PRIPOMBE: Čeprav stres, zlorabe drog in nekatere naravne koristi sprožijo kopičenje DeltaFosB, stres aktivira različne dolvodne celice in kasneje različne receptorje in gene. Z drugimi besedami, odvisnosti in odpornost na stres temeljijo na bistveno drugačnih mehanizmih
J Neurosci. 2010 Oct 27; 30 (43): 14585-92.
Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ.
vir
Fishberg Oddelek za nevroznanost, Medicinska šola Mount Sinai, New York, New York 10029, ZDA.
Minimalizem
Molekularni mehanizmi, na katerih temeljijo nevronske prilagoditve, ki jih povzročajo stres in droge, niso popolnoma razumljeni. Ena molekula, ki je vpletena v takšne prilagoditve, je ΔFosB, transkripcijski faktor, ki se nabira v glodalskem jedru accumbens (NAc), ključnem področju nagrajevanja možganov, kot odgovor na kronični stres ali ponavljajočo se izpostavljenost zlorabam. TNadzemni transkripcijski mehanizmi, ki nadzorujejo indukcijo ΔFosB s temi okoljskimi dražljaji, ostajajo nejasni. Tukaj identificiramo faktor, ki je odvisen od aktivnosti, faktor serumskega odziva (SRF), kot nov medij upornega stresa, vendar ne kokaina- inducirano ΔFosB. SRF je znižan v NAc obeh depresivnih bolnikov in pri miših, ki so kronično izpostavljene socialnemu poraznemu stresu. Ta dolgotrajna regulacija SRF ni prisotna pri prožnih živalih. Z uporabo inducibilne mutageneze pokažemo, da je stresno posredovana indukcija ΔFosB, ki se pojavlja pretežno v prožnih miših, odvisna od ekspresije SRF v tej možganski regiji. Poleg tega NAc-specifična genetska izbris SRF spodbuja različne fenotipe, podobne prodepresivnim in proanksioznim, in naredi živali bolj občutljive na škodljive učinke kroničnega stresa. V nasprotju s tem pa dokazujemo, da SRF ne igra vloge pri akumulaciji ΔFosB v NAc kot odziv na kronično izpostavljenost kokainu. Poleg tega NAc-specifično izločanje SRF nima vpliva na vedenje, ki ga povzroča kokain, kar kaže, da kronični socialni poraz in stalna izpostavljenost kokainu uravnavata akumulacijo ΔFosB in vedenjsko občutljivost prek neodvisnih mehanizmov.
Predstavitev
Jedro nucleus accumbens (NAc), ključno regijo za nagrajevanje možganov, je pomembno za integracijo senzoričnih in kognitivnih vhodov, ki motivirajo motivacijsko ustrezna vedenja kot odziv na okoljske dražljaje (Nestler in Carlezon, 2006; Sesack in Grace, 2010). NAc je bil tudi vpleten v vedenjske anomalije, povezane z odvisnostjo od drog in depresijo. V skladu s tem se je pokazalo, da je usmerjanje NAc z globoko možgansko stimulacijo ublažilo depresivno in odvisnostno podobno vedenje pri ljudeh in glodavcih (Schlaepfer et al., 2008; Vassoler et al., 2008; Heinze et al., 2009; Kuhn et al., 2009; al., XNUMX).
Ponavljajoča izpostavljenost drogam zlorabe ali stresa povzroča spremenjene vzorce genske ekspresije v NAc, kar lahko povzroči kroničnost odvisnosti in depresije (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Maze et al., 2010; Vialou et al., 2010; ., 2008). Zanimivo je, da se transkripcijski faktor ΔFosB, produkt spoja gena fosB, kopiči v NAc kot odgovor na ponavljajočo izpostavljenost zdravilu ali stresu (Nestler, 2008; Perrotti et al., 2010; Vialou et al., XNUMX). ΔFosB je bil predlagan kot potencialno molekulsko stikalo, ki usmerja prehod od rekreacijske uporabe zdravil na kronično odvisno stanje (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Renthal et al., 2009), ker njegovo kopičenje v NAc povečuje nagrajevanje odgovorov na številne zlorabe drog. V zadnjem času je bila pojasnjena vloga indukcije ΔFosB v NAc po kroničnem socialnem poraznem stresu (Nikulina et al., 2008; Vialou et al., 2010): ΔFosB spodbuja aktivne odzivne odzive na stresne dražljaje in povečuje odpornost. Čeprav se indukcija ΔFosB pojavi na način, ki je odvisen od stimulusa, mehanizmi, ki so odgovorni za kopičenje ΔFosB, povzročenega z drogami in stresom, v NAc, ostajajo neznani.
Faktor serumskega odziva (SRF) je transkripcijski faktor, potreben za od aktivnosti odvisne transkripcijske aktivacije več takojšnjih zgodnjih genov, vključno s c-fos, fosb, Egr1 in Arc (Knöll in Nordheim, 2009). Nedavne študije so pokazale učinke SRF na morfološke in citoarhitekturne lastnosti nevronov, vključno z regulacijo sinaptične aktivnosti in tvorbo vezij v možganih odraslih (Knöll in Nordheim, 2009). Te ugotovitve so nas spodbudile, da raziščemo, ali je SRF funkcionalno reguliran s kronično izpostavljenostjo zlorabam drog ali stresom, pa tudi potencialni vpliv take ureditve na indukcijo ΔFosB v teh pogojih.
Tu opisujemo nov mehanizem, s katerim znižanje regulacije SRF v NAc spodbuja prodepresive in anksiogene fenotipe, kar na koncu povečuje ranljivost živali na škodljive učinke kroničnega stresa. Ti učinki so deloma posredovani z izgubo indukcije ΔFosB pri NAc stresnih živali. Opaženo zmanjšanje ekspresije SRF in ΔFosB v postmortem NAc tkivu, pridobljenem od depresivnih bolnikov, potrjuje pomembnost naših ugotovitev za človeško depresijo. Zanimivo je, da se zdi, da je ta mehanizem za nadzor kopičenja ΔFosB specifičen za stres: kronična izpostavljenost kokainu nima vpliva na izražanje SRF, črtanje SRF iz NAc nima vpliva na kopičenje ΔFosB po kronični izpostavljenosti kokainu in takšno odstranjevanje SRF ne vpliva na kokain- inducirana vedenja. Ta nova povezava med SRF in ΔFosB v kontekstu stresa lahko predstavlja pomemben homeostatski mehanizem, ki uravnava posameznikovo občutljivost na kronični stres.
Materiali in metode
živali
V vseh vedenjskih in biokemičnih eksperimentih smo uporabili moške miši C57BL / 6J, stare 8 tednov (Jackson Laboratory). Vse živali so bile navajene v obratu za živali vsaj 1 teden pred eksperimentalnimi manipulacijami in so bile vzdrževane na 23 – 25 ° C na 12 h ciklu svetlobe / teme (luči od 7: 00 AM do 7: 00 PM) z ad libitum dostop do hrane in vode. Poskusi so bili izvedeni v skladu s smernicami Društva za nevroznanost in institucionalne komisije za nego živali in uporabo na Medicinski šoli Mount Sinai.
Za eksperimente s kokainom [Western blotting in kvantitativna imunoprecipitacija s kromatinom (ChIP)] so uporabili moške C8BL / 10-57-tedenske moške C6BL / 20J. Živali so prejele sedem intraperitonealnih injekcij fiziološke raztopine ali kokaina (24 mg / kg kokain-HCl; Sigma). Miške so uporabili 10 h po končni obdelavi. Za vedenjske poskuse so bili miši posamično nastanjeni in so bili zdravljeni z 7.5 mg / kg (lokomotorna senzibilizacija) ali XNUMX mg / kg (kondicionalna prednostna lokacija) kokain-HCl intraperitonealno, kot je opisano spodaj.
