Endogena opioidna nevroplastičnost dopaminergičnih nevronov v ventralnem tegmentalnem območju vpliva na naravno in opiatno nagrado (2014).

KOMENTARJI: O Študije družbe DeltaFosB pogosto navajamo vse osredotočene na nucleus accumbens (center za nagrajevanje) in ugotovil, da seks v veliki meri izkorišča enake možganske mehanizme kot met in kokain. Iz mejne študije istega raziskovalca (Zakon o naravnih in zdravilskih nagradah o mehanizmih skupne nevralne plastičnosti z ΔFosB kot ključnim posrednikom (2013)):

Tako se naravne nagrade in nagrade za zdravila ne konvergirajo le na isti živčni poti, temveč se konvergirajo na istih molekularnih mediatorjih in verjetno v istih nevronih v Nucleus Accumbens, da vplivajo na izstopajočo spodbudo in "željo" obeh vrst nagrad

Odnesejo: met, kokain in seks vse delajo enake temeljne stvari istim živčnim celicam v centru za nagrajevanje (nucleus accumbens), karkoli drugje v možganih. To je uničilo običajno govorjenje, da se naravne nagrade in zdravila razlikujejo po mehanizmih in učinkih.

Ta nova študija je preučila, kaj spol naredi VTA. VTA se tam začne z živčnimi celicami, ki proizvajajo dopamin - in se razvejajo do nucleus accumbens, čelne skorje in amigdale. V bistvu je VTA vir (izvir) večine našega dopamina. Oglejte si ti dve sliki nagradnega kroga: Pic1, Pic2

Raziskovalci so ugotovili, da spol (vrhunec) povzroči, da se celična telesa v VTA začasno skrčijo (pri moških). Celična telesa in njihovi dendriti sestavljajo sivo snov v možganih. To je tisto, kar heroinska odvisnost počne z VTA (ne enkratna uporaba heroina, ampak kronična uporaba heroina). Upoštevajte, da je to isto krčenje celic telesa VTA pojavijo pri ljudeh, odvisnih od heroina.

Spolno povzročeno krčenje celic traja vsaj 7 dni. Spremembe, ki jih je povzročil spol, so se vrnile v normalno stanje v dneh 30, vendar so raziskovalci samo ocenili dneve 1, 7 in 30.

Krčenje celičnih teles pri odvisnosti od heroina povzroči nižji dopamin v nucleus accumbens - ali kar imenujemo desenzibilizacija. Raziskovalci so podganam dajali morfij, da bi ocenili njihov odziv (po spolu), vendar se ni zgodilo nič. Običajno so podgane morfiju zelo všeč, tu pa so jih začasno desenzibilizirali. Skratka, nagrajevalni krog podejakulacijskih podgan se ni odzival na nizko raven heroina. Raziskovalci so domnevali, da bi bili potrebni višji odmerki, da bi izzvali "normalno" reakcijo podgan.

Če povzamemo - seks (začasno) v VTA naredi popolnoma enako kot odvisnost od heroina: krčenje teles živčnih celic, ki proizvajajo dopamin. To vodi do nižjega dopamina v nagradnem centru in manjše odzivnosti na mamila - in možgani podgan potrebujejo vsaj 7 dni, da si opomorejo.


 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Pitchers KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Minimalizem

Naravna nagrada in droge zlorabljajo mezolimbično pot in aktivirajo skupni mehanizem neuralne plastičnosti v nucleus accumbens. Kronična izpostavljenost opiatom povzroča plastičnost dopaminergičnih nevronov v ventralnem tegmentalnem območju (VTA), ki uravnava toleranco za nagrajevanje morfina.

Tu preizkušamo hipoteze, da sproščanje endogenih opioidov, povzročenih s parjenjem, v VTA povzroča morfološke spremembe VTA dopaminskih celic pri podganjih samcih, ki regulirajo dolgotrajno izražanje okrepljenega spolnega vedenja zaradi izkušenj.

Prvič, spolna izkušnja je zmanjšala VTA dopamin soma velikosti 1 in 7 dni, ne pa 30 dni po zadnjem parjenju.. Ta učinek smo blokirali z naloksonom pred vsako sejo parjenja; zato je bila plastičnost VTA dopaminskih celic odvisna od delovanja endogenih opioidov.

Po drugi strani pa je bila plastičnost VTA povezana s spremenjeno nagrado za opiate, saj spolno izkušeni moški niso oblikovali pogojene prednostne lokacije za 0.5 mg / kg morfina.

Nato smo ugotovili, ali endogeni opioidni učinek posreduje spolno nagrajevanje in spomin pri samcih podgan, ki so jih med izkušnjo parjenja sistemsko ali intra-VTA zdravili z naloksonom. Nalokson ni preprečil začetne olajšave spolnega vedenja zaradi ponovljenih izkušenj zaradi ponavljajočih se paritev ali pogojenih krajevnih izbir za parjenje. Zdravljenje z naloksonom pa je oslabilo dolgoročno izražanje izkušnje, ki jo je sprožilo pospeševanje spolnega vedenja in živčne aktivacije v mezolimbičnih področjih, ki so jih povzročili pogojeni simptomi parjenja..

Ti podatki skupaj kažejo, da endogeni opioidi med parjenjem povzročajo neuralno plastičnost v VTA dopaminskih nevronih, ki se zdijo ključni za nagrado za morfij in dolgoročni spomin za naravno nagrajevanje.

 

Predstavitev

Naravna nagrajevalna vedenja posreduje mezokortikolimbični sistem (Meisel in Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Droge zlorabe povzročajo spremembe živčnega sistema v tem sistemu, kar prispeva k razvoju in izražanju zlorabe snovi (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). Predhodno smo ugotovili, da izkušnje z naravnim nagrajevanjem, tj. Spolno izkušnjo pri samcih podgan, povzročajo tudi neuralno plastičnost v nucleus accumbens (NAc), vključno s povečanimi dendritičnimi bodicami (Pitchers et al., 2010a) in deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Vpliv plastičnosti, ki jo povzroča spol, je ključnega pomena za učinke spolnih izkušenj na poznejše parjenje, ki se kažejo kot olajšanje začetka in izvedbe spolnega vedenja (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Poleg tega spolna izkušnja spremeni odzivnost na psihostimulante, vključno s preobčutljivostjo lokomotorne aktivnosti in povečano nagrado (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

NAc je en ciljni niz dopaminergičnih nevronov v ventralnem tegmentalnem območju (VTA). VTA dopamin nevroni se aktivirajo med parjenjem in po izpostavljenosti pogojevam, ki napovedujejo spolno nagrajevanje (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), z vezavo endogenega opioidnega peptida (EOP) pri μ-opioidnih receptorjih (MOR; Matthews in nemški, 1984; Johnson in North, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Zato izpostavljenost pogojevam, ki napovedujejo spolno vedenje, povzroča sproščanje EOP in VTA aktivacije dopamina, ki olajšuje spolno motivacijo (Mitchell in Stewart, 1990; van Furth in drugi, 1995; van Furth in van Ree, 1996) in sproščanje dopamina v NAc (Fiorino et al., 1997).

Ponavljajoča izpostavljenost eksogenim opiatom povzroča morfološke spremembe v VTA (Mazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison in Nestler, 2012), zmanjšana velikost soma VTA dopaminskih nevronov (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), zmanjšane ravni nevrofilamentnih beljakovin (Beitner-Johnson et al., 1992), povečana razdražljivost dopaminskih celic in zmanjšan prenos aksoplazme in dopamina na NAc (Beitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Te spremembe VTA dopaminskega nevronov povzročajo toleranco za nagrajevanje morfina in so prehodne, ker se odvajajo v mesecu apstinence z zdravilom (Russo et al., 2007). Trenutno ni jasno, ali je plastičnost v VTA dopaminskih nevronih edinstvena za delovanje opiatov ali če se proizvajajo tudi z sproščanjem EOP med naravnim nagrajevanjem.

Tu preizkušamo hipotezo, da naravna izkušnja nagrajevanja povzroča neplastičnost, ki je podobna tisti, ki jo povzročajo opiati, in da opiati konvergirajo na plastičnem mehanizmu, ki je kritičen za naravno nagrajevanje in nagrajevanje. Preverjamo, ali spolne izkušnje pri samcih podgan zmanjšujejo velikost soma dopaminskih nevronov VTA preko procesa, ki je odvisen od delovanja EOP v VTA. Poleg tega preučujemo, ali so EOP-inducirane spremembe v VTA dopaminskih nevronih povezane z okrepitvijo naravnega nagrajevanja in pripisovanjem spodbujevalne poudarjenosti, ki so povezani z naravno nagrado, medtem ko povzročajo navzkrižno toleranco do morfijske nagrade.

Materiali in metode

živali

Odrasli samci podgan Sprague-Dawley (200-225 g) so bili pridobljeni iz reke Charles River in so bili nameščeni v parih v umetno osvetljenih prostorih v ciklu svetlobe / temne 12 h v vseh poskusih (luči so bile izklopljene pri 10: 00 AM, razen pri poskusu tolerance morfina: 5 AM , ugasne luči pri 00: XNUMX PM). Hrana in voda sta bili na voljo ad libitum razen med vedenjskim testiranjem. Samice spodbud so bile ovariektomizirane in implantirane subkutano s kapsulami 5% 17-β-estradiol benzoat SILASTIC (notranji premer 1.98 mm, dolžina 0.5 cm, Dow-Corning). Injekcijam progesterona (subkutano, 500 μg v 0.1 ml sezamovega olja) smo pred testiranjem dajali 3-6 h, da bi spodbudili spolno dovzetnost. Vse postopke so odobrile univerze zahodnega Ontarija in odbori za živalsko oskrbo univerze Michigan ter se strinjali s kanadskim svetom o negi živali in nacionalnimi smernicami za inštitute za zdravje, ki vključujejo vretenčarje v raziskavah.

Časovni potek spreminjanja velikosti VTA dopamina

Dnevne seje parjenja.

Za preučevanje časovnega poteka sprememb v velikosti dopaminskega nevronskega soma v VTA so bile spolno izkušene in naivne živali ubite pri 1, 7 ali 31 d (n = 5 – 8 na skupino) po zadnjem dnevu parjenja (izkušenega) ali ravnanju (naivno). Spolno izkušene skupine so bile primerne za spolno vedenje med končno sejo parjenja, kot tudi skupno število ejakulacij v petih sejah (povprečje 5 za vsako skupino) in se niso razlikovale v nobenem parametru spolnega vedenja.

Seje parjenja.

