Efekti i mbizotërimit të ΔFosB në sinjalizimin ndërmjetësues të opioidit dhe kanabinoidit në bërthamë accumbens (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Burim

Departamenti i Farmakologjisë dhe Toksikologjisë dhe Instituti për Studime të Barnave dhe Alkoolit, Shkolla e Mjekësisë e Universitetit të Commonwealth të Virxhinias, Richmond, VA 23298, SHBA.

Abstrakt

Faktori i qëndrueshëm i transkriptimit ΔFosB induktohet në bërthamë accumbens (NAc) nga ekspozimi kronik në disa ilaçe të abuzimit dhe shprehja transgenike e ΔFosB në striatum rrit pronat shpërblyese të morfines dhe cocaainite. Megjithatë, baza mekanike për këto vëzhgime nuk kuptohet plotësisht. Ne kemi përdorur një model bitransgenic miut me shprehjen inducible e ΔFosB në dopamine D (1) / dinorfin që përmbajnë neuronet striatale për të përcaktuar efektin e shprehjes ΔFosB në sinjalizimin e receptorëve opioid dhe kanabinoid në NAc. Rezultatet treguan se aktiviteti proteina G i ndërmjetësuar nga opioidi dhe inhibimi i adenilil ciklazës u rritën në NAc të minjve që shprehen ΔFosB. Në mënyrë të ngjashme, frenimi kappa opioid i adenyllycylase u rrit në minj shprehur ΔFosB. Në të kundërt, sinjalizimi ndërmjetësues i receptorit kanabinoid nuk ndryshonte në mes të minjve që shprehin peshën e tepërt të ΔFosB dhe minjve të kontrollit. Tgjetjet e tilla sugjerojnë se sinjalizimi i receptorëve opioid dhe kanabinoid modulohen në mënyrë të diferencuar nga shprehja e ΔFosB dhe tregojnë se shprehja ΔFosB mund të prodhojë disa nga efektet e saj përmes sinjalizimit të rritur të mu dhe kappa opioid receptor në NAc.

Keywords: G-protein, adenilil ciklase, striatum

1. Paraqitje

Receptorët opioid dhe CB kanabinoid₁ receptorët (CB₁R) janë objektivat neurobiologjike për dy klasa të përdorura gjerësisht të drogës që përfshijnë morfinë, heroinën dhe opioidet e recetave, dhe marihuanën (Δ⁹-tetrahidrokanabinol (THC), respektivisht. Efektet akute te opioideve dhe kanabinoideve jane te ndermjetesuara nga receptoret e G-protein-coupled qe aktivizojne kryesisht G_{i / o} proteina dhe prodhojnë përgjigje të efektorit në drejtim të rrymës si frenimi i adenilil ciklazës (Childers, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). Motori, dëmtimi i kujtesës dhe efektet psikoaktive të Δ⁹-THC janë prodhuar nga CB₁R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), të cilat janë shpërndarë gjerësisht në tru, me nivele të larta në ganglinë bazale, hipokampus dhe cerebelë (Herkenham, et al., 1991). Efektet analgjezike dhe shpërblyese të barnave opioide më të rëndësishme klinike dhe të abuzuara janë ndërmjetësuar kryesisht nga receptorët opioid (MOR) (Matthes, et al., 1996), të cilat janë pasuruar në sistemin limbik dhe në sistemin nervor (Mansour, et al., 1994). Sistemi mesolimbik, i përbërë nga parashikimet dopaminergjike nga zona tegmentale ventrale (VTA) në nucleus accumbens (NAc), luan një rol të rëndësishëm në efektet shpërblyese të opioideve dhe kanabinoideve (Bozarth dhe Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), si dhe droga të tjera të abuzimit (Koob dhe Volkow, 2010). Për më tepër, sistemet opioid endogjene dhe kanabinoid përfshihen në efektet shpërblyese të klasave të shumëfishta të barnave psikoaktive (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Kështu, është e rëndësishme të sqarohen mekanizmat me të cilat opioid dhe CB₁Sinjalizimi R janë të rregulluara në NAc.

Një çështje qendrore në fushën e abuzimit me drogën ka qenë identifikimi i proteinave që ndërmjetësojnë kalimin nga efektet akute në afat të gjatë të barnave psikoaktive. Faktori i transkriptimit AP-1 ΔFosB është veçanërisht interesant, sepse është një produkt i varur i skaruar fosb geni që grumbullohet pas ekspozimit të përsëritur ndaj drogave të abuzimit ose shpërblimeve natyrore (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Ne kemi gjetur se ΔFosB është e induktuar në tru pas ekspozimit të përsëritur ndaj morfines, Δ⁹-THC, kokaina ose etanoli, me çdo drogë që prodhon një model unik rajonal të shprehjes ΔFosB (Perrotti, et al., 2008). Një gjetje e qëndrueshme në të gjithë drogat ishte se ΔFosB u nxit shumë në striatum, ku të katërja barnat shkaktuan ΔFosB në thelbin e NAc dhe të gjitha përveç Δ⁹-THC shprehur dukshëm shprehje në shell NAc dhe caudate-putamen.

