Vpliv prekomerne ekspresije ΔFosB na signalizacijo, posredovano z opioidnim in kanabinoidnim receptorjem, v nucleus accumbens (2011)

Neurofarmakologija. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

vir

Oddelek za farmakologijo in toksikologijo in Inštitut za študije drog in alkohola, Medicinska univerza Virginia Commonwealth University, Richmond, VA 23298, ZDA.

Minimalizem

Stabilni transkripcijski faktor ΔFosB se inducira v nucleus accumbens (NAc) s kronično izpostavljenostjo večim zlorabam zdravil in transgenska ekspresija ΔFosB v striatumu povečuje nagrajene lastnosti morfina in kokainae. Vendar mehanistična podlaga za te ugotovitve ni povsem razumljena. Uporabili smo model bitransgenskega miši z inducibilno ekspresijo ΔFosB v dopamin D (1) receptor / dynorphin vsebujoči striatni nevroni za določitev učinka izražanja ΔFosB na signalizacijo opioidnega in kanabinoidnega receptorja v NAc. Rezultati so pokazali, da je bila aktivnost g-proteina, ki jo posreduje mi opioid, in inhibicija adenilil ciklaze v NAc miši, ki so izražali ΔFosB, okrepljeni. Podobno je bila kappa opioidna inhibicija adenilil ciklaze okrepljena v miših, ki izražajo ΔFosB. V nasprotju s tem se signalizacija, posredovana s kanabinoidnim receptorjem, ni razlikovala med mišmi, ki prekomerno izražajo ΔFosB in kontrolnimi mišmi. TIzsledki hese kažejo, da je signalizacija opioidnega in kanabinoidnega receptorja različno modulirana z izražanjem ΔFosB, in kažejo, da lahko izražanje ΔFosB povzroči nekatere njegove učinke z okrepljenim mu in kapa opioidnim receptorskim signalom v NAc.

ključne besede: G-protein, adenilil ciklaz, striatum

1. Predstavitev

Opioidni receptorji in kanabinoidni CB₁ receptorje (CB₁R) so nevrobiološki cilji za dva široko uporabljena razreda zdravil, ki vključujejo morfij, heroin in opioide na recept ter marihuano (Δ).⁹-tetrahidrokanabinol (THC)). Akutne učinke opioidov in kanabinoidov posredujejo receptorji, vezani na G-proteine, ki aktivirajo predvsem G_{i / o} beljakovine in proizvajajo efektorske odzive na nižji stopnji, kot je inhibicija adenilil ciklaze (Childers, 1991, Childers in sod., 1992, Howlett et al., 2002). Motnje, motnje spomina in psihoaktivni učinki Δ⁹-THC proizvaja CB₁R (Huestis in sod., 2001, Zimmer in sod., 1999), ki so široko razširjene v možganih, z visokimi ravnmi v bazalnih ganglijih, hipokampusu in možganih (Herkenham in sod., 1991). Učinke analgetikov in nagrajevanja najbolj klinično pomembnih in zlorabljenih opioidnih zdravil posredujejo predvsem opioidni receptorji (MOR) (Matthes et al., 1996), ki so obogateni v limbičnem sistemu in možganskem deblu (Mansour in sod., 1994). Mezolimbični sistem, sestavljen iz dopaminergičnih projekcij iz ventralnega tegmentalnega območja (VTA) v nucleus accumbens (NAc), igra pomembno vlogo pri nagrajevanju učinkov opioidov in kanabinoidov (Bozarth in Wise, 1984, Vaccarino in sod., 1985, Zangen et al., 2006), kot tudi druge droge zlorabe (Koob in Volkow, 2010). Poleg tega endogeni opioidni in kanabinoidni sistemi sodelujejo pri nagrajevanju učinkov različnih skupin psihoaktivnih zdravil (Maldonado in sod., 2006, Trigo in sod., 2010). Zato je pomembno pojasniti mehanizme, s katerimi opioidi in CB₁Signalizacija R je regulirana v NAc.

Osrednje vprašanje na področju zlorabe drog je bilo identificiranje beljakovin, ki posredujejo prehod z akutnih na dolgoročne učinke psihoaktivnih zdravil. Transkripcijski faktor AP-1 ΔFosB je še posebej zanimiv, ker je stabilen, okrnjen variant produkta fosb gen, ki se kopiči ob ponavljajoči se izpostavljenosti zlorabi drog ali naravnim nagradam (McClung in sod., 2004, Nestler, 2008, Nestler in sod., 1999). Ugotovili smo, da se ΔFosB inducira v možganih po ponavljajoči se izpostavljenosti morfinu, Δ⁹-THC, kokain ali etanol, pri čemer vsako zdravilo ustvari edinstven regionalni vzorec izražanja ΔFosB (\ tPerrotti, et al., 2008). Dosledna ugotovitev med zdravili je bila, da je bil ΔFosB v striatumu močno induciran, kjer so vsa štiri zdravila inducirala ΔFosB v jedru NAc in vsi razen Δ⁹-THC pomembno inducira ekspresijo v lupini NAc in kaudat-putamenu.

