DeltaFosB v jedru je ključnega pomena za okrepitev učinkov seksualne nagrade. (2010)

PRIPOMBE: Delta FosB je označevalec vseh odvisnosti, tako vedenjskih kot kemičnih. Ko se ta molekula povečuje v nagradnem krogu, se povečuje tudi zasvojenost. Je ena izmed molekul, ki sodelujejo pri nevroplastičnih spremembah. Ta poskus kaže, da se povečuje s spolnimi izkušnjami, podobno kot pri odvisnostih od drog. V poskusu so uporabili genski inženiring, da bi zvišali njegovo raven nad "normalno". To je imelo za posledico okrepljeno spodbujanje spolnih aktivnosti. Menimo, da se to zgodi pri zasvojenosti s pornografijo.

POPOLNA ŠTUDIJA

Pitcher KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM.

Geni Brain Behav. 2010 Oct; 9 (7): 831-40 doi: 10.1111 / j.1601-183X.2010.00621.x. Epub 2010 avgust 16.

Oddelek za anatomijo in biologijo celic, Schulichova šola za medicino in zobozdravstvo, Univerza za zahodno Ontario, London, Ontario, Kanada.

POVZETEK

Spolno obnašanje pri podganjih samcih nagrajuje in krepi. Vendar pa je malo znanega o specifičnih celičnih in molekularnih mehanizmih, ki posredujejo spolno nagrajevanje, ali o učinkih nagrajevanja na poznejše izražanje spolnega vedenja. Ta študija preizkuša hipotezo, da ima ΔFosB, stabilno izražena skrajšana oblika FosB, ključno vlogo pri krepitvi spolnega vedenja in spodbujanju spolne motivacije in uspešnosti zaradi izkušenj.

Izkazalo se je, da spolne izkušnje povzročajo kopičenje ΔFosB v več limbičnih regijah možganov, vključno z nucleus accumbens (NAc), medialno prefrontalno skorjo, ventralno tegmentalno območje in kaudatnim putamenom, ne pa tudi medialno preoptično jedro.

Nato smo pri spolno izkušenih in naivnih živalih izmerili indukcijo c-Fos, ciljnega ΔFosB (potlačenega). Število spolno induciranih c-Fos-imunoreaktivnih celic se je pri spolno izkušenih živalih bistveno zmanjšalo v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami.

Končno so bile ravni ΔFosB in njegova aktivnost v NAc manipulirane z uporabo virusnega prenosa genov za preučevanje njegove potencialne vloge pri posredovanju spolnih izkušenj in spodbujanju spolne uspešnosti. Živali s prekomerno ekspresijo ΔFosB so pokazale povečano olajšanje spolne uspešnosti pri spolnih izkušnjah glede na kontrole. V nasprotju s tem je izražanje ΔJunD, ki je prevladujoč negativni vezni partner ΔFosB, zmanjšalo spolno izkušnjo, ki jo je sprožilo olajšanje spolne uspešnosti in ovrženo dolgoročno vzdrževanje olajšanja v primerjavi z zelenimi fluorescenčnimi beljakovinami in skupinami prevelike ekspresije ΔFosB.

Te ugotovitve skupaj podpirajo kritično vlogo izražanja ΔFosB v NAc za krepitev učinkov spolnega vedenja in spodbujanje spolne uspešnosti, ki jo povzročajo spolne izkušnje.

UVOD

Spolno obnašanje je zelo koristno in okrepljeno za moške glodalce (Coolen et al. 2004; Pfaus sod. 2001). Poleg tega spolna izkušnja spremeni poznejše spolno vedenje in nagrado (Tenk sod. 2009). S ponavljajočimi se izkušnjami pri parjenju je spolno vedenje olajšano ali „okrepljeno“, kar dokazujejo zmanjšane latence za sprožitev parjenja in olajšanje spolne uspešnosti (Balfour sod. 2004; Pfaus sod. 2001). Vendar pa so osnovni celični in molekularni mehanizmi spolnega nagrajevanja in okrepitve slabo razumljeni. Spolno obnašanje in pogojeni znaki, ki napovedujejo parjenje, so pokazali, da začasno inducirajo ekspresijo gena c-fos takoj-zgodnjega v mezolimbičnem sistemu pri samcih podgan (Balfour sod. 2004; Pfaus sod. 2001). Poleg tega je bilo nedavno dokazano, da spolna izkušnja povzroča dolgotrajno nevroplastičnost v mezolimbičnem sistemu samcev podgan (Frohmader sod. 2009; Pitchers sod. 2010). Poleg tega se je pri podganjih samcih pokazalo, da spolna izkušnja inducira ΔFosB, a Član družine Fos, v nucleus accumbens (NAc) (Wallace sod. 2008). ΔFosB, odrezana različica FosB, je zaradi svoje večje stabilnosti edinstven član družine Fos (Carle sod. 2007; Ulery-Reynolds sod. 2008; Ulery sod. 2006) in ima pomembno vlogo pri večji motivaciji in nagrajevanju za zlorabe drog in o dolgotrajni nevrološki plastičnosti, ki povzroča odvisnost (Nestler sod. 2001). ΔFosB tvori heteromerni kompleks transkripcijskega faktorja (aktivator protein-1 (AP-1)) z Jun-proteini, prednostno JunD (Chen sod. 1995; Hiroi sod. 1998). Skozi inducirano prekomerno izražanje ΔFosB, primarno omejenega na striatum z uporabo bi-transgenih miši, se proizvaja odvisnost od drog podoben vedenjski fenotip kljub odsotnosti predhodne izpostavljenosti zdravilu. (McClung sod. 2004). Ta vedenjski fenotip vključuje senzibiliziran lokomotorni odziv na kokain (Kelz sod. 1999), povečana prednost kokaina (\ tKelz sod. 1999) in morfij (Zachariou sod. 2006), in povečano samouporabo kokaina (Colby sod. 2003).

Podobno kot nagrada za droge se ΔFosB regulira z naravnim nagrajevanjem in posreduje pri izražanju teh vedenja. Prekomerna ekspresija ΔFosB v NAc z uporabo modelov glodalcev povečuje prostovoljno teka koles (Werme sod. 2002), instrumentalno odzivanje na hrano (Olausson sod. 2006), vnos saharoze (Wallace sod. 2008), in olajša moškega (Wallace sod. 2008) in ženska (Bradley sod. 2005) spolno vedenje. Tako lahko ΔFosB sodeluje pri posredovanju učinkov naravnih izkušenj. Ttrenutna študija razširja predhodne študije s specifičnim raziskovanjem vloge ΔFosB v NAc v dolgoročnih rezultatih spolne izkušnje pri poznejšem parjenju in nevralni aktivaciji v mezolimbičnem sistemu..

  • Najprej je bilo ugotovljeno, katere regije možganov, ki so vpletene v plačilno vezje in spolno vedenje, izražajo ΔFosB, ki ga povzroča spolna izkušnja.
  • Dalje, učinek ΔFosB, ki ga povzroča spolna izkušnja, na izražanje c-Fos, ki je posledica spajanja, spodnji cilj, potlačen z ΔFosB (Renthal sod. 2008), je bila raziskana.
  • Končno, učinek manipuliranja aktivnosti ΔFosB v NAc (prekomerna ekspresija gena in ekspresija dominantnega negativnega veznega partnerja) na spolno vedenje in spodbujanje spolne motivacije ter uspešnosti, ki jo povzroča izkušnja, je bila določena z uporabo tehnologije prenosa virusnih vektorjev.