Spolno naivni moški so bili razvrščeni v eno od dveh poskusnih pogojev: spolno naivno ali spolno izkušeni. Spolno izkušenim živalim je bilo dovoljeno, da se pet dni zaporedoma parijo z dovzetnimi samicami v pravokotnih testnih kletkah (60 × 45 × 50 cm), dokler ni prišlo do izliva ali do 1 h (kar je nastopilo prej). Kletke smo temeljito očistili z raztopino etanola 70% in dodali svežo posteljnino med parjenjem. Spolno obnašanje je bilo izvedeno med temno fazo (2 – 6 h po temi). Samo živali, ki so ejakulirale med vsaj štirimi od petih sej parjenja, so bile ocenjene kot spolno izkušene in vključene v poskuse. Opazili smo vse paritvene seje in zabeležili spolno vedenje. Število montažnih (M) intromisij (IM), latenca montaže (ML; čas od vnosa ženske do prvega gnezdenja), latence intromisije (IL; čas od vnosa ženske do prvega vdora) in latence ejakulacije (EL; od prvega vdora v ejakulacijo).Agmo, 1997). Naivne živali so postavili v čisto testno kletko za 1 h istočasno s spolno izkušenimi moškimi, ki so se parile v istem prostoru, tako da so bile izpostavljene oddaljenim ženskim vonjem in podobnim stopnjam motenj in okoljski novosti kot izkušeni moški.

Označevanje z imunofluorescenco.

Živali smo globoko anestezirali z natrijevim pentobarbitalom (270 mg / kg, ip) in perfundirali intrakardialno z 50 ml 0.9% fiziološke raztopine, čemur je sledila 500 ml 4% paraformaldehida v 0.1 m natrijevem fosfatnem pufru (PB). V istem fiksativu smo odstranili možgane in jih določili za 1 h pri sobni temperaturi (RT) in nato potopili v 20% saharozo in 0.01% natrijev azid v 0.1 m PB za shranjevanje pri 4 ° C. Koronalne sekcije smo razrezali pri 35 μm na zamrzovalni mikrotom (H400R, Microm) in jih zbrali v štirih vzporednih serijah v raztopini krioprotektantov (30% saharoze, 30% etilen glikola v 0.1 m PB) in shranili pri 20 ° C. Vse inkubacije so bile izvedene pri RT z rahlim stresanjem in obilnim izpiranjem z 0.1 m PBS, pH 7.35, med inkubacijami. Odseki so bili izpostavljeni 1% H2O2 za 10 min, da uničimo endogene peroksidaze, nato blokiramo za 1 h v inkubacijski raztopini (PBS +: PBS, ki vsebuje 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) in 0.1% goveji serumski albumin (Jackson Immuno Research Laboratories). Nato sekcije inkubiramo preko noči pri RT v mišji tirozin hidroksilazi (TH) -antitolu (1: 20 000; Millipore). Po inkubaciji primarnih protiteles smo sekcije inkubirali v AlexaFluor 555-konjugiranem kozjem anti-mišjem protitelesu (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) za 30 min. Končno smo sekance izprali z 0.1 m PB, nameščene na steklena stekelca Superfrost Plus, posušili in prekrili z gelvatolom, ki je vseboval sredstvo proti blaženju 1,4-diazabiciklo (2,2) oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Analiza podatkov: velikost nevronske some.

Slike TH-imunoreaktivnih (IR) nevronov v VTA so bile odvzete pri povečavi 40 × na treh rostralnih do kaudalnih ravneh (Balfour et al., 2004). Razlik med celicami na različnih ravneh ni bilo. Velikost soma TH-IR nevronov je bila analizirana z uporabo ImageJ (National Institutes of Health). Povprečno območje, obseg in krožnost smo izmerili, kot je opisano v Sklair-Tavron et al. (1996). Analizirali smo povprečje 25 celic na žival (skupaj z vsemi nivoji 3 VTA) in vključili samo celice z jasno vidnim jedrom. Za vsako žival so izračunali povprečno površino, obod in krožnost. Za statistično analizo je bila uporabljena dvosmerna ANOVA [faktorji: spolna izkušnja (spolna izkušnja ali spolna naivnost) in čas (1, 7 ali 31 d)], ki mu sledi naknadnega primerjave z uporabo metode Holm – Sidak s stopnjo pomembnosti 0.05.

Spremembe VTA brez dopamina

Dvodnevni parni sestanki.

Da bi preverili, ali je spolna izkušnja med dnevnim parjenjem potrebna za zmanjšanje velikosti TH-IR nevronske some, so analizirali VTA dopaminske nevrone živali, ki so se pari med petimi dvotedenskimi parami. Seje parjenja so bile opisane zgoraj, vendar v obdobju 2.5 tednov. Možgani so bili zbrani 7 d po zadnjem parjenju ali rokovanju.

Označevanje z imunoperoksidazo.

Poleg tega je bilo preizkušeno, ali z uporabo občutljivih tehnik barvanja z imunoperoksidazo in detekcijo kromogena, omogočili tudi vizualizacijo sprememb velikosti TH-IR soma. Perfuzija in obdelava tkiva sta potekali, kot je opisano zgoraj. Po zdravljenju z 1% H2O2 in PBS +, sekcije inkubiramo preko noči pri RT v mišjem poliklonskem tirozin hidroksilazo (TH) -antitolu (1: 20 000; Millipore). Po inkubaciji primarnih protiteles smo sekcije inkubirali z biotinsko konjugiranim kozjim anti-kunčjim IgG (1 h, 1: 500 v PBS +; Vektorski laboratoriji), avidin-biotin-hren peroksidazo (1 h, ABC elita; 1: 1 000 v PBS) Vector Laboratories) in 3,3®-diaminobenzidin tetrahidroklorid (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich), okrepljen z nikljevim sulfatom v (0.02% v 0.1 m PB) z vodikovim peroksidom (0.015%). Odseke smo temeljito izprali z 0.1 m PB, da smo zaključili reakcijo in jih namestili na kodirana Superfrost plus steklena stekelca (Fisher) z 0.3% želatino v ddH2Po dehidraciji so bili vsi stekelci pokriti z DPX nosilcem (dibutil ftalat ksilen; Sigma-Aldrich).

Analiza podatkov: velikost nevronske some.

TH-IR celice smo analizirali na območje, obod in krožnico, kot je opisano zgoraj. Poleg tega smo analizirali TH-IR celice v substantia nigra (SN) v istih odsekih, ki se uporabljajo za analizo celic VTA TH-IR. Na koncu smo po analizi VTA in SN TH-IR celic prerezali odseke z uporabo cresil vijolične in ne-TH-IR celice analizirali po enakih postopkih kot zgoraj. Razlike med naivnimi in izkušenimi skupinami smo primerjali z dvotirnimi študentskimi t testov s stopnjo pomembnosti 0.05.

Učinki naloksona na zmanjšanje velikosti dopaminskega soma, ki ga povzroča izkušnja

Da bi ugotovili, ali so MOR-ji igrali vlogo pri spremembah dopaminskega neomnoznega soma, ki so jih povzročile spolne izkušnje, so bili med spolnim vedenjem blokirani. Polovica živali je pridobila spolno izkušnjo, medtem ko je bila druga polovica ravnana, vendar je ostala spolno naivna. Spolno izkušenim živalim je bilo dovoljeno pariti se 5 zaporednih dni. Pri spolno izkušenih in naivnih skupinah so živali zdravili z neselektivnim MOR antagonistom naloksonom (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, raztopljenim v 0.9% fiziološki raztopini) ali s fiziološko raztopino 30 min pred vnosom samice (izkušeno) ali pred ravnanjem (naiven); s tem ustvarjanjem štirih poskusnih skupin: spolno naivna slanica (Naive Sal), spolno naivna nalokson (Naive NLX), spolno izkušena slanica (Exp Sal) in spolno izkušen nalokson (Exp NLX; n = 5 – 8 na skupino). Zdravljenje z naloksonom ni imelo statistično pomembnih učinkov na kateri koli parameter spolnega vedenja, na katerokoli zdravilo 5 d, in skupine, ki so bile zdravljene z naloksonom in slanico, so bile pri spolni izkušnji enake. Vse živali smo ubili z intrakardialno perfuzijo 7d po zadnjem parjenju. Razdelitev, imunohistokemijo in analizo podatkov (dvosmerna ANOVA; faktorji: spolna izkušnja in zdravljenje z zdravili) za velikost dopaminskih som smo izvedli, kot je opisano zgoraj.

Prednost mesta, ki je pogojena z morfijem

Eksperimentalna zasnova.

Prej, Russo et al. (2007) kronični morfin povzroči toleranco na morfijsko nagrado. Ker so spolne izkušnje in kronični morfij povzročile podobno zmanjšanje velikosti soma dopaminskih nevronov v VTA, je bila funkcionalna pomembnost spolno povzročenih morfoloških sprememb testirana na nagrado z morfinom. Spolno izkušene in naivne živali so bile razdeljene v šest različnih poskusnih skupin (n = 9 – 13 na skupino) glede na spolno vedenje (spolno naivno ali izkušeno) in odmerek morfina (0.5, 5.0 ali 10.0 mg / kg, ip) in so bili preizkušeni za pogojeno prednostno mesto (CPP), povzročeno z morfinom.

Morfin-CPP.

Kondicioniranje je potekalo 1 d po zadnjem parjenju, skupine pa so bile primerne za spolno predstavo na zadnjem parjenju. Uporabljena CPP paradigma je bila sestavljena iz predtestiranja, kondicioniranja dni in post-testa, na katerem je temeljil aparat Tenk et al. (2009). Na kratko je bil aparat CPP (MED Associates) sestavljen iz treh ločenih komor. Med vsako sejo smo aparat temeljito očistili s 70% raztopino etanola, da smo čim bolj zadržali vohalne znake. Za določitev individualnih preferenc je bil izveden predhodni preizkus, med katerim so živali 15 minut imele prost dostop do celotnega aparata. Kot skupina živali niso imele večje naklonjenosti določeni komori, vendar je imela vsaka posamezna žival rahlo začetno naklonjenost. Podgane, ki so med predtestiranjem pokazale znatno prednost za eno od komor (> 200 s razlike med časom, preživetim v vsaki od komor; <5% živali), so bile izključene iz študije. Med kondicioniranjem je bilo zdravilo seznanjeno s prvotno prednostno ali neprimerno komoro z nepristransko paradigmo (Tzschentke, 2007) in živali so bile omejene na komore za 30 min. Živalim smo zjutraj injicirali fiziološko raztopino (ip) (9: 00 AM v 12: 00 PM) in jih omejili na komoro s slano raztopino (kontrola). Popoldne (1: 00-4: 00 PM), so bile živalim injicirane morfin (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg ali 10.0 mg / kg; morfin sulfat, raztopljen v 0.9% slanici, Johnson Matthey) in zaprt. v komoro z morfinom. Živali so bile izpostavljene dvema klimatizacijskima dnevoma. Naslednji dan (3 d po zadnjem dnevu parjenja) je bil izveden post-test, proceduralno enak pretestu. Za statistično analizo so čas, ki smo ga preživeli v morfinsko-parni komori med post-testom, primerjali s časom, preživetim v komori s slano paro med post-testom za spolno naivne ali izkušene moške v vsakem odmerku z uporabo seznanjenega. t test. p <0.05 se je štelo za statistično pomembno. Dodatne kontrolne skupine spolno naivnih in izkušenih živali so prejemale fiziološko raztopino v parnih in neparnih komorah kot negativni nadzor. Za nobeno skupino niso zaznali razlik v času, porabljenem med komorami.

Učinki sistemskega naloksona na spodbujanje spolnega vedenja, ki ga povzročajo izkušnje

Eksperimentalna zasnova.

