Inhibítory histón-deacetylázy uľahčujú tvorbu preferencií partnerov v ženských prériových voles (2013)

Nat Neurosci. Autorský rukopis; dostupné v PMC Jan 1, 2014.

Publikované v konečnom upravenom formulári ako:

PMCID: PMC3703824

NIHMSID: NIHMS477621

Konečná upravená verzia tohto článku vydavateľa je k dispozícii na stránke Nat Neurosci

Pozri ďalšie články v PMC to citát publikovaný článok.

Prejsť na:

abstraktné

V spoločensky monogamnej prérii vole (Microtus ochrogaster), párenie indukuje trvalé párové väzby iniciované tvorbou preferencií partnerov a regulované rôznymi neurotransmitermi vrátane oxytocínu, vazopresínu a dopamínu. Tu sme skúmali potenciálne epigenetické mechanizmy sprostredkujúce reguláciu párových väzieb. Ukázali sme, že inhibítory histón-deacetylázy butyrát sodný a TrichoStatin A (TSA) uľahčujú tvorbu preferencií partnerov v ženských prériách v neprítomnosti párenia. Toto bolo spojené so špecifickou up-reguláciou oxytocínu (OTR) a vazopresínových receptorov V1a (V1aR) v nucleus accumbens prostredníctvom zvýšenia acetylácie histónov na ich príslušných promótoroch. Okrem toho bolo zabránené preferencii partnera s podporou TSA pomocou blokády OTR alebo V1aR v nucleus accumbens. Dôležité je, že partnerská preferencia vyvolaná párením vyvolala rovnakú epigenetickú reguláciu promótorov génu OTR a V1aR ako TSA. Tieto pozorovania teda ukazujú, že TSA a párenie uľahčujú preferenciu partnera prostredníctvom epigenetických udalostí, čo poskytuje prvý priamy dôkaz epigenetickej regulácie párového viazania.

úvod

Sociálna príslušnosť je základnou charakteristikou ľudského sociálneho správania a sociálne kognitívne deficity sú bežnými znakmi v mnohých neuropsychiatrických poruchách vrátane porúch schizofrénie a autistického spektra, ako aj závislosti a depresie.1, Sociálne monogamné prairie voles (Microtus ochrogaster) sa ukázali ako veľmi zaujímavý model na skúmanie neurobiologických základov sociálnej väzby, keďže tak laboratórne, ako aj voľne žijúce osoby vytvárajú dlhodobé párové väzby2-4, ktoré sú najprv iniciované vytvorením selektívneho správania afilácie voči partnerovi, nazývaného preferencia partnera5, Táto tvorba preferencie partnera zahŕňa rôzne neurotransmitery a hormonálne systémy, vrátane neuropeptidov oxytocínu a vazopresínu (AVP) a mezolimbického dopamínu.5.

IVo všeobecnosti je tvorba preferencií partnerov sprostredkovaná neurotransmisiou AVP vo ventrálnej pallidum a laterálnej priehradke (LS) u mužov a neurotransmisiou oxytocínu v nucleus accumbens (NAcc) a prelimbickej kôre u ženských prérií.6-8.

Typicky zapojený do prirodzenej odmeny, ako je párenie, dopamín tiež pôsobí ako kritický sprostredkovateľ preferencie partnerov v prériách voles. Aktivácia receptorov dopamínového typu D2 (D2R) v NAcc uľahčuje, zatiaľ čo aktivácia receptorov typu dopamínu D1 (D1R) inhibuje tvorbu preferencií u samcov a samíc prérijných voles.9-11.

Dôležité je, že variácie v génovej expresii receptorov oxytocínu a AVP V1a, OTR a V1aR, môžu samy o sebe dramaticky ovplyvniť preferencie partnerov. V ženských prériách napríklad nadmerná expresia OTR v NAcc uľahčuje preferenciu partnera v neprítomnosti párenia.12-14.

Okrem regulácie párového viazania sa oxytocín a AVP podieľajú aj na širokom spektre spoločenského správania, vrátane sociálneho uznania, agresie a starostlivosti o matku.15, 16, Prerušenia tohto správania u hlodavcov vyvolávajú dlhodobé neuroadaptácie prostredníctvom epigenetických mechanizmov, vrátane DNA metylácie estrogénového receptora alfa.17 a AVP gény18, ako aj acetylácia histónu promótora glukokortikoidného receptora19, Inhibítory histón deacetylázy (HDAC), ktoré zvyšujú expresiu génu prostredníctvom zvýšenej acetylácie histónov v mozgu hlodavcov.20, môže tieto zmeny zvrátiť19a priamo ovplyvňujú sociálne správanie, ako je sexuálna vnímavosť21, Dôležité je, že v bunkovej línii pľúcneho karcinómu inhibítor HDAC trichostatín A (TSA) priamo zvyšuje transkripciu OTR lokálnou podporou acetylácie histónov22.

Preto môže byť navrhnutý epigenetický základ pri vytváraní preferencií partnerov v prérijných volách. Na testovanie tejto hypotézy sme najprv hodnotili účinky dvoch inhibítorov HDAC, butyrátu sodného (NaB) a TSA na tvorbu preferencií partnerov u dospelých samíc prérií. Potom sme skúmali molekulárne mechanizmy sprostredkujúce účinky TSA pri indukcii preferencie partnera v ženských prériách. Nakoniec sme sa snažili zistiť, či epigenetické zmeny vyvolané TSA počas kohabitácie boli vyvolané aj párením.

výsledky

Liečba TSA uľahčuje preferencie partnerov

Sexuálne naivné ženské prérijne voles boli injektované intracerebroventrikulárne (ICV.) s CSF alebo CSF ​​obsahujúcim 0.08, 0.4 alebo 4 ng) TSA bezprostredne pred kooperáciou 6-hodín s mužom bez párenia a potom sa testovala ich preferencia partnera. Šesť hodín spolužitia so samcom bez párenia nespôsobuje tvorbu preferencií partnerov v ženských prériách4 a preto sa táto paradigma správania široko používa na hodnotenie účinkov rôznych liekov na uľahčenie tvorby preferencií partnerov5.

Zvieratá liečené CSF vykazovali neselektívny styk bok po boku s partnerom alebo cudzincom po 6 hodinách kohabitácie bez párenia (t15= 0.76, P = 0.46; Obrázok 1a). Zvieratá liečené TSA vo všetkých testovaných dávkach však u partnera uprednostňovali viac času ako u cudzinca (t8= 4.35, P = 0.002 pre TSA 0.08 ng skupina; t15= 3.63, P = 0.002 pre TSA 0.4 ng skupina; a t8= 2.58, P = 0.03 pre TSA 4 ng). Dôležité je, že v lokomotorickej aktivite neboli zistené žiadne skupinové rozdiely (F3,46 = 1.25, P= 0.30, Obr. 1b) a nebolo pozorované žiadne agresívne správanie testovanej samice voči cudzincovi alebo partnerovi, čo dokazuje, že účinky TSA boli špecifické pre spoločenské preferencie, a nie ako sekundárne zmeny v pohybe alebo sociálnej averzii voči cudzincovi.