Studimet farmakologjike treguan se bashkë-administrimi i dopaminit D₁ receptor (D₁R) SCH 23390 bllokoi induksionin ΔFosB në NAc dhe caudate-putamen pas administrimit me ndërprerje të kokainës ose morfinës, duke sugjeruar rëndësinë e mundshme të D₁Neuronet R-shprehëse (Muller dhe Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Efekti i induksionit ΔFosB në sjelljet e ndërmjetësuara nga droga është hetuar duke përdorur minj bitransgjenike që shprehin ΔFosB në popullata të veçanta neuronale të NAc dhe striatum dorsal (Chen, et al., 1998). Minj që shprehin ΔFosB në dynorfin / D₁Neuronet R pozitive ne NAc dhe striatum dorsal (linja 11A) tregojne ndryshime te pergjigjeve ndaj medikamenteve te abuzimeve, vecanerisht ndjeshmeri te rritur ndaj efekteve te dobishme te kokaines ose morfines (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Këto ndryshime ndodhën në mungesë të ndryshimeve në nivelet e MOR ose nën-njësive të ndryshme të G-proteinave. Megjithatë, nivelet e ARR-së të dynorfinit u zvogëluan në NAc të minjve shprehëse ΔFosB (Zachariou, et al., 2006), duke sugjeruar se një objektiv i ΔFosB është një gjen që kodon një peptid endogjen opioid. Induksioni ΔFosB gjithashtu mund të prodhojë ndryshime të sjelljes duke rregulluar sinjalizimin e receptorëve në NAc, por kjo mundësi nuk është hetuar. Prandaj, studimet aktuale përdorën modelin bitransgjenik të miut për të përcaktuar nëse overexpression e ΔFosB në dynorphin / D₁R që përmbajnë neuronet striatale ndryshon aktivitetin e G-proteinave të ndërmjetësuar nga MOR dhe MOR- dhe KOR-mediated adenylyl cyclase inhibition në NAc. Efekti i ΔFosB në CB₁R aktiviteti i ndërmjetëm i G-së është vlerësuar gjithashtu sepse Δ⁹- Administrata e THC-së shkakton ΔFosB në NAc (Perrotti, et al., 2008) dhe sistemi endokannabinoid është i njohur për të rregulluar qarqet e shpërblimit të trurit (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), por efekti i ΔFosB në sistemin endokannabinoid nuk është hetuar.

2. Materiale dhe metoda

2.1. reagents

[³⁵S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) dhe [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) janë blerë nga PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, BPV, cAMP, albumina serum e gjedhit, kreatina fosfokinat, papaverine, imidazole dhe WIN-55212-2, u blenë nga Sigma Aldrich (St Louis, MO). GTPyS u ble nga Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO u sigurua nga Programi i Furnizimit të Barnave të Institutit Kombëtar për Abuzimin e Drogës (Rockville, MD). Lëngu scintillation Econo-1 është marrë nga Fisher Scientific (Norcross, GA). Lëngu scintillation Ecolite është marrë nga ICN (Costa Mesa, CA). Të gjitha kimikatet e tjera janë marrë nga Sigma Aldrich ose Fisher Scientific.

2.2. Mice

Minjtë bitransgjenikë meshkuj që rrjedhin nga NSE-tTA (linja A) × TetOp-ΔFosB (linja 11) janë gjeneruar siç përshkruhet në Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Minjtë bitransgjenikë u konceptuan dhe ngritën në doksiciklin (100 μg në ujë të pijshëm) për të shtypur shprehjen e transgjeneve. Në moshën 8 të moshës, doxycycline u eleminua nga uji për gjysmën e minjve për të lejuar shprehjen e transgjencës, ndërsa minjtë e mbetur u mbajtën në doksiciklin për të shtypur transgjenin. Trurit janë mbledhur 8 javë më vonë, koha në të cilën efektet transkripsionale të ΔFosB janë maksimale (McClung dhe Nestler, 2003). Një linjë e dytë transgenike e miut është përdorur në të cilën Δc-Jun, një antagonist negativ dominant i c-Jun, shprehet në D₁R / dynorphin dhe D₂R / enkephalin qelizat e striatum, hippocampus dhe korteks parietal (Peakman, et al., 2003). C-Jun dhe proteinat familjare të lidhura me Junin dimerizojnë me proteinat e familjes Fos dhe lidhin në vendin AP-1 të gjeneve të synuara për të rregulluar transkriptimin. Megjithatë, prerja e N-terminusit të c-Jun (Δc-Jun) e bën kompleksin transkriptivisht joaktive dhe të aftë për të penguar lidhjen e ADN-së të komplekseve aktive AP-1. Minjtë bitransgenic që rrjedhin nga NSE-tTA (linja A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (linja E) janë prodhuar siç përshkruhet në Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Minjtë bitransgjenikë u konceptuan dhe ngritën në doksiciklin (100 μg në ujë të pijshëm) për të shtypur shprehjen e transgjeneve. Pups u zvogëloheshin në javët e 3, të gjenotipizuara dhe u ndanë në grupe, me gjysma të mbajtura në ujë me doksiciklin dhe gjysma në ujë të rregullt për të shkaktuar shprehjen FLAG-Δc-Jun. Trurit janë mbledhur 6 javë më vonë, koha në të cilën janë matur nivelet maksimale të FLAG-Δc-Jun (Peakman, et al., 2003). Të gjitha procedurat e kafshëve janë kryer në përputhje me Udhëzuesin Kombëtar të Institutit të Shëndetit për Kujdesin dhe Përdorimin e Kafshëve Laboratore.

2.3. Përgatitja e membranës

Trurit u ruajtën në -80 ° C deri në ditën e analizës. Para analizës, secili truri u shkrirë, dhe NAc u zbulua në akull. Çdo mostër u homogjenizua në 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (tampon membranë) me goditje 20 nga një homogenizues qelqi në 4 ° C. Homogjenizati u centrifugua në 48,000 × g në 4 ° C për 10 min, resuspenduar në tampon membranë, centrifuguar përsëri në 48,000 × g në 4 ° C për 10 min dhe resuspenduar në 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (testi i analizës). Nivelet e proteinave u përcaktuan me metodën e Bradford (Bradford, 1976) duke përdorur albumin serum të gjedhit (BSA) si standard.

2.4. Agonist-Stimuluar [³⁵S] GTPγS Lidhja

Membranat ishin para-inkubuar për minuta 10 në 30 ° C me deaminazën adenosine (3 mU / ml) në tampon test. Membranat (5-10 μg proteina) u inkubuan pastaj për 2 hr në 30 ° C në tampon testi që përmban 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPγS, BPM 30 μM dhe deaminaza adenosine (3 mU / ml) me dhe pa përqendrime të përshtatshme të DAMGO ose WIN55,212-2. Lidhja jo specifike u mat me 20 μM GTPγS. Inkubacioni u përfundua me filtrim përmes filtrave të fibrave të qelqit GF / B, e ndjekur nga larja e 3 me 3 ml të ftohtë 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Radioaktiviteti i lidhur u përcaktua me spektrofotometrinë e lëngëzuar të shkrirjes pas ekstraktimit brenda natës të filtrave në lëngun scintillation Econo-1.

