Detekcia molekulárnych zmien v neurónoch exprimujúcich Fos s aktiváciou metamfetamínu z jediného krysieho dorzálneho striatu s použitím fluorescenčne aktivovaného bunkového triedenia (FACS) (2013)

J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 Aug 21.

Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, Hou X, Shaham Y., Dúfam, že BT.

abstraktné

Metamfetamín a iné lieky aktivujú malý podiel všetkých neurónov v mozgu. V minulosti sme vyvinuli metódu založenú na fluorescenčne aktivovaných bunkových triedeniach (FACS) na charakterizáciu molekulárnych zmien indukovaných selektívne v aktivovaných neurónoch, ktoré exprimujú marker neurálnej aktivity Fos. Tento spôsob však vyžaduje zhromažďovanie vzoriek od mnohých potkanov. Teraz opisujeme modifikovanú metódu založenú na FACS na charakterizáciu molekulárnych zmien v dorzálnych striatálnych neurónoch exprimujúcich Fos z jedinej krysy pomocou multiplexnej pred amplifikačnej stratégie.

Imunohistochémia Fos a NeuN (neuronálny marker) ukazuje, že 5-6% neurónov dorzálnych striatum bolo aktivovaných 90 min po akútnych injekciách metamfetamínu (5 mg / kg, ip), zatiaľ čo menej ako 0.5% neurónov bolo aktivovaných injekciami fyziologického roztoku.

Použili sme FACS na separáciu NeuN-označených neurónov do Fos-pozitívnych a Fos-negatívnych neurónov a hodnotili expresiu mRNA s použitím RT-qPCR od piatich Fos-pozitívnych neurónov. Metamfetamín indukoval 3-20-násobné zvýšenie okamžitých skorých génov arc, homer-2, c-fos, fosB a jeho izoforiem (AfosB a novú izoformu AFosB-2) v Fos-pozitívnych, ale nie Fos-negatívnych neurónoch. Okamžitá včasná indukcia génovej mRNA bola 10-násobne nižšia alebo neprítomná, keď sa hodnotila v netriedených vzorkách z homogenátov jednovrstvových dorzálnych striatum. Naša modifikovaná metóda umožňuje skúmať jedinečné molekulárne zmeny v neurónoch aktivovaných liekmi alebo podnetmi asociovanými s liečivom v komplexných modeloch závislosti.

Metamfetamín a iné lieky aktivujú malý podiel všetkých neurónov v mozgu. Tu uvádzame vylepšený spôsob charakterizácie molekulárnych zmien indukovaných selektívne v aktivovaných neurónoch, ktoré exprimujú marker neurálnej aktivity Fos. Použili sme FACS spolu s cielenou pre-amplifikáciou PCR na vyhodnotenie akútnej expresie génu indukovanej metamfetamínom z niekoľkých neurónov 5 Fos-exprimujúcich z dorzálneho striata jedného potkana. Metamfetamín indukoval 3-20-násobné zvýšenie okamžitých skorých génov (IEG) v Fos-pozitívnych, ale nie Fos-negatívnych neurónoch. Cielená pred-amplifikácia PCR umožňuje uskutočňovať štúdium jedinečných molekulárnych zmien v neurónoch aktivovaných liečivami alebo podnetmi asociovanými s liečivom v komplexných modeloch závislosti.

Vydané 2013. Tento článok je prácou vlády USA a je vo verejnej sfére v USA.