jr., Sibley DR, Fuchs S. Syntéza a spracovanie dopamínových receptorov D2. Biochem. 1993;32: 8179-8183. [PubMed]
  • De Montis G, Co C, Dworkin SI, Smith JE. Modifikácia komplexu dopamínového receptora D1 u potkanov, ktorým sa podáva kokaín samostatne. Eur J Pharmacol. 1998;362: 9-15. [PubMed]
  • De Vries TJ, Schoffelmeer AN, Binnekade R, Raaso H, Vanderschuren LJ. Relaps k správaniu kokaínu a heroínu sprostredkovanému receptormi dopamínu D2 je časovo závislý a súvisí so senzibilizáciou správania. Neuropsychopharmacology. 2002;26: 18-26. [PubMed]
  • De Vries TJ, Schoffelmeer AN, Binnekade R, Vanderschuren LJ. Dopaminergné mechanizmy sprostredkujúce motiváciu k vyhľadávaniu kokaínu a heroínu po dlhodobom vysadení intravenózneho podávania IV liekov. Psychofarmakológia (Berl) 1999;143: 254-260. [PubMed]
  • Edwards S, Whisler KN, Fuller DC, Orsulak PJ, Self DW. Zmeny závislé od závislostí odoziev D1 a D2 na správanie dopamínových receptorov po chronickej kokaínovej samospráve. Neuropsychopharmacology. 2007;32: 354-366. [PubMed]
  • Ferrario CR, Li X, Wang X, Reimers JM, Uejima JL, Wolf ME. Úloha redistribúcie glutamátového receptora pri lokomotorickej senzibilizácii na kokaín. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 818-833. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Fiorentini C, Busi C, Gorruso E, Gotti C, Spano P, Missale C. Recipročná regulácia funkcie dopamínového D1 a D3 receptora a transport heterodimerizáciou. Mol Pharmacol. 2008;74: 59-69. [PubMed]
  • Fiorentini C, Gardoni F, Spano P, Di Luca M, Missale C. Regulácia prenosu dopamínového D1 receptora a desenzibilizácie oligomerizáciou receptormi glutamátu N-metyl-D-aspartátu. J Biol Chem. 2003;278: 20196-20202. [PubMed]
  • Fishburn CS, Elazar Z, Fuchs S. Diferenciálna glykozylácia a intracelulárny prenos pre dlhé a krátke izoformy dopamínového receptora D2. J Biol Chem. 1995;270: 29819-29824. [PubMed]
  • Voľný RB, Hazelwood LA, Cabrera DM, Spalding HN, Namkung Y, Rankin ML, Sibley DR. Expresia D1 a D2 dopamínového receptora je regulovaná priamou interakciou s chaperónovým proteínom calnexínom. J Biol Chem. 2007;282: 21285-21300. [PubMed]
  • Fuchs RA, Evans KA, Parker MC, pozri RE. Diferenciálne postihnutie jadrových a shell subregiónov nucleus accumbens v podmienenom navodení navodenia kokaínového vyhľadávania u potkanov. Psychofarmakológia (Berl) 2004;176: 459-465. [PubMed]
  • Gawin FH, Kleber HD. Abstinenčná symptomatológia a psychiatrická diagnóza u užívateľov zneužívajúcich kokaín. Klinické pozorovania. Arch. Gen Psychiatry. 1986;43: 107-113. [PubMed]
  • George SR, O'Dowd BF, Lee SP. Oligomerizácia receptora spojeného s G-proteínom a jej potenciál pre objav liečiv. Nat Rev Drug Discov. 2002;1: 808-820. [PubMed]
  • Ghasemzadeh MB, Vasudevan P, Mueller C, Seubert C, Mantsch JR. Regionálne špecifické zmeny v expresii glutamátového receptora a subcelulárnej distribúcii po zániku samopodania kokaínu. Brain Res. 2009;1267: 89-102.