2.5. Analiza e ciklit të Adenylyl

Membranat (5-25 μg proteina) ishin para-inkubuar me adenozin deaminazën siç është përshkruar më sipër, pastaj inkubohen për 15 min në 30 ° C në prani ose mungesë të forskolinit 1μM, me ose pa DAMGO, U50,488H ose WIN55,212-2, 50 μM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 μCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, AMN ciklike 50 μM, 50 μM GTP, 0.2 mP papaverine, 5 mM fosfocreatinë, njësitë 20 / ml kreatine fosfokinazë dhe adenozin deaminazë (3 mU / ml) në një volum përfundimtar të 100 μl. Nën këto kushte, totali [α-³²P] cAMP u gjet në përgjithësi më pak se 1% e shumës totale të shtuar [α-³²P] ATP në çdo mostër. Reagimi u ndërpre duke vluar për 3 min dhe [³²P] AMP ciklike u izolua nga kolona e dyfishtë (Dowex dhe aluminit) e Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) është shtuar në çdo tub para kromatografisë kolone si një standard i brendshëm. Radioaktiviteti u përcaktua nga spektrofotometria e lëngëzuar e scintillimit (efikasiteti 45% për ³H) pasi 4.5 ml e eluatit u tretën në 14.5 ml të lëngjeve të scintillimit Ecolite.

2.6. Analiza e të dhënave

Nëse nuk tregohet ndryshe, të dhënat raportohen si vlera mesatare ± SE të eksperimenteve të veçanta 4-8, secila prej të cilave është kryer në tri kopje. Net-stimuluar [³⁵S] Lidhja GTPγS është llogaritur si lidhës i stimuluar agonist minus lidhja bazë. Niveli i aktivitetit adenilil ciklazit të stimuluar me forskolin përcaktohet si aktivitet i stimuluar nga forskolina - aktiviteti bazal (pmol / mg / min). Përqindja e ndalimit të aktivitetit adenilil ciklase të stimuluar me forskolin përcaktohet si (aktiviteti i stimuluar neto i forskolinit në mungesë të aktivitetit të stimuluar agonist - forskolin në prani të aktivitetit të stimuluar agonist / net forskolin në mungesë të agonistit) × 100. Të gjitha analizat e montimit dhe statistikave janë kryer duke përdorur Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Krerët e efektit të përqendrimit u analizuan me regresionin iterativ jo-linear për të marrë KE₅₀ dhe E_max vlerat. Rëndësia statistikore e të dhënave të efektit të përqendrimit u përcaktua me anë të analizës dyanëshe të variancës (ANOVA), duke përdorur dozën agoniste dhe induksionin e gjeneve (në ose jashtë) si faktorët kryesorë. Rëndësia statistikore e vlerave të kurbës-fit (E_max ose KE₅₀) u përcaktua nga testi t i studentit jo-çift i dyfishtë, duke përdorur korrigjimin e Welch-it ose transformimin e rrënjës katrore të të dhënave kur është e nevojshme për të korrigjuar për ndryshime të pabarabarta (zbuluar nga F-testi) në EC₅₀ vlerat.

3. rezultatet

3.1. Efekti i shprehjes ΔFosB në aktivizimin e proteinave G të ndërmjetësuar nga receptori i opiaks dhe kanabinoid

Për të përcaktuar nëse MOR- ose CB₁Aktivizimi i G-proteinave të ndërmjetësuar me R është ndryshuar nga shprehja transgene e induktueshme e ΔFosB në NAc, agonist-stimuluar [³⁵S] GTPγS u ekzaminua në membranat e izoluara të përgatitura nga ky rajon i minjve bitransgjenë që shprehin me kusht (ΔFosB në) ose nuk shprehin (ΔFosB off) transgjenin ΔFosB. Aneksafina MOR-selektive analoge DAMGO u përdor për të aktivizuar MOR dhe aminoalkilindoli kanabinoid WIN55,212-2 u përdor për aktivizimin e CB₁R. Këto ligande u treguan më parë si agonistë të plotë në MOR dhe CB₁R, përkatësisht (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Nuk ishte e mundur të ekzaminohej aktiviteti i G-proteinave të ndërmjetësuar nga KOR sepse sinjali është shumë i ulët në tru brejtës (Childers, et al., 1998). Rezultatet treguan stimulimin e varur nga përqendrimi i aktivitetit të proteinave G nga të dy DAMGO dhe WIN55,122-2 në NAc nga ΔFosB off dhe ΔFosB në minj (Figura 1). Për aktivitetin e stimuluar nga DAMGO (Figura 1A), ANOVA me dy drejtime të të dhënave të efektit të përqendrimit zbuloi efekte kryesore të rëndësishme të statusit ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) dhe përqendrimit të DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) pa bashkëveprim domethënës (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Analiza e regresionit jolinear të kurbave të efektit të përqendrimit zbuloi një DAMGO E dukshëm më të madh_max vlera në ΔFosB në minj (E_max = 73 ± 5.2% stimulim) në lidhje me ΔFosB jashtë minjve (E_max = 56 ± 4.1% stimulim; p <0.05 ndryshe nga ΔFosB tek minjtë nga testi t i Studentit). DAMGO EC₅₀ vlerat nuk ishin të ndryshme midis ΔFosB on dhe ΔFosB off minj (302 ± 72 nM kundrejt 212 ± 56 nM, respektivisht, p = 0.346).

Efekti i shprehjes ΔFosB në agonist-stimuluar [³⁵S] GTPγS lidhur në NAc. Membranat nga ΔFosB-ekspresion (ΔFosB on) ose kontrolli (ΔFosB off) minj u analizuan siç përshkruhet në Metodat duke përdorur përqëndrime të ndryshme ...

