Vnos hrane s prigrizki pri podganah ad libitum se sproži s kombinacijo maščob in ogljikovih hidratov (2014).

. 2014; 5: 250.

Objavljeno na spletu 2014 Mar 31. doi:  10.3389 / fpsyg.2014.00250

PMCID: PMC3978285

Minimalizem

Hrana za prigrizke, kot je krompirjev čips, bistveno prispeva k vnosu energije pri ljudeh. V nasprotju z osnovno hrano se prigrizki zaužijejo skupaj z drugimi obroki, kar lahko privede do ne-homeostatičnega vnosa energije. Hrana za prigrizke je pogosto povezana tudi s hedonsko hiperfagijo, ki je vnos hrane, neodvisno od lakote. Analiza vzorcev možganske aktivnosti z MRI z manganom je že pokazala, da vnos krompirjevih čipov pri podganah, hranjenih z ad libitumom, močno aktivira sistem nagrajevanja možganov podgane, kar lahko vodi v hedonsko hiperfagijo. Namen te študije je bil razviti preferenčni test z dvema izbirama, da bi opredelili molekularne determinante prigrizka, ki sproži dodaten vnos hrane pri podganah, hranjenih z ad libitumom. Različne vrste preskusne hrane so bile trikrat dnevno predstavljene trikrat na dan 10 min. Da bi zmanjšali vpliv organoleptičnih lastnosti, smo vsako preskusno živilo nadeli v homogeni mešanici s standardnim čokoladom. Analizirani so bili vnos hrane in lokomotorna aktivnost, povezana z uživanjem hrane, da bi ocenili učinke, ki jih povzroči preskusna hrana v testu izbire z dvema izbirama. Če povzamemo, maščobe (F), ogljikovi hidrati (CH) in mešanica maščob in ogljikovih hidratov (FCH) so privedli do večjega vnosa hrane v primerjavi s standardno kravjo. Zlasti krompirjeva preskusna hrana (PC) je bila zelo prednostna nad standardno kravjo hrano (STD) in tudi nad njihovimi glavnimi makronutrienti F in CH. Samo FCH je sprožil vnos, ki je primerljiv z osebnim računalnikom. Kljub nizki energijski gostoti je bila testna hrana brez maščob krompirjev čips (ffPC) bistveno prednostna nad STD in CH, ne pa nad F, FCH in PC. Tako lahko sklepamo, da je kombinacija maščobe in ogljikovih hidratov glavna molekularna določitev krompirjevih čipov, ki sprožijo hedonsko hiperfagijo. Uporabljeni test izbire z dvema izbirama bo olajšal prihodnje študije o stimulativnih in zaviralnih učinkih drugih sestavin hrane na vnos nehomostatične hrane.

ključne besede: hrana za prigrizke, vnos hrane, makronutrienti, prehranjevalno vedenje, podgana, test preferenc

UVOD

Slani prigrizki, kot je krompirjev čips, so v zadnjih 21 letih šteli med sedem glavnih prispevalcev k vnosu energije pri otrocih in mladostnikih v ZDA (). Prigrizna hrana ni del naše osnovne prehrane, ampak jo pogosto zaužijemo poleg drugih obrokov. Poleg tega prigrizki kažejo le šibek učinek sitosti, njihova kalorična vsebnost pa ni le delno kompenzirana z zmanjšanim zaužitjem običajnih obrokov (; ). Tako je mogoče sklepati, da poraba hrane s prigrizki vodi do povečanega celotnega vnosa energije. Tako imenovani hedonski vnos hrane je neodvisen od lakote, lahko poruši homeostatsko energijsko ravnovesje in zato privede do hiperfagije, torej vnosa hrane, ki presega sitost ().

Številne študije kažejo, da lahko nekatere vrste hrane pri podganah povzročijo podoben vnos ne-homeostatske energije kot pri ljudeh, kar kaže na obstoj visoko filogenetsko ohranjenega mehanizma nevronske regulacije vnosa hrane. Na primer, pokazalo se je, da podgane, ki imajo dostop do prehrane v kavarni, zavzamejo dvakrat več energije kot podgane, ki imajo dostop samo do običajnega črevesja. Poleg tega se je vzorec hranjenja spremenil od zaužite hrane na osnovi obroka do zauživanja hrane na osnovi prigrizka (). Podobno so podgane, hranjene z ad libitum, z dodatnim dostopom do krompirjevih čipsov, pokazale večji vnos energije kot podgane, ki imajo dodaten dostop samo do standardnega črevesja ().

Več raziskav je preučilo osnovne fiziološke mehanizme, ki so povezani z ne-homeostatičnim vnosom okusne hrane. Pred kratkim se je pokazalo, da prehrana iz kafeterije vpliva na sistem nagrajevanja v možganih podgan () in da krompirjev čips s prigrizki prilagaja aktivnost možganskih področij, ki se odzivajo na znake, ki večinoma urejajo nagrajevanje in odvisnost, vnos hrane, lokomotorno aktivnost in spanje (). Na molekularni ravni so v regulativne mehanizme ne-homeostatskega vnosa hrane vključeni različni sistemi, vključno s hormoni, dopaminom, melanokortini ali drugimi signalnimi molekulami (; ; ). Na primer, zdi se, da hedonski vnos več živil za prigrizek uravnava endogeni opioidni sistem, ker je opioidni antagonist naltrekson zmanjšal prednost pogojenih mest, ki jih povzročajo različne trdne prigrizke pri podganah, hranjenih z ad libitumom (). Endokanabinoidni sistem črevesja je lahko pomemben regulator vnosa maščob ().

Kljub temu pa molekularne determinante hrane, ki sprožijo ne-homeostatski vnos hrane, niso popolnoma označene. V številnih raziskavah je bila kafetična dieta kot okusna krma, ki vsebuje izbor različnih izdelkov, kot so torte, testenine, krompirjev čips, piškoti, sir ali oreški (; ). V drugih raziskavah so bili uporabljeni posamezni prehrambeni izdelki, na primer krompirjev čips () ali Froot zanke® žita (). Prekomerni vnos hrane je bil večinoma povezan z vsebnostjo energije, maščob ali sladkorja v hrani. Poleg tega naj bi vplivale tudi senzorične lastnosti: pri dobro hranjenih podganah je vnos hrane precej povzročil okus ali občutljivost živil, medtem ko se je zdelo, da vsebnost kalorij najbolj prispeva pri podganah z negativnim energijskim ravnovesjem ().

