Diferenciálna expresia FosB proteínov a potenciálnych cieľových génov vo vybraných oblastiach mozgu u pacientov so závislosťou a depresiami (2016)

  • Paula A. Gajewski,
  • Gustavo Turecki,
  • Alfred J. Robison

Pridané: August 5, 2016

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355

abstraktné

Chronické vystavenie stresu alebo návykovým látkam súvisí so zmenenou expresiou génov v celom tele a predpokladá sa, že zmeny v expresii génov v jednotlivých oblastiach mozgu sú základom mnohých psychiatrických ochorení, vrátane závažnej depresívnej poruchy a drogovej závislosti. Predklinické modely týchto porúch poskytli dôkazy o mechanizmoch tejto zmenenej génovej expresie, vrátane transkripčných faktorov, ale dôkazy podporujúce úlohu týchto faktorov u ľudských pacientov sa pomaly objavujú. Transkripčný faktor AFosB je indukovaný v prefrontálnom kortexe (PFC) a hipokampuse (HPC) hlodavcov ako odozva na stres alebo kokaín a jeho expresia v týchto oblastiach má regulovať ich „zhora nadol“ kontrolu odmeňovania obvodov, vrátane jadra accumbens (NAc). Tu používame biochémiu na preskúmanie výrazu FosB rodiny transkripčných faktorov a ich potenciálnych génových cieľov vo vzorkách PFC a HPC postmortem od depresívnych pacientov a závislých od kokaínu. Preukázali sme, že AFosB a iné izoformy FosB sú v HPC, ale nie v PFC, znížené v mozgoch depresívnych aj závislých jedincov. Ďalej sme ukázali, že potenciálne AF transkripčné ciele, vrátane GluA2, sú tiež downregulované v HPC, ale nie v PFC kokaínových závislých. Preto poskytujeme prvý dôkaz FosB génová expresia v humánnych HPC a PFC u týchto psychiatrických porúch a vo svetle nedávnych zistení, ktoré demonštrujú kritickú úlohu HPC AFosB v hlodavčích modeloch učenia a pamäte, tieto údaje naznačujú, že znížený AFosB v HPC by mohol potenciálne byť základom kognitívnych deficitov sprevádzajúcich chronické zneužívanie kokaínu alebo depresie.  

citácie: Gajewski PA, Turecki G, Robison AJ (2016) Diferenciálna expresia proteínov FosB a potenciálnych cieľových génov vo vybraných mozgových oblastiach závislostí a depresívnych pacientov. PLoS ONE 11 (8): e0160355. doi: 10.1371 / journal.pone.0160355

Editor: Ryan K. Bachtell, University of Colorado Boulder, Spojené štáty americké

obdržal: Február 29, 2016; Prijatý: Jún 18, 2016; Publikované: Augusta 5, 2016

Copyright: © 2016 Gajewski a kol. Ide o otvorený prístupový článok distribuovaný podľa podmienok Creative Commons Attribution License, ktoré umožňujú neobmedzené používanie, distribúciu a reprodukciu v akomkoľvek médiu za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané.

Dostupnosť údajov: Všetky relevantné údaje sú uvedené v dokumente.

financovania: Autor PAG dostal nejakú podporu platu z grantu pre autora AJR z Whitehall Foundation. Poskytovatelia nemali žiadnu úlohu pri navrhovaní štúdií, zbere údajov a analýze, rozhodnutí o publikovaní alebo príprave rukopisu.

Konkurenčné záujmy: Autori vyhlásili, že neexistujú konkurenčné záujmy.

úvod

Mechanizmy psychiatrických ochorení ako depresia a závislosť na molekulárnej a obvodovej úrovni nie sú úplne pochopené a tieto znalosti sú kľúčové pre racionálny rozvoj nových a lepších liečebných postupov. Zmeny v génovej expresii v nucleus accumbens (NAc) av oblastiach mozgu, ktoré vykazujú zhora nadol kontrolu nad NAc funkciou, ako napríklad prefrontálny kortex (PFC) a hipokampus (HPC), sa podieľajú na patogenéze závislosti a depresie v mnohých štúdiách. v obidvoch modelových organizmoch av post-mortem ľudskom mozgu [1-5]. Mnohé súčasné liečby depresie pôsobia prostredníctvom chronického zlepšenia serotonergnej a / alebo dopaminergnej signalizácie a prakticky všetky lieky zneužívania ovplyvňujú signalizáciu dopamínu v NAc. Okrem toho závislosť a depresia sú vysoko komorbidné, pričom takmer tretina pacientov s veľkou depresívnou poruchou tiež trpí poruchami užívania látok a komorbiditou, čo vedie k vyššiemu riziku samovraždy a väčšej sociálnej a osobnej ujmy.6, 7]. Súhrnne povedané, tieto údaje naznačujú, že chronické maladaptácie v mezolimbickom dopamínovom okruhu a súvisiacich štruktúrach môžu byť základom závislosti aj depresie, a že zmeny v expresii génov budú pravdepodobne zohrávať kľúčovú úlohu v týchto maladaptáciách.

Ako sa depresia a závislosť vyvíjajú v čase a môžu byť spojené s chronickým vystavením stresu a / alebo drogám zneužívania [8, 9] a pretože typické antidepresíva, ktoré sa zameriavajú na serotonergickú a dopaminergnú signalizáciu, vyžadujú, aby boli týždne liečby účinné [10], zdá sa pravdepodobné, že patogenéza týchto chorôb a mechanizmy ich liečby môžu byť spojené dlhodobý zmeny v expresii génov. Takéto zmeny by mohli vyplynúť z epigenetických modifikácií génovej štruktúry a skutočne sa dokazujú dôkazy o kľúčovej úlohe metylácie DNA a modifikácii histónov v závislosti aj depresii [11-14]. To však nevylučuje potenciálnu úlohu transkripčných faktorov v týchto procesoch, najmä stabilných transkripčných faktorov indukovaných chronickou neurónovou aktiváciou. Jedným z takýchto transkripčných faktorov je AFosB [1, 15, 16], variant spájania vyrobený z FosB gen. Na rozdiel od proteínu FosB s úplnou dĺžkou je AFosB pozoruhodne stabilný v porovnaní s inými bezprostrednými skorými génovými produktmi (polčas do 8 dní v mozgu [17]), primárne kvôli skráteniu dvoch degron domén v c-terminus [18], ako aj stabilizujúca fosforylácia na Ser27 [19, 20]. AFosB je indukovaný v mozgu hlodavcov, vrátane NAc a príbuzných štruktúr, stresom [21-23], antidepresíva [22] a drogy zneužívania [24]. Okrem toho modely hlodavcov implikujú expresiu AFosB v NAc v oboch závislostiach [20, 25] a depresie [26, 27], a nedávne štúdie naznačujú úlohu FosB pri týchto ochoreniach v PFC [21] a HPC [28]. V NAc podporuje expresia AFosB zvýšenú psychomotorickú senzibilizáciu a odmenenie psychostimulancií u hlodavcov [20, 25]. NAc AFosB tiež pôsobí ako faktor proresiliencie v myšacom chronickom sociálnom porážkovom modeli depresie a jeho expresia je potrebná pre antidepresívne funkcie [26]. Na rozdiel od toho expresia AFosB v PFC podporuje náchylnosť k sociálnemu porážkovému stresu u myší [21], čo naznačuje, že AFosB hrá veľmi odlišné úlohy v odmeňovacom okruhu av oblastiach mozgu, ktoré ho inervujú. Nakoniec je AFosB indukovaný v myšom dorzálnom HPC učením a jeho funkcia je potrebná pre normálnu tvorbu priestorovej pamäte [28], ktorý poskytuje možný mechanizmus pre kognitívne deficity často sprevádzajúce chronickú expozíciu a / alebo depresiu liekov [29-31].