Farmakološke študije so pokazale, da sočasno dajanje dopamina D₁ receptor (D₁R) antagonist SCH 23390 blokira indukcijo ΔFosB v NAc in kaudat-putamen po intermitentni uporabi kokaina ali morfina, kar kaže na potencialni pomen D₁Nevroni, ki izražajo R (Muller in Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Učinek indukcije ΔFosB na obnašanje, ki ga povzroča zdravilo, so raziskovali z uporabo bitransgenskih miši, ki izražajo ΔFosB v specifičnih nevronskih populacijah NAc in dorzalnega striatuma (Chen et al., 1998). Miši, ki izražajo ΔFosB v dynorphin / D₁R pozitivni nevroni v NAc in dorzalni striatum (linija 11A) kažejo spremenjene odzive na zlorabe drog, zlasti povečano občutljivost na koristne učinke kokaina ali morfina (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Te spremembe so se pojavile v odsotnosti sprememb ravni MOR ali različnih podenot G-proteina. Vendar so se ravni mRNA dynorphina zmanjšale v NAc miši, ki izražajo ΔFosB (Zachariou, et al., 2006), kar kaže, da je en cilj ΔFosB gen, ki kodira endogeni opioidni peptid. Indukcija ΔFosB lahko povzroči tudi vedenjske spremembe z regulacijo receptorskega signaliziranja v NAc, vendar ta možnost ni raziskana. Zato so v teh študijah uporabili model bitransgenskega miši, da bi ugotovili, ali je prekomerna ekspresija ΔFosB v dinorfinu / D₁R, ki vsebuje striatne nevrone, spremeni aktivnost G-proteina, ki jo posreduje MOR, in inhibicijo adenil-ciklaze, ki jo posreduje MOR in KOR, v NAc. Učinek ΔFosB na CB₁R-posredovano aktivnost G-proteina je bila prav tako ocenjena zaradi Δ⁹Dajanje-THC inducira ΔFosB v NAc (Perrotti, et al., 2008) in endokanabinoidni sistem je znano, da regulira vezje za nagrajevanje možganov (Gardner, 2005, Maldonado in sod., 2006), vendar učinek ΔFosB na endokanabinoidni sistem ni raziskan.

2. Materiali in metode

2.1. Reagenti

[³⁵S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) in [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) smo kupili od PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, BDP, cAMP, goveji serumski albumin, kreatin fosfokinaza, papaverin, imidazol in WIN-55212-2 so bili nabavljeni od Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPyS smo kupili od Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO je zagotovil Program oskrbe z drogami Nacionalnega inštituta za zlorabo drog (Rockville, MD). Econo-1 scintilacijska tekočina je bila pridobljena od podjetja Fisher Scientific (Norcross, GA). Ecolite scintilacijska tekočina je bila pridobljena iz ICN (Costa Mesa, CA). Vse druge kemikalije so bile pridobljene od Sigme Aldrich ali Fisher Scientific.

2.2. Miši

Moške bitransgenične miši, izvedene iz NSE-TTA (linija A) × TetOp-ΔFosB (linija 11), smo dobili, kot je opisano v Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Bitransgenske miši so bili zasnovani in vzgojeni na doksiciklinu (100 µg v pitni vodi) za zatiranje transgenske ekspresije. V starosti 8 tednov je bila doksiciklina izpuščena iz vode za polovico miši, da je omogočila transgeno ekspresijo, medtem ko so preostale miši vzdrževali na doksiciklinu za zaviranje transgena. Možgani so bili zbrani 8 tednov kasneje, čas, ko so transkripcijski učinki ΔFosB maksimalni (McClung in Nestler, 2003). Uporabili smo drugo transgeno linijo miši, v kateri je Δc-Jun, dominantni negativni antagonist c-Jun, izražen v D₁R / dinorfin in D₂R / enkefalinske celice striatuma, hipokampusa in parietalne skorje (Peakman, et al., 2003). C-Jun in pripadajoči proteini iz družine Jun dimerizirajo z beljakovinami družine Fos in se vežejo na mesto AP-1 ciljnih genov, da regulirajo transkripcijo. Vendar pa skrajšanje N-terminusa c-Jun (Δc-Jun) povzroči kompleks transcriptionally neaktivno in sposoben ovirati DNA vezavo aktivnih AP-1 kompleksov. Moške bitransgenične miši, izvedene iz NSE-TTA (linija A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (linija E), smo dobili, kot je opisano v Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Bitransgenske miši so bili zasnovani in vzgojeni na doksiciklinu (100 µg v pitni vodi) za zatiranje transgenske ekspresije. Mladiči so bili odstavljeni ob 3 tednih, genotipizirani in razdeljeni v skupine, pri čemer je bila polovica vzdrževana z vodo, ki vsebuje doksiciklin, in polovica na običajni pitni vodi, da bi povzročila izražanje FLAG-Δc-Jun. Možgani so bili zbrani 6 tednov kasneje, čas, v katerem so bile izmerjene maksimalne ravni FLAG-Δc-Jun (Peakman, et al., 2003). Vsi postopki na živalih so bili izvedeni v skladu z navodili Nacionalnega inštituta za zdravje za nego in uporabo laboratorijskih živali.

2.3. Priprava membrane

Do dneva testa so bile možgane shranjene pri -80 ° C. Pred analizo so se vsi možgani odmrznili in NAc smo razrezali na ledu. Vsak vzorec smo homogenizirali v 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membranski pufer) z 20 udarci iz steklenega homogenizatorja na 4 ° C. Homogenat smo centrifugirali pri 48,000x g pri 4 ° C za 10 min, resuspendiran v membranskem pufru, ponovno centrifugiran pri 48,000 × g pri 4 ° C za 10 min in resuspendiran v 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (testni pufer). Nivoje beljakovin smo določili po metodi Bradforda (Bradford, 1976z uporabo govejega serumskega albumina (BSA) kot standarda.