  • Ginés S, Hillion J, Torvinen M, Le Crom S, Casado V, Canela EI, Rondin S, Lew JY, Watson S, Zoli M, Agnati LF, Verniera P, Lluis C, Ferre S, Fuxe K, Franco R. Dopamine Receptory D1 a adenozín A1 tvoria funkčne interagujúce heteromérne komplexy. Proc Natl Acad Sci USA. 2000;97: 8606-8611. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Grimm JW, Nádej BT, Wise RA, Shaham Y. Neuroadaptácia. Inkubácia túžby po kokaíne po odstúpení. Príroda. 2001;412: 141-142. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Haber SN. Bazálne ganglia primátov: paralelné a integračné siete. J Chem Neuroanat. 2003;26: 317-330. [PubMed]
  • Heidbreder C. Selektívny antagonizmus na dopamínových D3 receptoroch ako cieľ farmakoterapie drogovej závislosti: prehľad predklinických dôkazov. CNS Neurol Disord Drug Targets. 2008;7: 410-421. [PubMed]
  • Heidbreder CA, Gardner EL, Xi ZX, Thanos PK, Mugnaini M., Hagan JJ, Ashby CR., Jr. Úloha centrálnych dopamínových D3 receptorov pri drogovej závislosti: prehľad farmakologických dôkazov. Brain Res Brain Res Rev. 2005;49: 77-105. [PubMed]
  • Henry DJ, Biela FJ. Opakované podávanie kokaínu spôsobuje trvalé zvýšenie citlivosti D1 dopamínového receptora v krysom jadre accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1991;258: 882-890. [PubMed]
  • Henry DJ, Biela FJ. Pretrvávanie senzibilizácie správania voči paralelám kokaínu zvyšuje inhibíciu neurónov nucleus accumbens. J Neurosci. 1995;15: 6287-6299. [PubMed]
  • Hooks MS, Juncos JL, Justice JB, Jr., Meiergerd SM, Povlock SL, Schenk JO, Kalivas PW. Individuálna lokomotorická odozva na novosť predpovedá selektívne zmeny receptorov D1 a D2 a mRNA. J Neurosci. 1994;14: 6144-6152. [PubMed]
  • Huang Q, Zhou D, Chase K, Gusella JF, Aronin N, DiFiglia M. Imunohistochemická lokalizácia D1 dopamínového receptora v mozgu potkanov odhalila jeho axonálny transport, pre- a postsynaptickú lokalizáciu a prevalenciu v bazálnych gangliách, limbickom systéme a talamické retikulárne jadro. Proc Natl Acad Sci US A. 1992;89: 11988-11992. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Ikemoto S. Zapojenie čuchového tuberkulu do odmeňovania kokaínu: štúdie intrakraniálnej samosprávy. J Neurosci. 2003;23: 9305-9311. [PubMed]
  • Ikemoto S, Qin M, Liu ZH. Funkčné delenie pre primárne posilnenie D-amfetamínu leží medzi mediálnym a laterálnym ventrálnym striatum: je rozdelenie akumulovaného jadra, škrupiny a čuchového tuberkulu platné? J Neurosci. 2005;25: 5061-5065. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Ito R, Dalley JW, Howes SR, Robbins TW, Everitt BJ. Disociácia v podmienenom uvoľňovaní dopamínu v jadre nucleus accumbens jadro a shell v reakcii na kokaínové podnety a pri správaní kokaínu u potkanov. J Neurosci. 2000;20: 7489-7495. [PubMed]
  • Ito R, Robbins TW, Everitt BJ. Diferenciálna kontrola nad správaním kokaínu pri hľadaní jadra a shell. Nat Neurosci. 2004;7: 389-397. [PubMed]
  • Javitch JA. Mravce idú pochodovať dva po dvoch: oligomérna štruktúra receptorov spojených s G-proteínom. Mol Pharmacol. 2004;66: 1077-1082. [PubMed]
  • Kim KM, Valenzano KJ, Robinson SR, Yao WD, Barak LS, Caron MG. Diferenciálna regulácia receptorov dopamínu D2 a D3 receptorovými kinázami spojenými s G proteínom a beta-arestínmi. J Biol Chem. 2001;276: 37409-37414. [PubMed]
  • Kim OJ, Ariano MA, Namkung Y, Marinec P, Kim E, Han J, Sibley DR. Expresia a prenos D2 dopamínového receptora je regulovaná prostredníctvom priamych interakcií so ZIP. J Neurochem. 2008;106: 83-95. [PubMed]
  • Kosten T, Kosten T, Poling J, Oliveto A. Inkubácia relapsu kokaínu počas klinického skúšania disulfiramu. Vysoká škola o problémoch drogovej závislosti. 2005 Abstrakt #357.