Cilj te študije je bil torej uporabiti test z izbiro hrane z dvema izbirama, s pomočjo katerega lahko določimo aktivnost posameznih komponent hrane za prigrizek, da spodbudijo vnos hrane. Predhodno so bili uporabljeni dvostranski preferenčni testi, na primer za testiranje prednosti podgan za aromo hrane, vpliv dajanja galanina na izbiro hrane ali sorazmerno aromatičnost saharoze / oljnih emulzij (; ). Za naš namen je bil spremenjen dvostranski protokol za trda živila na način, da so dele referenčnega standardnega čokolade v prahu (STD) zamenjali bodisi hrana za prigrizek bodisi posamezne sestavine v koncentraciji, prisotni v prigrizki. Tako bi lahko različna preskusna živila preizkusili glede na referenčno varnostno spolno analizo in drug proti drugemu. Kot vzor za prigrizek so bila testna živila vsake toliko časa predstavljena samo 10 min, podgane pa so imele vedno dostop do običajnih kroglic. Ta testni sistem je bil nato uporabljen za analizo učinkov makronutrientov na vnos krompirjevega čipsa.

MATERIALI IN METODE

ETIČNA IZJAVA

Ta študija je bila izvedena v natančnem skladu s priporočili Vodnika za nego in uporabo laboratorijskih živali Nacionalnega inštituta za zdravje. Protokol je odobril Odbor za etiko eksperimentov na živalih Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg (FAU).

ŽIVALI

Skupno so bili izvedeni testi vedenja s podganami 18. Na začetku so bili testi izvedeni pri osmih samcih podgan Wistar (dve kletki s po štirimi živalmi, začetna teža 210 ± 8 g, hranjene v ciklu 12 / 12 h temno / svetloba, kupljeno iz reke Charles, Sulzfeld, Nemčija). Večina poskusov je bila reproducirana na samcih podgan 10 Sprague Dawley (dve kletki s po petimi živalmi, začetna teža 181 ± 14 g, hranjeni v ciklu 12 / 12 h temno / svetloba, kupljeni iz reke Charles, Sulzfeld, Nemčija). Podgane so imele v celotni študiji dostop do peletov STD (Altromin 1324, Lage, Nemčija) in vode iz pipe.

PREIZKUSITE HRANE

Vsa preskusna živila so bila pripravljena, mešana in zdrobljena v živilskem predelovalcu, da se zagotovi homogenost in podobna tekstura. Testni PC za živila je bil sestavljen iz prahu STD (Altromin 1321, Lage, Nemčija) v mešanici s krompirjevim čipsom 50% („PFIFF Chips Salz“, nearomatiziran, soljen, brez dodanih okusnih spojin ali ojačevalcev okusa, kupljen v lokalnem supermarketu; 49 % ogljikovih hidratov, 35% maščobe, 6% beljakovin, 4% prehranskih vlaknin, 1.8% soli). Testna hrana ffPC je vsebovala 50% krompirjev čips brez maščobe ("Lay's Light Original."®", Z maščobnim nadomestkom olestra (OLEAN)®), nearomatizirani, nasoljeni, brez dodanih okusnih spojin ali ojačevalcev okusa, kupljeni v supermarketu v ZDA; 61% ogljikovih hidratov, 7% beljakovin, 3.4% prehranskih vlaknin, 1.7% soli, 0% maščob) v STD v prahu. Da bi preizkusili kombiniran vpliv makrohranil in maščob na ogljikove hidrate na okusnost krompirjevih sekancev, smo pripravili model krompirjevega čipsa (FCH), ki je bil sestavljen iz 50% prahu STD ter maščobnih in ogljikovih hidratnih sestavin krompirjevega čipsa. Preostali del krompirjevega čipsa (beljakovine, vlaknine, sol in neidentificirane komponente) so namesto STD nadomestili ogljikovi hidrati, da se čim bolj ujemajo z energijsko gostoto modela in računalnika. Tako so FCH sestavljali 50% STD, 17.5% maščobe (sončnično olje, kupljeno v lokalnem supermarketu) in 32.5% ogljikovi hidrati (dekstrin iz koruznega škroba, maltodekstrin, Fluka, Taufkirchen, Nemčija). Poleg tega so bile dele maščob in ogljikovih hidratov v testni hrani FCH ločeno testirane. Tako smo za testiranje vpliva vsebnosti maščobe (F) zmešali 17.5% maščobe z 82.5% STD. Učinek vsebnosti ogljikovih hidratov (CH) smo testirali s hrano, sestavljeno iz 32.5% ogljikovih hidratov in 67.5% STD. Gostota energije različnih preskusnih živil je bila izračunana na podlagi proizvajalčevega označevanja. Izračunane vrednosti in sestava testnih živil sta prikazani v Slika Slika11.

SLIKA 1 

Sestava (masni odstotek) in energijska vsebnost (kcal / 100 g) preskusnih živil: krompirjev čips (PC), krompirjev čips brez maščob (ffPC), vsebnost ogljikovih hidratov v PC (CH), vsebnost maščobe v PC (F) , mešanica maščob in ogljikovih hidratov (FCH) ter standardni čokolada v prahu ...

EKSPERIMENTALNO OBLIKOVANJE

Za dvostranske preferenčne teste so bila testna živila predstavljena trikrat na dan (ob 9 zjutraj, 12: 30 pm in 4 pm), vsakič 10 min (Slika Slika2A2A) v dveh dodatnih razpršilcih hrane (Slika Slika2B2B). Vnos preskusne hrane je bil določen z razliko v teži razpršilnikov hrane pred in po vsakem obdobju dostopa. Poraba energije je bila izračunana z množenjem teh količin zaužite hrane s pripadajočo vsebnostjo energije. Relativni vnos hrane in energije je bil izračunan tako, da se zaužita količina zaužite hrane ali energije določenega preskusnega živila vsoti obeh preskušenih živil. Položaj razpršilnikov hrane in živil, napolnjenih v določenem razpršilniku, je bil spremenjen za vsak preskus, da se prepreči vpliv preferenc na mestu. Poleg tega je bila izmerjena lokomotorna aktivnost podgan, povezana s hranjenjem. V ta namen so bile slike 10-ov posnete prek spletnih kamer, nameščenih nad kletkami (Slika Slika2C2C). Tako dobljene slike 60, posnete v posameznem obdobju dostopa do hrane, so bile ovrednotene s štetjem: eno število je bilo opredeljeno kot "en podgana vzame hrano iz enega razpršilnika hrane". Zaužijene količine hrane, energije in štetja so bile uporabljene za izračun relativnega prispevka vsakega preskusnega živila k skupnemu vnosu hrane dodatno k standardnim kroglicam za zaužitje v vsakem posameznem testu. Vsak poskus smo dva dni zapored izvajali v dveh kletkah s tremi preskusi na dan. Izbrane kombinacije hrane so se ponavljale do šest dni. Naslednji poskusi so bili izvedeni z dvema različnima živalskima kohortama: PC proti CH, PC proti F, PC proti FCH, F proti CH, FCH proti CH, FCH proti F, ffPC proti PC, ffPC proti CH , ffPC v primerjavi s F in ffPC proti FCH.