2.4. Agonistično stimulirani³⁵S] Vezava GTPyS

Membrane so bile predhodno inkubirane za 10 minuto pri 30 ° C z adenozin deaminazo (3 mU / ml) v testnem pufru. Membrane (protein 5 – 10 µg) so bile nato inkubirane za 2 h pri 30 ° C v testnem pufru, ki je vseboval 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPyS, 30 µM BDP in adenozin deaminaza (3 mU / ml) z ali brez ustreznih koncentracij DAMGO ali WIN55,212-2. Nespecifično vezavo smo izmerili z 20 µM GTPyS. Inkubacijo smo zaključili s filtracijo skozi filtre iz steklenih vlaken GF / B, čemur je sledilo izpiranje 3 z 3 ml ledeno mrzlega 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Vezano radioaktivnost smo določili s tekočinsko scintilacijsko spektrofotometrijo po ekstrakciji filtrov čez noč v Econo-1 scintilacijski tekočini.

2.5. Analiza adenilil ciklaze

Membrane (protein 5-25 µg) so bile predhodno inkubirane z adenozin deaminazo, kot je opisano zgoraj, nato pa so bile inkubirane za 15 min pri 30 ° C v prisotnosti ali odsotnosti forskolina 1µM z ali brez DAMGO, U50,488H ali WIN55,212-2, v testnem pufru, ki je vseboval 50 µM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (m / v) BSA, ciklični AMP 50 µM, 50 µM GTP, 0.2 mM papaverin, 5 mM fosfokreatin, 20 enote / ml kreatin fosfokinaze in adenozin deaminaza (3 mU / ml) v končnem volumnu 100 µl. Pod temi pogoji, skupno [α-³²P] cAMP je bil na splošno manjši od 1% skupne količine dodane [α-³²P] ATP v vsakem vzorcu. Reakcijo smo zaključili z vrenjem za 3 min in³²P] Ciklični AMP smo izolirali z dvojno kolono (Dowex in aluminijev oksid) po Salomonu (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) smo dodali v vsako epruveto pred kolonsko kromatografijo kot notranji standard. Radioaktivnost smo določili s tekočinsko scintilacijsko spektrofotometrijo (učinkovitost 45% za ³H) po 4.5 ml eluata raztopimo v 14.5 ml Ecolite scintilacijske tekočine.

2.6. Analiza podatkov

Če ni drugače navedeno, se podatki poročajo kot povprečne vrednosti ± SE za posamične poskuse 4-8, od katerih je vsaka izvedena v treh izvodih. Mreža, ki jo spodbuja [³⁵S] GTPyS vezava je izračunana kot agonistično stimulirana vezava minus bazalna vezava. Neto aktivnost forskolina, stimuliranega adenilil ciklaze, je definirana kot forskolin-stimulirana aktivnost - bazalna aktivnost (pmol / mg / min). Odstotek inhibicije aktivnosti forskolinom stimulirane adenilil ciklaze je definiran kot (neto forskolin-stimulirana aktivnost v odsotnosti agonistično-neto forskolin-stimulirane aktivnosti v prisotnosti agonist / net forskolin-stimulirane aktivnosti v odsotnosti agonista) × 100. Vse prilagoditve krivulje in statistične analize smo izvedli z uporabo Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Krivulje koncentracije in učinka smo analizirali z iterativno nelinearno regresijo, da smo dobili EC₅₀ in E_max vrednosti. Statistično značilnost podatkov o koncentraciji-učinku smo določili z dvosmerno analizo variance (ANOVA), pri čemer smo kot glavne dejavnike uporabili agonistično dozo in indukcijo gena (vklop ali izklop). Statistična značilnost ustreznih vrednosti krivulje (E_max ali ES₅₀) je bil določen z neparnim dvostranskim Studentovim t-testom z Welchovo korekcijo ali kvadratno koreninsko preoblikovanjem podatkov, kjer je bilo treba popraviti neenake variance (zaznane s F-testom) v ES₅₀ vrednosti.

3. Rezultati

3.1. Vpliv ekspresije ΔFosB na aktivacijo G-proteinov, ki jo posreduje opioid in kanabinoidni receptor

Za določitev, ali MOR- ali CB₁Aktivacijo G-proteina, posredovano z R, smo spremenili z inducibilno transgensko ekspresijo ΔFosB v NAc, agonistično stimulirani [³⁵S] GTPyS vezavo smo preučili na izoliranih membranah, pripravljenih iz te regije bitransgenskih miši, ki je pogojno izražala (ΔFosB na) ali ne eksprimirala (ΔFosB off) transgena ΔFosB. Za aktiviranje MOR smo uporabili MOR-selektivni enkefalinski analog DAMGO in uporabili kanabinoid aminoalkilindol WIN55,212-2 za aktiviranje CB₁Ti ligandi so bili prej prikazani kot polni agonisti pri MOR in CB₁R, v tem zaporedju (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Ni bilo mogoče preučiti aktivnosti G-proteinov, ki jo posreduje KOR, ker je signal prenizek pri možganih glodalcev (Childers in sod., 1998). Rezultati so pokazali, da so DAMGO in WIN55,122-2 v NAc iz skupine ΔFosB off in ΔFosB na miših stimulirali aktivnost G-proteinov.Slika 1). Za aktivnost, ki jo spodbuja DAMGO (Slika 1A), dvosmerna ANOVA podatkov o koncentracijskem učinku je pokazala pomembne glavne učinke statusa ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) in koncentracije DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) brez pomembna interakcija (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Nelinearna regresijska analiza krivulj koncentracija-učinek je pokazala bistveno večji DAMGO E_max vrednost v ΔFosB na miših (E_max = 73 ± 5.2% stimulacije) glede na ΔFosB pri miših (E_max = 56 ± 4.1% stimulacija; p <0.05 drugačen od ΔFosB na miših s Studentovim t-testom). DAMGO EC₅₀ vrednosti niso bile različne med ΔFosB in ΔFosB pri miših (302 ± 72 nM v primerjavi z 212 ± 56 nM, p = 0.346).