Në dallim nga rezultatet e marra me agonistin MOR DAMGO, asnjë ndryshim i varur nga statusi i varfërisë në G-protein nuk është vërejtur me agonistin kanabinoid WIN55,212-2 (Figura 1B) ANOVA dykahëshe e të dhënave të efektit të përqendrimit WIN55,212-2 zbuloi një efekt kryesor të rëndësishëm të përqendrimit WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), por jo të statusit ΔFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) dhe nuk kishte ndërveprim (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Në mënyrë të ngjashme, nuk kishte asnjë efekt të statusit ΔFosB në WIN55,212-2 E_max vlerat (103 ± 6% kundrejt stimulimit 108 ± 8% në ΔFosB në dhe jashtë minj, përkatësisht, p = 0.813 nga t-test i Studentit) ose EC₅₀ (103 ± 20 nM kundrejt 170 ± 23 nM në ΔFosB në dhe jashtë minj, respektivisht, p = 0.123).

Bazuar në formën e kthesave dhe faktin që studimet tona të mëparshme kanë treguar kthesa dyfazike të efektit të koncentrimit WIN55,212-2 në tru (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), kurbat WIN55,212-2 u analizuan gjithashtu duke përdorur një model me dy faqe. Analiza e të dhënave mesatare tregoi një përmirësim të lehtë në mirësinë e përshtatjes duke përdorur modelin me dy faqe (R² = 0.933 dhe 0.914, shuma e shesheve = 3644 dhe 5463 në ΔFosB në dhe jashtë minj, respektivisht) në krahasim me modelin me një vend (R² = 0.891 dhe 0.879, shuma e katrorëve = 6561 dhe 6628 në ΔFosB në dhe jashtë minj, respektivisht). Megjithatë, nuk u gjetën dallime të mëdha në mes të ΔFosB në dhe jashtë minjve ose në E_max ose KE₅₀ vlerat e vendeve të fuqisë së lartë ose të ulët (Tabela plotësuese 1), edhe pse kishte një tendencë drejt një KE më të ulët₅₀ vlera në vendin e lartë të fuqisë në minj me ΔFosB on (EC₅₀i lartë = 28.0 ± 10.6 nM) krahasuar me ato me ΔFosB off (EC₅₀i lartë = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Për më tepër, nuk kishte asnjë efekt të statusit ΔFosB në basal [³⁵S] GTPγS lidhur në membranat NAc (253 ± 14 kundrejt 226 ± 14 fmol / mg në ΔFosB në dhe jashtë minj, respektivisht, p = 0.188). Këto të dhëna tregojnë se shprehja transgene e induktueshme e ΔFosB në NAc të minjve ka rritur MOR-mediated G-proteination aktivizimit pa ndikuar ndjeshëm CB₁Aktiviteti R-ndërmjetës ose basal G-protein.

3.2. Efekti i ΔFosB në inhibimin e opiumit dhe kanabinoidit të ndërmjetësuar nga adenilil ciklaza

Për të vlerësuar efektin e shprehjes transgene të induktueshme të ΔFosB në modulimin e aktivitetit efektor në drejtim të rrymës nga MOR dhe CB₁R, ndalimi i aktivitetit adenilil ciklazë të stimuluar me forskolin μMXX μM u ekzaminua në membranat NAc. Përveç MOR dhe CB₁Ndalimi i aktivitetit të adenilil ciklazës ndërmjet ndërmjetësimit R, efektet e aktivitetit KOR u ekzaminuan gjithashtu duke përdorur agonistin e plotë KOR selektiv U50,488 (Zhu, et al., 1997), sepse rezultatet e mëparshme treguan se mRNA-ja e dinorfinës ishte një objektiv i ΔFosB në modelin bitransgenic (Zachariou, et al., 2006). Rezultatet treguan se DAMGO, U50,488 dhe WIN55,212-2 secili prodhoi ndalimin e varur të përqendrimit të aktivitetit adenylyl cyclase në të dy ΔFosB off dhe ΔFosB në minj (Figura 2). ANOVA me dy mënyra të të dhënave të efektit përqëndrues të DAMGO (Figura 2A) zbuloi efekte kryesore domethënëse të statusit ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) dhe përqendrimit të DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), por nuk ka ndërveprim domethënës (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Analiza e regresionit jolinear të lakoreve të efektit të përqendrimit të DAMGO zbuloi një DAMGO EC dukshëm më të ulët₅₀ vlera në ΔFosB tek minjtë (101 ± 11 nM) krahasuar me ΔFosB jashtë minjve (510 ± 182 nM, p <0.05 nga t-testi i studentit). Sidoqoftë, nuk kishte ndonjë ndryshim të rëndësishëm në DAMGO E_max vlerat (20.9 ± 1.26% kundrejt 19.8 ± 1.27% frenimi në ΔFosB në dhe jashtë minj, respektivisht, p = 0.534).

Efekti i shprehjes ΔFosB në frenimin e aktivitetit adenylyl cyclase në NAc. Membranat nga ΔFosB-ekspresion (ΔFosB on) ose kontroll (ΔFosB off) minj u analizuan siç përshkruhet në Metodat në prani të 1 μM ...

Ndalimi i adenilil ciklase i ndërmjetësuar nga KOR gjithashtu ndryshonte si një funksion i shprehjes transgene të indoktueshme të ΔFosB (Figura 2B) ANOVA dykahëshe e të dhënave të efektit të përqendrimit U50,488 tregoi efekte kryesore të rëndësishme të statusit ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) dhe përqendrimin U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , pa ndonjë ndërveprim domethënës (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Analiza e regresionit jolinear të kthesave të efektit të përqendrimit zbuloi një U50,488 E më të madhe_max vlera në ΔFosB tek minjtë (18.3 ± 1.14% frenim) krahasuar me ΔFosB jashtë minjve (12.5 ± 2.03% frenim; p <0.05 i ndryshëm nga ΔFosB në nga t-test i Studentit), me asnjë ndryshim të rëndësishëm në U50,488 EC₅₀ (310 ± 172 nM kundrejt 225 ± 48 nM në ΔFosB në dhe jashtë minj, respektivisht, p = 0.324).