Pretože AFosB je transkripčný faktor, predpokladá sa, že má svoje biologické účinky prostredníctvom modulácie expresie vybraných cieľových génov a mnohé z týchto cieľových génov sa podieľajú na depresii a závislosti. AFosB reguluje expresiu viacnásobných podjednotiek a-amino-3-hydroxy-5-metyl-4-izoxazolepropiónovej kyseliny (AMPA) - a glutamátových receptorov typu N-metyl-D-aspartátu (NMDA) [NMDA].25, 26, 32] a tieto receptory sa priamo podieľajú na závislosti [33, 34], depresia [35, 36] a antidepresívna funkcia [36, 37]. AFosB tiež reguluje expresiu signálnych molekúl, ako je vápnik / kalmodulín-dependentná proteínkináza IIa (CaMKIIa), ktorá je spojená s mnohými psychiatrickými poruchami [38] a ukázali sme, že táto regulácia expresie CaMKII u myší spôsobuje psychomotorickú senzibilizáciu na kokaín [20] a antidepresívnej funkcie [27]. Okrem toho AFosB reguluje expresiu cyklín-dependentnej kinázy 5 (cdk5) [39], ktorý je indukovaný v striate pomocou psychostimulačnej expozície a stresu [40-42] a reguluje psychomotorické a motivačné reakcie na kokaín [43]. Existuje teda silný dôkaz v modeloch hlodavcov, že indukcia AFosB vo viacerých oblastiach mozgu stresom, antidepresívami a liekmi na zneužívanie môže regulovať správanie súvisiace s depresiou a závislosťou modulovaním expresie vybraných cieľových génov v diskrétnych oblastiach mozgu.

Hoci predklinické modely závislosti a depresie boli pomerne plodné, je nevyhnutné podporovať zistenia zo zvieracích modelov s dôkazmi z humánnych štúdií, ak očakávame, že sa potenciálne molekulárne mechanizmy prenesú do nových možností liečby. Predtým sme dokázali, že AFosB je upregulovaný v NAc ľudí závislých na kokaíne [20] a redukovaný v NAc depresívnych ľudí [26]. Avšak regulácia FosB Expresia génového produktu v HPC a PFC, kritické regulátory NAc neuronálnej aktivácie, nebola predtým študovaná v ľudskom mozgu, ani nemá reguláciu potenciálnej expresie AFFB cieľového génu. Skúmali sme preto výraz FosB génové produkty, ako aj expresiu potenciálnych cieľových génov AFosB, v PFC a HPC pacientov trpiacich depresívnou poruchou alebo závislosťou od kokaínu.

Materiály a metódy

Ľudské vzorky

Ľudské mozgové tkanivá post mortem boli získané z Douglas Bell-Canada Brain Bank (Douglas Mental Health University Institute, Montreal, Quebec, Kanada). Informácie o používaní látky týkajúce sa závislých osôb na kokaíne, pacientov s depresiou a zodpovedajúcich kontrol sa nachádzajú v Tabuľka 1, Konzervácia tkaniva prebiehala v podstate podľa opisu [44]. V krátkosti, raz extrahovaný, mozog je umiestnený na mokrom ľade v boxe polystyrénu a ponáhľa sa do zariadení banky Douglas Bell-Canada Brain Bank. Hemisféry sú okamžite oddelené sagitálnym rezom uprostred mozgu, mozgového kmeňa a mozočku. Krvné cievy, epifýza, choroidný plexus, polovica cerebellu a polovica mozgového kmeňa sa typicky oddelia z ľavej hemisféry, ktorá sa potom pred zmrazením rezne koronálne do rezov s hrúbkou 1 cm. Druhá polovica mozočka sa pred zmrazením narezáva do sutín 1cm. Tkanivá sa rýchlo zmrazia v 2-metylbutáne pri -40 ° C pre 60 sek. Všetky mrazené tkanivá sa uchovávajú oddelene v plastových vreckách pri teplote -80 ° C na dlhodobé skladovanie. Špecifické oblasti mozgu sa odoberajú zo zmrazených koronárnych rezov na doske z nerezovej ocele so suchým ľadom v okolí, aby sa kontrolovala teplota prostredia. Vzorky PFC pochádzajú z Brodmannovej oblasti 8 / 9 a vzorky HPC sa odoberajú zo stredu hmoty hipokampálnej formácie (obr 1).

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

väčší obrázok (1.61MB)

pôvodný obrázok (1.59MB)

Obr. 1. Schéma disekčných oblastí pre vzorky ľudského mozgu.

Výkresy predstavujú predné (A) a zadné (B) koronálne rezy ľudského mozgu používané na disekciu PFC vzoriek a (C) HPC vzorky. Červené políčka zvýrazňujú oblasti pitvy. SFG: vynikajúci frontálny gyrus; MFG: stredný frontálny gyrus; IG: insulárny gyrus; FuG: fusiform gyrus.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g001

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

zväčšiť obrázok (529KB)

pôvodný obrázok (1.02MB)

Tabuľka 1. Závislosť od látok, toxikológia a použitie antidepresív u ľudí závislých na kokaíne, pacientov s depresiou a zodpovedajúcich kontrolných skupín.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.t001

Vzorky myši

Štúdia sa riadila pokynmi opísanými v Sprievodca starostlivosťou a používaním laboratórnych zvierat, ôsme vydanie (Inštitút laboratórnych zdrojov zvierat, 2011). Pred akýmkoľvek testovaním boli všetky experimentálne postupy schválené Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a používanie na Michiganskej štátnej univerzite. Ak akékoľvek zviera vykazuje nedostatok starostlivosti, infekcie, závažného úbytku hmotnosti alebo nehybnosti, zviera sa usmrtí. Žiadne zvieratá nepotrebovali takúto eutanáziu pred experimentálnym koncovým bodom v súčasnej štúdii. Po príchode do zariadenia boli samce myší C7BL / 57 staré v týždni 6 (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA) umiestnené v skupine 4 na klietku v kolóniovej miestnosti, ktorá bola nastavená na konštantnú teplotu (23 ° C) po dobu aspoň jednej hodiny. 3 dní pred experimentovaním v cykle 12 h svetlo / tma s ad libidum potravín a vody. Myšiam sa podávala chronická (7 dní) alebo akútna (jednorazová injekcia) kokaín (15 mg / kg) alebo sterilný fyziologický roztok (0.9% fyziologický roztok) intraperitoneálnou (ip) injekciou a usmrtili sa cervikálnou dislokáciou jednu hodinu po poslednej injekcii. Tkanivo sa okamžite pozbieralo (obr 2) alebo v rôznych časových bodoch po obetovaní (obr 3).