SLIKA 2 

Pregled zasnove študije: (A) Časovni razpored za tri ločene dvostranske preferenčne teste na en dan ob 9 am, 12.30 pm in 4 pm. (B) Pogled od spredaj kletke med dvema izbirama preferenčnih preskusov z dvema dodatnima razpršilcema preskusne hrane (testna hrana ...

STATISTIČNA ANALIZA

Za statistično analizo smo izračunali odstotek preskusnih živil, ki so jih zaužili v eni kletki med vsakim posameznim testnim preferenčnim 10 min, glede na skupni vnos iz obeh posod za preskusno hrano. Prednostni testi so bili izvedeni kot 6 – 50 posamezni testi (10 min vsak) z 2 – 4 neodvisnimi živalskimi skupinami (kletke), ki vsebujejo posameznike 4 – 5. Analiza variacije z enosmerno ponovljeno meritvijo (ANOVA) s spremenljivko "testni dnevi" ni pokazala pomembnega vpliva te spremenljivke (p <0.05) za večino preskusnih pogojev (glejte Rezultati in razprava za izjeme). Za preizkušene kombinacije PC v primerjavi s FCH (p = 1.06 × 10-7) in PC proti F (p = 4.13 × 10-5) ANOVA je močno vplivala na spremenljivko "testni dnevi". Posledično smo te podatke posebej analizirali za vsak dan.

Pomembnost vnosa hrane za določeno kombinacijo preskusne hrane je izračunala seznanjena, dvostranska študentska enota t-testiranje z orodjem Analysis ToolPak, Microsoft Excel 2013. Povprečne vrednosti posameznih testov so bile izračunane za neodvisne skupine (kletke) in uporabljene za statistično testiranje (n = 2 – 4). Podatki so predstavljeni v Številke 3-5 in Mize Tabele11-4. p-vrednost <0.05 se je štela za pomembno.

SLIKA 3 

Preferenčni testi med dvema izbirama med različnimi testnimi živili: (A) Relativni vnos hrane, (B) relativni vnos energije in (C) relativno preskušanje lokomotorne aktivnosti, povezane s krmljenjem, standardno črevo (STD) v posodah za hrano ali krompirjevem čipsu (PC) v primerjavi s STD kot ...
Tabela 1 

Statistični podatki za "vnos hrane" () "Vnos energije" (B) in "lokomotorna aktivnost" (C) prednostne teste z dvema od naslednjih testnih živil: standardni prah z zelišči (STD), krompirjev čips (PC), ogljikovi hidrati ...
Tabela 4 

Statistični podatki o časovni odvisnosti "vnosa hrane" za preferenčne teste s testnim kombiniranim krompirjevim čipsom (PC) v primerjavi z maščobo (F) in na testne dni 1 – 6.

V skladu s tem je bila izvedena statistična analiza vnosa energije in lokomotorne aktivnosti, povezane s hranjenjem. Celotna korelacija med vnosom hrane in lokomotorno aktivnostjo, povezano s hranjenjem, je bila določena z linearno regresijsko analizo med zaužitjem hrane [g] in s krmljenjem povezano lokomotorno aktivnostjo vsakega posameznega testa v vseh testiranih pogojih.

REZULTATI

Dobro je ugotovljeno, da lahko hrana s prigrizki, kot je krompirjev čips, sproži vnos hrane, ki ni homeostatična. Namen te študije je bil razviti testni sistem za identifikacijo posameznih sestavin hrane za prigrizek, ki so odgovorne za te procese. Nato je bil razvit sistem testiranja uporabljen za raziskovanje prispevka glavnih makrohranil (ogljikovih hidratov in maščob) k vnosu prigrizkov.

Za razvoj presejalnega testa je bil uporabljen potencial preskusne hrane, da bi sprožila vnos hrane pri podganah, ki niso bile prikrajšane ad libitum. Aktivnost hranjenja sta zabeležila dva neodvisna parametra. Najprej smo stehtali količino zaužite hrane. Poleg tega je bila lokomotorna aktivnost, povezana s hranjenjem, zabeležena s kamero. Obe metodi sta pokazali zelo visoko povezanost med vsemi testiranimi pogoji (r = 0.9204, R2 = 0.8471, p <0.001). Aktivnost hranjenja, prikazana kot relativni vnos hrane ali kot relativni vnos energije, je dala podobne rezultate, ki so se razlikovali le za ≤3 odstotne točke, kot je prikazano v Številke 3A, B.

Ker se je absolutna količina vnosa v testno hrano spreminjala iz dneva v dan in je bila na primer odvisna od starosti živali (podatki niso prikazani), smo uporabili preferenčni test z dvema izbirama (Slika Slika2B2B), ki je zabeležil vnos hrane glede na referenčno živilo. Čeprav so bili poskusi hranjenja izvedeni med svetlobnim ciklom dneva, tj. Fazo počitka podgan (), opazili smo precejšen dodaten vnos hrane, kar je bilo odvisno od sestave preskusne hrane. Pri obeh razpršilnikih za hrano je bilo opaziti pomanjkanje stranskih ali krajevnih prednosti, kar je povzročilo podoben vnos hrane in energije iz obeh razpršilnikov brez pomembne razlike (p = 0.3311, Številke 3A, B; Mize 1A, B). Poleg tega so na obeh točilnih napravah za hrano opazili podobno lokomotorno aktivnost, povezano s hranjenjem (p = 0.5089, Slika Slika3C3C; Tabela Tabela1C1C). Ni pomembnih odstopanj (p <0.05) relativnih preferenc za eno od dveh predstavljenih testnih živil med preskusnimi dnevi je bilo mogoče opaziti za kateri koli preskusni pogoj, razen za PC v primerjavi s FC in PC v primerjavi s F. Te izjeme so podrobneje opisane spodaj.

