Prefrontalni kortikalni krog za vedenje, povezano z depresijo in anksioznostjo, posredovano z holekistokininom: vloga ΔFosB (2014)

Minimalizem

Zmanjšana nevronska aktivnost medialnega prefrontalnega korteksa (mPFC) je povezana z družabno depresijo in anksioznim vedenjem, ki ga povzročajo socialni poraz pri miših. Vendar pa molekularni mehanizmi, na katerih temelji zmanjšana aktivnost mPFC in njena vloga prodepresorja, še vedno niso znani. Tukaj smo pokazali, da indukcija transkripcijskega faktorja ΔFosB v mPFC, specifično v predlimbnem (PrL) območju, posreduje dovzetnost za stres. Indukcija ΔFosB v PrL se je pojavila selektivno pri občutljivih miših po kroničnem socialnem poraznem stresu in čezmerni ekspresiji ΔFosB v tej regiji, ne pa tudi v bližnjem infralimbičnem (IL) območju, povečana občutljivost na stres. ΔFosB je povzročil te učinke delno z indukcijo kolecistokininskega (CCK) -B receptorja: blokada CCKB v mPFC inducira prožni fenotip, medtem ko dajanje CCK v mPFC posnema anksiogene in depresivne učinke socialnega stresa. Pred tem smo ugotovili, da optogenetska stimulacija mPFC nevronov pri občutljivih miših obrne več vedenjskih nepravilnosti, ki jih vidimo po kroničnem socialnem poraznem stresu. Zato smo domnevali, da bi optogenetska stimulacija kortikalnih projekcij reševala patološke učinke CCK v mPFC. Po infuziji CCK v mPFC smo optogenetsko stimulirali projekcije mPFC na bazolateral amigdale ali nucleus accumbens, dve subkortikalni strukturi, ki sta vključeni v regulacijo razpoloženja. Stimulacija kortikoamigdalne projekcije je blokirala anksiogeni učinek CCK, čeprav ni bilo opaziti nobenega učinka na druge simptome socialnega poraza. Nasprotno pa je stimulacija projekcij kortikokumbumbov obrnila družbeno izogibanje, ki ga je povzročil KKK, in pomanjkanje prednosti saharoze, ne pa tudi anksiogenih podobnih učinkov. Ti rezultati skupaj kažejo, da so socialno-stresni vedenjski primanjkljaji delno posredovani z molekularnimi prilagoditvami v mPFC, ki vključujejo ΔFosB in CCK skozi kortikalne projekcije za različne subkortikalne tarče.s.

ključne besede: akumbens, amigdala, anksioznost, CCK, depresija, mPFC

Predstavitev

Nekaj ​​anatomsko in funkcionalno medsebojno povezanih krajev limbičnih možganov, vključno z medialno prefrontalno skorjo (mPFC), hipokampusom, amigdalo in nukleusom accumbens (NAc), so vpleteni v posredovanje ključnih simptomov depresije in anksioznosti (; ; ; ; , ; ; ). Na primer, odsotnost kortikalne povratne informacije za amigdalo je povezana z disforičnimi čustvi in ​​se po uspešnem zdravljenju vrne na normalno raven. Antidepresivni učinki globoke možganske stimulacije subgenualnega cingularnega korteksa, območja mPFC, so povezani s ponovno vzpostavitvijo tako kortikalne kot subkortikalne možganske aktivnosti na normalno raven (; ). Podobno je globalna možganska stimulacija NAc antidepresivna in anksiolitična ter korelira s spremenjenim metabolizmom v NAc, amigdali in mPFC (; ; ). Ti podatki podpirajo hipotezo o nevronskih mrežah o motnjah razpoloženja, pri katerih zdravljenje z antidepresivi, ne glede na mehanizme, normalizira aktivnost tako v podaktivnih kortikalnih kot v nadaktivnih subkortikalnih vezjih (; ; ; ; ; ).

Živalski modeli, ki vključujejo kronično izpostavljenost fizičnim ali psihičnim stresom, zmanjšujejo strukturo in funkcijo nevronov v mPFC (), amigdala (), hipokampus () in NAc (; ). Kronični socialni porazni stres, etološko veljaven model depresije (), zmanjša nevronsko aktivnost mPFC, kot izhaja iz zmanjšane ekspresije Zif268 in c-Fos (; ). Poleg tega optogenetska stimulacija mPFC obrne te primanjkljaje in ima učinke, podobne antidepresivom (), ki potrjuje pomen mPFC pri pojavih, povezanih z razpoloženjem. Tglodalec mPFC, kot pri primatih, nadzira čustveno obnašanje delno s projekcijami na bazolateralno amigdalo (BLA) in NAc (; ; ). Kljub temu molekularni mehanizmi, ki posredujejo to vlogo mPFC, ostajajo neznani.

Ta študija se je najprej osredotočila na ΔFosB, stabilen transkripcijski faktor, ki se v NAc inducira s kroničnim socialnim poraznim stresom, kjer nasprotuje občutljivosti na stres. (). Opravili smo kartiranje ΔFosB indukcije po možganih po poraznem stresu in ugotovili, da so podobni prejšnjim študijam (; ; ), robustna indukcija v mPFC. Presenetljivo smo ugotovili, da takšna indukcija ΔFosB v mPFC spodbuja občutljivost na stres. Receptor kolecistokinina (CCK) -B smo identificirali kot molekularno tarčo ΔFosB v mPFC, kjer je CCkergična nevrotransmisija vpletena v anksiogene in depresogene učinke socialnega stresa (, ). Ugotovili smo, da je aktivnost CCK v mPFC potrebna in zadostna za učinke socialnega stresa, podobne anksioznosti in depresiji. Poleg tega z uporabo optogenetskih pristopov prikažemo specifične ukrepe CCK v podskupinah mPFC: CCK v projekcijah mPFC-BLA posreduje simptome anksioznosti, medtem ko CCK v projekcijah mPFC-NAc posreduje simptome depresije.

Materiali in metode

Eksperiment 1: preslikava indukcije ΔFosB v možgansko celico s kroničnim socialnim poraznim stresom.

Moške samice C57BL / 6J, stare osem tednov, so bile podvržene kroničnemu socialnemu poraznemu stresu za 10 zaporednih dni, kot je opisano prej (; ; ) (glej Tabela 1; Slika 1A). Na kratko, vsaka miška je bila izpostavljena neznani, agresivni moški CD1 upokojeni vzrejni miški za 5 min na dan. Po neposredni interakciji z agresorjem CD1 (5 min) so bile živali nameščene v sosednji oddelek iste kletke za naslednji 24 h s senzoričnim, vendar ne fizičnim, kontaktom. Kontrolne živali so bile nameščene v ekvivalentnih kletkah, vendar s člani istega seva. Preskusi socialnih interakcij so bili izvedeni 24 h po zadnjem dnevu poraza. Družbeno izogibanje neznani moški miši CD1 je bilo ocenjeno v skladu z objavljenimi protokoli. Izmerili smo čas, ki smo ga preživeli v "interakcijski coni" (koridor 8-cm, ki obdaja kletko). Ločevanje poraznih miši v občutljive in prožne subpopulacije je bilo izvedeno, kot je opisano prej (; ). Ker večina kontrolnih miši porabi več časa za interakcijo z družbenim ciljem kot s praznim ohišjem, se kot mejna vrednost uporabi razmerje medsebojnega delovanja 100 (enak čas, preživet v coni interakcije v prisotnosti in odsotnosti socialnega cilja): miši z ocenami <100 so označene kot "občutljive", tiste z ocenami ≥ 100 pa kot "odporne". Obsežne vedenjske, biokemijske in elektrofiziološke analize potrjujejo veljavnost teh različnih dovzetnih in prožnih subpopulacij (; ; ).

Tabela 1.  

Povprečno število (± SEM) FosB-imunoreaktivnih jeder na mm2 v možganskih območjih kontrolne, občutljive in prožne miši 24 h po kroničnem (10 d) socialnem poraznem stresu
Slika 1.  

Indukcija ΔFosB v mPFC spodbuja dovzetnost za stres. A, Reprezentativne fotomikrografije ΔFosB imunohistokemije v mPFC 24 h po zadnji 10 socialni porazni epizodi. BIndukcija ΔFosB se pri GABAergic ne pojavlja ...

Takoj po testu socialne interakcije so miši anestezirali in perfundirali intrakardialno z 4% paraformaldehidom / PBS. Število celic za ΔFosB+ nevroni v NAc izvedeni, kot je opisano prej (). Možgani so bili krioprotektirani z 30% saharozo in koronalni odseki (30 μm) so bili razrezani na zamrzovalni mikrotom in obdelani za imunohistokemijo. Prosto plavajoči deli so bili predhodno inkubirani v blokirnem pufru, ki je vseboval 0.3% Triton in 3% normalnega kozjega seruma. ΔFosB smo zaznali z uporabo kunčjih poliklonskih protiteles, vzgojenih proti N-terminalnemu delu proteina (1 / 1000 Biotehnologija Santa Cruz, katalog # sc-48) v istem pufru, nato pa obdelali z biotiniliranimi kozjimi anti-kunčjimi IgG protitelesi in avidin-biotinom. metoda s kompleksom peroksidaze z DAB kot substrat (Vector Laboratories). Čas inkubacije diaminobenzidina je bil pri vseh pogojih (100 s) konstanten. Rezine so bile nameščene, dehidrirane in pokrite. ΔFosB-imunopozitivne celice so pokazale specifično rjavo obarvanje v jedru in so bile z mikroskopom (povečava 20 ×) kvantificirane z opazovalcem, slepim za pogoje zdravljenja. Za kvantifikacijo smo na mišjo izbrali tri izbrane možganske sekcije, ki so zajemale vsako možgansko področje. Anatomsko ločevanje vsake možganske regije smo izvedli s primerjavo odseka z atlasom Paxinos mišjih možganov. Pogoji za imunohistokemijo so bili optimizirani za zmanjšanje ravni ozadja na minimum, kar omogoča pravilno identifikacijo ΔFosB-pozitivnih celic. Povprečne vrednosti so bile izračunane za vsako žival in obravnavane kot individualno opazovanje za statistično analizo. Čeprav uporabljena protitelesa prepoznajo ΔFosB in FosB v polni dolžini, vemo, da s pomočjo Western blot-a ugotovimo le ΔFosB pod preučevanimi pogoji (; ).