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

zväčšiť obrázok (649KB)

pôvodný obrázok (878KB)

Obr. 2. Porovnanie ľudských a myších FosB proteínov.

(A) Western blot hipokampálnych proteínov s FosB protilátkou odhalil viacnásobné ďalšie pásy v typickej vzorke HPC u ľudí závislých od kokaínu v porovnaní s chronickým kokaínom liečeným (15 mg / kg počas 7 dní) myšieho HPC. Nové pásy sú zrejmé pri 20 kDa, 23 kDa (biela šípka) a 30 kDa (čierna šípka). (B) Korelačné a lineárne regresné grafy expresie proteínu pre každý pás v ľudských vzorkách s postmortem intervalom (čas medzi smrťou a zmrazením mozgu) pre každú ľudskú vzorku. Bodkované čiary predstavujú interval spoľahlivosti 95%; žiadny lineárny regresný sklon sa významne nelíšil od 0.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g002

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

zväčšiť obrázok (214KB)

pôvodný obrázok (317KB)

Obr. 3. Expresia proteínov FosB v myšom HPC po predĺžených postmortemových intervaloch.

Mozgy myší, ktorým bola podaná akútna injekcia kokaínu (15 mg / kg ip) boli ponechané in situ pre 0, 1 alebo 8 hodín po usmrtení pred zberom HPC. Western blot odhalil nahromadenie 23 kDa pásu u 8 hr zvierat, ale nevykazuje iné pásy nájdené v ľudských HPC vzorkách.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g003

Western Blotting

Myšie mozgy sa rýchlo extrahovali na ľade a potom sa narezali na rezy 1 mm a dorzálny hipokampus sa odstránil pomocou 12 meradla a okamžite sa zmrazil na suchom ľade. Ľudské aj myšie vzorky sa homogenizovali svetelnou sonikáciou v modifikovanom RIPA pufri (10 mM Tris báza, 150 mM chlorid sodný, 1 mM EDTA, 0.1% dodecylsulfát sodný, 1% Triton X-100, 1% deoxycholát sodný, pH 7.4, inhibítory proteázy a fosfatázy [Sigma Aldrich]). Koncentrácia bola meraná pomocou DC Protein Assay (BioRad) a vzorky gélu boli normalizované na celkový proteín. Proteíny boli separované na 4-15% polyakrylamidových gradientových géloch (Criterion System, BioRad) a Western blot bol uskutočňovaný s použitím chemiluminiscencie (SuperSignal West Dura, Thermo Scientific). Celkový proteín sa testoval s použitím Swift Membrane Stain (G Biosciences) a proteíny sa kvantifikovali použitím softvéru ImageJ (NIH). Primárne protilátky sa použili na detekciu izoforiem FosB (5G4; 1: 500; signalizácia buniek, 2251), GluA2 / 3 (1: 1,000; Millipore, 07-598), CaMKIIa (1: 1,000; Millipore, 05 – 532), cdk5 (1: 1,000; Santa cruz, sc-173), GAPDH (1: 20,000; Cell Signaling, 21185).

štatistika

Všetky štatistické analýzy sa uskutočňovali použitím softvérového balíka Prism 6 (GraphPad). Linearná regresná analýza sa použila na stanovenie, či je expresia FosB génové produkty korelovali s postmortemovým intervalom. Sklon každej lineárnej regresnej priamky sa testoval na významný rozdiel od nuly. Študentské t-testy boli použité pre všetky párové porovnania medzi jedincami s kontrolnou skupinou a závislými od kokaínu (uvedené vo výsledkoch, kde je uvedená hodnota t). Jednosmerné ANOVA sa použili pre všetky viacnásobné porovnania medzi kontrolami, depresívnymi jedincami s antidepresívami na palube alebo depresívnymi jedincami bez antidepresív (uvedené vo výsledkoch, kde sa uvádza hodnota F). Jednosmerné ANOVA nasledovalo Tukey post hoc test. P <0.05 sa považovalo za významné.

výsledky

Naše nedávne štúdie naznačujú, že tri hlavné produkty FosB gén v mozgu, FosB s plnou dĺžkou (~ 50 kDa), AFosB (~ 35-37 kDa) a A2FosB (~ 25 kDa), sú diferenciálne indukované v oblastiach asociovaných s myšou v odmene v mozgu v reakcii na stres a liečbu antidepresívami [22] a iné antigény súvisiace s Fos, ktoré pravdepodobne produkuje FosB gén boli pozorované aj v mozgu myši [45-47]. Preto sme sa najprv snažili zistiť, či ľudský mozog vyjadruje vzor FosB génové produkty podobné tým, ktoré sa nachádzajú v mozgu myši. Porovnali sme typickú vzorku HPC od človeka závislého na kokaíne (Tabuľka 2) na HPC z myši, ktorej bol podávaný chronický kokaín (15 mg / kg, ip počas 7 dní). Všetky tri hlavné FosB génové produkty sa našli v myšom aj ľudskom mozgovom tkanive, ale v ľudskej vzorke sa pozorovali ďalšie pásy v porovnaní s myšou (Obr. 2A). Najvýraznejšie sa v ľudských vzorkách objavili pásy pri 30 kDa, 23 kDa a 20 kDa, ale neboli pozorované vo vzorkách myší. Predpokladali sme, že tieto pásy môžu predstavovať proteolytické produkty vyplývajúce z degradácie FosB alebo AFosB v dôsledku predĺženého postmortemového intervalu (PMI) v našich ľudských vzorkách (Tabuľka 2). Nebola však zistená žiadna korelácia medzi intenzitou týchto nových pásiem a PMI (Obr. 2B), alebo medzi PMI a hlavnými génovými produktmi, FosB, AFosB a A2FosB (Obr. 2B), tj žiadna z regresných línií nemala sklon výrazne odlišný od nuly. Tieto nové pásy teda nemusia byť proteolytickými degradačnými produktmi, ktoré sú výsledkom predĺženého času medzi smrťou a zmrazením tkaniva.

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

zväčšiť obrázok (279KB)

pôvodný obrázok (504KB)

Tabuľka 2. Demografia ľudí závislých na kokaíne, pacientov s depresiou a zodpovedajúcich kontrolných skupín.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.t002

Na ďalšie skúmanie sme myšiam podali jedinú injekciu kokaínu (15 mg / kg, ip) alebo fyziologického roztoku a jednu hodinu neskôr sa usmrtili cervikálnou dislokáciou. Mozgy sa potom nechali in situ nula, jedna alebo osem hodín pred odobratím vzoriek. Zaznamenali sme niektoré produkty degradácie (obr 3), najvýraznejším z nich je XXUMX kDa, ale výsledný obrazec nie je napodobňovaný ako u ľudských HPC vzoriek. Tieto údaje spolu ukazujú, že v ľudskom mozgu existujú ďalšie antigény súvisiace s Fos, ktoré môžu predstavovať nový FosB a pravdepodobne nie sú výsledkom proteolýzy FosB alebo AFosB.

