J Neurosci. 2006 May 10;26(19):5131-42.
Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ.
puna
Department of Psychiatry, Center for Basic Neuroscience, The University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, Texas 75390-9070, USA.
lē faʻatino
O le faʻailoga DeltaFosB (faʻapitoa foi o le FosB2 poʻo le FosB [faila pupuu]) o se tagata faufautua taua o le plastice umi o loʻo aʻafia i le faiʻai e ala i le masani ona faʻaalia i le tele o ituaiga o gaioiga o le mafaufau, e aofia ai fualaau o le faʻaleagaina, faʻalavelave, ma le puʻeina o le electroconvulsive . O se vaega iloga o le DeltaFosB o le, pe a osofaia, o loo i ai pea i le faiʻai mo ni vaitaimi uumi i le leai o se isi faʻaosofia. Ae peitai, o faiga e mafua ai lenei tulaga mautinoa, e le o iloa. O iinei, matou te faʻaalia ai o DeltaFosB o se mea e sili ona lelei le tusiga, ma le afa-ola o le 10 h i le aganuʻu. E le gata i lea, matou te faʻaalia o DeltaFosB o se phosphoprotein i le faiʻai ma o le phosphorylation o se serine sili ona faʻasaoina (Ser27) i DeltaFosB e puipuia ai mai le faʻaleagaina o le proteasomal. Matou te tuʻuina atu ni laina o faʻamaoniga e faʻamaonia ai o lenei phosphorylation o loʻo faʻasalalau e le casein kinase 2. O nei sailiiliga o le uluai faʻamaoniga lea o le DeltaFosB o le phosphorylated ma faʻaalia ai o le phosphorylation e fesoasoani i lona tulaga mausali, lea o loʻo i le ogatotonu o lona mafai ona faʻatautaia fetuunaiga tumau i le faiʻai.
faʻatomuaga
O le numera transcription ΔFosB, ua taʻua foi FosB2 poo le FosB [puupuu], o se fesuiaiga o le splice ua maeʻa C i le vave vave fosb (Dobrazanski et al., 1991; Nakabeppu ma Nathans, 1991; Yen et al., 1991). E pei o le FosB atoa, o le ΔFosB o loʻo i ai se vaega faʻapipiʻi DNA ma se laupepa leucine lea e faʻafeiloaʻi ai ma lala o le Jun e fai ai faʻalavelave faʻaliliuga-1 (AP-1), lea e faʻatonutonu ai le faʻamatalaga o le tele o genes (Morgan ma Curran, 1995; Rylski ma Kaczmarek, 2004). E ui lava i le leai o se vaega o le fefaʻasoaʻiga o loʻo maua i le C o le FosB, o galuega a le ΔFOSB e avea uma ma se mea e mafai ona faʻauluina ma faʻapipiiina i totonu o potu faʻalogo ma totonu o le mafaufau (Dobrazanski et al., 1991; Nakabeppu ma Nathans, 1991; Chen et al., 1997; McClung ma Nestler, 2003; Kumar et al., 2005).
ΔO le FosB o loʻo aʻafia i tulaga maualuga i se faʻalapotopotoga faʻapitoa i le faiʻai pe'ā maeʻa ona faʻasolosolo, ae le o se faʻalavelave, faʻafeiloaʻi i le tele o aʻafiaga o le mafaufau, e aofia ai le atuatuvale, o faʻamaʻi, antipsychotic and antidepressant drugs, o fualaau faʻaleagaina, ma taui faalenatura (Faamoemoe ma al., 1994b; Hiroi ma Kamalaele, 1996; Moratalla et al., 1996; Bing et al., 1997; Mandelzys et al., 1997; Kelz et al., 1999; Werme et al., 2002; Andersson et al., 2003; Colby et al., 2003; Peakman et al., 2003; Perrotti et al., 2004; Zachariou et al., 2006). O le faʻatagaina o le ΔFosB e fesoʻotaʻi tuusaʻo atu i le faʻatinoga o le tele o nei mea faʻapitoa i le mafaufau. O le mausali o le ΔFosB e tusa lava pe leai se faʻaosofiaga faʻaalia e ese mai i isi mea uma o le Fos aiga, e vave ona osofaia e ala i le tali atu i fuamoa, ma toe faʻafoʻi i lalo i ni nai itula,Faamoemoe ma al., 1992; Daunais et al., 1993; Persico et al., 1993; Hiroi ma Kamalaele, 1996; Perrotti et al., 2004). O le mea lea e fai ai e le ΔFosB se sui tauva lelei e faʻatalanoa nisi o suiga tumau i faʻamatalaga o le gene lea e faʻavaeina ai le faʻaogaina o le neuronal adaptations e mafua mai i nisi faʻasolosolo masani.
Ona o le umi o le i ai o le ΔFosB e tupu i le leai o se isi faʻateleina o lona mRNA (Chen et al., 1995), matou te faʻamaonia e, e le pei o FosB atoa ma isi uma puipuiga o le Family Fos, ia e le mautonu, o le ΔFosB atonu o se faʻailoga e le masani ai ona faʻasalalau (Faamoemoe ma al., 1994b; Chen et al., 1997; Nestler et al., 2001; McClung et al., 2004). E le gata i lea, o le auʻiliʻiliga o suʻesuʻega o le mafaufau o le faiʻai e masani ona faʻasolosolo, e fautuaina le suia o le ΔFosB. Mr (mole masalomia) mai le ~33 kDa i le tulaga ogaoga i ~35-37 kDa ao faagasolo togafitiga masani (Faamoemoe ma al., 1994a; Chen et al., 1995). Talu ai e leai se faʻamaoniga mo le i ai o ni mRNA faaopoopo e ono mafai ona fesuiaʻi mo nei fesuiaiga faʻapitoa, matou te faʻamatalaina faapea o le AAFOSB ua toe faʻaleleia ma atonu o lenei mea e saofaga i lona tulaga le mautu. Peitai, e oʻo mai i le taimi nei, e leai ni suʻesuʻega o meaola o le faʻafesuiaiga poʻo le toe faʻaleleia o suiga o le ΔFosB. O le sini o le suʻesuʻega nei o le fuafuaina lea pe o le ΔFosB o se phosphoprotein ma pe o le phosphorylation e iai sona sao i lona mausali.
Mea ma Metotia
Mamanu ma laina DNA.
O loʻo faʻaaogaina i totonu o le DMEM-maualuga le kulukose (L-glutamine) (L-Gln) ma faaopoopo i le 12% suauu vavalaʻau fetau (FBS), 5% serum (mai le Invitrogen, Carlsbad, CA) , 10 U / ml penicillin, ma 100 μg / ml streptomycin (mai Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Na maua togavao o le HeLa (American Type Culture Collection, Manassas, VA) i le maualuga-glucose DMEM o loʻo iai L-Gln ma faʻaopoopoina i le 100% FBS, penisilini, ma le streptomycin. O laina eletise na tausia i le 10 ° C i se 37% CO humid2 atemosifia.
Mo suauu le tumau i DNA, PC12 poʻo le HeLa na faʻapipiʻiina i luga o pusa ono (faʻapipiʻiina i le collagen I mo potu PC12) ina ia oʻo ai i le 90-100% faʻamalamalamaina i le aso e sosoo ai ma faʻaaogaina ai le Lipofectamine 2000 (Invitrogen). I nisi o suʻega (tagaʻi Fua. 1⇓⇓⇓⇓⇓-7), O le ΔFosB na faʻaalia ma le faʻaalia i vailaʻau PC12 e ala i le faʻamaʻi ma le recombinant herpes simplex virus (HSV).
ΔFosB ma le FDB cDNA na maua mai a tatou lava pTetop-constructs (Chen et al., 1997), ma vaevaeina i totonu o se vete pcDNA3.1 (Invitrogen). O nei tapena pcDNA3.1-ΔFosB / FosB na faʻaaogaina mo faʻamatalaga i mamanu mamani ma avea o se faʻataʻitaʻiga mo mutagenesis taʻutaʻua. Na saunia le HSV-ΔFosB faʻatasi e pei ona faʻamatalaina muamua (Neve et al., 1997), ma o le sauniuniga o loʻo i ai se tasi o le ~1 × 108 pfu / ml.
Suʻega o le pulse-chase.
E tusa ma le 24 h i le maea ai o le pipisi / faʻaogaina, na fufulu lua i le tolu taimi ma le 12 ml o le PBS ma faʻapipiʻi i le 2 ° C mo ~37 i le 1 ml o Cys / Met-free DMEM (Invitrogen) faʻaopoopoina i le 2% dialyzed FBS (Hyclone, Logan, UT) e faʻaputu ai vaituloto intracellular o Met ma Cys. I le faaiuga o lenei "matelaina," o vailaʻau (pe a fai e togafitiina ia lela), ma o laupega sa faaigoaina (pulse) ma le 5-12 μCi o 35S Faʻafefiloiina le Faʻasalaga Malie (PerkinElmer, Wellesley, MA) mo ~1 h i le 37 ° C e faʻaigoaina uma foutini synthesized. Na aveesea le radiolabel i le fufuluina o sela lua i le tolu taimi ma le 2 ml o le PBS, ma le 35Na mulimuli mai le puipuiga o le puipuiga o le eleele (S-labeled proteins) e ala i le suia o le ala i le "malulu" (nonradioactive) e faaopoopo atu i le 5% FBS ma le seleseleina o sela i taimi eseese. Sa togafitiga togafitiga i le gasologa o le tuliloa. O fuainumera uma o nei suʻega o loʻo faʻaalia ai le aofaiga muamua o le tele o protein e sili ai le faʻatusatusaina o le aofaʻi o latou tau.
Meaola ma gasegase e faʻaaogaina eletise eletise.
O tamaiti matutua Sprague Dawley male (200-300 g; Charles River Laboratories, Kingston, RI) sa togafitia i aso taʻitasi ma le faʻaaogaina o electroconvulsive (ECS) mo le 7-9 d. ECS na faia e pei ona faʻamatalaina muamua (Faamoemoe ma al., 1994a) Faʻaaoga se Ugo Basile (Comerio VA, Italia) iunite ECS i tulaga nei: faʻaiʻuga, 100 pulus / s; pulse ma, 0.5 ms; taimi faateia, 1.0 s; ma le taimi nei, 75 mA. O le puipuiga o manu na togafitia i le tutusa ma le faʻaogaina o eletise i le taliga e aunoa ma se eletise eletise.
32 P faaigoaina ole igoa.
Mo le faaigoaina o fasi falaoʻo, o le a faʻapipiʻi ai kusi, na vave ona vaʻaia le mafaufau, ma 300 μm meli muamua na saunia ma se DSK microslicer (Ted Pella, Redding, CA). O le fasi pepa na faʻafefiloi i totonu o faʻamaʻi palasitika i le 2 ml o le CSF (CSS (CSS) artificial deficient (ACSF) ma teu i le 30 ° C i lalo o le faʻaauau pea o le fausiaina ma le O2/ CO2 paluga (Hemmings et al., 1989). O fasi pepa (lua fasi pepa i le tube) na faʻaigoaina ma 1.3 mCi mo 8-10 h i le i ai pe leai foi o le okadaic acid (100 ng / ml). I le faaiuga o lenei faʻasalaga, na fufuluina ai fasi pepa ile tolu taimi ma le ACSF malulu ona faʻafeiloaʻiina lea i le sonication i le 250 μl o le faʻamalosi o le radioimmunoprecipitation assay (RIPA) [PBS, pH 7.4, 150 mm NaCl, 1% (v / v ) Igepal, 0.5% (w / v) SDS, 0.1 mm EDTA] ua faaopoopoina muamua aʻo leʻi faʻaaogaina le SDS e oo atu i le 1%, faʻamalolo inhibitor cocktail mo mamanu mamani (faʻaaoga i le 0.6 μl / ml; Sigma-Aldrich), cocktails inhibitors cocktails I ma II (faʻaaoga i le 5: 1; Sigma-Aldrich), 100 mm PMSF, ma le 1% glycerol. Na tapenaina Homogenates mo 2 min ma faʻamamaina i le centrifugation i le 15 × g mo 15 min. O le faʻamalosia o le Protein i le mea na maua ai supernatants na suʻesuʻeina e ala i le faʻaaogaina o le protein BCA (Pierce, Holmdel, NJ).
mo le 32O le faailogaina o fualaʻau faʻatoʻaga, ~24 h i le maea ai o le faʻamaʻi / faʻaogaina, na fufulu lua i le tolu taimi e aunoa ma le phosphate-free ma faʻafefiloi i lenei ala mo ~1 h. Ina ua mavae lenei vaitaimi o le matelaina, 0.2-0.3 mCi o 32FUA3PO4 (PerkinElmer) na faʻapipiʻiina i vaieli taʻitasi, ma faila mo le 4-12 h faʻalagolago i le ituaiga o faʻataʻitaʻiga (tagaʻii le 1-7 mo faʻamatalaga). Na fufulu faʻamaʻi faʻamaʻi ile PBS ma faʻasaina i luga o le aisa mo le 15 min ma 50 μl o le faʻaletupe RIPA faaopoopo. Lysates na aoina e ala i le viliina ma na pasia 10 taimi e ala i le fala o le 25 e selesele ai DNA, ua kuka mo 10 min, ma centrifugged i le 15,000 rpm mo 15-30 min i 4 ° C. O lysates ua faʻamamaina (supernatants) na tuʻuina atu i se pu fou ma o se suʻega o le protein BCA (Pierce) na faia. O fuainumera uma o nei suʻega e faʻaalia ai le aofaiga tutusa o ituaiga o vailaʻau (WT) ma S27A ΔFosB mo le lelei o faʻatusatusaga o le maualuga o le phosphorylation.
Vailaʻau faʻasaina ma togafitiga aganuʻu.