Spolne izkušnje povzročajo olajšanje spolnega vedenja, ki se ohranja vsaj 1 mesec (Pitchers et al., 2012). Da bi analizirali učinek blokiranja MOR na izkušnjo, ki jo povzroča spolno vedenje, so spolno izkušene živali prejele bodisi nalokson ali fiziološko raztopino pred petimi zaporednimi sejmi parjenja (n = 12), kot je opisano zgoraj. En teden po zadnjem parjenju je bil opravljen končni test parjenja, med katerim je bilo vsem živalim dovoljeno pariti do ene ejakulacije ali do 1 h. Na zadnji testni dan pred parjenjem ni bil apliciran nalokson ali zdravljenje s slanico. Parametri parjenja so bili primerjani, da bi ugotovili, ali je nalokson prizadel bodisi spolno izkušeno spodbujanje parjenja (dan 1 kot dan 5) bodisi vzdrževanje te olajšave (dan 5 proti testu) z dvosmerno ANOVA [faktorji: zdravljenje (slanost v primerjavi z naloksonom] ) in dan (dan 1, dan 5 ali test)] in Holm – Sidak metoda za naknadnega primerjave. Za vse statistične teste, \ t p <0.05 se je štelo za statistično pomembno.

Dodatni kontrolni poskusi

Sistemski nalokson na dan testiranja.

Da bi pokazali, da spremenjeno spolno obnašanje na zadnji testni dan parjenja ni bilo posledica odsotnosti naloksona, smo dajali bodisi nalokson ali fiziološko raztopino na zadnjem testnem dnevu parjenja živalim, ki so prejele parjenje skupaj z naloksonom, medtem ko so pridobili spolno izkušnjo. Natančneje, vse živali so prejele injekcijo naloksona (10 mg / kg, sc) 30 min pred predhodnim parjenjem z enim izlivom v zaporednih 5 dneh. Po testiranem dnevu 7 d je približno polovica živali prejela injekcijo naloksona (10 mg / kg, n = 7) ali slanica (n = 6) 30 min pred uvedbo receptivne ženske. Spolno vedenje je bilo opaženo in zabeleženo. Parametri parjenja so bili primerjani, da bi ugotovili, ali je nalokson prizadel bodisi spolno izkušeno spodbujanje parjenja (dan 1 kot dan 5) bodisi vzdrževanje te olajšave (dan 5 proti testu) z dvosmerno ANOVA [faktorji: zdravljenje (slanost v primerjavi z naloksonom] ) in dan (dan 1, dan 5 ali test)] in Holm-Sidak metoda za naknadnega primerjave. Za vse statistične teste, \ t p <5% se je štelo za statistično pomembno.

Učinki naloksona na kratkotrajno izražanje olajšanega spolnega vedenja.

Učinki zdravljenja z naloksonom (10 mg / kg, sc) med parjenjem so bili testirani na poznejše spolno obnašanje med zadnjim dnem testa parjenja, ki je bil izveden šele po 1 d po zadnjem parjenju (slanica, n = 5; nalokson, n =

Sistemska predhodna obdelava z naloksonom.

Da bi ugotovili, ali samo ponavljajoče zdravljenje z naloksonom povzroči okvaro spolnega vedenja 7 d po zadnjem zdravljenju, so spolno naivne živali prejele pet dnevnih injekcij naloksona (10 mg / kg, sc) ali slanih injekcij zaporednih dni pred testom parjenja 7 d po končnem naloksonu ali injiciranje slanice. Na ta zadnji testni dan živali niso prejele nobene injekcije. Spolno obnašanje so opazili in zabeležili, kot je opisano zgoraj. Parametri parjenja so primerjali med skupinami, ki so uporabljale neparne t preskusov. Za vse statistične teste, \ t p <5% se je štelo za statistično pomembno.

Sistemski nalokson in spolna nagrada.

Ena možnost za olajševalne učinke naloksona na prikaz vzdrževanja olajšanega spolnega vedenja je, da nalokson blokira koristne učinke spolnega vedenja. Da bi preizkusili to možnost, je bila izvedena paradigma CPP za spolno vedenje takoj po injiciranju naloksona ali fiziološke raztopine pri moških brez predhodnih spolnih izkušenj. Postopek CPP je bil podoben zgoraj opisanemu za morfij-CPP, vključno s predtestiranjem, kondicijskimi dnevi in ​​po preskusu.

Spolno vedenje je bilo povezano s prvotno neprepoznano komoro. Na protiutežen način je vsaka žival dobila injekcijo naloksona (n = 12) ali slanica (n = 11) 30 min pred dostopom do sprejemljive ženske. Povprečno trajanje parjenja je bilo 13 min. Eno minuto po ejakulaciji smo žival dali v parno komoro za 30 min. Na drugi dan kondicioniranja so živali prejele injekcijo bodisi naloksona ali fiziološke raztopine (tistega, kar so prejele pred parjenjem) in so bile dane v neparno komoro za 30 min. Nato je bil opravljen post-test, ki je bil enak pretestiranju. Da bi določili preferenco komore, smo primerjali čas, ki smo ga preživeli v parni komori med pretestiranjem in post-testom. Za statistično analizo, seznanjene t testi so bili uporabljeni za primerjavo preferencialnih in diferencialnih rezultatov ter časa v parni komori med predtestiranjem in post-testom, da bi ugotovili, ali je bil za spolno vedenje oblikovan pomemben CPP. p <0.05 se je zdelo pomembno.

Učinki nalokona intra-VTA na izkušnje, ki jih spodbuja spolno vedenje

Eksperimentalna zasnova.

Da bi ugotovili, ali je ukrep EOP, posebej v VTA, odgovoren za učinke sprememb spolnega vedenja, ki jih povzročajo spolne izkušnje, so živali pred vnosom VTA pred petim dnevnim parjenjem opravile lokalno infuzijo naloksona ali slanice. Vedenjska paradigma je bila podobna eksperimentu sistemskega naloksona. Spolno izkušenim živalim je bilo dovoljeno pariti med 5 zaporednimi dnevi do ene ejakulacije ali do 1 h. Petnajst minut pred uvedbo receptivne samice so samci podgan prejeli dvostranske infuzije bodisi naloksona (10 μg / μl na hemisfero; volumen 0.5 μl, raztopljenega v 0.9% fiziološki raztopini) ali fiziološke raztopine (0.5 μl na hemisfero). Dvostranske mikroinjekte so dajali s pretokom 0.5 μl / min v intervalih 1 min, čemur je sledilo dodatno 1 min z injekcijsko kanilo, ki je ostala na mestu za difuzijo. Injekcijsko kanilo smo nato zamenjali s slepo kanilo in pokrovom za prah. En teden po zadnjem dnevu parjenja (testni dan) so se vse živali ponovno sparile z ejakulacijo brez infuzije naloksona ali fiziološke raztopine. Slika 3A opisuje načrt eksperimenta. Analiza podatkov je bila izvedena kot je opisano v eksperimentu sistemskega naloksona.

Operacija kanulacije.

Moške podgane smo anestezirali z intraperitonealno injekcijo (0.1 ml / kg) ketamina (0.87 mg / ml) in ksilazinom (0.13 mg / ml) in dali v stereotaksični aparat (Kopf Instruments). Dvostranske vodilne kanile 21 (plastični One) so bile spuščene skozi majhne luknje v lobanji v možgane proti VTA pri –4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML iz bregme in −7.8 mm DV iz vrha lobanje v skladu z Paxinos in Watson (2013). Kanile so bile zavarovane z zobnim akrilom, ki se je pritrdil na tri vijake v lobanji. Živali so dobile 2-tedensko obdobje okrevanja in so bile vsakodnevno obdelane, da bi se prilagodile postopkom ravnanja in injiciranju, uporabljenim med vedenjskim testiranjem.

Preverjanje umestitve v kanuli.

Namestitev kanil je bila preiskana z uporabo TH-imunske barve za potrditev, da je bila VTA natančno ciljno usmerjena. V analize so bile vključene samo živali z ustrezno umestitvijo (končne velikosti skupin: izkušene soline n = 8; izkušenega naloksona n = 6). Tri dodatne živali, ki so prejele intra-VTA injekcije naloksona, usmerjene zunaj VTA, so bile združene v "zamujeno" injekcijsko skupino. Zamujena skupina je bila analizirana ločeno, da bi služila kot anatomska kontrola in Mann – Whitney U test je bil uporabljen za primerjavo obnašanja na koncu testnega dne z izkušenimi moškimi, zdravljenimi z naloksonom in fiziološko raztopino.

PERK-izraz, ki je povezan s kontekstualno cue-inducirano povezavo

Eksperimentalna zasnova.

Izpostavljenost kletki, v kateri so moški pridobili izkušnje pri parjenju, je pokazala, da povzroča MOR aktivacijo v VTA in nevronski aktivnosti v VTA in NAc (Balfour et al., 2004). Torej, okolje za parjenje služi kot pogojena odločitev, ki napoveduje spolno nagrado. Sedanja študija je preizkusila, ali je aktivacija MOR med spolno izkušnjo potrebna za poznejšo nevronsko aktivacijo, ki je bila sprožena s klaviaturo. Nalokson ali fiziološka raztopina je bila sistemsko (ip) aplicirana 30 min pred namestitvijo v parilen prostor in uvedba receptivne ženske za parjenje (izkušeno) ali pred kontrolno manipulacijo, ki je vključevala namestitev v kletko brez predstavitve ženske (nevtralna). okolje, naivno). Tako so nastale štiri eksperimentalne skupine: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​in Exp NLX. En teden po končnem parjenju je bila polovica živali v vsaki skupini izpostavljena kletkam za parjenje (moški iz spolov: pogojeni spolni vplivi) ali ravnanje s kletko (naivni moški: nenasilni / nevtralni znaki), druga polovica pa ni bila izpostavljena. vse namige in namesto tega ostanejo v domačih kletkah (za določitev izhodiščnega izraza PERK). Ta eksperimentalna paradigma je ustvarila skupine 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = Vsak 4 razen Naive NLX-No Cue, n = 3). Živali so bile perfundirane 10-15 min po izpostavljenosti iztočnici. Kontrolne živali so bile odstranjene iz njihovih kletk in so bile istočasno perfundirane.

Imunohistokemija.

Sekcija in imunohistokemija sta bili izvedeni, kot je opisano zgoraj. Tu smo uporabili kunčje poliklonsko protitelo proti p42 in p44 MAP kinazam ERK1 in ERK2 (pERK; 1: 4 000; tehnologija signalizacije celic). Primarno protitelo je v literaturi obsežno opisano (Roux in Blenis, 2004; Murphy in Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Poleg tega je opustitev primarnega protitelesa preprečila vso imunoreaktivnost in Western blot analiza možganskega tkiva podgane je razkrila dve vrsti pri ustrezni molekulski masi.