Prvi poskus, ko je bil PC testiran na STD, je privedel do skoraj izključnega zaužitja PC-ja (Številke 3A, B; Mize 1A, B). Nato je bil proučen prispevek dveh glavnih makrohranil PC-ja, in sicer ogljikovih hidratov in maščob, na vnos hrane. V ta namen je bila vsebnost ogljikovih hidratov (testna hrana CH) ali maščobe (testna hrana F) dodana zgoraj opisanim. Obe testni hrani CH in F sta povzročili znatno (CH: p <0.05, F: p <0.001, Slika Slika4A4A; Tabela Tabela22) večji vnos kot STD, pri čemer je F prevladoval nad CH (p <0.001, Slika Slika4A4A; Tabela Tabela22), vendar niti CH niti F nista mogla inducirati vnosa hrane, podobnega PC-ju (Številke 3A, B; Mize 1A, B). Rezultati kažejo, da aktivnosti krompirjevega čipsa, ki povzroča vnos hrane pri neokuženih podganah, ni mogoče razložiti z vsebnostjo maščob ali vsebnostjo ogljikovih hidratov v krompirjevem čipsu.

SLIKA 4 

Relativni vnos hrane med dvema izbirama preferenčnih preferenc (A) z uporabo glavnih makronutrientov krompirjevega čipsa (PC), ogljikovih hidratov (CH), maščob (F) kot tudi maščob in ogljikovih hidratov (FCH) ter običajnega jedka (STD). (B) Dve izbiri prednostnega testa brez maščob ...
Tabela 2 

Statistični podatki za „uživanje hrane“ preferenčnih testov z dvema od naslednjih preskusnih živil: ogljikovi hidrati (CH), standardni prašičji moki (STD), maščobe (F), mešanica maščob in ogljikovih hidratov (FCH), krompirjev čips brez maščob (ffPC) in krompirja ...

Ko pa so kombinirani maščobni in ogljikovi hidratni krompirjevi čipi dodali standardni čoke, je bil vnos te testne hrane FCH podoben (Številke 3A, B; Mize 1A, B) in lokomotorna aktivnost, povezana s hranjenjem, je le nekoliko nižja v primerjavi z računalnikom (Slika Slika3C3C; Tabela Tabela1C1C). Podobno kot PC je bil tudi FCH skoraj izključno zaužit, ko je bil predstavljen v preferenčnem testu pred F ali CH (Slika Slika4A; 4A; Tabela Tabela22).

Dosedanji rezultati kažejo, da učinek krompirjevega čipsa na povečanje vnosa hrane pri podganah, ki niso prikrajšani, povzroča njegova vsebnost kalorij, ki je v bistvu posredovana z vsebnostjo maščob in ogljikovih hidratov. Za nadaljnji preizkus te hipoteze smo hranjeno aktivnost ffPC-ja primerjali z drugimi testnimi živili (STD, PC, FCH, F in CH). Kot je bilo pričakovano, je ffPC pokazal nižjo aktivnost v primerjavi s PC, FCH in F (Slika Slika4B; 4B; Tabela Tabela22). Vendar je povzročil bistveno večji vnos v primerjavi s STD (p <0.05) in CH (p <0.001), kljub večji vsebnosti kalorij v teh dveh preskusnih živilih (Številke Številke11 in 4B4B). Tako lahko sklepamo, da poleg energijske gostote sprožijo vnos PC-ja tudi druge determinante.

Za oceno vpliva posameznih testnih dni na rezultate so bili izvedeni enosmerni ponovljeni ukrepi ANOVA. Le dva eksperimenta sta pokazala pomemben vpliv testnih dni, in sicer preferenčni testi PC-ja proti FCH (p = 1.06 × 10-7) in PC proti F (p = 4.13 × 10-5) (Slika Slika5; 5; Mize Tabele33 in 44). V prvih treh preskusnih dneh je bil vnos FCH pri podganah, ki niso bile navadne FCH, vendar so imele stik z osebnim računalnikom v prejšnjih testih PC proti STD, PC proti F in PC v primerjavi z CH, bistveno manjši od porabe osebnega računalnika (p <0.05). Na preizkusne dneve 4–6 ni bilo mogoče opaziti bistveno večjega vnosa PC v primerjavi s FCH (p > 0.05, Slika Slika5A5A; Tabela Tabela33). Spremembe je povzročil očiten porast vnosa FCH, ki ga je sčasoma zmanjševal vnos PC-ja, medtem ko se je skupni vnos hrane obeh testnih živil med testoma stalno gibal med 70 in 94 g / dan.

SLIKA 5 

(A) relativni vnos hrane (povprečne in posamezne vrednosti šestih različnih testnih dni) med dvema izbirama preferenčnih krompirjevih čipov (PC) v primerjavi z mešanico maščob in ogljikovih hidratov (FCH) in (B) PC glede na vsebnost maščobe v krompirjevih čipsih (F). Srednja vrednost ± standard ...
Tabela 3 

Statistični podatki o časovni odvisnosti "vnosa hrane" za preferenčne teste s krompirjevim čipsom s testno kombinacijo hrane (PC) v primerjavi z mešanico maščob in ogljikovih hidratov (FCH) in na testne dni 1 – 6.

Nasprotno pa ni bilo opaziti jasnega trenda, ko smo v različnih preskusnih dneh primerjali vnos PC-ja v primerjavi s F (Slika Slika5B; 5B; Tabela Tabela44).

DISKUSIJA

Prej je bilo prikazano, da hrana za prigrizke, kot je krompirjev čips, lahko modulira možganske vezi v podganah, ki so povezane z nagrajevanjem, vnosom hrane, sitostjo in lokomotorno aktivnostjo v primerjavi s standardno žrebanjem (). Te modulacije vzorcev aktivnosti so lahko odgovorne za ne-homeostatični vnos prigrizne hrane.