O le okadaic acid (OA; Sigma-Aldrich) na soloia i le ethanol ma faʻaaogaina i le faʻamoemoe mulimuli o 100 ng / ml. 5,6-Dichloro-1-β-d-ribofuranosyl-benzimidazole (DRB; Biomol, Plymouth Meeting, PA) na faʻateʻaina i le dimethyl sulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich) ma faʻaaogaina i le aganuʻu i totonu o le faʻamasinoga mulimuli o 50 μm. Spermine (Sigma-Aldrich) na faʻamaʻapeina i le vai ma faʻaaogaina i le faʻamoemoe mulimuli o 200 μm. Calphostin-C (Biomol) na faʻamaʻapeina i le DMSO ma faʻaaogaina i le 0.2 μm, aʻo le 12-myristate 13-acetate (PMA; Promega, Madison, WI) na faʻamavaeina i DMSO ma faʻaaoga i 0.1 μm. O le peptide inhibitory e fesootai ma myristoylated-autocamtide-2 (m-AIP; Biomol) na faʻamaʻapeina i le vai ma faʻaaoga i le faʻamoemoe mulimuli o 1 ma 10 μm. O le inhibitors protein-inisite protein kinase H-7 ma le H-8 (Biomol) na faʻamaʻapeina i le vai ma faʻaaogaina i le faʻamoemoega mulimuli o 150 ma 200 μm. MG132 (Calbiochem, San Diego, CA) ma le epoxominal (Peptides International, Louisville, KY) na faʻamavae uma i le DMSO ma faʻaaogaina i le faʻamasinoga mulimuli o 12.5 ma 7.5 μm. I faʻataʻitaʻiga uma, na faʻapipiʻiina ai le DMSO (taavale) i sela e manaʻomia e faʻamautinoa ai le tumau o le DMSO i togafitiga uma. Aua 32O faʻataʻitaʻiga o faʻamaumauga, sa faʻapipiʻiina fualaau i luma tonu o le igoa ma tausia mo le totoe o le taimi o le faailogaina. Mo faʻataʻitaʻiga o le pulse-chase, na faaopoopoina fualaau i le taimi o Cys / Met "starvation," na tausia i le taimi o le faailogaina, ona toe faaopoopo lea i le tulimanu. O le inhibitors o le proteasome na faʻapipiʻiina uma 3-4 H i le taimi atoa e tuliloaina ai le vave faʻaleleia o nei peptides.
ΔFosB immunoprecipitation, faʻamaʻiloga, ma le faʻamaioiography.
Mo le puipuia o le tino, na faʻaitiitia ai le 1: 5 faʻatasi ma le RIPA manino ina ia faʻatupu le faʻatonuga o le SDS i 0.1% aʻo leʻi faia ma le immunoprecipitation (IP). Ina ia faʻamaonia le faʻasoa faʻamaonia, o le lysates muamua na faʻamamaina e ala i le puipuia o le IgG e leai se ola ma le protein G-Sepharose (Sigma-Aldrich) mo le itiiti ifo 4 h. O le ΔFosB na faʻasaunoaina mai le lysates ua faʻamamaina e faʻaaoga ai le fomaʻi polyclonal goat e iloa ai le epitope i totonu o le FosB ma le ΔFosB (SC-48G; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) i le 0.5-1 μg IgG mo 10 μg o le protein lysate (50-300 μg o le protein atoa) i se aofaiga atoa o 0.5 ml. Na faʻafefiloi lemu le IP i le 4 ° C i luga o se rotor mo le 8 h ona sosoo ai lea ma le 15 μl o le protein G-Sepharose na faʻapipiʻiina foi IP mo le isi 4 h. IP na faʻamamaina e ala i le taina i le 3000 × g mo le 3-5 min i 4 ° C, faʻamaʻi faʻolu i le 0.5 ml o le RIPA malulu ma lua taimi faʻatasi ai ma PBS malulu e aofia ai le 0.1% Tween 20. Na faʻaaogaina IP i le 0.5 ml o le PBS malulu, faʻafeiloaʻiina, faʻapipiʻiina i totonu o se pu fou, ma faʻamaonia faʻamalosi puipuia i le faaopoopoina o le 15-25 μl o le 2 × faʻaitiitia le faʻamalama o le laemm protein protein. O lenei tulafono IP na mafua ai le tulaʻi mai ma le aoga tele o le toetoe lava o le ΔFosB i le lysate. O le puipuiga o le puipuiga o le puipuiga o le SDS-PAGE i le faʻaaogaina o le IP atoa i le 12.5% Tris-HCl Criterion gel (Bio-Rad, Hercules, CA), ona tuʻuina atu lea i le PVDF poʻo le nitrocellulose. Ina ua uma le fesiitaiga, o le membrane na malulu-ma 32P- ma 35O s-radiolabeled bands na matauina e ala i le faaaogaina o le kodak (Rochester, NY) faʻataʻitaʻiga faʻapitoa, faʻapea foi i le fua mai o le phosphorimaging using a Storm (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) PhosphorImager. Aofaʻi (nonphosphorylated ma phosphorylated) O le ΔFosB i lysates cell poʻo le faiʻai homogenates na maua i le puipuia o le masini puipuia (faʻaaogaina le membrane lava e tasi e faʻaaogaina e iloa ai le 32P-labeled protein), poo le tutusa o le lysate / homogeneate protein o loʻo tuʻuina atu i le SDS-PAGE ma tuʻuina i le PVDF poʻo le nitrocellulose. O le membrane na muamua polokaina e ala i le faapipiiina i le 1% (w / v) susu susu (Bio-Rad) i le PBS faaopoopo i le 0.1% (v / v) Tween 20 (Sigma) mo 1 h i 25 ° C. O le membrane na puipuia i le po i le 4 ° C faatasi ai ma a tatou lava antibody FOSB polyclonal antibody generated faasaga i meaola amino 1-16 o FosB / ΔFosB (faʻaaogaina i le 1: 10,000). Ina ua maeʻa le fausiaina muamua, e fa taimi na fufulu ai membranesa mo le 5 min ma le pa puipui, ona faʻavelaina ai lea i le 25 ° C mo ~1 h ma IgG o le lapisi ole IgG ua faʻafefiloi i le horseradish peroxidase (faʻaaogaina i le 1: 5000 i le puipuia o le pa puipui, mai Vector Laboratories, Burlingame, CA). Ona faʻamamāina ai lea o tagata mo le tolu minute mo le 10 min ma le pa puipui ma se taimi mo 5 min ma PBS. Ole aofaʻi o le protein ole ΔFosB na faʻaalia ile ata Kodak MR e ala i le faʻaleleia o le galauminescence (Pierce) ma / poʻo le iloa o le fluorescence e faʻaaoga ai le ECL-Plus reagents (Amersham Biosciences) ma le Storm PhosphorImager.
Osolosolo ma le faamamaina o le recombinant ΔFosB mai iniseti iniseti.
O le ΔFosB na faʻaalia i Sf9 iniseti iniseti e pei o le N-His (6) ΔFosB) e faʻaaoga ai le polokalama Bac-to-Bac baculovirus (Invitrogen) ma mulimuli i faatonuga a le kamupanī. I le faapuupuuga, o le ΔFosB cDNA (toega 2-237) na muamua atu i le igoa N-terminal tag MGHHHHHHAG na vaevaeina i le vector pFASTBacTM1, lea na faʻaaogaina e gaosia ai le baculovirus recombinant. O Sf9 na maua i le siama toe fuataina, ma N-His (6) ΔFosB na faʻamamaina mai lysates i le tele o taʻiala faʻasolosolo e aofia ai le chromatography e faʻaaogaina ai le koluma nickel (Qiagen, Valencia, CA), faʻaoga faʻavae e faʻaaoga ai se koluma Q-G (Amersham Biosciences), ma le tele o le faʻaaogaina e faaaoga ai se koluma gel-filtration (Amersham Biosciences).
In vitro suʻesuʻega o le phosphorylation.
In vitro Faʻaauau le faʻataʻitaʻiga mo le taimi ma le suʻesuʻeina o le stoichiometry i se voluma o 30 μl e aofia ai le 10 μm substrate (N-His (6) ΔFosB poʻo se substitute control), 250 μm ATP, ma 1 μCi / μl [γ-32P] ATP, o le faʻamalosi na tuʻuina mai e le kamupeni kinase, ma o se tasi o kinese nei: CK2 (20 ng / μl; Upstate, Charlottesville, VA), CaMKII (10 ng / μl; Upstate), PKC (1.6 ng / μl; Calbiochem) poo le p70S6K (2.5 mU / μl; Upstate). O faʻatulagaga o taimi na faia e ala i le aveesea o 5 μl aliquots mai le tali tali i taimi atofaina ma faaopoopo i ai le tutusa o le 4 × faʻaitiitia le faʻamalama o le laemm protein protein. O Michaelis-Menten kinetic parameter mo le CK2 o le tali na fuafuaina i lalo o le faʻamalamalamaina faʻamalosiina o tuʻutuʻuga faʻapitoa. O nei tali na faia mo 15 min i se voluma o 10 μl e aofia ai le 2 ng / μl enzyme, 250 μm ATP, 1 μCi / μl [γ-32P] ATP, ma N-Ana (6) ΔFosB faʻavae mai le 2.5-30 μm. Na faia uma faʻamaʻi i le 30 ° C i totonu o se vai vai. A maeʻa le TASI-PAGE ma le fusi o le gel i le Bio-Safe Coomassie (Bio-Rad), faʻagogo le gel, ma 32O le tuufaatasia o le P-phosphate na suʻesuʻeina e ala i le faʻatalanoaina o fuainumera (silasila i lalo, Faʻamaumauga o fuainumera, faʻatusatusaga, ma fuainumera).
Fuafuaga o le phosphopepatide e lua-fua ma le suʻesuʻeina o le acid phosphoamino.
O nei iloiloga uma na faia e pei ona faamatalaina mai e Ploegh ma Dunn (2000). Aotelega, o gel gel ua i ai 32P-faaigoaina o le PΔFosB (pe mai i vitro gaioiga poʻo mai faʻamaʻi faʻamalosi o sela), na fiafia, toe faʻamamaina, mulumulu, ma tuʻuina atu i le faʻaogaina o meaʻai. O le supernatant o loʻo i ai faʻataʻitaʻiga o mea e teu ai fualaʻau na faʻamaʻapeʻa ma na fufulu le tele o le lyophilate ma toe faʻaleleia i le 10 μl o le palota electrophoresis, pH 1.9. O le faʻataʻitaʻiga (3 μl) na maua i luga o se paʻu o le chromatography (TLC) o le cellulose (TTM, Newark, DE) ma vavaeʻese i le tasi vaega e ala i le electrophoresis ma le isi itu e ala i le alu aʻe o le TLC. O ata o phosphoreptide faʻafanua na faʻaalia i le televise ma faʻamalama. Mo le suʻesuʻeina o le acid phosphoamino, 2 μl o le digptic digests na resitala i le pa puipui electrophoresis na toe pipiiina i HCl hydrolysis i 105 ° C mo 25 min i 3 m HCl i lalo ole N2 atemosifia. O le tali na taofi i le ono o le mamafa o le vai, ma na faʻamalo le paluga. O le lyophilate na toe faʻaaogaina i le 5 μl o le palota electrophoresis, pH 1.9, ma vaʻaia i luga o se kuluma cell Tlose cellulose faatasi ai ma phospho-Ser, -Thr, ma -Tautu faʻamau. O le electrophoresis na faia i luga aʻe o le afa o le umi o le masini TLC e faʻaaoga ai le palota electrophoresis, pH 1.9, ona tuʻuina atu lea o le ipu i le pH 3.5 paʻu, ma ua maeʻa le electrophoresis. O ata o le phosphoamino acid na faʻaalia i le pulupuluina o le platema TLC ma se 1% (v / v) ninhydrin solution i le acetone, ma le 32O ata P-labeled samples amino acids na faʻaalia faʻapitoa e le autoradiography ma le phosphorimaging.
siRNA-faʻapipiʻi CK2A tuʻituʻi-lalo.
Na matou faʻaaogaina se auala e faʻafefe ai RNA e tuʻituʻi tuʻituʻi-lalo i le maualuga ole CK2 (Di Maira et al., 2005). O le PC12 na faʻapipiʻiina i luga o le paʻu i luga o paʻu ono-papatusi e aʻafia ai --70-80% faʻamalosia i le aso e sosoo ai, pe a oʻo mai le 20 nm (faʻauʻuga finafinau) a le 2 nm (finishing final) a le o le a le faʻamamaina siRNA poʻo le siNA i le mRNA o le catalytic o le vaega o le Rat CK5, e faʻaaoga ai le 24 μl o le sui suʻe SilentFectin (Bio-Rad) ma mulimuli i faatonuga a le kamupanī. E tusa ma le 24 i se taimi mulimuli ane, o siama na liua i le liua o le plasmid ΔFosB, e pei ona taʻua i luga. Pe tusa ma le 48 i le taimi mulimuli ane (~XNUMX h ma le siRNA transfection), o suli na tuʻuina i le 32P faʻamalo faʻamaonia poʻo le pulse-chase analysis e pei ona faamatalaina i luga. O CK2α siRNA na mulimuli mai nei ma tali tutusa: 5'P-CAAACUAUAAUCGUACAUCUU3 ', 5'P-UCAAUCAU-GACAUUAUGCGUU3', 5'P-UAGUCAUAUAACUUCCGUUCCGUU3 ', 5'P-AAAUCCCUG ACAUCAUAUUUU3' (Dharmacon, Lafayette, CO). I le avea ai ma se le lelei, sa matou faaaogaina Silencer Pule le lelei #3 siRNA mai Ambion (Austin, TX). O le tele o le CK2 tuituiina na mataʻituina e ala i le faʻaaogaina o le anti-CK2 polyclonal antibody (faʻamaumauga 06-873 mai Upstate) i le po i le 1: 1000 dilution. β-Tubulin sa faʻaaogaina e avea ma se faʻataʻitaʻiga o le faʻaaogaina ma maua i le monoclonal antibody (faʻamaumauga 05-661 mai Upstate) i le po i le 1: 20,000 dilution.
Faʻataʻitaʻiga faʻapipiʻi taʻitasi.