Srffl / fl miši smo pridobili, kot je opisano prej (Ramanan et al., 2005). NAc-specifično izločanje Srf smo dosegli s stereotaksično injekcijo in kasnejšo prekomerno ekspresijo virusa Cre rekombinaze (Cre), fuzirane z zelenim fluorescentnim proteinom (GFP), z uporabo vektorjev adeno-povezanega virusa (AAV). Uporabljena je bila nesmiselna Cre. AAV-GFP smo injicirali namesto AAV-Cre-GFP v Srffl / fl miši kot kontrolo. Na kratko, miši smo anestezirali z mešanico ketamina (10 mg / kg) in ksilazina (10 mg / kg), z naslednjimi stereotaksičnimi koordinatami, ki smo jih uporabili za virusno dostavo: + 1.6 (anterior / posterior), + 1.5 (lateralno), - 4.4 (hrbtna / ventralna) pod kotom 10 ° od vzdolžne osi (glede na bregmo). Skupaj 0.5 μl očiščenega virusa je bil dostavljen dvostransko v obdobju 5 min (0.1 μl / min), ki mu je sledilo 5 min počitka. Miši so bile testirane 2 tedne po operaciji, ko je bila virusna ekspresija maksimalna, in virusna mesta injiciranja so bila potrjena za vse živali z uporabo standardnih histoloških metod. Učinkovitost viralne posredovane Cre-ekspresije je bila potrjena z imunohistokemijo in z reverzno-transkriptazno PCR za Srf, izvedeno na mikrodisekcijskih NAc udarcih iz živali, ki so dobile AAV-Cre-GFP in AAV-GFP v NAc. AAV-GFP in AAV-Cre-GFP viruse smo ustvarili, kot je opisano prej (Maze et al., 2010).
Vedenjski postopki
Družbeni poraz.
C57BL / 6J miši so bili podvrženi kroničnemu socialnemu poraznemu stresu za 10 zaporedne dni, kot je opisano prej (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Na kratko, vsaka miška je bila izpostavljena neznani in agresivni moški CD1 upokojeni vzrejni miški za 5 min na dan. Po neposrednem medsebojnem delovanju z agresorjem CD1 so bile živali postavljene v sosednji prostor iste kletke za naslednji 24 h s senzoričnim, ne pa fizičnim kontaktom. Kontrolne živali so bile nameščene v ekvivalentnih kletkah, vendar s člani istega seva. Preskusi socialnih interakcij so bili izvedeni 24 h po zadnjem dnevu poraza.
Socialno izogibanje neznani CD1 moški miši je bilo ocenjeno v skladu z objavljenimi protokoli (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Eksperimentalna miška je bila prvič vstavljena v odprto polje, ki je vsebovalo prazno kletko iz žične mreže 2.5 min. Med drugo sejo je bila v žično kletko vstavljena neznana moška miška CD1. Izmerjen je bil čas, preživet v interakcijskem območju (8 cm širok hodnik, ki obdaja kletko). Ločevanje poraženih miši na občutljive in prožne subpopulacije je bilo izvedeno, kot je bilo opisano prej (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Ker je večina kontrolnih miši preživela več časa v interakciji s socialnim ciljem kot s praznim ohišjem, je bilo razmerje med interakcijami 100 (enak čas, preživet v coni interakcije v prisotnosti in odsotnosti socialnega cilja) nastavljeno kot mejna vrednost. Miške z oceno <100 so bile označene kot občutljive, tiste z oceno ≥ 100 pa kot odporne. Obsežne vedenjske, biokemijske in elektrofiziološke analize potrjujejo veljavnost teh različnih dovzetnih in prožnih subpopulacij (Krishnan et al., 2007; Wilkinson et al., 2009; Vialou et al., 2010).
Da bi proučili ranljivost Srffl / fl miši na socialni poraz, so miši, ki so bile injicirane dvostransko z AAV-GFP ali AAV-Cre-GFP, podvržene trima zaporednim porazom istega dne in nato pozneje testirane za socialno interakcijo 24 h. Ta submaksimalni porazni postopek je bil predhodno potrjen, da bi odkrili fenotipe prepoznavnosti po genetskih manipulacijah (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010).
Naučena nemoč.
Srffl / fl miši, ki prekomerno izražajo bodisi AAV-GFP ali AAV-Cre-GFP, so bili podvrženi postopku naučene nemoči, kot je opisano prej (Berton et al., 2007). Na kratko, miši so bile izpostavljene intermitentnim, neizogibnim šokom stopal za 1 h v 2 zaporednih dneh (0.45 mA, 5 s trajanje). Na dan testa so miši ponovno uvedli v okence za 15 zaporedne preskuse pobega. Med vsakim preskušanjem smo podali neprekinjen šok, miši pa smo dali možnost, da uidejo v sosednji, neelektrični predel. Po uspešnem pobegu so bila vrata samodejno zaprta in zabeležena je bila zakasnitev pobega. Ko miši niso pobegnile v 25 s, je bilo preskušanje končano in zabeleženo kot neuspeh. Predhodne študije so pokazale, da virusna ekspresija v NAc in drugih regijah nima učinka na izhodno obnašanje pri odsotnosti stresa (Newton et al., 2002; Berton et al., 2007).
Lokomotorna senzibilizacija.
Dva tedna po injekcijah AAV-GFP ali AAV-Cre-GFP znotraj NAc so bile miši Srffl / fl izpostavljene lokomotorni senzibilizaciji. Miši so bili navajeni na gibalno areno 30 minut na dan 4 dni. Po navajanju so živalim intraperitonealno injicirali 10 mg / kg kokaina-HCl in jih položili v lokomotorne škatle. Lokomotorne aktivnosti živali so bile zabeležene s sistemom foto-žarkov (San Diego Instruments), ko se ambulantni žarek lomi 30 minut na dan. Preobčutljivost gibanja je bila zabeležena v obdobju 6 d.
Prednostna izbira kraja.
Postopek priprave prostorov je bil izveden, kot je opisano prej (Maze et al., 2010), z naslednjimi spremembami. Na kratko, 18 dni po infuzijah AAV-GFP ali AAV-Cre-GFP pri miših Srffl / fl znotraj NAc so živali postavili v komore za kondicioniranje, ki so bile sestavljene iz treh kontekstno ločenih okolij. Iz študije so bile izključene miši, ki so pokazale pomembno prednost za katero koli od obeh komora za kondicioniranje (<10% vseh živali). Kondicionirne skupine so bile nadalje uravnotežene, da so se prilagodile morebitnim pristranskostim v komori, ki še vedno obstajajo. V naslednjih dneh so živalim vbrizgali fiziološko raztopino in jih popoldne zaprli v eno komoro 30 minut, nato vbrizgali kokain (7.5 mg / kg, ip) in naslednji dan 30 minut zaprli v drugo komoro, kar je skupaj dva kroga asociacijskega treninga na zdravljenje (dva para fiziološke raztopine in dva kokaina). Na dan preizkusa smo miši brez obdelave za 20 minut vrnili v aparat in jih preizkusili, da smo ocenili preferenco strani. Lokomotorični odzivi na kokain so bili ocenjeni s prekinitvami žarkov v komorah, seznanjenih s kokainom, da se zagotovi učinkovitost zdravljenja z zdravili. Za vse skupine so ocenili izhodiščno gibanje kot odziv na fiziološko raztopino, da bi zagotovili, da zdravljenje z virusom ne vpliva na gibanje.
Drugi vedenjski testi.
Srffl / fl miši so bili testirani na testih odprtega polja, svetlobe / teme in testih s prisilnim plavanjem na podlagi objavljenih protokolov (Vialou et al., 2010). Aktivnost miši na odprtem polju je bila zabeležena za 5 min z uporabo video sledilnega sistema (Ethovision) pod rdečimi svetlobnimi pogoji. Pri preskusu svetlobe / teme so miši dovolili, da prosto raziskujejo dvodelno škatlo, sestavljeno iz ene velike osvetljene arene, povezane z manjšo zaprto areno. Miši smo testirali v obdobju 5 min, da bi ocenili količino časa, porabljenega v obeh ograjenih prostorih. V testih odprtega polja in svetlobi / temi je bil čas, ki smo ga preživeli v srednji in lahki areni, ocenil kot inverzni indeks odzivov, povezanih z anksioznostjo. Za 1 min. Je bil izveden 5 d test prisilnega plavanja. Povečani čas nepremičnosti med testom prisilnega plavanja smo interpretirali kot vedenje, podobno prodepresivnemu. Test prisilnega plavanja 1 d je bil pri miših široko uporabljen in je bil potrjen kot merilo predvidljive veljavnosti, saj antidepresivne terapije zmanjšujejo čas neobčutljivosti.