Poskus 2: identifikacija ΔFosB nevronskega fenotipa, induciranega s socialnim stresom, v mPFC.

Za proučevanje izražanja ΔFosB v kortikalnih GABAergičnih nevronih smo uporabili tkiva miši GAD2-tdTomato, ki so bili izpostavljeni kroničnemu socialnemu poraznemu stresu in obarvali za ΔFosB, kot je opisano zgoraj (glej Slika 1B). Miševi so nastali z vzrejo miši GAD2-Cre (Gad2tm2 (cre) Zjh / J; JAX številka 010802) () z (B6.Cg-Gt (ROSA) 26Sortm9 (CAG-tdTomato) Hze / J; številka zaloge JAX 007908), ki prenašajo td-tomato (RFP varianta) z nadzorovanim pretokom.

Eksperiment 3: vedenjski učinki prekomerne ekspresije ΔFosB v predhodni (PrL) in infralimbični (IL) skorji.

Stereotaksična kirurgija je bila izvedena na odraslih mišjih samcih (8 tednov) za injiciranje HSV-ΔFosB-GFP ali HSV-GFP v PrL ali IL regije mPFC. Na kratko, miši smo anestezirali z mešanico ketamina (10 mg / kg) in ksilazina (1 mg / kg) in uporabili naslednje stereotaksične koordinate za virusno dostavo za PrL: 1.8 mm (anterior / posterior), 0.65 mm (bočno) ), -2.2 mm (hrbtna / ventralna); in za IL: 1.9 mm (anterior / posterior), 0.75 mm (stransko), -2.8 mm (dorzalno / ventralno) pod kotom 10 ° od vzdolžne osi (glede na bregmo). Skupaj 0.5 μl očiščenega virusa je bil dostavljen dvostransko v obdobju 5 min (0.1 μl / min), ki mu je sledilo 5 min počitka. Mesta z injekcijo virusa so bila potrjena s standardnimi histološkimi metodami (glej Slika 1C). Čeprav ni mogoče selektivno ciljati na PrL proti IL v miših s popolno natančnostjo, so podatki v Slika 1C ponazoriti, da je zelo verjetno, da se osredotoča na eno ali drugo regijo. Različni učinki vedenja, ki so bili doseženi z usmerjanjem v obe regiji (glej rezultate), utemeljujejo ta pristop. Prva serija miši je bila uporabljena izključno v submaksimalnem socialnem poraznem eksperimentu (glej Slika 1D). Tri dni po operaciji so miši podvrženi dvema zaporednima porazoma na isti dan in nato kasneje testirani na socialno interakcijo 24 h. Ta submaksimalni porazni postopek je bil predhodno potrjen, da bi odkrili fenotipe prepozitivnosti po genetskih manipulacijah (; ).

Druga serija miši je bila uporabljena za testiranje bazalnega anksioznega in depresivnega vedenja (glej Slika 1E – J). Dan po operaciji smo miši habituirali z 1% (m / v) raztopino saharoze. Naslednji dan so miši izbirali med plastenko za vodo in steklenico z raztopino saharoze 1%, ki je bila dnevno zamenjana. Vnos raztopine saharoze za 24 h je bil izmerjen četrti in peti dan po operaciji in izražen kot odstotek celotne količine zaužite tekočine. Miši so bile testirane na odprtem polju (dan 3), povišanem plus labirintu (dan 4), socialni interakciji (dan 5 zjutraj) in prisilnim plavanjem (dan 5 popoldan) na podlagi objavljenih protokolov (). Ugotovili smo, da s tem vrstnim redom testiranja prejšnji rezultati ne vplivajo na rezultate pri poznejših testih (). Aktivnost miši na odprtem polju je bila zabeležena za 5 min z uporabo sistema za videotracking (Ethovision) pri pogojih rdeče svetlobe. Dvignjen plus labirint je sestavljen iz dveh ravnih vzletnih stez, ki se postavljata 60 cm nad tlemi in razdeljene na dve odprti in dve zaprti roki. Miši smo posamično postavili v središče labirinta in jim dovolili, da svobodno raziščejo vsako roko v obdobju 5 min. V testih odprtega polja in povišanega plus labirinta je bil čas, ki smo ga preživeli v središču in odprtih krakih, uporabili kot inverzni indeks odzivov, povezanih z anksioznostjo. Enodnevni test prisilnega plavanja je bil izveden v obdobju 5 min. Povečan čas nepremičnosti med prisilnim plavalnim testom smo interpretirali kot prodepresijsko vedenje. Ta danski test 1 se je obširno uporabljal pri miših in potrdil kot merilo napovedne veljavnosti, saj antidepresivna zdravila zmanjšajo čas neobčutljivosti.

Končno je bila ločeni skupini miši injiciran intra-mOFC s HSV-ΔFosB in testiran na socialno interakcijo po submaksimalnem porazu (glej Slika 1K).

HSV vektorje smo dobili od Rachael Neve (Massachusetts Institute of Technology). Zanimivi geni (ΔFosB in GFP) so pod promotorjem CMV. Ti vektorji so bili obsežno potrjeni v predhodnih publikacijah (npr. ).

Eksperiment 4: učinki kroničnega socialnega stresa na nivoje CCKB receptorjev v mPFC.

Po 24 h po testu socialne interakcije so se možgani hitro odstranili in serijsko rezali, mPFC pa se je hitro razrezal in zamrznil na suhem ledu (glej Slika 2A,B). Izolacijo RNA, qPCR in analizo podatkov smo izvedli, kot je opisano prej; ). RNA smo izolirali s TriZol reagentom (Invitrogen) in nadalje očistili z RNAeasy mikro-kompleti iz QIAGEN. Vsi vzorci RNA so bili določeni tako, da imajo vrednosti 260 / 280 in 260 / 230 ≥1.8. Reverzna transkripcija je bila izvedena z uporabo iScript (Bio-Rad). qPCR z uporabo SYBR Green (Quanta) smo izvedli s PCI sistemom Applied Biosystems 7900HT RT z naslednjimi parametri cikla: 2 min pri 95 ° C; 40 cikli 95 ° C za 15 s, 59 ° C za 30 s in 72 ° C za 33 s; in stopenjsko segrevanje na 95 ° C, da se tvorijo disociacijske krivulje za potrditev posameznih produktov PCR. Podatke smo analizirali s primerjavo Ct vrednosti pogojev zdravljenja (občutljive ali prožne proti kontrolnim mišam, ali HSV-ΔFosB proti HSV-GFP) z ΔΔCt metoda (). qPCR primerji so naslednji: ΔFosB, naprej, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT in obratno, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG; CCKB, naprej, ACCCTTTATGCGGTGATCTTTC in vzvratno, ATGAGCACGTTTCCGCCAA; CCK, naprej, AGCGCGATACATCCAGCAG in vzvratno, ACGATGGGTATTCGTAGTCCTC; GAPDH, naprej, AGGTCGGTGTGAACGGATTTG in obratno, TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA.

Slika 2.  

Blokada receptorja CCKB ima učinek, podoben antidepresivu. A, Družbeni poraz zmanjša nivoje CCKB receptorjev v mPFC samo pri prožnih miših (n = 8 – 10). *p <0.05 v primerjavi s kontrolo (enosmerna ANOVA). **p <0.05 ...
Poskus 5: učinki ΔFosB na nivoje CCKB receptorja in cFos.

Miši smo injicirali intra-PrL s HSV-ΔFosB. Pri 72 h po operaciji, na vrhuncu prekomerne ekspresije virusa, so mesta injiciranja razrezali pod fluorescenčnim mikroskopom (glejte Slika 2C). Izolacijo RNA, qPCR in analizo podatkov smo izvedli, kot je opisano zgoraj. qPCR primerji so naslednji: c-fos, naprej, AATCCGAAGGGAACGGAATAAGA in obratno, TGCAACGCAGACTTCTCATCT.

Eksperiment 6: učinki blokade ΔFosB na stresno inducirane receptorje CCKB in prožnost.

Odraslim mišim smo injicirali dvostransko s HSV-GFP ali HSV-ΔJunD v PrL (glej Slika 2D – F). ΔJunD je N-terminalni skrajšani mutant JunD, ki deluje kot prevladujoče negativni antagonist ΔFosB. Miševi so dvakrat dnevno podvrženi socialnemu porazu za 5 d. Ta pospešeni socialni porazni protokol, skrajšan, da sovpada z obdobjem maksimalne transgenske ekspresije HSV, je bil uporabljen prej in dokazano, da povzroča maksimalne ravni socialnega izogibanja (). V 24 urah po zadnji stresni epizodi so miši odsekali glave brez anestezije, da bi se izognili učinkom anestetikov na raven nevronskih beljakovin. Okuženo tkivo smo odstranili z zaviralci proteaze (Roche) in fosfataze (Sigma-Aldrich), ki vsebujejo PBS, s pomočjo 15-metrskega udarca in takoj zamrznili na suhem ledu. Vzorci so bili homogenizirani z lahkim ultrazvočnim razbijanjem v modificiranem pufru RIPA: 10 mm Tris baze, 150 mm natrijevega klorida, 1 mm EDTA, 0.1% SDS, 1% Triton X-100, 1% natrijev deoksiholat, pH 7.4, in zaviralci proteaze in fosfataze kot zgoraj. Po dodajanju Laemmlijevega pufra so bile beljakovine ločene na 4–15% poliakrilamidnih gradientnih gelih (Criterion System; Bio-Rad), Western blotiranje pa je bilo izvedeno s sistemom Odyssey (Li-Cor) v skladu s protokoli proizvajalca. Membrane smo poprali s protitelesom proti receptorju CCKB (1/1000, Acris, katalog # AP01421PU-N). Drugo skupino miši so injicirali z AAV-ΔJunD ali AAV-GFP v PrL in nato, pet tednov po operaciji, da se omogoči največja ekspresija transgena, miši predložijo v protokol submaksimalnega poraza. Testirani so bili na socialno interakcijo 5 ur po zadnjem porazu.