Mutuale o Ser27 i Ala poʻo le Asp na faʻaaogaina e faʻaaoga ai le pusa vave o le Mutagenesis kit (Stratagene, La Jolla, CA) ma mulimuli i faatonuga a le kamupanī. Ina ia faʻalauiloaina le sui o le Ser27 i le souris ΔFosB protein, na faʻaaoga ai mutagenesis primers. Ser27 i Ala: (toe faʻaaogaina) 5'GCCGAAGGAGTCCACCGAAGCCAGGTACTGAGACTCGGCGGAGGG3 '. Ser27 i Asp (muamua muamua) 5'CCCTCCGCCGAGTCTCAGTACCTGGATTCGGTGGACTCCTTCGGC3 '. O le faʻavaeina o faavae o loʻo faʻamalosi, ma o le ser27 codon ua faʻamaufaʻailogaina.
Bioinformatics.
Malosiaga o phosphorylation nofoaga ma kinases mo le ΔFosB na suʻeina e ala i le tuʻuina atu o le faasologa o le protein i le kiore i faʻamatalaga faʻapitoa e aofia ai le ProSite (http://www.expasy.org/prosite/), PredictProtein (Rost et al., 2004), ma NetPhosK (Blom et al., 2004).
Faʻamaumauga o fuainumera, faʻatusatusaga, ma fuainumera.
O le aofaʻi o le protein o loʻo i ai i le PVDF poʻo le membrane nitrocellulose na faʻamaoniaina e faʻaaogaina ai le Storm PhosphorImager ma le polokalama Faʻamatalaga Faʻamatalaga (Amersham Biosciences / Molecular Dynamics). I totonu o le cell cell culture ma le faiʻai fai ni suʻesuʻega phosphorylation, o tau e maua mo le 32O le polotini p-labeled na vaevaeina i le tau na maua mo le aofaʻi atoa o le ΔFosB, ma faʻamatalaina o se fua faatatau. I le i vitro suʻesuʻega o le phosphorylation, o le aofaiga o 32P-faaigoaina o le ΔFosB mo mole o le ΔFosB (stoichiometry) na fuafuaina e pei ona faamatalaina muamua (Sahin et al., 2004). O fuataga uma sa faia i totonu o le laina laina o le meafaigaluega na faʻaaogaina. O fuainumera kenera na fuafuaina e faʻaaoga ai le ata Michaelis-Menten, e mafai ai V = VMax[S] / ([S]+KM) ma VMax = k2[EAofai]. O le afa-ola (t1/2) o le ΔFosB ma le FosB na fuafuaina mai poloka o le pulse-chase (e faʻaaoga ai le faʻasalalauina o laina e sili ona fetaui lelei i le faʻamaumauga) ma fetaui ma le taimi o le aofaiga ole totoe o le protein o le 50% o le uluai. I fuainumera uma, o iuga o loʻo faʻaalia o sui ia o le itiiti ifo i le lua i le tolu faʻataʻitaʻiga tutoʻatasi. I kalafi uma, o faʻamaumauga o loʻo faʻaalia o avega ± SEMs (3 ≤ n ≤16). O le taua fuainumera o eseesega na iloiloina e ala i le faʻaaogaina o se tupe e leʻi totogia t suʻega, faasaʻo mo faʻatusatusaga e tele, ma faʻaalia i le asterisks p ≤ 0.05.
i'uga
ΔFosB o se faʻailoga e le masani ai ona faʻailogaina
E ui lava na matou taumatemate muamua o le ΔFosB o se mea e sili ona mausali le tusitusi (Nestler et al., 2001), o se auiliiliga tuusaʻo o le tala o le tupe maua o le polotini e leʻi faia nei. Ina ia talanoaina lenei fesili, sa matou faia suesuega o pulse-chase e faaaoga ai cellX PCXNX, lea na masani ona faaaoga e pei o se laina laina e pei o se toto, lea na faailoa manino mai ai le ΔFosB e ala ile siama i le herpes simplex virus (HSV-ΔFosB). O faʻafouga faʻapipiʻi fou na faʻapipiiina ma le igoa 35S-Met / Cys, ma le mamanu o le 35S-labeina ΔFosB (35S-ΔFosB) na mataʻituina e ala i le puipuia mai le lysates cell lea e maua mai i taimi eseese pe a uma ona aveese faʻamaʻi amino faʻamalama. O le suʻesuʻeina o faʻamaʻiloga e le SDS-PAGE ma le autoradiography ua faʻaalia ai o le afa o ola o le ΔFosB i le PC12 o le ~10 h (Mati. 1). O nei suʻesuʻega e faʻaalia ai o le afa o le soifuaga o le ΔFosB e sili atu nai lo le tele o faʻamatalaga faʻamatalaina (silasila i le Talanoaga), e aofia ai le FosB atoa, o lona afa-ola i le aganuʻu faʻalauiloa ua lipotia mai o le ~90 min (Dobrazanski et al., 1991; Carle et al. 2004). E le gata i lea, e taua le matauina o le faʻaleagaina o le ΔFosB e le fetaui i se tikeri muamua o le pala, ae o le biphasic, amata mai i le fua lemu o le paʻu. E taʻu mai ai e iai le sili atu ma le tasi ΔFosB ituaiga ma / poʻo sili atu i le tasi le ala o le faʻaleagaina.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 1.
ΔFosB o se faʻailoga e le masani ai ona faʻailogaina. O le afa o le ola o le ΔFosB o le ~10 h i le aganuʻu. O le ΔFosB na faʻaalia i totonu o le PC12 i soʻo se faʻamaʻi ma le HSV-ΔFosB poo le transfection transfection ma le plasmid ΔFosB, ma o suauʻu na aʻafia i suʻega o le pulse-chase e pei ona faʻamatalaina i totonu o Mea ma Metotia. Na maua ni taunuʻuga tutusa e tusa lava po o le a le metotia na faʻaaoga e faʻamalosia ai le ΔFosB. O le ata o loʻo faʻaalia ai le taimi (ma le sui o le autoradiogram) o le faʻaleagaina o le ΔFosB. O le fuainumera o faʻamaumauga o le averesi o le ± SEM a itiiti ifo o 15 fuainumera faʻamaumauga taʻitasi na maua mai i le itiiti ifo ma le lima suʻesuʻega tutoʻatasi. Mo le faʻatusatusaga, o le afa o le lipoti o le FosB atoa o loʻo faʻaalia.
ΔFosB o le phosphoprotein i le faiʻai
Ua matou manatu o suiga i tua o le ΔFosB e mafai ona saofagā i lona tulaga mautu. Talu ai ona o le phosphorylation ua faʻaalia e faʻafetaui ai le gaioiga o mea taua i le tele o auala, e aofia ai lo latou faʻamautu (mo le toe iloilo, tagaʻi Desterro et al., 2000; Whitmarsh ma Davis, 2000), matou te suʻesuʻe pe o le ΔFosB o se phosphoprotein. O le mea lea, o le ΔFosB expression na mafua mai i le faiʻai o le rat e faʻaaoga ai ECS masani, o togafitiga e iloa e faʻaosofia ai le maualuga o le ΔFosB, aemaise i le pito i luma (cortex)Faamoemoe ma al., 1994a). I le tasi aso ina ua maeʻa le togafitiga ECS mulimuli, pe a maualuga le maualuga o le ΔFosB, e saunia ni fasi meaʻai i le pito i luma o le cortical slices ma ua uma ona faailoga igoa 32P-orthophosphate. E leʻi faʻasalalauina se faʻafefiloi o fasi pepa, ma o nei mea na faʻaaogaina e iloa ai le aofaʻi o vaega ΔFosB. A maeʻa le faʻamalosi faʻatasi ma se anti-FosB / ΔFosB antibody ma le vavae ese o puipuiga puipuia mai le SDS-PAGE, phosphorylated 32O le P-faaigoaina o le ΔFosB na maua i le tala, ae o le aofaʻiga atoa o le ΔFosB sa maua i le puipuia. O lenei auiliiliga na faaalia ai o le ΔFosB o le phosphorylated i le mafaufau, e pei ona molimauina e se tasi 32P-labeled band of ~35 kDa o loo i ai i le mafaufau o le mafaufau ua fai i le taimi, ae e toetoe lava a le mafai ona iloa i togafiti togafiti (Mati. 2A). O lenei mea e ogatasi ma le mea moni e faapea, i le leai o se faʻalauiloa masani, o laʻasaga maualuga o le ΔFosB e maualalo. O le faʻamaoni o le tali atu i le faʻamaoniga o loʻo faʻaalia i le le lava o se faailoilo i le IgG e aunoa ma le faʻaaoga.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 2.
ΔFosB o le phosphoprotein i le faiʻai. A, ΔFosB o le phosphorylated i le faiʻai. Esenegen ΔFosB na faʻaosoina i le faiʻai o le anufe e ala i togafitiga masani ECS e pei ona faʻamatalaina i le Materials and Methods. O le pito i luma o fasi falaoa na tusia i luga o le pito i luma 32FUA3PO4 mo ni nai itula. Ina ua maeʻa le homogenization o fasi pepa, na le mafai ona puipuia le ΔFosB, ma le phosphorylated ΔFosB (32P-ΔFosB) na maua i le tala o meaola (pito i luga). Ole aofaʻiga o le ΔFosB i faʻamaumauga e leʻi faʻaalia i le leʻo faʻasaina na maua mai i le puipuia o le puipuiga (vaega pito i lalo). I le avea ai o ni pulega le lelei, o le faʻaogaina o se meaola faʻaleagaina ma le IgG e le faʻaleagaina o loʻo faʻaalia. B, Faʻamasino phosphorylation sites ma kinases faʻatasi ai ma numera faʻatusatusa mo le kiore O le faasologa o le protein ΔFosB na maua mai i le suʻega bioinformatic. O nofoaga o le auva o loʻo i ai le maualuga o le vavalo o valoʻaga ua faʻamaonia i le faasologa o le polotini ma lisiina i le laulau. O le DNA-binding (basic) ma le leucine zipper e malosi i le faasologa o le polotini. C, D, ΔFosB phosphorylation ua faateleina e le Ser / Thr phosphatase inhibitor OA. C, 32O le P-ΔFosB levels i le puipuia mai i fasi pepa cortical i luma na faaigoaina i le toesea (Ctr) poo le i ai o le 100 ng / ml OA (kalafi ma luga o le pito i luga) na iloa e ala i aoaoga. O le vaega pito i lalo o loʻo faʻaalia ai le aofaʻi atoa o le ΔFosB na maua i le puipuia mai i fasi pepa e leʻi faʻaaogaina e ala i le puipuia. D, O PC12 suauu na aafia i le HSV-ΔFosB poo le HSV-LacZ (vete) ma faʻamaonia le igoa ma le 32FUA3PO4 i le toesea (Ctr) poʻo le i ai o 100 ng / ml OA. 32O le P-ΔFosB laʻasaga i faʻamaʻiloga na maua i le faʻalauiloaina (graph, panel top). O le vaega pito i lalo o loʻo faʻaalia ai le aofaʻi atoa o le ΔFosB na maua i lysates cell e ala i le puipuia.
I le avea ai ma laasaga muamua e agai atu i le maualuga o le kinase (s) ma le (s) site (s) o aafia ai i le ΔFosB phosphorylation, ua tatou gauai atu i le faasologa o le amino acid i le tele o iloiloga bioinformatic. Na faaalia mai e faapea, e ui lava e le oi ai i le ΔFosB ni nofoaga o le sui a le Tyr phosphorylation, e aofia ai le tele o sites o le Consolidated sites, e aofia ai sites e tolu o le CK2, ma nofoaga PKC e lua ma le maualuga o le phosphorylation prediction scores (Mati. 2B). Afai, e pei ona valoia e ala i le bioinformatics, o le ΔFosB e na o le phosphorylated i luga o Ser ma Thr, ona tatau ai lea ona suia le phosphorylation e le gaoioiga a Ser / Thr phosphatases. Ina ia tofotofoina lenei manatu, matou te faʻailogaina fasi pepa faʻasaga i luma 32P-orthophosphate i le i ai pe leai foi o le OA, o le Ser / Thr protein phosphorase inhibitor. E pei ona faʻaalia i Ata 2C, OA na mafua ai le faateleina o le (~2.5-fold) 32P-ΔFosB. Na mafua ai foi ona siʻitia le aofaʻi o le maualuga o le Ava o le Ava, lea e o gatasi ma lipoti talu ai e fesoʻotaʻi atu i aʻafiaga o le tino o le OA i lona mafai gafatia vave vave gasegase e aofia ai Fos proteins (Miller et al., 1998; Choe et al., 2004). O le taunuuga faaiʻu o se faʻaopoopoga o le maualuga o le (~60%) i le phosphorylated ΔFosB levels.
Ona matou suʻesuʻeina lea, pe i totonu ole potu PC12, lea e sili atu ona mafai ona faʻaaogaina togafitiga, na faʻaalia ai e le ΔFosB se mamanu phosphorylation e pei lava o loʻo vaaia i le faiʻai. Na matou faailoa atu le ΔFosB i le telefoni i le PC12 e ala ile siama i le HSV-ΔFosB ma faaigoa ma le igoa o sela e 32P-orthophosphate i le i ai pe leai foi o le OA. O faʻamatalaga manuia ma le puipuia o le porotini mai HSV-ΔFosB-faʻapipiʻi siama ua faʻaalia e le i ai uma i totonu o le immunoblot (Mati. 2D, vaega pito i lalo) ma le autoradiograph (luga o le panel) o le ~35 kDa band, e le o iai i totonu o vela na afaina ai le vevela. E pei ona matauina i le faiʻai, o le OA na mafua ai se laʻititi laʻititi o le aofaʻi o le Ava o le Ava ae o loʻo sili atu le maualuga (tusa ma le lua lua) le maualuga 32P-ΔFosB, e mafua ai le maualuga o le (~50%) i le ΔFosB phosphorylation. E le gata i lea, o le ogatasi ma faʻamatalaga bioinformatic, o le togafitiga o vailaau PC12 ma le inhibitor Tyr phosphatase e leʻi mafua ai suiga taua i 32P-ΔFosB maualuga (data e le o faaalia). Faʻatasi, o nei suʻesuʻega na faʻaalia ai o le ΔFOSB o le phosphorylated i luga o Ser ma / poʻo Thr i le faiʻai ma i le PC12 ma faʻamaonia le mulimuli ia avea ma se siosiomaga lelei o aganuʻu agavaʻa, ia suʻesuʻe atili ai i faʻamatalaga o le phosphorylation ma le taleni o le ΔFosB.