Vpliv izražanja ΔFosB na agonistično stimulirane³⁵S] GTPyS vezava v NAc. Membrane iz ΔFosB-izražajočih (ΔFosB on) ali kontrolnih (ΔFosB off) miši smo testirali, kot je opisano v metodah z uporabo različnih koncentracij ...

V nasprotju z rezultati, dobljenimi z agonistom MOR DAMGO, niso opazili razlik v aktivaciji G-proteinov, odvisnih od statusa ΔFosB, s kanabinoidnim agonistom WIN55,212-2 (Slika 1B). Dvosmerna ANOVA podatkov koncentracije WIN55,212-2 je pokazala pomemben glavni učinek koncentracije WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), ne pa tudi ΔFosB statusa (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) in ni bilo interakcije (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Podobno ni vplival status ΔFosB na WIN55,212-2 E_max vrednosti (103 ± 6% proti stimulaciji 108 ± 8% v ΔFosB na in izven miši, p = 0.813 po Studentovem t-testu) ali EC₅₀ vrednosti (103 ± 20 nM v primerjavi z 170 ± 23 nM v ΔFosB na in izven miši, p = 0.123).

Na podlagi oblike krivulj in dejstva, da so naše prejšnje študije pokazale dvofazne krivulje koncentracije in učinka WIN55,212-2 v možganih (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), so bile krivulje WIN55,212-2 analizirane tudi z modelom dveh mest. Analiza povprečnih podatkov je pokazala rahlo izboljšanje dobrega ujemanja z modelom dveh mest (R² = 0.933 in 0.914, vsota kvadratov = 3644 in 5463 v ΔFosB na ali izven miši) v primerjavi z enojnim modelom (R² = 0.891 in 0.879, vsota kvadratov = 6561 in 6628 v ΔFosB na in izven miši, oziroma). Vendar niso bile ugotovljene nobene pomembne razlike med ΔFosB na in izven miši v obeh E_max ali ES₅₀ vrednosti območij z visoko ali nizko učinkovitostjoDodatna tabela 1), čeprav je prišlo do trenda nižje ES₅₀ vrednost na mestu visoke jakosti pri miših z ΔFosB (EC₅₀visoko = 28.0 ± 10.6 nM) v primerjavi s tistimi z izklopom ΔFosB (EC₅₀visoko = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Poleg tega status ΔFosB ni vplival na bazalne³⁵S] GTPyS vezava v NAc membranah (253 ± 14 v primerjavi z 226 ± 14 fmol / mg v ΔFosB na in izven miši, p = 0.188). Ti podatki kažejo, da je inducirana transgenska ekspresija ΔFosB v NAc miši povečala aktivacijo G-proteinov, ki jo posreduje MOR, ne da bi pomembno vplivala na CB₁R-posredovana ali bazalna aktivnost G-proteinov.

3.2. Vpliv ΔFosB na zaviranje adenilil ciklaze, ki jo povzroča opioid in kanabinoidni receptor \ t

Oceniti učinek inducibilne transgenske ekspresije ΔFosB na modulacijo efektorske aktivnosti v smeri toka z MOR in CB₁R, inhibicija aktivnosti 1 uM forskolinom stimulirane adenilil ciklaze, je bila proučena v membranah NAc. Poleg MOR- in CB₁R-posredovana inhibicija aktivnosti adenilil ciklaze, učinki aktivnosti KOR so bili prav tako pregledani z uporabo KOR-selektivnega polnega agonista U50,488 (Zhu in sod., 1997), ker so prejšnji rezultati pokazali, da je bil dynorphin mRNA tarča ΔFosB v bitransgenskem modelu (Zachariou, et al., 2006). Rezultati so pokazali, da sta DAMGO, U50,488 in WIN55,212-2 proizvedli odvisno od koncentracije zaviranje aktivnosti adenilil ciklaze v obeh ΔFosB off in ΔFosB na miših (Slika 2). Dvosmerna ANOVA podatkov o koncentraciji in učinku DAMGO (Slika 2A) razkrila pomembne glavne učinke statusa ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) in koncentracije DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), vendar ni bilo pomembnih interakcij (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Nelinearna regresijska analiza krivulj koncentracije in učinka DAMGO je pokazala bistveno nižjo vrednost DAMGO EC₅₀ vrednost v ΔFosB na miših (101 ± 11 nM) v primerjavi z ΔFosB na miših (510 ± 182 nM, p <0.05 po študentskem t-testu). Vendar pri DAMGO E ni bilo bistvene razlike_max vrednosti (20.9 ± 1.26% v primerjavi z 19.8 ± 1.27% inhibicije v ΔFosB na in izven miši, p = 0.534).

Vpliv izražanja ΔFosB na inhibicijo aktivnosti adenilil ciklaze v NAc. Membrane iz ΔFosB-izražajočih (ΔFosB on) ali kontrolnih (ΔFosB off) miši smo testirali, kot je opisano v Metodah v prisotnosti 1 µM ...

KOR-posredovana inhibicija adenilil ciklaze se je razlikovala tudi kot funkcija inducibilne transgenske ekspresije ΔFosB (Slika 2B). Dvosmerni ANOVA podatkov koncentracije U50,488 je pokazal pomembne glavne učinke statusa ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) in koncentracije U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , brez pomembne interakcije (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Nelinearna regresijska analiza krivulj koncentracije in učinka je pokazala večji U50,488 E_max vrednost pri ΔFosB pri miših (18.3 ± 1.14% zaviranja) v primerjavi z ΔFosB pri miših (12.5 ± 2.03% zaviranja; p <0.05 drugačna od ΔFosB po Studentovem t-testu), brez pomembne razlike v U50,488 EC₅₀ vrednosti (310 ± 172 nM v primerjavi z 225 ± 48 nM v ΔFosB na in izven miši, p = 0.324).