Imunohistokemija
Srffl / fl miši smo anestezirali in perfundirali intrakardialno z 4% paraformaldehidom / PBS. V 30% saharozi / PBS smo odstranili možgane in jih krioprotektirali. Koronalni odseki (30 μm) smo razrezali na zamrzovalni mikrotom in obdelali za imunohistokemične analize. Validacija Srffl / fl knock-out je bila izvedena z uporabo poliklonskega protitelesa, usmerjenega proti SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology). Izražanje Cre je bilo potrjeno z GFP (piščančjim poliklonalnim, 1 / 8000, Aves Labs) izražanjem v seciranih možganih, ker se Cre zliva z GFP. Za kvantifikacijo indukcije ΔFosB po družbenem poraznem stresu v Srffl / fl knock-out miših smo odkrili ΔFosB z uporabo kunčjega poliklonskega protitelesa, vzgojenega proti N-terminalni regiji proteina (1 / 1000; Santa Cruz Biotechnology). Slike so bile posnete s konfokalnim mikroskopom (povečava 20 ×; Zeiss). Število GFP-imunopozitivnih celic, ki so šteli kot negativne in pozitivne za ΔFosB imunoreaktivnost, smo količinsko opredelili v več slikah za vsako žival, s srednjimi vrednostmi, ki smo jih nato izračunali za vsako žival. Vsaka žival je bila obravnavana kot individualno opazovanje za statistično analizo.
Človeško postmortno NAc tkivo
Človeško možgansko tkivo po smrti je bilo pridobljeno iz zbirke možganov Dallas, kjer se tkivo odvzame iz urada Dallas Medical Examiner in Programa za presaditev tkiv Univerze v Teksasu (UT) Southwestern po soglasju najbližjega sorodnika. Tkivo smo analizirali tako pri moških kot pri ženskah, ki so se ujemale glede na starost, interval po smrti, število integritete RNA (RIN) in pH. Posebni agonalni dejavniki, vključno s komo, hipoksijo, pireksijo, epileptičnimi napadi, dehidracijo, hipoglikemijo, odpovedjo več organov in zaužitjem nevrotoksičnih snovi v času smrti, vplivajo na celovitost RNK v možganskih tkivih postmortem (Tomita et al., 2004). Za karakterizacijo vzorcev tkiva smo uporabili lestvico agonalnih faktorjev (AFS) za vsakega od teh osmih stanj. Odsotnost agonalnega faktorja je bila dodeljena z oceno 0 in njegova prisotnost je bila ocenjena kot 1, da se zagotovi skupna ocena AFS med 0 in 8. Tkivo z agonalnimi ocenami 0 ali 1 odraža vzorce dobre kakovosti; demografski primeri so podani v tabeli 1. Izjemna kakovost tkiva je bila potrjena z visokimi vrednostmi RIN. Primeri so bili podvrženi standardni disekciji pred hitrim zamrzovanjem v -40 ° C izopentana in shranjevanjem pri -80 ° C; nadaljnja disekcija NAc je bila izvedena na zamrznjenem tkivu. Institucionalni pregledni odbor UT Southwestern je pregledal in odobril zbiranje tega tkiva za raziskovalno uporabo. Kasneje je bil za vsak primer depresije opravljen neposreden razgovor z informatorji, kjer so bili dokumentirani podatki o bolezni primera; so dva raziskovalna psihiatra s pomočjo meril DSM-IV postavila soglasno diagnozo velike depresivne motnje. Noben od primerov, vključenih v to študijo, ni imel pozitivnih toksikoloških pregledov na zdravila za zlorabo, alkohol ali zdravila na recept, razen antidepresivov. Kljub zdravljenju z antidepresivi so bili vsi preiskovanci ob smrti klinično depresivni. Vzorci tkiva so bili na slepo razdeljeni za analizo.
Tabela 1.
Demografski podatki za človeško postmortno študijo
Western bloting
Vzorce človeških in mišjih NAc smo obdelali, kot je opisano prej (Maze et al., 2010). Zamrznjeno tkivo smo sonificirali v pufru za lizo 5 mM HEPES, ki je vseboval 1% SDS s inhibitorji proteaze (Roche) in fosfataze (Sigma). Koncentracije beljakovin so bile določene z analizo proteina Dc (Bio-Rad). Enake količine beljakovinskih vzorcev smo izpostavili SDS-PAGE in Western blot-u. Western vzorce smo testirali z uporabo protitelesa proti SRF (1 / 2000; biologija Santa Cruz) ali GAPDH (1 / 1500; Abcam) in jih nato skenirali in kvantificirali z uporabo sistema za slikanje Odyssey (Licor).
Izolacija RNA in kvantitativna PCR
Izolacijo RNA, kvantitativno PCR (qPCR) in analizo podatkov smo izvedli, kot je opisano prej (Maze et al., 2010; Vialou et al., 2010). Na kratko, RNA smo izolirali s TriZol reagentom (Invitrogen) in jo nadalje očistili z RNAeasy mikro-kompleti iz Qiagena. Vsi vzorci RNA so bili določeni tako, da imajo vrednosti 260 / 280 in 260 / 230 ≥1.8. Reverzna transkripcija je bila izvedena z uporabo iScript (Bio-Rad). qPCR z uporabo SYBR green (Quanta) izvedemo s PCI sistemom Applied Biosystems 7900HT RT z naslednjimi parametri cikla: 2 min pri 95 ° C; 40 cikli 95 ° C za 15 s, 59 ° C za 30 s, 72 ° C za 33 s; in stopenjsko segrevanje na 95 ° C, da se tvorijo disociacijske krivulje za potrditev posameznih produktov PCR. Podatki so bili analizirani s primerjavo vrednosti C (t) zdravljenja (nadzor proti občutljivim ali prožnim mišim ali človeški nadzor proti depresivnim bolnikom) z metodo ΔΔC (t) (Tsankova et al., 2006). ΔFosB qPCR prajmerji: fuga, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT in obratno, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG.
ChIP
Čip je bil izveden, kot je prej opisano (Maze et al., 2010) na združenih dvostranskih NAc udarcih iz kontrolnih, občutljivih in elastičnih miši (štirje 14-merilni udarci / miši) 1 h po zadnjem porazu in iz slanice in kokaina zdravljenih živali 24 h po končni obdelavi. Tkivo je bilo zamreženo v 1% formaldehidu. Fiksiranje je bilo nato prekinjeno z uporabo glicina in tkivo je bilo oprano in vzdrževano pri -80 ° C do uporabe. Strnjena kromatina smo inkubirali preko noči z anti-SRF protitelesom (Santa Cruz Biotechnology), ki je bila prej vezana na magnetne kroglice (Dynabeads M-280; Invitrogen). Po povratnem navzkrižnem povezovanju in čiščenju DNA smo vezavo SRF na fosb promotor določili s qPCR z uporabo primerjev, ki so obsegali regijo fosb promotorja, ki je vseboval dva vezna mesta serumskega odziva. Izpadi SRF so bili znatno obogateni v primerjavi z nadzorom brez protiteles. Mišji promotorski genski promotor: naprej, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG in obratno, ACCTCCCAAACTCTCCCTTC.
Statistične analize
Enosmerne ANOVA so bile uporabljene za primerjavo sredstev med kontrolnimi, dovzetnimi in odpornimi miši pri biokemijskih in vedenjskih analizah. Dvosmerne ANOVA so bile uporabljene za primerjavo indukcije ΔFosB s socialnim porazom pri lokalnih izločljivih miših Srf, pa tudi za primerjavo učinka izločanja Srf v naučenih protokolih nemoči in preobčutljivosti lokomotornih sistemov. Študentovi t-testi so bili uporabljeni za primerjavo povprečja učinka izločanja Srf na indukcijo ΔFosB in med skupinami v človeški postmortalni analizi tkiva in mišje ChIP analize. Razlike med eksperimentalnimi pogoji so bile statistično pomembne pri p ≤ 0.05.