CK2 ae le PKC poʻo CaMKII phosphorylates ΔFosB i vitro
E pei ona faamatalaina i luga, o le auiliiliga o le ΔFosB amino acid na faaalia ai le maualuga o le vaitau mo le CK2, PKC, ma CaMKII phosphorylation sites. Ina ia iloa po o fea o nei maʻi e ono mafai ona fusi mai le ΔFosB, matou te faia se faasologa o i vitro fesuiaiga o le phosphorylation e faʻaaoga ai le faʻamaʻi mama ma le toe faʻatulagaina o le recombinant ΔFosB. E pei ona faʻaalia i Ata 3A, o le tolu candidate kinases, na o CK2 phosphorylated ΔFosB i se auala taua. E le gata i lea, o le tele o isi kinese na tofotofoina (eg, GSK3 ma le p70S6K) ae na le mafai ona tupu tele le phosphorylate ΔFosB (faʻamatalaga e le o faʻaalia). O le faʻataʻitaʻiina atili o le tali a le CK2 e ala i le suʻesuʻega o le taimi, na faʻaalia ai e mafai e lenei kinese ona faʻamalosia le tuufaatasia o le ~0.5 mole o le phosphate mo mole o le ΔFosB (Mati. 3B). O le mea moni e mafai e le CK2 ona fusi le ΔFosB i vitro i le maualuga o le stoichiometry (~50%) o loʻo fautuaina mai ai se tali faʻafesoʻotaʻi talafeagai. Ona matou suesueina lea o kineta o lenei tali e ala i le faaosoina o le CK2 i luma o le faateleina o le faamamaina o le ΔFosB, ma matou mautinoaina o CK2 phosphorylates ΔFosB ma se VMax o 5.8 pmol · min-1 · Μg-1 o le enzyme, a KM o 18.4 μm, ma a kpusi o 0.2 / s (Mati. 3C). O faʻataʻitaʻiga mo nei faʻasologa faʻasolosolo e lagolagoina atili ai le talafeagai o le faʻaogaina o lenei tali. Mo se faataitaiga, o le KM o CK2 mo DARPP32, o se tasi o ona pito sili ona lauiloa, o 3.4 μm, ma le kpusi o le ~0.3 / s (Girault et al., 1989); le KM mo laina ATP mai le ~10-40 μm (Cochet et al., 1983; Silva-Neto et al., 2002), ma mo na o pitonuʻu e amata mai i le ~10-50 μm (Meggio et al., 1977; Pyerin et al., 1987). Faʻatasi, o nei faʻamaumauga e faʻaalia ai o le ΔFosB o se mea sili mo le CK2 i vitro.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 3.
CK2 ae le PKC poʻo CaMKII phosphorylates ΔFosB i vitro. O le autoradiograph (luga o le panel) o loʻo faʻaalia ai le phosphorylated product, ma le Coomassie-stained gel (lalo panel) o loʻo faʻaalia ai le aofaʻi atoa o le ΔFosB i le tali. A, Na toe tuʻuina atu le recombinant faʻamamaina ΔFosB i vitro faʻamalosia e le tele o teteʻe tau kinasisi (e tolu o loʻo faʻaalia). B, Suʻesuʻega taimi ma suʻesuʻega stoichiometric e faʻaalia ai e mafai e le CK2 ona fusi le ΔFosB i vitro ma se stoichiometry o ~50%. C, Faʻataʻitaʻiga o le CK2 faʻataʻitaʻiga o le ΔFosB o se mea lelei i vitro sui. O le faasologa o le gaioiga o loo faaalia i se vaega lua-taufaasese (pito i lalo), ae na mafua mai i le kolisi Michaelis-Menten (luga).
CK2 faʻafaigofieina le phosphorylation ma le mautu o le ΔFosB i totonu o siama e le i totonu
Ina ia suʻesuʻeina le talafeagai o le CK2-phosphorylation o le ΔFosB, sa matou faʻatinoina le faʻatautaiga o le phosphorptide mapping i vitro phosphorylated ma PC12-cell-phosphorylated ΔFosB. A maeʻa le TASI-PAGE ma le faʻaleleia o 32P-ΔFosB (mai le i vitro gaioiga po o mai le puipuia o 32P-labeled sel), o le polotini sa faʻamaʻaina i trypsin, ma o le taunuuga o phosphopeptides na tuʻuina atu i le vaeluaina o vaega. O lenei auʻiliʻiliga na faʻaalia ai o le phosphopeptide autu mai le CK2 faʻataʻitaʻiga na faʻatasi ma le tasi o le lua phosphopiptides sili mai le ΔFosB phosphorylated i PC12 cells (Mati. 4A), ae o le phosphatipides e mafua mai i le PKC poʻo le CaMKII (faʻamatalaga e le o faaalia) le tali atu e leʻi faia. Sa i ai se isi o le ΔFosB phosphopeptide o loʻo i ai i luga o le faʻafanua mai le PC12, ae ona o le le mafai ona faia o soʻo se malo na matou tofotofoina e maua ai le phosphopeptide tutusa. i vitro, tatou te le o iloa nei pe o lenei sikototide lona lua o loʻo i ai se site o le phosphorylation e ese mai le isi phosphopeptide poʻo pe o se sui peptide tryptic o loʻo i ai le upega tafaʻilagi phosphorylation.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 4.
CK2 faʻafaigofieina le phosphorylation ma le mautu o le ΔFosB i totonu o siama e le i totonu. A, CK2 ae e le o le PKC e foliga mai e fesuiaʻi ai le ΔFosB i sela. Faʻafanua lua phosphatptide o ΔFosB phosphorylated e CK2 poo PKC i vitro poʻo le faʻaaogaina foi o cellules PC12. O uʻamea faʻaalia le malaga mai o le CK2-phosphorylated peptide ae le o le PKC-phosphorylated tasi ma se tasi o ΔFosB phosphopeptides e maua mai i PC12. B, O le ΔFosB phosphorylation i le PC12 o loʻo faʻateleina e ala i le togafitia o siama ma le CK2 activator spermine (SP) ma faʻaititia i togafitiga faʻatasi ma le inhibitor CK2 DRB. I le eseesega, o le ΔFosB phosphorylation i le PC12 e le aafia i togafitiga ma se PKC activator (PMA) poo le PKC-faapitoa inhibitor calphostin-C (Calph). O le autoradiogram sui (top panel) ma le immunoblot (vaega pito i lalo) o loʻo faʻaalia. C-F, Aafiaga o le CK2 faʻamalosi i luga o le faʻamalosia o le ΔFosB. O numera o loʻo faʻaalia ai le taimi (ma le sui autoradiogram) o le faʻaleagaina o le ΔFosB. O le PC12 sela e faʻaali mai ai le ΔFosB na tuʻuina i suʻega o le pulse-chase na faia i le toesea poʻo le auai o le inketi CK2 DRB (C), o le CK2 activator spermine (D), poʻo le inhibitor kinase lautele o le spectrum H-8 (E), lea na faʻaaogaina e pulea ai faʻamatalaga le manino o le DRB. F, Taunuuga o le tuʻituʻiina o le vaega o le CK2 i luga o le faʻatonutonu o le ΔFosB. PC12 suauu na suia i le aRNA (Ctr) poʻo le siRNA o loʻo tulimataʻi le CK2a ma le 24 i le taimi mulimuli na toe faʻafesoʻotaʻi ma se plasmid ΔFosB. O le pito i luga o le laulau o loʻo faʻaalia ai faʻamaʻi puipuia o lysates atoa-cell e faʻaalia ai le aafiaga o le CK2 siRNA i luga o CK2 ma le maualuga o le protein o le ΔFosB. O faʻamaumauga tutusa mo le β-tubulin o loʻo faʻaalia o se faʻatonuina o le faʻaleleia.
Ina ia faʻatalanoa atili le taua o le CK2 e pei o le ΔFosB kinase, sa matou togafitia ai le ΔFosB-faʻaalia o le PC12 faʻatasi ma lua vailaʻau faʻamalositino CK2. E pei ona faʻaalia i Ata 4B, Na faʻaititia le ΔFosB phosphorylation e ala i togafitiga o vailaau PC12 ma le CK2 inhibitor cell DRC (CME)Meggio et al., 1990; Szyszka et al., 1995), ma faʻateleina e ala i togafitiga faʻatasi ai ma le polyamine spermine, ua lauiloa e avea ma malosiaga CK2 malosi (Cochet ma Chambaz, 1983; Meggio et al., 1983). I le eseesega, togafitiga ole sel PC12 ma le PKC inhibitor calphostin-C (Kobayashi et al., 1989; Tamaoki et al., 1990) poʻo le PKC activator PMA (Schmidt ma Hecker, 1975; Beh et al., 1989) e le iʻu i ni suiga taua i le ΔFosB phosphorylation. I le tulaga o le PMA, o le laʻititi (ma e le taua) faʻalauteleina 32O le P-ΔFosB e ono mafai ona mafua ona o le faateleina o le aofaʻi o vaega ΔFosB e mafua mai i lenei fualaau faasaina; o le mea moni, ua lipotia mai o faʻataʻitaʻi o le phorbol e faʻaalia ai le tele o fos family proteins, e aofia ai le FosB (Yoza et al., 1992; Suh et al., 2004). E le gata i lea, o le togafitiga o sela e iai le inhibitor CaMKII patino-cell-permeable m-AIP (Ishida ma Fujisawa, 1995; Stevens et al., 1999) e leʻi iʻu ai foi i le faʻaititia o le ΔFosB phosphorylation (faʻamatalaga e le o faʻaalia). Faatasi, o nei taunuuga e ogatusa ma tatou i vitro sailiiliga ma taʻu mai i totonu o lelaʻau e le i totonu o le ΔFosB e foliga mai o phosphorylated e CK2 ae le o PKC poʻo CaMKII. O le mea moni e le puipuia atoatoa e le CK2 le ΔFosB phosphorylation o loʻo faʻaalia ai le i ai o nisi faʻaopoopoga o phosphorylation i totonu o le porotini.
Na matou vaʻaia mulimuli ane pe o le CK2 o loʻo i ai se sao i le aofaʻiga o le AAF ma o lea i lona mautu. O le mea lea, sa matou faia suʻesuʻega o pulse-chase e faʻaaoga ai vailaʻau o le PC12 e faʻaalia ma le CK2 poʻo le CK2 activator na faʻaaogaina i le suʻesuʻega phosphorylation. E pei ona faʻaalia i Ata 4C, o le togafitiga o sela ei ai le inhibitor CK2 DRB na i ai se aafiaga taua i le fua faatatau o le aofaʻi o le ΔFosB, e molimauina e le suiga i le foliga o lona tapulaa o le faaleagaina, mai le biphasic i se vavalalata e sili atu ona latalata i le mea o le pala. I le isi itu, o le i ai o le CK2 activator spermine na mafua ai le paʻu tele i le fua o le leaga o le ΔFosB, lea na mafua ai le faaputuputuina o le polotini i taimi muamua o le tuli (Mati. 4D).
E pei o le mataupu i le tele o le activators ma le inhibitors, spermine ma DRB e mafai ona i ai ni aafiaga faʻapitoa i fafo atu o le faʻaogaina o le CK2. O le mea moni, o le DRB ua faʻaalia e taofiofia ai le numera o le transcript IIH (TFIIH) -o faʻatasi le kinase (Yankulov et al., 1995), lea e mafua ai le faʻasaina o le RNA polymerase II-faʻasalalauga tusitusia. Talu ai ona o lenei aafiaga e ono aafia ai le mautu o le ΔFosB, matou te iloiloina le aafiaga o le inhibitor kinase lautele H-8 (Hidaka ma Kobayashi, 1992) i le ΔFosB o le suiga i se faʻasalaga (200 μm) e iloa e taofia ai le fesoʻotaʻiga TFIIH ae le CK2 (Yankulov et al., 1995). E pei ona faʻaalia i Ata 4E, togafitiga faʻatasi ma H-8 e leʻi afaina ai le fua faatatau o lafoga o le ΔFosB. Na maua foi tali tutusa i le H-7, le isi inhibitor kinase tele, faʻaaogaina i se faʻasalaga e faʻalavelave ai le fesoʻotaʻiga TFIIH ae le CK2 (faʻamaumauga e le o faʻaalia). O nei faʻamatalaga e lagolago atili ai le faʻamatalaga o le faʻaititia i le faʻatonuga o le ΔFOSB e mafua mai i le DRB e foliga mai e aʻafia i le faʻasaina o CK2.
Ina ia toe faʻatuina le matafaioi o le CK2 i le suiga ole Ava, ua matou suʻesuʻeina taunuuga o le tuʻituʻi i lalo CK2 e ala i siRNA. Na matou faia nei suʻega e faʻaaoga ai vailaʻau PC12 na muaʻi suia i le pule (nontrageting) siRNA poʻo le siRNA e faʻamoemoeina ai le mRNA o le kulimi catalytic o le rat CK2 (CK2α) ma le 24 i mulimuli ane suia i le ΔFosB. E pei ona faʻaalia i Ata 4F, faʻafesoʻotaʻi ma le CK2α siRNA faʻamalosi lelei ma tuitui lalo lalo ole CK2a protein e aunoa ma le aʻafia ai o vaega ole ΔFosB (top panel). Na maua mai i le iloiloga o le pulse-chase, o le tuʻituʻi i lalo CK2 na mafua ai le faateleina o le siitia o le ΔFosB o le numera o le tului e pei ona molimauina e le vave vave o le palatini. O le faʻamaoniaina o le CK2 (e ala i le DRB togafitiga poʻo le siRNA) e faʻaititia ai le siʻitia o le ΔFosB ma mafua ai le leiloloa o le vaega faʻavavevave o le kolisic curve, ae o le CK2 faʻamalosiaga e faʻaleleia ai le laʻititi o le ala, e maua ai le lagolago malosi mo le manatu e faia e CK2 se matafaioi i le faʻatonutonuina o le faʻatulaʻia o le ΔFosB.