METODE

živali

Odrasli samci podgan Sprague Dawley (200-225 gramov) so bili pridobljeni od Charles River Laboratories (Senneville, QC, Canada). Živali so bile med poskusi nameščene v kletkah iz pleksi stekla s tunelsko cevjo v istih spolnih parih. Prostor kolonij je bil reguliran s temperaturo in vzdrževan na ciklu 12 / 12 hr svetlo temno s hrano in vodo ad libitum razen med vedenjskim testiranjem. Ženke spodbud (210-220 gramov) za parjenje so dobile subkutani implantat, ki je vseboval 5% estradiol benzoat in 95% holesterola po dvostranski ovariektomiji pod globoko anestezijo (0.35g ketamin / 0.052g ksilazin). Spolno dovzetnost je bila inducirana z dajanjem 500µg progesterona v 0.1 ml sezamovem olju približno 4 ur pred testiranjem. Vse postopke so odobrili odbori za nego živali in uporabo Univerze za zahodni Ontario ter v skladu s smernicami CCAC, ki vključujejo vretenčarje v raziskavah.

Spolno vedenje

Parjenje se je zgodilo v zgodnji temni fazi (med 2 – 6 urami po nastopu temnega obdobja) pod temno rdečo osvetlitvijo. Pred začetkom eksperimenta so bile živali naključno razdeljene v skupine. Med parjenjem so moškim podganam dovolili kopulacijo v ejakulacijo ali 1 uro, zabeležili pa so tudi parametre za spolno vedenje, vključno z: latenco gnezdenja (ML; čas od vnosa ženske do prvega gnezdenja), latenco intromisije (IL; čas od uvedbe ženska do prvega gnezdenja z vaginalno penetracijo), latenca ejakulacije (EL; čas od prvega vdora v ejakulacijo), interval po ejakulaciji (PEI; čas od ejakulacije do prvega naknadnega vdora), število gnezd (M; (IM, gori, vključno s penetracijo vagine) in učinkovitost kopulacije (CE = IM / (M + IM)) (Agmo 1997). V analizo za živali, ki niso pokazale ejakulacije, niso bile vključene številke ojačitev in intromisij. Latence v gorah in intromiciji so parametri, ki kažejo na spolno motivacijo, medtem ko latenca ejakulacije, število vzponov in kopulacijska učinkovitost odražajo spolno uspešnost (Trup 2002).

Eksperiment 1: Izraz ΔFosB

Spolno naivnim samcem podgan je bilo dovoljeno pariti v čistih testnih kletkah (60 × 45 × 50 cm) za zaporedna, dnevna parjenja 5 ali ostanejo spolno naivne. Dodatna tabela 1 opisuje vedenjsko paradigmo za eksperimentalne skupine: naivci brez spolnosti (NNS; n = 5), naivni spol (NS; n = 5), brez seksa (ENS; n = 5) in izkušenega spola (ES; n = 4). NS in ES živali so žrtvovali 1 uro po ejakulaciji na zadnji dan parjenja, da bi raziskali izražanje c-Fos, inducirano s parjenjem. Živali NNS so bile sočasno žrtvovane z živalmi ENS 24 ur po končnem parjenju, da bi preučili spolno izkušene ΔFosB. Spolno izkušene skupine so bile primerne za spolno vedenje pred poznejšim testiranjem. Med skupinami ni bilo ugotovljenih bistvenih razlik za kakršne koli vedenjske ukrepe v okviru ustreznega parjenja in obeh izkušenih skupin so pokazale olajšanje spolnega vedenja zaradi spolnih izkušenj (Dodatna tabela 2). Kontrole so vključevale spolno naivne moške, ki so se sočasno ukvarjale s parjenimi živalmi, ki so zagotavljale izpostavljenost ženskim vonjem in vokalizacijam brez neposrednega ženskega stika.

Za žrtvovanje so bile živali globoko anestezirane z uporabo natrijevega pentobarbitala (270mg / kg; ip) in perfundirane intrakardialno z 50 mL 0.9% fiziološke raztopine, čemur je sledilo 500 mL 4% paraformaldehida v 0.1 M fosfatnem pufru (PB). Možgane smo odstranili in po fiksiranju za 1 h pri sobni temperaturi v istem fiksativu, nato potopili v 20% saharozo in 0.01% natrijev azid v 0.1 M PB in shranili na 4 ° C. Koronalni odseki (35 µm) smo razrezali z zamrzovalnim mikrotomom (H400R, Micron, Nemčija), zbrali v štirih vzporednih serijah v raztopini krioprotektantov (30% saharoze in 30% etilen glikola v 0.1 M PB) in shranili pri -20 ° C. Proste plavajoče sekcije so bile med inkubacijami temeljito sprane z 0.1 M fosfatno pufrano slanico (PBS; pH 7.3-7.4). Odseki so bili izpostavljeni 1% H2O2 za 10 min pri sobni temperaturi, da uničimo endogene peroksidaze, nato blokiramo v PBS + inkubacijski raztopini, ki je PBS, ki vsebuje 0.1% goveji serumski albumin (kataloška postavka 005-000-121; Jackson ImunoResearch Laboratories, West Grove, PA) in 0.4% Triton X -100 (kataloška postavka BP151-500; Sigma-Aldrich) za 1 h. Odseke smo nato inkubirali preko noči pri 4 ° C v pan-FosB-kunčjem poliklonskem protitelesu (1: 5K; sc-48 Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Antifos pan-FosB smo sprožili proti notranji regiji, ki sta jo delili FosB in ΔFosB. Celice ΔFosB-IR so bile specifično ΔFosB-pozitivne, ker je v času po stimulaciji (24 ur) vsa FosB, ki jo je mogoče detektirati, spodbujena (Perrotti sod. 2004; Perrotti sod. 2008). Poleg tega so bile v tem poskusu živali, ki so se parile na zadnji dan (NS, ES), žrtvovane po parjenju 1 h, torej pred FosB ekspresijo. Western blot analiza je potrdila detekcijo ΔFosB pri približno 37 kD. Po inkubaciji primarnih protiteles so sekcije inkubirali za 1 h v biotinsko konjugiranem kozjem anti-kunčjem IgG (1: 500 v PBS +; Vektorskih laboratorijih, Burlingame, CA, ZDA) in nato z 1 h v avidin-biotin-hoseradish peroksidazi (ABC elita) 1: 1K v PBS, Vector Laboratories, Burlingame, CA, ZDA). Po tej inkubaciji so bili deli obdelani na enega od naslednjih načinov:

1. Enotno označevanje s peroksidazo

Odseki NNS in ENS živali so bili uporabljeni za analizo možganov akumulacije ΔFosB, ki jo povzroča spolna izkušnja. Po inkubaciji ABC smo vizualizirali peroksidazni kompleks po obdelavi 10 minut do kromogene raztopine, ki je vsebovala 0.02% 3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) z 0.02% nikljevim sulfatom v 0.1 M PB z vodikov peroksid (0.015%). Odseke smo temeljito izprali z 0.1 M PB, da smo zaključili reakcijo in namestili na kodirana Superfrost plus steklena stekelca (Fisher, Pittsburgh, PA, USA) z 0.3% želatino v ddH20. Po dehidraciji so vsa stekelca pokrita z DPX (dibutil ftalat ksilenom).