Eksperiment 7: učinki intra-mPFC CI-988, antagonista CCKB, na socialno izogibanje socialnemu stresu in anhedonijo.

Bilateralna kanila (1.0 mm kanila do kanile, 1.8 mm spredaj, injektor-2.2 mm hrbtna / ventralna), usmerjena proti mPFC, so bili vsadeni v občutljive miši (glej Slika 2G,H). Teden dni po operaciji je bil 10 ng CI-988 infundiran neposredno v mPFC, usmerjen predvsem v PrL. Miši so bile nato preizkušene za njihovo socialno interakcijo. Za preostali 24 h so merili prednostno saharozo. CI-988 (Tocris Bioscience) smo raztopili v fiziološki raztopini, alikvotni in zamrznjeni. Končno razredčenje smo pripravili na dan poskusa. Dodatni poskus je bil izveden pri občutljivih miših s CI-988, intraperitonealno (2 mg / kg) 30 min pred preskusom socialne interakcije.

Eksperiment 8: učinki agonista CCKB na dovzetnost za družbeni stres in preobrat z optogenetsko stimulacijo projekcij mPFC na BLA ali NAc.

AAV-CaMKII-ChR2-EYFP ali AAV-CaMKII-EYFP so bili vbrizgani v desni mPFC, ponovno usmerjeni predvsem na PrL (glej Slika 3A – G). Pet tednov kasneje so se optična vlakna vsadila v desno NAc (1.4 anterior / posterior, 2.6 lateralno, -4.7 hrbtna / ventralna pod kotom 25 ° od sredinske črte) ali BLA (−1.6 anterior / posterior, 3.1 lateralno, −4.7 dorsal / ventralno brez kota od vzdolžne osi). Med istim kirurškim postopkom smo v mPFC vsadili tudi dvostransko kanilo (glej zgoraj). Na lobanjo so bile pritrjene kanile in vlakna z zobnim cementom. Mišem smo nato dovolili, da se 1 teden okrepi pred začetkom vedenjskih poskusov. Miši so bile izpostavljene submaksimalnemu porazu, nato so kasneje testirali 24 h za socialno interakcijo, neposredno sledili so povišanemu plus labirintu in preferencam saharoze za preostali 24 h. Pri 30 min pred preskusom socialne interakcije je bila polovica miši infundirana s CCK-8 (10 ng) v mPFC, medtem ko je druga polovica dobila vehikel (fiziološka raztopina). Miši smo testirali v parih (miška, ki je bila zdravljena z nosilcem in CCK-8, z AAV-GFP ali AAV-ChR2). CCK-8 (Sigma) smo raztopili v fiziološki raztopini, alikvotni in zamrznjeni. Končno razredčenje smo pripravili na dan poskusa.

Slika 3.  

Občutljivost na stres, ki jo povzroča CCK-8, je odvisna od specifičnih projekcij skorje. APri 24 h po submaksimalnem socialnem porazu in 30 min po infuziji CCK-8 so bile projekcijske regije mPFC lasersko stimulirane med testom za socialno interakcijo. Infuzija CCK-8 ...

Optične stimulacije so bile izvedene v skladu z objavljenimi protokoli (). Optična vlakna (Thor Laboratories) so bila kronično vsajena in povezana preko adapterja FC / PC z modro lasersko diodo 473 nm (Crystal Lasers, BCL-473-050-M). Za ustvarjanje impulzov modre svetlobe smo uporabili stimulator (Agilent, #33220A). Med vsemi stimulacijami so bile 40 ms zaporedje impulzov modre svetlobe 100 Hz (širina 9.9 ms) impulzov svetlobe dostavljene vsakemu 3 s terminalnim regijam v BLA ali NAc samo v času trajanja testa socialne interakcije, da bi posnemali burst-like vzorec skorje dejavnosti. Intenzivnost svetlobe z optičnimi vlakni je bila preverjena pred vsako uporabo z uporabo svetlobnega senzorja (Thor Laboratories, S130A) in intenziteta svetlobe je bila 15 mW. Ta protokol za stimulacijo, ki je bil predhodno validiran elektrofiziološko (), niso sprožili napadov na podlagi vedenjskih opazovanj in odsotnosti izražanja c-Fos zunaj optogenetsko stimuliranih regij ().

Eksperiment 9: učinki agonista CCKB na nevronsko aktivnost mPFC, merjeno z ravnmi c-Fos mRNA.

Na odrasle miši smo implantirali bilateralne kanile, ki so bile usmerjene v mPFC (glej Slika 3H). Po tednu počitka so miši podvrženi submaksimalnemu porazu in kasneje infundirani s CCK-8 24 h. mPFC lovilce smo odvzeli 30 min po infuziji zdravila in vzorce pripravili za analizo mRNA, kot je opisano zgoraj.

Stanovanja za živali.

Uporabili smo moške miši C57BL / 6J, stare 8 tednov (The Jackson Laboratory). Vse miši so bile navajene v obratu za živali vsaj 1 teden pred eksperimentalnimi manipulacijami in so bile vzdrževane pri 23 ° C – 25 ° C na ciklu svetlobe / temne 12 h (luči pri 7: 00 AM) z ad libitum dostop do hrane in vode. Poskusi so bili izvedeni v skladu s smernicami Društva za nevroznanost in Odbora za institucionalno oskrbo živali in uporabo na medicinski šoli Icahn na gori Sinaj.

Statistične analize.

Prikazani podatki so izraženi kot povprečje ± SEM (prikazano kot vrstice napak). Za primerjavo sredstev med kontrolnimi, občutljivimi in odpornimi mišmi pri imunohistokemičnih, biokemičnih in vedenjskih analizah so bile uporabljene enosmerne ANOVA. Za primerjavo sredstev med GFP-kontrolami in prekomerno ekspresijo ΔFosB v PrL ali IL v odprtem polju, povišanem plus labirintu, prisilnem plavanju in preferenčnih preizkusih saharoze so uporabili enosmerne ANOVA. Za primerjavo sredstev med GFP-kontrolami, ΔFosB-PrL in ΔFosB-IL v testu socialnih interakcij smo uporabili dvosmerne ANOVA. Za primerjavo učinkov CCK-8 z ali brez optogenetske stimulacije v vseh vedenjskih poskusih so bili uporabljeni dvosmerni ANOVA, kot tudi učinek prekomerne ekspresije ΔFosB ali infuzije CI-988 na socialno izogibanje. Če je primerno, naknadnega Analize so bile izvedene z uporabo Bonferronija naknadnega preskus. Študentska t testi so bili uporabljeni za primerjavo sredstev za učinek infuzije CI-988 na preferenco saharoze in teste prisilnega plavanja in na CCK-8 na c-Fos mRNA. Razlike med eksperimentalnimi pogoji so bile ocenjene kot statistično pomembne p ≤ 0.05.

Rezultati

Brain-wide kartiranje ΔFosB indukcije s kroničnim socialnim poraznim stresom

Najprej smo raziskali indukcijo ΔFosB z imunohistokemijo v kontrolnih, občutljivih in odpornih miših, po poteku kroničnega (10 d) socialnega poraznega stresa, s poudarkom na predelu možganov in srednjih možganov, ki so bile prej vključene v odziv na stres. Živali smo analizirali 24 h po zadnji porazni epizodi. Kronični socialni stres inducira ΔFosB v številnih možganskih območjih z različnimi vzorci, ki se opazijo med prožnimi in občutljivimi mišmi. Kot je prikazano v Tabela 1 in Slika 1AIL, BLA, dentatni gyrus hipokampusa, dorzalni striatum in NAc jedro so pokazali prednostno aktivacijo pri elastičnih miših; taki rezultati v NAc so skladni z objavljenimi ugotovitvami (). V presenetljivem nasprotju so občutljive miši pokazale večjo indukcijo v PrL, lateralnem septumu in posteljnem jedru strie terminalis. Več regij možganov je pokazalo primerljivo indukcijo ΔFosB v občutljivih in prožnih miših; med njimi sta orbitofrontalna skorja (OFC, drugo območje PFC), lupina NAc, dorzalni rafe in perikvekulozna siva (PAG).

Za identifikacijo nevronskega podtipa, ki prikazuje indukcijo ΔFosB v kortikalnih regijah, so bile miši GAD2-tdTomato izpostavljene kroničnemu socialnemu poraznemu stresu. Imunoreaktivnost ΔFosB pri občutljivih miših je bila nezaznavna v GABAergičnih nevronih (Slika 1B), ki potrjuje predhodne ugotovitve specifične indukcije ΔFosB v kortikalnih piramidnih nevronih po drugih oblikah kroničnega stresa (). Pri neokuženih kontrolnih miših, \ t izhodiščne vrednosti ΔFosB v regijah možganov so bile podobne tistim, ki so bile \ t, ) z veliko višjimi bazalnimi koncentracijami v NAc in hrbtnem striatumu v primerjavi z drugimi regijami, z izjemo zobate giruse, ki je pokazala ravni, primerljive s tistimi v striatnih regijah. (Tabela 1).