CK2 phosphorylates ΔFosB i luga o le Ser27
Ina ia amata ona faailoa le 'upega tafaʻilagi ile ΔFosB phosphorylated e CK2, sa matou faia suʻesuʻega o le phospho-amino acid o le recombinant ΔFosB phosphorylated by CK2 i vitro ma o le ΔFosB phosphorylated i le PC12. O nei suesuega na faaalia ai, i itu uma e lua, na pau lava le phospho-amino acid na maua o phospho-Ser (Mati. 5A). O lenei sailiiliga, faatasi ai ma le stoichiometry na maua mo le CK2 i vitro fomaʻi faʻasolosolo (~50%) (Mati. 3B) ma le i ai o le tasi nofoaga taua i le CK2 phosphopeptide map (Mati. 4A), o loʻo fautua mai ai o le CK2 phosphorylation o le ΔFosB atonu e faʻatapulaʻaina i se tasi o totoe o le serine. O lenei faʻasalaga e ogatusa ma le faʻatalanoaga o le aufaʻatasi o le au faʻatasi (Mati. 2B), lea na valoia na o le tasi le serine candidine, o lona uiga, Ser27, mo CK2. Ua faailoa mai i le iloiloga lafoga lafoga o Ser27 o loo matua puipuia lelei e ala i le evolusione i le aiga Fos (Mati. 5B), ma fautua mai atonu e ono maua ai se galuega taua o le physiological.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 5.
CK2 Phosphorylates ΔFosB i luga o le Ser27. A, Faʻataʻitaʻiga o le Phosphoamino acid o CK2-phosphorylated (i vitro) ma le PC12 cell-phosphorylated ΔFosB e faaalia ai, i itu uma e lua, o le vaega tele o le phosphorylated o le serine. B, O le suʻesuʻeina o faʻataʻitaʻiga o le FosB / ΔFosB amino acid na faʻaalia ai le faasaoina tele o Ser27 i totonu o le aiga Fos mai le tagata i le zebrafish (mea sili ona leaga). Ae ui i lea, o le mea o totoe i le tulaga + 3, lea e manaʻomia mo le konetusi o le CK2, e le faʻasaoina (malamalama malamalama). C, O lela o le HeLa na faʻaaogaina i soo se ituaiga o le ΔFosB (WT) poʻo le ΔFosB e aofia ai le sui sui e sui ai le Ser27 ma Ala (S27A). Seliti na faaigoaina ma le igoa 32FUA3PO4 ma togafitia i le taavale poʻo le spermine (SP) e faʻagaoioi CK2. O le autoradiogram sui (top panel) ma le immunoblot (vaega pito i lalo) o faʻataʻitaʻiga o le ΔFosB ua maua mai. O le faʻaogaina o sela e faʻafefeteina (vete) o loʻo faʻaalia.
Ina ia iloa pe o le ser27 o le phosphorylated i le ΔFosB, matou te suia le toega i Ala, ma iloilo auga i luga o le tulaga phosphorylation o le polotini. O le mea lea, matou te faʻaaogaina ia cellules o le HeLa (lea e mafai ona suia i le maualuga tele) e faʻaali atu ai le mutusiga WT poʻo S27A ΔFosB. E tusa ma le 24 h i le maea ai o le fesuiaiga, o le siama na faaigoaina ma le igoa 32P-orthophosphate, ma le lysates atoa-cell ua saunia. I le mulimuli ai i le puipuiga ma le SDS-PAGE, 32O le P-ΔFosB na maua i le faʻataʻitaʻiga ma le aofaʻi atoa o le ΔFOSB e ala i le puipuia. E pei ona faʻaalia i Ata 5C (vaega pito i lalo), ΔFosB e leʻi maua i vela vevela, ae o sene na suia i le WT poʻo le S27A mutant ΔFosB na faʻaalia lelei le protein. Na matou iloa o le suiga o le S27A na mafua ai le faʻaititia o le (~30%) 32P-ΔFosB maualuga (Mati. 5C, luga o le panel ma le kalafi), e faailoa ai i totonu o sel ola, o le ΔFosB o le phosphorylated i luga o le Ser27. I se taumafaiga e faʻamautu pe i totonu o sel Ser27 e moni lava e phosphorylated e CK2, matou te faʻatusatusaina le gafatia o le CK2 activator e suʻeina le fesuiaiga o le WT ma le S27A ΔFosB. E pei ona ma matauina i taimi muamua i le PC12 sene (Mati. 4B), o le togafitiga o lela o le HeLa ma le spermine na matua faateleina ai le phosphorylation o le WT protein. O le mea moni o lenei aafiaga na faʻaitiitia le faʻaititia e le S27A mutation (Mati. 5C) lagolagoina le faʻamatalaina o Ser27 i le ΔFosB o se mea faʻapitoa mo le CK2.
Faʻafouina o le Ser27 e faʻatonutonu ai le mautu o le ΔFosB
I le faʻamautuina o le faʻamautuina o le ΔFOSB ua faaitiitia pe a taofia CK2 ma faʻaleleia pe a faʻagaoioia CK2 (Mati. 4), ma o CK2 phosphorylates ΔFosB i luga o le Ser27 (Mati. 5), matou te vavalo o le puipuia o le phosphorylation o lenei 'upega tafaʻilagi e tatau ona faʻamalosia ai le polotini. O suʻega faʻataʻitaʻiga na faia ma le faʻaaogaina o sela o le HeLa e faʻaalia ai le WT poʻo le S27A mutant ΔFosB na faʻaalia e faapea, e pei ona valoia, o le suiga o le S27A na mafua ai le faateleina o le maualuga o le paʻu o le ΔFosB, ma le faʻaitiitia o le faʻamaʻi i le afa o le ola o le protein (Mati. 6A). Ona matou suʻesuʻeina lea pe o lenei faiga faʻavae tulafono e tupu foi i le tele-line PC12 cell line. O nei suʻesuʻega na faaalia ai, e pei ona matou matauina i le cellular HeLa, o le suiga o le S27A ua mafua ai se faʻaitiitia iloga i le afa o ola o le ΔFosB i le PC12 (mai le ~11 i le ~4 h)Mati. 6B). O le mea moni e faʻapea, o lenei faʻamalositiga e talitutusa ma le mafuaʻaga na faia e le CK2 poʻo le tuʻituʻi-lalo (Mati. 4) tuʻuina atu se isi lagolago mo le manatu o le CK2-faʻasalalau phosphorylation o Ser27 e faʻamaonia ai le mautu o le ΔFosB. O faʻamaoniga faʻaopoopo mo le faʻatonutonuina o le tulafono a le Ser27 phosphorylation i luga o le ΔFosB faʻaliliuga o le protein na maua mai e faʻaaoga ai le Ser27 phosphomimetic i le Asp mutation (S27D). O le suiga o le S27D e taua o le phospomaimetic, aua o loʻo tuʻuina atu ai se vaega tele (charboxyl) i le amino acids 27 ma faʻaaogaina ai i nisi itu le phosphorylation o le Ser27. E pei ona faʻaalia i Ata 6C, o le suiga o le S27D na mafua ai le faafeagai o le suiga o le S27A ma mafua ai ona sili atu ona mautu le protein nai lo le WT protein. E tutusa foi ma le aafiaga na maua ina ua maeʻa le faʻamalosia o CK2 (Mati. 4D), o le suiga o le S27D na mafua ai le faaputuputu ma siitia ai le maualuga o le ΔFosB i le taimi o itula muamua o le tuli.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 6.
Faʻafouina o le Ser27 e faʻatonutonu ai le mautu o le ΔFosB. A, C, Faʻataʻitaʻiga o le Pulse-chase e faʻaalia ai le aafiaga o le Ser27 phosphorylation i le fua faatatau o le lafoga o le ΔFosB. O le talaaga o le leaga ma le afa-ola fuafuaina o le ituaiga ΔFosB (WT), o le Ser27 i le Ala mutant (S27A), ma le phospomaimetic Ser27 i le Asp mutant (S27D) o loʻo faʻaalia. O nei lava sailiiliga na maua mai i le cellules o le HeLa (A) ma le PC12 sene (B, C).
O le Ser27 phosphorylation e faʻamautuina ai le ΔFosB i le puipuia o le faʻaleagaina o le proteasomal
I le amataina o le faasiliina o le masini lea o le phosphorylation o Ser27 e faamautuina ai le ΔFosB, na matou suesueina le gafatia o le inhibitors proteasome MG132 (Palombella et al., 1994; Tsubuki et al., 1996) ma le epoxicicin (Hanada et al., 1992; Kim et al., 1999) ia faʻafetaui le fua o le faʻaleagaina o le WT ma le S27A mutant ΔFosB. Na faia suʻesuʻega o le pululifa e ala i le faʻaaogaina o vailaʻau PC12 e maua i le HSV e faʻaleleia ai le WT poʻo le S27A ΔFosB ma togafitia faʻatasi ma DMSO poʻo se tasi o le inhibitors e lua o le proteasome. O nei suʻesuʻega na faaalia ai e ui lava o le fua o le leaga o le WT protein e matua le mafai lava ona maua i le auai o se tasi o le lua o le iniseti o le proteasome (Mati. 7A), o le tagata S27A tagata e maaleale i nei fualaau (Mati. 7B). Ua faailoa mai i lenei mea, e le pei o le WT protein, o le SOMNUMXA mutant o se taulaiga o le faaleagaina o le proteasomal. O le mea moni, o le togafitiga o sela e tusa ma le MG27 poʻo le vailaʻau o le vailaʻau e faʻaaogaina ai le suiga o le S132A i le fua o le leaga o le ΔFosB, e molimauina i le maualuga o le afa o le ola o le S27A mutia mai ~27 i ~4 h mo MG9 ma le ~ 132 h mo le epoxicicin (Mati. 7B). Faʻatasi, o nei suʻesuʻega e taʻu mai ai o le phosphorylation o le ΔFosB i Ser27 e puipuia ai le polotini mai le faaleagaina o le proteasomal ma o lea e taua ai mo lona tulaga le mafaagao.
Vaʻai faʻamatalaga lautele:
Ata 7.
O le faʻamalosia o le Ser27 e faʻamautu ai le ΔFosB e ala i le puipuia o le faʻaleagaina o le proteasomal. A, B, Suʻesuʻega o le pulse-chase i vailaʻau o le PC12 e aʻafia i le HSV e faʻaalia ai le faʻaleagaina o le profile ma fuafua le afa-ola o le ituaiga ΔFosB (A) poʻo le S27A ΔFosB (B) i le toesea po o le i ai o le lua o le inhibitors proteasome [MG132 ma le epoxomicin (Epoxo)]. Manatua le mea moni e faapea, o fualaau faasaina e matua taua tele i le faateleina o le ituaiga ΔFosB, ae o le togafitiga o sela ei ai le inhibitor proteasome na mafua ai le faamautuina o le S27A ΔFosB. C, O se faʻataʻitaʻiga mo le matafaioi o le Ser27 phosphorylation i le mafai gafatia o le ΔFosB e faʻatalanoa ai le gaosiga o le mafaufau i le uumi. I le taimi lava e osofaia ai, o le vaega o le ΔFosB e faʻamautuina i le mafaufau e le CK2-mediated phosphorylation o le S27. O lenei mea e maua ai i lona faʻaopoopoga, lea o le a oʻo ai i ni suiga i taimi uumi o faʻamatalaga o le gene. O nei suiga o le falemaʻi i faʻamatalaga o le gafa e fesoasoani i le faʻaleleia lelei o amioga. I le isi itu, o le faʻaogaina o le S27 e le Ser / Thr phosphatases PP1 ma / poʻo le PP2A o le a mafua ai le faʻamautuina o le polotini ma lona gaosiga e masini proteasomal.
Talanoaga
I le suʻesuʻega nei, matou te faʻaalia o le ΔFosB o le afa-ola o le ~10 h i le aganuʻu, lea e faʻamausaliina ai pe a faʻatusatusa i le FosB atoa ma le tele o isi faʻaliliuga tusitusi, e mafai ona puupuu lona afa-ola i le aganuʻu i ni nai minute ma seasea ona sili atu le 3 h (Hann ma Eisenman, 1984; Dobrazanski et al., 1991; Roberts ma Whitelaw, 1999; Ferrara et al., 2003; Hirata et al., 2004). E le gata i lea, tatou te iloa ai o le ΔFosB o le phosphorylated i le faiʻai ma o lona phosphorylation e malamalama lelei i le inhibitor okadaic acid PP1 / PP2A. O a tatou suʻesuʻega aganuʻu o suʻesuʻega o loʻo faʻaalia ai o le faʻamautuina o le ΔFosB o loʻo faʻatulagaina e le CK2, faʻatasi ai ma le maualuga o CK2 faʻamalosia le faʻamautuina o le polotini. I le mea mulimuli, oa tatou sailiga e fautuaina ai CK2 phosphorylates ΔFosB i se vete terminally serum N (S27) ma faʻaalia ai o le phosphorylation o le S27 e puipuia ai le ΔFosB mai le faʻaleagaina o le proteasomal. O lea matou te fautuaina ai se faʻataʻitaʻiga e mafai ai e le phosphorylation o le ΔFosB i luga o le S27 e CK2 ona avea ma faiga faʻavae faatonutonu o le siitaga o le ΔFosB (Mati. 7C). O le faʻalagolago i le phosphorylation-faʻasalalauga faʻapitoa o le ΔFosB e taua tele, ona o le maualuga o le maualuga o le ΔFosB i nisi o potu o le mafaufau ua faʻaalia e faʻatonutonu saʻo ai le tele o genes o le neuronal i vivo ma faʻamalosia ai aʻafiaga o amioga i meaola manu o le tele o le neuropsychiatric disorders (silasila i le Folasaga).