  • Kourrich S, Rothwell PE, Klug JR, Thomas MJ. Skúsenosť s kokaínom kontroluje obojsmernú synaptickú plasticitu v nucleus accumbens. J Neurosci. 2007;27: 7921-7928. [PubMed]
  • Lachowicz JE, Sibley DR. Molekulárne charakteristiky dopamínových receptorov cicavcov. Pharmacol Toxicol. 1997;81: 105-113. [PubMed]
  • Le Foll B, Frances H, Diaz J, Schwartz JC, Sokoloff P. Úloha dopamínového receptora D3 v reaktivite na podnety súvisiace s kokaínom u myší. Eur J Neurosci. 2002;15: 2016-2026. [PubMed]
  • Le Foll B, Goldberg SR, Sokoloff P. Receptor dopamínu D3 a drogová závislosť: účinky na odmenu alebo mimo nej? Neuropharmacology. 2005;49: 525-541. [PubMed]
  • Lee SP, O'Dowd BF, Ng GY, Varghese G, Akil H, Mansour A, Nguyen T, George SR. Inhibícia expresie bunkového povrchu mutantnými receptormi demonštruje, že D2 dopamínové receptory existujú v bunke ako oligoméry. Mol Pharmacol. 2000;58: 120-128. [PubMed]
  • Lee SP, O'Dowd BF, Rajaram RD, Nguyen T, George SR. Homodimerizácia D2 dopamínového receptora je sprostredkovaná viacerými miestami interakcie vrátane intermolekulárnej interakcie zahŕňajúcej transmembránovú doménu 4. Biochémia (Mosc) 2003;42: 11023-11031.
  • Lee SP, So CH, Rashid AJ, Varghese G, Cheng R, Lanca AJ, O'Dowd BF, George SR. Ko-aktivácia dopamínových D1 a D2 receptorov generuje nový signál vápnika sprostredkovaný fosfolipázou C. J Biol Chem. 2004;279: 35671-35678. [PubMed]
  • Lee SP, Xie Z, Varghese G, Nguyen T, O'Dowd BF, George SR. Oligomerizácia dopamínových a serotonínových receptorov. Neuropsychopharmacology. 2000b;23: S32-40. [PubMed]
  • Lu L, Grimm JW, Dempsey J, Shaham Y. Hľadanie kokaínu počas predĺžených ochranných lehôt u potkanov: rôzne časové priebehy reakcie vyvolané kokaínovými podnetmi v porovnaní s primárnou aktiváciou kokaínu počas prvých 6 mesiacov. Psychofarmakológia (Berl) 2004;176: 101-108. [PubMed]
  • Lu L, Grimm JW, Hope BT, Shaham Y. Inkubácia túžby po kokaíne po vysadení: prehľad predklinických údajov. Neuropharmacology. 2004b;47(Suppl 1): 214-226. [PubMed]
  • Marcellino D, Ferre S, Casado V, Cortes A, Le Foll B, Mazzola C, Drago F, Saur O, Stark H, Soriano A, Barnes C, Goldberg SR, Lluis C, Fuxe K, Franco R. Identifikácia dopamínu D1 -D3 receptorové heteroméry. Indikácie pre úlohu synergických interakcií D1-D3 receptora v striate. J Biol Chem. 2008;283: 26016-26025. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Martinez D, Broft A, Foltin RW, Slifstein M, Hwang DR, Huang Y, Perez A, Frankle WG, Cooper T, Kleber HD, Fischman MW, Laruelle M. Závislosť od kokaínu a dostupnosť receptora d2 vo funkčnom členení striatum: vzťahu k správaniu o kokaíne. Neuropsychopharmacology. 2004;29: 1190-1202. [PubMed]