V študijah, ki se ukvarjajo z ne-homeostatskim vnosom hrane ali zasvojenostjo s hrano, so uporabili različna okusna živila, kot so raztopine sladkorja, krajšava, pogača, krompirjev čips, piškoti ali sir (; ; ). Običajno so bili izbrani prehranski predmeti, bogati s sladkorjem, maščobo ali obema. Lahko pa domnevamo, da različne vrste hrane in različne sestavine hrane sprožijo različne fiziološke procese, povezane z vnosom hrane. Zato je pomembno določiti natančne molekularne determinante živilskih izdelkov, ki so odgovorni za čezmerni vnos, in določiti fiziološke poti, ki jih sprožijo različne sestavine hrane.

Namen pričujoče študije je bil razviti test izbire z dvema izbirama za presejanje komponent hrane za prigrizek zaradi njihove zmožnosti sproženja ne-homeostatskega vnosa hrane. Nato je bil uporabljen testni sistem za raziskovanje, kako glavni makronutrienti (ogljikovi hidrati in maščobe) krompirjev čips prispevajo k sprožitvi hedonskega vnosa te posebne prigrizke.

Inducirano hranjeno aktivnost smo zabeležili z dvema neodvisnima odčitkoma. Po eni strani količina zaužite hrane ali energije (Številke 3A, B, 4A, B in 5A, B; Mize 1A, B, , 22-4), po drugi strani pa je bila registrirana lokomotorna aktivnost, povezana s hranjenjem (na primer v Slika Slika3C; 3C; Tabela Tabela1C1C). Parametri odčitavanja vnosa hrane in lokomotorne aktivnosti, povezane s hranjenjem, so pokazali zelo visoko povezanost (r = 0.9204, R2 = 0.8471, p <0.001). Zato bi bilo mogoče izključiti, da bi na primer morebitno razlitje preskusne hrane pristransko vplivalo na rezultate.

Absolutna količina zaužite hrane se je pri različnih posameznikih spreminjala iz dneva v dan in je bila odvisna tudi od različnih nadaljnjih parametrov, kot je starost živali. Poleg tega je bilo dokazano, da je občutljivost nagrad za okusno hrano odvisna od stopnje razvoja podgan (). Zato je bil uporabljen diferencialni preizkus z dvema izbirama (Slika Slika2B2B), ki je zabeležil relativni vnos hrane dveh testnih živil na določeni seji hranjenja. V teh pogojih lahko pride do učinka treninga zaradi predstavitve neznane preskusne hrane v primerjavi z znanim referenčnim živilom. Zato je bil vsak preferenčni test izveden vsaj dva različna dneva, torej šestkrat. Poleg tega je bil položaj razpršilnikov hrane, ki vsebujejo testno hrano, spremenjen po vsakem posameznem testu, da se prepreči razvoj preferenc. Pomanjkanje stranskih ali krajevnih nastavitev je bilo ugotovljeno s testiranjem STD proti STD s šestimi zaporednimi ponovitvami testne nastavitve dva dni zapored. Tukaj ni nobene pomembne razlike med dvema identičnima testnima živilima glede vnosa hrane / energije (p = 0.3311, Številke 3A, B; Mize 1A, B) ali krmljenje povezanih lokomotornih aktivnosti (p = 0.5089, Slika Slika3C; 3C; Tabela Tabela1C1C) je bilo razkrito. Nazadnje, da bi zmanjšali vpliv senzornih parametrov, kot sta konsistenca in okus, smo testna živila ponudili po homogenizaciji v mešanici s STD v prahu. Glede na uporabljene preskusne pogoje je torej mogoče ugotoviti, da so bile razlike v sestavi testnih živil krive za razlike v vnosu hrane. Če povzamemo, zdelo se je, da je vzpostavljeni test izbire z dvema izbirama prinesel zanesljive rezultate in ga je mogoče uporabiti za preverjanje sestavin hrane, povezanih z vnosom hrane, ki ni homeostatična.

Nato je bil razvit vedenjski test uporabljen za raziskovanje vpliva glavnih sestavin maščobe in ogljikovih hidratov na vnos hrane, povzročene s krompirjevim čipom, pri podganah, hranjenih z ad libitumom. Prvi poskus je potrdil, da PC povzroči večji vnos hrane in energije kot STD (Številke 3A, B; Mize 1A, B). Kot je bilo pričakovati, so opazili tudi večji vnos hrane v primerjavi s STD, ko so bile izolirane sestavine krompirjevega čipa maščoba in ogljikovi hidrati ponujene v podobnih koncentracijah, kot so v krompirjevem čipuSlika Slika4A; 4A; Tabela Tabela22). Omeniti velja, da je bila maščobna komponenta bolj aktivna kot komponenta ogljikovih hidratov. Posledično je mogoče sklepati, da zdi, da maščoba prispeva k okusnosti testnega živila. Poroča se, da se prednost podgan za maščobe nauči in vodi do maščobne hrane: podgane, ki so se hranile z visoko maščobno prehrano, so pokazale povečan vnos oljnih emulzij v primerjavi s podganami, ki so prejemale dieto z veliko ogljikovih hidratov (). Poleg tega, da vplivajo na prehrano, maščoba močno prispeva k povečanemu vnosu hrane s tem, da dodatno poveča velikost obroka ().

Vendar se zdi, da so učinki vnosa maščob precej zapleteni. Maščoba (koruzno olje) v mišji ustni votlini je verjetno povzročila aktiviranje dopaminergičnega sistema prek receptorja za dopamin D1, kar se je zdelo kot mediator njegovih okrepitvenih učinkov (). Mogoče je transporter maščobnih kislin CD36 vključen v odkrivanje prehranskih maščob v ustni votlini podgan ali miši. To zgodnje odkrivanje maščob lahko vodi do hitre raje do maščobne hrane ().

Poleg tega so za povečan vnos maščobe odgovorni učinki po zaužitju. V samoregulirani paradigmi infundiranja znotraj želodca se je pokazalo, da podgane zaužijejo večjo količino prehrane z veliko maščobami v primerjavi z dieto z visoko vsebnostjo ogljikovih hidratov z intragastrično infuzijo (). Takšne učinke maščob po zaužitju lahko posredujejo senzorji maščobnih kislin, kot so CD36, GPR40 in GPR120 v tankem črevesju, kar vodi do po-oralnega spodbujanja apetita (; ).