E ui lava o le phosphorylation o se auala vave ma mafai ona toe fetuʻutuʻunaʻi ai le faʻasalalauga o nisi o faʻamatalaga tusitusia, e pei o le CREB (faʻafesoʻotaʻiga o le CAMP o loʻo fusia le protein) (Bohmann, 1990), faʻasolosolo le faʻaleagaina o mea e fesoʻotai ai faʻamaumauga e maua ai se faiga e sili atu ona mamana (faʻaitiitia le faigofie) e faʻatonutonu ai tulafono faatonutonu (Desterro et al., 2000). Faʻamaumauga o le transcription o ana galuega faʻatulagaina e faʻatonutonu i le tulaga o lo latou faʻaleagaina e aofia ai le NFκB (Desterro et al., 2000), c-Myc (Sears et al., 1999), ma le C-Fos (Ferrara et al., 2003), faatasi ai ma isi. I le tele o taimi, o le phosphorylation o se pule faʻatonu o le mausali o se numera o tusitusiga, pei ona faʻaalia mo c-Fos (Okazaki ma Sagata, 1995; Tsurumi et al., 1995), Antigen-1-Fos-related (Fra-1)Vial ma Marshall, 2003), Fra-2 (Manabe et al., 2001), c-Jun (Fuchs et al., 1996), JunB (Fuchs et al., 1997), ATF2 (Fuchs et al., 2000), ma le p53 (Buschmann et al., 2001). O a matou suʻesuʻega e faʻaopoopo atu ai le ΔFosB i lenei lisi o faʻaliliuga o faʻamatalaga o ana galuega faʻatulagaina e faʻatulafonoina e ala i lona faʻatonuina o le faʻalagolago i le phosphorylated.
O le CK2 o se soʻoga ma galue malosi Ser / Thr kinase o loʻo i ai> 300 faʻamaonia substrates faʻailoa mai nei ma o loʻo aafia i le tele o meaola, e aofia ai le oti sela ma ola (Litchfield, 2003; Unger et al., 2004), tali o le telefoni feaveaʻi (Yanagawa et al., 1997; Kato et al., 2003), ma le DNA toe faʻafouina ma toe faʻafouina chromatin (Barz et al., 2003; Krohn et al., 2003). E sili atu ma le tasi vaetolu o substrates putatives o CK2 o aʻafiaga e aafia i le faʻatonutonuina o faʻamatalaga o le gene (Meggio ma Pinna, 2003). O le mea moni, o CK2 ua faʻaalia o se lauiloa faaniukilia taua (Krek et al., 1992) (mo le iloiloga, vaʻai Yu et al., 2001) ma fegalegaleai ai ma le bZIP o loʻo i ai le tele o faʻamatalaga o tusitusiga (Yamaguchi et al., 1998). O le CK2-faʻapipiʻiina le phosphorylation ua faʻaalia foi e faʻafetaui ai le faʻaleagaina (faʻalelei pe faʻaitiitia) o le tele o palatini, e aofia ai IkB (Schwarz et al., 1996), PTEN (Torres ma Pulido, 2001), tioata fesoʻotaʻi (Yin et al., 2000), HMG1 (HMGXNUMX)Wisniewski et al., 1999), ma le tele o faʻamatalaga o tusitusiga e pei o le HMGB (Stemmer et al., 2002), Myf-5 (Winter et al., 1997), ma le c-Myc (Channavajhala ma Seldin, 2002). CK2 sili ona tele i le faiʻai (Alcazar et al., 1988; Girault et al., 1990), ma o lona gaioiga ua faʻaaogaina i le tele o itu o le gaioiga galue, e aofia ai le ola i le tino (Boehning et al., 2003), eseesega (Nuthall et al., 2004), galuega o le eletise ion (Jones ma Yakel, 2003; Bildl et al., 2004), ma le umi o le vaʻaia ma le faʻasolosolo faʻava-o-tino (Diaz-Nido et al., 1992; Lieberman ma Mody, 1999; Reikhardt et al., 2003).
E ui lava i lenei molimau tuputupu aʻe mo le matafaioi o le CK2 i le faʻatonutonuga o le galuega o le neuronal, e itiiti se mea e iloa e uiga i mea e pulea ai lana gaoioiga. E manatu le CK2 e matua sologa lelei, faatasi ai ma le faatonutonuina o lona gafatia e fesuiaʻi ai ni mea autu e faalagolago i le tele o suiga i lona tulaga intracellular (eg, cytosol vs nucleus) (Ahmed ma Tawfic, 1994; Yu et al., 1999). O lenei faʻamatalaga e tuʻuina mai ai se fesili taua e uiga i mea e manaʻomia e faʻamaoniga e faʻaosoosoina ai le ΔFosB faʻapipiʻi i le faiʻai pe a maeʻa le faʻaosooso masani (Mati. 7C). E tasi le manaʻoga o le toe faʻafouina o le fosB gaʻo ma le faʻatagaina o le ΔFosB mRNA (Chen et al., 1995). O a matou faʻamaumauga e faʻaalia ai CK2 phosphorylation o le ΔFosB e taua tele mo lona faʻamautuina, o loʻo fautua mai ai o se faailo lona lua e mafai ona manaʻomia mo aʻafiaga umi o le ΔFosB i le faʻavae o le gene, e pei o se faailo e faʻaosofia ai le phosphorylation o le protein e CK2. E mafai ona aofia ai le faʻamalosia o le CK2 e nisi masini le iloa poʻo lona faʻaaogaina i le nu. I le isi itu, o le CK2 phosphorylation o le ΔFosB e mafai ona aofia ai, e pei o le ΔFosB protein e faaliliuina i tali i mea taitasi e faaosofia ai, o se vaega e maua mai ai le phosphorylated ma tumau ai le tumau, ina ia faʻaosofia pea le maualuga o le neurons.
O a matou sailiga e faʻaalia ai o CK2 ma S27 atonu e le na o le pau ma le nofoaga e nafa ma le ΔFosB phosphorylation, aua e le mafai ona puipuia le CK2 poʻo le S27A ma mafai ona puipuia atoatoa le ΔFosB phosphorylation. O le mea lava e tasi, o le mea moni e faapea, o le suiga o le S27A i le 30% le faaitiitia i le phospho-ΔFosB ua finauina ai o le S27 o se nofoaga tele phosphorylation i luga o le polotini. Ae ui i lea, o loʻo tatou suʻesuʻeina isi nofoaga tuufaʻi ma phosphorylation ile ΔFosB. I le mea mulimuli, o le a taua foi le iloiloga o le fesuiaiga o le S27 ma soo se isi lava phosphorylation sites i le ΔFosB i le mafaufau i vivo pe a mavae ituaiga eseese o mea faʻalaulele, mo se faʻataʻitaʻiga, e ala i le faʻaaogaina o le tele o faʻasolosolo po o vailaʻau o le phosphospecific.
E pei ona taʻua i luga, S27 i le ΔFOSB ua matua faʻasaoina i le atinaʻeina ma i isi Fos protein proteins. Ae ui i lea, o le laasaga autasi mo CK2 e le: e pei ona faʻaalia i Ata 5B, naʻo le FosB / ΔFosB (ma le Zebrafish xenolog), ae le o le C-Fos poʻo le Fra-2, o loʻo i ai se mea faʻapitoa i le + 3, o le mea e sili ona taua o CK2 phosphorylation (Marin et al., 1986; Meggio et al., 1994). O le mea lea, o le leai o CK2 phosphorylation i luga o le S27 e mafai ona faʻamatalaina pe aisea e le ogatasi ai isi protein o Fos e pei o le ΔFosB. Ae peitai, e le o faamatalaina ai le mafuaaga o le FOSB atoa, lea ei ai le maliega tutusa a le CK2 e pei o le ΔFosB, e le tutusa le mautu. Matou te le iloa pe o le FosB atoa o loʻo faʻamalosia e CK2 i luga o lenei mea faʻasaoina. Naʻo lipoti a FosB (Skinner et al., 1997) ma le C-Fos (Okazaki ma Sagata, 1995; Chen et al., 1996) faʻamatalaga faʻamatalaga faʻamatalaga i nofoaga ole C-faʻaogaina o nei palatini, lea e toesea i le ΔFosB. O le phosphorylation o le FosB atoa ma isi fulu protein ole Fos e CK2 e manaʻomia ai suʻesuʻega saʻo. Ae ui i lea, e tusa lava pe maua mai i le phosphorylated, o le isi F protein family proteins e iloa e aofia ai motifusi i a latou C termini e faʻamoemoeina ai palatini mo faʻavavevave vave (Papavassiliou et al., 1992; Jariel-Encontre et al., 1997; Acquaviva et al., 2002). Mo se faʻataʻitaʻiga, ua faʻaalia e faapea o le lautele o residua o le 21 o loʻo i ai i le C terminus o fos family proteins uma, ae le i ai i le ΔFosB, o loʻo avea o se nofoaga faʻamalosi mo le C-Fos (Acquaviva et al., 2001). Na matou iloa e ui lava o lenei faasologa e faʻapena ona faʻamalosia ai le FosB atoa (Carle et al., 2004), o le le i ai o lenei vaega i le ΔFosB e leʻo atoatoa ona faʻatonuina mo lona faʻamautuina. Ae, o le tuufaatasiga o le toesea o lenei vaega C terminus ma le Ser27 phosphorylation e foliga mai o loo atoatoa ona faʻamatalaina mo le faʻaitiitia o le eseʻesega i le va o le ΔFosB ma le FosB.
E ui o le faʻaleagaina o Fos family proteins e faigata ma e le o malamalama atoatoa, o le faʻaleagaina o le proteasomal e foliga mai o le ala sili lea e aofia ai (Salvat et al., 1999; Acquaviva et al., 2002; Ferrara et al., 2003). Faʻamatalaga ua tuʻuina atu iinei, lea e le faʻaititia tele ai le faʻaititia o le ΔFosB, e finau ai, e le pei o isi F protein protein, ΔFosB e aloese mai le proteasome 26S, ma o lenei mea e taua tele i lona faʻamautinoaga. O le mea lea tatou te faia ai se fuafuaga e mafai ai ona maua le faʻamautuina lelei o le ΔFosB i le tuufaatasiga o mea taua e lua: (1) le leai o se C-terminal destabilizing domain ma (2) le phosphorylation o S27 e CK2.
I le aotelega, o le suʻesuʻega o loʻo i ai nei e maua ai le malamalamaʻaga faʻapitoa i le mafuaʻaga o le ΔFosB, o se oloa o vave gaʻo fosB, o le, e le pei o isi uma o le aiga Fos, o se polotini ola umi. E ui o isi F protein family proteins e manatu e vavalalata vave ma le tumau le faagaeetia-fesoʻotaʻiga o tusitusiga (Morgan ma Curran, 1995), o le fesoʻotaʻiga vavalalata o le ΔFOSB o loʻo faʻalagolago i ai le mafai ona faʻatalanoaina suiga tumau o le transcriptal e mafua mai i le faʻaosoosoina masani. O lenei mea e lagolagoina ai le manatu o le galuega a le ΔFosB o se masini komikaina tumau i le mafaufau, ma faasolosolo malie le faaliliuina o tali i ni fetuunaiga masani. O le faʻamaoniga o le Ser27 phosphorylation o se masini tutotonu mo le mautu o le ΔFosB e tatalaina ai auala fou mo le atinaʻeina o auala e faʻatonutonuina ai le galuega a le ΔFosB ma faʻapea ona suia ai ona aafiaga i taimi umi i aʻafiaga faʻaleaganuʻu ma amio.
Faamatalaga Faʻamatalaga
- Maua Novema 21, 2005.
- Toe maua le Fepuari 21, 2006.
- Talia ia Aperila 2, 2006.
- O lenei galuega na lagolagosua e le National Alliance for Research on Schizophrenia ma le Paʻitau o le Young Investigator Award i le PGU, o le National Institute on Drug Abuse (NIDA) National Research Service Award i le PGU, ma tuuina atu mai le National Institute of Health mentally and NIDA ia EJN faafetai atu ia Dr. James Bibb mo lana fesoasoani i le i vitro faʻataʻitaʻiga o le phosphorrylation, Dr Ming-Hu Han mo lana fesoasoani i le sauniuni o le faiʻai pepa e faʻaaogaina mo le igoa faʻamaonia, ma Dr Rachael Neve mo lana fesoasoani i le afifiina o HSV.
- G. Rudenko's present address: Life Science Institute ma le Matagaluega o Fale Talavai, Iunivesite o Michigan, 210 Washtenaw Avenue # 3163A, Ann Arbor, MI 48109-2216.
- E tatau ona tuʻuina atu le faʻatautaia ia Eric J. Nestler, le faletusi a 5323 Harry Hines, Dallas, TX 75390-9070. Imeli: [imeli puipuia]
mau faasino
Acquaviva C, Brockly F, Ferrara P, Bossis G, Salvat C, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2001) Faailoaina o le motusia C-termite motif i totonu o le pulea o le faʻaitiitia vave o le proteasomal o le C-Fos proto-oncoprotein i le taimi o le suiga G (0) -to-S. Oncogene 20:7563-7572.
Acquaviva C, Bossis G, Ferrara P, Brockly F, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2002) Tele auala faʻaleagaina mo fos family proteins. Ann NY Acad Sci 973:426-434.
Ahmed K, Tawfic S (1994) Faʻatulagaina o tulafono faatonutonu i le intracellular protein protein kinase CK2: o le faʻamalosia o le faʻamalosia e faʻasalalau faʻasalalauga. Cell Mol Biol Res 40:539-545.
Alcazar A, Martin E, Lopez-Fando J, Salinas M (1988) Faʻaleleia atili le faʻamalosiga ma meatotino o casein kinase II mai le faiʻai. Neurochem Res 13:829-836.
Andersson M, Westin JE, Cenci MA (2003) Taimi taimi o DeltaFosB masani-e pei o le immunoreactivity ma le mRNA matūafaʻavae pe a uma le faʻamalolo o togafitiga masani o le dopaminomimetic. Eur J Neurosci 17:661-666.
Barz T, Ackermann K, Dubois G, Eils R, Pyerin W (2003) O le lautele o le lautele o mata e faailoa ai se matafaioi i le lalolagi mo protein kinase CK2 i le chromatin remodeling. J Cell Sci 116:1563-1577.
Beh I, Schmidt R, Hecker E (1989) E lua isozymas o le PKC o loʻo maua i HL-60 o loʻo faaalia ai se eseesega i le faʻaagagaina e le TAR o le phorbol. FEBS Lett 249:264-266.
Bildl W, Strassmaier T, Thurm H, Andersen J, Eble S, Oliver D, Knipper M, Mann M, Schulte U, Adelman JP, Fakler B (2004) Protein kinase CK2 o loʻo faʻapipiʻiina i le Ca (2 +) faʻataʻitaʻiina - o le K + ua faʻamalosia ma faʻasaʻoina le gaosiga o laina. Neuron 43:847-858.