Obrázok 1  

Akútna injekcia trichostatínu A (TSA) uľahčuje tvorbu preferencie partnera v ženských prériách v neprítomnosti párenia. (a) Samice vystavené samcom počas liečby 6 hodín bez cerebrospinálnej tekutiny (CSF) v neprítomnosti párenia ukázali neselektívne ...

Na zistenie, či TSA zvyšuje acetyláciu histónov v mozgových štruktúrach podieľajúcich sa na vytváraní preferencií partnera, bola samostatná dávka samíc injektovaná strednou dávkou TSA (0.4). ng) a kohabitovaný so samcom v neprítomnosti párenia počas 30 min, 2 alebo 9 hodín. V žiadnom časovom bode tak NAcc, ako aj caudate putamen nemohli byť zistené žiadne signifikantné rozdiely v globálnych hladinách acetylácie histónov H3 (Lys14).P > 0.05 pre všetky skupiny, Obr. 1c a d). To demonštruje, že TSA uľahčuje tvorbu preferencie partnera v neprítomnosti párenia, napriek tomu, že neovplyvňuje globálnu acetyláciu histónu H3 v NAcc alebo v caudate putamen.

Dôležité je, že butyrát sodný tiež uľahčil preferenciu partnerov v ženských prériách po kohabitácii s mužom počas 6 hodín bez párenia, čo je spojené so zvýšením globálnej acetylácie histónu H3 (Lys14) v NAcc (Doplnkový obrázok 1). Účinky TSA na tvorbu preferencií partnera by sa teda mohli reprodukovať s iným inhibítorom HDAC, čo svedčí skôr o tom, že by sa skôr nešpecifický účinok TSA mal uľahčiť uprednostňovaním partnera, čo by mohlo viesť k zapojeniu sa do inhibície HDAC. Berúc do úvahy, že TSA je špecifickejší a afinitný inhibítor I / II HDAC23, 24a že behaviorálne účinky TSA boli výraznejšie ako NaB, rozhodli sme sa použiť TSA na NaB na skúmanie špecifických molekulárnych korelátov v nasledujúcich častiach štúdie.

Molekulárne korelácie preferencií partnerov podporovaných TSA

Keďže variácie v hladinách expresie génov vo vole NAcc sú spojené s rôznymi stratégiami párenia medzi monogamnými a nemonogamickými hraboch, a so zmenou tvorby partnerských preferencií v prérijných volách, najmä12, 13, 25, 26Hodnotili sme, či tvorba preferencií partnera s podporou TSA bola spojená s variáciami génovej expresie v NAcc.

Liečba TSA (0.4 ng, ICV) indukovala zvýšenie hladín mRNA OTR v NAcc po 2 hodinách spolužitia v porovnaní s kontrolami liečenými CSF (t10 = 2.38, P = 0.038, Obrázok 2a), ktoré mali tendenciu pretrvávať po 9 hodinách spolužitia (t9 = 2.17, P = 0.058, Obr. 2b). Aj keď bolo možné pozorovať mierne, ale nie významné zvýšenie mRNA V1aR v NAcc 2 hodinách po injekcii TSA, v žiadnom časovom bode neboli zistené žiadne iné rozdiely v skupine žiadnej z ostatných meraných mRNA, vrátane D1R alebo D2R (P > 0.05, Obr. 2a, b). Dôležité je, že neboli pozorované žiadne skupinové rozdiely v kaudátovom putamene v žiadnom časovom bode a pre žiadnu meranú mRNA (P > 0.05 pre všetky skupiny, Obr. 2c, d), čo naznačuje, že zvýšenie OTR mRNA pozorované u zvierat ošetrených TSA bolo špecifické pre NAcc. Okrem toho, takáto up-regulácia bola prítomná len po kohabitácii s mužom, pretože hladiny OTR a V1aR mRNA v NAcc zostali nezmenené 2 hodín po injekcii TSA bez kohabitácie (OTR: 100.0% ± 11.70 pre skupinu CSF, 86.7% ± 12.11 pre TSA skupina, t12 = 0.79, P = 0.444; V1aR: 100.0% ± 26.24 pre skupinu CSF, 92.3% ± 13.75 pre skupinu TSA, t9 = 0.27, P = 0.791).

Obrázok 2  

Liečba TSA (0.4 ng) up-reguluje receptory oxytocínu (OTR) a vazopresínu (V1aR) v ženských prériách počas kohabitácie so samcom v neprítomnosti párenia. Hladiny OTR mRNA (a, b) a proteínu (e, f) boli regulované po 2 (a, e) a 9 hodinách ...

V súlade s vyššími hladinami OTR mRNA vykazovali zvieratá ošetrené TSA tiež vyššie hladiny OTR proteínu v oboch časových bodoch v NAcc (2 hodín: t10 = 2.34, P = 0.041; Počet hodín: 9: t10 = 3.16, P = 0.01, Obr. 2e, f), ale nie caudate putamen (\ tt10 = 0.41, P = 0.69, Obr. 2g, h). Zaujímavé je, že zatiaľ čo žiadna významná zmena hladín mRNA V1aR nebola detegovaná v NAcc pri 2 alebo 9 hodinách po injekcii TSA (Obr. 2a, b), hladiny V1aR proteínu boli signifikantne zvýšené v čase 9 hodín v porovnaní so zvieratami liečenými CSF v NAcc (t9 = 3.46, P = 0.007, Obr. 2f), ale nie caudate putamen (t10 = 0.98, P = 0.35, Obr. 2h). Hoci s niektorými variáciami, hladiny D1R a D2R proteínu v NAcc a caudate putamen neboli významne ovplyvnené podaním TSA (P > 0.05, Obr. 2e-h).

TSA uľahčuje acetyláciu histónu oxtr a avpr1a

Zvýšenie hladiny mRNA aj proteínov pre OTR po kohabitácii po liečbe TSA naznačilo, že TSA pravdepodobne zvýšila transkripciu oxtr, gén kódujúci OTR, namiesto zmeny translácie alebo obratu proteínu. Okrem toho hladiny V1aR proteínu boli vyššie v NAcc, spojené s miernym, ale nie významným zvýšením hladín mRNA po liečbe TSA (Obr. 2). Vzhľadom na to, že TSA je silný inhibítor HDAC triedy I a II23, 24, 27, predpokladali sme, že TSA zvyšuje acetyláciu histónov na oxtr a avpr1a promótory v NAcc, potom zosilňujú ich transkripciu. Prijala sa nová dávka zvierat ICV, injekcie TSA (0.4 ng) a okamžite kohabitoval so samcom bez párenia počas 30 minút pred usmrtením. Časové okno 30-min bolo zvolené na základe predchádzajúcej práce vykazujúcej maximálne zvýšenie acetylácie histónov po lokálnej injekcii TSA u potkanov a myší.28, 29, H3K14 acetylácia na oxtr a avpr1a Promótory sa potom analyzovali imunoprecipitáciou chromatínu.