Vendar pa v tej študiji niti sestavina maščob niti ogljikovih hidratov nista mogla povzročiti vnosa hrane, podobnega PC-ju. Le kombinacija obeh komponent (FCH) je privedla do vnosa hrane / energije, primerljive s PC-jem, kar kaže na sinergijski učinek maščob in ogljikovih hidratov (Številke 3A, B; Mize 1A, B). Posledično FCH povzroča večji vnos hrane kot F, CH ali STD (Slika Slika4A; 4A; Tabela Tabela22). Prejšnja študija z dvema različnima skupinama podgan je pokazala, da je skupina, ki je imela dostop do mešane hrane, sestavljene iz maščob in ogljikovih hidratov, zaužila večjo količino hrane v primerjavi s skupino podgan, ki jim je bila zagotovljena hrana samo z visoko vsebnostjo maščob (). Ta rezultat je v skladu s sedanjim rezultatom našega dvostranskega testa na trdne prigrizke. Prednostni testi s tekočo preskusno hrano so že pokazali, da imajo podgane raje emulzijo z maščobami in sladkorjem nad posameznimi sestavnimi deli kot tudi nad standardno zalogo).

Iz teh ugotovitev je mogoče domnevati, da kombinacija makrohranil, maščob in ogljikovih hidratov sproži dodatne učinke v primerjavi z dajanjem le ene od komponent. Ena od raziskav je na primer pokazala, da je pri podganah agonist receptorjev GABA-B receptorja baklofena spodbudil uživanje sladke maščobe, zaviral jesti maščobe, vendar ni vplival na popivanje saharoze (). Te ugotovitve jasno kažejo na prisotnost posebnih mehanizmov, povezanih s čezmernim vnosom različnih makronutrientov ali njihove kombinacije. Poleg tega študija s podganami Opazili so, da mešanica maščobe in sladkorja, ne pa posameznih sestavin, vodi v debelost, ki jo povzroči hiperfagija. Poleg tega mešanica maščobe in sladkorja spreminja izražanje hipotalamičnega nevropeptida na drugačen način v primerjavi z maščobami ali sladkorjem samo ().

Ker so bila testna živila med seboj preizkušena v različnih kombinacijah, se lahko zgodi, da so bile živali poznane s testnimi živili iz prejšnjih preferenčnih testov, vendar naivno na novo uvedena testna hrana. Tako bi lahko novost ali poznavanje testnega živila vplivale na vnos hrane. Zato so bili preferenčni testi izvedeni vsaj šestkrat, tako da so bile živali že po prvem testu seznanjene z obema testnima živilima. Kasnejša analiza ANOVA je pokazala, da spremenljivka "testni dan" ni imela pomembnega vpliva, razen pri preferenčnih testih PC proti FCH in PC v primerjavi z F. Zanimivo je, da je bil v kombinaciji PC-FCH-kombinacija viden trend: podgane oz. ki so bili v tej študiji seznanjeni s PC-jem iz prejšnjih preferenčnih testov (PC v primerjavi s STD, F ali CH), so bili v prvih treh testnih dneh občutno prednost PC-ju nad FCH (p <0.05). V naslednjih testnih dneh se je naklonjenost računalniku zmanjšala (Slika Slika5A; 5A; Tabela Tabela33). Tako lahko sklepamo, da imata FCH in PC podobne zmožnosti, da inducirajo vnos hrane pri podganah, hranjenih z ad libitumom, vendar je PC raje, kadar so podgane naivne na FCH, ne pa na PC. V nasprotju s tem ni bilo opaziti jasnega trenda, ko je bil PC testiran na F. Namesto tega so bili v petih od šestih testnih dni opaženi visoki in stalni preferenci PC-ja proti F. Zato se zdi, da novost določenega preskusnega živila na splošno ni vplivala na prehranjevalne preference, ampak le, ko je bil PC testiran na FCH.

Razpored predstavitve hrane lahko poleg novosti vpliva tudi na vedenje hranjenja. Na primer, lahko pride do utrujenosti hrane ali aklimacije. Zato so bili nekateri preferenčni testi, ki so bili opravljeni na začetku študije, ponovili na koncu celotnega zaporedja (npr. PC proti F, PC proti CH). Ponovitve so dale zelo podobne prvotnim testom. Vendar pa ni mogoče popolnoma izključiti, da se pri uporabljenih pogojih pojavijo utrujenost hrane ali učinki aklimatizacije.

Sposobnost testnih živil STD, CH, F in FCH, da sprožijo vnos hrane, je lahko vpliv njihove ustrezne energijske gostote, ker so imela testna živila, ki so povzročila večji vnos hrane, pogosto višjo kalorično vsebnost (Slika Slika11). Vendar poskusi s ffPC kažejo, da vsebnost energije očitno ni edini sprožilec vnosa hrane pri živali, ki niso prikrajšane. Predstavitev ffPC je privedla do bistveno manjšega dodatnega vnosa hrane v primerjavi z običajnim osebnim računalnikom (p <0.001, Slika Slika4B; 4B; Tabela Tabela22). Ti rezultati kažejo, da je privlačen vnos maščobe manj povezan s teksturnimi lastnostmi maščob, kot je občutek v ustih, ampak bolj s kalorično vsebnostjo ali kemorecepcijo prostih maščobnih kislin v prebavnem traktu ali v gustatorskem sistemu (). V nasprotju s to ugotovitvijo smo že poročali, da pri podganah, ki niso prikrajšane, ni mogoče opaziti preferenc za torte z visoko vsebnostjo maščob v primerjavi s torto brez maščob. Samo podgane, prikrajšane za hrano, so dale prednost torti z veliko maščobami (). Zlasti so bili ffPC zelo prednostni kot STD in CH kljub nižji energijski gostoti ffPC (Slika Slika4B; 4B; Tabela Tabela22). Zato se zdi, da imajo druge komponente ali lastnosti ffPC, ki presegajo vsebnost energije, dodaten vpliv na aktivnost prigriznjene hrane, da spodbudi vnos hrane. Na primer, sol ali vlaknine lahko vplivajo na vnos hrane (; ). Preizkus izbire z dvema izbirama, ki je bil uporabljen v tej študiji, lahko zdaj ponudi uporaben presejalni sistem za nadaljnjo preiskavo (manjših) sestavin krompirjevih sekancev, ki prispevajo k njihovemu ne-homeostatskemu vnosu. Ugotovitev, da vsebnost energije ni edini parameter, ki povzroča vnos hrane, podpira predhodna študija, v kateri je dodatek saharina v maščobni emulziji podobno povečevalno vplival na vnos hrane kot dodajanje saharoze ().