  • Martinez D, Orlowska D, Narendran R, Slifstein M, Liu F, Kumar D, Broft A, Van Heertum R, Kleber HD. Dopamínový typ 2 / 3 receptorová dostupnosť v striate a sociálny stav u ľudských dobrovoľníkov. Biol Psychiatry. 2010;67: 275-278. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Martinez D, Slifstein M, Narendran R, Foltin RW, Broft A, Hwang DR, Perez A, Abi-Dargham A, Fischman MW, Kleber HD, Laruelle M. Receptory dopamínu D1 v závislosti od kokaínu, merané pomocou PET a voľba samoobnovenia spravovať kokaín. Neuropsychopharmacology. 2009;34: 1774-1782. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • McFarland K, Kalivas PW. Obvody sprostredkujúce opätovné zavedenie kokaínu vyvolaného správania pri hľadaní drog. J Neurosci. 2001;21: 8655-8663. [PubMed]
  • Missale C, Nash SR, Robinson SW, Jaber M, Caron MG. Dopamínové receptory: od štruktúry k funkcii. Physiol Rev. 1998;78: 189-225. [PubMed]
  • Moore RJ, Vinsant SL, Nader MA, Porrino LJ, Friedman DP. Vplyv vlastného podávania kokaínu na striatálne dopamínové receptory D1 u opíc rhesus. Synapsie. 1998;28: 1-9. [PubMed]
  • Moore RJ, Vinsant SL, Nader MA, Porrino LJ, Friedman DP. Vplyv vlastného podávania kokaínu na dopamínové receptory D2 u opíc rhesus. Synapsie. 1998b;30: 88-96. [PubMed]
  • Morgan D, Grant KA, Gage HD, Mach RH, Kaplan JR, Prioleau O, Nader SH, Buchheimer N, Ehrenkaufer RL, Nader MA. Sociálna dominancia u opíc: receptory dopamínu D2 a samopodávanie kokaínu. Nat Neurosci. 2002;5: 169-174. [PubMed]
  • Nader MA, Daunais JB, Moore T, Nader SH, Moore RJ, Smith HR, Friedman DP, Porrino LJ. Účinky samopodania kokaínu na striatálne dopamínové systémy u opíc rhesus: počiatočná a chronická expozícia. Neuropsychopharmacology. 2002;27: 35-46. [PubMed]
  • Nader MA, Morgan D, Gage HD, Nader SH, Calhoun TL, Buchheimer N, Ehrenkaufer R, Mach RH. PET zobrazovanie dopamínových D2 receptorov počas chronického samoadminačného užívania kokaínu u opíc. Nat Neurosci. 2006;9: 1050-1056. [PubMed]
  • Neisewander JL, Baker DA, Fuchs RA, Tran-Nguyen LT, Palmer A, Marshall JF. Expresia proteínu Fos a správanie kokaínu pri potkanoch po expozícii prostrediu na podávanie kokaínu. J Neurosci. 2000;20: 798-805. [PubMed]
  • Neisewander JL, Fuchs RA, Tran-Nguyen LT, Weber SM, Coffey GP, Joyce JN. Zvýšenie väzby dopamínového receptora D3 u potkanov, ktorí dostávali kokaínovú výzvu v rôznych časových okamihoch po samopodávaní kokaínu: dôsledky pre správanie, pri ktorom sa kokaín hľadá. Neuropsychopharmacology. 2004;29: 1479-1487. [PubMed]
  • Nelson CL, Milovanovič M, Wetter JB, Ford KA, Wolf ME. Behaviorálna senzibilizácia na amfetamín nie je sprevádzaná zmenami expresie povrchu glutamátového receptora v jadrovom nucleus accumbens. J Neurochem. 2009;109: 35-51. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Neve KA, Seamans JK, Trantham-Davidson H. Signalizácia receptora dopamínu. J Recept Signal Transduct Res. 2004;24: 165-205. [PubMed]