Analiza podatkov.

pERK-imunoreaktivne (-IR) celice so bile preštete v številnih možganskih regijah z uporabo cevke za risanje kamere lucida, pritrjene na Leica DMRD mikroskop: NAc [jedro (C) in lupina (S); 400 × 600 μm; medialni prefrontalni korteks; mPFC; anteriorno področje cingulacije (ACA); prelimbični korteks (PL); infralimbični korteks (IL); 600 × 800 μm vsak], caudate – putamen (CP; 800 × 800 μm) in bazolateralna amigdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Dva odseka smo prešteli na možgansko regijo in število celic v standardnih področjih analiz smo nato izračunali kot število celic na mm2. Dve štetji sta bili povprečeni na žival za izračun skupinskih sredstev. Skupinska povprečja med spolno izkušenimi ali naivnimi skupinami so primerjali z dvosmerno ANOVA [dejavniki: zdravljenje z zdravili (NLX ali Sal) in iztočnica (cue ali no cue)], ki ji sledi naknadnega primerjave z uporabo Holm – Sidakovih ali Mann-Whitneyovih preskusov, kjer je to primerno, s stopnjo pomembnosti p <0.05. V lupini NAc pri spolno izkušenih živalih je bil močan trend k pomembnosti dejavnikov, zato so bile izvedene parne primerjave za primerjavo samo skupin fiziološke raztopine (Sal-No Cue) in fiziološke raztopine (Sal + Cue).

Slike.

Digitalne slike so bile posnete s pomočjo CCD kamere (Macrofire, Optronics), ki je bila priključena na a Leica (DM5000B) s fiksnimi nastavitvami kamere. Slike so bile uvožene v programsko opremo Adobe Photoshop 9.0. Slike niso bile spremenjene na noben način, razen za prilagoditev svetlosti in kontrasta.

Rezultati

Spremembe v dopaminskih celicah VTA, ki jih povzročajo spolne izkušnje

Spolne izkušnje so povzročile zmanjšanje velikosti VTA dopamina soma (Slika 1A – C). Spolne izkušnje so znatno zmanjšale površino in obseg soma celic VTA TH-IR (območje: F(1,31) = 23.068, p <0.001; obseg, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Prav tako je bil glavni pomemben učinek časa (območje: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; obseg, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) in pomembno interakcijo med izkušnjami in časom (območje: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; obseg, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Primerjave po parih so pokazale, da sta bila površina in obseg celic TH-IR znatno zmanjšana 1 in 7 d po zadnjem dnevu spolnega vedenja pri spolno izkušenih živalih v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami.Slika 1B, območje: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, obseg: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Učinek spolnega vedenja se je razblinil, ko mu je sledilo obdobje abstinence od nagrajevanja, ko se je velikost some nevronov TH-IR po zadnji seji parjenja vrnila na izhodišče 31 d (Slika 1B, območje: p = 0.798; C, obseg: p = 0.785). Spremembe, ki jih povzročajo spolne izkušnje, niso bile odkrite v krožnosti v kateri koli časovni točki (Slika 1D). Zmanjšanje velikosti VTA dopamin soma ni bilo odvisno od dnevnih sej parjenja, saj je izkušnja pri parjenju med petimi dvotedenskimi obdobji parjenja povzročila tudi zmanjšano velikost VTA dopamina (Slika 2A,B, E – H, območje: p = 0.004; obseg: p <0.001). V nasprotju s tem spolne izkušnje niso vplivale na velikost soma TH-IR v substantia nigra (Slika 2C, I – J, območje: p = 0.13; obseg: p = 0.16) ali spremenjene velikosti soma v bližnjih VTA ne-TH-IR nevronih (Slika 2D, E – H, območje: p = 0.46; obseg: p =

Slika 1. 

Spremembe velikosti soma v endogenih opioidnih snoveh VTA dopaminskih nevronov. APredstavitvene slike VTA dopaminskih nevronov iz spolno naivnih in izkušenih živali, ki kažejo zmanjšanje velikosti soma 7 d po končnem parjenju. Merilna lestvica, 5 μm. Kvantitativni podatki, ki kažejo, da so spolne izkušnje (Exp, črne palice) povzročile znatno zmanjšanje površine (B; v μm2) in obseg (C; v μm) VTA dopaminskih celic, 1 d (Naive, Exp; n = 6) in 7 d (naivna, n = 5; Exp, n = 6), vendar ne 31 d (Naivna, n = 6; Exp, n = 8) po končnem parjenju v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami (Naive, bele palice). Območje se je pri izkušenih moških zmanjšalo na 84% v primerjavi z naivnimi kontrolami pri 1 ali 7 d. Obseg je bil pri izkušenih skupinah zmanjšan na 91.6 in 90% v primerjavi z nadzorom pri 1 in 7 d oz. Vpliv na krožnost ni bil (D). Ta plastičnost dopaminskih celic v območju (E) in obseg (F) preprečil nalokson (NLX, n = 8), vendar ne fiziološko raztopino (Sal, n = 7) zdravljenje med parjenjem, 7 d po končnem parjenju v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM; * označuje pomembno razliko v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami istega dne (B, C) ali v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami, ki so jih zdravili s fiziološko raztopino, in spolno \ tE, F).

Slika 2. 

Spolne izkušnje niso zmanjšale velikosti soma v nevronih dopaminskih nevronatov ali nevronov VTA nondopamina. VTA TH-IR nevronska soma (A; v μm2) in obseg (B; v μm) pri spolno naivnih (belih) in izkušenih (črnih) živalih, ki so pridobile izkušnje s parjenjem dvakrat na teden in ne v zaporednih dneh. Področje Substantia nigra TH-IR (C) in območje VTA brez TH-IR (\ tD) pri spolno naivnih (belih) in izkušenih (črnih) živalih. Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM; * kaže na pomembno razliko v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami. Reprezentativne slike, ki prikazujejo TH-IR (rjave) nevrone v VTA spolno naivnih (E) in izkušeni (F) moških. G, H, Slika večje povečave nevrona označena s puščico v E in F v tem zaporedju. Nissl-obarvani nevroni so na teh slikah prikazani modro. Reprezentativne slike, ki kažejo TH-IR nevrone v SN spolno naivnih (I) in izkušeni (J) moških. Vrstice merilnika: E-J20 μm.

Zmanjšanje velikosti soma VMA dopaminskih nevronov, ki ga povzroča spolna izkušnja, je odvisno od aktivacije opioidnih receptorjev

Zmanjšanje velikosti VTA dopaminskega nevronskega soma, ki ga je povzročila spolna izkušnja, je bilo blokirano z neselektivnim MOR antagonistom naloksona, ki smo ga aplicirali pred vsakim parjenjem. Zdravljenje z naloksonom pred parjenjem je pomembno vplivalo na območje (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) in usmerjen proti pomembnemu vplivu na obod (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Za območje je bilo ugotovljeno pomembno interakcijo med izkušnjami in zdravljenjem z naloksonom (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) in obseg (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Primerjave po parih so pokazale, da so spolne izkušnje pri živalih, ki so bile zdravljene s slanico, po zadnjem parjenju znatno zmanjšale površino in obseg VTA dopaminskih nevronov 7 d v primerjavi s spolno naivnimi samci, ki so bili zdravljeni s slanico (Slika 1E, območje: p = 0.018; F, obseg: p = 0.007). V nasprotju s tem se spolno izkušene živali, zdravljene z naloksonom, niso razlikovale od \ tSlika 1E, območje: p = 0.483; F, obseg: p = 0.330). Poleg tega je bila velikost soma izkušenih slanih živali bistveno manjša kot pri izkušenih živalih z naloksonom (Slika 1E, območje: p = 0.002; F, obseg: p = 0.002). Ta učinek naloksona je bil specifičen za spolne izkušnje, saj samo zdravljenje z naloksonom ni vplivalo na velikost TH-IR celic v spolno naivnih moških, zdravljenih z naloksonom, v primerjavi s kontrolami, ki so jih zdravili s slanico (Slika 1E,F). Poleg tega ta učinek naloksona na zmanjšanje velikosti soma, ki ga povzroča izkušnja, ni bil posledica učinkov naloksona na spolno vedenje, saj se paritveno vedenje med moškimi, zdravljenimi z naloksonom in slanimi zdravili, bistveno ne razlikuje, razen za daljši čas za sprožitev parjenja po ejakulaciji (po intervalu ejakulacije) pri moških, zdravljenih z naloksonom, v prvem in petem parjenju (p = 0.03 in p = 0.004). Moški, ki so bili zdravljeni s slanico in naloksonom, so se med vsakim od petih sej parjenja kopulirali v ejakulacijo.

Spodbuda za nagrajevanje morfina zaradi spolnih izkušenj

Učinki spolnih izkušenj na velikost dopaminskih somatov VTA z delovanjem EOP v VTA so podobni tistim, ki so poročani za eksogene opiate (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Zato je bilo preizkušeno, ali naravna nagrada, ki jo povzroča plastičnost VTA dopaminskih celic, vpliva na nagrado za opiatni morfij. Dejansko je spolna izkušnja povzročila toleranco za nagrajevanje morfina, podobno kot učinki kroničnih opiatov (Russo et al., 2007). Spolno izkušeni moški niso uspeli razviti CPP za odmerek morfina 0.5 mg / kg; ker so spolno naivni moški oblikovali CPP za ta odmerek, kar je pokazala večja poraba časa v morfinsko-parni komori v primerjavi s komoro s slano paro med post-testom (\ tSlika 3; p = 0.039). Tako spolno naivne kot izkušene skupine so preživele bistveno več časa v komori z morfinom, v primerjavi s komoro s parno slanico z večjimi odmerki morfina: 5.0 mg / kg (Slika 3; Naiven: p = 0.029; Razširjeno: p = 0.012) in 10.0 mg / kg (Slika 3; Naiven: p <0.001; Exp: p =

Slika 3. 

Učinki spolne izkušnje na nagrado za morfij. Čas, porabljen v slanici (Sal) ali morfijem (Mor; 0.5, 5 ali 10 mg / kg telesne teže) komore med post testom pri spolno naivnem (naivna, n = 10 – 13) ali izkušeni (Exp, n = 9 – 13) samci. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SEM; * označuje pomembno razliko v primerjavi s komorami, ki so bile zdravljene s Sal-om, pri istih živalih. NS, Ni pomembno.