2. Dvojna imunofluorescenca

Za analizo ΔFosB in c-Fos smo uporabili dele iz vseh štirih poskusnih skupin, ki vsebujejo NAc in mPFC. Po inkubaciji ABC so sekcije inkubirane za 10 min z biotiniliranim tiramidom (BT; 1: 250 v PBS + 0.003% H2O2 Komplet za ojačanje signalov s tiramidom, NEN Life Sciences, Boston, MA) in za 30 min s konjugiranim strepavidinom Alexa 488 (1: 100; Laboratoriji Jackson Immunoresearch, West Grove, PA). Sekcije nato inkubiramo čez noč s kunčjim poliklonskim protitelesom, ki specifično prepozna c-Fos (1: 150; sc-52; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), čemur sledi inkubacija 30 min s kozjim anti-kunčjim Cy3-konjugiranim sekundarnim protitelesom (1: 200; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA, ZDA). Po barvanju smo sekance temeljito izprali z 0.1 M PB, montiranim na kodirana steklena stekelca z 0.3% želatino v ddH20 in pokrijemo z vodnim nosilnim medijem (Gelvatol), ki vsebuje sredstvo proti blaženju 1,4-diazabiciklo (2,2) oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Imunohistokemične kontrole so vključevale opustitev enega ali obeh primarnih protiteles, kar je povzročilo odsotnost označevanja v ustrezni valovni dolžini.

Analiza podatkov

Analiza možganov ΔFosB

Dva eksperimentatorja, ki sta bila slepa za zdravljenje, sta na kodiranih diapozitivih opravila pregled možganov. ΔFosB-imunoreaktivne (-IR) celice v možganih so bile delno kvantitativno analizirane z uporabo lestvice, ki predstavlja število ΔFosB-pozitivnih celic, kot je opisano v Tabela 1. Poleg tega je bilo na podlagi delno kvantitativnih ugotovitev šteto število ΔFosB-IR celic z uporabo standardnih področij analize v možganskih področjih, ki so vpleteni v nagrajevanje in spolno vedenje, s cevjo za lucida, ki je pritrjena na mikroskop Leica DMRD (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar) , Nemčija): NAc (jedro (C) in lupina (S); 400 × 600µm), analizirano na treh rostralno-kaudalnih ravneh (Balfour sod. 2004); ventralno tegmentalno območje (VTA; 1000 × 800µm), analizirano na treh rostralno-kaudalnih ravneh (Balfour sod. 2004) in VTA rep (Perrotti sod. 2005); prefrontalni korteks (sprednje cinglulate območje (ACA); predlimbna skorja (PL); infralimbija skorje (IL); vsaka 600 × 800µm); repni putamen (CP; 800 × 800µm); in medialno preoptično jedro (MPN; 400 × 600 µm) (Dodatne slike 1 – 3). Dva odseka smo prešteli na podregijo in izračunali povprečno na žival za izračun povprečne vrednosti skupine. Spolno naivno in izkušeno povprečje skupin ΔFosB-IR celic smo primerjali za vsako podregijo z uporabo neparnih t-testov.

Tabela 1     

Povzetek izražanja ΔFosB pri spolno naivnih in izkušenih živalih
Analiza ΔFosB in c-Fos

Slike so bile zajete z ohlajeno CCD kamero (Microfire, Optronics), priključeno na mikroskop Leica (DM5000B, Leica Microsystems; Wetzlar, Nemčija) in programsko opremo Neurolucida (MicroBrightfield Inc) s fiksnimi nastavitvami za vse predmete (z uporabo ciljev 10x). Število celic, ki izražajo c-Fos-IR ali ΔFosB-IR v standardnih področjih analize v jedru in lupini NAc (vsaka 400 × 600µm; Dodatna slika 1) in ACA mPFC (600 × 800µm; Dodatna slika 3) smo ročno prešteli opazovalec, ki je bil slep za eksperimentalne skupine, v 2 delih na žival z uporabo Neurolucida programske opreme (MBF Bioscience, Williston, VT) in povprečil na žival. Skupinska povprečja celic c-Fos ali ΔFosB so primerjali z dvosmerno ANOVA (faktorji: spolna izkušnja in spolna aktivnost) in Fisher LSD za post hoc primerjave na ravni pomembnosti 0.05.

Eksperiment 2: manipulacija z izrazom ΔFosB

Virusni posredni genski prenos Vector

Spolno naivne moške podgane Sprague Dawley so bile pred stereotaksično operacijo naključno razdeljene v skupine. Vse živali so prejele dvostranske mikroinjekcije rekombinantnih adeno-povezanih virusnih (rAAV) vektorjev, ki kodirajo GFP (nadzor; n = 12), divji tip ΔFosB (n = 11) ali prevladujoče-negativni vezni partner ΔFosB, imenovan ΔJunD (n = 9) v NAc. ΔJunD zmanjša transkripcijo, ki jo posreduje ΔFosB, s konkurenčno heterodimerizacijo z ΔFosB pred vezavo regije AP-1 znotraj genskih promotorjev (Winstanley sod. 2007). Virusni titer smo določili z qPCR in ovrednotili vivo pred začetkom študije. Titer je bil 1 – 2 × 1011 infekcijskih delcev na ml. Vektorji rAAV so bili injicirani v volumnu 1.5 µL / strani v 7 minutah (koordinate: AP + 1.5, ML +/− 1.2 iz Bregme; DV-7.6 iz površine lobanje po Paxinos in Watson, 1998) z uporabo Hamiltonove brizge (5µL) Harvard Apparatus, Holliston, MA, ZDA). Vektorji ne povzročajo nobene toksičnosti, ki bi bila večja od samih kontrolnih infuzij (Winstanley et al., 2007; Za podrobnosti o pripravi AAV glejte Hommel et al., 2003). Vedenjski poskusi so se začeli 3 tednov po vektorskih injekcijah, ki omogočajo optimalno in stabilno virusno okužbo (Wallace sod. 2008). Ekspresija transgena v glodalskih vrstah doseže vrhove v 10 dneh in ostane povišana vsaj za 6 mesecev (Winstanley sod. 2007). Na koncu poskusa so bile živali transkardialno perfuzirane in sekcije NAc so imuno-obdelane za GFP (1: 20K; zajčno anti-GFP protitelo; Molecular Probes) z uporabo ABC-peroksidaza-DAB reakcije (kot je opisano zgoraj) na histološko preverite mesta injiciranja z GFP kot oznako (Dodatna slika 4). ΔFosB in ΔJunD vektorji prav tako vsebujejo segment, ki izraža GFP, ločen z notranjim mestom vstopa ribosomov, kar omogoča preverjanje na mestu injiciranja z vizualizacijo GFP pri vseh živalih. V statistične analize so bile vključene samo živali z mestom injiciranja in širjenjem virusa, omejenim na NAc. Širjenje virusa je bilo na splošno omejeno na del NAc in se ni razširilo rostralno-kaudalno po celem jedru. Poleg tega se je širjenje virusa pojavilo večinoma omejeno na lupino ali jedro. Vendar pa variacije mest injiciranja in širjenja znotraj NAc niso vplivale na učinke na vedenje. Nazadnje, injekcije GFP niso vplivale na spolno vedenje ali olajšanje spolnega obnašanja, ki ga povzročajo izkušnje, v primerjavi z živalmi, ki niso bile operirane, iz prejšnjih študij (Balfour sod. 2004).