Ďalej sme sa snažili zistiť, či závislosť na kokaíne, neliečená depresia alebo depresia spojená s vystavením účinkom antidepresív sú spojené so zmenami FosB génových produktov v ľudskom HPC alebo PFC. Pacienti a kontrolné subjekty boli vybraní tak, aby neboli žiadne významné rozdiely v priemernom veku, pohlaví, pH mozgu alebo PMI (Tabuľka 1). Vo vzorkách od pacientov závislých od kokaínu neboli pri Western blote zistené žiadne rozdiely v expresii akejkoľvek izoformy FosB v PFC v porovnaní s kontrolami (Obr. 4A a 4B). Pozorovali sme však výrazný pokles HPC jedincov závislých od kokaínu v FosB plnej dĺžky (t(35) = 2.67, p = 0.012), AFosB (t(31) = 2.81, p = 0.009), ako aj vo všetkých troch nových skupinách, 30 kDa (t(34) = 2.71, p = 0.011), 23 kDa (t(15) = 2.7, p = 0.016) a 20 kDa (t(13) = 2.43, p = 0.031) a trend smerom k zníženiu A2AFosB (t(29) = 2.03, p = 0.052). Podobne, vo vzorkách od pacientov trpiacich depresiou, neboli žiadne rozdiely v expresii akejkoľvek FosB izoformy v PFC, zatiaľ čo HPC vykazoval pokles FosB v plnej dĺžke (F (2,35) = 1.98, p = 0.048) a AFosB ( F (2,30) = 1.38, p = 0.027), ako aj v pásme 23 kDa (F (2,21) = 2.05, p = 0.022) a pásmu 20 kDa (F (2,18) = 0.97, p = 0.028) (Obr. 4C a 4D). Tieto údaje naznačujú, že FosB Expresia génu v HPC je znížená vo viacerých psychiatrických stavoch, zatiaľ čo expresia PFC nie je ovplyvnená.

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

väčší obrázok (1.19MB)

pôvodný obrázok (1.98MB)

Obr. 4. Expresia proteínov FosB v HPC a PFC pacientov so závislosťou od kokaínu a pacientov s depresiou.

(A) Western blot proteínov FosB z HPC a PFC závislých na ľudskom kokaíne (Coc) a kontrol (Con). (B) Kvantifikácia odhaľuje pokles závislý od kokaínu v mnohých proteínoch FosB v HPC, ale nie v PFC (*: p <0.05, #: p = 0.05). (C) Western blot proteínov FosB z HPC a PFC pacientov s ľudskou depresiou mimo (Dep) alebo na antidepresívach (Dep + AD) a kontrolách (Con). (D) Kvantifikácia odhaľuje pokles závislý od depresie v niektorých proteínoch FosB v HPC, ale nie v PFC (*: p <0.05). Chybové pruhy označujú priemer +/- SEM.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g004

Priamy dôkaz pre génové ciele transkripčnej regulácie AFosB v HPC je nedostatočný, iba cyklín-dependentná proteínkináza 5 (cdk5) potvrdila cieľ po elektrokonvulzívnej stimulácii u myší [39]. Mnohé ďalšie gény sú však známymi cieľmi pre transkripčnú reguláciu AFosB v iných oblastiach mozgu, najmä v NAc. Patrí medzi ne množstvo génov nevyhnutných pre funkciu hipokampálnych buniek a synaptickú plasticitu, ako napríklad GluA2 [48] a CaMKII [20]. Preto sme použili Western blot na stanovenie hladín potenciálnych génových cieľov AFosB u HPC a PFC pacientov závislých na kokaíne a depresívnych pacientov. Nezistili sme signifikantné rozdiely v hladinách proteínov kandidátskych cieľových génov v PFC jedincov závislých od kokaínu, zatiaľ čo HPC vykázalo významný pokles v GluA2 (t (34) = 2.31, p = 0.027) a silný trend smerom k poklesu Hladiny CaMKII (t (35) = 1.99, p = 0.053), zatiaľ čo cdk5 zostal nezmenený (Obr. 5A a 5B). V PFC a HPC depresívnych pacientov neboli pozorované žiadne zmeny v expresii cieľových génov AFosB (Obr. 5C a 5D). Tieto údaje naznačujú, že AFosB môže regulovať expresiu potenciálnych cieľových génov v ľudskom HPC a táto regulácia môže byť oblasť mozgu a ochorenie špecifické.

thumbnail

Na stiahnutie:

Slideshow PowerPoint

zväčšiť obrázok (546KB)

pôvodný obrázok (1.01MB)

Obr. 5. Expresia možných cieľových proteínov AFosB génu v HPC a PFC pacientov so závislosťou od kokaínu a depresiou.

(A) Western blot potenciálnych cieľových proteínov ΔFosB génu z HPC a PFC osôb zneužívajúcich ľudský kokaín (Coc) a kontrolných osôb (Con). (B) Kvantifikácia odhaľuje na kokaíne závislý pokles všetkých GluA2 a CaMKII v HPC, ale nie PFC (*: p <0.05, #: p = 0.05). (C) Western blot potenciálnych cieľových proteínov ΔFosB génu z HPC a PFC pacientov s ľudskou depresiou mimo (Dep) alebo na antidepresívach (Dep + AD) a kontrolách (Con). (D) Kvantifikácia neodhaľuje žiadne zmeny závislé od depresie. Chybové pruhy označujú priemer +/- SEM.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g005

Diskusia

Tu uvádzame prvú kompiláciu FosB génový produkt a analýza proteínov AFosB-cieľového proteínu v hipokampe a prefrontálnom kortexe závislých od kokaínu a depresívnych pacientov. Je známe, že tieto oblasti mozgu hrajú kľúčovú úlohu v patofyziológii týchto chorôb a používanie ľudských post-mortem vzoriek nám umožňuje: 1) určiť, či sú molekulárne zmeny nájdené v dobre študovaných modeloch hlodavcov týchto chorôb rekapitulované u ľudí ; 2) identifikujú nové cesty pre štúdium na hlodavčích modeloch pre potenciálnu terapeutickú intervenciu. Naše analýzy boli zamerané na vyjadrenie FosB génové produkty, pretože ich expresia v týchto oblastiach má významnú úlohu pri depresii a je indukovaná expozíciou kokaínu v modeloch hlodavcov [21, 22, 24]. Keď sme na začiatku skúmali hladiny FosB proteínov v našich ľudských vzorkách, bolo jasné, že naša FosB protilátka detegovala viac pásov, ako boli predtým uvedené vo vzorkách mozgu hlodavcov našou skupinou a mnohými ďalšími [1, 22]. Pretože ľudské mozgy sú zmrazené niekoľko hodín po smrti, zatiaľ čo myšie vzorky boli odstránené a zmrazené do dvoch minút po usmrtení, my myši sme opustili mozog in situ po obetovaní až do ôsmich hodín, aby sa zistilo, či sa objavia podobné pásma. Pretože sme však nepozorovali rovnaký vzor proteínov FosB, ktoré sa nachádzajú v ľudských vzorkách, a pretože sme tiež nezistili žiadnu koreláciu medzi dĺžkou PMI a úrovňou rôznych pásov v ľudských vzorkách, došli sme k záveru, že mnohé z pásov v Je nepravdepodobné, že by vzorky ľudského mozgu boli výsledkom proteolytickej degradácie väčších izoforiem FosB. Hoci nemôžeme vylúčiť rozdiely v proteolytických mechanizmoch medzi druhmi, navrhli by sme, aby niektoré z ľudských pásiem boli výsledkom rozdielneho zostrihu FosB mRNA a budúce štúdie našej skupiny sa budú zaoberať touto otázkou.

