Neuroton dopaminergjik neuropastik i indukuar endogjen në zonën tegmentale të barkut ndikon shpërblimin natyror dhe opiat (2014)

KOMENTE: La Studimet DeltaFosB ne shpesh përmendim të gjithë të përqëndruar në bërthama accumbens (qendra e shpërblimeve), dhe zbuloi se seksi pothuajse udhëton të njëjtat mekanizma të trurit si meth & kokainë. Nga studimi historik nga ky studiues i njëjtë (Aktet e Shpërblimeve Natyrore dhe të Drogës mbi Mekanizmat e Përbashkët të Plastikimit Neural me ΔFosB si Ndërmjetës kryesor (2013)):

Kështu, shpërblimet natyrore dhe ato të ilaçeve jo vetëm që konvergojnë në të njëjtën rrugë nervore, ato bashkohen në të njëjtat ndërmjetësues molekularë, dhe ka të ngjarë në të njëjtat neurone në Nucleus Accumbens, për të ndikuar në shkëlqimin e nxitjes dhe "dëshirën" e të dy llojeve të shpërblimeve

Largimi: metoda, kokaina dhe seksi të gjitha bëjnë të njëjtat gjëra themelore në të njëjtat qeliza nervore në qendrën e shpërblimit (nucleus accumbens), çfarëdo që mund të bëjnë ndryshe diku tjetër në tru. Kjo shpërbë pikë e zakonshme duke folur se shpërblimet natyrore dhe barnat ndryshojnë në mekanizma dhe efekte.

Ky studim i ri shqyrtoi se çfarë bën seksi në VTA. VTA është vendi ku fillojnë qelizat nervore që prodhojnë dopaminë - dhe ato degëzohen në bërthamën e akumbensit, korteksit ballor dhe amigdalës. Në thelb VTA është burimi (burimi) i shumicës së dopaminës sonë. Shihni këto 2 fotografi të qarkut të shpërblimit: Pic1, Pic2

Studiuesit zbuluan se seksi (kulmi) shkakton trupat e qelizave në VTA për tkurrje përkohësisht (në meshkuj). Trupat e qelizave dhe dendritet e tyre përbëjnë lëndën gri të trurit. Kjo është pikërisht ajo që varësia e heroinës i bën VTA-së (jo një herë përdorimi i heroinës, por përdorimi kronik i heroinës). Vini re se ky tkurrje e vetme e trupave qelizor VTA ndodh në personat e varur nga heroina njerëzore.

Tkurrja e qelizave të shkaktuara nga seksi zgjat për të paktën 7 ditë. Ndryshimet e nxitura nga gjinia ishin rikthyer në normale në ditët 30, por hulumtuesit vlerësuan vetëm ditët 1, 7 dhe 30.

Tkurrja e trupave qelizorë në varësinë nga heroina rezulton në dopaminë më të ulët në bërthamën e akumbensit - ose atë që ne e quajmë desensitization. Studiuesit administruan morfinë te minjtë për të vlerësuar përgjigjen e tyre (pas seksit), por asgjë nuk ndodhi. Zakonisht minjtë e pëlqejnë shumë morfinën, por këtu ata desensibilizohen përkohësisht. Me pak fjalë, qarku i shpërblimit të minjve pas-ejakulatorit nuk i përgjigjej nivelit të ulët të heroinës. Studiuesit supozuan se do të duheshin doza më të larta për të shkaktuar një reagim "normal" të miut.

Për ta përmbledhur - Seksi (përkohësisht) bën të njëjtën gjë në VTA ashtu si edhe varësia ndaj heroinës: tkurrja e dopaminës që prodhon trupat e qelizave nervore. Kjo çon në dopaminë më të ulët në qendrën e shpërblimit, dhe më pak reagim ndaj narkotikëve - dhe duhen të paktën 7 ditë që truri i miut të shërohet.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

pitchers KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstrakt

Shpërblimi natyror dhe drogat e abuzimit konvergojnë në shtegun mesolimbik dhe aktivizojnë mekanizmin e përbashkët të plasticitetit nervor në bërthamën accumbens. Ekspozimi kronik ndaj opiates shkakton plasticitet në neuronet dopaminergjike të zonës tegmentale ventrale (VTA), e cila rregullon tolerancën e shpërblimit morfine.

Këtu ne provojmë hipotezat se lirimi i opioideve endogjene në VTA shkakton ndryshime morfologjike të qelizave dopamine të VTA në minjtë meshkuj, të cilët në anën tjetër rregullojnë shprehjen afatgjatë të përforcimit të sjelljes seksuale të përvojës.

Së pari, përvoja seksuale zvogëloi VTA dozën dopamine soma 1 dhe 7 ditë, por jo 30 ditë pas sesionit të fundit të çiftëzimit. Ky efekt u bllokua me nalokson para secilës sesion takimi; kështu, plasticiteti i qelizës dopamine VTA ishte i varur nga veprimi i opioideve endogjene.

Nga ana tjetër, plasticiteti i VTA ishte i lidhur me shpërblimin e ndryshuar të opiumit, pasi meshkujt me përvojë seksualisht nuk formonin preferencën e vendit të kushtëzuar për morfinin 0.5 mg / kg.

Tjetra, u përcaktua nëse veprimi opioid endogjen ndërmjetëson shpërblimin seksual dhe kujtesën në minjtë meshkuj të trajtuar me nalokson gjatë përvojës së çiftëzimit, qoftë sistemikisht ose intra-VTA. Naloxone nuk e ka penguar lehtësimin fillestar të sjelljes seksuale të sjelljes seksuale gjatë seancave të përsëritura të çiftëzimit, ose preferencës së kushtëzuar të vendit për t'u çiftëzuar. Megjithatë, trajtimi nalokson zbutte shprehjen afatgjatë të lehtësimit të përvojës së sjelljes seksuale dhe aktivizimit nervor në zonat mesolimbike të nxitura nga cues të kushtëzuar nga çiftëzimi.

Së bashku, këto të dhëna tregojnë se opioidet endogjene gjatë çiftëzimit nxisin plasticitetin nervor në neuronet e VTA dopamine që duken kritike për shpërblimin morfinë dhe kujtesën afatgjatë për sjelljen e shpërblimit natyror.

 

Prezantimi

Sjelljet e shpërblimit natyror janë ndërmjetësuar nga sistemi mesokortikolimik (Meisel dhe Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Droga e abuzimit shkakton ndryshime nervore në këtë sistem, të cilat në kthim kontribuojnë në zhvillimin dhe shprehjen e abuzimit të substancave (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). Ne kemi përcaktuar më parë se përvoja me sjelljen e shpërblimit natyror, dmth., Përvoja seksuale në minjtë meshkuj, gjithashtu shkakton plasticitet nervor në bërthamë accumbens (NAc), duke përfshirë shtyllat dendritike në rritje (Pitchers et al., 2010a) dhe deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Nga ana tjetër, kjo plasticitet i nxitur nga gjinia është kritike për efektet e përvojës seksuale në matingin e mëvonshëm, që manifestohet si lehtësim i inicimit dhe kryerjes së sjelljes seksuale (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Për më tepër, përvoja seksuale ndryshon reagimin ndaj psikostimulantëve, duke përfshirë sensibilizimin e aktivitetit lokomotor dhe shpërblimin e shtuar (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

NAc është një objektiv i poshtëm i neuroneve dopaminergjike në zonën tegmentale ventrale (VTA). Neuronet dopamine të VTA aktivizohen gjatë mating dhe pas ekspozimit ndaj cues të kushtëzuar parashikues të shpërblimit seksual (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), përmes peptidit opioid endogjen (EOP) -binding në receptorët μ-opioid (MORs; Matthews dhe gjermanisht, 1984; Johnson dhe Veri, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Prandaj, ekspozimi ndaj cues të kushtëzuar që parashikon sjelljen seksuale shkakton çlirimin e aktivizimit të EOP dhe VTA të qelizave dopamine, e cila lehtëson motivimin seksual (Mitchell dhe Stewart, 1990; van Furth dhe të tjerët, 1995; van Furth dhe van Ree, 1996) dhe lirimin e dopaminës në NAc (Fiorino et al., 1997).

Ekspozimi i përsëritur ndaj opiateve ekzogjene shkakton ndryshime morfologjike në VTA (Mazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison dhe Nestler, 2012), zvogëlon madhësinë e soma të neuroneve dopamine të VTA (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), ulur nivelet e proteinave neurofilament (Beitner-Johnson et al., 1992), rritjen e ngacmueshmërisë së qelizave dopamine, dhe reduktimin e transportit aksoplazmatik dhe prodhimin dopamin ndaj NAc (Beitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Këto ndryshime të neuroneve dopamine të VTA shkaktojnë tolerancën e shpërblimit të morfines dhe janë të përkohshme pasi ato shpërndahen brenda një muaji të abstinencës së drogës (Russo et al., 2007). Aktualisht është e paqartë nëse plasticiteti në neuronet dopamine të VTA është unike për veprimet e opiateve ose nëse ato gjithashtu prodhohen nga lirimi i EOP gjatë sjelljeve natyrale shpërbleese.

Këtu ne provojmë hipotezën se përvoja e shpërblimit natyror shkakton neuroplasticitet të ngjashëm me atë të shkaktuar nga opiatet dhe kështu që opiatet konvergojnë në një mekanizëm të plasticitetit që është kritik për sjelljen e shpërblimit natyror dhe shpërblimin e kujtesës. Ne testojmë nëse eksperienca seksuale në minjtë meshkuj zvogëlon madhësinë e soma të VPA dopamin neuroneve nëpërmjet një procesi të varur nga veprimi i EOP në VTA. Për më tepër, ne hulumtojmë nëse ndryshimet e EOP-së të nxitura nga neuronet dopamine të VTA janë të lidhura me përforcimin e sjelljes natyrale të shpërblimit dhe atribuimin e ndjeshmërisë së stimujve për cues që lidhen me shpërblimin natyror, duke shkaktuar ndër-tolerancë ndaj shpërblimit morfinë.

Materialet dhe Metodat

kafshët

Të rriturit meshkuj Sprague-Dawley (200-225 g) janë marrë nga Charles River dhe janë vendosur në çifte në dhoma të ndriçuara artificialisht në një cikël të dritës / errët 12 h në të gjitha eksperimentet (dritat off në 10: 00 AM përveç eksperimentit të tolerancës morfine , ndizet në 5: 00 PM). Ushqimi dhe uji ishin në dispozicion ad libitum përveç gjatë testimit të sjelljes. Femrat stimuluese u ovariektomizuan dhe u implantuan nën lëkurë me 5% 17-β-estradiol benzoate Kapsula SILASTIC (diametri i brendshëm 1.98 mm, gjatësia 0.5 cm, Dow-Corning). Injeksione të progesteronit (nënlëkurës, 500 μg në 0.1 ml të vajit të susamit) u administruan 3-6 h para testimit për të nxitur pranueshmërinë seksuale. Të gjitha procedurat u miratuan nga Komitetet e Kujdesit të Kafshëve të Universitetit të Ontarios Perëndimore dhe Universitetit të Miçiganit dhe u konformin me Këshillin Kanadez për Kujdesin e Kafshëve dhe Udhëzimet Kombëtare të Institutit të Shëndetësisë që përfshinin kafshët kurrizore në kërkime.

Kohëzgjatja e ndryshimit të madhësisë soma të dopaminës VTA

Sesionet e shoqërimit të përditshëm.

Për të studiuar rrjedhën kohore të ndryshimeve në madhësinë e soma neuronale dopamine në VTA, kafshët e përjetuara dhe naive u vranë në 1, 7 ose 31 d (n = 5-8 për grup) pas ditës së fundit të çiftëzimit (me përvojë) ose trajtimit (naiv). Grupet me eksperiencë seksuale u përputheshin me sjelljen seksuale gjatë sesionit përfundimtar të çiftëzimit, si dhe me numrin e përgjithshëm të ejakulacioneve gjatë pesë sesioneve (mesatarja e 5 për secilin grup) dhe nuk ndryshonin në asnjë parametër të sjelljes seksuale.