Rezultati
Izraz SRF in ΔFosB v depresiji pri ljudeh in socialno poraženih miših
Da bi raziskali potencialno vlogo SRF pri razvoju depresivnih dejanj, smo najprej ocenili izražanje beljakovin SRF v NAc pri postmortalnih depresivnih človeških bolnikih. Depresivni preiskovanci so pokazali znatno znižano raven SRF v NAc v primerjavi s svojimi kontrolnimi skupinami (t (19) = 1.9; p <0.05) (slika 1A). Glede na vlogo SRF pri regulaciji takojšnje zgodnje ekspresije genov, ki je odvisna od aktivnosti (Ramanan et al., 2005), smo domnevali, da je SRF lahko vključen v nadzor izražanja ΔFosB v tej možganski regiji. V podporo tej hipotezi smo opazili, da so se tudi vrednosti mRNA Δfosb znatno zmanjšale pri NAc depresivnih ljudi (t (16) = 1.8; p <0.05) (slika 1B). To se sklada z nedavnimi ugotovitvami znižanja ravni beljakovin ΔFosB tudi v teh pogojih (Vialou et al., 2010).
Slika 1.
Zatiranje SRF, ki ga povzroča kronični stres, je povezano z zmanjšano transkripcijo ΔFosB v NAc. Bolniki z depresijo A, B, postmortem pri ljudeh z zmanjšano koncentracijo beljakovin SRF (n = 10 / skupina; A) in izražanja mRNA Δfosb v NAc (n = 8 / skupina; B). C, miši, ki so bile izpostavljene kroničnemu stresu socialnega poraza (10 d), so bile razvrščene v občutljive in prožne subpopulacije. D, Kronični stres zaradi socialnega poraza zmanjša raven beljakovin SRF v NAc občutljivih miši, ne pa tudi odpornih miši, v primerjavi s kontrolami 24 ur po testu socialne interakcije, prikazanem v C. E, Ravni mRNA ΔfosB v NAc so pri občutljivih miših nespremenjene povišana regulacija pri prožnih živalih (n = 7–15 / skupina). Beljakovine F, SRF kažejo povečano vezavo na promotor gena fosb po kroničnem stresu socialnega poraza samo pri odpornih in ne pri dovzetnih miših (n = 5 / skupina). Prikazani podatki so izraženi kot povprečje ± SEM (predstavljeni kot vrstice napak). Con., Nadzor; Dep., Potrt; Sus., Dovzetno; Res., Prožen. * p <0.05 v primerjavi s kontrolo; *** p <0.001 v primerjavi s kontrolo; #p <0.05 v primerjavi z občutljivimi; ## p <0.01 v primerjavi z občutljivimi; ### p <0.001 v primerjavi z občutljivimi.
Za razširitev teh ugotovitev smo uporabili protokol kroničnega socialnega poraza pri miših. Očitni sta bili dve prepoznavni skupini poraženih miši, dovzetni in odporni (Krishnan et al., 2007), ki sta temeljili na merilu socialnega izogibanja, pri katerem so dovzetne živali pokazale znatno zmanjšano socialno interakcijo v primerjavi s kontrolnimi in odpornimi živalmi (F (2,23, 157.2) = 0.001; p <0.001; t preskusi z Bonferronijevo korekcijo, dovzetni v primerjavi z nadzorom, p <0.05; elastični v primerjavi z nadzorom, p <0.01; prožni v primerjavi z občutljivimi, p <1) (slika 2,32C). Dva dni po zadnji porazni epizodi so dovzetne, odporne in neporažene kontrolne miši analizirali na ekspresijo SRF v NAc. Podobno kot ugotovitve pri človeški depresiji so se ravni beljakovin SRF znatno zmanjšale pri NAc občutljivih miši v primerjavi s kontrolami, medtem ko ravni SRF niso vplivale na NAc odpornih miši (F (4.7) = 0.05; p <0.05; t testi z Bonferronijeva korekcija, občutljiv v primerjavi z nadzorom, p <0.05; elastičen v primerjavi z občutljivim, p <1) (slika XNUMXD).
Nato smo preučili izražanje Δfosb mRNA v NAc teh treh skupin živali in opazili znatno povečanje izražanja Δfosb samo pri prožnih živalih, pri občutljivih miših pa ni opaziti pomembnega povečanja (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (Slika 1E). Za nadaljnje raziskovanje možnih interakcij med ravnmi SRF in transkripcijo Δfosb smo s pomočjo ChIP preučili, ali se je vezava SRF na promotor gena fosb spremenila po kroničnem stresu socialnega poraza v ločenih kohortah občutljivih in odpornih miši. Odporne živali so pokazale znatno okrepljeno vezavo SRF na promotor fosb pri NAc v primerjavi s kontrolami (t (8) = 2.1; p <0.05) in v primerjavi z dovzetnimi miši (t (8) = 2.0; p <0.05). Med kontrolami in dovzetnimi miši niso opazili nobene razlike, kar verjetno kaže na pomanjkanje indukcije SRF pri dovzetnih miših (slika 1F).
Za potrditev vloge SRF pri regulaciji ΔFosB po stresu zaradi kroničnega socialnega poraza so bile mišice Srffl / fl preučene o vplivu selektivne odstranitve SRF iz NAc na indukcijo stresa ΔFosB. Srffl / fl miši smo stereotaksično injicirali intra-NAc z vektorji AAV, ki izražajo GFP ali Cre-GFP. Izločanje SRF, ki ga povzroča AAV-Cre-GFP, specifično za NAc, je bilo potrjeno imunohistokemično (slika 2A). Dejansko ni prišlo do prekrivanja med obarvanjem SRF in izražanjem Cre, kar dokazuje učinkovitost izločanja. V mikrorazsekanih udarcih NAc smo zaznali znatno 50-odstotno zmanjšanje ravni beljakovin SRF (t (11) = 4.3; p <0.001). Velikost verjetno odraža dejstvo, da del tkiva v takih mikrodisekcijah ni virusno okužen.
Slika 2.
SRF posreduje indukcijo ΔFosB s stresom kroničnega socialnega poraza. A, Injekcija AAV-Cre-GFP v NAc miši Srffl / fl povzroči izločanje beljakovin SRF v nevronih, ki izražajo Cre. Injekcija AAV-GFP ni imela opaznega učinka. B, Takšen selektivni izločanje SRF iz NAc popolnoma blokira indukcijo ΔFosB v NAc po kroničnem stresu socialnega poraza (n = 4 / skupina). Prikazani podatki so izraženi kot povprečje ± SEM (predstavljeni kot vrstice napak). * p <0.05 v primerjavi z nadzorom AAV-GFP; ** p <0.01 v primerjavi s porazom AAV-GFP.
Nato smo izvedli kvantitativno imunohistokemijo za ΔFosB v NAc poraženih miši Srffl / fl, injiciranih znotraj NAc z AAV-Cre-GFP ali AAV-GFP. Po kroničnem stresu socialnega poraza je bila ekspresija ΔFosB pomembno inducirana pri NAc živali, ki so si injicirali AAV-GFP (interakcija med virusom in zdravljenjem, F (1,12) = 6.4; t testi s Bonferronijevo korekcijo, kontrola v primerjavi s porazom, p <0.05; AAV-Cre proti AAV-GFP, p <0.01). Vendar te indukcije niso opazili pri miših Srffl / fl, ki so prejemale AAV-Cre-GFP (slika 2B), kar dokazuje, da indukcija ΔFosB v NAc zaradi kroničnega stresa zahteva SRF.