ΔFosB v mPFC spodbuja dovzetnost za stres

Da bi sledili tem ugotovitvam, smo se osredotočili na PrL, ker smo že prej pokazali, da je optogenetska aktivacija tega območja povzročila antidepresivne učinke v socialni paradigmi porazov (). Za testiranje funkcionalnih posledic indukcije ΔFosB v tej možganski regiji smo viralno prekomerno izražali ΔFosB v PrL kontrolnih miši (Slika 1C) in jih izpostavil submaksimalnemu poteku socialnega poraznega stresa, ki pri normalnih živalih ne povzroča socialnega izogibanja. Miševi, ki prekomerno izražajo ΔFosB v PrL, so bili bolj dovzetni za socialni poraz kot kontrolne miši, ki so jih injicirali GFP, ker so pokazali družbeno izogibanje po submaksimalnem socialnem porazu (interakcija, F(2,38) = 2.847, p > 0.05, glavni učinek virusa, F(2,38) = 6.013, p <0.05; Bonferroni post test t = 2.447, p <0.05) (Slika 1D). Te miši so pokazale tudi povečano nepokretnost v testu prisilnega plavanja 1 dan (F(2,31) = 6.448, p <0.05; Bonferroni post test t = 3.518, p <0.05) (Slika 1E), učinek, ki je nasproten tistemu, ki ga proizvajajo antidepresivi. V nasprotju s tem, prekomerna ekspresija ΔFosB v PrL ni spremenila več izhodiščnih mer, podobnih anksioznemu vedenju, preferencam saharoze, socialni interakciji ali lokomotorni aktivnosti (Slika 1F – J). Te ugotovitve skupaj podpirajo hipotezo, da selektivna indukcija ΔFosB v prl občutljivih miši prispeva k ranljivosti za stres in njegove škodljive posledice. V nasprotju s tem, prekomerna ekspresija ΔFosB v drugi regiji mPFC, IL, ni vplivala na izhodiščno čustveno vedenje ali na odzive na socialni porazni stres (Slika 1D – J), ker se je prekomerna ekspresija ΔFosB v medialnem OFC usmerila k spodbujanju odpornosti na kronični socialni poraz, čeprav ta učinek ni dosegel statistične pomembnosti; (interakcija, F(1,31) = 1.741, p > 0.05, glavni učinek časa interakcije, F(1,31) = 14.170, p <0.05; Bonferroni post test t = 3.860, p <0.05 v skupini GFP; t = 1.960, p <0.05 v skupini ΔFosB; učinek virusa, t = 2.447, p <0.05) (Slika 1K).

ΔFosB spodbuja indukcijo CCKB v mPFC

Velika količina dokazov podpira idejo, da ima CCK, ki je obilen nevropeptid v možganih, bistveno vlogo pri nevrobioloških mehanizmih stresa in anksioznosti. (). Zlasti sproščanje CCK v mPFC med socialnim stresom pri podganah je povezano z vedenjem, povezanim z anksioznostjo (). Čeprav je vpletenost CCK v depresijo pri ljudeh še vedno nejasna, nedavni dokazi kažejo na njeno vlogo pri socialnem porazu, povzročenem z depresijo, podobno kot pri podganah (). Zato smo domnevali, da lahko spremembe ravni CCK ali CCKB (znane tudi kot CCK2) receptor v mPFC prispevajo k razlikam med občutljivimi in odpornimi mišmi. Pri 48 h po končni porazni epizodi so se ravni mRNA CCKB zmanjšale samo v mPFC odpornih miši (F(2,18) = 8.084, p <0.01; Bonferroni post test, t = 3.104, p <0.05 vs nadzor; t = 5.113, p <0.01 v primerjavi z občutljivimi) (Slika 2A). Pri koncentracijah mRNA CCK ni bilo opaziti razlik v občutljivih ali prožnih miših (podatki niso prikazani). Opazili smo povečanje ΔFosB mRNA samo pri občutljivih miših, ki so skladne z zgoraj navedenimi podatki o beljakovinah (\ tF(2,18) = 5.246, p <0.01; Bonferroni post test t = 3.336, p <0.05 vs občutljiv; t Test t(12) = 2.138, p <0.05 vs nadzor) (Slika 2B). Ker ΔFosB ureja prepis številnih genov (; ), smo upoštevali možnost, da bi lahko reguliral izražanje mRNA CCKB. Da bi rešili to vprašanje, smo najprej prekomerno izražali ΔFosB v PrL in ugotovili, da ta manipulacija povečuje ravni CCKB mRNA v tej regiji (t(12) = 2.012, p <0.05 vs GFP) (Slika 2C). Zanimivo je tudi, da smo ugotovili tudi zmanjšanje c-Fos ravni mRNA po preveliki ekspresiji ΔFosB (t(11) = 3.382, p <0.01) (Slika 2C). TRezultati raziskave kažejo, da je indukcija ΔFosB v prl občutljivih miši aktivni mehanizem dovzetnosti s preprečevanjem supresije CCKB pri odpornih miših.

Da bi še dodatno okrepili ta opazovanja, smo prekomerno izražali ΔJunD, ΔFosB veznega partnerja, ki nima njegove transaktivacijske domene in tako deluje kot prevladujoči negativni antagonist, in določil njegov vpliv na stresno inducirano izražanje CCKB. Potrdili smo, da je kronični družbeni poraz povečal koncentracijo CCKB v PrL pri občutljivih miših (t Test t(12) = 2.289, p <0.05 vs nadzor) (Slika 2D,E). Poleg tega je bila ta indukcija popolnoma blokirana s prekomerno ekspresijo ΔJunD v tej regiji (F(2,20) = 6.306, p <0.01, Bonferroni post test t = 3.615, p <0.01) (Slika 2D,E), ki podpira hipotezo, da ΔFosB posreduje stresno inducirano izražanje CCKB. Poleg tega je blokada aktivnosti ΔFosB v PrL, preko lokalne ΔJunD ekspresije, prav tako spodbujala odpornost proti porazu stresa (t Test t(16) = 2.114, p = 0.05 vs nadzor) (Slika 2F). Mehanizem, ki je podlaga za regulacijo CCKB v prožnih miših, je treba še pojasniti.

Vloga CCKB pri odpornosti in dovzetnosti za stres

Za neposredno testiranje vloge CCKB regulacije v PrL pri posredovanju občutljivosti proti odpornosti smo selektivni antagonist receptorja CCKB CI-988 (10 ng) infundirali neposredno v to območje možganov občutljivih miši. CI-988 učinkovito antagonizira CCKB receptorje vivo ker kaže nanomolarno afiniteto in visoko selektivnost za podtip receptorja CCKB (). Blokada dejavnosti CCKB močno povečala socialno interakcijo (Slika 2G) (interakcija, F(1,20) = 7.795, p <0.05; droga F(1,20) = 5.38, p <0.05, Bonferroni post test t = 3.615, p <0.01). Infuzija CI-988 je prav tako odpravila primanjkljaj v preferencah saharoze, opažen pri občutljivih miših (t(8) = 2.681, p <0.05) (Slika 2H). Oba vedenjska rezultata kažejo, da blokada delovanja CCK v PrL ima močne učinke, podobne antidepresivom. Zanimivo je, da je bil CI-988, ko je bil apliciran intraperitonealno, neučinkovit pri obračanju socialnega izogibanja (podatki niso prikazani).

Da bi preizkusili nasprotje, da bi aktivacija CCKB v PrL lahko posredovala družbeno izogibanje in zmanjšala preferenco saharoze zaradi kroničnega socialnega poraznega stresa, smo preučili učinek lokalne infuzije CCK-8 (10 ng), prevladujoče oblike CCK v možganih. , na vedenje, povezano z depresijo in anksioznostjo. Odmerek zdravila je bil izbran na podlagi prejšnjih rezultatov v literaturi (; ; ). Miši so bile izpostavljene submaksimalnemu socialnemu porazu 24 h pred vedenjskim testiranjem (Slika 3A). CCK-8, infundiran 30 min pred preskušanjem, je bil zadosten za spodbujanje socialnega izogibanja v socialnem interakcijskem testu, kot tudi za zmanjšanje časa, ki ga preživijo odprte roke v povišanem plus labirintu (SI: BLA, interakcija, F(1,22) = 0.79, p > 0.05; glavni učinek zdravila, F(1,22) = 11.75, p <0.05; Bonferroni post test t = 2.957, p <0.05; NAc: interakcija, F(1,26) = 6.688, p <0.05, Bonferroni post test t = 2.816, p <0.05; EPM: BLA, interakcija, F(1,22) = 8.0, p <0.01; Bonferroni post test t = 2.509, p <0.05 učinek zdravila; t = 2.528, p <0.05 virusni učinek; NAc, t Test t(17) = 1.961; p <0.05 učinek zdravila v skupini eYFP) (Slika 3B – E, levo). Pri preferencah saharoze niso opazili razlik.Slika 3F,G, levo). Končno, infuzija CCK-8 ni vplivala na obnašanje (socialna interakcija in povišan plus labirint) naivnih nedefeiranih miši v teh testih (podatki niso prikazani). TRezultati kažejo, da povečanje aktivnosti CCKB, ki ga povzroča ΔFosB, v PrL občutljivih miši v primerjavi z elastičnimi mišmi prispeva k nekaterim od vedenjskih primanjkljajev, ki jih povzročajo ti stresi.

Blokada CCK-inducirane občutljivosti na stres z aktivacijo kortikalnih projekcij na BLA v primerjavi z NAc

Zmanjšana živčna aktivnost mPFC je povezana z depresijo podobnega vedenja pri miših, optogenetska stimulacija nevronov mPFC pri občutljivih miših, ki povzročajo učinke, podobne antidepresivom (). Tako smo domnevali, da lahko CCK deluje v PrL z zaviranjem nevronske aktivnosti in s tem povzročanjem depresije podobnega vedenja. V skladu s to hipotezo smo opazili upadanje c-Fos mRNA v PrL kot odziv na infuzijo CCK v to področje možganov (\ tt(13) = 2.235, p <0.05) (Slika 3H).