Spodbujanje parjenja s spolnimi izkušnjami je odvisno od aktivacije opioidnih receptorjev

Dosedanje ugotovitve kažejo, da EOP, ki deluje v VTA med dnevnimi kratkimi parami 5, povzroča plastičnost VTA dopaminskih nevronov, ki je podoben učinkom kroničnega morfina ali samo-dajanja heroina (Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Predvidevali smo, da je zmanjšanje velikosti VTA dopamina soma ključnega pomena za učenje nagrajevanja in posebej za spolno obnašanje, ki ga povzročajo spolne izkušnje v smislu motivacije in uspešnosti. Ta hipoteza je bila preizkušena z blokiranjem MOR z uporabo naloksona med parjenjem in preučevanjem učinkov na olajšanje spolnega vedenja, ki ga povzroča spolna izkušnja med petimi dnevnimi sejmi parjenja. Podatki so predstavljeni v Slika 4 samo za prvo in peto sejo parjenja, saj gre za podatke, ki najbolje ponazarjajo olajševanje spajalnega vedenja zaradi izkušenj. Poleg tega se dolgoročnejši učinki zdravljenja z naloksonom med parjenjem testirajo na vzdrževanje izkušenj, ki jih povzroča olajšanje parjenja, med zadnjim testom parjenja 1 teden kasneje. Slika 4A prikazuje eksperimentalno zasnovo. Obstajal je pomemben glavni učinek seje parjenja na vse parametre spolnega vedenja (zakasnitev montaže: F(2,55) = 11.286, p <0.001; zakasnitev vdora: F(2,55) = 8.767, p <0.001; zakasnitev ejakulacije: F(2,55) = 10.368, p <0.001) in zdravljenje z naloksonom pri zakasnitvah za povečanje (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) in vnos (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Primerjave po parih so pokazale, da je zdravljenje z naloksonom vplivalo na spolno vedenje med prvo sejo parjenja, ker so imele živali z naloksonom bistveno daljše latence do prvega navzočnosti (p = 0.002) in vnos (p = 0.002) v primerjavi s slanimi kontrolami na prvi dan parjenja. Ta učinek naloksona na začetno spolno vedenje se je zmanjšal zaradi spolne izkušnje in ni bil opažen med nobenim od naslednjih sej parjenja (Tabela 1). Poleg tega dajanje naloksona pred vsako od petih sej parjenja ni preprečilo začetnega olajšanja spolnega vedenja s spolnimi izkušnjami. V skladu z okrepljenimi učinki spolne izkušnje so samci, ki so bili zdravljeni s slanico, pokazali zmanjšano latenco (Slika 4B; p = 0.032) vnos (Slika 4C; p = 0.033) in ejakulacijo (Slika 4D; p <0.001) med petim parjenjem v primerjavi s prvim parjenjem, ki je nakazovalo olajšanje spolnega vedenja. Podobno so moški, zdravljeni z naloksonom, imeli bistveno krajše zakasnitve za namestitev (Slika 4B; p <0.001), intromisija (Slika 4C; p <0.001) in ejakulacija (Slika 4D; p = 0.017) na petem mestu v primerjavi s prvim dnem. Poleg tega se moški, ki so bili zdravljeni z naloksonom, niso razlikovali od kontrol slanice v kateri koli latenci v času petega parjenja.

Slika 4. 

Endogeni opioidi imajo odločilno vlogo pri olajšanju spolnega vedenja, ki ga povzročajo izkušnje. A, Eksperimentalna zasnova. B-D, Parametri spolnega vedenja za samce, ki se zdravijo s slanico (Sal, bele palice, n = 11) ali nalokson (NLX; črne črte, n = 12) s sistemskim dajanjem. Prikazani podatki so zamikanje (B; sekund), vpis (C; sekund) in ejakulacija (D; sekund) na dneve 1 in 5 petih zaporednih dni parjenja. Poleg tega so prikazani podatki za končni test parjenja, 7 d po peti seji parjenja. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SEM; + označuje pomembno razliko med dnevi 1 in 5 v okviru zdravljenja; * označuje pomembno razliko med dnevom in dnevom testiranja 5 v okviru zdravljenja; # označuje pomembno razliko med naloksonom in skupinami slanice v dnevu.

Oglejte si to tabelo: 

Tabela 1. 

Zdravljenje z naloksonom pred parjenjem je povečalo latence, da se vzpne in sproži šele na prvi dan parjenja

V nasprotju s tem pa je zdravljenje z naloksonom med sejami s spolnimi izkušnjami prekinilo vzdrževanje izkušenj, ki jih je sprožilo olajšanje spolnega vedenja na zadnjem dnevu testiranja parjenja. Preskusni dan smo izvedli 7 d po končni seji parjenja v odsotnosti naloksona. Kontrolni moški, ki so bili zdravljeni s slanico, so pokazali pričakovano olajšanje spolnega vedenja, ki ga povzroča izkušnja. Natančneje, latence za montažo, intromisijo in ejakulacijo se med petim sejo parjenja in končnim testnim dnevom niso razlikovale (Slika 4B – D). Ker so moški, zdravljeni z naloksonom, znatno povečali latence,Slika 4B; p = 0.033), vpis (Slika 4C; p = 0.036) in ejakulacijo (Slika 4D; p = 0.049) na dan preskusa v primerjavi s petim parjenjem. Tudi na dan testiranja je bilo ugotovljeno, da so živali z naloksonom bistveno počasnejše kot moški, ki so bili zdravljeni s slanico, kot kažejo daljše latence,Slika 4B; p = 0.017) in vnos (Slika 4C; p = 0.043). Tako je zdravljenje z naloksonom blokiralo vzdrževanje, vendar ne začetnega, spodbujanja spolnega vedenja, ki ga povzroča izkušnja. Te ugotovitve kažejo na kritično vlogo plastičnosti nevronov VTA, ki jo povzroča VOP, pri dolgoročnem izražanju okrepitve naravnega nagrajevanja.

Opravljenih je bilo več dodatnih kontrolnih poskusov, da bi ugotovili, da so se učinki blokade opioidnih receptorjev na izgubo dolgoročne okrepitve spolnega vedenja pojavili neodvisno od pomanjkanja uporabe naloksona na zadnjem dnevu testiranja parjenja (Slika 5A,B), so bile značilne za izgubo dolgoročnega, vendar ne kratkoročnega vzdrževanja \ tSlika 5E,F), niso bile posledica dnevne izpostavljenosti nanoksonu samega (Slika 5C,D), in niso bili posledica izgube spolne koristi pri moških, zdravljenih z naloksonom (Slika 5G,H). Prvič, da bi pokazali, da spremenjeno spolno obnašanje pri končnem testu parjenja ni bilo posledica odsotnosti naloksona, so na zadnji dan testiranja parjenja dajali bodisi nalokson ali fiziološko raztopino živalim, ki so prejele parjenje skupaj z naloksonom, medtem ko so pridobili spolno izkušnjo (Slika 5A). Prišlo je do pomembnega glavnega učinka dneva parjenja na latence za namestitev (Slika 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) in vnos (Tabela 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Ni bilo glavnega učinka dneva parjenja na latenco na ejakulacijo (Tabela 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Podobno kot zgoraj opisano, zdravljenje z naloksonom med parjenjem ni vplivalo na olajšanje spolnega vedenja med prvimi petimi seksualnimi izkušnjami. Obe skupini (skupine, zdravljene s slanico in naloksonom, kar je bilo ugotovljeno z zdravljenjem, ki je bilo opravljeno med končnim testom parjenja; oba sta prejemala nalokson med parjenjem), sta pokazala olajšano spolno obnašanje na dan 5 v primerjavi z dnevnim 1 in pokazala bistveno krajše latence do prvega priprave (Slika 5B; slanica: p = 0.033; nalokson: p = 0.014) in vnos (Tabela 2; slanica: p = 0.034; nalokson: p = 0.026). Živali, ki so prejele bodisi nalokson ali fiziološko raztopino na zadnjem dnevu testiranja parjenja, so imele daljše latence (Slika 5B; slanica: p = 0.018; nalokson: p = 0.029) in vnos (Tabela 2; slanica: p = 0.019; nalokson: p = 0.020) v primerjavi s petim dnem izkušnje parjenja. Zato dajanje naloksona ali fiziološke raztopine na dan preskusa tik pred parjenjem ni vplivalo na učinek zdravljenja z naloksonom med spolnimi izkušnjami in zmanjšanje dolgotrajne olajšave spolnega vedenja je bilo enako kot pri živalih, ki niso prejele nobene injekcije. na zadnjem dnevu testiranja parjenja (Slika 4).

Slika 5. 

Endogeni opioidi so pomembni pri dolgoročnem izražanju izkušenj, ki jih spodbuja spolno vedenje. A, Eksperimentalna zasnova eksperimenta z učinkom zdravljenja NLX na testnem dnevu. B, Mount latency na dneve 1 in 5 pet zaporednih dni parjenja in končni dan testiranja parjenja (Test) po slanem (sivom) ali naloksonskem (črnem) injiciranju. Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM. * označuje pomembno razliko med dnevom 1 in dnevom 5 v okviru zdravljenja. # označuje pomembno razliko med dnevom testiranja in dnevom 5 v okviru zdravljenja. CEksperimentalna zasnova za poskuse za testiranje učinka predhodnega zdravljenja z naloksonom samo brez spolnih izkušenj na parjenje. D, Steknite latenco na zadnji dan testa parjenja, 7 dni po 5 dneh bodisi s fiziološko raztopino bodisi z injekcijo naloksona v odsotnosti parjenja. Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM. EEksperimentalna zasnova za eksperiment, da se preveri, ali je zdravljenje z naloksonom vplivalo na kratkoročni prikaz olajšanega spolnega vedenja pri spolno izkušenih živalih. F, Latenca gnezdenja na dan 1 in dan 5 pet zaporednih dni parjenja in končni dan testa parjenja, 1 dan za dnem 5 v prisotnosti slane (sive) ali naloksonske (črne) injekcije. Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM. * označuje pomembno razliko med dnevom 1 in dnevom 5 v okviru zdravljenja. GEksperimentalna zasnova za eksperiment, da se preveri, ali je zdravljenje z naloksonom blokiralo učinke spolnega vedenja. HČas, porabljen v parni komori (v sekundah) med predpreskusom (belo) in post-testom (črno) za živali, ki so pred parjenjem prejemale bodisi nalokson ali slanico. Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM; * označuje pomembno razliko v primerjavi s pretestom.

Oglejte si to tabelo: 

Tabela 2. 

Prikazani podatki so latence do intromisije in ejakulacije (v sekundah) iz kontrolnih poskusov, da bi ugotovili, da so se učinki blokade MOR na izgubo dolgoročne okrepitve spolnega vedenja pojavili neodvisno od pomanjkanja uporabe naloksona na zadnji testni dan testiranja

Da bi ugotovili, ali je zdravljenje z naloksonom, ko je bil seznanjen s spolno izkušnjo in se ni ponovil samim nanoksonom, ki je povzročilo okvaro spolnega vedenja 7 d po zadnjem zdravljenju, spolno naivne živali prejele bodisi pet dnevnih injekcij naloksona ali injekcije slanice pred končnim testom parjenja 7 d kasneje (Slika 5C). Za noben parni parameter med fiziološko raztopino in skupinami, ki so bile predhodno obdelane z naloksonom, niso bile ugotovljene pomembne razlike (Slika 5D; zakasnitev montaže; latenca intromisije: fiziološka raztopina 139.7 ± 40.3 proti naloksonu 121.83 ± 42.55; latenca ejakulacije: fiziološka raztopina 887.9 ± 70.0 proti naloksonu 1050.8 ± 327.31). Ti rezultati kažejo, da sam nalokson ne zadošča za spreminjanje poznejšega spolnega vedenja, podobno pomanjkanju učinkov samega naloksona na VTA dopaminsko nevronsko plastičnost.