Predchádzajúce výsledky zo štúdií na hlodavcoch zistili vzostup izoforiem FosB v HPC a PFC po chronickom kokaíne [24]. Z našej kohorty jedincov závislých od kokaínu sme však zistili zníženie všetkých izoforiem FosB v HPC, bez zmeny v PFC v porovnaní s kontrolnými jedincami. Domnievame sa, že to môže byť spôsobené inherentnými rozdielmi medzi štúdiami na hlodavcoch a prípadmi závislosti od ľudí. Štúdie závislosti od kokaínu trvajú len malú časť života hlodavcov a doteraz žiadne štúdie indukcie AFosB neprekročili 14 dní nepretržitej expozície kokaínu [9].1, 20]. Užívatelia kokaínu môžu byť závislí na oveľa dlhšie časové obdobia, čo môže vyvolať homeostatické účinky spôsobujúce FosB gén, ktorý sa má potlačiť v HPC. Okrem toho mnohé štúdie preukázali, že dlhodobá závislosť na psychostimulanciách je sprevádzaná zníženou kognitívnou funkciou [9, 49]. Naša nedávna práca dokazuje, že HPC AFosB hrá rozhodujúcu úlohu pri učení [28], a teda zníženie HPC FosB génová expresia u závislých od kokaínu tu môže predstavovať mechanizmus kognitívneho poklesu psychostimulačnej závislosti. So zníženým vyjadrením FosB V HPC sme tiež pozorovali pokles hladín proteínov kandidátskych cieľových génov AFosB GluA2 a CaMKII a obe tieto molekuly sú tiež kritické pre funkciu a učenie HPC [50] a boli predtým spojené so závislosťou [38, 51].

V HPC depresívnych pacientov sme pozorovali pokles viacerých FosB proteínov v závislosti od toho, či pacienti užívali antidepresíva. To môže naznačovať, že antidepresíva majú rozdielne účinky na zostrih alebo stabilitu FosB génových produktov, hoci naše predchádzajúce štúdie u hlodavcov neodhalili žiadne takéto rozdiely [22]. Neexistovali však žiadne rozdiely v expresii potenciálnych cieľových génov ani v HPC, ani v PFC týchto pacientov. Hoci závažná depresia je často sprevádzaná kognitívnymi problémami [52], je pravdepodobné, že HPC AFosB nie je jediným faktorom zmeneným v reakcii na depresiu. Zatiaľ čo závislí od kokaínu vykazovali zmeny v HPC AFosB av expresii cieľového génu, depresia môže viesť k rôznym kompenzačným mechanizmom, ktoré zabraňujú redukcii expresie GluA2 alebo CaMKII. Budúce štúdie teda objasnia, či zmeny v expresii génu HPC v depresii a závislosti vyplývajú z podobných mechanizmov.

Je dôležité poznamenať, že ľudskej populácii použitej v tejto štúdii chýba homogenita predklinických modelov hlodavcov alebo primátov. Napríklad piati depresívni pacienti trpeli alkoholizmom a dvaja mali na palube v čase smrti. Podobne šesť pacientov závislých od kokaínu použilo antidepresíva počas troch mesiacov pred úmrtím. Hoci to nie je prekvapujúce, pretože depresia a závislosť majú vysokú úroveň komorbidity [6, 7], komplikuje interpretáciu výsledkov. Nezaznamenali sme významný rozdiel v žiadnom z našich biochemických meraní medzi subjektmi závislými od kokaínu, ktorí mali na palube antidepresíva, a tými, ktorí to neurobili, ani nepozorovali rozdiely medzi depresívnymi pacientmi, ktorí mali závislosť na látke, a tými, ktorí to neurobili (údaje nie sú uvedené). ). To však vylučuje prekrývajúce sa alebo synergické účinky depresie a závislosti na našich opatreniach. Naopak, keďže pozorujeme podobné zníženie expresie izoformy HPC FosB s depresiou a závislosťou, je možné, že redukcia HPC FosB Expresia génu je bežným mechanizmom medzi týmito dvoma stavmi a môže prispieť ku komorbidite. Výskum tejto hypotézy bude vyžadovať oveľa väčšie kohorty ľudských subjektov a ďalšie predklinické štúdie.

Na záver konštatujeme, že tento násobok FosB génové produkty sú downregulované v HPC, ale nie v PFC, ľudí trpiacich závislosťou a depresiou. Hoci nemôžeme dosiahnuť etiologickú súvislosť medzi týmto fenoménom a chorobnými stavmi, je možné, že poklesy HPC AFosB a / alebo iných izoforiem FosB môžu byť čiastočne základom kognitívnych deficitov spojených s depresiou a závislosťou alebo prispievajú k komorbidite týchto psychiatrických pacientov. poruchy.

Poďakovanie

Autori by chceli poďakovať Kennethovi Moonovi za vynikajúcu technickú pomoc.

Príspevky od autorov

  1. Navrhnuté a navrhnuté experimenty: AJR PAG.
  2. Vykonali experimenty: AJR GT PAG.
  3. Analyzované údaje: PAG AJR.
  4. Prispôsobené reagencie / materiály / nástroje analýzy: GT.
  5. Napísal: PAG AJR.