Naslednja hipoteza je, da optogenetska stimulacija mPFC deluje kot antidepresiv tako, da nasprotuje učinkom CCK na nevronsko aktivnost. Pri preizkušanju te hipoteze smo raziskali subkortikalne strukture, ki posredujejo učinke CCK, podobnih anksiogenim in prodepresijskim. Piramidni nevroni mPFC se močno prenašajo na NAc in BLA, dve limbični strukturi, povezani z vedenjskimi odzivi na stres. Pokazalo se je, da spremenjena aktivnost obeh možganskih regij igra bistveno vlogo pri izražanju anksiozno in depresivno podobnega vedenja (; ). Zato smo testirali, ali bi stimulacija glutamatergičnih projekcij iz PrL v NAc ali BLA nasprotovala škodljivim učinkom mikrofuzije CCK na PrL (Slika 3A). V PrL smo injicirali AAV-CaMKII-ChR2-EYFP ali AAV-CaMKII-EYFP kot kontrolo. Znano je, da je promotor CaMKII usmerjen na ekspresijo virusa na glutamatergične piramidne nevrone v kortikalnih regijah. Potem smo pustili dovolj časa (6 tednov), da so se transgeni transportirali do živčnih terminalov teh piramidnih nevronov v NAc in BLA (Slika 3I). Miši so prejele submaksimalni družbeni poraz; 24 h kasneje smo infundirali CCK-8 v PrL in 30 min po tem smo izmerili socialno interakcijo med optogenetsko stimulacijo glutamatergičnih terminalov v NAc ali BLA. Takoj po testu socialne interakcije smo miši ovrednotili v povišanem plus labirintu, da bi ocenili obnašanje, povezano z anksioznostjo, in nato za preferenco saharoze, da bi ocenili anhedonijo.

Optogenetska stimulacija glutamatergičnih projekcij PrL na NAc je povsem obrnila socialno izogibanje, ki ga je povzročil intra-PrL CCK-8 (interakcija, F(1,26) = 6.688, p <0.05, brez učinka zdravila v skupini ChR2) (Slika 3C). Nasprotno pa taka stimulacija s PrL na NAc ni vplivala na anksiozno podobno obnašanje, kot je bilo izmerjeno v povišanem plus labirintu (Slika 3E); vendar pa je taka stimulacija povečala prednost za saharozo v primerjavi z nestimuliranimi mišmi (interakcija, F(1,20) = 5.77, p <0.05; Bonferroni post test t = 2.998, p <0.05 stimulacijski učinek pri živalih, zdravljenih s CCK-8) (Slika 3G).

Z optogenetsko stimulacijo prl glutamatergičnih projekcij na BLA so opazili zelo različen vedenjski vzorec. Takšna stimulacija ni preprečila socialnega izogibanja, povzročenega z infuzijo znotraj PrL CCK-8 (interakcija, F(1,22) = 0.79, p > 0.05; glavni učinek zdravila, F(1,22) = 11.75, p <0.05; brez učinka v stimulirani skupini, t Test t(12) = 2.054, p <0.05) (Slika 3B). Vendar pa je stimulacija arentantov BLA pokazala učinek, podoben anksiolitiku, kot kaže povečan čas, porabljen v odprtih krakih zvišanega labirinta (interakcija, F(1,22) = 8.0, p <0.01; Bonferroni post test t = 2.528, p <0.05 virusnega učinka znotraj skupin, zdravljenih s CCK-8) (Slika 3D). Stimulacija glutamatergičnih projekcij BLA ni pomembno vplivala na preferenco saharoze (interakcija, F(1,22) = 2.08, p > 0.05) (Slika 3F).

Razprava

Rezultati te študije zagotavljajo dokaze o molekularnih prilagoditvah, ki se pojavljajo v PrL, ki so osnova za občutljivost za socialni stres. Pokazali smo indukcijo ΔFosB v tej podregiji mPFC po kroničnem socialnem poraznem stresu, kjer prekomerna ekspresija ΔFosB spodbuja občutljivost na stres. Identificirali smo CCKB receptor kot en ciljni gen, ki ga regulira ΔFosB v PrL, očitno inducira CCKB protein v občutljivih miših in preprečuje dolgotrajno izražanje CCKB, ki se pojavlja selektivno v prožnih miših. Nadalje smo pokazali, da infuzija agonista CCK v PrL spodbuja depresijo in anksiozno podobne vedenjske anomalije kot odziv na socialni stres, medtem ko blokada receptorja CCKB v tej regiji občutljivih miši blokira te učinke. Naslednje smo uporabili optogenetska orodja za identifikacijo mikrocirkurnosti, ki je bila vključena v proanxiety proti prodepresijskemu delovanju CCK v PrL. Čeprav kortiko-NAc glutamatergične projekcije posredujejo primanjkljaje nagrad, ki jih kaže socialno izogibanje in zmanjšanje preferenc pri saharozi, to mikrovezje ne vpliva na anksiogene učinke CCK, ki se infundirajo v PrL. Nasprotno pa kortikalne projekcije BLA posredujejo manifestacijo vedenja, povezanega z anksioznostjo, vendar nimajo vpliva na socialno izogibanje zaradi socialnega stresa ali pomanjkanje prednosti saharoze. Ti podatki skupaj kažejo, da spremembe v funkciji PrL po kroničnem socialnem poraznem stresu posredujejo številne vedenjske pomanjkljivosti prek specifičnih subkortikalnih projekcij.

ΔFosB: preslikava limbične stresne mreže in vloge v mPFC

ΔFosB imunohistokemija identificira nevrone, ki jih prizadene kronični stres z ločljivostjo ene celice, in se uporablja za kartiranje nevronskih vezij, reguliranih s stresom (; ; ). Uporabili smo to metodologijo, da pokažemo, da kronični socialni poraz povzroča ΔFosB v več možganskih območjih z različnimi vzorci med prožnimi in občutljivimi skupinami, pri čemer so nekatere regije pokazale samo indukcijo pri prožnih miših, druge pa samo pri občutljivih miših, druge pa v obeh pogojih (Tabela 1). Prejšnje delo je pokazalo, da indukcija ΔFosB v NAc ali ventralni PAG spodbuja odpornost na kronični stres in prispeva k antidepresivnim odzivom. (; ).

Indukcija ΔFosB v prl občutljivih miši, skupaj s prejšnjimi ugotovitvami, da optogenetska stimulacija te regije kaže antidepresivne učinke (), nas je spodbudilo, da preučimo vpliv ΔFosB v tej kortikalni regiji. V nasprotju z ugotovitvami v NAc in ventralni PAG smo ugotovili, da ΔFosB v PrL spodbuja dovzetnost za kronični socialni porazni stres in proizvaja učinek, podoben prodepresiji, pri testu prisilnega plavanja, ne da bi prizadel anksiozno vedenje ali preferenco saharoze. V nasprotju s PrL, nismo našli nobenega učinka prekomerne ekspresije ΔFosB v bližnjem IL. Nedavna študija je ugotovila povišane vrednosti ΔFosB v IL v prožnih miših in to podregijo povezala v odpornost na socialni stres (). Zato so potrebne nadaljnje študije za obravnavo različnih vlog za ti dve podregiji mPFC, za katere se je pokazalo, da povzročata nasprotne učinke na drugih vedenjskih področjih (; ; ). Pred tem smo poročali, da depresivni ljudje kažejo nižje vrednosti ΔFosB v NAc, ki so jih pregledali po smrti (), wker so bile višje vrednosti ΔFosB prikazane v dorsolateralnem PFC (Brodmanovo območje 46) depresivnih ljudi (). Druge kortikalne regije v tej študiji niso bile proučene. V vsakem primeru te ugotovitve skupaj podpirajo specifične abnormalnosti v izrazu ΔFosB v depresiji pri ljudeh, kjer transkripcijski faktor zelo različno vpliva na ranljivost stresa. V prihodnjih študijah bi bilo zanimivo preučiti vpliv ΔFosB v številnih drugih možganskih regijah, kjer se inducira (Tabela 1) o odzivih na stres.

Eden od mehanizmov, s katerimi lahko indukcija ΔFosB v PrL prispeva k obnašanju, podobnemu depresiji, je z zaviranjem aktivnosti PrL. Pokazalo se je, da ΔFosB zavira odzive AMPA glutamata, \ t in c-Fos izražanje, v NAc srednjih živčevjah (; ; ). Prav tako smo ugotovili zmanjšanje c-Fos ekspresijo ΔFosB v PrL. Tako je lahko indukcija ΔFosB v PrL odgovorna za zmanjšano aktivnost nevronov v tej regiji po kroničnem socialnem poraznem stresu. Pričakovati je, da bi tako zmanjšanje tona PrL v primerjavi z njegovimi subkortikalnimi cilji, kot sta BLA in NAc, povečalo izražanje strahu in nezmožnost pogasiti čustvene odzive na stres (, ). Poleg tega lezije mPFC povzročajo občutljive stresne odzive in pomanjkljivosti pri izumrtju strahu (; ; ; ), kar kaže na to, da bi stresno povzročena motnja mPFC, ki je bila deloma posredovana z indukcijo ΔFosB, lahko prispevala k depresiji in drugim motnjam, povezanim s stresom ().

Vloga CCK v ranljivosti stresa

Zagotavljamo dokaze, da je CCKB receptor tarča ΔFosB, tako da je indukcija ΔFosB v prl občutljivih miši samo eden od mehanizmov, s katerimi ΔFosB izkazuje podobne učinke v tej regiji. Čeprav specifični učinki CCK v vezjih mPFC ostajajo nejasni, je pri glodalcih CCK lokaliziran znotraj GABAergičnih interneuronov (). Domneva se, da zavira aktivnost kortikalnih piramidnih nevronov s povečanjem lokalnega sproščanja GABA in neposredno deluje na receptorje CCKB, izražene s piramidnimi nevroni (; ; ; ). Tako lahko CCkergična nevrotransmisija prispeva k zmanjšani aktivnosti PrL, ki je omenjena zgoraj.