Domnevamo, da zdravljenje z naloksonom med pridobivanjem spolnih izkušenj moti dolgoročno izražanje spolne izkušnje, ki jo povzroča spolno vedenje. Da bi to še dodatno preizkusili, so bili učinki zdravljenja z naloksonom med parjenjem testirani na poznejšem spolnem obnašanju med končnim testom parjenja, ki je bil izveden šele po 1 d po zadnjem parjenju (eksperimentalna zasnova; Slika 5E). Velik učinek dneva parjenja na gori je bil pomemben (Slika 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) in zakasnitve vstopa (Tabela 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Glavnega dnevnega učinka dneva na zakasnitev ejakulacije ni bilo (Tabela 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Podobno kot zgoraj opisano, so vsi moški (kljub zdravljenju s slanico ali naloksonom) pokazali olajšanje spolnega vedenja med petimi srečanji s spolnimi izkušnjami, ki jih kažejo bistveno krajše latence (Slika 5F; slanica: p = 0.002; nalokson: p = 0.018) in vnos (Tabela 2; slanica: p = 0.006; nalokson: p = 0.009) na dan 5 v primerjavi z dnevom 1. Podobno je bilo pri testiranem dnevu dokazano olajšano spolno vedenje v primerjavi z danom 1, označenim z bistveno krajšimi latencami (Slika 5F; slanica: p = 0.001; nalokson: p = 0.020) in vnos (Tabela 2; slanica: p = 0.004; nalokson: p = 0.009). Še pomembneje je, da zdravljenje z naloksonom med parjenjem ni pomembno vplivalo na spodbujanje spolnega obnašanja pri spolnih izkušnjah pri testiranju 1 d po spolnih izkušnjah, neodvisno od zdravljenja z naloksonom v tem zadnjem dnevu testiranja parjenja.

Nazadnje smo preizkusili možnost, da je oslabitev učinka naloksona na dolgotrajno izražanje olajšanega spolnega vedenja posledica blokirajočega učinka naloksona na nagrajujoče lastnosti spolnega vedenja. Vendar nalokson, ki se daje neposredno pred parjenjem, ni spremenil tvorbe CPP za parjenje (Slika 5G), kar kaže na to, da zdravljenje z naloksonom ni spremenilo spolnega nagrajevanja. Obe skupini, zdravljeni s slanico in naloksonom, tvorita pomemben CPP za spolno vedenje, kar kaže znatno povečan čas, porabljen v komori s spolaSlika 5H; slanica: p = 0.038; nalokson: p = 0.002) med post testom v primerjavi s predhodnim testom. Zato nalokson nima škodljivega učinka na vzdrževanje lažjega spolnega vedenja, saj blokira nagrado, povezano s spolnim vedenjem.

Spodbujanje spolnega vedenja je odvisno od delovanja EOP v VTA

Da bi potrdili, da EOP deluje posebej v VTA, da bi spodbudili dolgoročno olajšanje spolnega vedenja, je načrtovanje poskusov, opisano v Slika 3A ponavljajo z intra-VTA naloksonskimi infuzijami in ne s sistemskimi injekcijami. Rezultati so bili identični sistemski aplikaciji, opisani zgoraj. Na vse parametre spolnega vedenja je bil pomemben glavni vpliv dneva parjenja (Slika 6A, zakasnitev namestitve: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, latenca vnosa: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, latenca ejakulacije: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) in zdravljenje z naloksonom znotraj VTA pri latencih (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) in vnos (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Nalokson Intra-VTA ni preprečil začetne olajšave spolnega obnašanja, povzročene z izkušnjami med parjenjem 5 d, ker so moški, zdravljeni z naloksonom, pokazali zmanjšano latenco za vzpon (Slika 6A; p = 0.001), vpis (Slika 6B; p <0.001) in ejakulacija (Slika 6C; p = 0.001) na dan 5 v primerjavi z dnevom 1. Samci, zdravljeni z naloksonom, se niso razlikovali od samic, zdravljenih s slanico, peti dan parjenja v kateri koli latenci. Zdravljenje z naloksonom Intra-VTA, kot je sistemsko dajanje, je povzročilo znatno povečanje \ tSlika 6A; p <0.001) in zakasnitve vstopa (Slika 6B; p <0.001) prvi dan parjenja v primerjavi s samci, zdravljenimi s fiziološko raztopino, česar med naslednjimi paritvenimi sejami niso opazili (med katerimi se moški, zdravljeni z naloksonom in fiziološko raztopino, niso razlikovali). Ena nepričakovana ugotovitev je bila, da v tem poskusu moški, ki so bili zdravljeni s fiziološko raztopino, niso pokazali statistično pomembnega olajšanja zakasnitve vpetja ali vdiranja (kot je bilo prikazano v vseh zgoraj opisanih poskusih), peti dan pa je bil v primerjavi s prvim dnevom skrajšan le z zakasnitvijo ejakulacije (fiziološka raztopina: p =

Slika 6. 

Endogeni opioidi v VTA posredujejo pri olajšanju spolnega vedenja in njegovem dolgotrajnem vzdrževanju. Parametri spolnega vedenja za samce, ki se zdravijo s slanico (Sal, bele palice, n = 8) ali NLX (črne črte, n = 6) z uporabo znotraj VTA. Prikazani podatki so zamikanje (A), vpis (B) in ejakulacija (C) na dneve 1 in 5 petih zaporednih dni parjenja. Poleg tega so podatki prikazani za končni dan testiranja parjenja, 7 d naslednji dan 5 v odsotnosti fiziološke raztopine ali injekcije naloksona. Podatki predstavljajo srednjo vrednost ± SEM; + označuje pomembno razliko med dnevi 1 in 5 v okviru zdravljenja; * označuje pomembno razliko med dnevom in dnevom testiranja 5 v okviru zdravljenja; # kaže pomembno razliko med naloksonom in Sal skupinami v dnevu. Shematske risbe koronalnih sekcij VTA (H, -4.60; I, -5.00; J, -NNUMX iz bregme), ki kažejo mesta injiciranja znotraj VTA za vse živali v eksperimentu 5.25 (fiziološka raztopina, bela, nalokson, črna; s predlogami iz Swanson Brain Maps (Swanson, 2004). Kanile so bile dvostranske, vendar so mesta injiciranja enostransko predstavljena zaradi lažje predstavitve. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, substantia nigra.

Zdravljenje z intra-VTA naksolonom je blokiralo vzdrževanje lažjega spolnega vedenja, opaženega pri spolno izkušenih moških, podobno kot učinki sistemskega naloksona. Natančneje, na zadnjem testiranem dnevu so moški, ki so bili zdravljeni z naloksonom, imeli daljše latence (Slika 6A; p = 0.011), vpis (Slika 6B; p = 0.010) in ejakulacijo (Slika 6C; p = 0.015) v primerjavi z njihovim petim parjenjem in v primerjavi z moškimi, ki so bili zdravljeni s slanico, na zadnji testni dan (Slika 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). V nasprotju s tem se živali, ki so bile zdravljene s solno raztopino, niso razlikovale v latencih, ki jih je bilo treba vzpenjati, in med uvajanjem med končnim dnevom testiranja in dnevom 5 parjenja. Ti učinki so bili specifični za dovajanje naloksona v zdravilo VTA, saj so bili moški s kanulacijskimi mesti v bližini, vendar niso ciljali na zdravilo VTA (Slika 6D; n = 3) je pokazal dolgotrajno olajšanje spolnega vedenja, podobnega kontrolam, ki so jih zdravili s slanico (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 in so se bistveno razlikovale v primerjavi z naleksonskimi živalmi znotraj VTA na zadnji dan testiranja parjenja (ML, IL: p = 0.029; EL: p =

Dejavnost EOP je potrebna za spolno pogojeno nevronsko aktivacijo, ki je pogojena s cue

Na podlagi dosedanjih ugotovitev smo domnevali, da je aktivacija EOP v VTA med izkušnjo parjenja in kasnejše zmanjšanje velikosti VTA dopamina soma ključnega pomena za pripisovanje spodbujevalne poudarke stimulacijam, povezanim z nagrajevanjem, in posledično vzdrževanje lažjega spolnega vedenja. Da bi preizkusili to hipotezo, so bili proučeni učinki blokiranja opioidnih receptorjev med izkušnjo parjenja na nevronsko aktivnost, ki jo povzroči poznejša izpostavljenost pogojevanim kontekstualnim namenom, ki napovedujejo spolno nagrajevanje (kontekstualne napotke, povezane s spolom). Tudi spolno naivne živali so bile izpostavljene okoljskim pokazateljem, vendar niso bile povezane s predhodnimi izkušnjami pri parjenju, zato so bile nevtralne. Nazadnje, izhodiščne vrednosti PERK so bile določene pri spolno izkušenih in naivnih kontrolnih skupinah, ki so ostale v domačih kletkah in niso bile izpostavljene nobenim namenom (-No Cue). Potrditev in razširitev prejšnjih ugotovitev (Balfour et al., 2004), izpostavljenost kontekstualnim namenom, povezanim s prejšnjo spolno nagrado, je znatno povečala izražanje pERK pri spolno izkušenih moških v NAc (Slika 7) in mPFC (Slika 8A – C), vendar ni povzročil nevronske aktivacije v BLA (Slika 8D) ali CPu (podatki niso prikazani). Glavni učinki izpostavljenosti iztočnic v jedru NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) in PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) in obdelavo z naloksonom v jedru NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) in PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). V jedru NAc je bilo pomembno interakcijo (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) in IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Prvič, izpostavljenost cue, povezana s parjenjem, je pomembno povečala pERK pri spolno izkušenih živalih, ki so bile zdravljene s slanico (Exp Sal ​​+ Cue), v primerjavi s kontrolami, ki niso bile izpostavljene nobenim namigom in vzete iz domače kletke (Exp Sal-No Cue) v jedru NAc (Exp).Slika 7A; p <0.001) in mPFC podregije ACA (Slika 8A; p = 0.001), PL (Slika 8B; p = 0.003) in IL (Slika 8C; p = 0.029). V nasprotju s tem, pri spolno naivnih živalih, ki so bile zdravljene s slanico, izpostavljenost kontekstualnim namigom, ki niso bili povezani s spolnim nagrajevanjem, ni povzročila pERK v nobenem od možganskih področij (Naiv Sal + Cue v primerjavi z naivnim Sal-No Cue; Sl. 7, 8), kar dokazuje, da je indukcija pERK specifična za izpostavljenost spolnim izkušnjam, ki so povezane z izkušnjami. Poleg tega spolna izkušnja sama po sebi ni spremenila izhodiščne pERK ekspresije v katerem koli možganskem območju, saj ni bilo razlik med skupinami, ki so bile vzete iz domačih kletk, bodisi spolno naivne ali izkušene, in obdelane s slanico ali naloksonom.

Slika 7. 

Endogeno delovanje opioidov je potrebno za nevralno aktivacijo v NAc, ki jo povzročajo pogojeni spolni vplivi. Število pERK-IR celic na mm2 v jedru nucleus accumbens (A) in lupine (B) pri spolno naivnih (belih) in izkušenih (Exp; črnih) živalih, ki so bile predhodno obdelane s sistemskim NLX ali fiziološko raztopino (Sal) med parjenjem (samci moškega spola) ali z rokovanjem (naivni samci). Skupine so bile bodisi izpostavljene kontekstualnim opozorilom (Cue), ki so bile povezane z moškimi in nevtralnimi znaki pri naivnih živalih ali pa so jih vzeli iz domačih kletk (No Cue, označeno s pomanjkanjem Cue-oznake). Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SEM; * označuje pomembno razliko v primerjavi s predhodno obdelanimi fiziološko raztopljenimi kontrolami (Naive Sal-No Cue in Exp Sal-No Cue); # označuje pomembno razliko v primerjavi s Sal-obdelano skupino Exp, ki je bila izpostavljena Cue (Exp Sal ​​+ Cue). Reprezentativne slike pERK-IR celic na mm2 v jedru NAc spolno izkušenih moških s Salom (C, D) ali NLX (E, F) ki so bili bodisi vzeti iz domače kletke (No Cue, C, E), bodisi izpostavljeni kontekstualnim namigom, povezanim s parjenjem (Cue; D, F). N = 4 za vsako skupino, razen za naivno NLX (brez napak), n = 3. ac, Zgornja komisija. Merilna lestvica, 100 μm.