Referencie

  1. 1. Robison AJ, Nestler EJ. Transkripčné a epigenetické mechanizmy závislosti. Nat Rev Neurosci. 2011, 12 (11): 623-37. Epub 2011 / 10 / 13. doi: 10.1038 / nrn3111 nrn3111 [pii]. PMID: 21989194; PubMed Central PMCID: PMC3272277.
  2. 2. Fass DM, Schroeder FA, Perlis RH, Haggarty SJ. Epigenetické mechanizmy porúch nálady: zacielenie neuroplasticity. Neuroscience. 2014, 264: 112-30. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2013.01.041 pmid: 23376737; PubMed Central PMCID: PMC3830721.
  3. Zobraziť článok
  4. PubMed / NCBI
  5. Študovňa Google
  6. Zobraziť článok
  7. PubMed / NCBI
  8. Študovňa Google
  9. Zobraziť článok
  10. PubMed / NCBI
  11. Študovňa Google
  12. Zobraziť článok
  13. PubMed / NCBI
  14. Študovňa Google
  15. Zobraziť článok
  16. PubMed / NCBI
  17. Študovňa Google
  18. 3. Menard C, Hodes GE, Russo SJ. Patogenéza depresie: Pohľady zo štúdií na ľuďoch a hlodavcoch. Neuroscience. 2015. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2015.05.053 pmid: 26037806.
  19. Zobraziť článok
  20. PubMed / NCBI
  21. Študovňa Google
  22. Zobraziť článok
  23. PubMed / NCBI
  24. Študovňa Google
  25. Zobraziť článok
  26. PubMed / NCBI
  27. Študovňa Google
  28. Zobraziť článok
  29. PubMed / NCBI
  30. Študovňa Google
  31. Zobraziť článok
  32. PubMed / NCBI
  33. Študovňa Google
  34. Zobraziť článok
  35. PubMed / NCBI
  36. Študovňa Google
  37. Zobraziť článok
  38. PubMed / NCBI
  39. Študovňa Google
  40. Zobraziť článok
  41. PubMed / NCBI
  42. Študovňa Google
  43. Zobraziť článok
  44. PubMed / NCBI
  45. Študovňa Google
  46. Zobraziť článok
  47. PubMed / NCBI
  48. Študovňa Google
  49. Zobraziť článok
  50. PubMed / NCBI
  51. Študovňa Google
  52. Zobraziť článok
  53. PubMed / NCBI
  54. Študovňa Google
  55. Zobraziť článok
  56. PubMed / NCBI
  57. Študovňa Google
  58. Zobraziť článok
  59. PubMed / NCBI
  60. Študovňa Google
  61. Zobraziť článok
  62. PubMed / NCBI
  63. Študovňa Google
  64. Zobraziť článok
  65. PubMed / NCBI
  66. Študovňa Google
  67. Zobraziť článok
  68. PubMed / NCBI
  69. Študovňa Google
  70. Zobraziť článok
  71. PubMed / NCBI
  72. Študovňa Google
  73. Zobraziť článok
  74. PubMed / NCBI
  75. Študovňa Google
  76. Zobraziť článok
  77. PubMed / NCBI
  78. Študovňa Google
  79. Zobraziť článok
  80. PubMed / NCBI
  81. Študovňa Google
  82. Zobraziť článok
  83. PubMed / NCBI
  84. Študovňa Google
  85. Zobraziť článok
  86. PubMed / NCBI
  87. Študovňa Google
  88. Zobraziť článok
  89. PubMed / NCBI
  90. Študovňa Google
  91. Zobraziť článok
  92. PubMed / NCBI
  93. Študovňa Google
  94. Zobraziť článok
  95. PubMed / NCBI
  96. Študovňa Google
  97. Zobraziť článok
  98. PubMed / NCBI
  99. Študovňa Google
  100. Zobraziť článok
  101. PubMed / NCBI
  102. Študovňa Google
  103. Zobraziť článok
  104. PubMed / NCBI
  105. Študovňa Google
  106. Zobraziť článok
  107. PubMed / NCBI
  108. Študovňa Google
  109. Zobraziť článok
  110. PubMed / NCBI
  111. Študovňa Google
  112. Zobraziť článok
  113. PubMed / NCBI
  114. Študovňa Google
  115. Zobraziť článok
  116. PubMed / NCBI
  117. Študovňa Google
  118. Zobraziť článok
  119. PubMed / NCBI
  120. Študovňa Google
  121. Zobraziť článok
  122. PubMed / NCBI
  123. Študovňa Google
  124. Zobraziť článok
  125. PubMed / NCBI
  126. Študovňa Google
  127. Zobraziť článok
  128. PubMed / NCBI
  129. Študovňa Google
  130. Zobraziť článok
  131. PubMed / NCBI
  132. Študovňa Google
  133. Zobraziť článok
  134. PubMed / NCBI
  135. Študovňa Google
  136. Zobraziť článok
  137. PubMed / NCBI
  138. Študovňa Google
  139. Zobraziť článok
  140. PubMed / NCBI
  141. Študovňa Google
  142. Zobraziť článok
  143. PubMed / NCBI
  144. Študovňa Google
  145. Zobraziť článok
  146. PubMed / NCBI
  147. Študovňa Google
  148. Zobraziť článok
  149. PubMed / NCBI
  150. Študovňa Google
  151. Zobraziť článok
  152. PubMed / NCBI
  153. Študovňa Google
  154. 4. Keralapurath MM, Briggs SB, Wagner JJ. Samopodanie kokaínu indukuje zmeny synaptického prenosu a plasticity ventrálneho hipokampu. Biológia závislosti. 2015. doi: 10.1111 / adb.12345 pmid: 26692207.
  155. 5. Loureiro M, Kramar C, Renard J, Rosen LG, Laviolette SR. Transplantácia kanabinoidov v Hippocampus aktivuje Nucleus Accumbens Neurons a moduluje odmeňovanie a emocionálnu výkyvy súvisiace s averziou. Biologická psychiatria. 2015. doi: 10.1016 / j.biopsych.2015.10.016 pmid: 26681496.
  156. 6. Davis L., Uezato A, Newell JM, Frazier E. Poruchy užívania veľkej depresie a komorbidných látok. Aktuálny názor v psychiatrii. 2008, 21 (1): 14-8. doi: 10.1097 / YCO.0b013e3282f32408 pmid: 18281835.
  157. 7. Komorbidita: závislosť a iné duševné choroby. In: Služby USDoHaH, editor .: Národný inštitút pre zneužívanie drog; 2010.
  158. 8. Tafet GE, Nemeroff CB. Prepojenia medzi stresom a depresiou: Psychoneuroendokrinologické, genetické a environmentálne interakcie. Journal neuropsychiatrie a klinických neurovied. 2015: appineuropsych15030053. doi: 10.1176 / appi.neuropsych.15030053 pmid: 26548654.
  159. 9. Cadet JL, Bisagno V. Neuropsychologické následky chronického užívania drog: Relevantnosť k liečebným prístupom. Hranice v psychiatrii. 2015, 6: 189. doi: 10.3389 / fpsyt.2015.00189 pmid: 26834649; PubMed Central PMCID: PMC4713863.
  160. 10. Blier P. Farmakológia predpokladaných skorých antidepresívnych stratégií. Eur Neuropsychopharmacol. 2003, 13 (2): 57-66. PMID: 12650947. doi: 10.1016 / s0924-977x (02) 00173-6
  161. 11. Januar V, Ancelin ML, Ritchie K, Saffery R, ​​Ryan J. BDNF promótor metylácie a genetické variácie v neskorej depresii života. Translačná psychiatria. 2015, 5: e619. doi: 10.1038 / tp.2015.114 pmid: 26285129; PubMed Central PMCID: PMCPMC4564567.
