Ј Неуроцхем. 2014 Јан;128(1):173-85. дои: 10.1111/јнц.12381. Епуб 2013 21. август.
Лиу КР1, Рубио ФЈ, Боссерт ЈМ, Марцхант Њ, Фанус С, Хоу Кс, Схахам И, Хопе БТ.
Апстрактан
Метамфетамин и други лекови активирају мали део свих неурона у мозгу. Претходно смо развили методу засновану на сортирању ћелија активираном флуоресценцијом (ФАЦС) за карактеризацију молекуларних промена изазваних селективно у активираним неуронима који изражавају маркер нервне активности Фос. Међутим, овај метод захтева прикупљање узорака од многих пацова. Сада описујемо модификовану методу засновану на ФАЦС-у за карактеризацију молекуларних промена у дорзалним стријаталним неуронима који експримирају Фос од једног пацова користећи стратегију мултиплексног пре-амплификације.
Фос и НеуН (неуронски маркер) имунохистохемије показују да је 5-6% неурона дорзалног стриатума било активирано 90 минута након акутних ињекција метамфетамина (5 мг/кг, ип), док је мање од 0.5% неурона активирано ињекцијама физиолошког раствора.
Користили смо ФАЦС да раздвојимо НеуН-обележене неуроне на Фос-позитивне и Фос-негативне неуроне и проценили експресију мРНА користећи РТ-кПЦР од само пет Фос-позитивних неурона. Метамфетамин је изазвао 3-20 пута повећање непосредних раних гена арц, хомер-2, ц-фос, фосБ и његових изоформа (ΔфосБ и нова изоформа ΔфосБ-2) у Фос-позитивним, али не и Фос-негативним неуронима. Непосредна рана индукција мРНК гена била је 10 пута мања или је изостала када је процењена у несортираним узорцима из појединачних хомогената дорзалног стријатума. Наш модификовани метод чини изводљивим проучавање јединствених молекуларних промена у неуронима активираним лековима или знаковима повезаним са дрогом у сложеним моделима зависности.
Метамфетамин и други лекови активирају мали део свих неурона у мозгу. Овде извештавамо о побољшаној методи за карактеризацију молекуларних промена изазваних селективно у активираним неуронима који изражавају маркер неуралне активности Фос. Користили смо ФАЦС заједно са циљаном ПЦР пре-амплификацијом да проценимо акутну експресију гена изазвану метамфетамином из само 5 неурона који експримирају Фос из једног дорзалног стриатума пацова. Метамфетамин је изазвао 3-20 пута повећање непосредних раних гена (ИЕГ) у Фос-позитивним, али не и Фос-негативним неуронима. Циљана ПЦР пре-амплификација чини изводљивим проучавање јединствених молекуларних промена у неуронима активираним лековима или знаковима повезаним са лековима у сложеним моделима зависности.
Објављено 2013. Овај чланак је дело Владе САД и у јавном је власништву у САД.
;