V súlade s nárastom predtým pozorovaných hladín OTR mRNA a proteínov vykazovali zvieratá ošetrené TSA veľmi vysoký nárast (+ 460%) v acetylácii histónu H3 pri oxtr génového promótora v porovnaní s kontrolami liečenými CSF v NAcc (t10 = 5.88, P = 0.0002), ale nie caudate putamen (t9= 0.31, P = 0.76, Obrázok 3a). Okrem toho, histón H3 acetylácia na. \ T avpr1a signifikantne zvýšený 30 min po podaní TSA (+ 196%) v NAcc (t10 = 3.12, P = 0.01), ale nie caudate putamen (t9= 0.38, P = 0.71) v porovnaní s kontrolami liečenými CSF (\ tObr. 3b). Preto TSA zvýšila miesto acetylácie histónov špecificky v NAcc už v čase 30 minút po začiatku kohabitácie so samcom.

Obrázok 3  

Liečba TSA zvyšuje acetyláciu histónov oxtr a avpr1a promótory počas kohabitácie so samcom v neprítomnosti párenia. Histón H3 acetylácia (Lys14) na oxtr a) a. \ t avpr1a (b) promótory boli zvýšené v nucleus accumbens (NAcc), ale nie ...

TSA uľahčuje preferencie partnerov prostredníctvom OTR a V1aR

Z predchádzajúcej sady experimentov sa vynára molekulárny model pôsobenia, kde počas kohabitácie TSA potencuje acetyláciu histónov pri oxtr a avpr1a promótory, potom zosilňujú ich transkripciu a vedú k vyšším hladinám proteínu OTR a V1aR až do 9 hodín po začiatku kohabitačného obdobia. Dôležité je, že tento účinok TSA je lokálne špecifický, pretože caudate putamen zostáva nedotknutý. Tu sme testovali, či tento nárast OTR a V1aR vyvolaný TSA súvisí s uľahčením tvorby partnerských preferencií. Samice prairie voles dostali intra-NAcc injekciu TSA (0.04ng na stranu) s alebo bez predchádzajúcej injekcie (30minutes pred injekciou TSA, 0.5ng na stranu) CSF alebo CSF ​​obsahujúceho jeden z dvoch rôznych antagonistov OTR, OTA (B) a OTA (T) alebo antagonistu V1aR (V1aRA). Bezprostredne po injekcii TSA boli samičky kohabitované so samcom počas 6 hodín bez párenia, po ktorom nasledoval test preferencie partnerov.

Zvieratá liečené CSF nepreukázali preferenciu partnera (t5 = 0.17, P = 0.87, Obrázok 4a). Zvieratá liečené TSA však strávili významne viac času v kontaktoch s „partnerom“ ako pri „vedľajšom“, čo naznačuje, že jediná injekcia TSA priamo do NAcc je dostatočná na uľahčenie tvorby preferencií partnera bez párenia (t5 = 7.04, P = 0.0009). Je zaujímavé, že blokáda OTR alebo V1aR pred liečbou OTA (B), OTA (T) alebo V1aRA zabránila účinkom TSA (P > 0.05 pre všetky skupiny). Pretože sa nezistili žiadne skupinové rozdiely v pohybovej aktivite (F4,32 = 1.89, P = 0.14, Obr. 4b), tieto údaje naznačujú, že TSA v NAcc uľahčuje vytváranie preferencií partnerov prostredníctvom mechanizmov sprostredkovaných OTR a V1aR spôsobom špecifickým pre správanie.

Obrázok 4  

Preferencia partnera s podporou TSA vyžaduje oxytocín (OTR) a vazopresínové (V1aR) receptory sprostredkované neurotransmisie v ženskom jadre accumbens. (a) TSA uľahčuje preferenciu partnera, keď je infúziou do nucleus accumbens (0.04 ng na stranu), ...

Párenie indukuje podobné neuroadaptácie ako TSA

Po našich predchádzajúcich pozorovaniach sme zistili, že epigenetická potenciácia oxytocínu a vazopresínovej neurotransmisie v ženskej NAcc bola dostatočná na uľahčenie tvorby preferencie partnera v neprítomnosti párenia. Na zistenie, či sa tieto neuroadaptácie vyskytujú aj počas prirodzenej tvorby preferencie partnera, sa samičie prérijné voly spolunažívali s mužom počas 24 hodín v prítomnosti párenia, čo vyvoláva preferenciu partnera4a obetované. V NAcc sme pozorovali zvýšenie hladiny OTR aj V1aR mRNA a proteínov v porovnaní s pohlavne naivnými ženami (OTR: + 38%, t10 = 2.68, P = 0.02 pre mRNA a + 58%, t8 = 3.05, P = 0.01 pre proteín; V1aR: + 89%, t14= 2.53, P = 0.02 pre mRNA a + 26%, t20 = 2.23, P = 0.037 pre proteín, Obr. 5a, b).

Obrázok 5  

Kohabitácia s párením indukuje upreguláciu receptorov oxytocínu (OTR) a vazopresínu (V1aR) v nucleus accumbens (NAcc) ženských prérií voles. 24h Kohabitácia so samcom s párením up-reguluje OTR (a) a V1aR (b) mRNA a proteín ...

Keďže hladiny mRNA aj proteínu pre OTR a V1aR boli zvýšené kohabitáciou s párením, ďalej sme skúmali, či táto up-regulácia bola spojená s epigenetickým zlepšením oxtr a avpr1a transkripcie génov. Nová šarža samíc bola teda spolužitá so samcom po dobu 6 hodín s párením a H3K14 acetyláciou pri oxtr a avpr1a promótory merané imunoprecipitáciou chromatínu. V súlade s OTR a V1aR mRNA a hladinami proteínov vykazujú samice prérijnej voly vyššiu acetyláciu H3K14 na oxtr a avpr1a v NAcc v porovnaní so sexuálne naivnými ženami (\ toxtr: t9 = 2.64, P = 0.02; avpr1a: t9 = 2.91, P = 0.017 Obr. 5c, d). Tieto údaje naznačujú, že paradigmy kohabitácie, ktoré spoľahlivo indukujú preferenciu partnera u ženských prérií, vyvolávajú upreguláciu expresie OTR a V1aR v NAcc prostredníctvom epigenetických mechanizmov, ako bolo pozorované po liečbe TSA.

Diskusia

V tejto štúdii prvýkrát uvádzame epigenetickú reguláciu tvorby partnerských preferencií. Najprv sme demonštrovali, že zvýšená acetylácia histónov v NAcc podávaním inhibítora HDAC uľahčuje tvorbu preferencie partnerov u dospelých samíc prérií v neprítomnosti párenia. Tsliepky, sme odhalili priamy dôkaz, že tvorba preferencií u žien je epigeneticky poháňaná, pretože spolužitie a párenie so samcom sa zvyšuje oxtr a avpr1a expresia génov prostredníctvom zvýšenej acetylácie histónov v NAcc, Aplikácia TSA v NAcc indukovala preferenciu partnera a viedla k vyšším hladinám OTR mRNA a proteínov v NAcc. Okrem toho, hoci globálna acetylácia histónu H3 nebola ovplyvnená u samíc liečených TSA, výrazné obohatenie acetylácie histónov na oxtr Promótor v NAcc bol pozorovaný už v čase 30 minút po podaní TSA. Nakoniec blokovanie OTR v NAcc bolo dostatočné na to, aby sa zabránilo preferencii partnera uľahčenej TSA. Keďže podobné epigeneticky riadené modifikácie boli zistené po kohabitácii s párením, pri postupoch, o ktorých je známe, že indukujú preferencie partnerov, naše údaje navrhli model epigenetickej regulácie sociálneho správania. Dkoexistenciu s mužom, TSA alebo párenie, rýchlo indukuje špecifickú histónovú H3 acetyláciu na \ t oxtr promótor v NAcc, ktorý zvyšuje jeho transkripciu, čo vedie k vyšším hladinám OTR mRNA a proteínov, ktoré potom uľahčujú tvorbu preferencií partnerov.