  162. 12. Covington HE 3rd, Maze I, LaPlant QC, Vialou VF, Ohnishi YN, Berton O, et al. Antidepresívne účinky inhibítorov histón deacetylázy. J Neurosci. 2009, 29 (37): 11451-60. Epub 2009 / 09 / 18. 29 / 37 / 11451 [pii] doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1758-09.2009 pmid: 19759294; PubMed Central PMCID: PMC2775805.
  163. 13. Maze I, Covington HE 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ a kol. Základná úloha histón metyltransferázy G9a v plasticite vyvolanej kokaínom. Science. 2010, 327 (5962): 213-6. Epub 2010 / 01 / 09. 327 / 5962 / 213 [pii] doi: 10.1126 / science.1179438 pmid: 20056891; PubMed Central PMCID: PMC2820240.
  164. 14. Massart R, Barnea R, Dikshtein Y, Suderman M, Meir O, Hallett M. a kol. Úloha metylácie DNA v nucleus accumbens pri inkubácii túžby po kokaíne. The Journal of neuroscience: oficiálny časopis Spoločnosti pre neurovedy. 2015, 35 (21): 8042-58. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.3053-14.2015 pmid: 26019323.
  165. 15. Volánik JK. Molekulárna neurobiológia závislosti: o čom je (Delta) FosB? Americký časopis o zneužívaní drog a alkoholu. 2014; 40 (6): 428–37. doi: 10.3109 / 00952990.2014.933840 pmid: 25083822.
  166. 16. Nestler EJ. FosB: Regulátor transkripcie stresových a antidepresívnych reakcií. Eur J Pharmacol. 2014. doi: 10.1016 / j.ejphar.2014.10.034 pmid: 25446562.
  167. 17. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Fosforylácia DeltaFosB sprostredkováva jeho stabilitu in vivo. Neuroscience. 2009, 158 (2): 369-72. Epub 2008 / 12 / 02. S0306-4522 (08) 01596-0 [pii] doi: 10.1016 / j.neuroscience.2008.10.059 pmid: 19041372; PubMed Central PMCID: PMC2734485.
  168. 18. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, et al. Proteasómovo závislé a nezávislé mechanizmy pre destabilizáciu FosB: identifikácia FosB degrónových domén a implikácie pre stabilitu DeltaFosB. Eur J Neurosci. 2007, 25 (10): 3009-19. Epub 2007 / 06 / 15. EJN5575 [pii] doi: 10.1111 / j.1460-9568.2007.05575.x pmid: 17561814.
  169. 19. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Regulácia stability DeltaFosB fosforyláciou. J Neurosci. 2006, 26 (19): 5131-42. Epub 2006 / 05 / 12. 26 / 19 / 5131 [pii] doi: 10.1523 / JNEUROSCI.4970-05.2006 pmid: 16687504.
  170. 20. Robison AJ, Vialou V, Mazei-Robison M, Feng J., Kourrich S., Collins M. a kol. Behaviorálne a štrukturálne reakcie na chronický kokaín vyžadujú doprednú slučku obsahujúcu deltaFosB a vápnik / kalmodulín-dependentnú proteínovú kinázu II v Nucleus Accumbens Shell. J Neurosci. 2013, 33 (10): 4295-307. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.5192-12.2013 pmid: 23467346.
  171. 21. Vialou V, Bagot RC, Cahill ME, Ferguson D, Robison AJ, Dietz DM, et al. Prefrontálny kortikálny okruh pre depresívne a úzkostné správanie sprostredkované cholecystokinínom: úloha DeltaFosB. J Neurosci. 2014, 34 (11): 3878-87. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1787-13.2014 pmid: 24623766; PubMed Central PMCID: PMC3951691.
  172. 22. Vialou V, Thibault M, Kaska S, Cooper S, Gajewski P, Eagle A a kol. Diferenciálna indukcia izoforiem FosB v mozgu fluoxetínom a chronickým stresom. Neuropharmacology. 2015, 99: 28-37. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2015.07.005 pmid: 26164345.
  173. 23. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS a kol. Indukcia deltaFosB v mozgových štruktúrach súvisiacich s odmenou po chronickom strese. J Neurosci. 2004, 24 (47): 10594-602. Epub 2004 / 11 / 27. 24 / 47 / 10594 [pii] doi: 10.1523 / JNEUROSCI.2542-04.2004 pmid: 15564575.
  174. 24. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S a kol. Odlišné vzorce indukcie DeltaFosB v mozgu drogami zneužívania. Synapsie. 2008, 62 (5): 358-69. Epub 2008 / 02 / 23. doi: 10.1002 / syn.20500 pmid: 18293355; PubMed Central PMCID: PMC2667282.
  175. 25. Kelz MB, Chen J., Carlezon WA Jr., Whisler K, Gilden L, Beckmann AM a kol. Expresia transkripčného faktora deltaFosB v mozgu reguluje citlivosť na kokaín. Nature. 1999, 401 (6750): 272-6. Epub 1999 / 09 / 28. doi: 10.1038 / 45790 pmid: 10499584.
  176. 26. Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE 3rd, Dietz DM, Ohnishi YN, et al. DeltaFosB v okruhoch odmeňovania mozgu sprostredkováva odolnosť voči stresu a antidepresívnym reakciám. Nat Neurosci. 2010, 13 (6): 745-52. Epub 2010 / 05 / 18. nn.2551 [pii] doi: 10.1038 / nn.2551 pmid: 20473292; PubMed Central PMCID: PMC2895556.
  177. 27. Robison AJ, Vialou V, Sun HS, Labonte B, S AG, Dias C a kol. Fluoxetín Epigeneticky mení promótor CaMKIIalpha v Nucleus Accumbens na reguláciu väzbových a antidepresívnych účinkov DeltaFosB. Neuropsychofarmakologie. 2013. doi: 10.1038 / npp.2013.319 pmid: 24240473.
  178. 28. Eagle AL, Gajewski PA, Yang M, Kechner ME, Al Masraf BS, Kennedy PJ a kol. Vychutnávanie učenia Hippocampal DeltaFosB v závislosti od skúseností. J Neurosci. 2015, 35 (40): 13773-83. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.2083-15.2015 pmid: 26446228.
  179. 29. Papakostas GI, Culpepper L. Pochopenie a riadenie kognície u depresívneho pacienta. J Clin Psychiatry. 2015, 76 (4): 418-25. doi: 10.4088 / JCP.13086ah1c pmid: 25919832.
  180. 30. Evans VC, Iverson GL, Yatham LN, Lam RW. Vzťah medzi neurokognitívnou a psychosociálnou funkciou pri depresívnej poruche: systematický prehľad. J Clin Psychiatry. 2014, 75 (12): 1359-70. doi: 10.4088 / JCP.13r08939 pmid: 25551235.
  181. 31. Wood S, Sage JR, Shuman T, Anagnostaras SG. Psychostimulanciá a kognícia: kontinuum behaviorálnej a kognitívnej aktivácie. 2014, 66 (1): 193 – 221. doi: 10.1124 / pr.112.007054 pmid: 24344115; PubMed Central PMCID: PMC3880463.