V nasprotju z učinki, opaženimi z MOR in KOR, ni bilo pomembnega učinka inducibilne transgenske ekspresije ΔFosB na inhibicijo adenilil ciklaze s kanabinoidnim agonistom WIN55212-2 (Slika 2C). Dvosmerni ANOVA podatkov o koncentraciji WIN55,212-2 je pokazal pomemben učinek koncentracije zdravila (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), ne pa tudi statusa ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) niti ni prišlo do pomembne interakcije (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Poleg tega v odsotnosti agonista ni vplival status ΔFosB na bazalno ali s forskolin-stimulirano aktivnost adenilil ciklaze. Aktivnost bazalne adenilil ciklaze je bila pri miših ΔFosB 491 ± 35 pmol / mg / min pri miših v primerjavi z 546 ± 44 pri miših ΔFosB (p = 0.346 po Studentovem t-testu). Prav tako je bila aktivnost adenilil ciklaze v prisotnosti 1 µM forskolina 2244 ± 163 pmol / mg / min pri ΔFosB pri miših v primerjavi z 2372 ± 138 pmol / mg / min pri ΔFosB pri miših (p = 0.555).

3.3. Vpliv ΔcJun na zaviranje adenilil ciklaze, ki jo posreduje opioid in kanabinoidni receptor \ t

Ker inducibilna transgenska ekspresija ΔFosB povečane inhibitorne transdukcije signala iz MOR in KOR v adenilil ciklazo v NAc, je bilo zanimivo ugotoviti, ali bi dominantni negativni inhibitor ΔFosB-posredovane transkripcije moduliral signalizacijo opioidnega receptorja na nasprotni način. Za obravnavo tega vprašanja smo inhibirali aktivnost forskolinom stimulirane adenilil ciklaze z DAMGO in U50,488 v membranah, pripravljenih iz NAc bitransgenskih miši, ki so pogojno izražali ΔcJun. Rezultati niso pokazali pomembnega učinka izražanja ΔcJun na inhibicijo aktivnosti adenilil ciklaze z MOR ali KOR (Slika 3). Dvosmerna ANOVA krivulj koncentracije učinka DAMGO je pokazala pomemben glavni učinek koncentracije DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), ne pa tudi ΔcJun statusa (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) in ni bilo pomembne interakcije (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Podobno ni bilo bistvene razlike v E_max ali ES₅₀ vrednosti med mišmi z ΔcJun na (E_max = 23.6 ± 2.6%; ES₅₀ = 304 ± 43 nM) ali ΔcJun off (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; ES₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Podobne rezultate smo opazili pri U50,488, tako da je dvosmerna ANOVA krivulj koncentracija-učinek pokazala pomemben učinek koncentracije (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), ne pa tudi ΔcJun statusa (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) in ni prišlo do pomembne interakcije (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Prav tako ni bilo bistvenih razlik v E_max ali ES₅₀ vrednosti med mišmi z ΔcJun na (E_max = 14.8 ± 2.9%; ES₅₀ = 211 ± 81 nM) ali izklop (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; ES₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Vpliv izražanja ΔcJun na inhibicijo aktivnosti adenilil ciklaze v NAc. Membrane iz ΔcJun-izražajočih (ΔcJun na) ali kontrolnih (ΔcJun off) miši so bile inkubirane v prisotnosti DAMGO (A), U50,488H (B) ali WIN55,212-2 ...

Izražanje ΔcJun tudi ni pomembno vplivalo na zaviranje adenilil ciklaze v NAc s strani kanabinoidnega agonista. Dvosmerna ANOVA krivulj koncentracije WIN55,212-2 je pokazala pomemben glavni učinek koncentracije WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), ne pa tudi genotipa (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) in ni bilo pomembne interakcije (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Prav tako ni bilo bistvenih razlik v WIN55,212-2 E_max vrednosti (13.0 ± 2.3% in 13.6 ± 0.9% inhibicije v ΔcJun v primerjavi z izločenimi miši, p = 0.821) in / ali EC₅₀ vrednosti (208 ± 120 nM in 417 ± 130 nM v ΔcJun v primerjavi z izločenimi miši, p = 0.270). Torej, čeprav je prišlo do rahlega trenda zmanjšanja moči WIN55,212-2 pri miših, ki izražajo ΔcJun, transgen ni bistveno spremenil inhibicije kanabinoidov adenilil ciklaze. Poleg tega ni bilo nobenega učinka ΔcJun statusa na bazalno ali forskolin-stimulirano aktivnost adenilil-ciklaze. Bazalna aktivnost adenilil ciklaze je bila 1095 ± 71 pmol / mg / min in 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) pri miših z vklopom oz. Aktivnost adenilil ciklaze, stimulirano z 1 µM forskolinom, je bila 4185 ± 293 pmol / mg / min v primerjavi z 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) pri miših z vklopom ali izklopom ΔcJun.