V ženských prériách voles, 6 hodín spolužitia s mužom bez párenia nespôsobuje tvorbu partnerských preferencií4a toto paradigma správania sa použilo na skúmanie účinkov farmakologických manipulácií na indukciu preferencie partnera5, V našej štúdii, zatiaľ čo kontrolné roztoky ošetrené fyziologickým roztokom alebo CSF ​​nevyvinuli preferencie partnerov, samice prairie sa liečili NaB alebo TSA. Keďže ani NaB, ani TSA neovplyvnili celkovú lokomóciu, ich účinky na preferencie partnerov sa zdali byť skôr špecifické pre správanie než vedľajšie účinky na lokomóciu. Tento špecifický účinok TSA bol potvrdený aj našimi molekulárnymi pozorovaniami. Vskutku, aj keď sú podávané ICV, sme boli schopní detegovať špecifickú zmenu génovej expresie v NAcc, ale nie v priľahlej štruktúre, caudate putamen. Okrem toho ani v rámci NAcc, D1R a D2R hladiny mRNA a proteínu zostali nedotknuté. Zdá sa, že takáto špecificita je prekvapujúca pre široký inhibítor HDAC, ako je TSA, ktorý ovplyvňuje HDAC triedy I aj II. Bolo však uvedené, že TSA ovplyvňuje expresiu len malej podskupiny génov v cicavčom genóme30-32, vrátane u myší20.

Tu sme demonštrovali, že acetylácia histónu H3 na Lys14 na oxtr promótor, modifikácia spojená so zvýšenou génovou transkripciou, vrátane počas cerebrálnej plasticity33, 34, zdôrazňuje vyššie hladiny OTR mRNA a proteínu. V reakcii na TSA sa acetylácia histónov na oxtr promótor zvyšuje a uľahčuje aktiváciu jeho transkripcie v ľudskej bunkovej línii22, ktoré podporujú naše zistenia oxtr môže byť regulovaný epigeneticky. Pretože lokálna blokáda OTR v NAcc bola dostatočná na zabránenie behaviorálnych účinkov TSA, naše údaje naznačujú, že expresia OTR indukovaná TSA v NAcc počas kohabitácie sprostredkovala uľahčenie tvorby partnerských preferencií. Okrem toho 24 hodín kohabitácie s párením, postup, o ktorom je známe, že spoľahlivo indukuje preferenciu partnera u ženských prérií, indukuje podobné zvýšenie expresie OTR u samíc NAcc. To je v úplnom súlade so známym zapojením oxytocínu a jeho receptora do neurobiológie tvorby partnerských preferencií u ženských voles. Párenie indukuje zvýšenie extracelulárnych hladín oxytocínu v NAcc25a lokálna infúzia oxytocínu do NAcc uľahčuje tvorbu preferencie partnera v neprítomnosti párenia8, Okrem toho antagonisty OTR blokujú tvorbu preferencií partnera indukovanú podaním oxytocínu alebo párením8, 35, Dôležité je, že nadmerná expresia OTR sprostredkovaná vírusom v ženskej NAcc je dostatočná na uľahčenie tvorby preferencií partnera12, 13.

Okrem posilnenia úlohy OTR, naše výsledky tiež poskytujú dôkazy o aktivácii expresie génu OTR prostredníctvom epigenetických mechanizmov počas kohabitácie so samcom v neprítomnosti párenia. Napriek tomu, že takéto spolužitie bez párovania na krátke časové obdobie je nedostatočné na vyvolanie preferencie partnerov, aktivuje neurobiologické procesy, ktoré sú základom tvorby preferencií partnerov.. Napríklad dve hodiny voľnej expozície u samca vyvolávajú mierne, ale nevýznamné zvýšenie uvoľňovania oxytocínu u samíc NAcc.25, Preto sa môže navrhnúť, že TSA alebo NaB potencujú neuroadaptácie vyvolané kohabitáciou u muža, čo uľahčuje rozvoj preferencie partnera. Je zaujímavé, že takáto potenciácia už bola opísaná u hlodavcov, kde inhibítory HDAC triedy I a II, vrátane NaB a TSA, uľahčujú konsolidáciu vzdelávacej udalosti, ktorá nemá za následok dlhodobú tvorbu pamäte u kontrolných zvierat.36, 37. Na podporu tohto pojmu, dlhšie obdobia spolužitia (napr, 48hours) môže navodiť preferencie partnera aj v neprítomnosti párenia4. Je tiež dôležité poznamenať, že kohabitácia s párením spustená u samíc NAcc zvyšuje expresiu OTR a V1aR expresiou prostredníctvom rovnakých epigenetických mechanizmov ako tie, ktoré boli pozorované po kohabitácii s liečbou TSA, čo dokazuje, že TSA a párenie ovplyvňujú tie isté cesty na podporu. vytváranie preferencií partnerov. Dôležité je, že TSA neindukuje upreguláciu OTR a V1aR u samíc NAcc v neprítomnosti kohabitácie so samcom. Celkovo to podporuje hypotézu, že TSA uľahčuje vytváranie preferencií partnerov prostredníctvom zosilnenia endogénnych neuroadaptácií, ktoré sú prirodzene spúšťané spolužitím muža, namiesto toho, aby sa aktivovali na týchto alebo rôznych neuroadaptáciách.

OŠtúdia ur tiež poukazuje na kritickú úlohu NAcc V1aR pri vytváraní partnerských preferencií u žien, pretože zvieratá liečené TSA vykazujú vyššie hladiny V1aR, ktorých blokáda zabránila vytváraniu preferencií partnerov podporovaných TSA, Okrem toho, tieto účinky boli spojené s vyššou acetyláciou histónov na avpr1a Bez významného zvýšenia mRNA V1aR pravdepodobne v dôsledku neoptimálneho časového bodu. Aj keď nemôžeme vylúčiť reguláciu stability proteínu prostredníctvom TSA prostredníctvom acetylácie nebielónových proteínov38, toto zistenie naznačuje, že podobne ako. \ t oxtr promotor, TSA by mohol podporovať avpr1a transkripcie prostredníctvom lokálnej acetylácie histónov. Zatiaľ čo bol opísaný príspevok AVP v párovaní mužského páru5, jeho úloha v ženskom správaní je stále kontroverzná. Na jednej strane ICV, Injekcia AVP uľahčuje tvorbu preferencií partnerov u samcov aj samíc, čo je zabránené blokádou V1aR alebo OTR.39. Na druhej strane ICV, Injekcia antagonistu V1aR blokuje preferenciu partnerstva indukovanú párením u samcov, ale nie u samíc, prérijných voles.40, Všetky tieto štúdie však boli použité ICV, zabránenie ďalšiemu nahliadnutiu do príslušných štruktúr. Tu uvádzame prvý dôkaz, že AVP neurotransmisia v NAcc môže byť zapojená do tvorby preferencií partnerov u ženských voles, zatiaľ čo väčšina z literatúry opisuje jej zapojenie do rôznych oblastí, ako je ventrálna palida, laterálna priehradka, jadro lôžka. stria terminalis a amygdala u mužov5. Preto je zaujímavé poznamenať, že blokáda OTR alebo V1aR v samičej NAcc bola dostatočná na zabránenie vytváraniu preferencií partnera po liečbe TSA, čo naznačuje, že vytvorenie partnerskej preferencie vyžaduje aktiváciu V1aR aj OTR. Tjeho zistenie je v súlade s predchádzajúcim pozorovaním v mužských prériách a podporuje ho, že súbežný prístup k OTR a V1aR v LS je nevyhnutný pre preferencie partnerov vyvolané AVP6. Okrem toho pozorovanie špecifického zvýšenia hladín OTR aj V1aR u zvierat ošetrených TSA ďalej podporuje požiadavku súčasnej aktivácie AVP a oxytocínových neurotransmisií na párové viazanie.