Bing G, Wang W, Qi Q, Feng Z, Hudson P, Jin L, Zhang W, Bing R, Hong JS (1997) Faʻamatalaga umi o faʻamatalaga faʻapitoa o le FOS ma le faʻaaogaina ole FosB delta e fesootaʻi ma le faoa faamalosi i le ratopopampus ma le striatum. J Neurochem 68:272-279.
Blom N, Sicheritz-Ponten T, Gupta R, Gammeltoft S, Brunak S (2004) Faʻamatalaga o le faʻasologa o le faʻaliliuga ma le phosphorylation o protein mai le faasologa o le amino acid. Puipuiga 4:1633-1649.
Boehning D, Moon C, Sharma S, Hurt KJ, Hester LD, Ronnett GV, Shugar D, Snyder SH (2003) Neurotransmission o le monoxide e faʻamalosia ai le CK2 phosphorylation o le heme oxygenase-2. Neuron 40:129-137.
Bohmann D (1990) Transcription mafuaʻaga phosphorylation: o se fesoʻotaʻiga i le va o le faʻaliliuga faʻaliliu ma le tulafono faatonutonu o faʻamatalaga o le gene. Cellular Cancer 2:337-344.
Buschmann T, Potapova O, Bar-Shira A, Ivanov VN, Fuchs SY, Henderson S, Fried VA, Minamoto T, Alarcon-Vargas D, Pincus MR, Gaarde WA, Holbrook NJ, Shiloh Y, Ronai Z (2001) Jun NH2-kinase phosphorylation o le p53 i le Thr-81 e taua mo le p53 faʻamautuina ma galuega tusitusi e tali atu i le atuatuvale. Mol Cell Biol 21:2743-2754.
Carle TL, Ulery PG, Nestler EJ (2004) O le le iai o se faʻasao Fos aiga C-terminal domain fesoasoani i le deltaFosB tulaga tutumau tumau. Soc Neurosci Abstr 30: 692.2.
Channavajhala P, Seldin DC (2002) Fesoʻotaʻiga Lelei o le protein kinase CK2 ma c-Myc i lymphomagenesis. Oncogene 21:5280-5288.
Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Faamoemoe BT, Nestler EJ (1995) Faatonutonuina o le Delta FosB ma fosB-like proteins e ala i togafitiga eletoroni ma le togafitiga o cocaine. Mol Pharmacol 48:880-889.
Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Faʻailoga faʻapitoa e aʻafia ai le fos: ala eseese o le ΔFosB faʻaosoina i le faiʻai e togafiti masani. J Neurosci 17:4933-4941.
Chen RH, Juo PC, Curran T, Blenis J (1996) O le faʻaleleia o le C-F i le C-terminus e faʻateleina ai lona gaioiga suiga. Oncogene 12:1493-1502.
Choe ES, Parelkar NK, Kim JY, Cho HW, Kang HS, Mao L, Wang JQ (2004) O le inhibitor phosphatase 1 / 2A inhibitor okadaic acids e faateleina ai le CREB ma le Elk-1 phosphorylation ma le c-fos expression i le rat striatum in vivo. J Neurochem 89:383-390.
Cochet C, Chambaz EM (1983) Polyamine-faʻapipiʻi protein phosphorylations: o se faʻatagaina mo le gaioiga o le polyamine intracellular. Mol Cell Endocrinol 30:247-266.
Cochet C, Feige JJ, Chambaz EM (1983) Faʻaleaga faʻaleagaina ma mole molepiʻa o se ituaiga o g type case kin kinase e sili ona faʻamamaina mai le tino o le toto. Biochim Biophys Acta 743:1-12.
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW (2003) O le tele o le faʻamatalaga faapitoa o le ituaiga o DeltaFosB e faʻateleina ai le faʻamalosi mo le koko. J Neurosci 23:2488-2493.
Daunais JB, Roberts DC, McGinty JF (1993) O le puleaina o le cocaine e sili atu le tupu muamua, ae le o le f-fos, mRNA i le rat. NeuroReport 4:543-546.
Desterro JM, Rodriguez MS, Hay RT (2000) Faʻataʻitaʻiga o mafuaʻaga tau tusitusiga e ala i le faʻaleagaina o le protein. Cell Mol Life Sci 57:1207-1219.
Diaz-Nido J, Armas-Portela R, Avila J (1992) Faʻapupulaina o le casein kinase cytoplasmic case II kinisi e faʻatasi ai ma le mea e tupu i luga o le fatu pe a maeʻa le DNA inisiua i le NIA-103 neuroblastoma kamela. J Neurochem 58:1820-1828.
Di Maira G, Salvi M, Arrigoni G, Marin O, Sarno S, Brustolon F, Pinna LA, Ruzzene M (2005) Protein kinase CK2 phosphorylates ma toe faʻasalalau Akt / PKB. Sesega o le Cell Misa 12:668-677.
Dobrazanski P, Noguchi T, Kovary K, Rizzo CA, Lazo PS, Bravo R (1991) O oloa uma e lua o le fosB, FosB ma lona fomu puupuu, FosB / SF, o tagata tusitusi i le fibroblasts. Mol Cell Biol 11:5470-5478.
Ferrara P, Andermarcher E, Bossis G, Acquaviva C, Brockly F, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2003) O le faʻatulagaga o le faʻatinoina o le faʻaleagaina o le protein-fos protein proteasomal e eseese e tusa ai ma tuutuuga o faʻamatalaga. Oncogene 22:1461-1474.
Fuchs SY, Dolan L, Davis RJ, Ronai Z (1996) Faʻaauau le faʻaogaina o le Phosphorylation o le faʻatulagaina o le C-Jun e le Jun N-kinase. Oncogene 13:1531-1535.
Fuchs SY, Xie B, Adler V, Fried VA, Davis RJ, Ronai Z (1997) c-Jun NH2-kinasesini kinasele e faʻamoemoe i le faʻatinoina oa latou mea e fesoʻotai faʻatasi ai. J Chem Biol 272:32163-32168.
Fuchs SY, Tappin I, Ronai Z (2000) O le tumau o le ATF2 transcript factor e faʻatonutonuina e le phosphorylation ma le dephosphorylation. J Chem Biol 275:12560-12564.
Girault JA, Hemmings HC Jr, Williams KR, Nairn AC, Greengard P (1989) Faʻapipiʻiina o le DARPP-32, phospamine-ma le CAMP-phospophrotein faʻatonutonu, e le casein kinase II. J Chem Biol 264:21748-21759.
Girault JA, Hemmings HC Jr, Zorn SH, Gustafson EL, Greengard P (1990) Faʻaalia i le faiʻai mamamele o le DARPP-32 serine kinase tutusa ma le casein kinase II. J Neurochem 55:1772-1783.
Hanada M, Sugawara K, Kaneta K, Toda S, Nishiyama Y, Tomita K, Yamamoto H, Konishi M, Oki T (1992) Epoxomicin, o se sui fou o le antitumor o le microbial origin. J Antibiot (Tokyo) 45:1746-1752.
Hann SR, Eisenman RN (1984) Puipuia ua fauina e le tagata c-myc oncogene: faʻamatalaga eseese i vela e le neoplastic. Mol Cell Biol 4:2486-2497.
Hemmings HC Jr, Girault JA, Williams KR, LoPresti MB, Greengard P (1989) ARPP-21, o le phosphoprotein AMP-faʻamaonia (Mr = 21,000) ua faʻamaoaigaina i le oʻoi luga o le faiʻai o le dopamine-innervated. O le faasologa o le amino acids o le laupepa ua lipotia mai e le AMP cyclic i totonu o le tino ma le suesuega o le phosphorylation in vitro. J Biol Chem 264:7726-7733.
Hidaka H, Kobayashi R (1992) Pharmacology o inhibitors protein kinase. Annu Rev Pharmacol Toxicol 32:377-397.
Hirata H, Bessho Y, Kokubu H, Masamizu Y, Yamada S, Lewis J, Kageyama R (2004) O le faʻaletonu o le Hes7 protein e taua tele mo le ata o le vaega o le somite. Nat Genet 36:750-754.
Hiroi N, Graybiel AM (1996) O togafitiga o le neurolepic e masani ai ma le masani e faʻaaogaina ai polokalame manino o faʻamatalaga o faʻamatalaga i totonu o le striatum. J Comp Neurol 374:70-83.
Faamoemoe B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ (1992) Faʻataʻitaʻiga o faʻamatalaga vave o le kenera ma le AP-1 o loʻo fusifusia i totonu o le 'iole o loʻo aʻafia e cocaine masani. Faʻaalia Natl Acad Sci USA 89:5764-5768.
Hope BT, Kelz MB, Duman RS, Nestler EJ (1994a) O togafitiga faʻafuasei o le faoa faamalosi o le electroconvulsive (ECS) e maua ai le faʻaalia o se AP-1 tumau umi i le faiʻai ma le suia o foliga ma uiga. J Neurosci 14:4318-4328.
Faamoemoe BT, Maua HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ (1994b) Faʻailoga o se AP-1 umi umi faʻalavelave e aofia ai fesuiaiga ole Fos-like i le faiʻai e le cocaine masani ma isi togafitiga masani. Neuron 13:1235-1244.
Ishida A, Fujisawa H (1995) Faʻaleleia o le kinosini-faalagolago le protein kinase II e ala i le vaega ole autoinhibitory. J Chem Biol 270:2163-2170.
Jariel-Encontre I, Salvat C, Steff AM, Pariat M, Acquaviva C, Furstoss O, Piechaczyk M (1997) Auala faʻapitoa mo le i-fos ma le faʻaleagaina o le c-junior. Mol Biol Rep 24:51-56.
Jones S, Yakel JL (2003) Casein kinase ii (protein kinase ck2) e faatonutonu ai le serotonin 5-ht (3) o le alatusi o le taligalu o loʻo maua i ng108-15. Neuroscience 119:629-634.
Kato T Jr, Delhase M, Hoffmann A, Karin M (2003) CK2 o le C-terminal IkappaB kinase e nafa mo le activation o NF-kappaB i le taimi o le tali a UV. Mol Cell 12:829-839.
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ (1999) O le faʻamatalaga o le faʻailoga deltaFosB i le faiʻai e taofiofi ai le lagona lelei i le cocaine. natura 401:272-276.
Kim KB, Myung J, Sin N, Crews CM (1999) Puipuiga puipuia mai mea masani o oloa gaosia oloa ma le dihydroeponemycin: malamalamaaga i tulaga patino ma le gafatia. Bioorg Med Chem Lett 9:3335-3340.
Kobayashi E, Nakano H, Morimoto M, Tamaoki T (1989) Calphostin C (UCN-1028C), o le komipiuta microbial compound, o se inhibitor sili ona malosi ma faapitoa o le protein kinase C. Biochem Biophys Commun Res 159:548-553.
Krek W, Maridor G, Nigg EA (1992) Casein kinase II o se eletise faaniukilia sili ona taua. J Cell Biol 116:43-55.
Krohn NM, Sūmū C, Fojan P, Grimm R, Grasser KD (2003) Protein kinase CK2 phosphorylates le maualuga o le vaega o le vaega o le SSRP1, o le faatosinaina o le aloaia o DNA ua faaleagaina. J Chem Biol 278:12710-12715.
Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DEH, Tuilosaga HT, Russo SJ, LaPlant Q, Fugalati K, Neve RL, Tagata Uluaʻi DW, Nestler EJ (2005) O le faʻafouina o Chromatin o se faʻaaogaina autu e mafua ai le cocaine-faʻapipiʻiina le palasitisi i le gataifale. Neuron 48:303-314.
Lieberman DN, Mody I (1999) Casein kinase-II e faatonutonuina ai le auaunaga a le NMDA i le hippocampal neurons. Nat Neurosci 2:125-132.
Litchfield DW (2003) Protein kinase CK2: fausaga, tulafono faatonutonu ma le matafaioi i filifiliga taugata o le olaga ma le oti. Biochem J 369:1-15.
Manabe T, Kuramoto N, Nakamichi N, Aramachi K, Baba K, Hirai T, Yoneyama M, Yoneda Y (2001) Faʻaleagaina o le c-Fos protein na faʻaalia e N-methyl-d-apartic acid i vaega ninii faaniukilia o le hippocampus murine. Brain Res 905:34-43.
Mandelzys A, Gruda MA, Bravo R, Morgan JI (1997) O le leai o se faʻaauau o le 37 kDa flog-related antigen ma le AP-1-pei o le DNA-binding binding in the brains of kainic acids treated fosB null souris. J Neurosci 17:5407-5415.
Marin O, Meggio F, Matiiori F, Borin G, Pinna LA (1986) Nofoaga patino o casein kinase-2 (TS) mai le cytosol o le ate rat. Se suʻesuʻega faʻataʻitaʻi ma peptide ata. Eur J Biochem 160:239-244.
McClung CA, Nestler EJ (2003) Faatonutonuina o faʻamatalaga o le gutu ma le cocaine e le CREB ma le DeltaFosB. Nat Neurosci 6:1208-1215.
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ (2004) DeltaFosB: se fomaʻi mole mole mo le taimi umi i le faiʻai. Brain Res Mol Brain Res 132:146-154.
Meggio F, Pinna LA (2003) E tasi le afe-ma-tasi vaega o le protein kinase CK2? FASEB J 17:349-368.
Meggio F, Donella-Deana A, Pinna LA, Moret V (1977) Phosphorylation o casein vaega ninii e le ate ate 'phosvitin kinase.'. FEBS Lett 75:192-196.
Meggio F, Brunati AM, Pinna LA (1983) Autophosphorylation o le ituaiga 2 casein kinase TS i ona pusa alpha-ma beta-subunits. Aafiaga o tagata eseese. FEBS Lett 160:203-208.
Meggio F, Shugar D, Pinna LA (1990) Ribofuranosyl-benzimidazole e pei o inhibitors o casein kinase-2 ma casein kinase-1. Eur J Biochem 187:89-94.
Meggio F, Marin O, Pinna LA (1994) Substrate faapitoa o protein kinase CK2. Cell Mol Biol Res 40:401-409.
Miller C, Zhang M, He Y, Zhao J, Pelletier JP, Martel-Pelletier J, Di Battista JA (1998) Faʻaaogāina o le faʻasaina o le cyclooxygenase-2 gene e ala i le okadaic acid inhibition o gaoioiga phosphatase i le chondrocytes a le tagata: faʻamalosia o le AP-1 ma CRE faʻamalosi pipiʻi pipiʻi. J Cell Biochem 69:392-413.
Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel AM (1996) Faʻafesoʻotaʻiga i le faʻaleleia o fesoʻotaʻiga i faʻamaoniga o le puipuiga o le Fos-Jun i le laʻau i le taimi o togafitiga faʻasolosolo masani ma le faʻasolosolo. Neuron 17:147-156.
Morgan JI, Curran T (1995) Vaʻa vave-gasegase vave: sefulu tausaga i le. Trends Neurosci 18:66-67.
Nakabeppu Y, Nathans D (1991) O se faʻalavelave faʻapitoa o le FosB e faʻalavelaveina ai le tusiga Fos / Jun. potu 64:751-759.
Nestler EJ, Barrot M, Self DW (2001) Delta FosB: se fomaʻi mole mole puipui mo le tagofia o mea ua fai ma vaisu. Faʻaalia Natl Acad Sci USA 98:11042-11046.
Neve RL, Howe JR, Hong S, Kalb RG (1997) Folasaga o le faʻaaogaina o le glutamate o loʻo maua ai le 1 i totonu o le afi uila in vitro ma i vivo e faʻaoga ai se siama faʻataʻitaʻiina o le herpes simplex. Neuroscience 79:435-447.
Nuthall HN, Joachim K, Stifani S (2004) Faʻapipiʻiina o le serine 239 o Groucho / TLE1 e protein kinase CK2 e taua tele mo le faʻasaina o le eseesega o le neuronal. Mol Cell Biol 24:8395-8407.
Okazaki K, Sagata N (1995) O le ala Mos / MAP kinase e faʻaleleia ai le C-F e ala i le phosphorylation ma faʻamalosia ai lona suiga i le NIH 3T3. EMBO J 14:5048-5059.
Palombella VJ, Rando OJ, Goldberg AL, Maniatis T (1994) O le alaquitin-proteasome auala e manaʻomia mo le faʻaaogaina o le protein Nursite B1 precursor ma le faʻamalosia o NF-Kappa B. potu 78:773-785.
Papavassiliou AG, Treier M, Chavrier C, Bohmann D (1992) Faʻaleagaina faʻaleagaina o le C-Fos, ae le o v-Fos, e ala i se faailo o le phosphorylation i le c-Jun. saienisi 258:1941-1944.
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E (2003) O le le mautonu, o le faiʻai o le vaega-faapitoa o faʻamatalaga o se tagata le lelei o le m-C-Jun i moa felaʻifoʻi ua faʻaitiitia ai le lagona i le koko. Brain Res 970:73-86.
Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ (2004) Faʻailoaina o DeltaFosB i faʻaleleia o faiʻai i le taui pe a mavae le faʻalavelave masani. J Neurosci 24:10594-10602.
Persico AM, Schindler CW, O'Hara BF, Brannock MT, Uhl GR (1993) Faailoga o le numera o le tusiga o le Brain: aafiaga o le amphetamine mataga ma le masani ma le tui o tui. Brain Res Mol Brain Res 20:91-100.
Ploegh HL, Dunn BM (2000) Faʻaliliuga o le Falemeli: phosphorylation ma phosphatases. I: Taiala faʻaonapo nei i totonu o le protein proteins (Dunn BM, ed.) Pp. 13.01-13.02. Niu Ioka: Wiley ma Atalii.
Pyerin W, Burow E, Michaely K, Kubler D, Kinzel V (1987) Catalytic ma mole molemoa o le phosvitin / casein kinase type II mai le tino epithelial sel i le aganuu (HeLa) ma le sootaga i le ecto protein kinase. Biol Chem Hoppe Seyler 368:215-227.
Reikhardt BA, Kulikova OG, Borisova GY, Aleksandrova IY, Sapronov NS (2003) Tulaga o le polokalama "protein kinase CK2-HMG14" i le amnesia e tusa ai ma le matua i tausaga e matua. Neurosci Behav Physiol 33:799-804.
Roberts BJ, Whitelaw ML (1999) Faʻaleagaina o le helix-loop-helix / Per-ARNT-Sim homology domain dioxin receptor e ala ile alaquitin / proteasome auala. J Chem Biol 274:36351-36356.
Rost B, Yachdav G, Liu J (2004) Le predictProtein server. Nucleic Acids Res 32:W321-W326.
Rylski M, Kaczmarek L (2004) Ap-1 taulaʻi i le faiʻai. Front Biosci 9:8-23.
Sahin B, Kansy JW, Nairn AC, Spychala J, Ealiki SE, Fienberg AA, Greene RW, Bibb JA (2004) O le faʻamalamalamaina o le musele adenosine kinase ma le iloiloga o se faʻataʻitaʻiga mo le protein phosphorylation. Eur J Biochem 271:3547-3555.
Salvat C, Aquaviva C, Jariel-Encontre I, Ferrara P, Pariat M, Steff AM, Carillo S, Piechaczyk M (1999) E i ai le tele o auala puipuia e saofaga i le C-Fos, c-Jun ma le p53 i le faʻaleagaina o le protein i vivo? Mol Biol Rep 26:45-51.
Schmidt R, Hecker E (1975) Faʻaaogaina o le estia phorbol i lalo o tulaga masani e teu ai. Taʻi maʻi 35:1375-1377.
Schwarz EM, Van Antwerp D, Verma IM (1996) O le phosphorylation faʻatasi o le IkappaBalpha e le casein kinase II e sili ona tupu i le serini 293: manaoga mo le faʻaleagaina o le IkappaBalpha free. Mol Cell Biol 16:3554-3559.
Sears R, Leone G, DeGregori J, Nevins JR (1999) Faʻamalosia e Ras le faʻamautuina o le protein Myc. Mol Cell 3:169-179.
Silva-Neto MA, Fialho E, Paes MC, Oliveira PL, Masuda H (2002) O le nucleotide tutoatasi o le phosphorrylation o le vitellin e le casein kinase II ua faamamaina mai Rhodnius prolixus ocycytes. Insect Biochem Mol Biol 32:847-857.
Skinner M, Qu S, Moore C, Poto R (1997) O le faʻaliliuina ma le suiga o le fesuiaiga e le protein FosB e manaʻomia ai le phosphorylation o le vaega o le faʻamalosia o le carboxyl-terminal. Mol Cell Biol 17:2372-2380.
Sulu C, Schwander A, Bauw G, Fojan P, Grasser KD (2002) Protein kinase CK2 eseese le phosphorylates mailei chromosomal high move group B (HMGB) protein e faʻafetaui ai lo latou faʻamautuina ma fesoʻotaʻiga DNA. J Chem Biol 277:1092-1098.
Stevens I, Derua R, Rondelez E, Waelkens E, Merlevede W, Goris J (1999) Faailoaina o le cyk, o le B2 kinase cyclin, e avea o se papa o le calcium / calmodulin-dependent protein kinase II ma lona matafaioi i le Xenopus laevis oocyte maturation. Faʻaaoga Sini Cell 252:303-318.
Suh HW, Choi SS, Lee JK, Lee HK, Han EJ, Lee J (2004) Faatonutonuina o le c-fos ma le c-jun gene expression by lipopolysaccharide ma cytokines i tagata muamua e suʻesuʻeina astrocytes: aafiaga o auala o PKA ma PKC. Arch Pharm Res 27:396-401.
Szyszka R, Boguszewska A, Grankowski N, Ballesta JP (1995) Eseese le phosphorylation o le ribosomal proteins acidic mai le yeast cell e lua fusi o le protein kinases: casein kinase-2 ma le 60S kinase. Galue Biochim Pol 42:357-362.
Tamaki T, Takahashi I, Kobayashi E, Nakano H, Akinaga S, Suzuki K (1990) Calphostin (UCN1028) ma le calphostin o loʻo fesoʻotaʻi, o se vasega fou o faʻamaʻi faapitoa ma malolosi inhibitors o protein kinase C. Adv Second Messenger Phosphoprotein Res 24:497-501.
Torres J, Pulido R (2001) O le PTEN o le tumutumu o le tumo o le phosphorylated e le protein kinase CK2 i lona C iuga. O aʻafiaga mo le faʻaleleia o le PTEN i le faʻaleagaina o le puipuiga. J Chem Biol 276:993-998.
Tsubuki S, Saito Y, Tomioka M, Ito H, Kawashima S (1996) Faʻailoga eseʻese o le paopain ma le proteasome gaoioiga e le peptidyl aldehydes o le di-leucine ma le tri-leucine. J Biochem (Tokyo) 119:572-576.
Tsurumi C, Ishida N, Tamura T, Kakizuka A, Nishida E, Okumura E, Kishimoto T, Inagaki M, Okazaki K, Sagata N (1995) O le faʻaitiitia o le C-F e le 26S proteasome ua faʻateleina e le C-Jun ma le tele protein kinases. Mol Cell Biol 15:5682-5687.
Unger GM, Davis AT, Slaton JW, Ahmed K (2004) Protein kinase CK2 o le pule o le ola ola: faʻafitauli mo togafitiga o le kanesa. Curr Cancer Drug Targets 4:77-84.
Vial E, Marshall CJ (2003) O le maualuga o le ERK-MAP kinase e puipuia ai le FOS Family family FRA-1 e faʻaleagaina le proteasomal i siama o le coloncin carcinoma. J Cell Sci 116:4957-4963.
Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S (2002) ΔFosB faʻafoe le faʻaauau o le uila. J Neurosci 22:8133-8138.
Whitmarsh AJ, Davis RJ (2000) Faatonutonuina o le galuega o tusitusiga i le phosphorylation. Cell Mol Life Sci 57:1172-1183.
Winter B, Kautzner I, Issinger OG, Arnold HH (1997) E lua mea e maua ai le protein kinase CK2 phosphorylation nofoaga e taua mo le galuega a Myf-5. Biol Chem 378:1445-1456.
Wisniewski JR, Szewczuk Z, Petry I, Schwanbeck R, Renner U (1999) Faʻafesoʻotaʻi le phosphorylation o siʻufoʻamea o le vaega maualuga o le eletise 1 proteins e casein kinase II e suia ai le faʻamautuina, mautu, ma le DNA e faʻamaonia faʻamaoni. J Chem Biol 274:20116-20122.
Yamaguchi Y, Wada T, Suzuki F, Takagi T, Hasegawa J, Handa H (1998) O le Casein kinase II e fegalegaleai ma le domains BZIP o nisi o tusitusiga. Nucleic Acids Res 26:3854-3861.
Yanagawa T, Yuki K, Yoshida H, Bannai S, Ishii T (1997) Faʻapipiʻiina o le A170 faʻamalosia le protein e le casein kinase II-pei o le gaoioiga i macrophages. Biochem Biophys Commun Res 241:157-163.
Yankulov K, Yamashita K, Roy R, Egly JM, Bentley DL (1995) O le inhibitor elongation transcriptional 5,6-dichloro-1-beta-d-ribofuranosylbenzimidazole inhibits factor transcript factor IIH-fesootai protein kinase. J Chem Biol 270:23922-23925.
Yen J, Atamai RM, Tratner I, Verma IM (1991) O le isi fesuiaiga o le FosB o se faʻatonuga le lelei o le faʻaliliuina o tusitusiga ma le suiga e fosa protein. Faʻaalia Natl Acad Sci USA 88:5077-5081.
Yin X, Jedrzejewski PT, Jiang JX (2000) Casein kinase II phosphorylani tioata e fesoʻotaʻi ma le 45.6 ma o loʻo aafia i lona faʻaleagaina. J Chem Biol 275:6850-6856.
Yoza BK, Brooks JW, Mizel SB (1992) Faʻailoga o vaega AP-1 faʻaliliuga i vaega o le T-cell activation e le eletise 1 ma le estu phorbol. Lautele le Tuputupu Aʻe 3:677-684.
Yu S, Wang H, Davis A, Ahmed K (2001) Taunuʻuga o le CK2 o loʻo faʻamaonia ai le matāʻupu taulaukilia. Mol Cell Biochem 227:67-71.
Yu S, Davis AT, Guo C, Green JE, Ahmed K (1999) Vaʻaiga eseese o le proté protein kinase CK2 i le matatiole faʻatekonolosi i luga o faʻamatalaga le tumau o ona vaega. J Cell Biochem 74:127-134.
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchmann T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ (2006) ΔFosB: o se matafaioi taua mo le ΔFosB i le nucleus accumbens i le gaoioiga morphine. Nat Neurosci 9:205-211.
Mataupu e taʻua ai lenei tusiga
- Tali Faʻatonu ma Faʻatulagaga i le Cocaine Faʻanoanoa e Manaʻomia ai le Fafaga Faʻatasi o le Fafagaina [Delta] FosB ma Calcium / Calmodulin-Protein Protein Kinase II i le Nucleus Accumbens Shell Journal of Neuroscience, 6 Mati 2013, 33(10):4295-4307
- Faʻaalia o le {Delta} Faʻailoga FosBai Levodopa-Faʻasalaga Faʻafiafiaga Lelei Journal of Neuroscience, 26 Me 2010, 30(21):7335-7343
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- Faʻaaogaina o mea na fai ma vaisu: matafaioi a {Delta} FosB Faʻamatalaga Faʻamatalaga a le Royal Society B: Faʻataʻitaʻiga Faʻatura, 12 Oketopa 2008, 363(1507):3245-3255
- Faʻaauau le faʻafitauli i le toe faʻaleleia o le methamphetamine-amioga saili i le laina o le gaogao-o aʻafiaga e mafua mai ai le musele mutant O le FASEB Journal, 1 Iulai 2007, 21(9):1994-2004
- O le Activator Protein-1 Transcription Factor i le Epithelium Carcinogenesis Suesuega o le Kanesa Mumu, 1 Fepuari 2007, 5(2):109-120
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