Në kontrast me efektet e vërejtura me MOR dhe KOR, nuk kishte asnjë efekt të rëndësishëm të shprehjes transfuzive ΔFosB të induktivës në ndalimin e adenilil ciklazës nga agonisti kaninabinoid WIN55212-2 (Figura 2C) ANOVA dykahëshe e të dhënave të efektit të përqendrimit WIN55,212-2 tregoi një efekt të rëndësishëm të përqendrimit të ilaçit (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), por jo të statusit ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) dhe as nuk kishte një ndërveprim të rëndësishëm (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Për më tepër, nuk kishte asnjë efekt të statusit ΔFosB në aktivitetin bazenal ose të stimuluar nga forskolin adenilil ciklaza në mungesë të ndonjë agonisti. Aktiviteti bazik i adenilil ciklasës ishte 491 ± 35 pmol / mg / min në ΔFosB tek minjtë krahasuar me 546 44 në ΔFosB jashtë minjve (p = 0.346 nga t-testi i Studentit). Po kështu, aktiviteti i adenilil ciklasës në prani të 1 μM forskolin ishte 2244 ± 163 pmol / mg / min në ΔFosB tek minjtë përkundrejt 2372 ± 138 pmol / mg / min në minj ΔFosB (p = 0.555).

3.3. Efekti i ΔcJun në opioid dhe kanabinoid receptor-ndërmjetësuar ndalimin e adenylyl cyclase

Për shkak se shprehja transgjenike e transfuzionit të shtytjes transfuzive të transfuzionit fatal inhibitor të ΔFosB nga MOR dhe KOR tek adenilil ciklaza në NAc, ishte me interes të përcaktohej nëse një inhibitor dominant negativ i transkriptimit të ndërmjetësuar nga A-FosB do të modulonte sinjalizimin e receptorit opioid në një mënyrë të kundërt. Për të trajtuar këtë pyetje, ndalimi i aktivitetit adenylyl cyclase stimuluar forskolin nga DAMGO dhe U50,488 u ekzaminua në membranat e përgatitura nga NAc e minj bitransgenic duke shprehur shprehimisht ΔcJun. Rezultatet nuk treguan efekt të rëndësishëm të shprehjes ΔcJun në ndalimin e aktivitetit adenylyl cyclase nga MOR ose KOR (Figura 3) ANOVA dykahëshe e lakoreve të efektit të përqendrimit DAMGO tregoi një efekt kryesor të rëndësishëm të përqendrimit të DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), por jo të statusit ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) dhe nuk kishte asnjë ndërveprim domethënës (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Në mënyrë të ngjashme, nuk kishte ndonjë ndryshim të rëndësishëm në E_max ose KE₅₀ vlerat mes minjve me ΔcJun on (E_max = 23.6 ± 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) ose ΔcJun off (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Rezultate të ngjashme u panë me U50,488, të tilla që ANOVA dykahëshe e lakoreve të efektit të përqendrimit tregoi një efekt të rëndësishëm të përqendrimit (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), por jo të statusit ΔcJun (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) dhe nuk kishte asnjë ndërveprim domethënës (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Po kështu, nuk kishte dallime të konsiderueshme në E_max ose KE₅₀ vlerat mes minjve me ΔcJun on (E_max = 14.8 ± 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) ose off (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Efekti i shprehjes ΔcJun në ndalimin e aktivitetit adenylyl cyclase në NAc. Membranat nga minjtë që shprehin ΔcJun (ΔcJun on) ose kontrolli (ΔcJun off) u inkubuan në prani të DAMGO (A), U50,488H (B) ose WIN55,212-2 ...

Shprehja ΔcJun gjithashtu nuk ndikoi në mënyrë të konsiderueshme në frenimin e adenilil ciklasës në NAc nga agonisti kanabinoid. ANOVA dykahëshe e lakoreve të efektit të përqendrimit WIN55,212-2 tregoi një efekt kryesor të rëndësishëm të përqendrimit të WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), por jo të gjenotipit (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) dhe nuk kishte asnjë ndërveprim domethënës (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Po kështu, nuk kishte ndryshime të konsiderueshme në WIN55,212-2 E_max vlerat (13.0 ± 2.3% dhe 13.6 ± 0.9% frenimi në ΔcJun kundrejt minjve, respektivisht, p = 0.821) dhe ose EC₅₀ (208 ± 120 nM dhe 417 ± 130 nM në ΔcJun në krahasim me minjtë, përkatësisht, p = 0.270). Kështu, edhe pse kishte një tendencë të vogël drejt potencës së zvogëluar të WIN55,212-2 në minj që shprehnin ΔcJun, transgeni nuk ndryshoi ndjeshëm inhibimin e kanabinoidit të adenilil ciklazës. Për më tepër, nuk kishte asnjë efekt të statusit ΔcJun në veprimtarinë adenilil ciklase të stimuluar nga basali ose forskolin. Aktiviteti i basenit adenilil ciklase ishte 1095 ± 71 pmol / mg / min dhe 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) në minj me ΔcJun në ose jashtë, respektivisht. Aktiviteti adenilil ciklase i stimuluar nga forskolin 1 μM ishte 4185 ± 293 pmol / mg / min kundrejt 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) në minj me ΔcJun në ose off, respektivisht.

3.4. diskutim

Rezultatet e këtij studimi zbuluan aktivizimin e zgjerimit të G-proteinave të ndërmjetësuar nga MOR dhe ndalimin e adenilil ciklazës në NAc të minjve me shprehjen transgene të induktuar të ΔFosB në dynorfin / D₁R që përmbajnë neuronet. Ndalimi i aktivitetit adenylyl cyclase ndërmjetësuara nga KOR është rritur gjithashtu në NAc të minjve ekspresive të ΔFosB, duke sugjeruar që ΔFosB rregullon sistemin opioid endogjen në NAc. DAMGO E_max vlera ishte më e madhe për MOR-stimulated [³⁵S] GTPγS detyruese, dhe KE e saj₅₀ vlera ishte më e ulët për frenimin e adenylyl cyclase, në minjtë e shprehur mbi ΔFosB në krahasim me minjtë e kontrollit. Këto rezultate sugjerojnë mundësinë e rezervës së receptorit për modulimin e efektorit, por jo aktivizimin e G-proteinave nën kushtet e analizës së ekzaminuar. Konstatimi se inhibimi maksimal i adenilil ciklazës nga agonisti KOR u ndikua nga shprehja ΔFosB sugjeron rezervë receptoresh të ulët për përgjigjen e ndërmjetësuar nga KOR, në përputhje me nivelet e ulëta të vendeve të lidhura në KOR në tru të miut (Unterwald, et al., 1991). Në të kundërt, CB₁Aktiviteti i proteinës G të ndërmjetësuar nga R dhe ndalimi i adenilil ciklazës nuk u ndikuar nga shprehja ΔFosB, duke sugjeruar se sistemet opioid dhe kanabinoid ndryshojnë në përgjigjen e tyre ndaj ΔFosB në këto neurone NAc.