Spolno vedenje

Tri tedne po prenašanju virusnega vektorja, živali, povezane z enim izlivom (ali za 1 uro) za zaporedne seje parjenja 4, da pridobijo spolno izkušnjo (izkušnje) in so bile nato preizkušene za dolgoročno izražanje izkušenj, spodbujenih s spolnim vedenjem 1 in 2 tednov (testne seje 1 in 2) po končni izkušnji. Parametri spolnega vedenja so bili zabeleženi med vsemi seji parjenja, kot je opisano zgoraj. Statistične razlike za vse parametre med vsakim parjenjem so bile primerjane znotraj in med skupinami z dvosmernimi ponovljenimi merami ANOVA (faktorji: zdravljenje in parjenje) ali enosmerne ANOVA (latenca ejakulacije, število gnezd in intromisij; faktor: zdravljenje ali parjenje Sledili so Fisher LSD ali Newman-Keuls testi za post hoc primerjave na ravni pomembnosti 0.05. Natančneje, spodbujevalni učinki spolnih izkušenj na parametre parjenja so bili primerjani med izkušnjami 1 (naivne) in izkušnjami 2, 3 ali 4, kot tudi med eksperimentalnimi skupinami v vsaki izkušnji. Za analizo učinkov zdravljenja (vektorja) na dolgotrajno olajšanje spolnega vedenja so bili parametri parjenja primerjani med izkušnjami 4 in 1 testne seje in 2 znotraj vsake tretirane skupine in primerjane med eksperimentalnimi skupinami v vsakem testnem obdobju.

REZULTATI

Spolne izkušnje povzročajo kopičenje ΔFosB

Na začetku je bila izvedena semi-kvantitativna raziskava kopičenja ΔFosB v možganih pri spolno izkušenih moških v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami. Povzetek splošnih ugotovitev je na voljo v Tabela 1. ΔFosB-IR analizo smo nadaljevali z določanjem števila celic ΔFosB-IR v več limbično povezanih možganskih regijah z uporabo standardnih področij analize. Slika 1 prikazuje reprezentativne podobe DAB-Ni, ki obarvajo NAc spolno naivnih in izkušenih živali. V podregijah mPFC so ugotovili pomembno regulacijo ΔFosB (Slika 2A), NAc jedro in lupino (2B), repni putamen (2B) in VTA (2C). V NAc so na vseh rostralno-kaudalnih ravneh v jedru in lupini NAc obstajale pomembne razlike, podatki, prikazani v Slika 2 je povprečje na vseh rostroudnih ravneh. V nasprotju s tem ni bilo bistvenega povečanja ΔFosB-IR v hipotalamičnem medialnem preoptskem jedru (NNS: Avg 1.8 +/− 0.26; ENS: Avg 6.0 +/− 1.86).

Slika 1    

 

Reprezentativne slike, ki prikazujejo ΔFosB-IR celice (črne barve) v NAc, ki še niso imele spolnega odnosa (A), in nimajo nobenih spolnih (B) skupin. aco: sprednja komisura Merilna lestvica označuje 100 µm.
Slika 2      

Število celic ΔFosB-IR v: A. subregijah infralimbične (IL), predlimbne (PL) in sprednje cingularne skorje (ACA) medialne prefrontalne skorje; B. jedro in lupino jedrne celice ter repni putamen (CP); C. Rostralna, srednja, repna in repna ...

Spolne izkušnje oslabijo c-Fos, ki ga povzroči parjenje

Učinek spolne izkušnje na ravni ΔFosB v NAc smo potrdili s fluorescenčno barvno tehniko. Poleg tega so bili analizirani učinki spolnih izkušenj na izražanje c-Fos. Slika 3 prikazuje reprezentativne slike ΔFosB- (zelene) in c-Fos (rdeče) -IR celice v vseh eksperimentalnih skupinah (A, NNS; B, NS; C, ENS; D, ES). Spolne izkušnje so znatno povečale izražanje ΔFosB v jedru NAc (Slika 4A: F1,15 = 12.0; p = 0.003) in lupino (Slika 4C: F1,15 = 9.3; p = 0.008). Nasprotno pa parjenje 1 uro pred perfuzijo ni vplivalo na izražanje ΔFosB (Slika 4A, C) in ni bilo zaznane nobene interakcije med spolno izkušnjo in parjenjem tik pred perfuzijo. Obstajal je splošni učinek parjenja pred perfuzijo na izražanje c-Fos v obeh jedrih NAc (Slika 4B: F1,15 = 27.4; p <0.001) in lupino (Slika 4D: F1,15 = 39.4; p <0.001). Poleg tega je bil v jedru NAc odkrit splošni učinek spolnih izkušenj (Slika 4B: F1,15 = 6.1; p = 0.026) in lupino (Slika 4D: F1,15 = 1.7; p = 0.211) in interakcija med spolno izkušnjo in parjenjem pred perfuzijo je bila odkrita v jedru NAc (F)1,15 = 6.5; p = 0.022), s trendom v lupini (F1,15 = 1.7; p = 0.211; F1,15 = 3.4; p = 0.084). Post hoc analize so pokazale, da so v jedru in lupini spolno naivnih moških izražene c-Fos ekspresijeSlika 4B, D). Vendar pa pri spolno izkušenih moških c-Fos ni bil bistveno povečan v jedru NAc (Slika 4B) in znatno oslabljeno v lupini (Slika 4D). Tako je spolna izkušnja povzročila zmanjšanje izražanja c-Fos, povzročenega s parjenjem. Vrednosti P za določene primerjave v parih so v legendah.

Slika 3      

Reprezentativne slike, ki prikazujejo ΔFosB (zeleno) in c-Fos (rdeče) v NAc za vsako poskusno skupino. Vrstica merila kaže 100 µm.
Slika 4      

ΔFosB in c-Fos, inducirani s parjenjem, zaradi spolnih izkušenj. Številke imunoreaktivnih celic ΔFosB (Core, A; Shell, C; ACA, E) ali c-Fos (Core, B; Shell, D; ACA, F) za vsako skupino: NNS (n = 5), NS (n = 5), ENS (n = 5) ali ES (n = 4). Podatki so izraženi ...

Učinek spolnih izkušenj na ravni c-Fos, povzročenih s parjenjem, ni bil omejen na NAc. Podobno zmanjšanje izražanja c-Fos so opazili pri ACA pri spolno izkušenih živalih v primerjavi s spolno naivnimi kontrolami. Spolne izkušnje so pomembno vplivale na izražanje ΔFosB v ACA (Slika 4E: F1,15 = 154.2; p <0.001). Parjenje pred perfuzijo ni vplivalo na izražanje ΔFosB (Slika 4C), vendar je znatno povečal c-Fos (Slika 4F: F1,15 = 203.4; p <0.001) v ACA. Poleg tega je bila ekspresija c-Fos, povzročena s parjenjem, v ACA znatno zmanjšana zaradi spolnih izkušenj (Slika 4F: F1,15 = 15.8; p = 0.001). Za izražanje c-Fos je bila odkrita dvosmerna interakcija med spolno izkušnjo in parjenjem pred perfuzijoSlika 4F: F1,15 = 15.1; p <0.001). Vrednosti P za določene parne primerjave so v slikovnih legendah. Nazadnje ni prišlo do pomembnega zmanjšanja ekspresije c-Fos, povzročene s parjenjem, v medialnem preoptičnem jedru (NS: Avg 63.5 +/− 4.0; ES: Avg 41.4 +/− 10.09), območje, kjer izkušnje s parjenjem niso povzročile pomembne povečanje izražanja ΔFosB, kar kaže, da ekspresija c-Fos, ki jo povzroča parjenje, ni bila prizadeta v vseh možganskih predelih.