V zaključku je ta študija vzpostavila vedenjsko presejalno orodje, ki je bilo optimizirano za raziskovanje sposobnosti različnih preskusnih živil, da inducirajo vnos hrane pri podganah, hranjenih z ad libitumom. Test je bil uporabljen za preučevanje, kako glavni makronutrienti krompirjevega čipsa, in sicer maščoba in ogljikovi hidrati, prispevajo k sprožitvi hedonskega vnosa hrane. Pokazalo se je, da maščobe močno vplivajo na dodaten vnos hrane, vendar je kombinacija obeh makrohranil identificirana kot glavni prispevek k okusu krompirjevega čipsa. Gostota energije ni edini dejavnik, ki je odgovoren za povečan vnos hrane, saj je ffPC sprožil večji vnos hrane kot druga testna živila z večjo vsebnostjo energije. Preizkus izbire z dvema izbirama, uporabljen v tej študiji, se bo uporabil v prihodnjih preiskavah, da bi odtehtali vpliv manjših sestavin krompirjevih sekancev, tako da bomo lahko bolj natančno razumeli molekularne določitve njihovega vnosa. Poleg tega je treba raziskati, ali mešanica maščob in ogljikovih hidratov lahko povzroči podobne spremembe v vzorcih možganske aktivnosti kot hrana za prigrizek.

PRISPEVKI AVTORJA

Zasnovali in zasnovali poskuse: Tobias Hoch, Monika Pischetsrieder, Andreas Hess. Izvedli poskuse in analizirali podatke: Tobias Hoch. Interpretirali podatke: Tobias Hoch, Monika Pischetsrieder, Andreas Hess. Prispevani reagenti / materiali / orodja za analizo: Monika Pischetsrieder, Andreas Hess. Napisali prispevek: Tobias Hoch, Monika Pischetsrieder, Andreas Hess. Končno odobreno različico, ki bo objavljena: Tobias Hoch, Monika Pischetsrieder, Andreas Hess. Strinjalo se je, da bo odgovoren za vse vidike dela pri zagotavljanju, da so vprašanja, povezana z natančnostjo ali celovitostjo katerega koli dela, ustrezno raziskana in razrešena: Tobias Hoch, Monika Pischetsrieder, Andreas Hess.

Izjava o konfliktu interesov

Avtorji izjavljajo, da je bila raziskava izvedena v odsotnosti komercialnih ali finančnih odnosov, ki bi se lahko razumeli kot potencialno navzkrižje interesov.

Priznanja

Študija je del projekta Nevrotrition, ki ga podpira pobuda FAU Emerging Fields. Miriam Schneider, Centralni inštitut za duševno zdravje, Mannheim, Nemčija, se zahvaljujemo za nasvete pri postavitvi eksperimentalne zasnove in Christine Meissner za lektoriranje rokopisa. Poleg tega smo zelo hvaležni sodnikom, ki so pomagali pri prilagajanju statističnih analiz.