3.4. Diskusija

Rezultati te študije so pokazali, da je aktivacija M-proteina, ki jo posreduje MOR, in inhibicija adenilil ciklaze v NAc miši z inducibilno transgensko ekspresijo ΔFosB v dynorphin / D.₁R, ki vsebujejo nevrone. KOR-posredovana inhibicija aktivnosti adenilil ciklaze je bila prav tako povečana v NAc miši, ki izražajo ΔFosB, kar kaže, da ΔFosB regulira endogeni opioidni sistem v NAc. DAMGO E_max vrednost je bila večja za MOR-stimulirano [³⁵S] GTPyS vezava in njegova EC₅₀ Vrednost je bila nižja za inhibicijo adenilil ciklaze, v ΔFosB prekomerno izraženih miših v primerjavi s kontrolnimi mišmi. Te ugotovitve kažejo na možnost rezerve receptorja za efektorsko modulacijo, ne pa tudi za aktivacijo G-proteinov v preučenih pogojih analize. Ugotovitev, da je največja inhibicija adenilil ciklaze s KOR agonistom vplivala na izražanje ΔFosB, kaže na nizko receptorsko rezervo za KOR-posredovan odziv, skladen z nizkimi nivoji vezavnih mest KOR v mišjih možganih (Unterwald in sod., 1991). Nasprotno pa CB₁Aktivnost G-proteina, ki jo posreduje R, in zaviranje adilil ciklaze, nista vplivali na ekspresijo ΔFosB, \ t kažejo, da se sistemi opioidov in kanabinoidov razlikujejo po svojem odzivu na ΔFosB v teh NAc nevronih.

Učinek ΔFosB na signalizacijo, ki ga posreduje opioidni receptor, je v skladu z našim prejšnjim poročilom, da je izražanje ΔFosB v striatumu spremenilo akutne in kronične učinke morfina (Zachariou, et al., 2006). Ena ugotovitev te študije je bila, da so miši s transgensko ekspresijo ΔFosB v dynorphin / D₁R striatni nevroni so bili bolj občutljivi na morfij na mestu kondicioniranja kot kontrole. Poleg tega je bil ta učinek oponašan z virusno posredovano ekspresijo ΔFosB z mestno specifično injekcijo v NAc. Ta opažanja so skladna s trenutnimi rezultati, ki kažejo izboljšano MOR signalizacijo v NAc.

Predhodno smo identificirali kodiranje genov dynorphin kot tarčo ΔFosB in predlagal, da bi bil reducirani dynorphin skladen z izboljšanimi nagrajevalnimi lastnostmi morfina v ΔFosB bitransgenskih miših (Zachariou, et al., 2006). Predstavljeni rezultati kažejo, da je KOR-posredovana inhibicija adenilil ciklaze v NAc povečana pri miših, ki izražajo ΔFosB, kar bi lahko odražalo kompenzacijsko povečanje KOR občutljivosti po reduciranem dinorfinu. Prejšnje študije so pokazale, da je bila KOR v določenih regijah možganskih mišic prodynorfina, vključno z NAc, regulirana navzgor.Clarke in sod., 2003).

V nasprotju z ΔFosB, inducibilna transgenska ekspresija ΔcJun, prevladujočega negativnega okrnjenega mutanta ΔFosB vezavnega partnerja cJun, ni spremenila inhibicije adenilil ciklaze z MOR ali KOR agonisti. Ti rezultati kažejo, da bazalne ravni ekspresije ΔFosB, ki so relativno nizke, ne igrajo pomembne vloge pri ohranjanju signalizacije opioidnih receptorjev na tej ravni transdukcije signala v NAc. Dejstvo, da je bil pogojen nagibni učinek morfina v naši prejšnji študiji zmanjšan z izrazom ΔcJun (Zachariou, et al., 2006) predlaga, da je indukcija morfina ΔFosB med postopkom kondicioniranja pomembna pri uravnavanju vedenjskih odzivov na zdravilo ali da transkripcijski učinki ΔFosB, razen tistih, ki vplivajo na proksimalno signalizacijo z opioidnimi receptorji, lahko vplivajo na nagrado za opioide. V vsakem primeru rezultati te študije jasno kažejo, da: \ t če je izražanje ΔFosB povišano nad bazalnimi nivoji pri striatnem dynorphinu / D₁Nevroni, ki izražajo R, so močno povečali vezavo MOR in KOR na inhibicijo adenilil ciklaze v NAc.

Mehanizmi, s katerimi se MOR- in KOR-posredovana signalizacija krepita s prekomerno izražanjem ΔFosB, so nejasni, vendar smo prej pokazali, da so ravni MOR, ki jih ocenjuje [³H] naloksona se ne razlikujejo v NAc ΔFosB v primerjavi z izločenimi mišmi (Zachariou, et al., 2006). Ista študija je pokazala, da je Gα_iNivoji proteinov 1 in 2 v tej regiji niso vplivali na ekspresijo ΔFosB. Vendar pa so predhodne analize ekspresijskega niza genov pokazale, da je Gα_o mRNA je bila regulirana v NAc ΔFosB na miših (McClung in Nestler, 2003). V prihodnjih študijah bo zanimivo celovito proučiti učinek transgene ekspresije ΔFosB na ekspresijo podenote G-proteina na ravni beljakovin kot tudi na izražanje mnogih modulatorskih proteinov G-proteinov.