CCK je anksiogeno sredstvo, s sistemskim dajanjem agonistov CCKB, ki povzročajo napade panike pri zdravih prostovoljcih. Bolniki, ki so bili nagnjeni k napadom panike, so po izpostavljenosti CCK preobčutljivi (\ t; ). Številne študije so potrdile anksiogene učinke CCK pri glodalcih (). Sproščanje CCK pri mPFC med poraznim stresom pri podganah je povezano z vedenjem, povezanim z anksioznostjo (); Prl in IL podregije v tej študiji niso bile diferencirane. V zadnjem času je sistemska, kronična blokada CCKB s CI-988 pri podganah pokazala antidepresivne učinke (). CI-988 je normaliziral čas nepremičnosti v testu prisilnega plavanja. Preprečila je tudi hiperaktivnost hipotalamus-hipofizo-nadledvične žleze, zmanjšali obseg hipokampusa in celično proliferacijo ter zmanjšali preferenco saharoze, ki jo običajno povzroča socialni poraz. Tukaj potrjujemo te rezultate s prikazom antidepresivnega učinka CI-988, infundiranega v PrL občutljivih miši, čeprav ena sama sistemska injekcija ni oponašala tega učinka.

Poleg akutnega delovanja CCK v PrL smo identificirali znižanje ravni mRNA CCKB v prožnih miših, kar bi lahko bila molekularna prilagoditev, ki je bila podlaga za odpornost. Pravzaprav so spremembe v CCKergičnem tonu, zlasti ravni CCKB, pomemben mehanizem za izražanje anksioznosti. Transgene miši, ki prekomerno izražajo CCKB v predelu možganov, kažejo povečane odzive anksioznosti in strahu (). Naše ugotovitve spremenjenih ravni CCKB med odpornimi in dovzetnimi miši lahko prispevajo k fenotipskim razlikam v anksioznosti in depresivnem vedenju. Tu prikazujemo PrL kot kritični anatomski substrat za anksiogene in prodepresivne učinke CCK v kontekstu socialnega stresa. Kljub temu je v vedenjske akcije CCK vključenih več drugih možganskih regij, vključno z BLA, hipokampusom, NAc in PAG (; ; ; ; ). Prav tako smo ugotovili, da se pri mPFC občutljivih živali povečajo ravni proteina CCKB, ne pa tudi ravni mRNA. Te ugotovitve poudarjajo, da čeprav ravni mRNA pogosto korelirajo z nivoji beljakovin, to ni nujno tako ().

Naši optogenetski poskusi kažejo, da povečanje aktivnosti glutamatergičnih projekcij s PrL na NAc ali na BLA antagonizira učinke CCK v PrL. Potrebne so nadaljnje študije, da bi ugotovili, da ta učinek optogenetske stimulacije posredujejo isti PrL nevroni, ki jih nadzira CCK. Zanimivo je, da naši podatki razkrivajo različne vloge teh dveh mikrovezij pri posredovanju različnih področij vedenjskih nepravilnosti. Projekcija kortiko-NAc nadzoruje anhedonijo in nagrado; dejstvo, da ureja socialno izogibanje, potrjuje, da je ta simptom bolj odraz zmanjšane motivacije in nagrajevanja za družbeno vedenje in ne večje socialne anksioznosti. Ta sklep je v skladu z nezmožnostjo benzodiazepinov, da popravijo to nepravilnost (), in z nedavnim dokazom, da spodbujanje NAc z mPFC poveča nagrado in motivacijo za droge zlorabe (). Nasprotno pa projekcija kortiko-BLA nadzoruje simptome, povezane z anksioznostjo, kar je skladno z veliko literaturo pri glodalcih in ljudeh (glej zgoraj).

V zaključku, Rezultati te študije opredeljujejo vzorec limbičnih regij možganov, vpletenih v dovzetne in odporne živali, in kažejo spremembe PrL, ki spodbujajo občutljivost. Te spremembe vključujejo indukcijo ΔFosB in njegovo indukcijo receptorja CCKB. V nasprotju s tem blokada delovanja CCK v PrL spodbuja antidepresivne in anksiolitične učinke. Ugotavljamo tudi subkortikalne cilje teh kortikalnih piramidnih nevronov, ki posredujejo ta dejanja, s kortiko-NAc vezjem, ki je bistveno za obnašanje, povezano z depresijo, in kortiko-BLA vezje, ki je pomembno za vedenje, povezano z anksioznostjo. Medtem ko klinične študije antagonistov CCKB pri depresivnih bolnikih v 1990s niso prinesle obetavnih rezultatov, sedanje ugotovitve kažejo na vrednost ponovnega zdravljenja terapevtskega potenciala takih sredstev v podskupinah pacientov, izpostavljenih visokim stopnjam stresa.

Opombe

 

To delo sta podprla Nacionalni inštitut za duševno zdravje (EJN) in fundacija za raziskovanje možganov in vedenja National Alliance for Research on Schizophrenia and Depression Young Investigator Award VV

 

 

Avtorji ne prijavljajo konkurenčnih finančnih interesov.

 