SRF knock-out v NAc spodbuja prodepresijske in proanksiozne fenotipe
Ker je bilo že dokazano, da indukcija ΔFosB s stresom kroničnega socialnega poraza posreduje odpornosti (Vialou et al., 2010), smo domnevali, da lahko zmanjšanje regulacije SRF in posledična izguba indukcije ΔFosB pri dovzetnih živalih predstavlja negativno prilagoditev, ki na koncu povzroči živali, ki so bolj občutljive na škodljive učinke stresa. Da bi preizkusili to hipotezo, smo pri odraslih miših Srffl / fl sprožili lokalno NAc-specifično delecijo gena Srf, kot je opisano zgoraj, in nastale miši in njihove kontrole smo testirali v bateriji vedenjskih paradigem za oceno izhodiščne depresije in tesnobe - kot vedenje. Lokalna NAc delecija SRF je spodbudila prodepresijski učinek, izmerjen s testom prisilnega plavanja (t (30) = 2.5; p <0.05), in anksiogeni učinek, izmerjen na prostem (t (38) = 1.9; p <0.05) in preskusi svetlobe / teme (t (8) = 1.9; p <0.05). Tako so miši Srffl / fl, ki so prejemale AAV-Cre-GFP v NAc, pokazale manjšo zakasnitev do nepremičnosti v testu prisilnega plavanja, manj časa v središču odprtega polja in manj časa v svetlobnem oddelku svetlo / temne škatle v primerjavi z živalmi, ki so jim injicirali AAV-GFP (slike 3A-C). Vendar izbris SRF znotraj NAc ni spremenil izhodiščnih ravni gibanja, kar kaže na to, da opaženi vedenjski učinki pri živalih s knock-out SRF niso bili posledica nepravilnosti v splošni gibalni aktivnosti (slika 3D). Ti podatki so zanimivi glede na prejšnja poročila, ki kažejo, da čeprav ΔFosB v NAc ureja depresivno podobno vedenje, ni videti, da sodeluje pri odzivih, povezanih z anksioznostjo (Vialou et al., 2010). Naše sedanje ugotovitve, da izguba SRF povzroča anksiogene odzive, kažejo, da to počne prek ciljev, ki niso ΔFosB.
Slika 3.
Izločanje SRF iz NAc spodbuja prodepresijo in proanksiji podobne fenotipe. A – C, selektivno izločanje SRF iz NAc, doseženo z injekcijo AAV-Cre-GFP v NAc miši Srffl / fl, zmanjša zakasnitev do nepremičnosti v testu prisilnega plavanja (n = 14–18 / skupina; A) in zmanjšuje čas, preživet v središču, in čas v svetlobnem oddelku v preskusih na prostem (B) oziroma svetlobe / teme (C) (n = 5–15 / skupina). D, pri miših, ki so prejemale injekcije AAV-GFP ali AAV-Cre-GFP znotraj NAc, niso opazili razlike v bazalni gibalni aktivnosti. E, F, povečana dovzetnost za naučeno nemoč (n = 7–8 / skupina; E) in stres socialnega poraza (n = 5–6 / skupina; F), merjena z latenco pobega in časom socialne interakcije . Prikazani podatki so izraženi kot povprečje ± SEM (predstavljeni kot vrstice napak). * p <0.05 v primerjavi z GFP ali odsoten cilj; ** p <0.01 v primerjavi z GFP; *** p <0.001 v primerjavi z GFP.
Nato smo preučevali, ali izbris SRF v NAc povečuje tudi ranljivost živali na škodljive učinke ponavljajočega se stresa. Srffl / fl miši, ki so jim v NAc vbrizgali AAV-Cre-GFP ali AAV-GFP, so pregledali v dveh modelih depresije, se naučili nemoči in kroničnega socialnega poraza. Pri naučeni nemoči so živali Srffl / fl, ki so prejemale AAV-Cre-GFP, pokazale povečano latenco, da bi se izognile nožnemu šoku po predhodni izpostavljenosti neizogibnemu stresnemu stresu stopala (zdravljenje × preskušanje interakcije, F (14,180) = 10.2; t testi z Bonferronijevo korekcijo, p <0.001; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01), kar kaže na povečano dovzetnost za stresne motnje v vedenju (slika 3E). Podobno je tudi lokalna odstranitev SRF iz NAc povečala socialno odpornost (t (10) = 1.8; p <0.05) v primerjavi s kontrolnimi živalmi, ki so jih injicirali AAV-GFP, po kroničnem stresu socialnega poraza (slika 3F), učinek podoben prodepresiji.
Pomanjkanje vključenosti SRF pri indukciji ΔFosB in odzivu na vedenjske reakcije na kokain
Glede na to, da se ΔFosB povzroča tudi v NAc kot odziv na zlorabe drog, kot je kokain, je bilo zanimivo preučiti potencialno vlogo SRF pri delovanju kokaina. Za razliko od kroničnega stresa socialnega poraza ponavljajoča se izpostavljenost kokainu ni spremenila izražanja beljakovin SRF v NAc (t (14) = 0.8; p> 0.05) (slika 4A) in ni vplivala na vezavo SRF na promotor gena fosB v tej možganski regiji. (t (4) = 0.7; p> 0.05) (slika 4B). To kaže na to, da v nasprotju s stresom indukcija ΔFosB po kroničnem kokainu ni posredovana s SRF. To smo preizkusili neposredno s preučevanjem, ali se kopičenje ΔFosB po kroničnem kokainu spremeni pri živalih Srffl / fl, ki prejemajo AAV-Cre-GFP v primerjavi z AAV-GFP v NAc. Ugotovili smo, da izbris SRF ni vplival na kopičenje ΔFosB, povzročeno s kokainom, v tej možganski regiji (slika 4C).
Slika 4.
Izguba SRF ni vplivala na kokainsko indukcijo ΔFosB ali kokainsko reguliranega vedenja. A, B, Ponavljajoča izpostavljenost kokainu (7 d, 20 mg / kg kokain-HCl) ni vplivala na ekspresijo proteina SRF v NAc (A) ali na SRF, ki se veže na promotor gena fosB v tej možganski regiji (B) 24 h po izpostavljenost zdravilu (n = 5 / skupina). Akumulacija C, ΔFosB, izmerjena imunocitokemično, po kronični izpostavljenosti kokainu ni odvisna od izločitve SRF, specifičnega za NAc. D, E, lokalna delecija SRF iz NAc prav tako ni vplivala na lokomotorno aktivnost po injiciranju slanice (d 1) na kokainsko inducirano lokomotorno aktivnost in preobčutljivost (n = 8 / skupina) (d 1 – 7; D) ali na kokainsko pogojeno prednostno mesto (n = 8 / skupina; E). Prikazani podatki so izraženi kot povprečje ± SEM (prikazano kot vrstice napak).
Da bi nadaljevali s to presenetljivo ugotovitvijo, smo raziskali, ali selektivni izločanje SRF iz NAc spremeni vedenjske odzive na kokain. Skladno s tem, da SRF ne regulira indukcije ΔFosB s kokainom, izločanje SRF, specifično za NAc, ni vplivalo na gibalno aktivnost, ki jo povzroča akutna preobčutljivost kokaina ali lokomotorja, opažena po večkratni izpostavljenosti kokainu (zdravljenje × čas interakcije, F (4,80) = 0.3; p> 0.05) (slika 4D). Prav tako izločanje SRF, specifično za NAc, ni vplivalo na kokainsko pogojeno mesto (t (14) = 0.1; p> 0.05) (slika 4E), kar zagotavlja posredno mero nagrade za kokain.
Razprava
Ta študija je identificirala SRF kot nov vmesni posrednik ΔFosB v NAc po kroničnem socialnem poraznem stresu in vključuje SRF v razvoj depresivnega in anksioznega vedenja. Zagotavljamo neposredne dokaze, da kronični socialni poraz zmanjšuje koncentracijo SRF v NAc za dovzetne, vendar ne odporne živali, in da to zmanjšanje preprečuje indukcijo ΔFosB v tej možganski regiji, kar smo pokazali, da je potrebno za učinkovito spopadanje s kroničnim stresom, odpornost (Vialou et al., 2010). Podobno zmanjšanje izražanja SRF je bilo ugotovljeno pri NAc depresivnih ljudi, kjer je bila tudi ΔFosB mRNA in ekspresija proteina zmanjšana.. V nasprotju s tem, ravni ΔFosB niso bile zmanjšane v NAc občutljivih miši, kljub dolgotrajni regulaciji SRF, ki implicira druge transkripcijske mehanizme, še neznane, pri nadzoru ekspresije ΔFosB. Vzročna vloga SRF pri posredovanju indukcije ΔFosB v NAc po kroničnem stresu je bila ugotovljena z uporabo inducibilne genetske delecije SRF iz te možganske regije. Vedenjska analiza miši s temi nukleotidom, specifičnimi za NAc, nadalje vključuje SRF kot ključno vlogo pri razvoju tako izhodiščnega kot stresno induciranega depresivnega in anksioznega vedenja. V presenetljivem nasprotju je bil deletacija SRF brez učinka na indukcijo ΔFosB kot odziv na kronično uporabo kokaina ali na vedenjske učinke kokaina. Te ugotovitve podpirajo novo specifično vlogo za SRF pri uravnavanju indukcije ΔFosB in vedenjskih odzivov na različne okoljske motnje.