Zanimivo je, da izraz ΔFosB ni povečal CB₁R-posredovano signaliziranje v NAc. Možno je, da so spremembe v CB₁R signalizacija se pojavlja v diskretni populaciji nevronov, ki je zakrita v celotnem pripravku NAc. Na primer, dajanje Δ⁹- THC je znatno povzročil ΔFosB v jedru, vendar ne v lupini NAc (Perrotti, et al., 2008). Izkazalo se je, da je izziv z Δ⁹-THC po večkratnem dajanju A⁹-THC poveča sproščanje dopamina v jedru NAc, vendar zmanjšano sproščanje v lupini (Cadoni, et al., 2008). Pomembno je tudi omeniti, da linija 11A bitransgeničnih miši izraža ΔFosB samo v dynorphin / D.₁R pozitivni srednji živčni nevroni striatuma, vendar CB₁R so izraženi v oba dynorphin / D₁R in enkefalin / D₂R pozitivni striatni nevroni (Hohmann in Herkenham, 2000), kot tudi na terminalih kortikalnih aferentov (Robbe, et al., 2001). Ekspresija dominantnega negativnega regulatorja ΔFosB-posredovane transkripcije, ΔcJun, prav tako ni pomembno vplivala na signaliziranje kanabinoidnih receptorjev, čeprav je ΔcJun inducibno izražen v obeh D₁ in D₂ki vsebujejo populacije srednjih kosti v teh miših (\ tPeakman, et al., 2003). Možno je, da je bazalna ekspresija ΔFosB dovolj nizka, da ΔcJun ne bi vplival na receptorsko signalizacijo, kot kažejo rezultati z MOR in KOR. Možno je tudi, da CB₁Signalizacija R je zmerno povečana z bazalno ekspresijo ΔFosB, tako da je nadaljnje povečanje izražanja ΔFosB ali blokiranje njegovih dejanj z ΔcJun imelo le majhne učinke, ki niso dosegli ravni statistične pomembnosti. Posredna podpora za to razlago je razvidna iz primerjave WIN55,212-2 EC₅₀ vrednosti med miši, ki izražajo ΔcJun v primerjavi z ΔFosB. Razmerje med WIN55,212-2 EC₅₀ vrednost inhibicije adenilil ciklaze pri miših z inducirano ekspresijo ΔcJun na njegovo EC₅₀ Vrednost za aktivacijo G-proteinov pri miših z inducirano ekspresijo ΔFosB je bila 4.0, medtem ko je bilo isto razmerje v miših brez indukcije transgena 1.2.

Alternativno lahko kanabinoidi inducirajo izraz ΔFosB brez neposrednega učinka na CB₁R signalizacija. V tem scenariju lahko kanabinoidi modulirajo odzivnost na psihoaktivne učinke drugih zdravil prek ΔFosB-posredovane transkripcijske regulacije. jazdejstvo, dajanje Δ⁹-THC povzroči navzkrižno senzibilizacijo na opioide in amfetamin (\ tCadoni, et al., 2001, Lamarque et al., 2001), skladno s to hipotezo. Poleg tega so poročali, da je večkratno dajanje kanabinoidnega agonista CP55,940 povečalo MOR-posredovano aktivacijo G-proteinov v NAc, podobno kot pri miših, ki inducibno izražajo ΔFosB v tej študiji (Vigano, et al., 2005). Učinek izražanja ΔFosB na Δ⁹-TH-posredovano vedenje ni bilo ovrednoteno, vendar rezultati ne izključujejo interakcije. Rezultati tega in naše prejšnje študije (Zachariou, et al., 2006) kažejo ΔFosB-povzročene spremembe v MOR in KOR / dinorfinu v striatumu. Uspešni učinki Δ⁹-THC, izmerjen po preferencah na mestu, se ukinejo v miših z ničnim pomenom, medtem ko se delecija KOR oslabi Δ⁹-THC odvrne mesto in razkrije Δ⁹-THC nastavitev mesta (Ghozland, et al., 2002). Podobno je pogojena averzija do mesta Δ⁹-TKK v odsotnosti pro-dinorfina v primerjavi z divjimi mišmi (\ tZimmer in sod., 2001). Ti podatki kažejo, da je Δ⁹-THC je lahko bolj koristen po indukciji ΔFosB in posledični indukciji MOR-signalizacije z zmanjšanjem ekspresije dynorphina.

V povzetkuy, rezultati te študije so pokazali, da izražanje ΔFosB v D₁R / dynorphin pozitivni striatni nevroni izboljšajo MOR- in KOR-posredovano signalizacijo na ravni G-proteinov, ki zavirajo aktivnost adenilil ciklaze v NAc. Ta ugotovitev je skladna s študijami, ki so pokazale vlogo endogenega sistema opioidov pri nagradi (Trigo in sod., 2010) in zagotoviti možen mehanizem za učinke, ki jih posreduje ΔFosB na nagrado. Nasprotno pa CB₁R-posredovana signalizacija v NAc ni bila bistveno pogojena s striatno ekspresijo ΔFosB pri preučenih pogojih, čeprav so dodatne študije upravičene za določitev učinka indukcije ΔFosB na endokanabinoidni sistem.

Poudarki raziskav

MOR signalizacija je povečana v nucleus accumbens miši, ki izražajo ΔFosB
KOR inhibicija adenilil ciklaze se poveča tudi pri miših, ki izražajo ΔFosB
Izraz ΔFosB ne spremeni CB₁R signaliziranje v nucleus accumbens

Dodatni material

01

Kliknite tukaj za ogled.^{(45K, pdf)}

Priznanja

Avtorji se zahvaljujejo Hengjun He, Jordan Cox in Aaron Tomarchio za tehnično pomoč pri [...]³⁵S] GTPyS testi vezave. Ta študija je bila podprta z USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) in P01 DA08227 (EJN).

Opombe

Omejitev odgovornosti založnika: To je PDF datoteka neurejenega rokopisa, ki je bil sprejet za objavo. Kot storitev za naše stranke nudimo to zgodnjo različico rokopisa. Rokopis bo podvržen kopiranju, stavljanju in pregledu dobljenega dokaza, preden bo objavljen v končni obliki. Upoštevajte, da se med proizvodnim procesom lahko odkrijejo napake, ki bi lahko vplivale na vsebino, in vse pravne omejitve, ki veljajo za revijo.