Reference

  • Akirav I, Maroun M. Vloga medialnega prefrontalnega korteksa - amigdalnega kroga pri stresnih učinkih na izumrtje strahu. Neural Plast. 2007; 2007: 30873. doi: 10.1155 / 2007 / 30873. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Barbas H, Blatt GJ. Topografsko specifične projekcije hipokampusa so usmerjene v funkcionalno ločene prefrontalne površine v rezus opici. Hipokampus. 1995, 5: 511 – 533. doi: 10.1002 / hipo.450050604. [PubMed] [Cross Ref]
  • Becker C, Thièbot MH, Touitou Y, Hamon M, Cesselin F, Benoliel JJ. Izboljšane kortikalne ekstracelularne ravni materiala, podobnega kolecistokininu, v modelu predvidevanja družbenega poraza pri podganah. J Neurosci. 2001, 21: 262 – 269. [PubMed]
  • Becker C, Zeau B, Rivat C, Blugeot A, Hamon M, Benoliel JJ. Ponavljajoče se družbene poškodbe, ki jih povzročajo depresije, podobne vedenjskim in biološkim spremembam pri podganah: vpletenost holecistokinina. Mol psihiatrija. 2008, 13: 1079 – 1092. doi: 10.1038 / sj.mp.4002097. [PubMed] [Cross Ref]
  • Belcheva I, Belcheva S, Petkov VV, Petkov VD. Asimetrija v vedenjskih odzivih na holecistokinin, mikroinvestirana v podgane jedra accumbens in amigdale. Nevrofarmakologija. 1994, 33: 995 – 1002. doi: 10.1016 / 0028-3908 (94) 90158-9. [PubMed] [Cross Ref]
  • Benoliel JJ, Bourgoin S, Mauborgne A, Pohl M, Legrand JC, Hamon M, Cesselin F. GABA, ki deluje tako na GABA kot na GABAB receptorje, zavira sproščanje kolecistokinin podobnega materiala iz hrbtenjače podgan in vitro. Brain Res. 1992, 590: 255 – 262. doi: 10.1016 / 0006-8993 (92) 91103-L. [PubMed] [Cross Ref]
  • Berton O, McClung CA, Dileone RJ, Krishnan V, Renthal W, Russo SJ, Graham D, Tsankova NM, Bolanos CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ. Bistvena vloga BDNF v mezolimbični poti dopamina pri socialnem poraznem stresu. Znanost. 2006, 311: 864 – 868. doi: 10.1126 / science.1120972. [PubMed] [Cross Ref]
  • Berton O, Covington HE, 3rd, Ebner K, Tsankova NM, Carle TL, Ulery P, Bhonsle A, Barrot M, Krishnan V, Singewald GM, Singewald N, Birnbaum S, Neve RL, Nestler EJ. Indukcija δFosB v perikaqueductal sivi s stresom spodbuja aktivne odzivne oblike. Neuron. 2007, 55: 289 – 300. doi: 10.1016 / j.neuron.2007.06.033. [PubMed] [Cross Ref]
  • Bewernick BH, Hurlemann R, Matusch A, Kayser S, Grubert C, Hadrysiewicz B, Axmacher N, Lemke M, Cooper-Mahkorn D, Cohen MX, Brockmann H, Lenartz D, Sturm V, Schlaepfer TE. Nucleus accumbens stimulacija globokih možganov zmanjšuje ocene depresije in anksioznosti pri depresiji, ki je odporna na zdravljenje. Biol Psychiatry. 2010, 67: 110 – 116. doi: 10.1016 / j.biopsych.2009.09.013. [PubMed] [Cross Ref]
  • Bradwejn J, Koszycki D, Shriqui C. Povečana občutljivost na holecistokinin tetrapeptid pri panični motnji: klinične in vedenjske ugotovitve. Arch Gen Psychiatry. 1991, 48: 603 – 610. doi: 10.1001 / archpsyc.1991.01810310021005. [PubMed] [Cross Ref]
  • Bremner JD. Ali stres poškoduje možgane? Biol Psychiatry. 1999, 45: 797 – 805. doi: 10.1016 / S0006-3223 (99) 00009-8. [PubMed] [Cross Ref]
  • Bremner JD. Travmatski stres: učinki na možgane. Dialogues Clin Neurosci. 2006, 8: 445 – 461. [PMC brez članka] [PubMed]
  • Bremner JD. Nevroimaganje pri posttraumatski stresni motnji in drugih stresnih motnjah. Neuroimaging Clin North Am. 2007, 17: 523 – 538. doi: 10.1016 / j.nic.2007.07.003. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Britt JP, Benaliouad F, McDevitt RA, Stuber GD, Wise RA, Bonci A. Sinaptični in vedenjski profil več glutamatergičnih vhodov v akumulacijo jedra. Neuron. 2012; 76: 790 – 803. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.09.040. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Burgos-Robles A, Bravo-Rivera H, Quirk GJ. Prelimbični in infralimbični nevroni signalizirajo različne vidike privlačnega instrumentalnega vedenja. PLOS One. 2013; 8: e57575. doi: 10.1371 / journal.pone.0057575. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Chen Q, Nakajima A, Meacham C, Tang YP. Povišan holecistokininergični ton predstavlja pomemben molekulski / nevronski mehanizem za izražanje tesnobe pri miših. Proc Natl Acad Sci US A. 2006; 103: 3881 – 3886. doi: 10.1073 / pnas.0505407103. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Choi DC, Gourley SL, Ressler KJ. Prelimbic BDNF in TrkB signalizacija uravnava utrditev tako apetitnega kot averzivnega čustvenega učenja. Transl psihiatrija. 2012; 2: e205. doi: 10.1038 / tp.2012.128. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Christoffel DJ, Golden SA, Dumitriu D, Robison AJ, Janssen WG, Ahn HF, Krishnan V, Reyes CM, Han MH, Ables JL, Eisch AJ, Dietz DM, Ferguson D, Neve RL, Greengard P, Kim Y, Morrison JH , Russo SJ. IκB kinaza uravnava sinaptično in vedenjsko plastičnost, ki jo povzroča družbeni poraz. J Nevrosci. 2011; 31: 314 – 321. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.4763-10.2011. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Covington HE, 3rd, Kikusui T, Goodhue J, Nikulina EM, Hammer RP, Jr, Miczek KA. Kratek stres zaradi socialnega poraza: dolgotrajni učinki na zaužitje kokaina med izražanjem piha in zif268 mRNA v amigdali in prefrontalni skorji. Nevropsihoparmakologija. 2005; 30: 310 – 321. doi: 10.1038 / sj.npp.1300587. [PubMed] [Cross Ref]
  • Covington HE, 3rd, Lobo MK, Maze I, Vialou V, Hyman JM, Zaman S, LaPlant Q, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Neve RL, Deisseroth K, Nestler EJ. Antidepresivni učinek optogenetske stimulacije medialne prefrontalne skorje. J Nevrosci. 2010; 30: 16082 – 16090. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1731-10.2010. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Covington HE, 3rd, Maze I, Sun H, Bomze HM, DeMaio KD, Wu EY, Dietz DM, Lobo MK, Ghose S, Mouzon E, Neve RL, Tamminga CA, Nestler EJ. Vloga za represivno histonsko metilacijo pri ranljivosti, ki jo povzroča kokain. Neuron. 2011; 71: 656 – 670. doi: 10.1016 / j.neuron.2011.06.007. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • de Montigny C. Cholecystokinin tetrapeptid povzroča panične podobne napade pri zdravih prostovoljcih: predhodni izvidi. Psihiatrija arh. 1989; 46: 511 – 517. doi: 10.1001 / archpsyc.1989.01810060031006. [PubMed] [Cross Ref]
  • De Witte P, Heidbreder C, Roques B, Vanderhaeghen JJ. Nasprotni učinki holecistokinin oktapeptida (CCK-8) in tetrapeptida (CCK-4) po injiciranju v kaudalni del jedra se pojavijo ali v njegov rostralni del in možganske ventrikle. Neurochem Int. 1987; 10: 473 – 479. doi: 10.1016 / 0197-0186 (87) 90074-X. [PubMed] [Cross Ref]
  • Diorio D, Viau V, Meaney MJ. Vloga medialnega prefrontalnega korteksa (cingulata gyrus) pri uravnavanju hipotalamično-hipofizno-adrenalnih odzivov na stres. J Nevrosci. 1993; 13: 3839 – 3847. [PubMed]
  • WC Drevets. Neuroimaging in nevropatološke študije depresije: posledice za kognitivno-čustvene značilnosti motenj razpoloženja. Curr mnenje Neurobiol. 2001; 11: 240 – 249. doi: 10.1016 / S0959-4388 (00) 00203-8. [PubMed] [Cross Ref]
  • Fales CL, Barch DM, Rundle MM, Mintun MA, Snyder AZ, Cohen JD, Mathews J, Sheline YI. Spremenjena predelava čustvenih motenj v afektivnem in kognitivno-nadzornem možganskem vezju v veliki depresiji. Biološka psihiatrija. 2008; 63: 377 – 384. doi: 10.1016 / j.biopsych.2007.06.012. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Fales CL, Barch DM, Rundle MM, Mintun MA, Mathews J, Snyder AZ, Sheline YI. Zdravljenje z antidepresivi normalizira hipoaktivnost v dorsolateralnem prefrontalnem korteksu med obdelavo čustvenih motenj v veliki depresiji. J Prizadene neskladje. 2009; 112: 206 – 211. doi: 10.1016 / j.jad.2008.04.027. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Feder A, Nestler EJ, Charney DS. Psihobiologija in molekularna genetika odpornosti. Nat Rev Neurosci. 2009; 10: 446 – 457. doi: 10.1038 / nrn2649. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Gallopin T, Geoffroy H, Rossier J, Lambolez B. Kortikalni viri CRF, NKB in CCK ter njihovi učinki na piramidalne celice v neokorteksu. Cereb Cortex. 2006; 16: 1440 – 1452. doi: 10.1093 / cercor / bhj081. [PubMed] [Cross Ref]
  • Grubert C, Hurlemann R, Bewernick BH, Kayser S, Hadrysiewicz B, Axmacher N, Sturm V, Schlaepfer TE. Nevropsihološka varnost jedra obdaja globoko možgansko stimulacijo za veliko depresijo: učinki 12-mesečne stimulacije. World J Biol Psychiatry. 2011; 12: 516 – 527. doi: 10.3109 / 15622975.2011.583940. [PubMed] [Cross Ref]
  • Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC. ΔFosB različno modulira delovanje jedra in neposredne funkcije poti. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110: 1923 – 1928. doi: 10.1073 / pnas.1221742110. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Gygi SP, Rochon Y, Franza BR, Aebersold R. Korelacija med obiljem beljakovin in mRNA v kvasovkah. Mol Cell Biol. 1999; 19: 1720 – 1730. [PMC brez članka] [PubMed]
  • Heidbreder CA, Groenewegen HJ. Medialna prefrontalna skorja pri podganah: dokazi za razlikovanje dorso-ventral na podlagi funkcionalnih in anatomskih značilnosti. Neurosci Biobehav Rev. 2003; 27: 555 – 579. doi: 10.1016 / j.neubiorev.2003.09.003. [PubMed] [Cross Ref]
  • Holson RR. Mesialne prefrontalne kortikalne lezije in plahost pri podganah: I. Reaktivnost na averzivne dražljaje. Physiol Behav. 1986; 37: 221 – 230. doi: 10.1016 / 0031-9384 (86) 90224-6. [PubMed] [Cross Ref]
  • Keedwell PA, Andrew C, Williams SC, Brammer MJ, Phillips ML. Nevronski korelati anhedonije pri večji depresivni motnji. Biološka psihiatrija. 2005; 58: 843 – 853. doi: 10.1016 / j.biopsych.2005.05.019. [PubMed] [Cross Ref]
  • Kennedy SH, Giacobbe P. Depresija, odporna na zdravljenje: napredek somatskih terapij. Ann Clin Psychiatry. 2007; 19: 279 – 287. doi: 10.1080 / 10401230701675222. [PubMed] [Cross Ref]