  • Nicola SM, Surmeier J, Malenka RC. Dopaminergná modulácia neuronálnej excitability v striate a nucleus accumbens. Annu Rev Neurosci. 2000;23: 185-215. [PubMed]
  • O'Donnell P. Dopamínové blokovanie nervových súborov predného mozgu. Eur J Neurosci. 2003;17: 429-435. [PubMed]
  • Paspalas CD, Goldman-Rakic ​​PS. Mikrodomény pre neurotransmisiu dopamínového objemu v primátovom prefrontálnom kortexe. J Neurosci. 2004;24: 5292-5300. [PubMed]
  • Pierce RC, Kalivas PW. Obvodový model vyjadrenia senzibilizácie správania na psychostimulanty podobné amfetamínu. Brain Res Brain Res Rev. 1997;25: 192-216. [PubMed]
  • Pinto A, Sesack SR. Ultraštrukturálna analýza prefrontálnych kortikálnych vstupov do potkanej amygdaly: priestorové vzťahy k predpokladaným dopamínovým axónom a D1 a D2 receptorom. Funkcia štruktúry mozgu. 2008;213: 159-175. [PubMed]
  • Rocheville M, Lange DC, Kumar U, Patel SC, Patel RC, Patel YC. Receptory pre dopamín a somatostatín: tvorba hetero-oligomérov so zvýšenou funkčnou aktivitou. Science. 2000;288: 154-157. [PubMed]
  • Rodd-Henricks ZA, McKinzie DL, Li TK, Murphy JM, McBride WJ. Kokaín sa podáva sám do škrupiny, ale nie do jadra nucleus accumbens potkanov Wistar. J Pharmacol Exp Ther. 2002;303: 1216-1226. [PubMed]
  • Scarselli M, Novi F, Schallmach E, Lin R, Baragli A, Colzi A, Griffon N, Corsini GU, Sokoloff P, Levenson R, Vogel Z, Maggio R. D2 / D3 dopamínové receptorové heterodiméry vykazujú jedinečné funkčné vlastnosti. J Biol Chem. 2001;276: 30308-30314. [PubMed]
  • Schmidt HD, Anderson SM, Pierce RC. Stimulácia D1-podobných alebo D2 dopamínových receptorov v škrupine, ale nie v jadre, nucleus accumbens obnovuje správanie kokaínu, ktoré sa hľadá u potkanov. Eur J Neurosci. 2006;23: 219-228. [PubMed]
  • Schmidt HD, Pierce RC. Kooperatívna aktivácia dopamínových receptorov podobných D1 a D2 podobných receptorom v jadre nucleus accumbens je potrebná na obnovenie správania kokaínu hľadajúceho u potkanov. Neuroscience. 2006;142: 451-461. [PubMed]
  • Self DW, Barnhart WJ, Lehman DA, Nestler EJ. Opačná modulácia kokaín-hľadajúceho správania agonistami dopamínového receptora podobného D1 a D2. Science. 1996;271: 1586-1589. [PubMed]
  • Takže CH, Verma V, Alijaniaram M, Cheng R, Rashid AJ, O'Dowd BF, George SR. K vápnikovej signalizácii prostredníctvom dopamínových D5 receptorov a D5-D2 receptorových hetero-oligomérov dochádza mechanizmom odlišným od mechanizmu pre hetero-oligoméry dopamínových D1-D2 receptorov. Mol Pharmacol. 2009;75: 843-854. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Staley JK, Mash DC. Adaptívny vzostup D3 dopamínových receptorov v mozgu odmeňuje okruhy ľudských úmrtí kokaínu. J Neurosci. 1996;16: 6100-6106. [PubMed]