Sesionet e matjes.

Meshkujt seksualisht naivë u caktuan në cilëndo prej dy kushteve eksperimentale: seksualisht naive ose me përvojë seksualisht. Kafshët me eksperiencë seksuale u lejuan të bashkohen pesë herë në ditë me radhë, me femra të hapura në kafaze testuese drejtkëndore (60 × 45 × 50 cm) derisa shfaqja e derdhjes ose deri në 1 h (cilado që erdhi së pari). Kafazet janë pastruar plotësisht me 70% etanol zgjidhje dhe shtrat të freskët është shtuar në mes të sessions mating. Sjellja seksuale është kryer gjatë fazës së zezë (2-6 h pas fillimit të errësirës). Vetëm kafshët që ejakuluan gjatë së paku katër nga pesë sesionet e çiftëzimit u konsideruan të përjetuara seksualisht dhe përfshiheshin në eksperimente. Të gjitha sesionet e shoqërimit u vëzhguan dhe sjellja seksuale u regjistrua. Numri i shtrëngimeve (M) intromissave (IM), rritja e latente (ML, koha nga futja e femrës në malin e parë), latenca e intromizës (IL, koha nga futja e femrës tek intromizioni i parë), dhe latente ejakuluese (EL; kohë nga hyrja e parë në derdhje) janë regjistruar (Agmo, 1997). Kafshët naive u vendosën në një kafaz testimi të pastër për 1 h në të njëjtën kohë me meshkujt me eksperiencë seksuale që u përplasën në të njëjtën dhomë, kështu që ata ishin të ekspozuar ndaj aromave të largëta të femrave dhe nivele të ngjashme të shqetësimeve dhe risive mjedisore si meshkujt me përvojë.

Etiketimi i imunofluorescencës.

Kafshët janë thellësisht anestetizuar duke përdorur pentobarbital natriumi (270 mg / kg, ip) dhe perfuzuar intracardialisht me 50 ml të kripës 0.9%, e ndjekur nga 500 ml e 4% paraformaldehyde në 0.1 m fosfat i natriumit (BP). Trurit u hoqën dhe u vendosën për 1 h në temperaturën e dhomës (RT) në të njëjtin fixator, dhe pastaj u zhytën në 20% sukrozë dhe 0.01% azide natriumi në 0.1 m PB për ruajtje në 4 ° C. Seksionet koronale u prenë në 35 μm në një mikrotomë ngrirëse (H400R, Microm) dhe u mblodhën në katër seri paralele në zgjidhje kriofrotektante (30% sukrozë, 30% etilen glikol në 0.1 m PB) dhe pastaj ruhen në 20 ° C. Të gjitha inkubacionet u kryen në RT me agjitacion të butë dhe shpëlarje të bollshme me 0.1 m PBS, pH 7.35, midis inkubacioneve. Seksionet u ekspozuan ndaj 1% H2O2 për 10 min për të shkatërruar peroksidaza endogjene, pastaj të bllokuara për 1 h në solucionin e inkubacionit (PBS +: PBS që përmban 0.4% Triton X-100, Sigma-Aldrich) dhe 0.1% serum albumin e gjedhit (Jackson Immuno Research Laboratories). Tjetra, seksionet u inkubuan brenda natës në RT në një tirozin hidroksilazë miu (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Pas inkubacionit primar të antitrupave, seksionet u inkubuan në antitrupat anti-miu të konjuguar me AlexaFluor 555 (1: 100, Invitrogen, Eugene, OR) për 30 min. Së fundi, pjesët u lanë me 0.1 m PB, të montuara në slides qelqi Superfrost Plus, të thata, dhe mbuluar me xhelvatol që përmban agjent anti-venitje 1,4-diazabiciklo (2,2) oktan (DABCO, 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Analiza e të dhënave: madhësia e soma neuron.

Imazhet e neuroneve TH-immunoreaktive (IR) në VTA u morën në 40 × zmadhim në tre nivele rostral deri caudal (Balfour et al., 2004). Nuk ka pasur dallime në mes të qelizave në nivele të ndryshme. Madhësia soma e neuroneve TH-IR është analizuar duke përdorur ImageJ (National Institutes of Health). Sipërfaqja mesatare, perimetri dhe qarkullimi janë matur siç përshkruhet nga Sklair-Tavron et al. (1996). Një mesatare e qelizave 25 për kafshë (kombinuar të gjitha nivelet 3 VTA) u analizua dhe vetëm qelizat me një bërthamë të dukshme ishin të përfshira. Për secilën kafshë janë llogaritur zonat mesatare, perimetri dhe qarkullimi. Për analiza statistikore përdoret një ANOVA me dy drejtime [faktorët: përvoja seksuale (seksi me përvojë ose seks naiv) dhe koha (1, 7 ose 31 d)] ndjekur nga Post hoc krahasime duke përdorur metodën Holm-Sidak me një nivel domethënës të 0.05.

Ndryshimet VTA jo-dopamine

Seancat dyvjeçare të çiftëzimit.

Për të provuar nëse përvoja seksuale gjatë seancave të çiftimit të përditshëm është e nevojshme për zvogëlimin e madhësisë së soma të neuroneve TH-IR, u analizuan neuronet dopamine të VTA të kafshëve të cilat ishin bashkuar gjatë pesë seancave dyvjeçare. Sesionet e çiftëzimit ishin siç përshkruheshin më sipër, por gjatë një periudhe 2.5 javësh. Trurit janë mbledhur 7 d pas mating ose trajtimit të fundit.

Etiketimi imunoperoksidaze.

Përveç kësaj, është testuar nëse përdorimi i teknikave të ndjeshme të ngjyrosjes me imunoperoksidazë dhe zbulimin e kromogjenit, gjithashtu do të lejonte vizualizimin e ndryshimeve të madhësisë soma të TH-IR. Përpunimi i perfundimit dhe indeve është kryer siç përshkruhet më sipër. Pas trajtimit me 1% H2O2 dhe PBS +, seksionet u inkubuan brenda natës në RT në një miu poliklonal hydroxylase (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Pas inkubacionit primar të antitrupave, seksionet u inkubuan me IgG anti-lepuri të dhisë konjuguar me biotin (1 h, 1: 500 në PBS +, Vector Laboratories), peroksidazë avidin-biotin-rrikë (1 h, elita ABC; 1: 1 000 në PBS (3,3 min, 10%, DAB, Sigma-Aldrich), me peroksid hidrogjeni (0.02%), me 0.02% në 0.1 m PB). Seksionet janë larë tërësisht në 0.015 m PB për të përfunduar reagimin dhe montuar në shifrat e koduara Superfrost plus xhami (Fisher) me 0.1% xhelatinë në ddH2O. Pas dehidrimit, të gjitha slides ishin mbuluar me shtresë DPX (xylene dibutyl ftalat, Sigma-Aldrich).

Analiza e të dhënave: madhësia e soma neuron.

Qelizat TH-IR u analizuan për zonën, perimetrin dhe rrethoren siç përshkruhet më lart. Për më tepër, qelizat TH-IR në substancë nigra (SN), në të njëjtat pjesë të përdorura për analizën e qelizave VTA TH-IR, u analizuan. Më në fund, pas analizës së qelizave VTA dhe SN TH-IR, seksionet u kontrolluan duke përdorur cresyl violet dhe qelizat jo-TH-IR u analizuan duke përdorur të njëjtat metoda siç përshkruhet më sipër. Dallimet midis grupeve naive dhe me përvojë u krahasuan duke përdorur Student me dy bisht t teste me një nivel domethënës të 0.05.

Efektet e naloksonit në reduktimin e madhësisë soma të dopaminës së shkaktuar nga përvoja

Për të përcaktuar nëse MORs luajti një rol në ndryshimet e nxitura nga përvoja seksuale në madhësinë e soma neuronale dopamine, MOR u bllokua gjatë sjelljes seksuale. Gjysma e kafshëve morën përvojë seksuale, ndërsa gjysma tjetër u trajtuan por mbetën seksualisht naive. Kafshët me përvojë seksuale u lejuan të martoheshin në 5 ditë të njëpasnjëshme. Brenda grupeve me përvojë dhe naive seksuale, kafshët u trajtuan me naloxone antagoniste jo-selektive MOR (10 mg / kg, Sigma-Aldrich, tretur në 0.9% kripur) ose me kripur 30 min para futjes së femrës (me përvojë) ose para trajtimit (naive); duke krijuar katër grupe eksperimentale: Saline seksualisht naive (Naive Sal), naloksone seksualisht naive (Naive NLX), kripësi me përvojë seksuale (Exp Sal) dhe naloksone me përvojë seksualisht (Exp NLX; n = 5-8 për grup). Trajtimi Naloxone nuk kishte efekte statistikisht të rëndësishme në çdo parametër të sjelljes seksuale, në ndonjë nga grupet e trajtuara me 5 d dhe naloxone dhe kripur, ishin identike në përvojën seksuale. Të gjitha kafshët u vranë nëpërmjet perfuzionit intrakardial 7 d pas sesionit të fundit të çiftëzimit. Seksionimi, imunohistokimi dhe analiza e të dhënave (ANOVA me dy drejtime, faktorët: përvoja seksuale dhe trajtimi i drogës) për madhësinë e soma dopamine janë kryer siç përshkruhet më sipër.

Morfinë preferohet vend i kushtëzuar

Dizajn Eksperimental.

Më parë, Russo et al. (2007) tregoi se morfina kronike shkakton tolerancë ndaj shpërblimit të morfines. Meqë përvoja seksuale dhe morfina kronike shkaktojnë zvogëlime të ngjashme në madhësinë e dopaminës në VTA, rëndësia funksionale e ndryshimeve morfologjike të nxitura nga gjinia u testua për shpërblimin morfinë. Kafshët me eksperiencë seksuale dhe naive u ndanë në gjashtë grupe të ndryshme eksperimentale (n = 9-13 për grup) bazuar në sjelljen seksuale (seksualisht naive ose me përvojë) dhe dozën morfine (0.5, 5.0 ose 10.0 mg / kg, ip) dhe u testuan për preferencën e vendndodhjes së kushtëzuar me morfinë (CPP).

Morphine-CPP.

Kondicionimi u bë 1 d pas sesionit të fundit të çiftëzimit dhe grupet u përputheshin për performancën seksuale gjatë sesionit të fundit të çiftëzimit. Paradigma e përdorur e CPP përbëhej nga një pretest, ditë kondicionimi dhe post-test, dhe aparati u bazuar në Tenk et al. (2009). Shkurtimisht, aparati CPP (MED Associates) përbëhej nga tre dhoma të dallueshme. Midis çdo seance, aparati u pastrua plotësisht me 70% tretësirë ​​etanoli për të minimizuar shenjat e zgjatura të nuhatjes. Për të përcaktuar preferencat individuale, u bë një paraprovë gjatë së cilës kafshëve iu dha qasje e lirë në të gjithë aparatin për 15 min. Si grup, kafshët nuk treguan preferencë të konsiderueshme për një dhomë specifike, por secila kafshë individuale kishte një preferencë të vogël fillestare. Mirat që treguan një preferencë të konsiderueshme për një nga dhomat (> 200 s ndryshim midis kohës së kaluar në secilën nga dhomat; <5% e kafshëve) gjatë paraprovës u përjashtuan nga studimi. Gjatë kondicionimit, ilaçi ishte çiftuar ose në dhomën e preferuar fillimisht ose në atë të pa preferuar, duke përdorur një paradigmë të paanshme (Tzschentke, 2007) dhe kafshët u mbyllën në dhomat për 30 min. Kafshët u injektuan me kripur (ip) në mëngjes (9: 00 AM në 12: 00 PM) dhe u mbyllën në dhomën e çrregullimit të kripës (kontrollit). Në pasdite (1: 00-4: 00 PM), kafshët u injektuan me morfinë (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg ose 10.0 mg / kg, morfinë sulfate tretur në 0.9% saline, Johnson Matthey) në dhomën morphine-çiftëzohet. Kafshët u nënshtruan dy ditëve të kondicionimit. Ditën tjetër (3 d pas ditës së fundit të mating) u krye një post-test, proceduralisht identik me pretest. Për analiza statistikore, koha e kaluar në dhomën e çiftëzuar me morfinë gjatë testimit u krahasua me kohën e kaluar në dhomën e çiftëzuar të kripës së ftohtë gjatë testimit për meshkuj seksualisht naivë ose me përvojë brenda secilës dozë duke përdorur një çift t testi. p <0.05 u konsiderua statistikisht e rëndësishme. Grupet shtesë të kontrollit të kafshëve seksuale naive dhe me përvojë morën kripë në të dy dhomat e çiftëzuara dhe ato të çiftëzuara për të shërbyer si kontrolle negative. Për secilin grup nuk u zbuluan ndryshime në kohën e kaluar ndërmjet dhomave.