V kombinácii s oxytocínom a AVP sa dopamínová neurotransmisia v NAcc moduluje v tvorbe partnerských preferencií u ženských voles.9. Hoci párenie indukuje uvoľňovanie dopamínu v NAcc9variácie hladín receptora sa pozorujú až po dlhšom období - dlhšom ako 24h - spolužitia s párením, čo je dôležité pre udržanie párového párovania10, V súlade s týmito pozorovaniami samičie prérie, ošetrené TSA, vykazovali preferenciu partnera bez významnej variácie receptorov dopamínu D1R a D2R. Preto táto absencia regulácie dopamínového receptora poskytuje ďalší dôkaz špecifickosti TSA.

Naše údaje po prvý raz uvádzajú epigenetickú zložku v neurobiológii párového viazania a naznačujú, že TSA indukuje „permisívny stav“ v ženských prériách voles, potencujúci prirodzenú molekulárnu odozvu na spolužitie a podporu vytvárania silnejších sociálnych interakcií čo vedie k preferencii partnerov, Je preto lákavé predpokladať, že preferencia partnera podporovaného TSA by sa mohla ďalej posilniť a viesť k trvalej väzbe. Napriek tomu, že špecifické HDACs zostávajú identifikované, bolo by zaujímavé ďalej skúmať účinky TSA na iné správanie spojené s monogamnou životnou stratégiou v prérijných volách, ako je selektívna agresia a biparentálna starostlivosť. Berúc do úvahy význam prérijných voles pri modelovaní neurobiologických mechanizmov párového viazania u ľudí5a sľubné inhibítory HDAC už v klinických skúškach24, 41, 42naše údaje pripravujú pôdu pre nové farmakologické možnosti ovplyvňovania sociálneho správania.

Metódy

Predmety

Sexuálne naivná žena prérijna voles (Microtus ochrogaster) z laboratórnej chovnej kolónie boli odstavené vo veku 21 a umiestnené v pároch súrodencov rovnakého pohlavia v plastových klietkach (12 × 28 × 16 cm) s vodou a potravou. podľa chuti, Všetky klietky boli udržiavané v cykle 14: 10 h svetlo-tma a teplota bola približne 20 ° C. Všetky zvieratá boli náhodne rozdelené do experimentálnych skupín, keď dosiahli vek 70-90. Počet použitých zvierat sa zakladal na predchádzajúcich štúdiách v našej skupine a ďalších, v kombinácii s analýzou výkonu. Experimentálne postupy boli schválené Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a používanie na Floridskej štátnej univerzite.

Drogy

Butyrát sodný (NaB), rozpustený vo fyziologickom roztoku a Trichostatín A (TSA) rozpustený v umelom nosiči mozgovomiechového moku (CSF, BioFluids, Rockville, MD) boli zakúpené od Sigma-Aldrich (St Louis, MO). NaB bol injikovaný intraperitoneálne (ip) v dávke 600 mg / kg, o ktorej je známe, že indukuje acetyláciu histónov v niekoľkých mozgových štruktúrach u myší43, 44, Podobne rozsah dávok použitý pre TSA bol založený na predchádzajúcej práci určujúcej jej účinnosť pri indukovaní lokálnych acetylačných dejov histónov a zmien v expresii génov u hlodavcov.19, 20, Selektívny antagonista V1aR receptora V1aRA, d(CH2)5[Tyr (Me)] AVP a OTR antagonista OTA (B), [d(CH2)5Tyr (Me)2, Thr4Tyr-NH29] -OVT) boli získané od firmy Bachem (Torrance, CA). Druhý, selektívnejší OTR antagonista, OTA (T), dGly-NH2-d(CH2)5 [Tyr (Me)2, Thr4] OVT45Maurice Manning (University of Toledo, OH). Tieto antagonisty a použité dávky boli zvolené na základe predchádzajúcich štúdií, ktoré demonštrujú ich selektivitu pre V1aR alebo OTR, resp.35, 39, 46-49.

Stereotaxická kanylácia a mikroinjekcia

Samice boli anestetizované pentobarbitalom sodným (1mg / 10g telesná hmotnosť) a 26 meradlo z nehrdzavejúcej ocele vodiace kanyly (Plastics One, Roanoke, VA) boli stereotaxicky implantované, zamerané na laterálnu komoru (jednostranne; nosná tyč pri -2.5 mm, 0.6 mm rostral, 1.0 mm laterálne, a 2.6 mm ventrálne k bregma) alebo miestne špecificky k NAcc (bilaterálne; nosová lišta pri −2.5 mm, 1.7 mm rostrálna, ± 1.0 mm obojstranná a 4.5 mm ventrálna k bregma). Po 3 dňoch zotavenia dostali pacienti mikroinjekcie buď CSF alebo CSF ​​obsahujúce rôzne koncentrácie TSA. Keď sa použili selektívne antagonisty pre OTR alebo V1aR, injikovali sa 30 minúty pred TSA. Injekcie sa uskutočnili ihlou 33, ktorá presahovala 1 mm pod vodiacu kanylu do cieľovej oblasti, v injekčnom objeme 500 nL do laterálnej komory (ICV.) alebo 200 nL na stranu do NAcc. Ihla bola pripojená na Hamiltonovu injekčnú striekačku (Hamilton, Reno, NV) cez polyetylén-20 hadičku a piestová depresia bola uskutočňovaná pomaly, čo vyžadovalo 1 minútu na injekciu. Na konci experimentu boli všetky subjekty usmrtené rýchlou dekapitáciou a mozgy boli extrahované, aby sa overilo umiestnenie kanyly pozorovateľom, ktorý bol slepý k experimentálnym podmienkam. Pacienti s chybne umiestnenými kanylami boli vylúčení z analýzy dát.

Test spolužitia a preferencie partnerov

Okamžite nasledujte ip., ICValebo intra-NAcc injekcie liekov, samičky boli kohabitované so samcom počas 6 hodín bez párenia. Neprítomnosť párenia bola overená skúmaním videozáznamu. Na vyšetrenie neuroadaptácií vyvolaných kohabitáciou s páriacimi samičkami (2 μg na deň) ip, pre 3 dni) boli spoluobčané so samcom počas 6 alebo 24 hodín a prítomnosť párenia bola overená a posteriori na videokazete (od 6 po 11 záchvaty počas prvých 6 hodín spolužitia).