ΔFosB v NAc posreduje okrepitev spolnega vedenja

Da bi raziskali potencialni molekularni mehanizem za okrepitev spolnega vedenja, kar je dokazano z izkušnjami, ki jih je spodbudilo spolno vedenje, so bili določeni učinki lokalne manipulacije z ravnmi ΔFosB in njegovo transkripcijsko aktivnost. Spolne izkušnje v štirih zaporednih izkušnjah so imele pomemben vpliv na zakasnitev pri namestitvi (Slika 5A: F1,23 = 13.8; p = 0.001), latencija vnosa (Slika 5B: F1,23 = 18.1; p <0.001) in zakasnitev ejakulacije (Slika 5C: GFP, F11,45 = 3.8; p = 0.006). Kontrolne živali GFP so pokazale pričakovano olajšanje spolnega vedenja, ki ga je povzročilo izkušnje, in pokazale bistveno nižje latence na prvo gnezdenje, prvo intromisijo in ejakulacijo v času izkušenj 4 v primerjavi z izkušnjami 1 (Slika 5A – C; glejte sliko legende za vrednosti p). To olajšanje spolnega vedenja, ki ga je povzročilo izkušnje, je bilo opaženo tudi v skupini ΔFosB za latenco gnojenja in intromisije, vendar ni bilo ugotovljene pomembne razlike v latenci ejakulacije (Slika 5A – C). V nasprotju s tem so ΔJunD živali prikazale zakasnjeno pospeševanje; čeprav so se zakasnitve za montažo, intromisijo in ejakulacije zmanjšale s ponovljenimi sejami parjenja, nobeden od teh parametrov ni dosegel statistične pomembnosti v primerjavi z izkušnjami 1 in 4 (Slika 5A – C). Med primerjanjem skupin za vsako izkušnjo se je pokazalo, da je imelo ΔJunD bistveno daljše latence za vzbujanje, intromit in ejakulacijo med izkušnjami v primerjavi z ΔFosB in GFP (Slika 5A – C). Poleg tega sta imela tako spolna izkušnja kot zdravljenje pomemben vpliv na učinkovitost kopulacije (Slika 5F: spolna izkušnja, F1,12 = 22.5; p <0.001; zdravljenje, F1,12 = 3.3; p = 0.049). Samci ΔFosB so imeli povečano učinkovitost kopulacije med izkušnjami 4 v primerjavi z izkušnjami 1 (Slika 5F). Poleg tega so imele živali ΔFosB bistveno manj nosilcev pred ejakulacijo v času izkušenj 4, v primerjavi z izkušnjami 1 (Slika 5D: F10,43 = 4.1; p = 0.004), in da so imeli samci ΔJunD precej več vzponov pred ejakulacijo, s čimer se je znatno zmanjšala učinkovitost kopulacije, kot katera koli od drugih dveh skupin (Slika 5D in F). Tako so živali GFP in ΔFosB pokazale olajšavo za sprožitev spolnega vedenja in spolne uspešnosti, medtem ko ΔJunD živali niso.

Slika 5      

Spolno obnašanje GFP (n = 12), ΔFosB (n = 11) in ΔJunD (n = 9) živali: latenca (A), latenca intromisije (B), latenca ejakulacije (C), število grebenov (D), število intromisij (E) in učinkovitost kopulacije (F). Podatki so izraženi ...

Da bi testirali hipotezo, da je izražanje ΔFosB ključnega pomena za dolgoročno izražanje izkušenj, ki jih povzroča olajšanje spolnega vedenja, so bile živali testirane 1 teden (testna seja 1) in 2 tedni (testna seja 2) po končni izkušnji. Pospešeno spolno vedenje se je ohranilo v obeh skupinah GFP in ΔFosB, saj se nobeden od vedenjskih parametrov ni razlikoval med testnimi sejami 1 ali 2 in končno izkušnjo 4 v skupinah GFP in ΔFosB (Slika 5A – C; razen latence ejakulacije in učinkovitosti kopulacije v testni seji 1 za ΔFosB živali). Znatne razlike med ΔJunD živalmi in skupinami GFP ali ΔFosB so bile odkrite v obeh preskusih za vse parametre spolnega vedenja (Slika 5A – F). Pri primerjavi števila intromisij, PEI ali odstotkov živali, ki so ejakulirale (100% moških v vseh skupinah, ki so bile ejakulirane med zadnjimi štirimi parjenji), ni bilo odkritih razlik med ali znotraj skupin.

DISKUSIJA

Sedanja študija je pokazala, da spolna izkušnja povzroča kopičenje ΔFosB v več regijah možganov, povezanih z limbicami, vključno z jedrom NAc in lupino, mPFC, VTA in repnim putamenom. Poleg tega je spolna izkušnja oslabila ekspresijo c-Fos v NAc in ACA. Nazadnje se je pokazalo, da je ΔFosB v NAc-u kritičen pri posredovanju olajšanja parjenja med pridobivanjem spolnih izkušenj in dolgoročnim izražanjem izkušenj, ki jih spodbuja spolno vedenje.. Natančneje, zmanjšanje transkripcije, ki jo posreduje ΔFosB, oslabi olajšanje spolne motivacije in uspešnosti, ki jo povzroča izkušnja, medtem ko je prekomerna ekspresija ΔFosB NAc je povzročil okrepljeno pospeševanje spolnega vedenja v smislu povečane spolne uspešnosti z manj izkušnjami. Sedanje ugotovitve podpirajo hipotezo, da je ΔFosB kritični molekularni posrednik za dolgoročno nevronsko in vedenjsko plastičnost, ki jo povzroča spolna izkušnja.

Sedanje ugotovitve razširjajo prejšnje študije, ki kažejo spolno izkušene ΔFosB v NAc pri samcih podgan (Wallace sod. 2008) in ženske hrčke (Hedges sod. 2009). Wallace et al. (2008) pokazala, da je rAAV-Prekomerna ekspresija ΔFosB v NAc je povečala spolno vedenje pri spolno naivnih živalih med prvim parjenjem, \ t kot kaže manj intromisij na ejakulacijo in krajše post-ejakulacijske intervale, vendar ni imelo učinka pri spolno izkušenih moških (Wallace sod. 2008).

Nasprotno pa trenutna študija ni pokazala učinkov prevelikega izražanja ΔFosB pri spolno naivnih moških med prvim testom, ampak med in po pridobitvi spolne izkušnje. Prekomerni ekspresorji ΔFosB so pokazali povečano spolno učinkovitost (povečana učinkovitost kopulacije) v primerjavi z živalmi GFP.