  • Stéfanski R, Ziolkowska B, Kusmider M, Mierzejewski P, Wyszogrodzka E, Kolomanska P, Dziedzicka-Wasylewska M, Przewlocki R, Kostowski W. Aktívne verzus pasívne podávanie kokaínu: rozdiely v neuroadaptívnych zmenách v mozgovom dopaminergnom systéme. Brain Res. 2007;1157: 1-10. [PubMed]
  • Sutton MA, Schmidt EF, Choi KH, Schad CA, Whisler K, Simmons D, Karanian DA, Monteggia LM, Neve RL, Self DW. Zvýšenie regulácie AMPA receptorov vyvolané extinkciou znižuje správanie, pri ktorom dochádza ku kokaínu. Príroda. 2003;421: 70-75. [PubMed]
  • Volkow ND, Fowler JS, Wang GJ, Baler R, Telang F. Zobrazovanie úlohy dopamínu pri užívaní drog a závislosti. Neuropharmacology. 2009;56(Suppl 1): 3-8. [Článok bez PMC] [PubMed]
  • Volkow ND, Fowler JS, Wang GJ, Hitzemann R, Logan J, Schlyer DJ, Dewey SL, Wolf AP. Znížená dostupnosť dopamínového D2 receptora je spojená so zníženým frontálnym metabolizmom u osôb užívajúcich kokaín. Synapsie. 1993;14: 169-177. [PubMed]
  • Volkow ND, Fowler JS, Wang GJ, Swanson JM, Telang F. Dopamín pri zneužívaní drog a závislosti: výsledky zobrazovacích štúdií a dôsledky liečby. Arch Neurol. 2007;64: 1575-1579. [PubMed]
  • Volkow ND, Fowler JS, Wolf AP, Schlyer D, Shiue CY, Alpert R, Dewey SL, Logan J, Bendriem B, Christman D a kol. Účinky chronického zneužívania kokaínu na postsynaptické dopamínové receptory. Am J psychiatrie. 1990;147: 719-724. [PubMed]
  • Volkow ND, Wang GJ, Fowler JS, Logan J, Gatley SJ, Gifford A, Hitzemann R, Ding YS, Pappas N. Predikcia posilnenia odpovedí na psychostimulanty u ľudí receptorovými hladinami dopamínového dopamínového D2 receptora. Am J psychiatrie. 1999;156: 1440-1443. [PubMed]
  • Volkow ND, Wang GJ, Fowler JS, Logan J, Gatley SJ, Hitzemann R, Chen AD, Dewey SL, Pappas N. Znížená striatálna dopaminergná odozva u detoxikovaných subjektov závislých od kokaínu. Príroda. 1997;386: 830-833. [PubMed]
  • Volkow ND, Wang GJ, Fowler JS, Thanos PP, Logan J, Gatley SJ, Gifford A, Ding YS, Wong C, Pappas N. Brain DA D2 receptory predpovedajú posilňujúce účinky stimulantov u ľudí: replikačná štúdia. Synapsie. 2002;46: 79-82. [PubMed]
  • Wang H, Pickel VM. Dopamínové receptory D2 sú prítomné v prefrontálnych kortikálnych aferenciách a ich cieľoch v náplastiach jadra potkanieho kaudátu a putamenu. J Comp Neurol. 2002;442: 392-404. [PubMed]
  • Wolf ME, Ferrario CR. AMPA receptorová plasticita v nucleus accumbens po opakovanej expozícii kokaínu. Neurosci Biobehav Rev Epub. 2010 Jan 28;
  • Worsley JN, Moszczynska A, Falardeau P, Kalasinsky KS, Schmunk G, Guttman M, Furukawa Y, Ang L, Adams V, Reiber G, Anthony RA, Wickham D, Kish SJ. Dopamínový receptor D1 je zvýšený v nucleus accumbens u ľudí, chronických užívateľov metamfetamínu. Mol Psychiatry. 2000;5: 664-672. [PubMed]
  • Xi ZX, Gardner EL. Farmakologické účinky NGB-2904, selektívneho antagonistu receptora dopamínu D3, na zvieracích modeloch drogovej závislosti. CNS Drug Rev. 2007;13: 240-259. [PubMed]