Reference

Bozarth MA, Wise RA. Anatomsko različna področja opiatnih receptorjev posredujejo nagrado in fizično odvisnost. Znanost. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Hitra in občutljiva metoda za kvantifikacijo mikrogramskih količin beljakovin z uporabo načela vezave na beljakovinsko barvilo. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kronična delta⁹Zdravljenje s tetrahidrokanabinolom povzroči časovno odvisno izgubo G-proteinov, aktiviranih s kanabinoidnimi receptorji, v možganih. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Učinkovitost agonista kanabinoidnih receptorjev za spodbujanje [³⁵S] GTPyS vezava na podgane cerebelarne membrane korelira z agonistično induciranim zmanjšanjem afinitete za BDP. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Preobčutljivostna vedenjska reakcija po večkratni izpostavljenosti Delta 9-tetrahidrokanabinolu in navzkrižni preobčutljivosti z morfinom. Psihofarmakologija (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Vedenjska preobčutljivost za delta 9-tetrahidrokanabinol in navzkrižno senzibilizacijo z morfinom: diferencialne spremembe v prenosu dopamina ob pršiču in jedru dopamina. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgene živali z inducibilno ciljno ekspresijo gena v možganih. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Drugi kurirji, povezani z opioidnimi receptorji. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioidna in kanabinoidna receptorska inhibicija adenilil ciklaze v možganih. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa stimulacija opioidnih receptorjev³⁵S] GTPγS vezava v možganih prašičev: Pomanjkanje dokazov o kapi₂-selektivna aktivacija G-proteinov. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kuhinja I. Regija selektivne up-regulacije mikro-, delta- in kapa-opioidnih receptorjev, ne pa receptorjev 1, podobnih opioidnim receptorjem, v možganih enkefalina in dynorphin knockout miši. Nevroznanosti. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Steratalno specifična prekomerna ekspresija DeltaFosB-a povečuje spodbudo za kokain. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Endocannabinoid signalni sistem in možganska nagrada: poudarek na dopaminu. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Motivacijski učinki kanabinoidov posredujejo mu-opioidni in kapa-opioidni receptorji. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Karakterizacija in lokalizacija kanabinoidnih receptorjev v možganih podgan: kvantitativna avtoradiografska študija in vitro. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Lokalizacija kanabinoidne CB (1) receptorske mRNA v nevronskih subpopulacijah striatuma podgan: dvojna oznaka in situ hibridizacijska študija. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Mednarodna farmakološka zveza. XXVII. Razvrstitev kanabinoidnih receptorjev. Farmakološki pregled. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blokada učinkov dimljene marihuane s CB1-selektivnim antagonistom kanabinoidnih receptorjev SR141716. Arch. Psihiatrija. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Izražanje transkripcijskega faktorja deltaFosB v možganih nadzoruje občutljivost na kokain. Narava. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Nevroskopi odvisnosti. Nevropsihofarmakologija. 2010;35: 217-238. [PMC brez članka] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Kronično zdravljenje z Delta (9) -tetrahidrokanabinolom povečuje lokomotorni odziv na amfetamine in heroin. Posledice ranljivosti za zasvojenost z drogami. Neurofarmakologija. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Vključenost endokanabinoidnega sistema pri odvisnosti od drog. Trendi Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, RC Thompson, Akil H, Watson SJ. m-opioidne receptorske mRNA ekspresije v CNS podgane: primerjava z vezavo mu-receptorja. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, kuhinja I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Izguba analgezije, ki jo povzroča morfij, učinek nagrajevanja in odtegnitvenih simptomov pri miših brez gena z-opioidnim receptorjem. Narava. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Regulacija izražanja genov in kokainske nagrade s strani CREB in DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekularno stikalo za dolgoročno prilagoditev v možganih. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1 dopaminski receptorji modulirajo indukcijo deltaFosB v striatumu podgane po vmesnem dajanju morfina. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Pregled. Transkripcijski mehanizmi odvisnosti: vloga DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC brez članka] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: molekularni posrednik dolgoročne nevronske in vedenjske plastičnosti. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakološke študije regulacije kronične indukcije antigena, povezane s FOS, s kokainom v striatumu in nucleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducibilna ekspresija dominantnega negativnega mutanta c-Jun v transgenih miših, specifična za možgansko regijo, zmanjša občutljivost na kokain. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Različni vzorci indukcije DeltaFosB v možganih zaradi zlorabe drog. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC brez članka] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokalizacija in mehanizmi delovanja kanabinoidnih receptorjev na glutamatergičnih sinapsah mišjega jedra accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Analiza adenilat ciklaze. Adv. Ciklični nukleotidni rez. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Stimuliran z opioidnimi receptorji³⁵S] GTPyS vezava v podganah talamusa in kultiviranih celičnih linijah: mehanizmi transdukcije signala, ki so osnova agonistične učinkovitosti. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Endogeni opioidni sistem: skupni substrat pri zasvojenosti z drogami. Od alkohola odvisni. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Nevroanatomska lokalizacija opioidnih receptorjev κ1 in κ2 v možganih podgan in morskih prašičkov. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blokada opioatnih receptorjev nucleus accumbens zmanjša intravenozno nagrado heroina pri podganah. Psihofarmakologija (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molekularni mehanizmi, vključeni v asimetrično interakcijo med kanabinoidnimi in opioidnimi sistemi. Psihofarmakologija (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Bistvena vloga za DeltaFosB v nucleus accumbens v delovanju morfina. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Dva možganska mesta za kanabinoidno nagrado. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktiviranje kloniranega humanega kappa opioidnega receptorja s strani agonistov poveča vezavo [35S] GTPyS na membrane: določanje moči in učinkovitosti ligandov. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Odsotnost disforičnih učinkov delta-9-tetrahidrokanabinola pri miših z pomanjkanjem dinorfina. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Povečana smrtnost, hipoaktivnost in hipoalgezija v kanabinoidnih CB1 receptorjih za izničenje. Proc. Natl. Acad. Sci. ZDA 1999;96: 5780-5785. [PMC brez članka] [PubMed]