Efekti i ΔFosB në sinjalizimin e ndërmjetësuar nga receptori opioid është në përputhje me raportin tonë të mëparshëm që shprehja ΔFosB në striatumin ndryshoi efektet akute dhe kronike të morfines (Zachariou, et al., 2006). Një zbulim i atij studimi ishte se minjtë me shprehje transgenike të ΔFosB në dynorfin / D₁Neuronet striatale ishin më të ndjeshme ndaj morfinës në kushte të rregullta sesa në kontrollet. Për më tepër, ky efekt u imitua nga shprehja e ndërmjetësuara viralisht e ΔFosB nga injeksionet specifike për vendin në NAc. Këto vëzhgime janë në përputhje me rezultatet e tanishme që tregojnë sinjalizimin e zgjeruar të MOR në NAc.

Ne kemi identifikuar më parë encoding gjen dinamorfin si një objektiv i ΔFosB, dhe propozoi që dinamorfi i reduktuar do të ishte në përputhje me vetitë e përmirësuara të morfines në minjtë bitransgjenike ΔFosB (Zachariou, et al., 2006). Rezultatet e pranishme tregojnë se frenimi i ndërmjetësuar nga KOR-i i adenilil ciklazës në NAc është rritur në minjtë shprehës ΔFosB, të cilat mund të pasqyrojnë një rritje kompensuese në ndjeshmërinë e KOR pas dinamorfinit të reduktuar. Studimet e mëparshme kanë treguar se KOR u rregullua në rajone të caktuara të trurit të minjve nokaut prodynorphin, duke përfshirë NAc (Clarke, et al., 2003).

Në dallim nga ΔFosB, shprehja transgjenike e induktueshme e ΔcJun, mutanti negativ i dominuar negativ i partnerit cJun që lidh partnerin ΔFosB, nuk e ndryshoi inhibimin e adenilil ciklase nga MOR ose agonistë KOR. Këto rezultate sugjerojnë se nivelet bazë të shprehjes ΔFosB, të cilat janë relativisht të ulëta, nuk luajnë një rol të rëndësishëm në ruajtjen e sinjalizimit të receptorëve opioid në këtë nivel transduksioni të sinjaleve në NAc. Fakti që efekti i shpërblimit të morfinëve u reduktua me shprehjen ΔcJun në studimin tonë të mëparshëm (Zachariou, et al., 2006) sugjeron ose se induksioni morfine i ΔFosB gjatë procedurës së kondicionimit është i rëndësishëm në rregullimin e përgjigjeve të sjelljes ndaj drogës ose që efektet transkripsionale të ΔFosB përveç atyre që ndikojnë në sinjalizimin proksimal nga receptorët opioid mund të ndikojnë në shpërblimin opioid. Në çdo rast, rezultatet e këtij studimi tregojnë qartë se, kur shprehja ΔFosB është ngritur mbi nivelet bazë në dynorphin striatal / D₁R-shprehur neuronet, ka një rritje të fuqishme në bashkimin e MOR dhe KOR për frenimin e adenylyl cyclase në NAc.

Mekanizmat me të cilat MOR-i dhe sinjalizimi i ndërmjetësuar nga KOR janë rritur nga ekspresioni i madh i ΔFosB janë të paqarta, por ne kemi treguar më parë se nivelet MOR, të vlerësuara nga [³H] nalokson, nuk janë të ndryshme në NAc të ΔFosB në krahasim me minjtë (Zachariou, et al., 2006). I njëjti studim gjeti se Gα_iNivelet e proteinave 1 dhe 2 nuk u prekën në këtë rajon nga shprehja ΔFosB. Megjithatë, analizat e mëparshme të grupeve të shprehjes së gjeneve treguan se Gα_o mRNA u rregullua në NAc të ΔFosB në minj (McClung dhe Nestler, 2003). Do të jetë me interes për studimet e ardhshme që të shqyrtojnë në mënyrë gjithëpërfshirëse efektin e shprehjes transgenike ΔFosB në shprehjen e nën-njësive të proteinave G në nivelin e proteinave, si dhe në shprehjen e proteinave shumë modulatore G-proteinike.

Është interesante që shprehja ΔFosB nuk ka rritur CB₁Sinjalizimi i ndërmjetësuar nga R në NAc. Është e mundur që ndryshimet në CB₁Sinjalizimi R ndodhë në një popullsi diskrete të neuroneve që është errësuar në të gjithë përgatitjen e NAc. Për shembull, administrimi i Δ⁹- THC induktoi në mënyrë të konsiderueshme ΔFosB në bërthamë, por jo në guaskë, të NAc (Perrotti, et al., 2008). unëndeed, është treguar se sfida me Δ⁹-THC pas administrimit të përsëritur të Δ⁹-THC rritur lirimin dopamine në thelbin NAc, por ulur lirimin në shell (Cadoni, et al., 2008). Është gjithashtu e rëndësishme të theksohet se linja 11A e minjve bitransgenic shpreh ΔFosB vetëm në dynorphin / D₁R neuronet pozitive mesatare të striatumit, por CB₁R janë shprehur në dy dynorfin / D₁R dhe enkefalin / D₂Neuronet pozitive striatale R (Hohmann dhe Herkenham, 2000), si dhe në terminalet e aferentëve kortikal (Robbe, et al., 2001). Shprehja e rregullatorit dominant negativ të transkriptimit ΔFosB-mediated, ΔcJun, gjithashtu nuk kishte efekt të rëndësishëm në sinjalizimin e receptorit kanabinoid, edhe pse ΔcJun shprehet shprehimisht në të dy D₁ dhe D₂- që përmbajnë popullatat e neuroneve të mesme të mprehtë në këto minj (Peakman, et al., 2003). Megjithatë, është e mundur që shprehja bas ΔFosB është mjaft e ulët që ΔcJun nuk do të ndikonte në sinjalizimin e receptorëve, siç sugjerohet nga rezultatet me MOR dhe KOR. Është gjithashtu e mundur që CB₁Sinjalizimi R është përmirësuar modestisht nga shprehja bazë ΔFosB, kështu që rritja e mëtejshme e shprehjes ΔFosB ose bllokimi i veprimeve të tij me ΔcJun ka pasur vetëm efekte të lehta që nuk kanë arritur nivelin e rëndësisë statistikore. Mbështetja indirekte për këtë interpretim mund të shihet duke krahasuar WIN55,212-2 EC₅₀ vlera midis minjve që shprehin ΔcJun kundrejt ΔFosB. Raporti i WIN55,212-2 EC₅₀ vlera për frenimin e adenylyl cyclase në minj me shprehjen e shkaktuar të ΔcJun në KE e saj₅₀ vlera për aktivizimin e proteinave G në minj me shprehjen e induktuar të ΔFosB ishte 4.0, ndërsa raporti i njëjtë në minj pa induksionin e as transgjenit ishte 1.2.