Slika 8. 

Učinki naloksona na pERK ekspresijo, povzročeno s parjenjem, v drugih ciljnih regijah VTA. Število pERK-IR celic na mm2 v spolno naivnih (belih) in izkušenih (Exp; črnih) živalih, ki so bile predhodno obdelane s sistemskim NLX ali fiziološko raztopino (Sal) med parjenjem in so bile izpostavljene kontekstualnim namenom (Cue) ali domači kletki (brez opozoril) v ACA (A), PL (B), IL (IL) (C) in BLA (D). Podatki so povprečje ± SEM; * označuje pomembno razliko v primerjavi s predhodno obdelanimi fiziološko raztopljenimi kontrolami (Naive Sal-No Cue in Exp Sal-No Cue); # označuje pomembno razliko v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami, ki jih je zdravil Sal, ki so bile izpostavljene cue (Naive Sal + Cue).

V podporo naši hipotezi je zdravljenje z naloksonom med spolno izkušnjo pomembno oslabilo indukcijo pERK s spolno povezanimi pogojevami. Ekspresija pERK v teh izkušenih moških, ki so bili izpostavljeni iztrebki z naloksonom (Exp NLX + Cue), se ni razlikovala od izhodiščne ekspresije pERK v kateri koli spolno naivni ali izkušeni kontrolni skupini, ki je bila vzeta iz domačih kletk (Naive Sal-No Cue ali Naive NLX- No Cue). Poleg tega je bila ekspresija pERK pri izkušenih moških, ki so bili izpostavljeni iztrebki z naloksonom (Exp NLX + Cue), bistveno manjša v primerjavi z izkušenimi živalmi, ki so bili zdravljeni s slanimi zdravili (Exp Sal ​​+ Cue) v jedru NAc (Exp).Slika 7A; p = 0.002) in podregije mPFC (Slika 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p =

V lupini NAc dvosmerna ANOVA analiza ni prinesla statistično pomembnih učinkov izpostavljenosti faktorjev in zdravljenja z naloksonom. Vendar pa je primerjava po paru pokazala, da je izpostavljenost cueu inducirala pERK v spolno izkušeni skupini, ki je bila zdravljena s slanico (Exp SAL + Cue), v primerjavi s kontrolno skupino, ki ni bila izpostavljena Saline naive (Slika 7B; Naivna SAL-No Cue: p =

Razprava

Trenutna študija dokazuje, da je EOP, ki deluje v VTA med spolnim vedenjem, naravno nagrajevanje, povzročil robustno, a prehodno zmanjšanje velikosti soma v VTA dopaminskih celic. Zmanjšanje velikosti soma ni bilo opaženo pri ne-dopaminskih nevronih VTA, niti v dopaminskih nevronih v bližnji državi, kar kaže na to, da je bila ta sprememba specifična za VTA dopaminske celice. Ta VTA dopaminska plastičnost se zdi podobna tisti, ki jo povzroča kronična izpostavljenost opiatom (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) in je povzročil podobno toleranco za eksogeno nagrado za opiate (morfij). Pokazali smo, da je VTA dopaminska plastičnost ključnega pomena za dolgoročno (vzdrževanje), vendar ne kratkoročno (razvoj), okrepitev spolnega vedenja in nagrajeno povezano nevronsko aktivnost (pERK) v ciljnih regijah VTA: NAc in mPFC. Te ugotovitve kažejo na vlogo plastične VTA dopamina pri dolgoročnem izražanju spodbujevalne pomembnosti naravnih nagradnih napovedi ali nagrajevanja spomina.

Dobro je dokumentirano, da spolne izkušnje privedejo do lažjega poznejšega spolnega vedenja, vključno s hitrejšim začetkom začetka parjenja in večjo učinkovitostjo (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Ta olajšava ali okrepitev spolnega vedenja se ohrani vsaj za 28 d po parjenju (Pitchers et al., 2012). Poleg tega je bilo dokazano, da spolno vedenje in pogojene napovedi, ki napovedujejo spolno nagrajevanje, povzročajo internalizacijo MOR v VTA in povzročajo aktivacijo nevronov v celotnem mezolimbičnem sistemu, vključno z VTA (nevroni dopamina in nondopamina), NAc, PFC in BLA (Balfour et al., 2004, 2006). Dobro je ugotovljeno, da imajo nevroni dopaminskih VTA ključno vlogo pri učenju in pripisovanju spodbujevalne pomembnosti spodbud, povezanih z nagrajevanjem (Berridge in Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) in so ključnega pomena za napovedovanjeSchultz, 2010). Trenutne ugotovitve razširjajo naše sedanje znanje s tem, da dokazujejo, da je nevroplastičnost, ki jo povzroča nagrada, kritična za te funkcije, in je odvisna od aktivacije MOR z EOP v VTA. Trenutno ni znano, kateri EOP je ligand MOR, ki deluje v VTA med spolnim vedenjem moškega. Čeprav sta oba β endorfina in enkefalina vključena v spodbujevalno motivacijo za ojačevalnike hrane (Hayward et al., 2002), to je treba še ugotoviti za spolno vedenje moških. Pred tem smo pokazali, da se β-endorfinski nevroni med parjenjem ne aktivirajo, niti se ne povečuje mRNA POMC; tako kaže, da β endorfin ne sme biti kritični EOP, ki deluje v VTA med parjenjem (Davis et al., 2007). Ta VTA dopaminska plastičnost je bila bistvena za nevronsko aktivnost v mPFC, NAc in VTA po izpostavljenosti spolnim napovedovanjem okoljskih znakov. Poleg tega je bila VTA dopaminska plastičnost ključnega pomena za dolgoročni izraz povečane iniciacije in uspešnosti spolnega vedenja. V nasprotju s tem pa nevroplastičnost VTA, ki jo je povzročila spolna izkušnja, ni bila potrebna za hedonični odziv, ker je spolna nagrada (določena s CPP) in kratkoročna olajšava spolne motivacije in uspešnosti (med spolnimi izkušnjami ali pozneje 1) ostala nedotaknjena kljub blokadi MOR med parjenjem (Mehrara in Baum, 1990). Namesto tega podatki kažejo, da VTA dopaminska nevplastičnost posreduje dolgoročno (7 d po zadnji spolni izkušnji; Pitchers et al., 2012) izraz „željo“ po spolni nagradi in povečani motivirani odzivi na priprave za parjenje (Miller in Baum, 1987; Berridge in Robinson, 1998).

Spolno izkušene živali so pokazale navzkrižno toleranco na nagrado z morfinom, podobno kot učinki tekanja koles pri miših, drugo naravno obnašanje, ki je blokirano z zdravljenjem z naloksonom (Lett et al., 2001, 2002) in ugotovljeno, da je odvisno od plastičnosti VTA dopaminskih celic (trenutne ugotovitve). Podobno kot pri naravnih nagradah, ponavljajoča se izpostavljenost morfiju ali heroinu zaradi opiatov povzroči prehodno zmanjšanje velikosti VTA dopamina soma (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Poleg tega izpostavljenost opiatom s kratkimi karenci povzroča toleranco nagrajevanja, ki jo povzročajo višji odmerki zdravila, ki so potrebni za oblikovanje nagradnih nagrad (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007), in povzroči, da živali, ki se sami uporabljajo, eskalirajo vnos drog (Ahmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Zato EOP in opiati delujejo na skupne nevralne substrate, da povzročijo toleranco nagrajevanja med zgodnjim umikom, kar lahko odraža kompenzacijski homeostatski mehanizem za preprečevanje stimulacije s ponavljajočo izpostavljenostjo (Koob in Le Moal, 2005). V nasprotju s tem pa je med dolgotrajno abstinenco uživanja opiatov toleranca obrnjena na občutljivost za nagrajene lastnosti zdravila (Harris in Aston-Jones, 2003; Aston-Jones in Harris, 2004; Harris in Gewirtz, 2004). Zanimivo je, da je bilo ugotovljeno, da spolna izkušnja, ki ji sledi spolna abstinenčna doba 7-28 d, povzroča navzkrižno senzibilizacijo za psihostimulantsko nagrado (Pitchers et al., 2010a), ki je odvisna od ekspresije deltaFosB, ki jo povzroči parjenje, in aktivacije 1 dopaminskega receptorja v NAc (Pitchers et al., 2013). Torej izkušnje s spolnim nagrajevanjem povzročajo sočasno toleranco za nagrajevanje opiatov in senzibilizacijo za nagrado za psihostimulant, čeprav je treba preizkusiti daljše obdobje abstinence spolnosti na toleranco za nagrajevanje morfina. Domnevamo, da lahko te nasprotne učinke na nagrado za zdravila posredujejo različne oblike neuralne plastičnosti na različnih področjih mezolimbičnega sistema: delovanje VOP EOP in dopaminska plastičnost posredujeta toleranco za nagrajevanje opiatov (trenutna študija), medtem ko NAc deltaFosB izraža nadzor nad senzibilizacijo psihostimulantov (Pitchers et al., 2013). Oba dogodka lahko prispevata k stopnjevanju uživanja drog (Ahmed in Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

Molekularni mehanizmi, po katerih EOP vpliva na VTA dopaminske nevrone med naravnim nagrajevanjem, ostajajo neznani. Pot IRS2-Akt-mTORC2 je glavni posrednik zmanjšane velikosti soma v VTA, ki jo povzroča ponovni morfij (Jaworski et al., 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Ponavljajoča uporaba morfina povzroči spremembe v velikosti dopaminskih nevronov v VTA, ki jih lahko preprečimo z intravenskimi infuzijami nevrotrofičnega faktorja, ki izvira iz možganov (BDNF; Sklair-Tavron in Nestler, 1995). BDNF aktivira to pot prek signalizacije TrkB (Russo et al., 2007), receptorska kinaza z visoko afiniteto za BDNF in del poti IRS2-Akt (Seroogija in Gall, 1993; Numan in Seroogy, 1999) in izražena na dopaminskih in GABA nevronih v VTA. Določanje različnih sestavin poti IRS2-Akt z uporabo tehnologije prenosa genov virusnega vektorja posnema učinke kronične izpostavljenosti opiatom. Poleg tega se lahko učinki izpostavljenosti opiatom rešijo z obnovitvijo te signalne poti (Russo et al., 2007) in prekomerna ekspresija sestavine mTORC2 preprečuje redukcijo morfina, ki jo povzroča VTA dopamin (\ tMazei-Robison et al., 2011). Zato predhodno delo, ki preučuje učinke kroničnih opiatov na velikost VTA dopamina, kaže, da je dolgotrajna regulacija poti IRS2-Akt-mTOR, ki jo povzroča morfin, zadostna in potrebna za ta učinek (Mazei-Robison in Nestler, 2012). Zato je skušnjava domnevati, da učinke spolne izkušnje na VTA dopaminsko nevroplastičnost podobno posredujejo BDNF in pot IRS2-Akt-mTORC2.