VIRI

  • Alsio J., Olszewski PK, Levine AS, Schioth HB (2012). Mehanizmi prenosa: odvisnost od vedenja in molekularne prilagoditve pri prenajedanju. Spredaj. Nevroendokrinol. 33:127–139 10.1016/j.yfrne.2012.01.002 [PubMed] [Cross Ref]
  • Avena NM, Rada P., Hoebel BG (2009). Popivanje sladkorja in maščob ima občutne razlike v vedenju, podobnem zasvojenosti. J. Nutr. 139 623 – 628 10.3945 / jn.108.097584 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Beauchamp GK, Bertino M. (1985). Podgane (Rattus norvegicus) ne raje slane trdne hrane. J. Comp. Psihola. 99 240–24710.1037/0735-7036.99.2.240 [PubMed] [Cross Ref]
  • Berner LA, Bocarsly ME, Hoebel BG, Avena NM (2009). Baclofen zavira požiranje čiste maščobe, diete, ki ni bogata s sladkorjem ali sladko-maščobo. Behav. Pharmacol. 20 631–634 10.1097/FBP.0b013e328331ba47 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Berthoud HR (2011). Metabolični in hedonski nagoni v nevronskem nadzoru apetita: kdo je šef? Curr. Opin. Neurobiol. 21 888 – 896 10.1016 / j.conb.2011.09.004 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Kapelo D. (2011). Vloga prigrizka v energijskem ravnovesju: biobehevioralni pristop. J. Nutr. 141 158 – 162 10.3945 / jn.109.114330 [PubMed] [Cross Ref]
  • DiPatrizio NV, Astarita G., Schwartz G., Li X., Piomelli D. (2011). Endokanabinoidni signal v črevesju nadzira prehranski vnos maščob. Proc. Natl. Acad. Sci. ZDA 108 12904 – 12908 10.1073 / pnas.1104675108 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Epstein DH, Shaham Y. (2010). Podgane, ki se prehranjujejo s sirom in vprašanje odvisnosti od hrane. Nat. Neurosci. 13 529 – 531 10.1038 / nn0510-529 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Friemel CM, Spanagel R., Schneider M. (2010). Nagrajevanje občutljivosti za okusne prehrambene nagibe med pubertetnim razvojem pri podganah. Spredaj. Behav. Neurosci. 4: 39 10.3389 / fnbeh.2010.00039 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Hoch T., Kreitz S., Gaffling S., Pischetsrieder M., Hess A. (2013). Magnetnoresonančno slikanje z manganom za kartiranje vzorcev možganskih aktivnosti, povezanih z vnosom prigrizkov pri podganah, hranjenih z ad libitumom. PLoS ONE 8: e55354 10.1371 / journal.pone.0055354 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Imaizumi M., Takeda M., Fushiki T. (2000). Učinki vnosa olja na testnem preferenčnem mestu pri miših. Brain Res. 870 150–15610.1016/S0006-8993(00)02416-1 [PubMed] [Cross Ref]
  • Jarosz PA, Sekhon P., Coscina DV (2006). Vpliv opioidnega antagonizma na prehrano s prigrizki pogojenih mest. Pharmacol. Biochem. Behav. 83 257 – 264 10.1016 / j.pbb.2006.02.004 [PubMed] [Cross Ref]
  • la Fleur SE, Van Rozen AJ, Luijendijk MC, Groeneweg F., Adan RA (2010). Prosta izbira z visoko vsebnostjo maščob z visoko vsebnostjo sladkorja povzroči spremembe v izražanju ločnih nevropeptidov, ki podpirajo hiperfagijo. Int. J. Obes. (Lond.) 34 537 – 546 10.1038 / ijo.2009.257 [PubMed] [Cross Ref]
  • Laugerette F., Passilly-Degrace P., Patris B., Niot I., Febbraio M., Montmayeur JP, et al. (2005). Vključenost CD36 pri odkrivanju oroznih snovi v prehranskih lipidih, spontani maščobni nagnjenosti in prebavnih izločkov. J. Clin. Naložite. 115 3177 – 3184 10.1172 / JCI25299 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Lucas F., Sclafani A. (1990). Hiperfagija pri podganah, ki nastane zaradi mešanice maščobe in sladkorja. Fiziol. Behav. 47 51–5510.1016/0031-9384(90)90041-2 [PubMed] [Cross Ref]
  • Martire SI, Holmes N., Westbrook RF, Morris MJ (2013). Spremenjeni vzorci hranjenja pri podganah, ki so bile izpostavljene prijetni prehrani iz kavarne: povečana prigrizek in posledice za razvoj debelosti. PLoS ONE 8: e60407 10.1371 / journal.pone.0060407 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Naim M., Blagovna znamka JG, Christensen CM, Kare M. R, Van Buren S. (1986). Prednost pri podganah za okuse in teksture hrane v prehransko nadzorovanih polčiščenih dietah. Fiziol. Behav. 37 15–2110.1016/0031-9384(86)90377-X [PubMed] [Cross Ref]
  • Pandit R., De Jong JW, Vanderschuren LJ, Adan RA (2011). Nevrobiologija prenajedanja in debelosti: vloga melanokortikov in širše. EUR. J. Pharmacol. 660 28 – 42 10.1016 / j.ejphar.2011.01.034 [PubMed] [Cross Ref]
  • Pittmann DW (2010). "Vloga gustratornega sistema pri odkrivanju maščobnih kislin pri podganah", v Zaznavanje maščob: okus, tekstura in učinki po zaužitju eds Montmayeur JP, Le Coutre J., uredniki. (Boca Raton, FL: CRC Press)
  • Prats E., Monfar M., Castella J., Iglesias R., Alemany M. (1989). Vnos energije podgan, ki so se prehranjevale s kavarniško prehrano. Fiziol. Behav. 45 263–27210.1016/0031-9384(89)90128-5 [PubMed] [Cross Ref]
  • Ramirez I., Friedman MI (1990). Prehranska hiperfagija pri podganah: vloga vsebnosti maščob, ogljikovih hidratov in energije. Fiziol. Behav. 47 1157–116310.1016/0031-9384(90)90367-D [PubMed] [Cross Ref]
  • Reed DR, Friedman MI (1990). Sestava prehrane spreminja sprejemanje maščob s podganami. Appetite 14 219–23010.1016/0195-6663(90)90089-Q [PubMed] [Cross Ref]
  • Scheggi S., Secci ME, Marchese G., De Montis MG, Gambarana C. (2013). Vpliv okusnosti na motivacijo za delovanje s kalorično in nekalorično hrano pri podganah, ki niso prikrajšane za hrano in niso prikrajšane za hrano. Nevroznanost 236 320 – 331 10.1016 / j.neuroscience.2013.01.027 [PubMed] [Cross Ref]
  • Sclafani A., Ackroff K. (2012). Vloga zaznavanja hranljivih snovi v črevesju pri spodbujanju apetita in kondicioniranju prehranskih navad. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Fiziol. 302 R1119 – R1133 10.1152 / ajpregu.00038.2012 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Sclafani A., Weiss K., Cardieri C., Ackroff K. (1993). Hranjenje podgan na kolače brez maščob in z veliko maščob. Obes. Res. 1 173–17810.1002/j.1550-8528.1993.tb00608.x [PubMed] [Cross Ref]
  • Sclafani A., Zukerman S., Ackroff K. (2013). Senzorji za maščobne kisline GPR40 in GPR120 so kritični za post-oralno, vendar ne za oralno posredovanje maščobnih preferenc pri miših. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Fiziol. 305 R1490 – R1497 10.1152 / ajpregu.00440.2013 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Poševni MM, Mathias KC, Popkin BM (2013). Trendi virov in pijač med otroki in mladostniki v ZDA: 1989-2010. J. Acad. Nutr. Dieta. 113 1683 – 1694 10.1016 / j.jand.2013.06.001 [PMC brez članka] [PubMed] [Cross Ref]
  • Smith BK, York DA, Bray GA (1996). Učinki prehranske preference in dajanja galanina v paraventrikularnem ali amigdaloidnem jedru na prehrano s samo izbiro. Možgani Res. Bik. 39 149–15410.1016/0361-9230(95)02086-1 [PubMed] [Cross Ref]
  • Vitaglione P., Lumaga RB, Stanzione A., Scalfi L., Fogliano V. (2009). Beta-Glukan obogaten kruh zmanjša vnos energije in kratkoročno spremeni plazemske koncentracije grelina in peptida YY. Appetite 53 338 – 344 10.1016 / j.appet.2009.07.013 [PubMed] [Cross Ref]
  • Warwick ZS, Synowski SJ (1999). Vpliv pomanjkanja hrane in vzdrževalne prehrane na preferenco maščob in sprejem pri podganah. Fiziol. Behav. 68 235–23910.1016/S0031-9384(99)00192-4 [PubMed] [Cross Ref]
  • Warwick ZS, Synowski SJ, Rice KD, Smart AB (2003). Neodvisni učinki okusnosti prehrane in vsebnosti maščob na velikost doje in dnevni vnos pri podganah. Fiziol. Behav. 80 253 – 25810.1016 / j.physbeh.2003.07.007 [PubMed] [Cross Ref]
  • Whybrow S., Mayer C., Kirk TR, Mazlan N., Stubbs RJ (2007). Učinki dvotedenske obvezne porabe prigrizkov na vnos energije in energijsko ravnovesje. Debelost (Silver Spring) 15 673 – 685 10.1038 / oby.2007.567 [PubMed] [Cross Ref]