  182. 32. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA a kol. Základná úloha fosB génu pri molekulárnych, bunkových a behaviorálnych účinkoch chronických elektrokonvulzívnych záchvatov. J Neurosci. 1998, 18 (17): 6952-62. Epub 1998 / 08 / 26. PMID: 9712664.
  183. 33. Pierce RC, Wolf ME. Psychostimulačné indukované neuroadaptácie v nucleus accumbens Prenos AMPA receptora. Cold Spring Harbor perspektívy v medicíne. 2013, 3 (2): a012021. doi: 10.1101 / cshperspect.a012021 pmid: 23232118; PubMed Central PMCID: PMC3552338.
  184. 34. Luscher C. Kokaínom vyvolaná synaptická plasticita excitačného prenosu vo ventrálnej tegmentálnej oblasti. Cold Spring Harbor perspektívy v medicíne. 2013, 3 (5): a012013. doi: 10.1101 / cshperspect.a012013 pmid: 23637310; PubMed Central PMCID: PMC3633178.
  185. 35. Graybeal C, Kouslycznyk C, Holmes A. Stresom vyvolané deficity v kognitívnosti a emocionalite: úloha glutamátu. Curr Top Behav Neurosci. 2012, 12: 189-207. doi: 10.1007 / 7854_2011_193 pmid: 22261703; PubMed Central PMCID: PMC3877736.
  186. 36. Duman RS. Patofyziológia depresie a inovatívne liečby: remodelovanie glutamátergických synaptických spojení. Dialógy Clin Neurosci. 2014, 16 (1): 11-27. PMID: 24733968; PubMed Central PMCID: PMC3984887.
  187. 37. Zarate C, Duman RS, Liu G, Sartori S., Quiroz J, Murck H. Nové paradigmy pre liečbu rezistentnej depresie. Ann NY Acad Sci. 2013, 1292: 21-31. doi: 10.1111 / nyas.12223 pmid: 23876043; PubMed Central PMCID: PMC3936783.
  188. 38. Robison AJ. Rozvíjajúca sa úloha CaMKII pri neuropsychiatrickom ochorení. Trends Neurosci. 2014, 37 (11): 653-62. doi: 10.1016 / j.tins.2014.07.001 pmid: 25087161.
  189. 39. Chen J, Zhang Y, Kelz MB, Steffen C, Ang ES, Zeng L, et al. Indukcia cyklín-dependentnej kinázy 5 v hipokampuse chronickými elektrokonvulzívnymi záchvatmi: úloha delta FosB. J Neurosci. 2000, 20 (24): 8965-71. Epub 2000 / 01 / 11. 20 / 24 / 8965 [pii]. PMID: 11124971.
  190. 40. Mlewski EC, Krapacher FA, Ferreras S, Paglini G. Prechodná zvýšená expresia Cdk5 aktivátora p25 po akútnom a chronickom podávaní d-amfetamínu. Ann NY Acad Sci. 2008, 1139: 89-102. doi: 10.1196 / annals.1432.039 pmid: 18991853.
  191. 41. Bignante EA, Rodriguez Manzanares PA, Mlewski EC, Bertotto ME, Bussolino DF, Paglini G a kol. Zapojenie septa Cdk5 do vzniku nadmernej úzkosti vyvolanej stresom. Európska neuropsychofarmakológia: časopis European College of Neuropsychopharmacology. 2008, 18 (8): 578-88. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2008.02.007 pmid: 18406108.
  192. 42. Seiwell AP, Reveron ME, Duvauchelle CL. Zvýšená akumulovaná expresia Cdk5 u potkanov po krátkom prístupe ku kokaínu, ktorý sa podával samostatne, ale nie po dlhodobom prístupe. Neurosci Lett. 2007, 417 (1): 100-5. doi: 10.1016 / j.neulet.2007.02.043 pmid: 17339080; PubMed Central PMCID: PMC1876973.
  193. 43. Taylor JR, Lynch WJ, Sanchez H, Olausson P, Nestler EJ, Bibb JA. Inhibícia Cdk5 v nucleus accumbens zvyšuje lokomotoricky aktivačné a stimulačno-motivačné účinky kokaínu. Proc Natl Acad Sci US A. 2007, 104 (10): 4147 – 52. Epub 2007 / 03 / 16. 0610288104 [pii] doi: 10.1073 / pnas.0610288104 pmid: 17360491; PubMed Central PMCID: PMC1820723.
  194. 44. Quirion R, Robitaille Y, Martial J, Chabot JG, Lemoine P, Pilapil C a kol. Autorádiografia ľudského mozgového receptora s použitím sekcií celej hemisféry: všeobecná metóda, ktorá minimalizuje tkanivové artefakty. Synapsie. 1987, 1 (5): 446-54. Epub 1987 / 01 / 01. doi: 10.1002 / syn.890010508 pmid: 2850625.
  195. 45. Nádej BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y a kol. Indukcia dlho trvajúceho komplexu AP-1 zloženého zo zmenených proteínov podobných Fos v mozgu chronickou kokaínom a inými chronickými liečbami. Neurón. 1994, 13 (5): 1235-44. Epub 1994 / 11 / 01. 0896-6273 (94) 90061-2 [pii]. PMID: 7946359. doi: 10.1016 / 0896-6273 (94) 90061-2
  196. 46. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologické štúdie regulácie chronickej indukcie antigénu súvisiaceho s FOS kokaínom v striate a nucleus accumbens. J. Pharmacol Exp Ther. 1995, 275 (3): 1671-80. Epub 1995 / 12 / 01. PMID: 8531143.
  197. 47. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ. Chronické antigény súvisiace s Fos: stabilné varianty deltaFosB indukované v mozgu chronickými liečbami. J Neurosci. 1997, 17 (13): 4933-41. Epub 1997 / 07 / 01. PMID: 9185531.
  198. 48. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM a kol. Expresia FOSB transkripčného faktora v mozgu reguluje citlivosť na kokaín. Nature. 1999, 401 (6750): 272-6. http://www.nature.com/nature/journal/v401/n6750/suppinfo/401272a0_S1.html, PMID: 10499584
  199. 49. Buchta WC, Riegel AC. Chronický kokaín narúša mechanizmy mezokortikálneho učenia. Brain Res. 2015; 1628 (Pt A): 88 – 103. doi: 10.1016 / j.brainres.2015.02.003 pmid: 25704202; PubMed Central PMCID: PMC4739740.
  200. 50. Shonesy BC, Jalan-Sakrikar N, Cavener VS, Colbran RJ. CaMKII: molekulárny substrát pre synaptickú plasticitu a pamäť. Pokrok v molekulárnej biológii a translačnej vede. 2014, 122: 61-87. doi: 10.1016 / B978-0-12-420170-5.00003 – 9 pmid: 24484698.
  201. 51. Loweth JA, Tseng KY, Wolf ME. Adaptácie v prenose AMPA receptora v nucleus accumbens prispievajú k inkubácii túžby po kokaíne. Neuropharmacology. 2014; 76 Pt B: 287 – 300. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2013.04.061 pmid: 23727437; PubMed Central PMCID: PMC3836860.
  202. 52. Culpepper L. Vplyv neliečenej veľkej depresívnej poruchy na kognitívne a denné funkcie. J Clin Psychiatry. 2015, 76 (7): e901. doi: 10.4088 / JCP.13086tx4c pmid: 26231021.