Efektet e naloksonit sistemik në lehtësimin e përvojës së sjelljes seksuale

Dizajn Eksperimental.

Përvoja seksuale rezulton në lehtësimin e sjelljes seksuale që mbahet për të paktën muajin 1 (Pitchers et al., 2012). Për të analizuar efektin e bllokimit të MOR në lehtësimin e sjelljes seksuale të shkaktuar nga përvoja, kafshët me eksperiencë seksuale morën ose nalokson ose kripur para pesë seancave të njëpasnjëshme (n = 12 secili) siç përshkruhet më sipër. Një javë pas sesionit të fundit të çiftëzimit, u krye një provë përfundimtare e mating gjatë së cilës të gjitha kafshët u lejuan të bashkohen deri në një derdhje ose deri në 1 h. Nuk u trajtua asnjë trajtim naloxone ose kripur para çiftëzimit në ditën e fundit të testimit. Parametrat e çiftëzimit u krahasuan për të përcaktuar nëse naloksoni prekë ose lehtësimin e përvojës seksuale të çiftëzimit (ditën 1 vs ditën 5) ose ruajtjen e kësaj lehtësie (ditën 5 vs test) duke përdorur një ANOVA dy mënyra [faktorët: trajtimi (kripësi kundrejt naloksonit ) dhe dita (dita 1, dita 5, ose test)] dhe metoda Holm-Sidak për të Post hoc krahasimet. Për të gjitha testet statistikore, p <0.05 u konsiderua të ishte statistikisht domethënëse.

Eksperimentet shtesë të kontrollit

Naloksoni sistemik në ditën e testimit.

Për të treguar se sjellja e ndryshuar seksuale në ditën e testimit të çiftëzimit përfundimtar nuk ishte për shkak të mungesës së naloksonit, ne administruam ose naloxone ose kripur në ditën e testit përfundimtar të mating për kafshët që morën çiftëzimin e çiftuar me naloxone ndërsa ata fitonin përvojë seksuale. Në mënyrë të veçantë, të gjitha kafshët morën injeksionin naloxone (10 mg / kg, sc) 30 min para çiftëzimit para një derdhjeje gjatë ditëve 5 të njëpasnjëshme. Në ditën e provës 7 d më vonë, afërsisht gjysma e kafshëve morën një injeksion të naloksonit (10 mg / kg, n = 7) ose kripur (n = 6) 30 min para paraqitjes së një femre të hapur. Sjellja seksuale është vërejtur dhe regjistruar. Parametrat e çiftëzimit u krahasuan për të përcaktuar nëse naloksoni prekë ose lehtësimin e përvojës seksuale të çiftëzimit (ditën 1 vs ditën 5) ose ruajtjen e kësaj lehtësie (ditën 5 vs test) duke përdorur një ANOVA dy mënyra [faktorët: trajtimi (kripësi kundrejt naloksonit ) dhe dita (dita 1, dita 5, ose test)] dhe metoda Holm-Sidak për të Post hoc krahasimet. Për të gjitha testet statistikore, p <5% u konsiderua të jetë statistikisht domethënëse.

Efektet e naloksonit në shprehjen afatshkurtër të sjelljes së lehtësuar seksuale.

Efektet e trajtimit naloxone (10 mg / kg, sc) gjatë çiftëzimit u testuan në sjelljen e mëvonshme seksuale gjatë një dite testimi përfundimtar, i cili u krye vetëm me 1 d pas çiftëzimit të fundit (kripur, n = 5; naloksone, n =

Pretreatment sistemik nalokson.

Për të përcaktuar nëse përsëritja e trajtimit të naloksonit vetëm shkakton dëmtimin e sjelljes seksuale 7 d pas trajtimit të fundit, kafshët seksualisht naive morën pesë injeksione të përditshme naloxone (10 mg / kg, sc) ose kripur në ditët e njëpasnjëshme para testit të matjes 7 d pas naloksonit përfundimtar ose injeksion kripur. Në këtë ditë testimi të fundit, kafshët nuk morën asnjë injeksion. Sjellja seksuale u vërejt dhe u regjistrua ashtu siç u përshkrua më sipër. Parametrat e çiftëzimit u krahasuan midis grupeve që përdorin unpaired t teste. Për të gjitha testet statistikore, p <5% u konsiderua të jetë statistikisht domethënëse.

Nalksoni sistemik dhe shpërblimi seksual.

Një mundësi për efektet qetësuese të naloxone në shfaqjen e mirëmbajtjes së sjelljes seksuale të lehtësuar është që naloxone bllokon efektet e dobishme të sjelljes seksuale. Për të provuar këtë mundësi, paradigma e CPP u krye për sjellje seksuale menjëherë pas naloxone ose injeksion të kripur në meshkuj pa përvojë paraprake seksuale. Procedura e CPP ishte e ngjashme me përshkrimin e mësipërm për morfinë-CPP, duke përfshirë parashtrimin, ditët e kondicionimit dhe testin pas testit.

Sjellja e seksit u shoqërua me dhomën fillimisht të papëlqyeshme. Në një mënyrë të ekuilibruar, çdo kafshë mori një injeksion naloksoni (n = 12) ose kripur (n = 11) 30 min para marrjes së qasjes në një femër të hapur. Kohëzgjatja mesatare e sesionit të çiftëzimit ishte ~ 13 min. Një minutë pas ejakulimit, kafsha u vendos në dhomën e çiftëzuar për 30 min. Në ditën tjetër të kondicionimit, kafshët morën një injeksion ose naloxone ose kripur (cilado që ata morën para çiftëzimit), dhe u vendosën në dhomën e palidhur për 30 min. Më pas, u krye një post-test, i njëjtë me pretendimet. Për të përcaktuar preferencën e dhomës, u krahasua koha e kaluar në dhomën e çiftëzuar gjatë pretest dhe post-test. Për analiza statistikore, çiftëzohet t testet u përdorën për të krahasuar rezultatet e preferencës dhe ndryshimeve, dhe kohën në dhomën e çiftëzuar gjatë pretest dhe post-test për të përcaktuar nëse një CPP rëndësishëm u formua për sjellje seksuale. p <0.05 u konsiderua domethënëse.

Efektet e naloxone intra-VTA në lehtësimin e përvojës së sjelljes seksuale

Dizajn Eksperimental.

Për të përcaktuar nëse veprimi i EOP-së në mënyrë specifike në VTA, ishte përgjegjës për efektet e ndryshimeve të sjelljes seksuale të sjelljeve seksuale, kafshët iu nënshtruan infuzionit lokal të naloksonit ose kripës në VTA para pesë seancave të përditshme të çiftëzimit. Paradigma e sjelljes ishte e ngjashme me eksperimentin naloxone sistemik. Kafshët me eksperiencë seksuale u lejuan të martoheshin gjatë ditëve të njëpasnjëshme 5 deri në një derdhje ose deri në 1 h. Pesëmbëdhjetë minuta para futjes së femrës së hapur, minjtë meshkuj morën infuzion dypalësh ose nalokson (10 μg / μl për hemisferën, volumin 0.5 μl, të tretur në 0.9% kripur) ose kripur (0.5 μl për hemisferën). Microinjections dypalëshe u administruan në një normë rrjedhjeje prej 0.5 μl / min në një interval min 1 pasuar nga një minum shtesë 1 me kanulin e injektimit të lënë në vend për difuzion. Kanulja e injektimit u zëvendësua më pas me kanulinë bedel dhe kapakun e pluhurit. Një javë pas ditës së fundit të mating (ditën e testit), të gjitha kafshët u mblodhën edhe një herë në derdhje pa një infuzion naloxone ose kripur. Figura 3A përshkruan dizajnin eksperimental. Analiza e të dhënave është kryer siç përshkruhet në eksperimentin naloxone sistemik.

Kirurgji kanulare.

Ratsë meshkuj janë anestetizuar me injeksion intraperitoneal (0.1 ml / kg) të ketamines (0.87 mg / ml) dhe ksilazine (0.13 mg / ml), dhe vendosen në një aparat stereotak (Kopf Instruments). Kanalet udhëzuese dypalëshe 21 (Plastics One) u ulën përmes vrimave të vogla të shpimit në kafkë në tru drejt VTA në -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML nga bregma dhe -7.8 mm DV nga maja e kafkës sipas Paxinos dhe Watson (2013). Cannulas u siguruan me akrilik dentar që i përmbahen tre vida të vendosura në kafkë. Kafshëve iu dha një periudhë shërimi në javë 2 dhe u trajtuan çdo ditë për t'u përdorur në trajtimin dhe procedurat e injektimit të përdorura gjatë testimit të sjelljes.

Verifikimi i vendosjes së kanulave.

Vendosja e kanulave u ekzaminua duke përdorur IM-imunitetin për të konfirmuar se VTA ishte shënjestruar në mënyrë të saktë. Në analizat u përfshinë vetëm kafshët me vendosje adekuate (madhësia e grupit përfundimtar: kripësi me përvojë n = 8; naloxone me përvojë n = 6). Tre kafshë të tjera që morën injeksione intraoktave nalëksone brenda VTA të drejtuara jashtë VTA u grupuan së bashku në një grup injektimi "të humbur". Grupi i humbur u analizua veçmas për të shërbyer si kontrolle anatomike dhe Mann-Whitney U test u përdor për të krahasuar sjelljen në ditën finale të testimit me naloxone dhe me meshkuj me përvojë të trajtuar me kripë.

Shprehja e pERK-së e shkaktuar nga kontestimi i lidhur me matjen

Dizajn Eksperimental.

Ekspozimi ndaj kafazit në të cilin meshkujt kanë fituar përvojën e çiftëzimit ka treguar se shkakton aktivizimin MOR në aktivitetin VTA dhe neuron në VTA dhe NAc (Balfour et al., 2004). Prandaj, mjedisi i bashkimit shërben si një parashikues i kushtëzuar parashikuese për shpërblimin seksual. Studimi aktual ka testuar nëse aktivizimi i MOR gjatë përvojës seksuale është i nevojshëm për aktivizimin e mëvonshëm të nervave të kushtëzuar. Naloxone ose kripur u administruan në mënyrë sistemike (ip) 30 min para vendosjes në arenën mating dhe futjen e një femre të hapur për mating (me përvojë), ose para manipulimit të kontrollit i cili përbëhej nga vendosja në kafaz trajtimi pa paraqitjen e femrës (neutral mjedisi, naiv). Kështu, u krijuan katër grupe eksperimentale: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​dhe Exp NLX. Një javë pas sesionit përfundimtar të çiftëzimit, gjysma e kafshëve në secilin grup ishin ekspozuar ndaj kafazit të matingit (meshkujt e ekspozuar: cues të kushtëzuar nga seksi) ose trajtimi i kafazit (meshkujt naivë: indiferent / cues neutrale), ndërsa gjysma tjetër nuk ishte e ekspozuar ndaj çdo cues dhe në vend të kësaj ka mbetur në kafaze të shtëpisë (për të përcaktuar shprehjen bazë pERK). Kjo paradigmë eksperimentale prodhoi grupe 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 secili përveç Naive NLX-No Cue, n = 3). Kafshët u perfunduan 10-15 min pas ekspozimit të sugjerimeve. Kafshët e kontrollit u hoqën nga kafazet e tyre të shtëpisë dhe perfunduan njëkohësisht.

Immunohistochemistry.