Test preferencie partnera sa uskutočňoval bezprostredne po kohabitácii 6-hour, ako bolo opísané vyššie11. Stručne povedané, trojkomorové testovacie zariadenie pozostávalo z neutrálnej klietky spojenej s dvoma paralelnými identickými klietkami, z ktorých každá obsahovala stimulačné zviera - neznámeho „cudzinca“ muža alebo známeho „partnera“ použitého v období spolužitia. Ženské subjekty sa mohli počas 3-hodinového testovania voľne pohybovať v aparáte a stimulační muži boli uviazaní v ich klietkach, čo neumožňovalo žiadny priamy kontakt medzi sebou. Celá relácia bola natočená na video a trvanie kontaktu subjektu s partnerom alebo cudzím človekom bolo neskôr vyčíslené trénovaným experimentátorom, ktorý nepoznal biologické skupiny. Partnerská preferencia bola definovaná ako subjekty, ktoré trávia podstatne viac času v tele kontaktom s partnerom oproti cudzincovi, čo určujú spárované, obojstranné t-test. Okrem toho bol trojkomorový prístroj vybavený fotoelektrickými senzormi, ktoré umožňujú stanovenie lokomotorickej aktivity indikovanej počtom vstupov samice do stimulačných komôr. Toto lokomotorické skóre nám teda umožňuje kontrolovať predpokladané sekundárne účinky liekov na správanie žien, ako je napríklad všeobecná aktivita, úzkosť alebo pozmenený prieskum nového prostredia, ako to bežne používa naša skupina a iné.12.

Extrakcia RNA a proteínov

Samice boli usmrtené rýchlou dekapitáciou a mozgy boli okamžite extrahované a zmrazené na suchom ľade. Koronálne rezy (200 um) boli narezané na kryostate a mrazené na mikroskopické sklíčka. Bilaterálne tkanivové razníky s priemerom 1 mm sa odobrali z celého NAcc a caudate putamen, ktorý bol kontrolnou oblasťou a až do spracovania sa skladovali pri -80 ° C. Celková RNA a proteíny boli extrahované s použitím protokolu TRI-Reagent podľa inštrukcií výrobcu (Molecular Research Center, Cincinnati, OH).

Analýza expresie proteínu pomocou Western-blot

Po separácii na 10% polyakrylamidovom géli (15% pre históny) boli proteíny prenesené na nitrocelulózové membrány a inkubované s nasledujúcimi primárnymi protilátkami: anti-OTR (sc-8102, 1: 1000), -V1aR (sc-18096, 1: 500), -D1R (sc-33660, 1: 1000), -D2R (sc-9113, 1: 1000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), -aktín (A2066, 1: 1000, Sigma Aldrich. St Louis, MO), alebo anti-acetyl histón H3 (Lys14, # 06-911, 1: 1000) a celkový H3 (# 05-928, 1: 1000, Millipore, Temecula, CA). Všetky protilátky sú validované pre ich použitie u ľudí, potkanov a myší, s ktorými prérijne voles zdieľajú vysoké percento homológie (v rozsahu od 81 do 96%). Po hybridizácii so sekundárnou protilátkou konjugovanou s HRP boli membrány odhalené pomocou ECL (substrát ECL SuperSignal West Dura, Pierce Biotechnologies, Rockford, IL) a exponované na film Fuji XAR (Fuji Film, Tokyo, Japonsko). Kvantifikácia bola uskutočnená s použitím softvéru AIS 6.0 Image (Imaging Research, St. Catharines, Ontario, Kanada) a všetky signály boli normalizované v rámci rovnakej membrány na aktín, s výnimkou acetyl-H3 signálu, ktorý bol normalizovaný na celkový signál histón H3. Normalizované údaje sú potom vyjadrené ako percento zvierat liečených CSF.

Semikvantitatívna polymerázová reťazová reakcia v reálnom čase (RT-PCR)

0.5 ug celkovej RNA sa spracovalo na komplementárnu syntézu DNA a potom sa analyzovalo, ako bolo opísané vyššie50 s normalizáciou na gén nikotínamid adenín dinukleotid dehydrogenázy (NADH). Všetky reakcie sa uskutočnili trojmo a ich špecificita sa overila analýzou krivky topenia a separáciou na 2% agarózovom géli. Použité primérové ​​sekvencie boli nasledujúce: 5'-TCCAAGGCCAAAATCCGCACGG-3 '(Fwd) a 5'-GGCAGAAGCTTCCTTGGGCGC-3' (Rev) pre OTR, 5'-GAGGTGAACAATGGCACTAAAACC-3 '(For) a 5'-CCAGATGTGGTAGCAGATGAAGC-3' (Rev) pre AVP1aR, 5'-TTAACAACAATGGGGCTGTG-3 '(For) a 5'-GGCATGAGGGATCAGGTAAA-3' (Rev) pre D1R, 5'-GTGAAGGCGCTGTAGAGGAC-3 '(For) a 5'-CGGTGTGTTCATCATCTGCT-3' (Rev ) pre D2R a 5'-CTATTAATCCCCGCCTGACC-3 '(For) a 5'-GGAGCTCGATTTGTTTCTGC-3' (Rev) pre NADH. Normalizované údaje sú vyjadrené ako percento zvierat liečených CSF.

Imunoprecipitácia chromatínu

Histónová H3 acetylácia (Lys14) v NAcc a kaudátových putamenových tkanivových punčoch bola analyzovaná s použitím Magna ChIP proteínu G Tissue Kit (Millipore, Temecula, CA) podľa inštrukcií výrobcu. Stručne, po zosieťovaní s 1% formaldehydom bol chromatín strihaný s použitím Misonix XL-2000 na fragmenty 200-600 bp. Imunoprecipitácia acetylovaného histónu H3 (Lys14) sa potom uskutočnila s 10 ug anti-acetyl-H3 (Lys14) protilátky (Millipore) cez noc pri 4 ° C. Po premytí, elúcii z guľôčok a zvrátení zosieťovania sa imunoprecipitovaná DNA purifikovala a analyzovala trojmo pomocou RT-PCR na platforme iCycler (pozri vyššie) s internou krivkou štandardu vytvorenou zo združených vzoriek INPUT. Priméry boli navrhnuté tak, aby amplifikovali 236 bp-dlhú oblasť umiestnenú 128 bp upstream od prvého kódovania exónu pre prérijnú vole OTR (oxtrPrístupové číslo GenbankAF079980), alebo 192 bp dlhá oblasť umiestnená 141 bp upstream od prvého kódovania exónu pre pririe vole V1aR (avpr1aPrístupové číslo GenbankAF069304). Sekvencie boli nasledujúce: 5'-CTCCGGAGCCGGGGCTAAGT-3 '(Fwd) a 5'-ACCGCTTCCCCGAGAGTAGGG-3' (Rev) pre oxtra 5'-GGTGGACCAGCCAGACCCCA-3 '(Fwd) a 5'-TGCAGAGCCAGGCGCTTTCC-3' (Rev) pre avpr1a, Každá vzorka bola normalizovaná príslušnou hodnotou INPUT a dáta sú potom vyjadrené ako percento zvierat ošetrených CSF.