Nga ana tjetër, kanabinoidët mund të nxisin shprehjen ΔFosB pa ndonjë efekt të drejtpërdrejtë në CB₁Sinjalizimi R. Në këtë skenar, kanabinoidët mund të modifikojnë reagimin ndaj efekteve psikoaktive të barnave të tjera nëpërmjet rregullimit transkripsion të ndërmjetësuar nga FosB. unën fakt, administrimi i Δ⁹-THC prodhon ndër-senzibilizim ndaj opioideve dhe amfetaminës (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), në përputhje me këtë hipotezë. Për më tepër, administrimi i përsëritur i agonistit të kanabinoidit CP55,940 është raportuar të rrisë aktivizimin e proteinave G të ndërmjetësuar në MOR në NAc, ngjashëm me minjtë që shprehin ΔFosB në studimin aktual (Vigano, et al., 2005). Efekti i shprehjes ΔFosB në Δ⁹- Sjelljet e ndërmjetësuar nga THC nuk janë vlerësuar, por rezultatet e tanishme nuk përjashtojnë një ndërveprim. Rezultatet e këtij dhe studimi ynë i mëparshëm (Zachariou, et al., 2006) tregojnë alterations induced ΔFosB në MOR dhe KOR / dynorphin në striatum. Efektet shpërblyese të Δ⁹-THC, të matura sipas preferencës së vendit, shfuqizohen në minj MOR null, ndërsa fshirja e KOR atenuohet Δ⁹-THC ka vendosur urrejtje dhe ka zbuluar Δ⁹-There preferencat e THC (Gbanland, et al., 2002). Në mënyrë të ngjashme, aversioni i kushtëzuar i vendit për Δ⁹-THC mungon në pro-dinorphin nokaut në krahasim me minj egra-type (Zimmer, et al., 2001). Këto të dhëna sugjerojnë se Δ⁹-THC mund të jetë më e dobishme pas induksionit ΔFosB dhe induksionit konsekuent të sinjalizimit MOR me reduktime në shprehjen e dynorphin.

Në përmbledhjey, rezultatet e këtij studimi treguan se shprehja e ΔFosB në D₁R / neuronet pozitive të striatumit dinorfinës kanë rritur sinjalizimin MOR- dhe KOR-mediat në nivelin e inhibimit të ndërmjetësimit të aktivitetit adenilil ciklase në NAc. Ky konstatim është në përputhje me studimet që kanë treguar një rol për sistemin opioid endogjen në shpërblim (Trigo, et al., 2010), dhe ofrojnë një mekanizëm të mundshëm për efektet e ndërmjetësuara nga AFA-në në shpërblim. Në të kundërt, CB₁Sinjalizimi i ndërmjetësuar nga R në NAc nuk ishte prekur ndjeshëm nga shprehja striatale ΔFosB në kushtet e ekzaminuara, edhe pse studime të mëtejshme janë të garantuara për të përcaktuar efektin e induksionit ΔFosB në sistemin endokanabinoid.

Pikat kryesore të hulumtimit

Sinjalizimi MOR është rritur në nucleus accumbens të minjve që shprehin ΔFosB
KOR frenimi i adenylyl cyclase është rritur gjithashtu në minj duke shprehur ΔFosB
Shprehja e ΔFosB nuk ndryshon CB₁Sinjalizimi R në bërthamën accumbens

Materiale plotësuese

01

Kliko këtu për të parë.^{(45K, pdf)}

Mirënjohje

Autorët e falënderojnë Hengjun Ai, Jordan Cox dhe Aaron Tomarchio për asistencë teknike me [³⁵S] GTPγS bindëse. Ky studim u mbështet nga USPHS Grantet DA014277 (LJS), DA10770 (DES) dhe P01 DA08227 (EJN).

Shënimet

Përgjegjësia e botuesit: Ky është një skedar PDF i një dorëshkrimi të papenguar që është pranuar për publikim. Si një shërbim për klientët tanë ne po japim këtë version të hershëm të dorëshkrimit. Dorëshkrimi do t'i nënshtrohet kopjimit, botimit dhe rishikimit të provës që rezulton para se të publikohet në formën përfundimtare të tij. Ju lutem vini re se gjatë procesit të prodhimit mund të zbulohen gabime të cilat mund të ndikojnë në përmbajtjen dhe të gjitha mohimet ligjore që zbatohen në revistë kanë të bëjnë.