Poleg tega je sedanja študija preizkusila vlogo ΔFosB z blokiranjem prepisovanja z ΔFosB z uporabo virusnega vektorja, ki izraža ΔJunD. Preprečevanje povečanega izražanja ΔFosB, ki ga povzročajo izkušnje, je zavrlo olajševanje spolne motivacije (povečano latenco vzpenjanja in intromisije) ter spolno uspešnost (povečana latenca ejakulacije in število vzponov) in posledično dolgoročno izražanje olajšanega spolnega vedenja.

Ti podatki so torej prvi, ki nakazujejo obvezno vlogo ΔFosB pri pridobivanju izkušenj, ki jih spodbuja spolno vedenje. Poleg tega ti podatki kažejo, da je ΔFosB tudi kritično vključen v dolgoročno izražanje olajšanega vedenja, ki ga povzročajo izkušnje. Predlagamo, da ta dolgoročni izraz olajšanega vedenja predstavlja obliko spomina za naravno nagrado, zato je ΔFosB v NAc posrednik spomina na nagrado. Tudi spolne izkušnje so povečale ravni ΔFosB v VTA in mPFC, ki so bile vpletene v nagrado in spomin (Balfour sod. 2004; Phillips sod. 2008). Prihodnje študije so potrebne za pojasnitev potencialnega pomena regulacije ΔFosB na teh področjih za nagrajevanje spomina.

Izraz ΔFosB je zelo stabilen, zato ima velik potencial kot molekularni posrednik trajnih prilagoditev možganov po kroničnih motnjah (Nestler sod. 2001). Pokazalo se je, da ΔFosB postopoma povečuje NAc v večkratnih injekcijah kokaina in traja do nekaj tednov (Upam, da sod. 1992; Upam, da sod. 1994). Te spremembe v izražanju NAc ΔFosB so povezane s senzibilizacijo in zasvojenostjo z zdravili (Chao & Nestler 2004; McClung & Nestler 2003; McClung sod. 2004; Nestler 2004, 2005, 2008; Nestler sod. 2001; Zachariou sod. 2006). V nasprotju s tem je bila vloga ΔFosB pri posredovanju naravne nagrade premajhna. Nedavni dokazi kažejo, da je indukcija ΔFosB v NAc vključena v naravno nagrajevanje. Raven ΔFosB se podobno poveča v NAc po vnosu saharoze in vožnji s kolesom. Prekomerna ekspresija ΔFosB v striatumu z uporabo bitransgenskih miši ali virusnih vektorjev pri podganah povzroči povečanje vnosa saharoze, večjo motivacijo za hrano in povečano spontano vožnjo koles (Olausson sod. 2006; Wallace sod. 2008; Werme sod. 2002). Sedanji podatki bistveno prispevajo k tem poročilom in nadalje podpirajo idejo, da je ΔFosB kritičen posrednik za okrepitev nagrajevanja in naravni spominski nagrajevalec.

ΔFosB lahko posreduje okrepljeno spolno vedenje, ki ga povzroča izkušnja, z indukcijo plastičnosti v mezolimbičnem sistemu. Dejansko spolna izkušnja povzroča številne dolgotrajne spremembe mezolimbičnega sistema (Bradley & Meisel 2001; Frohmader sod. 2009; Pitchers sod. 2010). pri spolno izkušenih podganjih samcih so pokazali senzibiliziran lokomotorni odziv na amfetamin in okrepljeno nagrado za amfetamin (Pitchers sod. 2010); spremenjen lokomotorni odziv na amfetamin so opazili tudi pri ženskih hrčkih (Bradley & Meisel 2001). Poleg tega je bilo ugotovljeno povečanje števila dendritičnih hrbtenic in zapletenosti dendritičnih stebrov po obdobju abstinence od spolne izkušnje pri samcih podgan (Pitchers sod. 2010). Trenutna študija kaže, da je ΔFosB lahko specifičen molekularni posrednik dolgoročnih rezultatov spolne izkušnje. V dogovoru se je nedavno pokazalo, da je ΔFosB pomemben za induciranje dendritičnih sprememb hrbtenice kot odziva na kronično uporabo kokaina. (Dietz sod. 2009; Maze sod. 2010).

Ni jasno, kateri vzporedni nevrotransmiterji so odgovorni za induciranje ΔFosB v NAc, vendar je DA predlagan kot kandidat (Nye sod. 1995). Skoraj vsa zloraba drog, vključno s kokainom, amfetamini, opiati, kanabinoidi in etanolom, ter naravne koristi povečujejo ΔFosB v NAc. (Perrotti sod. 2005; Wallace sod. 2008; Werme sod. 2002). Tako zloraba zdravil kot tudi naravne koristi povečujejo sinaptično koncentracijo DA v NAc (Damsma sod. 1992; Hernandez & Hoebel 1988a, b; Jenkins & Becker 2003). Indukcija ΔFosB z zdravili za zlorabo je bila prikazana v DA receptorjih, ki vsebujejo celice in kokainom induciran ΔFosB blokiran z antagonistom D1 DA receptorjat (Nye sod. 1995). Zato se predvideva, da sproščanje DA stimulira ekspresijo ΔFosB in s tem posreduje nevroplastičnost, povezano z nagrado.. Nadaljnja podpora ideji, da so ravni ΔFosB odvisne od DA, je ugotovitev, da področja možganov, kjer so spolne izkušnje spremenile vrednosti ΔFosB, prejmejo močan dopaminergični vložek iz VTA, vključno z medialnim prefrontalnim korteksom in bazolateralnim amigdalom..

V nasprotju s tem se ΔFosB ne poveča v medialnem preoptičnem območju, čeprav je to področje prejelo dopaminergični vnos, čeprav iz virov hipotalamusa (Miller & Lonstein 2009). Prihodnje študije so potrebne, da se preveri, ali sta izražanje ΔFosB in učinki spolne motivacije in uspešnosti, povezani s parjenjem, odvisni od delovanja DA. Vloga DA pri spolnem nagrajevanju pri samcih podgan trenutno ni povsem jasna (Agmo in Berenfeld 1990; Pfaus 2009). Obstajajo številni dokazi, da se DA sprosti v NAc med izpostavljenostjo samici ali parjenju (Damsma sod. 1992) in DA nevroni se aktivirajo med spolnim vedenjem (Balfour sod. 2004). Vendar pa sistemske injekcije antagonistov DA receptorjev ne preprečujejo spolne nagrajenosti, pogojene s preferencami mesta (Agmo in Berenfeld 1990) in hipoteza, da je DA kritična za okrepitev parjenja, ki jo povzroči izkušnja, ni testirana.

Prav tako ni jasno, kakšni so spodnji mediatorji učinkov ΔFosB na spolno vedenje. Pokazalo se je, da ΔFosB deluje tako kot transkripcijski aktivator in represor prek AP-1 odvisnega mehanizma (McClung & Nestler 2003; Peakman sod. 2003). Identificirani so bili številni ciljni geni, vključno s takojšnjim genskim c-fos (Upam, da sod. 1992; Upam, da sod. 1994; Morgan & Curran 1989; Renthal sod. 2008; Zhang sod. 2006), cdk5 (Bibb sod. 2001), dynorphin (Zachariou sod. 2006), sirtuin-1 (Renthal sod. 2009), NFkB podenote (Ang sod. 2001) Odin podenoto AMPA glutamatnega receptorja GluR2 (Kelz sod. 1999). Sedanji rezultati kažejo, da so bile stopnje spanja, inducirane s c-Fos, zmanjšane s spolnimi izkušnjami v možganih s povečanim ΔFosB (NAc in ACA). Supresija c-Fosa se zdi odvisna od obdobja zadnjega parjenja in ponovitvene seje parjenja, kot v prejšnjih študijah, tako zmanjšanje c-Fos ni bilo odkrito pri samcih podgan, ki so testirali 1 teden po zadnjem parjenju (Balfour sod. 2004) ali po spolni izkušnji, ki je sestavljena samo iz ene seje parjenja (Lopez in Ettenberg 2002). Poleg tega je trenutna ugotovitev v skladu z dokazom, da ΔFosB zatre gen za c-fos po kronični izpostavljenosti amfetaminu (Renthal sod. 2008). V skladu s temi ugotovitvami je bila indukcija več takojšnjih zgodnih genskih mRNA (c-fos, fosB, c-jun, junB in zif268) zmanjšana po večkratnih injekcijah kokaina v primerjavi z akutnimi injekcijami drog (Upam, da sod. 1992; Upam, da sod. 1994), in c-fos, ki je bil induciran z amfetaminom, je bil po ukinitvi kronične uporabe amfetamina \ tJaber sod. 1995; Renthal sod. 2008). Funkcionalna pomembnost znižane regulacije izražanja c-Fosa po kroničnem zdravljenju ali spolni izkušnji ostaja nejasna in predlagano je, da je pomemben homeostatski mehanizem za uravnavanje občutljivosti živali na ponavljajočo izpostavljenost nagrajevanju (Renthal sod. 2008).

Sklepna ugotovitev je, da trenutna študija dokazuje, da ima ΔFosB v NAc bistveno vlogo pri spominu spolnega nagrajevanja, kar podpira možnost, da je ΔFosB pomemben za splošno okrepitev nagrajevanja in spomin.. Ugotovitve iz sedanje študije dodatno pojasnijo naše razumevanje celičnih in molekularnih mehanizmov, ki posredujejo spolno nagrajevanje in motivacijo, ter dopolnjujejo literaturo, ki kaže, da je ΔFosB pomemben akter v razvoju zasvojenosti, saj dokazuje vlogo ΔFosB v naravni nagradi. okrepitev.

Dodatni material

Supp Slika S1-S4 in tabela S1-S2

Priznanja

To raziskavo so podprli štipendije kanadskih inštitutov za raziskave na področju zdravja pri LMC, Nacionalni inštitut za duševno zdravje EJN in znanstveni svet za naravoslovje in tehnologijo Kanade za KKP in LMC.