  • Kennedy SH, Evans KR, Krüger S, Mayberg HS, Meyer JH, McCann S, Arifuzzman AI, Houle S, Vaccarino FJ. Spremembe regionalnega metabolizma glukoze v možganih, izmerjene s pozitronsko emisijsko tomografijo po zdravljenju velike depresije s paroksetinom. Am J Psihiatrija. 2001; 158: 899 – 905. doi: 10.1176 / appi.ajp.158.6.899. [PubMed] [Cross Ref]
  • Krishnan V, Han MH, Graham DL, Berton O, Renthal W, Russo SJ, Laplant Q, Graham A, Lutter M, Lagace DC, Ghose S, Reister R, Tannous P, Green TA, Neve RL, Chakravarty S, Kumar A , Eisch AJ, Self DW, Lee FS in sod. Molekularne prilagoditve, na katerih temelji občutljivost in odpornost na družbeni poraz v regijah, ki nagrajujejo možgane. Celica. 2007; 131: 391 – 404. doi: 10.1016 / j.cell.2007.09.018. [PubMed] [Cross Ref]
  • Krišnan V, Nestler EJ. Molekularna nevrobiologija depresije. Narava. 2008; 455: 894 – 902. doi: 10.1038 / narava07455. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Lehmann ML, Herkenham M. Okoljska obogatitev daje odpornost na stres do družbenega poraza po nenadno-anatomski poti, ki je odvisna od korteksa. J Nevrosci. 2011; 31: 6159 – 6173. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0577-11.2011. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Leistedt SJ, Linkowski P. Možgani, mreže, depresija in še več. Eur Neuropsychopharmacol. 2013; 23: 55 – 62. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2012.10.011. [PubMed] [Cross Ref]
  • Mayberg HS, Lozano AM, Voon V, McNeely HE, Seminowicz D, Hamani C, Schwalb JM, Kennedy SH. Globoka stimulacija možganov za zdravljenje depresije, odporne na zdravljenje. Neuron. 2005; 45: 651 – 660. doi: 10.1016 / j.neuron.2005.02.014. [PubMed] [Cross Ref]
  • Maze I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Bistvena vloga histon metiltransferaze G9a v plastičnosti, ki jo povzroča kokain. Znanost. 2010; 327: 213 – 216. doi: 10.1126 / znanost.1179438. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • McClung CA, Nestler EJ. Ureditev izražanja genov in nagradnje kokaina s strani CREB in DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208 – 1215. doi: 10.1038 / nn1143. [PubMed] [Cross Ref]
  • Milad MR, Quirk GJ. Nevroni v medialnem prefrontalnem korteksu signalizirajo spomin za izumrtje strahu. Narava. 2002; 420: 70 – 74. doi: 10.1038 / narava01138. [PubMed] [Cross Ref]
  • Nahas Z, Anderson BS, Borckardt J, Arana AB, George MS, Reeves ST, Takacs I. Dvostranska epiduralna predfrontalna kortikalna stimulacija za zdravljenje odporne depresije. Biološka psihiatrija. 2010; 67: 101 – 109. doi: 10.1016 / j.biopsych.2009.08.021. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Nikulina EM, Arrillaga-Romany I, Miczek KA, Hammer RP., Jr Dolgotrajne spremembe mezokortikolimbičnih struktur po ponavljajočem se družbenem porazu pri podganah: časovni potek muR-opioidnega receptorja mRNA in imunoreaktivnost FosB / DeltaFosB. Eur J Nevrosci. 2008; 27: 2272 – 2284. doi: 10.1111 / j.1460-9568.2008.06176.x. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Plemeniti F, Roques BP. CCK-B receptor: kemija, molekularna biologija, biokemija in farmakologija. Prog Neurobiol. 1999; 58: 349 – 379. doi: 10.1016 / S0301-0082 (98) 00090-2. [PubMed] [Cross Ref]
  • Noble F, Wank SA, Crawley JN, Bradwejn J, Seroogy KB, Hamon M, Roques BP. Mednarodna zveza za farmakologijo: XXI. Struktura, porazdelitev in funkcije holecistinokininskih receptorjev. Pharmacol Rev. 1999; 51: 745 – 781. [PubMed]
  • Pérez de la Mora M, Hernandez-Gómez AM, Méndez-Franco J, Fuxe K. Cholecystokinin-8 poveča K (+) - izzvan [3H] sproščanje gama-amino-maslene kisline v rezinah iz različnih možganskih področij. Eur J Pharmacol. 1993; 250: 423 – 430. doi: 10.1016 / 0014-2999 (93) 90029-H. [PubMed] [Cross Ref]
  • Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Indukcija δFosB v možganovskih strukturah po kroničnem stresu. J Nevrosci. 2004; 24: 10594 – 10602. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.2542-04.2004. [PubMed] [Cross Ref]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Razločni vzorci indukcije DeltaFosB v možganih zaradi zlorabe drog. Sinopsija. 2008; 62: 358 – 369. doi: 10.1002 / syn.20500. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Radley JJ, Rocher AB, Miller M, Janssen WG, Liston C, Hof PR, McEwen BS, Morrison JH. Ponavljajoči stres povzroči dendritično izgubo hrbtenice v medialni predfrontalni skorji podgane. Cereb Cortex. 2006; 16: 313 – 320. doi: 10.1093 / cercor / bhi104. [PubMed] [Cross Ref]
  • Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Delta FosB posreduje epigenetsko desenzibilizacijo gena c-fos po kronični izpostavljenosti amfetaminom. J Nevrosci. 2008; 28: 7344 – 7349. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1043-08.2008. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Rezayat M, Roohbakhsh A, Zarrindast MR, Massoudi R, Djahanguiri B. Cholecystokinin in GABA interakcija v hrbtnem hipokampusu podgan pri povišanem preizkusu tesnobe plus-labirint. Physiol Behav. 2005; 84: 775 – 782. doi: 10.1016 / j.physbeh.2005.03.002. [PubMed] [Cross Ref]
  • Richard JM, Berridge KC. Prefrontalna skorja modulira željo in strah, ki nastane zaradi jedra, ki prizadene motnjo glutamata. Biološka psihiatrija. 2013; 73: 360 – 370. doi: 10.1016 / j.biopsych.2012.08.009. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Rotzinger S, Vaccarino FJ. Podtipi receptorjev za holecistinokin: vloga pri modulaciji vedenja, povezanega z anksioznostjo in nagradami, na živalskih modelih. J Psihiatrija Nevrosci. 2003; 28: 171 – 181. [PMC brez članka] [PubMed]
  • Schlaepfer TE, Cohen MX, Frick C, Kosel M, Brodesser D, Axmacher N, Joe AY, Kreft M, Lenartz D, Sturm V. Globoka stimulacija možganov za nagrajevanje vezja blaži anhedonijo pri ognjevzdržni večji depresiji. Nevropsihoparmakologija. 2008; 33: 368 – 377. doi: 10.1038 / sj.npp.1301408. [PubMed] [Cross Ref]
  • Sierra-Mercado D, Padilla-Coreano N, Quirk GJ. Nerazdružljive vloge prelimbičnega in infralimbičnega kortiksa, ventralnega hipokampusa in bazolateralne amigdale v izražanju in izumiranju pogojenega strahu. Nevropsihoparmakologija. 2011; 36: 529 – 538. doi: 10.1038 / npp.2010.184. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Silva MG, Boyle MA, Finger S, Numan B, Bouzrara AA, Almli CR. Vedenjski učinki velikih in majhnih poškodb medialne čelne skorje podgane. Exp Brain Res. 1986; 65: 176 – 181. [PubMed]
  • Somogyi P, Hodgson AJ, Smith AD, Nunzi MG, Gorio A, Wu JY. Različne populacije GABAergičnih nevronov v vidnem korteksu in hipokampusu mačke vsebujejo somatostatin ali imunoreaktivno snov holecistinokin. J Nevrosci. 1984; 4: 2590 – 2603. [PubMed]
  • Surget A, Tanti A, Leonardo ED, Laugeray A, Rainer Q, Touma C, Palme R, Griebel G, Ibarguen-Vargas Y, Hen R, Belzung C. Antidepresivi novačijo nove nevrone za izboljšanje regulacije odziva na stres. Mol psihiatrija. 2011; 16: 1177 – 1188. doi: 10.1038 / mp.2011.48. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Taniguchi H, He M, Wu P, Kim S, Paik R, Sugino K, Kvitsiani D, Fu Y, Lu J, Lin Y, Miyoshi G, Shima Y, Fishell G, Nelson SB, Huang ZJ. Resurs Cre gonilnih linij za genetsko ciljanje GABAergičnih nevronov v možganski skorji. Neuron. 2011; 71: 995 – 1013. doi: 10.1016 / j.neuron.2011.07.026. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Teyssier JR, Ragot S, Chauvet-Gélinier JC, Trojak B, Bonin B. Aktivacija vzorca izražanja gena, odvisnega od DeltaFOSB, v dorsolateralni predfrontalni skorji bolnikov z veliko depresivno motnjo. J Prizadene neskladje. 2011; 133: 174 – 178. doi: 10.1016 / j.jad.2011.04.021. [PubMed] [Cross Ref]
  • Tsankova NM, Berton O, Renthal W, Kumar A, Neve RL, Nestler EJ. Trajna regulacija hipokampalnega kromatina v mišjem modelu depresije in antidepresiva. Nat Neurosci. 2006; 9: 519 – 525. doi: 10.1038 / nn1659. [PubMed] [Cross Ref]
  • Tye KM, Prakash R, Kim SY, Fenno LE, Grosenick L, Zarabi H, Thompson KR, Gradinaru V, Ramakrishnan C, Deisseroth K. Amygdala vezje, ki posredujejo reverzibilno in dvosmerno nadziranje tesnobe. Narava. 2011; 471: 358 – 362. doi: 10.1038 / narava09820. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE, 3rd, Dietz DM, Ohnishi YN, Mouzon E, Rush AJ, 3rd, Watts EL, Wallace DL, Iñiguez SD, Ohnishi YH, Steiner MA, Warren BL, Krishnan V, Bolaños CA, Neve RL, Ghose S, Berton O, Tamminga CA, et al. DeltaFosB v nagradnih sklopih možganov posreduje odpornost na stres in antidepresivne odzive. Nat Neurosci. 2010; 13: 745 – 752. doi: 10.1038 / nn.2551. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Vogt BA, Finch DM, Olson CR. Funkcionalna heterogenost v cingulatskem korteksu: prednja izvršna in zadnja presojna regija. Cereb Cortex. 1992; 2: 435 – 443. doi: 10.1093 / cercor / 2.6.435-a. [PubMed] [Cross Ref]
  • Wilkinson MB, Xiao G, Kumar A, LaPlant Q, Renthal W, Sikder D, Kodadek TJ, Nestler EJ. Zdravljenje z imipraminom in odpornost imata podobno regulacijo kromatina v mišjem jedru, ki se pojavlja v modelih depresije. J Nevrosci. 2009; 29: 7820 – 7832. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0932-09.2009. [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Indukcija DeltaFosB v orbitofrontalni skorji posreduje toleranco do kogenske kognitivne disfunkcije. J Nevrosci. 2007; 27: 10497 – 10507. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.2566-07.2007. [PubMed] [Cross Ref]
  • Yaksh TL, Furui T, Kanawati IS, Go VL. Sprostitev holecistokinina iz možganske skorje podgane in vivo: vloga GABA in receptorskih sistemov glutamata. Možgani Res. 1987; 406: 207 – 214. doi: 10.1016 / 0006-8993 (87) 90784-0. [PubMed] [Cross Ref]
  • Zanoveli JM, Netto CF, Guimarães FS, Zangrossi H., Jr Sistemske in intra dorzalne periaqueduktalne injekcije sivo-holestakinin sulfatiranega oktapeptida (CCK-8s) povzročajo paničen odziv pri podganah, podvrženih povišanemu T-labirintu. Peptidi. 2004; 25: 1935 – 1941. doi: 10.1016 / j.peptides.2004.06.016. [PubMed] [Cross Ref]