Za SRF-posredovano transkripcijo je bilo prej dokazano, da se odziva na sinaptično aktivnost, ki jo v veliki meri sproži povečan pritok kalcija, kot tudi na okrepljeno nevrotrofno aktivnost, zlasti v primeru nevrotrofnega faktorja iz možganov (BDNF) (Bading et al., 1993; Xia et al., 1996, Johnson et al., 1997, Chang et al., 2004, Kalita et al., 2006, Knöll in Nordheim, 2009). To vzbuja zanimivo vprašanje, zakaj se SRF v NAc zmanjša na občutljivih, vendar ne prožnih miših po kroničnem socialnem poraznem stresu. Ta diferencialna regulacija verjetno ni posredovana z dopaminsko ali BDNF signalizacijo, saj občutljivi miši prikazujejo povečane ravni BDNF beljakovin in povečano signalizacijo BDNF v NAc, kot tudi okrepljeno burstno žarčenje dopaminskih nevronov ventralnega tegmentalnega območja (VTA), ki obnavljajo NAc, medtem ko elastične živali kažejo normalno raven signalizacije BDNF in hitrosti vžiganja VTA (Krishnan et al., 2007). Druga možnost je, da se ekspresija SRF v NAc potisne kot odziv na spremenjeno glutamatergično inervacijo te možganske regije, za katero smo pokazali, da je diferencialno regulirana pri občutljivih proti prožnim mišim (Vialou et al., 2010). Potrebno je nadaljnje delo za neposredno preučevanje tega in drugih možnih mehanizmov.
Nedavne študije z uporabo genoma in drugih metod kažejo, da so N5 – 10% ciljnih genov SRF v nevronih neposredni zgodnji geni (Philippar et al., 2004; Ramanan et al., 2005; Etkin et al., 2006; Nordheim, 2009). To je skladno z našimi podatki, ki kažejo kritično vlogo SRF pri indukciji ΔFosB, okrnjenega produkta fosb neposrednega zgodnjega gena, s kroničnim stresom. Zanimivo je, da številni ciljni geni SRF, identificirani v teh različnih študijah, predstavljajo tudi znane cilje ΔFosB v NAc (Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2008, 2009; Maze et al., 2010). Med temi običajno urejenimi geni je nekaj, za katere je znano, da uravnavajo nevronski citoskelet (npr. Cdk5, Arc in Actb). To je v skladu s poročili, da SRF vpliva na dinamiko aktina in nevronsko gibljivost v več vrstah nevronskih celic (Alberti et al., 2005; Ramanan et al., 2005; Knöll et al., 2006), medtem ko je ΔFosB znano, da vplivajo na dendritično izraste hrbtenice NAc nevronov (Maze et al., 2010). Takšne skupne funkcionalne končne točke lahko odražajo usklajene učinke SRF, skupaj z njegovo indukcijo ΔFosB, ki delujejo na vrsto skupnih ciljnih genov, da vplivajo na morfologijo nevronov in na koncu na kompleksno vedenje.
Dokazano je tudi, da ima SRF kritično vlogo pri regulaciji sinaptične plastičnosti in nevronske ekspresije in vedenja genov glede na aktivnost. Na primer, izguba SRF-odvisne indukcije neposrednih zgodnjih genov kot odgovor na prostovoljno raziskovanje novega okolja ali nevronske aktivacije z elektro konvulzivnimi napadi je bila povezana z okvarjenim dolgoročnim sinaptičnim potenciranjem v hipokampusih mutantov Srf (Ramanan et al. Etkin et al., 2005). Poleg tega se je pokazalo, da izčrpanje SRF v hipokampusu povzroča primanjkljaje v dolgoročni sinaptični depresiji, takojšnja zgodnja genska ekspresija, ki jo povzroča nov kontekst, in slabša navado med raziskovanjem novega okolja (Etkin et al., 2006). Ti podatki dokazujejo pomen SRF v sposobnosti živali, da se ustrezno prilagodi na motnje v okolju, kot v prej omenjenem primeru učenja privajanja na novo okolje ali, v primeru prilagajanja negativnim stresnim dražljajem, za preprečevanje širjenja stresa -inducirani vedenjski primanjkljaji, kot v naši sedanji študiji. Tako opažamo, da živali, ki kažejo primanjkljaj v izražanju SRF, bodisi kot odgovor na stres zaradi socialnega poraza pri dovzetnih posameznikih bodisi z neposrednim rušenjem SRF, kažejo povečano depresivno in tesnobno podobno vedenje. Glede na to, da imajo depresivni človeški subjekti tudi prisotne znižane ravni SRF v NAc, je možno, da SRF igra temeljno vlogo pri uravnavanju posameznikove sposobnosti pozitivnega prilagajanja negativnim okoljskim dražljajem, deloma z regulacijo izražanja ΔFosB v NAc.
RAZLIKOVALNI MEHANIZMI: ZAVOJNOST VS STRES ODPORNOST
Presenetljiva ugotovitev te študije je, da čeprav je SRF potreben za akumulacijo ΔFosB v NAc kot odziv na kronični stres, ni potrebna za indukcijo ΔFosB znotraj iste možganske regije kot odziv na kronični kokain. Prav tako SRF ni potreben za normalne vedenjske odzive na zdravilo. Ti podatki kažejo, da kljub dejstvu, da je ΔFosB induciran v NAc kot odziv na številne vrste dražljajev (Nestler et al., 1999; Nestler, 2008), se zdi, da so različne molekularne poti, ki vodijo do indukcije ΔFosB. Ena od možnih razlag teh ugotovitev so delno različni tipi celic, ki kažejo akumulacijo ΔFosB kot odziv na stres v primerjavi s kokainom. Kronični stres povzroča ΔFosB približno enakomerno v dveh večjih subpopulacijah kostnih nevronov, ki izražajo pretežno D1 v primerjavi z dopaminskimi receptorji D2, medtem ko kronični kokain inducira ΔFosB pretežno znotraj D1 + nevronov (Kelz et al., 1999; Perrotti et al., 2004; . Tako je možno, da so poti, odvisne od SRF, pomembne za indukcijo ΔFosB v D2 + nevronih.. Vendar pa to ne bi razložilo popolne izgube indukcije ΔFosB pri SRF-jevih miših po kroničnem stresu, ker se indukcija pojavlja v obeh podtipih nevronov. Druga možna razlaga je, da kronični stres in kronični kokain posegata v različne celične signalne kaskade zaradi svojih različnih načinov delovanja na nevroni NAc, s kroničnim stresom, ki morda delujejo prek spremenjenega glutamatergičnega prenosa, kot je bilo že omenjeno, in kroničnega kokaina, ki deluje predvsem prek D1 receptorsko signaliziranje (Nestler, 2008). Še ena možnost je, da je indukcija ΔFosB s kroničnim stresom v primerjavi s kroničnim kokainom odvisna od različnih transkripcijskih mehanizmov, ki so različno kontrolirani z različnimi nevronskimi vnosi, ki innervirajo NAc iz različnih glutamatergičnih projekcijskih območij, na primer več regij prefrontalnega skorje, hipokampusa in amigdale. Potrebno je še veliko nadaljnjega dela za raziskovanje teh in alternativnih možnosti.