Skratka, sedanja študija je pokazala, da je nevroplastičnost VTA posledica izkušenj z naravnim nagrajevanjem, zlasti s ponovljenim moškim spolnim vedenjem. Natančneje, EOP deluje v VTA za zmanjšanje velikosti dopaminskih som, kar je domnevno povezano s povečano živčno razburljivostjo in manjšo količino dopamina, kar ima za posledico hipodopaminergični sistem, in spreminja mezolimbični sistem kot odziv na napotke, ki napovedujejo spolno nagrado. Poleg tega je nevroplastičnost VTA ključnega pomena za spodbujevalno motivacijo in nagrajevanje spomina, ne pa tudi za hedonični vpliv spolnega vedenja. Nevroplastičnost VTA, ki je posledica naravnega nagrajevanja, ki ji sledi kratek čas abstinence za nagrajevanje, vpliva na nagrado za opiat in lahko vpliva na ranljivost za razvoj odvisnosti od drog.

Opombe

  • Prejeto januarja 12, 2014.
  • Revizija je prejela maj 17, 2014.
  • Sprejeto maj 20, 2014.
  • Raziskavo so podprli kanadski inštitut za raziskave na področju zdravja pri LMC in znanstveni svet ter znanstveni inštitut za raziskave KKP.

  • Avtorji ne prijavljajo konkurenčnih finančnih interesov.

  • Korespondenco je treba nasloviti na dr. Liqueja M. Coolena, Medicinski center Univerze v Mississippiju, Oddelek za fiziologijo in biofiziko, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [e-pošta zaščitena]

Reference

    1. Agmo A

    (1997) spolno vedenje samcev. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Prehod z zmernega na pretiran vnos droge: sprememba v hedonični nastavljeni točki. Znanost 282: 298-300.

    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Dolgotrajno povečanje vrednosti za samo-dajanje kokaina po eskalaciji pri podganah. Psihofarmakologija 146: 303-312.

    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Vztrajno povečevanje motivacije za jemanje heroina pri podganah z zgodovino stopnjevanja drog. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Nevrobiološki dokazi za hedonsko alostazo, povezano z naraščajočo uporabo kokaina. Nat Neurosci 5: 625-626.

    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Eskalacija kokainske samostojne uporabe ni odvisna od spremenjenih ravni dopamina, ki jih povzroča kokain. J Neurochem 86: 102-113.

    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Možganski substrati za povečano iskanje drog med dolgotrajnim umikom. Neurofarmakologija 47: 167-179.

    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Spolno obnašanje in spolni vplivi na okolje sprožijo mezolimbični sistem pri samcih podgan. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Potencialni prispevki eferentov iz medialnega prefrontalnega korteksa v živčno aktivacijo po spolnem vedenju pri samcih podgan. Nevroznanost 137: 1259-1276.

    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Nevrofilamentne beljakovine in mezolimbični dopaminski sistem: skupna regulacija s kroničnim morfinom in kroničnim kokainom v predelu ventralnega tegmenta podgan. J Neurosci 12: 2165-2176.

    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Kakšna je vloga dopamina pri nagrajevanju: hedonistični učinek, nagradno učenje ali spodbujevalni poudarek? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Disekcijske komponente nagrajevanja: „naklonjenost“, „želja“ in učenje. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Gold M

    (2012) Seks, droge in rock 'n' roll: hipoteza o skupni mezolimbični aktivaciji kot funkciji polimorfizmov nagrajenih genov. J Psihoaktivne droge 44: 38-55.

    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Periferna električna stimulacija je spremenila zmanjšanje velikosti celic in povečala raven BDNF v ventralnem tegmentalnem področju pri podganah, zdravljenih s kroničnim morfinom. Brain Res 1182: 90-98.

    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Aktivacija nevronov POMC med splošnim vzburjenjem, ne pa tudi spolnega vedenja pri samcih podgan. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dinamične spremembe v izpljuvanju nucleus accumbens dopamina med Coolidgejevim učinkom pri samcih podgan. J Neurosci 17: 4849-4855.

    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Selektivna vloga dopamina pri učenju stimulacije in nagrajevanja. Narava 469: 53-57.

    1. Frohmader KS,
    2. Pitcher KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Mešanje užitkov: pregled učinkov zdravil na spolno vedenje pri ljudeh in živalskih modelih. Horm Behav 58: 149-162.

    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Wise RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamin deluje na subpopulacije nevronov, ki uravnavajo spolno vedenje pri podganjih samcih. Nevroznanost 166: 771-784.

    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Povišan strah med odvzemom akutnega morfina: model umika opiatov in tesnoba. Psihofarmakologija 171: 140-147.

    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Spremenjena motivacija in učenje po umiku opiatov: dokazi za dolgotrajno odpravljanje regulacije nagrajevanja. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Nizka MJ

    (2002) Selektivni nagradni primanjkljaj pri miših brez beta-endorfina in enkefalina. J Neurosci 22: 8251-8258.

    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Naravna zasvojenost: vedenjski model in model vezja, ki temelji na zasvojenosti s sladkorjem pri podganah. J Addict Med 3: 33-41.

    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Nevronski mehanizmi zasvojenosti: vloga učenja in spomina, povezanega z nagrajevanjem. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    Blokada receptorjev (1997) GABA (A) v prednjem ventralnem tegmentalnem področju poveča zunajcelično raven dopamina v jedru accumbens podgan. J Neurochem 69: 137-143.

    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Nadzor dendritične arborizacije s fosfoinozitidno-3-kinazno-Akt-sesalsko tarčo poti rapamicina. J Neurosci 25: 11300-11312.

    1. Johnson SW,
    2. Severni RA

    (1992) Opioidi vzbujajo dopaminske nevrone s hiperpolarizacijo lokalnih interneuronov. J Neurosci 12: 483-488.

    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Regulacija sproščanja somatodendritičnega dopamina v ventralnem tegmentalnem območju z opioidi in GABA: mikrodializna študija in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plastičnost nagradne nevroskopi in "temna stran" odvisnosti od drog. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

    1. Lennette DA

    (1978) Izboljšan montažni medij za imunofluorescenčno mikroskopijo. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Nalokson oslabi pogojeno prednostno mesto, ki ga povzroča kolesarski tek v podganah. Physiol Behav 72: 355-358.

    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Pred izkušnjami s tekom kolesa se doseže navzkrižna toleranca do ugodnega učinka morfina. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

    1. Matthews RT,
    2. Nemški DC

    (1984) Elektrofiziološki dokazi za vzbujanje dopaminskih nevronov v podolgovatem predelu prsnega ventila s morfinom. Nevroznanost 11: 617-625.

    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Razveseliti JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) Vloga za signalizacijo mTOR in nevronsko aktivnost v morfinsko induciranih prilagoditvah v ventralnem tegmentalnem področju dopaminskih nevronov. Nevron 72: 977-990.

    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) molekularna in celična plastičnost ventralnega tegmentalnega območja in nevroni locus coeruleus kateholaminov, inducirani z opiatom. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) nalokson moti izražanje, ne pa tudi pridobitev pri moških podgan kondicionalnega odziva na preferenčno mesto za estrusno žensko. Psihofarmakologija 101: 118-125.

    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Spolne izkušnje pri glodalcih: celični mehanizmi in funkcionalne posledice. Brain Res 1126: 56-65.

    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Nalokson zavira parjenje in pogojeno mesto za estrusno žensko pri samcih podgan takoj po kastraciji. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Spodbujanje spolnega vedenja pri podganjih samcih, povezanih z injekcijami opiatov znotraj VTA. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    Specifičnost signala (2006) MAPK: pravi kraj ob pravem času. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

    1. Nestler EJ

    (2012) Transkripcijski mehanizmi odvisnosti od drog. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) možgani podgan v stereotaksičnih koordinatah (Academic, Boston), Ed 7.

    1. Pitcher KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Nevroplastičnost v mezolimbičnem sistemu, ki jo povzroča naravna nagrada in kasnejša abstinenca nagrajevanja. Biol Psychiatry 67: 872-879.

    1. Pitcher KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB v nucleus accumbens je ključnega pomena za krepitev učinkov spolne nagrajenosti. Geni Brain Behav 9: 831-840.

    1. Pitcher KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Doživetje naravnih nagrad spreminja distribucijo in delovanje receptorjev AMPA in NMDA v nucleus accumbens. PLoS One 7: e34700.

    1. Pitcher KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Naravne in zdravilne nagrade delujejo na skupne mehanizme nevralne plastičnosti, pri čemer je DeltaFosB ključni posrednik. J Neurosci 33: 3434-3442.

    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK in p38 MAPK aktivirane proteinske kinaze: družina protein kinaz z različnimi biološkimi funkcijami. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Self DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Pot IRS2-Akt v nevronih dopamina na srednjem možganu uravnava vedenjske in celične odzive na opiate. Nat Neurosci 10: 93-99.

    1. Schultz W

    (2010) Multiple funkcije dopaminskih nevronov. F1000 Biol Rep 2: 2.

    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Ekspresija nevrotrofinov z dopaminergičnimi nevroni iz srednjega mozga. Exp Neurol 124: 119-128.

    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Motivacijske lastnosti opioidov: dokaz, da aktivacija delta-receptorjev posreduje okrepitvene procese. Brain Res 436: 234-239.

    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Nasprotni učinki morfina in nevrotrofinov, NT-3, NT-4 in BDNF, na nevroni locus coeruleus in vitro. Brain Res 702: 117-125.

    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    Kronični morfij povzroči vidne spremembe v morfologiji mezolimbičnih dopaminskih nevronov. Proc Natl Acad Sci ZDA 93: 11202-11207.

    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Nenormalnosti, povezane z odtegnitvijo morfija v VTA: konfokalni laserski skenirni mikroskopiji. Eur J Neurosci 17: 605-612.

    1. Swanson LW

    (2004) Zemljevidi možganov: struktura možganov podgan (Academic, San Diego), Ed 3.

    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Pitcher KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Spolna nagrada pri podganjih samcih: učinki spolnih izkušenj na pogojene krajevne preference, povezane z ejakulacijo in intromisijami. Horm Behav 55: 93-97.

    1. Tzschentke TM

    (2007) Merjenje nagrajevanja s predpostavko pogojene lokacije (CPP): posodobitev zadnjega desetletja. Addict Biol 12: 227-462.

    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Spolna motivacija: vpletenost endogenih opioidov v ventralno tegmentalno področje. Brain Res 729: 20-28.

    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Regulacija moškega spolnega vedenja: vpletenost možganskih opioidov in dopamina. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Kronična izpostavljenost opioidom povzroča povečano samo-dajanje heroina pri podganah. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

    1. Mladi KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    Nevrobiologija vezave parov: vpogled iz socialno monogamnega glodavca. Sprednji Neuroendocrinol 32: 53-69.

  •