Štatistické analýzy a spracovanie údajov

Pre analýzy preferencií partnerov boli vylúčené zvieratá, ktoré vykazovali párenie počas kohabitačného obdobia alebo s chybne umiestnenými kanylami. Pri všetkých ostatných molekulárnych analýzach bolo vylúčené maximálne jeden dátový bod na jednu biologickú skupinu, keď bol identifikovaný ako odľahlý. Väčšina experimentov bola replikovaná, okrem prípadov, keď boli výsledky veľmi jasné. Čas strávený pri kontakte s každým zo stimulačných zvierat v priebehu testu partnerskej preferencie bol analyzovaný dvojstranným párovaním t-test. Lokomotívne skóre sa analyzovalo pomocou dvojitého sledu t-test (pre dve skupiny) alebo jednosmerná ANOVA (pre viac ako dve skupiny) a podľa potreby Fischerova PLSD post-hoc boli uskutočnené testy s prahovou hodnotou významnosti P <0.05. Po overení normality boli všetky ostatné údaje analyzované obojstranne t- test za predpokladu, že sa vopred alebo vopred testujú rovnaké alebo nerovnaké odchýlky. Všetky štatistické analýzy sa uskutočnili pomocou softvéru StatView (SAS Institute). Keď sú dáta štandardizované na ich príslušné kontroly (% CSF, soľných alebo páriacich skupín), štatistické analýzy sa uskutočnili na nespracovaných údajoch.

Doplnkový materiál

Poďakovanie

Túto prácu podporil Národný inštitút duševného zdravia (NIMH), ktorý udeľuje MHR21-083128 spoločnostiam MK a ZW a MHR01-058616 spoločnosti ZW.

poznámky pod čiarou

 

Konflikt záujmov: Autori neuvádzajú žiadny konflikt záujmov.

Príspevky autora

Experimenty uskutočnili HW, FD a YL. HW a FD analyzovali údaje. Štúdiu navrhli HW, FD, ZW a MK. FD, ZW a MK napísali príspevok. Všetci autori diskutovali o výsledkoch a komentovali rukopis.