VIRI

  1. Agmo A. Spolno vedenje samcev. Brain Res Brain Res Protoc. 1997, 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Okrepitev lastnosti ejakulacije pri samcih podgan: vloga opioidov in dopamina. Behav Neurosci. 1990, 104: 177 – 182. [PubMed]
  3. Ang E, Chen J, Zagouras P, Magna H, Holland J, Schaeffer E, Nestler EJ. Indukcija jedrskega faktorja-kappaB v nucleus accumbens s kronično kokainsko administracijo. J Neurochem. 2001, 79: 221 – 224. [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Spolno vedenje in spolni vplivi na okolje sprožijo mezolimbični sistem pri samcih podgan. Nevropsihofarmakologija. 2004, 29: 718 – 730. [PubMed]
  5. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Učinki kronične izpostavljenosti kokainu ureja nevronska beljakovina Cdk5. Narava. 2001, 410: 376 – 380. [PubMed]
  6. Bradley KC, Haas AR, Meisel RL. 6-Hidroksidopaminske lezije pri ženskah hrčkih (Mesocricetus auratus) odpravljajo občutljive učinke spolnih izkušenj na kopulacijske interakcije z moškimi. Behav Neurosci. 2005, 119: 224 – 232. [PubMed]
  7. Bradley KC, Meisel RL. Spolno obnašanje c-Fos v nucleus accumbens in amfetaminsko stimulirano lokomotorno aktivnost so občutljive na prejšnje spolne izkušnje pri ženskih sirijskih hrčkih. J Neurosci. 2001, 21: 2123 – 2130. [PubMed]
  8. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ. Proteasomsko odvisni in neodvisni mehanizmi za destabilizacijo FosB: identifikacija degronskih domen FosB in posledice za stabilnost DeltaFosB. Eur J Neurosci. 2007, 25: 3009 – 3019. [PubMed]
  9. Chao J, Nestler EJ. Molekularna nevrobiologija odvisnosti od drog. Annu Rev Med. 2004, 55: 113 – 132. [PubMed]
  10. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Regulacija delta FosB in FosB podobnih beljakovin z elektrokonvulzivnim napadom in zdravljenjem s kokainom. Molekularna farmakologija. 1995, 48: 880 – 889. [PubMed]
  11. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Steratalno specifična prekomerna ekspresija DeltaFosB-a povečuje spodbudo za kokain. J Neurosci. 2003, 23: 2488 – 2493. [PubMed]
  12. Coolen LM, Allard J, Truitt WA, Mckenna KE. Centralna regulacija ejakulacije. Physiol Behav. 2004, 83: 203 – 215. [PubMed]
  13. Damsma G, Pfaus JG, Wenkstern D, Phillips AG, Fibiger HC. Spolno obnašanje povečuje prenos dopamina v nucleus accumbens in striatum samcev podgan: primerjava z novostjo in lokomocijo. Behav Neurosci. 1992, 106: 181 – 191. [PubMed]
  14. Dietz DM, Maze I, Mehanik M, Vialou V, Dietz KC, Iniguez SD, Laplant Q, Russo SJ, Ferguson D, Nestler EJ. Bistvena vloga ΔFosB pri kokainski regulaciji dendritičnih brazd nevronov nucleus accumbens. Društvo za nevroznanost Izvleček. 2009
  15. Frohmader KS, Pitchers KK, Balfour ME, Coolen LM. Mešanje užitkov: Pregled učinkov zdravil na spolno vedenje pri ljudeh in živalskih modelih. Horm Behav. 2009 V tiskalniku.
  16. Hedges VL, Chakravarty S, Nestler EJ, Meisel RL. Prekomerna ekspresija Delta FosB v nucleus accumbens povečuje spolno nagrajevanje pri ženskih sirijskih hrčkih. Geni Brain Behav. 2009, 8: 442 – 449. [PMC brez članka] [PubMed]
  17. Hernandez L, Hoebel BG. Hranjenje in stimulacija hipotalamusa povečata promet dopamina v akumbensih. Physiol Behav. 1988a, 44: 599 – 606. [PubMed]
  18. Hernandez L, Hoebel BG. Nagrada za hrano in kokain povečata zunajcelični dopamin v nucleus accumbens, merjeno z mikrodializo. Life Sci. 1988b, 42: 1705 – 1712. [PubMed]
  19. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Greenberg ME, Nestler EJ. Bistvena vloga gena fosB v molekularnem, celičnem in vedenjskem delovanju kroničnih elektro konvulzivnih napadov. J Neurosci. 1998, 18: 6952 – 6962. [PubMed]
  20. Homel JD, Sears RM, Georgescu D, Simmons DL, DiLeone RJ. Lokalni genski knockdown v možganih z uporabo interakcije z virusno posredovano RNA. Nat Med. 2003, 9: 1539 – 1544. [PubMed]
  21. Hope B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ. Regulacija neposredne zgodnje genske ekspresije in vezave AP-1 v podganah jedra accumbens s kroničnim kokainom. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89: 5764-5768. [PMC brez članka] [PubMed]
  22. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Indukcija dolgotrajnega kompleksa AP-1, sestavljenega iz spremenjenih Fos-podobnih beljakovin v možganih s kroničnim kokainom in drugimi kroničnimi zdravljenji. Neuron. 1994, 13: 1235 – 1244. [PubMed]
  23. Trup EM, Meisel RL, Sachs BD. Moško spolno vedenje. Horm Behav. 2002, 1: 1 – 139.
  24. Jaber M, Cador M, Dumartin B, Normand E, Stinus L, Bloch B. Akutno in kronično zdravljenje z amfetamini različno uravnavata nivoje nevropeptidnih RNA in Fos imunoreaktivnost v striatnih nevronih podgan. Nevroznanost. 1995, 65: 1041 – 1050. [PubMed]
  25. Jenkins WJ, Becker JB. Dinamično povišanje dopamina med kopičenjem pri podganah. Eur J Neurosci. 2003, 18: 1997 – 2001. [PubMed]
  26. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Izražanje transkripcijskega faktorja deltaFosB v možganih nadzoruje občutljivost na kokain. Narava. 1999, 401: 272 – 276. [PubMed]
  27. Lopez HH, Ettenberg A. Izpostavljenost samicam podgan daje razlike v indukciji c-fos med spolno naivnimi in izkušenimi samci podgan. Brain Res. 2002, 947: 57 – 66. [PubMed]
  28. Maze I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mehanik M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schhefer Y, Nestler EJ. Bistvena vloga histonske metiltransferaze G9a pri plastičnosti, ki jo povzroča kokain. Znanost. 2010, 327: 213 – 216. [PMC brez članka] [PubMed]
  29. McClung CA, Nestler EJ. Regulacija izražanja genov in kokainske nagrade s strani CREB in DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003, 6: 1208 – 1215. [PubMed]
  30. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekularno stikalo za dolgoročno prilagoditev v možganih. Brain Res Mol Brain Res. 2004, 132: 146 – 154. [PubMed]
  31. Miller SM, Lonstein JS. Dopaminergične projekcije na medialno preoptično področje po porodu. Nevroznanost. 2009, 159: 1384 – 1396. [PMC brez članka] [PubMed]
  32. Morgan JI, Curran T. Stimulacijsko transkripcijsko povezovanje v nevronih: vloga celičnih genov takojšnjega zgodnjega razvoja. Trendi Neurosci. 1989, 12: 459 – 462. [PubMed]
  33. Nestler EJ. Molekularni mehanizmi odvisnosti od drog. Nevrofarmakologija. 2004, 47 Dodatek 1: 24 – 32. [PubMed]
  34. Nestler EJ. Nevrobiologija odvisnosti od kokaina. Sci Pract Perspect. 2005, 3: 4 – 10. [PMC brez članka] [PubMed]
  35. Nestler EJ. Pregled. Transkripcijski mehanizmi odvisnosti: vloga DeltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008, 363: 3245 – 3255. [PMC brez članka] [PubMed]
  36. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: trajno molekularno stikalo za zasvojenost. Proc Natl Acad Sci US A. 2001, 98: 11042-11046. [PMC brez članka] [PubMed]
  37. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakološke študije regulacije kronične indukcije antigena, povezane s FOS, s kokainom v striatumu in nucleus accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995, 275: 1671 – 1680. [PubMed]
  38. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. DeltaFosB v nucleus accumbens uravnava instrumentalno vedenje in motivacijo, okrepljeno s hrano. J Neurosci. 2006, 26: 9196 – 9204. [PubMed]
  39. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducibilna ekspresija dominantnega negativnega mutanta c-Jun v transgenih miših, specifična za možgansko regijo, zmanjša občutljivost na kokain. Brain Res. 2003, 970: 73 – 86. [PubMed]
  40. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB se kopiči v populaciji GABAergičnih celic v posteriornem repu ventralnega tegmentalnega območja po zdravljenju psihostimulantov. Eur J Neurosci. 2005, 21: 2817 – 2824. [PubMed]
  41. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Indukcija deltaFosB v možganskih strukturah, povezanih z nagrajevanjem, po kroničnem stresu. J Neurosci. 2004, 24: 10594 – 10602. [PubMed]
  42. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Različni vzorci indukcije DeltaFosB v možganih zaradi zlorabe drog. Synapse. 2008, 62: 358 – 369. [PMC brez članka] [PubMed]
  43. Pfaus JG. Poti spolne želje. J Sex Med. 2009, 6: 1506 – 1533. [PubMed]
  44. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Kondicioniranje in spolno vedenje: pregled. Horm Behav. 2001, 40: 291 – 321. [PubMed]
  45. Phillips AG, Vacca G, Ahn S. Pogled od zgoraj navzdol na dopamin, motivacijo in spomin. Pharmacol Biochem Behav. 2008, 90: 236 – 249. [PubMed]
  46. Pitcher KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. Nevroplastičnost v mezolimbičnem sistemu, ki jo povzroča naravna nagrada in naknadna abstinenca nagrajevanja. Biol Psychiatry. 2010, 67: 872 – 879. [PMC brez članka] [PubMed]
  47. Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Delta FosB posreduje epigenetsko desenzibilizacijo gena c-fos po kronični izpostavljenosti amfetaminu. J Neurosci. 2008, 28: 7344 – 7349. [PMC brez članka] [PubMed]
  48. Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. Genomska analiza kromatinskega uravnavanja s kokainom kaže na vlogo sirtuinov. Neuron. 2009, 62: 335 – 348. [PMC brez članka] [PubMed]
  49. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitcher KK, Coolen LM. Spolna nagrada pri podganjih samcih: učinki spolnih izkušenj na pogojene krajevne preference, povezane z ejakulacijo in intromisijami. Horm Behav. 2009, 55: 93 – 97. [PMC brez članka] [PubMed]
  50. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Fosforilacija DeltaFosB posreduje njeno stabilnost in vivo. Nevroznanost. 2008
  51. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Regulacija stabilnosti DeltaFosB s fosforilacijo. J Neurosci. 2006, 26: 5131 – 5142. [PubMed]
  52. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar A, Graham DL, Green TA, Kirk A, Iniguez SD, Perrotti LI, Barrot M, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolanos-Guzman CA. Vpliv DeltaFosB-ja v jedru je posledica naravnega obnašanja, povezanega z nagrajevanjem. J Neurosci. 2008, 28: 10272 – 10277. [PMC brez članka] [PubMed]
  53. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB ureja tek koles. J Neurosci. 2002, 22: 8133 – 8138. [PubMed]
  54. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Indukcija DeltaFosB v orbitofrontalnem korteksu posreduje toleranco pri kognitivni disfunkciji, ki jo povzroča kokain. J Neurosci. 2007, 27: 10497 – 10507. [PubMed]
  55. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Bistvena vloga za DeltaFosB v nucleus accumbens v delovanju morfina. Nat Neurosci. 2006, 9: 205 – 211. [PubMed]
  56. Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu M. c-Fos olajšuje pridobivanje in izumrtje kokainskih vztrajnih sprememb. J Neurosci. 2006, 26: 13287 – 13296. [PubMed]