Seksioni dhe imunohistokimi janë kryer siç përshkruhet më sipër. Këtu, ne kemi përdorur një antitrup poliklonale lepuri kundër p42 dhe p44 MAP Kinases ERK1 dhe ERK2 (pERK; 1: 4 000; Teknologjia e sinjalizimit të qelizave). Antitrupi primar ka qenë i karakterizuar gjerësisht në literaturë (Roux dhe Blenis, 2004; Murphy dhe Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Për më tepër, mosveprimi i antitrupit primar për të parandaluar të gjithë imunotektivitetin dhe analizat Western blot të indeve të trurit të miut zbuluan dy bende me peshën molekulare të përshtatshme.

Analiza e të dhënave.

qelizat pERK-immunoreaktive (-IR) janë numëruar në një numër të rajoneve të trurit duke përdorur një kamerë vizatimesh lucidë të bashkangjitur në një Leica Mikroskopi DMRD: NAc [core (C) dhe shell (S); 400 × 600 μm; lëvore paragjykuale mesatare; mPFC; zona e cingulimit anterior (ACA); korteksi prelimbik (PL); korteksi infralimbik (IL); 600 × 800 μm secili], caudate-putamen (CP; 800 × 800 μm), dhe amygdala basolaterale (BLA, 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Dy seksione u numëruan për rajonin e trurit dhe numrat e qelizave në fushat standarde të analizave u llogaritën pastaj si numri i qelizave për mm2. Të dy akuzat ishin mesatarisht për kafshë për llogaritjen e mjeteve në grup. Mesataret e grupeve brenda grupeve me eksperiencë seksuale ose naive u krahasuan duke përdorur ANOVA dy mënyra [faktorë: trajtimi i drogës (NLX ose Sal) dhe sugjerim Post hoc krahasimet duke përdorur testet e shumës së Holm-Sidak ose Mann-Whitney ku është e përshtatshme me një nivel domethënës të p <0.05. Në guaskën NAc të kafshëve me përvojë seksuale, ekzistonte një prirje e fortë drejt rëndësisë së faktorëve dhe kështu, u bënë krahasime dyshe për të krahasuar vetëm grupet e kripur (Sal-No Cue) dhe kripës saline (Sal + Cue).

Images.

Imazhet digjitale u kapën duke përdorur një kamera CCD (Macrofire, Optronics) e lidhur me një Leica mikroskop (DM5000B) me parametra fiks kamera. Imazhet u importuan në Adobe Photoshop 9.0 software. Imazhet nuk u ndryshuan në asnjë mënyrë përveç rregullimit të shkëlqimit dhe kontrastit.

Rezultatet

Ndryshimet e nxitur nga përvoja seksuale në qelizat dopamine të VTA

Përvoja seksuale rezultoi në një rënie në madhësinë e SOMA dopamine të VTA (Fig 1A-C). Përvoja seksuale zvogëlon dukshëm zonën dhe perimetrin e soma të VTA TH-IR qelizat (zona: F(1,31) = 23.068, p <0.001; perimetër, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Kishte gjithashtu një efekt kryesor domethënës të kohës (zona: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; perimetër, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) dhe një ndërveprim të rëndësishëm midis përvojës dhe kohës (zona: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; perimetër, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Krahasimi i pjesshëm zbuloi se zona dhe perimetri i qelizave TH-IR ishin reduktuar ndjeshëm 1 dhe 7 d pas ditës së fundit të sjelljes seksuale në kafshët me përvojë seksuale krahasuar me kontrollet seksualisht naive [Fig 1B, zona: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, perimetër: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)] Efekti i sjelljes seksuale shpërndahet kur ndiqet nga periudha e abstinencës së shpërblimit ndërsa madhësia e soma e neuroneve TH-IR kthehet në vijën bazë 31 d pas seancës së fundit të çiftëzimit (Fig 1B, zona: p = 0.798; C, perimetër: p = 0.785). Ndryshimet e nxitura nga përvoja gjinore nuk u zbuluan në rrethana në asnjë nga pikat kohore (Fig 1D). Reduktimi i madhësisë somatike dopamine VTA nuk ishte e varur në seancat e përditshme të çiftëzimit, pasi përvoja e grumbullimit gjatë pesë sesioneve dyvjeçare dyvjeçare gjithashtu prodhoi një madhësi të zvogëluar të SOMA dopamine të VTA-së (Fig 2A,B, E-H, zona: p = 0.004; perimetër: p <0.001). Në të kundërt, përvoja seksuale nuk ndikoi në madhësinë e soma të TH-IR në substancën e zezë (Fig 2C, I-J, zona: p = 0.13; perimetër: p = 0.16) as ndryshuar madhësia soma në neuronet pranë VTA jo-TH-IR (Fig 2D, E-H, zona: p = 0.46; perimetër: p =

Figura 1. 

Ndryshimet e madhësisë soma të indeve të opiumit endogjen të VNT dopamin neuroneve. A, Imazhe përfaqësuese të neuroneve VTA dopamine nga kafshë seksualisht naive dhe me përvojë, që tregojnë zvogëlimin e madhësisë soma 7 d pas sesionit përfundimtar të matjes. Bar shkallëzimi, 5 μm. Të dhënat sasiore që tregojnë se përvoja seksuale (Exp, bare të zeza) shkaktoi reduktim të ndjeshëm në zonë (B; në μm2) dhe perimetri (C; në μm) të qelizave dopamine të VTA, 1 d (Naive, Exp; n = 6) dhe 7 d (Naive, n = 5; exp, n = 6), por jo 31 d (Naive, n = 6; exp, n = 8) pas çiftëzimit përfundimtar, krahasuar me kontrollet seksualisht naive (Naive, bare të bardha). Zona u zvogëlua në 84% në meshkujt me përvojë krahasuar me kontrollet naive në 1 ose 7 d. Perimetri u zvogëlua në 91.6 dhe 90% në grupet me përvojë krahasuar me kontrollin në 1 dhe 7 d resp. Nuk kishte asnjë efekt në qarkullimin (D). Kjo plasticitet i qelizave dopamine në zonën (E) dhe perimetri (F) u parandalua nga naloksoni (NLX, n = 8), por jo i kripur (Sal, n = 7) gjatë çiftëzimit, 7 d pas sesionit përfundimtar të çiftëzimit krahasuar me kontrollet seksualisht naive (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM; * tregon dallim të rëndësishëm në krahasim me kontrollet seksuale naive të së njëjtës ditë (B, C) ose në krahasim me kontrollet seksualisht naive të trajtuara me kripë dhe meshkujt me përvojë seksualisht të trajtuar me naloksone (E, F).

Figura 2. 

Përvoja seksuale nuk uli madhësinë e soma në neuronet substantia nigra dopamine ose neuronet VTA nondopamine. VTA TH-IR zona e neuroneve (A; në μm2) dhe perimetri (B; në μm) në kafshë seksualisht naive (të bardha) dhe me përvojë (të zezë) që fituan përvojën duke u bashkuar dy herë në javë sesa gjatë ditëve të njëpasnjëshme. Sipërfaqja soma e Substantia nigra TH-IR (C) dhe zona VTA jo-TH-IR soma (D) në kafshë seksualisht naive (të bardha) dhe me përvojë (të zezë). Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM; * tregon dallim të rëndësishëm në krahasim me kontrollet seksualisht naive. Imazhe përfaqësuese që tregojnë TH-IR (kafe) neuronet në VTA të seksualisht naive (E), dhe me përvojë (F) meshkuj. G, H, Një imazh më i madh i zmadhimit të neurit të treguar nga shigjeta në E F respektivisht. Neuronet e ngjyrosura me Nissl tregohen në ngjyrë blu në këto imazhe. Imazhe përfaqësuese që tregojnë neuronet TH-IR në SN të seksualisht naive (I) dhe me përvojë (J) meshkuj. Bare shkallë: E-J, 20 μm.

Sëmundja seksuale e shkaktuar nga sesa e zvogëlimit të somatit të VNT dopamin neuroneve varet nga aktivizimi i receptorit opioid

Reduktimi i madhësisë së SOM-it të dopamines neuron të VTA të shkaktuar nga përvoja seksuale u bllokua nga naloksoni antagonist MOR, jo-zgjedhor, i administruar para çdo sesioni mating. Trajtimi i Naloxone para sesioneve të çiftëzimit kishte një efekt të rëndësishëm në zonën (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) dhe u trondit drejt një efekti të rëndësishëm në perimetrin (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Një ndërveprim i rëndësishëm midis përvojës dhe trajtimit naloxone u gjet për zonën (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) dhe perimetri (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Krahasimet e pjesshme treguan se eksperienca seksuale në kafshët e trajtuara me kripë ka zvogëluar ndjeshëm zonën dhe perimetrin e neuroneve dopaminës VTA 7 d pas sesionit të fundit të matjes krahasuar me meshkujt seksualisht naivë të trajtuar me kripur (Fig 1E, zona: p = 0.018; F, perimetër: p = 0.007). Në të kundërt, kafshët e trajtuara me naloksone seksualisht nuk ndryshonin nga meshkujt naivë të trajtuar me naloksone (Fig 1E, zona: p = 0.483; F, perimetër: p = 0.330). Përveç kësaj, madhësia e soma e kafshëve kripur me përvojë ishte ulur ndjeshëm në krahasim me kafshët naloxone me përvojë (Fig 1E, zona: p = 0.002; F, perimetër: p = 0.002). Ky efekt i naloksonit ishte specifik për përvojën seksuale, pasi trajtimi nalokson nuk ndikoi në madhësinë e soma të qelizave TH-IR në meshkujt e trajtuar me nalokson seksualisht naivë krahasuar me kontrollet e trajtuara me kripë (Fig 1E,F). Për më tepër, ky efekt i naloksonit në reduktimin e madhësisë së somait të shkaktuar nga përvoja nuk ishte për shkak të efekteve të naloksonit në sjelljen seksuale, pasi sjellja e çiftëzimit nuk ndryshonte në mënyrë të konsiderueshme midis meshkujve të trajtuar me naloksone dhe me kripë, me përjashtim të një kohe më të gjatë për të filluar matingin pas ejakulimit (interval pas ejakulimit) në meshkujt e trajtuar me nalokson gjatë sesionit të parë dhe të pestë të mating (p = 0.03 dhe p = 0.004, respektivisht). Të dy meshkujt e trajtuar me kripëra dhe naloxone u shoqëruan me derdhje gjatë secilës prej pesë sesioneve të çiftëzimit.

Toleranca shpërblimi për morfinë të nxitur nga përvoja seksuale

Efektet e përvojës seksuale në madhësinë e SOM dopamine nga veprimi i EOP në VTA janë të ngjashme me ato të raportuara për opiatet ekzogjene (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Prandaj, është testuar nëse plastika e dopaminës VTA e nxitur nga shpërblimi natyror ndikon në shpërblimin për morfiumin e opiumit. Në të vërtetë, përvoja seksuale shkaktoi tolerancë ndaj shpërblimit morfinë, e ngjashme me efektet e opiateve kronike (Russo et al., 2007). Meshkujt me përvojë seksualisht nuk arritën të zhvillonin një CPP për dozën morfine 0.5 mg / kg; ndërsa meshkujt seksualisht naivë kanë formuar një CPP për këtë dozë, siç tregohet nga shpenzimi i një sasie më të madhe kohe në dhomën e çiftëzuar me morfinë krahasuar me dhomën e çiftëzuar të kripës së ftohtë gjatë testit post-test (Fig 3; p = 0.039). Të dy grupet seksualisht naive dhe me përvojë kaluan një sasi të konsiderueshme kohore në dhomën e morfines në krahasim me dhomën e çiftëzuar me kripëra me doza më të larta të morfines: 5.0 mg / kg (Fig 3; naive: p = 0.029; Exp: p = 0.012) dhe 10.0 mg / kg (Fig 3; naive: p <0.001; Skadimi: p =

Figura 3. 

Efektet e përvojës seksuale në shpërblimin morfinë. Kohët e shpenzuara gjatë testit post-test në seksualisht naivë (Naive, Xhumx ose 0.5 mg / kg peshë) n = 10-13) ose me përvojë (Exp, n = 9-13) meshkuj. Të dhënat paraqiten si mesatare ± SEM; * tregon dallim të rëndësishëm krahasuar me dhomën Sal-çiftëzuar brenda kafshëve të njëjta. NS, Nuk është e rëndësishme.

Ndihma e nxitur nga përvoja gjinore e sjelljes së matingit varet nga aktivizimi i receptorit opioid

Gjetjet e deritanishme tregojnë që EOP që vepron në VTA gjatë seancave ditore të çiftëzimit të shkurtër të 5 shkakton plasticitet të neuroneve dopamine të VTA që është e ngjashme me efektet e morfinës kronike ose vetë administrimit të heroinës (Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Ne hypothesized se VTA dopamine zvogëlimin soma madhësi është kritike për të fituar shpërblim dhe veçanërisht për përvojën seksuale të nxitur lehtësimin e sjelljes së seksit në drejtim të motivimit dhe performancës. Kjo hipotezë u testua duke bllokuar MOR duke përdorur nalokson gjatë çiftëzimit dhe duke shqyrtuar efektet në lehtësimin e sjelljes seksuale të shkaktuar nga përvoja seksuale gjatë pesë sesioneve të përditshme të çiftëzimit. Të dhënat janë paraqitur në Figura 4 vetëm për seancat e para dhe të pestë të bashkimit, pasi këto janë të dhënat që ilustrojnë më së miri lehtësimin e përvojës së sjelljes së çiftëzimit. Për më tepër, efektet afatgjata të trajtimit nalokson gjatë sesioneve të çiftëzimit testohen në mirëmbajtjen e lehtësimit të sjelljes së çiftëzimit të përvojës, gjatë një prove përfundimtare të matjes 1 javë më vonë. Figura 4A tregon dizajnin eksperimental. Ekzistonte një efekt i rëndësishëm kryesor i sesionit të matjes në të gjitha parametrat e sjelljes së seksit (latent malin: F(2,55) = 11.286, p <0.001; vonesa e ndërhyrjes: F(2,55) = 8.767, p <0.001; vonesa e derdhjes: F(2,55) = 10.368, p <0.001) dhe trajtimi i naloksonit në vonesat e montimit (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) dhe ndërhyrje (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Krahasimet e pjesshme treguan se trajtimi nalokson ndikoi në sjelljen seksuale gjatë sesionit të parë të matingit sepse kafshët naloxone kishin latente dukshëm më të gjata për të parë (p = 0.002) dhe ndërhyrje (p = 0.002) në krahasim me kontrollet e kripës në ditën e parë të çiftëzimit. Ky efekt naloxone në sjelljen fillestare të seksit u zvogëlua nga përvoja seksuale dhe nuk u vërejt gjatë ndonjë prej sesioneve të matesë pasuese (Tabela 1). Për më tepër, administrimi naloxone para secilës prej pesë seancave të çiftëzimit nuk e ka penguar lehtësimin fillestar të sjelljes seksuale me përvojë seksuale. Në përputhje me efektet përforcuese të përvojës seksuale, meshkujt e trajtuar me kripë solide shfaqën ulje në latente (Fig 4B; p = 0.032) ndërhyrje (Fig 4C; p = 0.033) dhe ejakulimit (Fig 4D; p <0.001) gjatë seancës së pestë të çiftëzimit krahasuar me seancën e parë të çiftëzimit, e cila tregoi lehtësimin e sjelljes seksuale. Në mënyrë të ngjashme, meshkujt e trajtuar me nalokson shfaqën vonesa dukshëm më të shkurtër për tu montuar (Fig 4B; p <0.001), intromis (Fig 4C; p <0.001), dhe derdhje (Fig 4D; p = 0.017) në të pestën krahasuar me ditën e parë. Për më tepër, meshkujt e trajtuar me naloksone nuk ndryshojnë nga kontrollet e kripës në asnjë nga latente gjatë seancës së pestë të matjes.

Figura 4. 

Opioidet endogjene luajnë një rol kritik në lehtësimin e përvojës së sjelljes seksuale. A, Dizajn Eksperimental. B-D, Parametrat e sjelljes seksuale për meshkujt e trajtuar me kripur (Sal, bare të bardha, n = 11) ose naloxone (NLX, bare te zeza, n = 12) me administrimin sistematik. Të dhënat e paraqitura janë latente për të montuar (B; sekonda), ndërhyrje (C; sekonda), dhe derdhje (D; sekonda) në ditët 1 dhe 5 të pesë ditëve të njëpasnjëshme të çiftëzimit. Përveç kësaj, të dhënat tregohen për provën përfundimtare të çiftëzimit, 7 d pas sesionit të pestë të çiftëzimit. Të dhënat paraqiten si mesatare ± SEM; + tregon dallim të rëndësishëm midis ditëve 1 dhe 5 brenda trajtimit; * tregon dallim të rëndësishëm në mes të ditës së provës dhe ditës 5 brenda trajtimit; # tregon dallim të rëndësishëm midis grupeve naloxone dhe kripur brenda ditës.

Tabela 1. 

Administrimi i Naloxone para çiftëzimit ka rritur latencat për ngritjen dhe intromizionin vetëm në ditën e parë të çiftëzimit

Në të kundërt, trajtimi naloxone gjatë seancës së përvojës seksuale ka ndërprerë mirëmbajtjen e lehtësimit të sjelljes seksuale të përvojës nga sjellja seksuale në ditën e testimit përfundimtar. Dita e testimit u krye me 7 d pas sesionit përfundimtar të matjes në mungesë të një injeksioni naloxone. Meshkujt kontrollues të trajtuar me kripëra shfaqën lehtësimin e pritur të përvojës së sjelljes seksuale. Në mënyrë të veçantë, latentitetet për të ngritur, ndërhyrje, dhe derdhje nuk ndryshojnë midis seancës së pestë të matjes dhe ditës së fundit të testimit (Fig 4B-D). Ndërsa, meshkujt e trajtuar me nalokson treguan një rritje të konsiderueshme në latente për të ngritur (Fig 4B; p = 0.033), ndërhyrje (Fig 4C; p = 0.036) dhe ejakulimit (Fig 4D; p = 0.049) në ditën e testimit në krahasim me sesionin e pestë të matjes. Gjithashtu, në ditët e testimit, kafshët naloxone u gjetën të jenë dukshëm më të ngadalshëm sesa meshkujt e trajtuar me kripë të zezë, siç shfaqet nga latente më të gjata për të montuar (Fig 4B; p = 0.017) dhe ndërhyrje (Fig 4C; p = 0.043). Kështu, trajtimi nalokson bllokoi mirëmbajtjen, por jo fillimin, zhvillimin e lehtësimit të sjelljes seksuale të përvojës. Këto gjetje tregojnë një rol kritik për EOP-induced VTA dopamin neurons plastike në shprehjen afatgjatë të përforcimit të sjelljes natyrore shpërblim.

Disa eksperimente shtesë të kontrollit u zhvilluan për të përcaktuar se efektet e bllokimit të receptorit opioid në humbjen e përforcimit afatgjatë të sjelljes seksuale ndodhën i pavarur nga mungesa e administrimit të naloksoneve në ditën e testimit përfundimtar të mating (Fig 5A,B), ishin specifike për humbjen e mirëmbajtjes afatgjatë, por jo afatshkurtër të lehtësimit të çiftëzimit (Fig 5E,F), nuk janë shkaktuar nga ekspozimi ditor vetëm për nalokson (Fig 5C,D) dhe nuk ishin shkaktuar nga humbja e shpërblimit seksual në meshkujt e trajtuar me naloksone (Fig 5G,H). Së pari, për të treguar se sjellja e ndryshuar seksuale në testin përfundimtar të matingit nuk ishte për shkak të mungesës së naloxone, ose naloxone ose kripur u administrua në ditën e testit përfundimtar mating për kafshët që morën mating çiftëzohet me naloxone ndërsa ata fitonin përvojë seksuale (Fig 5A). Ekzistonte një efekt kryesor domethënës i lidhjes së ditës në latente për të montuar (Fig 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) dhe ndërhyrje (Tabela 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Nuk kishte asnjë efekt kryesor të ditës së çiftëzimit në latente ndaj ejakulimit (Tabela 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Ngjashëm me atë që u përshkrua më lart, trajtimi nalokson gjatë çiftëzimit nuk ndikoi në lehtësimin e sjelljes seksuale gjatë pesë seancave fillestare të përvojës seksuale. Të dy grupet (grupet e trajtuara me kripëra dhe naloksone siç janë përcaktuar nga trajtimet e marra gjatë testit përfundimtar të matingit, të dy morën naloksone gjatë çiftëzimit) treguan sjellje seksuale të lehtësuar në ditën 5 krahasuar me ditën 1 dhe treguan latente dukshëm më të shkurtërFig 5B; kripur: p = 0.033; naloksone: p = 0.014) dhe ndërhyrje (Tabela 2; kripur: p = 0.034; naloksone: p = 0.026). Kafshët që morën ose nalokson ose kripur në ditën e fundit të testimit të çiftëzimit kishin latente më të gjata për t'u ngritur (Fig 5B; kripur: p = 0.018; naloksone: p = 0.029) dhe ndërhyrje (Tabela 2; kripur: p = 0.019; naloksone: p = 0.020) krahasuar me ditën e pestë të përvojës së çiftëzimit. Prandaj, administrimi i naloksonit ose i kripës në ditën e testimit menjëherë para çiftëzimit nuk ka ndikuar në efektin e trajtimit nalokson gjatë seancave të përvojës seksuale dhe zbutja e lehtësimit afatgjatë të sjelljes seksuale ishte identike me atë që tregohet në kafshë që nuk kanë marrë asnjë injeksion në ditën përfundimtare të testimit të çiftëzimit (Fig 4).

Figura 5. 

Opioidet endogjene janë të rëndësishme në shprehjen afatgjatë të lehtësimit të sjelljes seksuale të përvojës. A, Dizajni eksperimental për eksperiment për efektin e trajtimit NLX në ditën e testimit. B, Lumë në mal në ditët 1 dhe 5 të pesë ditëve të njëpasnjëshme të matjes dhe ditës së provës përfundimtare të matjes (Test) pas injektimit me kripinë (gri) ose naloxone (të zezë). Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM. * tregon dallim të rëndësishëm në mes të ditës 1 dhe ditës 5 brenda trajtimit. # tregon dallim të rëndësishëm në mes të ditës së testimit dhe ditës 5 brenda trajtimit. C, Dizajni eksperimental për eksperiment për të provuar efektin e para-trajtimit naloxone pa eksperimën seksuale në sjelljen e mating. D, Montoni latente në ditën përfundimtare të testimit të çiftëzimit, 7 ditë pas ditëve 5 të injektimit të kripur ose naloxone në mungesë të çiftëzimit. Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM. E, Dizajni eksperimental për eksperiment për të provuar nëse trajtimi nalokson prekë shfaqjen afatshkurtër të sjelljes seksuale të lehtësuar në kafshët me përvojë seksuale. F, Montoni latentin në ditën 1 dhe ditën 5 të pesë ditëve të njëpasnjëshme të matjes dhe ditës së testimit të çiftëzimit përfundimtar, 1 ditë pas dite 5 në praninë e injeksionit të kripur (gri) ose naloxone (të zezë). Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM. * tregon dallim të rëndësishëm në mes të ditës 1 dhe ditës 5 brenda trajtimit. G, Dizajni eksperimental për eksperiment për të provuar nëse trajtimi nalokson bllokuan efektet shpërblyese të sjelljes seksuale. H, Koha e kaluar në dhomën e çiftëzimit (në sekonda) gjatë prerjes (të bardhë) dhe pas provës (e zezë) për kafshët që pranojnë ose nalokson ose kripur para çiftëzimit. Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM; * tregon dallim të rëndësishëm në krahasim me pretest.

Tabela 2. 

Të dhënat e paraqitura janë latente për ndërhyrje dhe derdhje (sekonda) nga eksperimentet e kontrollit të kryera për të përcaktuar se efektet e bllokimit MOR në humbjen e përforcimit afatgjatë të sjelljes seksuale ndodhën i pavarur nga mungesa e administrimit naloxone në ditën e testit përfundimtar të çiftëzimit

Për të përcaktuar nëse ishte trajtim nalokson kur u shoqërua me përvojë seksuale dhe nuk u përsërit në naloxone në vetvete që shkaktoi dëmtim të sjelljes seksuale 7 d pas trajtimit të fundit, kafshët seksualisht naive morën ose pesë injeksione të përditshme të injeksione naloxone ose kripur para një provimi përfundimtar të mating 7 d më vonë (Fig 5C). Asnjë dallim domethënës nuk është zbuluar për asnjë parametër të çiftëzimit mes grupeve të tretura me kripur dhe nalokson (Fig 5D; malin latente; kohëzgjatja e intromizës: kripur 139.7 ± 40.3 vs naloxone 121.83 ± 42.55; latente ejaculation: kripur 887.9 ± 70.0 vs naloxone 1050.8 ± 327.31). Këto rezultate tregojnë se vetëm naloksoni nuk është i mjaftueshëm për të ndryshuar sjelljen e mëvonshme seksuale, të ngjashme me mungesën e efekteve të naloksonit vetëm në plasticitetin e VTA dopamin neuron.

Ne supozojmë se trajtimi nalokson gjatë përvetësimit të përvojës seksuale pengon shprehjen afatgjatë të lehtësimit të sjelljes seksuale të përvojës seksuale. Për ta testuar këtë më tej, efektet e trajtimit naloxone gjatë çiftëzimit u testuan në sjelljen e mëvonshme seksuale gjatë një testi përfundimtar të çiftëzimit, i cili u krye vetëm me 1 d pas çiftëzimit të fundit (dizajn eksperimental; Fig 5E). Ka pasur një efekt kryesor domethënës të mating day on mount (Fig 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) dhe vonesat e ndërhyrjes (Tabela 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Nuk kishte ndonjë efekt kryesor të rëndësishëm të ditës në vonesën e ejakulimit (Tabela 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Ngjashëm me të përshkruara më lart, të gjithë meshkujt (pavarësisht nga trajtimet e kripës ose naloksonit) treguan lehtësim të sjelljes seksuale gjatë pesë seancave të përvojës seksuale të treguara me latente dukshëm më të shkurtra për të montuar (Fig 5F; kripur: p = 0.002; naloksone: p = 0.018) dhe ndërhyrje (Tabela 2; kripur: p = 0.006; naloksone: p = 0.009) në ditën 5 krahasuar me ditën 1. Në mënyrë të ngjashme, sjellja seksuale e lehtësuar u demonstrua në ditën e testimit në krahasim me ditën 1 treguar me latente dukshëm më të shkurtra për të montuar (Fig 5F; kripur: p = 0.001; naloksone: p = 0.020) dhe ndërhyrje (Tabela 2; kripur: p = 0.004; naloksone: p = 0.009). Më e rëndësishmja, trajtimi nalokson gjatë çiftëzimit nuk ndikoi ndjeshëm në lehtësimin e sjelljes seksuale të përvojës seksuale kur u provua 1 d pas përvojës seksuale, pavarësisht nga trajtimi naloxone në këtë ditë testimi përfundimtar.

Më në fund, ne testuam mundësinë që efektet qetësuese të naloxone në shprehjen afatgjatë të sjelljes seksuale të lehtësuar është për shkak të një efekti bllokues të naloxone në vetitë e dobishme të sjelljes seksuale. Sidoqoftë, naloksoni i administruar menjëherë para bashkimit nuk ndryshoi formimin e CPP për çiftëzim (Fig 5G), duke sugjeruar se trajtimi naloxone nuk ndryshoi shpërblimin seksual. Të dy grupet e trajtuara me kripëra dhe naloksone formuan një CPP të dukshme për sjelljen seksuale siç tregohet nga koha e rritur dukshëm e shpenzuar në dhomën e seksit të çiftëzuar (Fig 5H; kripur: p = 0.038; naloksone: p = 0.002) gjatë testimit në krahasim me pretest. Prandaj, naloksoni nuk e ushtron efektin e tij të dëmshëm në mbajtjen e sjelljes seksuale të lehtësuar duke bllokuar shpërblimin e lidhur me sjelljen seksuale.

Lehtësimi i sjelljes seksuale varet nga veprimi i EOP-së në VTA

Për të konfirmuar që EOP vepron në mënyrë specifike në VTA për të nxitur lehtësimin afatgjatë të sjelljes seksuale, dizajni eksperimental i përshkruar në Figura 3A u përsërit me intra-VTA infusions naloxone në vend se injeksione sistemike. Rezultatet ishin identike me administrimin sistematik të përshkruar më sipër. Ka pasur një efekt kryesor domethënës të takimit në të gjitha parametrat e sjelljes së seksit (Fig 6A, rritet latenca: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, vonesa e ndërhyrjes: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, latente ejaculation: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) dhe intra-VTA naloxone trajtim në latencies të malit (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) dhe ndërhyrje (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Naloxone intra-VTA nuk e ka penguar lehtësimin fillestar të sjelljes seksuale gjatë 5 d të çiftëzimit, pasi meshkujt e trajtuar me nalokson treguan ulje të ngadalësuara (Fig 6A; p = 0.001), ndërhyrje (Fig 6B; p <0.001), dhe derdhje (Fig 6C; p = 0.001) në ditën 5 krahasuar me ditën 1. Meshkujt e trajtuar me Naloxone nuk ndryshojnë nga meshkujt e trajtuar me kripë në ditën e pestë të çiftëzimit në ndonjë latente. Trajtimi brenda-VTA naloxone, si administrimi sistematik, shkaktoi rritje te konsiderueshme te malit (Fig 6A; p <0.001) dhe vonesat e ndërhyrjes (Fig 6B; p <0.001) në ditën e parë të çiftëzimit krahasuar me meshkujt e trajtuar me kripë, gjë që nuk u vu re gjatë seancave pasuese të çiftëzimit (gjatë së cilës meshkujt e trajtuar me nalokson dhe kripë nuk ndryshonin). Një vëzhgim i papritur ishte se në këtë eksperiment, meshkujt e trajtuar me kripë nuk treguan lehtësim të rëndësishëm statistikor të vonesave të montimit ose intromisionit (siç u tregua në të gjitha eksperimentet e përshkruara më sipër), dhe vetëm vonesa e derdhjes u shkurtua në ditën e pestë krahasuar me ditën e parë (kripë: p =

Figura 6. 

Opioidet endogjene në ndërmjetësimin e VTA ndërmjetësojnë lehtësimin e sjelljes seksuale dhe mirëmbajtjen afatgjatë të saj. Parametrat e sjelljes seksuale për meshkujt e trajtuar me kripur (Sal, bare të bardha, n = 8) ose NLX (bare të zeza, n = 6) me administrimin intra-VTA. Të dhënat e paraqitura janë latente për të montuar (A), ndërhyrje (B), dhe derdhje (C) në ditët 1 dhe 5 të pesë ditëve të njëpasnjëshme të çiftëzimit. Përveç kësaj, të dhënat tregohen për ditën e testimit përfundimtar, 7 d pas ditës 5 në mungesë të injektimit të kripës ose naloksonit. Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM; + tregon dallim të rëndësishëm midis ditëve 1 dhe 5 brenda trajtimit; * tregon dallim të rëndësishëm në mes të ditës së provës dhe ditës 5 brenda trajtimit; # tregon ndryshim të rëndësishëm midis grupeve naloxone dhe Sal brenda ditës. Skicimet skematike të seksioneve VTA koronare (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 nga bregma) që tregojnë vendet e injektimit intra-VTA për të gjitha kafshët në Experiment 5 (kripur, e bardhë, naloxone, e zezë, duke përdorur vizatime template nga Swanson Brain Maps (Swanson, 2004). Kanulet ishin dypalëshe, por faqet e injektimit janë të përfaqësuara në mënyrë të njëanshme për lehtësimin e prezantimit. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Lemniscus medial; SN, substantia nigra.

Trajtimi intra-VTA naxolone bllokoi mbajtjen e sjelljes seksuale të lehtësuar të vërejtur tek meshkujt me eksperiencë seksuale, të ngjashme me efektet e naloksonit sistemik. Në mënyrë të veçantë, në ditën e testit përfundimtar, meshkujt e trajtuar me nalokson kishin latente më të gjata për t'u ngritur (Fig 6A; p = 0.011), ndërhyrje (Fig 6B; p = 0.010), dhe derdhje (Fig 6C; p = 0.015) në krahasim me sesionin e tyre të pestë të matjes dhe krahasuar me meshkujt e trajtuar me kripë në ditën e fundit të testimit (Fig 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Në të kundërt, kafshët e trajtuara me kripëra nuk ndryshojnë në latente për të ngritur dhe ndërhyrje në mes të ditës së testit përfundimtar dhe ditës 5 të mating. Këto efekte ishin specifike për dërgimin e naloksonit tek VTA, si meshkujt me faqet e kanulimit aty pranë, por jo duke synuar VTA (Fig 6D; n (ML, 3 ± 53, EL = 6.245 ± 389) dhe në mënyrë të konsiderueshme të ndryshme krahasuar me kafshët naloxone intra-VTA në ditën e testit përfundimtar të çiftëzimit (ML, 299.5) IL: p = 0.029; EL: p =

Veprimi i EOP është i nevojshëm për aktivizimin e nervave të kushtëzuar të lidhur me seksin

Bazuar në gjetjet e deritanishme, ne supozuam që aktivizimi i EOP në VTA gjatë përvojës së çiftëzimit dhe zvogëlimi i mëvonshëm i Soma dopamine Soma, janë kritike për atribuimin e ndjeshmërisë nxitëse për stimulimin e stimulimeve të lidhura me shpërblimin dhe rrjedhimisht ruajtjen e lehtësimit të sjelljes seksuale. Për të provuar këtë hipotezë, efektet e bllokimit të receptorëve opioid gjatë përvojës së çiftëzimit në aktivitetin nervor të nxitur nga ekspozimi i mëvonshëm në cues kontekstual të kushtëzuar, parashikuan shpërblimin seksual (cues kontekstuale të lidhura me seksin). Kafshët seksualisht naive u ekspozuan edhe ndaj cuesve mjedisorë, por këto nuk ishin të lidhura me përvojën e mëparshme të çiftëzimit, prandaj ishin shenja neutrale. Së fundi, nivelet bazë të pERK-ut u përcaktuan në grupet e kontrollit seksual me përvojë dhe naivë që mbetën në kafazet e shtëpisë dhe nuk u ekspozuan ndonjë shenja (-No Cue). Konfirmimi dhe zgjerimi i gjetjeve të mëparshme (Balfour et al., 2004), ekspozimi ndaj cues kontekstuale të lidhura me shpërblimin e seksit të mëparshëm shprehën dukshëm shprehjen e pERK në meshkujt me përvojë seksualisht në NAc (Fig 7) dhe mPFC (Fig 8A-C), por nuk shkaktoi aktivizimin neuronal në BLA (Fig 8D) ose CPu (të dhënat nuk tregohen). Ka pasur efekte kryesore të ekspozimit sugjerim në thelbin e NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038), dhe PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041), dhe trajtimi nalokson në bërthamën e NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002), dhe PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Ka pasur ndërveprim të rëndësishëm në bërthamën e NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014), dhe IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Së pari, ekspozimi i cue-së në lidhje me çiftëzimin në mënyrë të konsiderueshme rriti pERK në kafshët me përvojë seksualisht të kripur (Exp Sal ​​+ Cue) në krahasim me kontrollet që nuk ishin të ekspozuar ndaj ndonjë cues dhe të marra nga kafazi i shtëpisë (Exp Sal-No Cue)Fig 7A; p <0.001), dhe nënrajonet mPFC ACA (Fig 8A; p = 0.001), PL (Fig 8B; p = 0.003), dhe IL (Fig 8C; p = 0.029). Në të kundërt, në kafshët seksualisht naive të trajtuara me kripur, ekspozimi ndaj cues kontekstual, të cilat nuk ishin të lidhura me shpërblimin seksual, nuk nxitën pERK në asnjë nga zonat e trurit (Naive Sal + Cue krahasuar me Sal-Na Cue naive; Fiq. 7, 8), duke treguar se induksioni i pERK-ut është specifik për ekspozimin e cuesve të lidhura me përvojën seksuale. Për më tepër, përvoja seksuale vetëm nuk e ndryshoi shprehjen e pERK-it bazë në asnjë nga rajonet e trurit, pasi nuk kishte dallime midis grupeve që u morën nga kafazet e shtëpisë, qoftë seksualisht naive apo përvojë, dhe trajtohen me kripur ose naloksone.

Figura 7. 

Veprimi opioid endogjen kërkohet për aktivizimin nervor në NAc të nxitur nga cues të kushtëzuar nga seksi. Numrat e qelizave pERK-IR per mm2 në bërthamën e nucleus accumbens (A) dhe shell (B) në kafshë seksualisht naive (të bardha) dhe me përvojë (të zezë), të cilat u trajtuan paraprakisht me NLX sistemike ose me kripur (Sal) gjatë sesioneve të çiftëzimit (meshkujve) ose seancave të trajtimit (meshkuj naive). Grupet ose u ekspozoheshin në cues kontekstualë (Cue), të cilat ishin cues shoqërues të çiftëzimit në meshkujt e Ekspozitës dhe cues neutrale në kafshët Naive, ose të marra nga kafazet e shtëpisë (No Cue, treguar nga mungesa e cue-label). Të dhënat paraqiten si mesatare ± SEM; * tregon dallim të rëndësishëm në krahasim me kontrollet e ekspozuara nga ana e kripës-para-trajtuar (Naive Sal-No Cue dhe Exp Sal-No Cue); # tregon dallim të madh në krahasim me grupin e Exp ekspozuar me Cue (Exp Sal ​​+ Cue). Imazhe përfaqësuese të qelizave pERK-IR për mm2 në bërthamën e NAc të meshkujve me përvojë seksualisht me Sal (C, D) ose NLX (E, F) që u morën nga kafazi i shtëpisë (No Cue, C, E), ose të ekspozuara ndaj cues kontekstuale të lidhura me çiftëzimin (Cue; D, F). N = 4 secili grup përveç Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, Përpara anterior. Bar shkallëzimi, 100 μm.

Figura 8. 

Efektet e naloxone në mating shprehje pERK nxitur nga sugjerimet në rajone të tjera VTA target. Numrat e qelizave pERK-IR per mm2 në kafshë seksualisht naive (të bardha) dhe me eksperiencë (të zezë), të cilat u trajtuan paraprakisht me NLX sistematike ose kripur (Sal) gjatë sesioneve të çiftëzimit dhe u ekspozuan ndaj cues kontekstuale (Cue) ose kafaz shtëpie (pa cues) në ACAA), PL (B), IL (C), dhe BLA (D). Të dhënat përfaqësojnë mesataren ± SEM; * tregon dallim të rëndësishëm në krahasim me kontrollet e ekspozuara nga ana e kripës-para-trajtuar (Naive Sal-No Cue dhe Exp Sal-No Cue); # tregon një ndryshim të rëndësishëm në krahasim me kontrollet e kontrolluara seksualisht naive të trajtuara nga Sal-i (Naive Sal + Cue).

Në mbështetje të hipotezës tonë, trajtimi nalokson gjatë përvojës seksuale ndjeshëm zbutur induksionin pERK nga cues kondicionuar lidhur me seksin. shprehja pERK në këto meshkuj me përvojë të ekspozuar ndaj eksplorimit me naloxone (Exp NLX + Cue) nuk ndryshonte nga shprehja pERK bazë në cilindo nga grupet kontrolluese seksualisht naive ose me përvojë të marra nga kafazet e shtëpisë (Naive Sal-No Cue ose Naive NLX- Nuk ka cue). Për më tepër, shprehja pERK në meshkujt me eksperiencë të ekspozuar me ekspozim të naloxon (Exp NLX + Cue) ishte dukshëm më e ulët në krahasim me kafshët me përvojë të ekspozuar me kripë (Exp Sal ​​+ Cue) në thelbin e NAcFig 7A; p = 0.002) dhe nën rajonet e mPFC (Fig 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p =

Në shell NAc, analiza ANOVA me dy drejtime nuk ka dhënë efekte statistikisht të rëndësishme të ekspozimit të faktorëve të cue dhe trajtimit naloxone. Sidoqoftë, një krahasim me çifte tregoi se ekspozimi i sugjerimit nxiti pERK në grupin me përvojë seksualisht të kripur (Exp SAL + Cue) në krahasim me grupin e kontrollit naiv të Saline të pa ekspozuar (Fig 7B; Naive SAL-No Cue: p =

Diskutim

Studimi aktual tregon se EOP që vepron në VTA gjatë sjelljes seksuale, një sjellje natyrale shpërblimi, shkaktoi një reduktim të fuqishëm, por të përkohshëm në madhësinë e soma të qelizave dopamine të VTA. Reduktimi në madhësinë e soma nuk u vërejt në neuronet VTA jo-dopamike, as në neuronet dopamine në substantia nigra aty pranë, duke sugjeruar që ky ndryshim ishte specifik për qelizat dopamine të VTA. Kjo plasticitet dopamine VTA duket e ngjashme me atë të shkaktuar nga ekspozimi kronik i opiumit (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) dhe shkaktoi tolerancë të ngjashme me shpërblimin e opiumit (morfinë) ekzogjen. Ne kemi treguar se plasticiteti i VTA dopamine është kritik për afatgjatë (mirëmbajtje), por jo afatshkurtër (zhvillim), përforcim të sjelljes seksuale dhe aktivitet nervor të nxitur nga shpërblimi (pERK) në rajonet e targetuara VTA: NAc dhe mPFC. Këto gjetje tregojnë një rol për plasticitetin dopamine të VTA-së në shprehjen afatgjatë të shkallës stimuluese të cuesve parashikuese të shpërblimeve natyrore ose kujtesës së shpërblimit.

Është dokumentuar mirë se përvoja seksuale rezulton në lehtësimin e sjelljeve seksuale të mëvonshme, duke përfshirë fillimin më të shpejtë të fillimit të çiftëzimit dhe rritjes së performancës (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Kjo lehtësim ose përforcim i sjelljes seksuale mbahet për të paktën 28 d pas çiftëzimit (Pitchers et al., 2012). Përveç kësaj, është treguar se sjellja e seksit dhe shenjat e kushtëzuara që parashikojnë shpërblimin e seksit shkaktojnë internalizim të MOR në VTA dhe nxisin aktivizimin neuronal në të gjithë sistemin mesolimbik, duke përfshirë në VTA (dopamin dhe neuronet nondopamine), NAc, PFC dhe BLABalfour et al., 2004, 2006). Ajo është themeluar mirë VTA dopamin neurons luajnë një rol vendimtar në të mësuarit dhe atribuimit të shtyjë stimuluese e stimujve të lidhura me shpërblimin (Berridge dhe Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) dhe janë kritike për parashikimin e shpërblimit (Schultz, 2010). Gjetjet e tanishme zgjerohen në njohuritë tona aktuale duke demonstruar se neuroplasticiteti i VTA i nxitur nga shpërblimi është kritik për këto funksione dhe varet nga aktivizimi i MOR nga EOP në VTA. Aktualisht nuk dihet se cila EOP është ligandi MOR që vepron në VTA gjatë sjelljes seksuale mashkullore. Edhe pse β endorfina dhe enkefalina janë implikuar në motivimin stimulues për përforcuesit e ushqimit (Hayward et al., 2002), kjo mbetet të themelohet për sjelljen seksuale të meshkujve. Ne kemi treguar më parë se neuronet β-endorphin nuk janë aktivizuar gjatë çiftëzimit, as nuk ka rritje në POMC mRNA; pra, duke sugjeruar se endorfina β nuk mund të jetë EOP kritik që vepron në VTA gjatë çiftëzimit (Davis et al., 2007). Kjo plasticitet dopamine VTA ishte thelbësore për aktivitetin nervor në mPFC, NAc, dhe VTA pas ekspozimit ndaj cueve mjedisore që parashikojnë shpërblimin seksual. Për më tepër, plasticiteti i VTA dopaminës ishte kritik për shprehjen afatgjatë të rritjes së inicimit dhe shfaqjes së sjelljes seksuale. Në të kundërt, neuroplasticiteti VTA i shkaktuar nga përvoja seksuale nuk ishte e nevojshme për përgjigjen hedonike si shpërblimi seksual (i përcaktuar nga CPP) dhe lehtësimi afatshkurtër i motivimit dhe performancës seksuale (gjatë përvojës seksuale ose 1 d më vonë) mbeti i paprekur pavarësisht bllokimit të MOR gjatë çiftëzimitMehrara dhe Baum, 1990). Në vend të kësaj, të dhënat sugjerojnë se VPA dopamine neuroplasticity ndërmjetëson afat më të gjatë (7 d pas përvojës së seksit të fundit; Pitchers et al., 2012) Shprehja e "dëshirës" së shpërblimit seksual dhe rritjes së motivuar të përgjigjeve ndaj cues mating (Miller dhe Baum, 1987; Berridge dhe Robinson, 1998).

Kafshët me eksperiencë seksuale treguan tolerancë të tërthortë ndaj shpërblimit të morfinës, të ngjashme me efektet e drejtimit të rrotave në minj, një sjellje tjetër shpërblyese natyrore, një efekt i bllokuar me trajtimin nalokson (Lett et al., 2001, 2002) dhe përcaktohet të jetë i varur nga plasticiteti i qelizave dopamine të VTA (gjetjet aktuale). Ngjashëm me shpërblimet natyrore, ekspozimi i përsëritur ndaj morfines ose heroinës së opiateve rezulton në një reduktim të përkohshëm të madhësisë së SOMA dopamine të VTA-së (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Për më tepër, ekspozimi i opiateve me periudha të shkurtra të tërheqjes shkakton tolerancë shpërblimi, siç përfshihet nga doza më të larta të medikamenteve që kërkohen për të formuar shoqata shpërblimesh (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007), dhe shkakton që kafshët vetë-administruar të përshkallërojnë marrjen e drogës (Ahmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Prandaj, EOP dhe opiatet veprojnë në substrate nervore të zakonshme për të nxitur tolerancën e shpërblimit gjatë tërheqjes së hershme, të cilat mund të pasqyrojnë një mekanizëm kompensues homeostatik për të luftuar stimulimin me ekspozim të përsëritur (Koob dhe Le Moal, 2005). Në të kundërt, gjatë abstinencës afatgjatë të drogës opiate, toleranca kthehet në një ndjeshmëri ndaj pronave të dobishme të drogës (Harris dhe Aston-Jones, 2003; Aston-Jones dhe Harris, 2004; Harris dhe Gewirtz, 2004). Është interesante që përvoja seksuale e ndjekur nga një periudhë abstinence seksuale e 7-28 d është gjetur të shkaktojë ndjeshmërim të kryqëzuar për shpërblim psikostimulues (Pitchers et al., 2010a), e cila varet nga shprehja deltaFosB e nxitur nga mating-i dhe aktivizimi i 1 receptorit dopamin në NAc (Pitchers et al., 2013). Prandaj, përvoja e shpërblimeve seksuale shkakton tolerancë të njëkohshme të shpërblimit të opiumit dhe sensibilizim shpërblimesh psikostimulues, megjithëse një periudhë më e gjatë e abstinencës seksuale ndaj tolerancës së shpërblimit morfinë mbetet për t'u testuar. Ne vërejmë se këto efekte të kundërta mbi shpërblimin e drogës mund të ndërmjetësohen nga forma të ndryshme të plasticitetit nervor në fusha të ndryshme të sistemit mesolimbik: Veprimi i VTA EOP dhe plasticiteti dopamin ndërmjetësojnë tolerancën e shpërblimit të opiumit (studimi aktual), ndërsa shprehja deltaFosB NAc kontrollon sensibilizimin psikostimulues (Pitchers et al., 2013). Të dyja këto ngjarje mund të kontribuojnë në përshkallëzimin e marrjes së drogës (Ahmed dhe Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