Referencie

1. Bora E, Yucel M, Allen NB. Neurobiológia ľudského afiliatívneho správania: dôsledky pre psychiatrické poruchy. Aktuálne stanovisko v psychiatrii. 2009, 22: 320-325. [PubMed]
2. Thomas JA, Birney EC. Rodičovská starostlivosť a párenie prérie vole, (Microtus ochrogasterBehaviorálna ekológia a Sociobiológia. 1979, 5: 171-186.
3. Getz LL, Hofmann JE. Sociálna organizácia vo voľne žijúcich prériách voles,Microtus ochrogasterBehaviorálna ekológia a Sociobiológia. 1986, 18: 275-282.
4. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Vývoj partnerských preferencií v ženských prériách (Microtus ochrogaster): Úloha sociálnych a sexuálnych skúseností. Hormóny a správanie. 1992, 26: 339-349. [PubMed]
5. Young KA, Gobrogge KL, Liu Y, Wang Z. Neurobiológia párového spájania: postrehy zo sociálne monogamného hlodavca. Hranice v neuroendokrinológii. 2011, 32: 53-69. [Článok bez PMC] [PubMed]
6. Liu Y, Curtis JT, Wang Z. Vasopresín v laterálnej priehradke reguluje tvorbu párových väzieb u samčích prérijných voles (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience. 2001, 115: 910-919. [PubMed]
7. Lim MM, Young LJ. Vazopresín-dependentné nervové obvody tvoriace párové väzby v monogamnej prérii vole. Neuroscience. 2004, 125: 35-45. [PubMed]
8. Liu Y, Wang ZX. Nukleus accumbens oxytocín a dopamín interagujú a regulujú tvorbu párových väzieb u ženských prérií. Neuroscience. 2003, 121: 537-544. [PubMed]
9. Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. Dopamínové receptory D2 v nucleus accumbens sú dôležité pre sociálne pripojenie v ženských prériách (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience. 2000, 114: 173-183. [PubMed]
10. Aragona BJ a kol. Nucleus accumbens dopamín odlišne sprostredkováva tvorbu a udržiavanie monogamných párových väzieb. Nat Neurosci. 2006, 9: 133-139. [PubMed]
11. Liu Y a kol. Nucleus accumbens dopamín sprostredkuje amfetamínom indukované poškodenie sociálnej väzby u monogamných druhov hlodavcov. Zborník Národnej akadémie vied. 2010, 107: 1217-1222. [Článok bez PMC] [PubMed]
12. Keebaugh AC, Young LJ. Zvýšenie expresie oxytocínového receptora v jadre accumbens pred-pubertálnych prérijných prérií zvyšuje kvalitu aloparentálnej reakcie a tvorbu preferencií partnerov ako dospelých. Hormóny a správanie. 2011, 60: 498-504. [Článok bez PMC] [PubMed]
13. Ross HE a kol. Variácia hustoty receptora oxytocínu v jadre Accumbens má rozdielne účinky na afiliatívne správanie v monogamných a polygamných volónoch. The Journal of Neuroscience. 2009, 29: 1312-1318. [Článok bez PMC] [PubMed]
14. Pitkow LJ a kol. Uľahčenie afilácie a tvorby párov väzieb génom transferu vazopresínu do ventrálneho predného mozgu monogamného hrdla. The Journal of Neuroscience. 2001, 21: 7392-7396. [PubMed]
15. Veenema AH. K pochopeniu toho, ako sociálne skúsenosti v ranom veku menia sociálne správanie regulované oxytocínom a vazopresínom. Hormóny a správanie. 2012, 61: 304-312. [PubMed]
16. Francis DD, Young LJ, Meaney MJ, Insel TR. Prirodzene sa vyskytujúce rozdiely v starostlivosti o matku sú spojené s expresiou receptorov oxytocínu a vazopresínu (V1a): rodové rozdiely. Journal of Neuroendokrinology. 2002, 14: 349-353. [PubMed]
17. Champagne FA a kol. Starostlivosť o matku súvisiaca s metyláciou promótora estrogénového receptora-a1b a expresia estrogénového receptora-α v mediálnej preoptickej oblasti samičieho potomka. Endocrinology. 2006, 147: 2909-2915. [PubMed]
18. Murgatroyd C a kol. Dynamické programy metylácie DNA pretrvávajú nepriaznivé účinky stresu v ranom veku. Nat Neurosci. 2009, 12: 1559-1566. [PubMed]
19. Weaver ICG a kol. Epigenetické programovanie materinským správaním. Nat Neurosci. 2004, 7: 847-854. [PubMed]
20. Weaver ICG, Meaney MJ, Szyf M. Účinky starostlivosti o matku na hipokampálny transkriptóm a správanie sprostredkované úzkosťou u potomkov, ktoré sú reverzibilné v dospelosti. Zborník Národnej akadémie vied Spojených štátov amerických. 2006, 103: 3480-3485. [Článok bez PMC] [PubMed]
21. Bonthuis PJ, Patteson JK, Rissman EF. Získavanie sexuálnej citlivosti: Úlohy acetylácie chromatínu, estrogénového receptora-α a vaječníkových hormónov. Endocrinology. 2011, 152: 3172-3181. [Článok bez PMC] [PubMed]
22. Zhong S, Fields CR, Su N, Pan YX, Robertson KD. Farmakologická inhibícia epigenetických modifikácií spojená s profilovaním génovej expresie odhalila nové ciele aberantnej metylácie DNA a deacetylácie histónov pri rakovine pľúc. Oncogene. 2007, 26: 2621-2634. [PubMed]
23. Yoshida M, Horinouchi S, Beppu T. Trichostatín A a trapoxín: nové chemické sondy na úlohu acetylácie histónov v štruktúre a funkcii chromatínu. Bioessays. 1995, 17: 423-430. [PubMed]
24. Monneret C. Inhibítory históndeacetylázy. European Journal of Medicinal Chemistry. 2005, 40: 1-13. [PubMed]
25. Ross HE a kol. Charakterizácia oxytocínového systému regulujúceho afiliatívne správanie u ženských prérií. Neuroscience. 2009, 162: 892-903. [Článok bez PMC] [PubMed]
26. Young LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. Rozdiely druhov v expresii génov centrálneho receptora oxytocínu: Komparatívna analýza sekvencií promótora. Journal of Neuroendokrinology. 1996, 8: 777-783. [PubMed]
27. Witt O, Deubzer HE, Milde T a Oehme I. Rodina HDAC: Aké sú ciele týkajúce sa rakoviny? Listy proti rakovine. 2009; 277: 8–21. [PubMed]
28. Vecsey CG a kol. Inhibítory histón-deacetylázy zvyšujú pamäť a synaptickú plasticitu prostredníctvom CREB: transkripčnej aktivácie závislej od CBP. The Journal of Neuroscience. 2007, 27: 6128-6140. [Článok bez PMC] [PubMed]
29. Monsey MS, Ota KT, Akingbade IF, Hong ES, Schafe GE. Epigenetické zmeny sú kritické pre konsolidáciu strachovej pamäte a synaptickú plasticitu v bočnej Amygdale. PLoS ONE. 2011, 6: e19958. [Článok bez PMC] [PubMed]
30. Van Lint C, Emiliani S, Verdin E. Expresia malej frakcie bunkových génov sa mení v odozve na hyperacetyláciu histónov. Génová expresia. 1996, 5: 245-253. [PubMed]
31. Mariadason JM, Corner GA, Augenlicht LH. Genetická reprogramovanie v dráhach dozrievania buniek hrubého čreva indukovaných mastnými kyselinami s krátkym reťazcom: Porovnanie s trichostatínom A, Sulindacom a kurkumínom a dôsledky pre chemoprevenciu rakoviny hrubého čreva. Výskum rakoviny. 2000, 60: 4561-4572. [PubMed]
32. Halsall J, Gupta V, O'Neill LP, Turner BM, slávik KP. Gény sú často chránené pred globálnou hyperacetyláciou histónov vyvolanou inhibítormi HDAC. MÁ JEDEN. 2012; 7: e33453. [Článok bez PMC] [PubMed]
33. Ito K, Adcock I. Acetylácia histónov a deacetylácia histónov. Molekulárna biotechnológia. 2002, 20: 99-106. [PubMed]
34. Molfese DL. Posilňovanie neurovedy prostredníctvom epigenetiky: molekulárne mechanizmy učenia a pamäti. Vývojová neuropsychológia. 2011, 36: 810-827. [Článok bez PMC] [PubMed]
35. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Mobilné mechanizmy sociálneho pripojenia. Hormóny a správanie. 2001, 40: 133-138. [PubMed]
36. Hawk JD, Florian C, Abel T. Posttréningová intrahippocampálna inhibícia histónových deacetyláz triedy I zvyšuje dlhodobú pamäť objektu. Učenie a pamäť. 2011; 18: 367–370. [Článok bez PMC] [PubMed]
37. Stefanko DP, Barrett RM, Ly AR, Reolon GK, Wood MA. Modulácia dlhodobej pamäte na rozpoznanie objektu prostredníctvom HDAC inhibície. Zborník Národnej akadémie vied. 2009, 106: 9447-9452. [Článok bez PMC] [PubMed]
38. Yang XJ, Seto E. Lyzín Acetylácia: kodifikovaná Crosstalk s inými posttranslačnými modifikáciami. Molekulová bunka. 2008, 31: 449-461. [Článok bez PMC] [PubMed]
39. Cho MM, DeVries AC, Williams JR, Carter CS. Účinky oxytocínu a vazopresínu na partnerské preferencie u mužských a ženských prérijných voles (Microtus ochrogaster) Behaviorálne neurovedy. 1999, 113: 1071-1079. [PubMed]
40. Insel TR, Hulihan TJ. Rodovo špecifický mechanizmus párového viazania: Oxytocín a tvorba partnerských preferencií v monogamných hraboch. Behaviorálne neurovedy. 1995, 109: 782-789. [PubMed]
41. Stimson L, La Thangue NB. Biomarkery na predpovedanie klinických reakcií na inhibítory HDAC. Rakovinové listy. 2009, 280: 177-183. [PubMed]
42. Iannitti T, Palmieri B. Klinické a experimentálne aplikácie fenylbutyrátu sodného. Drogy vo výskume a vývoji. 2011; 11: 227–249. [Článok bez PMC] [PubMed]
43. Kumar A, et al. Rekonštrukcia chromatínu je kľúčovým mechanizmom, ktorý je základom plastovej indukcie kokaínu v Striatume. Neurón. 2005, 48: 303-314. [PubMed]
44. Schroeder FA, Lin CL, Crusio WE, Akbarian S. Antidepresívne účinky inhibítora histón-deacetylázy, butyrátu sodného, ​​v myši. Biologická psychiatria. 2007, 62: 55-64. [PubMed]
45. Manning M., et al. Peptidové a nepeptidové agonisty a antagonisty pre vazopresín a oxytocín V1a, V1b, V2 a OT receptory: výskumné nástroje a potenciálne terapeutické činidlá. In: Inga DN, Rainer L, redaktori. Pokrok vo výskume mozgu. Elsevier; 2008. s. 473 – 512. [PubMed]
46. Witt DM, Insel TR. Selektívny antagonista oxytocínu zoslabuje uľahčenie progesterónu ženského sexuálneho správania. Endocrinology. 1991, 128: 3269-3276. [PubMed]
47. Winslow JT, Hastings N, Carter CS, Harbaugh CR, Insel TR. Úloha centrálneho vazopresínu v párovom viazaní v monogamných prériách. Nature. 1993, 365: 545-548. [PubMed]
48. Insel T. Oxytocín - neuropeptid pre príslušnosť: dôkazy z behaviorálnych, receptorových autorádiografických a porovnávacích štúdií. Psychoneuroendokrinológia. 1992; 17: 3–35. [PubMed]
49. Insel T, Wang Z, Ferris C. Spôsoby distribúcie mozgového vazopresínového receptora spojené so sociálnou organizáciou u mikrotínových hlodavcov. The Journal of Neuroscience. 1994, 14: 5381-5392. [PubMed]
50. Hollis F, Duclot F, Gunjan A, Kabbaj M. Individuálne rozdiely v účinku sociálnej porážky na anhedóniu a acetyláciu histónov v krysích hippocampusch. Hormóny a správanie. 2011, 59: 331-337. [Článok bez PMC] [PubMed]