Naše ugotovitve skupaj opredeljujejo nov transkripcijski mehanizem, preko katerega se v NAc inducira ΔFosB, ki posreduje odzivnost proresilience na stresne dražljaje. Ta študija zagotavlja tudi pomemben nov vpogled v vlogo, ki jo ima SRF na ravni NAc pri regulaciji depresivnega in anksioznega vedenja.. Boljše razumevanje transkripcijske vloge SRF pri uravnavanju takšnega vedenja bo pomagalo pri identifikaciji novih genskih tarč, ki sodelujejo pri odpornosti na motnje, povezane s stresom, in lahko olajša prihodnji razvoj učinkovitejših antidepresivnih terapij.
To delo so podprli štipendije Nacionalnega inštituta za duševno zdravje in Nacionalnega inštituta za zlorabo drog in raziskovalno zavezništvo z AstraZeneca. Zahvaljujemo se Davidu D. Gintyju za zagotavljanje Srffl / fl miši.
Korespondenco je treba nasloviti na Eric J. Nestlerja, oddelek za nevroznanost Fishberg, medicinsko šolo Mount Sinai, eno mesto Gustave L. Levy, polje 1065, New York, NY 10029-6574. [e-pošta zaščitena]
Avtorske pravice © 2010 avtorji 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
Reference
1. ↵
1. Alberti S,
2. Krause SM,
3. Kretz O,
4. Philippar U,
5. Lemberger T,
6. Casanova E,
7. Wiebel FF,
8. Schwarz H,
9. Frotscher M,
10. Schütz G,
11. Nordheim A
(2005) Za migracijo nevronov v glodalnem migracijskem toku morskega tkiva je potreben serumski odzivni faktor. Proc Natl Acad Sci ZDA 102: 6148 – 6153.
Povzetek / prosti tekst
2. ↵
1. Bading H,
2. Ginty DD,
3. Greenberg ME
(1993) Regulacija izražanja genov v hipokampalnih nevronih s pomočjo različnih poti signaliziranja kalcija. Znanost 260: 181 – 186.
Povzetek / prosti tekst
3. ↵
1. Berton O,
2. McClung CA,
3. Dileone RJ,
4. Krishnan V,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Graham D,
8. Tsankova NM,
9. Bolanos CA,
10. Rios M,
11. Monteggia LM,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2006b) Bistvena vloga BDNF v mezolimbični poti dopamina pri socialnem poraznem stresu. Znanost 311: 864 – 868.
Povzetek / prosti tekst
4. ↵
1. Berton O,
2. Covington HE 3rd.,
3. Ebner K,
4. Tsankova NM,
5. Carle TL,
6. Ulery P,
7. Bhonsle A,
8. Barrot M,
9. Krishnan V,
10. Singewald GM,
11. Singewald N,
12. Birnbaum S,
13. Neve RL,
14. Nestler EJ
(2007) Indukcija ΔFosB v perikaqueductal sivi s stresom spodbuja aktivne odzivne oblike. Nevron 55: 289 – 300.
CrossRefMedline
5. ↵
1. Chang SH,
2. Poser S,
3. Xia Z
Nova vloga faktorja serumskega odziva pri preživetju nevronov. J Neurosci 2004: 24 – 2277.
Povzetek / prosti tekst
6. ↵
1. Etkin A,
2. Alarcón JM,
3. Weisberg SP,
4. Touzani K,
5. Huang YY,
6. Nordheim A,
7. Kandel ER
(2006) Vloga pri učenju za SRF: izbris v odrasli forebrain moti LTD in nastanek takojšnjega spomina na nov kontekst. Nevron 50: 127 – 143.
CrossRefMedline
7. ↵
1. Heinze HJ,
2. Heldmann M,
3. Voges J,
4. Hinrichs H,
5. Marco-Pallares J,
6. Hopf JM,
7. Müller UJ,
8. Galazky I,
9. Sturm V,
10. Bogerts B,
11. Münte TF
(2009) Preprečevanje spodbujevalne senzibilizacije v hudi odvisnosti od alkohola z uporabo globoke možganske stimulacije nucleus accumbens: klinični in osnovni znanstveni vidiki. Spredaj Hum Neurosci 3: 22.
Medline
8. ↵
1. Johnson CM,
2. Hill CS,
3. Chawla S,
4. Treisman R,
5. Oslabitev H
(1997) Kalcij nadzira gensko ekspresijo preko treh različnih poti, ki lahko delujejo neodvisno od signalne kaskade Ras / mitogen-aktiviranih protein kinaz (ERK). J Neurosci 17: 6189 – 6202.
Povzetek / prosti tekst
9. ↵
1. Kalita K,
2. Kharebava G,
3. Zheng JJ,
4. Hetman M
(2006) Vloga megakaryoblastične akutne levkemije-1 pri stimulaciji transkripcije, ki jo povzroča BDNF, odvisna od serumskega odziva, odvisna od ERK1 / 2 ali povečane sinaptične aktivnosti. J Neurosci 26: 10020 – 10032.
Povzetek / prosti tekst
10. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA Jr.
4. Whisler K,
5. Gilden L,
6. Beckmann AM,
7. Steffen C,
8. Zhang YJ,
9. Marotti L,
10. Self DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. Surmeier DJ,
14. Neve RL,
15. Duman RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ
(1999) Izražanje transkripcijskega faktorja ΔFosB v možganih nadzoruje občutljivost na kokain. Narava 401: 272 – 276.
CrossRefMedline
11. ↵
1. Knöll B,
2. Nordheim A
(2009) Funkcionalna raznolikost transkripcijskih faktorjev v živčnem sistemu: SRF paradigma. Trendi Neurosci 32: 432 – 442.
CrossRefMedline
12. ↵
1. Knöll B,
2. Kretz O,
3. Fiedler C,
4. Alberti S,
5. Schütz G,
6. Frotscher M,
7. Nordheim A
(2006) Serumski odzivni faktor nadzira sestavljanje nevronskega vezja v hipokampusu. Nat Neurosci 9: 195 – 204.
CrossRefMedline
13. ↵
1. Krishnan V,
2. Han MH,
3. Graham DL,
4. Berton O,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Laplant Q,
8. Graham A,
9. Lutter M,
10. Lagace DC,
11. Ghose S,
12. Reister R,
13. Tanni P,
14. Zelena TA,
15. Neve RL,
16. Chakravarty S,
17. Kumar A,
18. Eisch AJ,
19. Self DW,
20. Lee FS,
21. et al.
(2007) Molekularne prilagoditve, ki so podlaga za občutljivost in odpornost na socialni poraz v regijah, ki prejemajo možgansko nagrado. Celica 131: 391 – 404.
CrossRefMedline
14. ↵
1. Kuhn J,
2. Bauer R,
3. Pohl S,
4. Lenartz D,
5. Huff W,
6. Kim EH,
7. Klosterkoetter J,
8. Sturm V
(2009) Opažanja o prenehanju kajenja po globokem možganskem stimuliranju nucleus accumbens. Eur Addict Res 15: 196 – 201.
CrossRefMedline
15. ↵
1. Kumar A,
2. Choi KH,
3. Renthal W,
4. Tsankova NM,
5. Theobald DE,
6. Truong HT,
7. Russo SJ,
8. Laplant Q,
9. Sasaki TS,
10. Whistler KN,
11. Neve RL,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2005) Preoblikovanje kromatina je ključni mehanizem, ki temelji na plastičnosti v striatumu, ki jo povzroča kokain. Nevron 48: 303 – 314.
CrossRefMedline
16. ↵
1. Maze I,
2. Covington HE 3rd.,
3. Dietz DM,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Mehanik M,
8. Mouzon E,
9. Neve RL,
10. Haggarty SJ,
11. Ren Y,
12. Sampath SC,
13. Hurd YL,
14. Greengard P,
15. Tarakhovsky A,
16. Schaefer A,
17. Nestler EJ
(2010) Bistvena vloga histonske metiltransferaze G9a v plastičnosti, ki jo povzroča kokain. Znanost 327: 213 – 216.
Povzetek / prosti tekst
17. ↵
1. McClung CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. Zachariou V,
5. Berton O,
6. Nestler EJ
(2004) DeltaFosB: molekularno stikalo za dolgoročno prilagoditev v možganih. Brain Res Mol Brain Res 132: 146 – 154.
Medline
18. ↵
1. Nestler EJ
(2008) Transkripcijski mehanizmi odvisnosti: vloga deltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 363: 3245 – 3255.
Povzetek / prosti tekst
19. ↵
1. Nestler EJ,
2. Carlezon WA Jr.
(2006) Mezolimbični krog nagrajevanja dopamina pri depresiji. Biološka psihiatrija 59: 1151 – 1159.
CrossRefMedline
20. ↵
1. Nestler EJ,
2. Kelz MB,
3. Chen J
(1999) ΔFosB: molekularni posrednik dolgotrajne nevronske in vedenjske plastičnosti. Brain Res 835: 10 – 17.
CrossRefMedline
21. ↵
1. Newton SS,
2. Thome J,
3. Wallace TL,
4. Shirayama Y,
5. Schlesinger L,
6. Sakai N,
7. Chen J,
8. Nikoli,
9. Nestler EJ,
10. Duman RS
(2002) Inhibicija cAMP odzivnega elementa, ki veže protein ali dynorphin v nucleus accumbens, povzroči antidepresiven učinek. J Neurosci 22: 10883 – 10890.
Povzetek / prosti tekst
22. ↵
1. Nikulina EM,
2. Arrillaga-Romany I,
3. Miczek KA,
4. Hammer RP Jr.
(2008) Dolgotrajna sprememba v mezokortikolimbičnih strukturah po večkratnem socialnem poraznem stresu pri podganah: časovni potek mRNA mio opioidnih receptorjev in imunoreaktivnost FosB / DeltaFosB. Eur J Neurosci 27: 2272 – 2284.
CrossRefMedline
23. ↵
1. Perrotti LI,
2. Hadeishi Y,
3. Ulery PG,
4. Barrot M,
5. Monteggia L,
6. Duman RS,
7. Nestler EJ
(2004) Indukcija ΔFosB v možganskih strukturah, povezanih z nagrajevanjem, po kroničnem stresu. J Neurosci 24: 10594 – 10602.
Povzetek / prosti tekst
24. ↵
1. Perrotti LI,
2. Weaver RR,
3. Robison B,
4. Renthal W,
5. Maze I,
6. Yazdani S,
7. Elmore RG,
8. Knapp DJ,
9. Selley DE,
10. Martin BR,
11. Sim-Selley L,
12. Bachtell RK,
13. Self DW,
14. Nestler EJ
(2008) Različni vzorci indukcije DeltaFosB v možganih zaradi zlorabe drog. Synapse 62: 358 – 369.
CrossRefMedline
25. ↵
1. Philippar U,
2. Schratt G,
3. Dieterich C,
4. Müller JM,
5. Galgóczy P,
6. Engel FB,
7. Keating MT,
8. Gertler F,
9. Schüle R,
10. Vingron M,
11. Nordheim A
(2004) Ciljni gen SRF Fhl2 antagonizira RhoA / MAL-odvisno aktivacijo SRF. Mol Cell 16: 867 – 880.
CrossRefMedline
26. ↵
1. Ramanan N,
2. Shen Y,
3. Sarsfield S,
4. Lemberger T,
5. Schütz G,
6. Linden DJ,
7. Ginty DD
(2005) SRF posreduje gensko ekspresijo, inducirano z aktivnostjo, in sinaptično plastičnost, ne pa tudi nevronalno viabilnost. Nat Neurosci 8: 759 – 767.
CrossRefMedline
27. ↵
1. Renthal W,
2. Carle TL,
3. Maze I,
4. Covington HE 3rd.,
5. Truong HT,
6. Alibhai I,
7. Kumar A,
8. Montgomery RL,
9. Olson EN,
10. Nestler EJ
(2008) Delta FosB posreduje epigenetsko desenzibilizacijo gena c-fos po kronični izpostavljenosti amfetaminu. J Neurosci 28: 7344 – 7349.
Povzetek / prosti tekst
28. ↵
1. Renthal W,
2. Kumar A,
3. Xiao G,
4. Wilkinson M,
5. Covington HE 3rd.,
6. Maze I,
7. Sikder D,
8. Robison AJ,
9. LaPlant Q,
10. Dietz DM,
11. Russo SJ,
12. Vialou V,
13. Chakravarty S,
14. Kodadek TJ,
15. Stack A,
16. Kabbaj M,
17. Nestler EJ
(2009) Genomska analiza kromatine pri kokainu kaže na vlogo sirtuinov. Nevron 62: 335 – 348.
CrossRefMedline
29. ↵
1. Schlaepfer TE,
2. Cohen MX,
3. Frick C,
4. Kosel M,
5. Brodesser D,
6. Axmacher N,
7. Joe AY,
8. Kreft M,
9. Lenartz D,
10. Sturm V
(2008) Globalna stimulacija možganov za nagrajevanje vezja olajša anhedonijo pri neodzivni veliki depresiji. Nevropsihofarmakologija 33: 368 – 377.
CrossRefMedline
30. ↵
1. Sesack SR,
2. Grace AA
(2010) Mreža za nagrajevanje kortiko-bazalnih ganglijev: mikrocirkuliranje. Nevropsihofarmakologija 35: 27 – 47.
CrossRefMedline
31. ↵
1. Tomita H,
2. MP,
3. Walsh DM,
4. Evans SJ,
5. Choudary PV,
6. Li J,
7. Overman KM,
8. Atz ME,
9. Myers RM,
10. Jones EG,
11. Watson SJ,
12. Akil H,
13. Bunney WE Jr.
(2004) Vpliv agonalnih in postmortemskih faktorjev na profil genske ekspresije: kontrola kakovosti v mikromrežnih analizah ali postmortemskih možganih. Biol Psihiatrija 55: 346 – 352.
CrossRefMedline
32. ↵
1. Tsankova NM,
2. Berton O,
3. Renthal W,
4. Kumar A,
5. Neve RL,
6. Nestler EJ
(2006) Trajna regulacija hipokampalnega kromatina v mišjem modelu depresije in antidepresivnega delovanja. Nat Neurosci 9: 519 – 525.
CrossRefMedline
33. ↵
1. Vassoler FM,
2. Schmidt HD,
3. Gerard ME,
4. Slavni KR,
5. Ciraulo DA,
6. Kornetsky C,
7. Knapp CM,
8. Pierce RC
(2008) Globalna stimulacija možganov lupine nucleus accumbens ublaži ponovno vzpostavitev iskanja droge pri podganah. J Neurosci 28: 8735 – 8739.
Povzetek / prosti tekst
34. ↵
1. Vialou V,
2. Robison AJ,
3. Laplant QC,
4. Covington HE 3rd.,
5. Dietz DM,
6. Ohnishi YN,
7. Mouzon E,
8. Rush AJ 3rd.,
9. Watts EL,
10. Wallace DL,
11. Iñiguez SD,
12. Ohnishi YH,
13. Steiner MA,
14. Warren BL,
15. Krishnan V,
16. Bolaños CA,
17. Neve RL,
18. Ghose S,
19. Berton O,
20. Tamminga CA,
21. Nestler EJ
(2010) ΔFosB v vezjih za nagrajevanje možganov spodbuja odpornost na stres in antidepresivne odzive. Nat Neurosci 13: 745 – 752.
CrossRefMedline
35. ↵
1. Wilkinson MB,
2. Xiao G,
3. Kumar A,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Sikder D,
7. Kodadek TJ,
8. Nestler EJ
(2009) Zdravljenje z imipraminom in prožnost imata podobno regulacijo kromatina v ključni regiji, ki nagrajuje možgane. J Neurosci 29: 7820 – 7832.
Povzetek / prosti tekst
36. ↵
1. Xia Z,
2. Dudek H,
3. Miranti CK,
4. Greenberg ME
(1996) Vhod kalcija preko NMDA receptorja povzroči takojšnjo zgodnjo gensko transkripcijo z mehanizmom, ki je odvisen od MAP kinaze / ERK. J Neurosci 16: 5425 – 5436.
Povzetek / prosti tekst
;