Mekanizmat molekulare me të cilat EOP ndikon në neuronet dopamine të VTA gjatë sjelljes natyrale të shpërblimit mbeten të panjohura. Rruga IRS2-Akt-mTORC2 është një ndërmjetës i madh i zvogëluar i madhësisë soma në VTA shkaktuar nga morfina e përsëritur (Jaworski dhe të tjerët, 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Ndryshimet e shkaktuara nga administrimi i morfines në përmasat e dopaminës neuroneve në VTA mund të parandalohen nga infuzion intra-VTA të faktorit neurotrofik të trurit (BDNF; Sklair-Tavron dhe Nestler, 1995). BDNF e aktivizon këtë rrugë nëpërmjet sinjalizimit të TrkB (Russo et al., 2007), një receptor kinase me afinitet të lartë për BDNF dhe pjesë e rrugës IRS2-Akt (Seroogy dhe Gall, 1993; Numan dhe Seroogy, 1999), dhe shprehur në dopamin dhe neuronet GABA në VTA. Reduktimi i komponentëve të ndryshëm të rrugës IRS2-Akt duke përdorur teknologjinë e transferimit gjenetik të vektorëve viral imiton efektet e ekspozimit kronik të opiumit. Për më tepër, efektet e ekspozimit të opiumit mund të shpëtohen duke rivendosur këtë rrugë sinjalizuese (Russo et al., 2007) dhe shprehja e tepërt e një komponenti të mTORC2 parandalon zvogëlimin e soma të dopaminës VTA të nxitur nga morfina (Mazei-Robison et al., 2011). Prandaj, puna e mëparshme që heton efektet e opiateve kronike në madhësinë e SOMA dopamine të VTA tregon se ulja e rregullimit të morfines nga rruga IRS2-Akt-mTOR është e mjaftueshme dhe e nevojshme për këtë efekt (Mazei-Robison dhe Nestler, 2012). Kështu, është joshëse të spekulohet se efektet e përvojës seksuale në neuroplasticitet dopamine të VTA ndërmjetësohen në mënyrë të ngjashme nga BDNF dhe IRS2-Akt-mTORC2.

Në përfundim, studimi i tanishëm tregoi se neuroplasticiteti i VTA është shkaktuar nga përvoja me sjellje natyrale shpërbleese, në veçanti nga sjellja e përsëritur seksuale mashkullore. Në mënyrë të veçantë, EOP vepron në VTA për të zvogëluar madhësinë e dozës së dopamës, e cila supozohet të jetë e lidhur me rritjen e ngacmimit nervor dhe prodhimin më pak të dopamine që rezulton në një sistem hipodopaminergjik dhe ndryshon funksionimin e sistemit mesolimbik në përgjigje të cuesve që parashikojnë shpërblimin seksual. Për më tepër, neuroplasticiteti VTA është kritik për motivimin e nxitjes dhe shpërblimin e kujtesës, por jo për ndikimin hedonik të sjelljes seksuale. Së fundmi, neuroplasticiteti VTA i shkaktuar nga sjellja e shpërblimit natyror, i ndjekur nga një periudhë e shkurtër e apstinencës së shpërblimit, ka ndikim në shpërblimin e opiumit dhe mund të ndikojë kështu në cenueshmërinë ndaj zhvillimit të varësisë nga droga.

Shënimet

  • Margjina janar 12, 2014.
  • Revizioni mori majin 17, 2014.
  • Pranohet Maj 20, 2014.

  • Ky hulumtim u mbështet nga grantet e Institutit Kanadez të Kërkimeve Shëndetësore të LMC dhe Shkencave të Natyrës dhe Këshillit të Kërkimeve Inxhinierike në KKP

  • Autorët nuk deklarojnë interesa financiare konkurruese.

  • Korrespondenca duhet t'i drejtohet Dr Lique M. Coolen, Universitetit të Mississippi Medical Center, Departamenti i Fiziologjisë dhe Biofizikës, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [email mbrojtur]

Referencat

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Sjellja seksuale e meshkujve. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Tranzicioni nga futja e medikamenteve në tepruara të drogës: ndryshimi në pikën hedonike. Shkencë 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Rritje afatgjate në pikën e caktuar për vetë-administrimin e kokainës pas përshkallëzimit në minjtë. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Rritja e vazhdueshme e motivimit për të marrë heroinë në minjtë me një histori të përshkallëzimit të drogës. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Dëshmitë neurobiologjike për allostasis hedonike të shoqëruara me përdorimin eskalues ​​të kokainës. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Shkalla e vetë-administrimit të kokainës nuk varet nga nivelet e dopaminës së ndryshuar të kokainës të nxitur nga nucleus accumbens. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Substrate të trurit për rritjen e kërkimit të drogës gjatë tërheqjes së zgjatur. Neuropharmacology 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Sjellja seksuale dhe cues mjedisore të lidhura me seksin aktivizojnë sistemin mesolimbik në minjtë meshkuj. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Kontributet e mundshme të efferents nga korteksit mesatar prefrontal të aktivizimit nervor pas sjelljes seksuale në miun meshkuj. Neuroscience 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Proteinat e neurofilamentit dhe sistemi mesolimbik dopamin: rregullimi i zakonshëm nga morfina kronike dhe kokaina kronike në zonën tegmentale të barkut të miellit. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Cili është roli i dopamine në shpërblim: ndikim hedonik, shpërblim i të mësuarit, apo ndjeshmëri nxitëse? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Komponentët e shpërthimit të shpërblimit: "simpati", "dëshirë" dhe mësim. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Gold M

    (2012) Seksi, droga dhe rock'n'roll: hipoteza e aktivizimit mesolimbik të zakonshëm si një funksion i polimorfizmave të shpërblimit të gjeneve. J drogë psikoaktive 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Stimulimi periferik elektrik përmbysi reduktimin e madhësisë së qelizave dhe rritjen e nivelit të BDNF në zonën tegmentale të barkut në minjtë kronikë të trajtuar me morfinë. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Aktivizimi i neuroneve POMC gjatë zgjimit të përgjithshëm, por jo sjelljes seksuale në minjtë meshkuj. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Ndryshimet dinamike në efflux dopamine të nucleus accumbens gjatë efektit Coolidge në minjtë meshkuj. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn unë,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Një rol selektiv për dopamin në nxënien e nxitjes së shpërblimit. Natyrë 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Përzierja e kënaqësive: shqyrtimi i efekteve të drogës në sjelljen e seksit tek njerëzit dhe modelet e kafshëve. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. RA urti,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamina vepron në nënpopullimet e neuroneve që rregullojnë sjelljen seksuale në minjtë meshkuj. Neuroscience 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Çrregullimi i lartë gjatë tërheqjes nga morfina akute: një model i tërheqjes së opiateve dhe ankthit. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Motivimi dhe të mësuarit e ndryshuar pas tërheqjes së opiumit: dëshmi për disregulimin e zgjatur të procesimit të shpërblimit. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. MJ i ulët

    (2002) Deficiti selektiv i shpërblimit në minj që nuk kanë beta-endorfinë dhe enkefalinë. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Varësia natyrore: një model sjelljeje dhe qarku i bazuar në varësinë e sheqerit në minjtë. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Mekanizmat nervorë të varësisë: roli i mësimit dhe kujtesës lidhur me shpërblimin. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) Bllokada e receptorit GABA (A) në zonën tegmentale të barkut anterior rrit nivelet ekstracelulare të dopaminës në bërthamën accumbens të minjve. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Kontrolli i arborizimit dendritik nga objektivi i fosfoinozitid-3'-kinase-Akt-gjitar i rrugës rapamycin. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. RA veriore

    (1992) Opioidët nxisin neuronet dopamine nga hiperpolarizimi i interneuronëve lokalë. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Rregullimi i lirimit somatodendritik dopamine në zonën tegmentale të barkut nga opioidet dhe GABA: një studim mikrodializmi in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plutueshmëria e neurocircuitry shpërblim dhe "anën e errët" të varësisë nga droga. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Një medium i përmirësuar i montimit për mikroskopin e imunofluorescentës. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloxone zbut preferencën e kushtëzuar të vendit të shkaktuar nga rrotat në rats. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Përvoja e mëparshme me drejtimin e rrotave prodhon tolerancë të tërthortë ndaj efektit të shpërblyeshëm të morfines. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. DC gjermane

    (1984) Dëshmia elektrofiziologjike për ngacmimin e zonave tegmentale të miellit të barkut me dopaminë nga morfina. Neuroscience 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) Roli për sinjalizimin mTOR dhe aktivitetin neuronal në adaptimet morfine-të nxitura në zonat tegmentale të ventralit të dopaminës. Neuron 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Plastikë molekulare dhe qelizore e induktuar nga Opiate e zonës tegmentale të barkut dhe locus coeruleus neuroneve catecholamine. Ftohtë Pranvera Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloxone prish shprehjen, por jo blerjen nga minjtë meshkuj të një përgjigje preferenciale për vendin e kushtëzuar për një femër të jashtëzakonshme. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Përvoja seksuale në brejtësit femra: mekanizmat celularë dhe pasojat funksionale. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloxone pengon preferencën e vendbanimit dhe të kushtëzuar të vendit për një femër estrous në minjtë meshkujsh menjëherë pas kastrimit. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Lehtësimi i sjelljeve seksuale në miun meshkuj të lidhur me injeksione intra-VTA të opiateve. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Specifikimi i sinjalit MAPK: vendi i duhur në kohën e duhur. Trendet Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Mekanizmat transkripsion të varësisë nga droga. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Truri i miut në koordinatat stereotakse (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplasticiteti në sistemin mesolimbik të shkaktuar nga shpërblimi natyror dhe abstinenca pasuese e shpërblimit. Biol Psikiatria 67: 872-879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB në bërthamë accumbens është kritike për efektet përforcuese të shpërblimit seksual. Gjene Brain Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Përvoja e shpërblimit natyror ndryshon shpërndarjen dhe funksionimin e receptorit AMPA dhe NMDA në nucleus accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Shpërblimet natyrore dhe të drogës veprojnë mbi mekanizmat e zakonshëm të plasticitetit nervor me DeltaFosB si ndërmjetës kyç. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK dhe p38 MAPK-aktivizuar kinazë proteina: një familje e kinazave proteinike me funksione të ndryshme biologjike. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Vetë DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Rruga IRS2-Akt në midranin neuronet dopamine rregullon reagimet e sjelljes dhe qelizave ndaj opiateve. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Funksione të shumëfishta të neuroneve dopamine. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Shprehja e neurotrofinëve nga neuronet dopaminergjike të midbrain. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Karakteristikat motivuese të opioideve: dëshmi se një aktivizim i receptorëve delta ndërmjetëson proceset e përforcimit. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Efektet kundërshtare të morfines dhe neurotrofinëve, NT-3, NT-4 dhe BDNF, në neuronet locus coeruleus in vitro. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Morfina kronike shkakton ndryshime të dukshme në morfologjinë e neuroneve mesolimbike dopamine. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Anomalitë e nxitura nga morfina në VTA: mikroskopi konfokal i skanimit të lazerit. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Hartat e trurit: struktura e trurit të miut (Akademik, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Shpërblimi seksual në minjtë meshkuj: efektet e përvojës seksuale në preferencat e kushteve të kushtëzuara që lidhen me ejakulimin dhe ndërhyrjet. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Matja e shpërblimit me paradigmën e preferencës së kushtëzuar të vendit (CPP): përditësimi i dekadës së fundit. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Motivimi seksual: përfshirja e opioideve endogjene në zonën tegmentale të barkut. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Rregullimi i sjelljes seksuale mashkullore: përfshirja e opioideve të trurit dhe dopaminës. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Ekspozimi kronik i opiumit prodhon vetë-administrimin e heroinës në rats. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Neurobiologjia e lidhjes së palëve: njohuri nga një brejtës social monogam. Fronti Neuroendokrinol 32: 53-69.

    •