Referencat

Bozarth MA, RA urti. Fushat anatomike të dallueshme të receptorëve të opiumit ndërmjetësojnë shpërblimin dhe varësinë fizike. Shkenca. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Një metodë e shpejtë dhe e ndjeshme për sasinë e sasive të mikrogramit të proteinave duke shfrytëzuar parimin e lidhjes së ngjyrave të proteinave. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Delta kronike⁹-tetrahydrocannabinol prodhon një humbje të varur nga koha e proteinave G të aktivizuara nga receptorët kanabinoid në tru. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Efektiviteti i agonistit të receptorit të kanabinoidit për stimulimin e [³⁵S] GTPγS që lidhet me membranat cerebellare të miut korrelon me uljen e agonistëve në prirjen e PKB-së. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Sensibilizimi i sjelljes pas ekspozimit të përsëritur ndaj Delta 9-tetrahydrocannabinol dhe ndër-sensibilizimi me morfinë. Psikopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Sensibilizimi i sjelljes ndaj Delta 9-tetrahidrokannabinolit dhe ndër-sensibilizimi me morfinë: ndryshime diferenciale në bërthamën e akumulimit dhe transmetimit të dopamines bazë. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Kafshët transgjenike me shprehje indicibile të gjenit në tru në tru. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Transmetuesit e dytë të receptorëve opioidë. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid dhe receptori i kanabinoidit të inhibimit të adenilil ciklazës në tru. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Fëmijët SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Stimulimi Kappa opioid receptor i [³⁵S] GTPγS detyruese në trurin e derrave të derrave: Mungesa e provave për kappa₂-aktivizimi selektiv i G-proteinave. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kuzhina I. Regjistrimi selektiv i rajonit të receptorëve mikro, delta dhe kappa-opioid, por jo receptorët opioid receptorë si 1 në trurin e minjve të enkefalinit dhe dinorfinit. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Vetë DW. Zmadhimi i tepërt i tipit qelizor striatoz të DeltaFosB rrit nxitjen për kokainë. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Sistemi i sinjalizimit të Endocannabinoid dhe shpërblimi i trurit: Theksi në dopamin. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Gbanland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Efektet motivuese të kanabinoidëve janë të ndërmjetësuar nga receptorët e opiodit dhe kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rajs KC. Karakterizimi dhe lokalizimi i receptorëve të kanabinoidëve në tru të miut: një studim sasior autoradiografik in vitro. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Lokalizimi i receptorit CB (1) të kanabinoidit mRNA në nënpopullimet neurone të striatumit të miellit: një studim me dy etiketa në hibridizimin në vend. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Bashkimi Ndërkombëtar i Farmakologjisë. XXVII. Klasifikimi i receptorëve të kanabinoidëve. Shqyrtimi farmakologjik. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Bllokadën e efekteve të marihuanës së tymosur nga antagonisti i receptorit kanabinoid selektiv CB1 SR141716. Arch. Gjenerali psikiatrik. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Vetë DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Nestler EJ. Shprehja e faktorit të transkriptimit deltaFosB në tru kontrollon ndjeshmërinë ndaj kokainës. Natyra. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurokirkuitry e varësisë. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Trajtimi kronik me Delta (9) -tetrahydrocannabinol rrit reagimin lokomotor ndaj amfetaminës dhe heroinës. Implikimet për dobësi ndaj varësisë nga droga. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Përfshirja e sistemit endokanabinoid në varësinë nga droga. Trendet Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-Opioid receptor mRNA shprehje në miš CNS: krahasim me mu-receptor detyrues. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kuzhina I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Humbja e analgjezisë së detyruar nga morfina, efekti i shpërblimit dhe simptomat e tërheqjes në minjtë që nuk kanë genin e receptorit μ-opioid. Natyra. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Rregullimi i shprehjes së gjeneve dhe shpërblimi i kokainës nga CREB dhe DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: një kalim molekular për përshtatjen afatgjatë në tru. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1 receptorët e dopaminës modulojnë induksionin deltaFosB në striatumin e mibrës pas administrimit intermittent të morfinës. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Shqyrtim. Mekanizmat transkripcionalë të varësisë: roli i DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: një ndërmjetës molekular i plasticitetit afatgjatë nervor dhe sjelljes. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, MB Kelz, Iadarola M, Nestler EJ. Studime farmakologjike për rregullimin e induksionit antigjen kronik të FOS nga kokaina në striatum dhe nucleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, shprehja specifike e rajonit të trurit të një mutanti dominant negativ të c-Jun në minjtë transgenic zvogëlon ndjeshmërinë ndaj kokainës. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Vetë DW, Nestler EJ. Modele të dallueshme të induksionit DeltaFosB në tru nga drogat e abuzimit. Synapse. 2008;62: 358-369. [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokalizimi dhe mekanizmat e veprimit të receptorëve kanabinoidë në synapset glutamatergic të nucleus accumbens miut. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Analizë adenilate ciklase. Adv. Nucleotide ciklike Rez. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R., Liu Q, Childers SR. Mu opioid receptor-stimuluar [³⁵S] GTPγS lidhur në thalamus miu dhe linjat e qelizave të kultivuara: mekanizmat e sinjalit të transduksionit nën efektivitetin agonist. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Sistemi opioid endogjen: një substrat i zakonshëm në varësinë e drogës. Alkooli i drogës varet. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Lokalizimi neuro-anatomik i receptorëve opioid të κ1 dhe κ2 në tru të miellit të miellit dhe guinea. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Bllokadat e receptorëve të opiumit të nucleus accumbens zbehin shpërblimin intravenoz të heroinës në miat. Psikopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Mekanizmat molekulare të përfshira në ndërveprimin asimetrik midis sistemeve të kanabinoideve dhe opioideve. Psikopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Një rol esencial për DeltaFosB në bërthamë accumbens në veprim morfinë. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Dy vende të trurit për shpërblimin e kanabinoidëve. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktivizimi i receptorit opioid të klonuar të njeriut të kappa nga agonistët rrit [35S] GTPγS që lidhet me membranat: përcaktimi i potencialeve dhe efikasitetit të ligandave. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valentin E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Mungesa e delta -9-tetrahydrocannabinol efektet dysphoric në minj me dinorfin të mangët. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Rritja e mortalitetit, hypoaktivitetit dhe hypoalgesisë në receptorët kanabinoid CB1 minjtë e zhdukur. Proc. Natl. Acad. Sci. SHBA 1999;96: 5780-5785. [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed]