Li-receptor tsa Dopamine D2 ka ho lemalla ho lemalla ho lemala le ho qobella ho ja likokoanyana tse ngata (2010)

Tlhaloso: Phuputso ena e bonts'a hore ha phoofolo e fuoa phihlello e se nang moeli, matlafatso a matla a tlhaho (lijo tse matlafatsang haholo) a ka baka ho theoha ha li-receptor tsa D2. Ho fokotseha hona ho bonoe hoo e ka bang likhoto tsohle, 'me ho etsahetse ka potlako. Ha lijo tse "hlabosang haholo" li tlosoa, likhoto li ile tsa hana ho ja chow e tloaelehileng. Likhoto li ile tsa tsoela pele ho itlopa joala (ha li khona) leha li ne li kopanya motlakase le phepo e "monate haholo".

• Thuto e feletseng

Nat Neurosci. 2010 Mots'eanong; 13(5): 635-641. E phatlalalitsoe marang-rang 2010 March 28. doi:  10.1038 / nn.2519

inahaneloang

Re fumane hore nts'etsopele ea botenya e kopantsoe le ho hlaha ha khaello e ntseng e mpefala e ntseng e tsoela pele ea likarabo tsa moputso oa neural. Liphetoho tse tšoanang ho moputso homeostasis e susumetsoang ke cocaine kapa heroin li nkuoa e le tsa bohlokoa ho tliseng phetoho ho tloha ho tloaelo ho ea lithethefatsong tse tlamang. Ka hona, re hlokometse mokhoa o phehellang o kang oa ho fepa ka mafu a mangata empa eseng litheko, tse lekantsoeng joalo ka tšebeliso ea lijo tse matlafatsang tse sitoang ho sitisoa ke ts'usumetso e hlohlelletsang. Li-receptors tsa Striatal dopamine D2 (D2Rs) li ile tsa theoloa ka tlase ho likhoto tse feteletseng, joalo ka ha ho tlalehiloe ho batho ba lemaletse lithethefatsi. Ho feta moo, ho cha ha li-lentivirus tse kopaneng le lenane la li-D2R ho potlakisa ho nts'etsopele ea bofokoli ba meputso e tlisoang ke bokhoba le ho qaleha ha lijo tse qobelloang tse ts'oanang le litheko tse nang le phihlello ea lijo tsa mafura a phahameng. Lintlha tsena li bonts'a hore ts'ebeliso e fetelletseng ea lijo tse fumanehang habonolo e baka likarabo tse joalo tsa "neuroadaptive" tse tsamaellanang le liteishene tsa meputso ea kelello 'me e khanna nts'etsopele ea lijo tse qobelloang. Mehato e tloaelehileng ea hedonic ka hona e ka baka botenya le bokhoba ba lithethefatsi.

Selelekela

Ho fepa ho susumetsoa ke monyaka le moputso, 'me ho fumana moputso oa lijo ho ka susumetsa ts'ebeliso ea matla1, 2. Leha ho le joalo, mekhoa ea hedonic e tlatsetsang botenya e ntse e sa utloisisoe hantle. Ho batho ba hyperphagic ba nang le khaello ea leptin ea congenital, ts'ebetso ea mokokotlo le ventral striatum, e leng likarolo tsa mantlha tsa lisekete tsa moputso oa boko li eketseha haholo ka lebaka la litšoantšo tsa lijo3, 'me kalafo ea phetisetso ea leptin e fokotsa ts'ebetso ea ho tsoala le ho itlaleha ha lijo3 . Sena se fana ka maikutlo a hore striatum e bohlokoa linthong tsa hedonic tsa boitšoaro ba ho fepa. Ho bonts'itsoe haufinyane hore ts'ebetsong ea striatum ho arabela lijo tse hlabosang haholo e na le bothata ho batho ba batenya ho feta ha e bapisoa le lits'oants'o tse matla4. Ho feta moo, boikaketsi ba dorsal striatum le boima ba 'mele ba nako e telele bo tsebahala haholo ho batho ba nang le boemo ba TaqIA ba lefapha la liphatsa tsa lefutso la DRD2-ANKK1, le lebisang ho fokotseheng ha polelo ea D2R mme e bonts'itsoe ho beha batho pele ho mathata a ts'epahalo ea lithethefatsi4, 5 Litemoso tsena le tse ling tse tšoanang le tsona li lebisitse ho tlhahiso ea hore likhaello ts'ebetsong ea meputso e kanna ea ba karolo ea bohlokoa ea kotsi bakeng sa nts'etsopele ea botenya, le hore batho ba nonneng haholo ba ka ja lijo tse hlabosehang ho lefella moputso oa hyposensitivity6. Haholo-holo, ha ho hlake hore na khaello ea ts'ebetso ea meputso e sebetsa ka nako e telele ebile e etella pele botenya, kapa hore na tšebeliso e fetelletseng ea lijo tse hlabosang e ka baka moputso oa ho se sebetse 'me ka tsela eo e tlatsetsa botebong bo bakoang ke ho ja.

Tšobotsi e khethollang ea batho ba nonneng haholo le ba batenya haholo ke hore ba ntse ba tsoela pele ho ja ho feta tekano le litlamorao tse mpe tse tsebahalang tsa bophelo bo botle. Ho joalo, batho ba bangata ba nang le boima ba 'mele haholo ba hlahisa takatso ea ho fokotsa ts'ebeliso ea bona ea lijo, leha ho le joalo ba loanela ho laola mokhoa oa bona oa ho ja mme ba sebelisa ka makhetlo a fetang matla a bona a matla7, 8. Nts'etsopele ea boitšoaro ba ho fepa e sa nahaneleng sephetho se fosahetseng e fana ka maikutlo a khothalletsoang ts'ebelisong ea ho sebelisa lithethefatsi ho batho ba lemaletseng lithethefatsi, e leng se sa ts'oaneng le litlamorao tse mpe9. Mona re fuputile litlamorao tsa ho fihlella lijo tse matlafatsang tse nang le mafura a holimolimo le kutloisiso ea lits'ebetso tsa moputso oa boko likoteng. Re boetse re ile ra hlahloba kamano pakeng tsa tahi e haelloang ke phepo ea hedonic le ho hlaha ha takatso e matla ea lijo. Kamora nako, re fuputse karolo ea li-stylatal D2Rs likarolong tsena tsa likarabo tsa boits'oaro.

Lirosa tse kang moputso oa bokhoba ba litheko ho litheko tse makatsang

Ho lekola litlamorao tsa phihlelletso kapa katoloso ea phihlello ea lijo tse nang le mafura a mangata, re ile ra lokisa likhoto tsa banna tsa Wistar (300-350 g) ka bipolar e hlasimollang eleketrode ho lateral hypothalamus mme ra ba koetlisetsa 10-14 d tekong e sa bonahaleng. Tsamaiso ea hona joale ea moputso oa tšusumetso ea boko (BSR) ho fihlela meeli e tsitsitseng ea moputso e thehiloe4. Ts'ebetsong ea BSR, likhoto li arabela ka matla ho fumana motlakase o iphelisang ka motlakase o matlafatsang, ka matla a fokolang a bolokang boits'oaro ba boithati bo bitsoang moputso oa 10. Hobane meeli ea meputso e lula e tsitsitse ebile e sa fetohe ka nako e telele tlasa maemo a mantlha, ts'ebetso ena e fana ka tekanyo e bonolo ea karabelo ea litsamaiso tsa moputso oa boko. Kamora ho theha meeli e tsitsitseng ea BSR (e hlalosoang e le <10% phapang meeling ea linako tse tharo tse latellanang), re abetse likhoto ho lihlopha tse tharo tse sa bonts'eng phapang ea litekanyo tsa boima ba 'mele kapa meputso pakeng tsa lihlopha. Lihlopha tsena tse tharo li fuoe monyetla o fapaneng oa ho ja lijo tsa 'mokhoa oa ho jella' tse nang le lijo tse hlabosang tse nang le matla a fumanehang habonolo bakeng sa tšebeliso ea batho (bona Mekhoa ea Inthanete). Likhoto li ne li na le 0 h (likhoto tsa chow-n feela; n = 9), 1 h (likhoto tse thibetsoeng tsa ho fihlella; n = 11), kapa 18-23 h (likhoto tse atolositsoeng tsa ho fihlella; n = 11) phihlello ea lijo ka letsatsi bakeng sa Matsatsi a 40 a latellanang. Lijo tsa ho jella li tsejoa ka lebaka la ho nona ho bakoang ke lijo ka likhoto11. Likhoto tsohle li ne li boetse li na le phihlello ea lib libum ho li-chow tsa standard tsa laboratori, ka meeli ea moputso, ho nona boima ba 'mele le ho ja caloric tse tlalehiloeng hohle.

Boima bo ile ba eketseha haholo liphatseng ka phihlello e atolositsoeng ea lijo tsa k'haravenare ha li bapisoa le lihlopha tsa phihlello tsa chow-feela kapa li-ukufinyelela (sa feiga. 1a). Boima bo ne bo boetse bo eketsa ho nyoloha ho likhoto tse thibetsoeng ha li bapisoa le likhoto tsa chow-but, empa phello ena ha e fihle bohlokoa ba lipalo. Nts'etsopele ea botona bo phahameng ho litheko tse atolositsoeng e ne e amana haufi le ho haella ha ts'ebetso ea moputso oa boko, e bonts'itsoeng mehatong e phahameng ea BSR e tsoetseng pele (sa feiga. 1b). Hobane ha ho na phapang lipakeng tsa karabelo ea BSR e hlokometsoeng har'a lihlopha tsena tse tharo (Supplementary Fig. 1), khaello ea ts'ebetso ea boits'oaro e ke ke ea ikarabella ponong ena. Liphoso tse tšoanang ts'ebetsong ea moputso oa boko li tlalehiloe ho litoeba tse nang le ts'ebetso e atolositsoeng empa e sa thibeloang ho kenella kahare ho koae ea koae kapa ho intša heroin12, 13, 14. Kahoo, ho fihlella lijo tse matlafatsang tse nang le mafura a mangata ho ka baka bofokoli bo kang ba ts'ebetso ea moputso oa boko, ho nahanoa e le mohloli oa bohlokoa oa khothatso o ka bakang ho nona ho feta le ho kenya letsoho kholisong ea botenya1, 6.

Setšoantšo sa 1: Ho phahamisa boima ba 'mele le ho putsa khaello ea likhoto ka phihlello e atileng ea ho ja lijo tsa kharebe.

(a) Boima ba 'mele (± sem) ho fumana li-chow-feela, ho thibela ho fihlella le likhoto tse atolositsoeng tsa phihlello (phihlello ea ts'ebelisano le letsatsi: F39,702 = 7.9, P <0.0001; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, teko ea poso hoc). (b) Phetoho ea liperesente tsa (± sem) ho tloha meeling ea metheo ea moputso (phihlello ea ho sebelisana ha nako: F78,1092 = 1.7, P <0.0005; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test).

Ha re lekola boits'oaro ba phepo ka botlalo (sa feiga. 2), re fumane hore kakaretso ea "caloric" e sebelisoang letsatsi le letsatsi e ne e tšoana lipakeng tsa likhoto tsa chow-feela le tse thibetsoeng (fig. 2a, d). Ka lehlakoreng le leng, ho jella likhalori ka kakaretso ho likhoto tse nang le phihlello e atolositsoeng hoo e batlang e le habeli ea lithibelo tse thibelitsoeng le tse fumanehang feela (Fig. 2a, d). Leha likhokahano tse thibeloang-phihlelong le li-chow-kuphela li bolokiloe joalo ka hoo e batlang e le letsatsi le letsatsi karolelano ea khalori (sa feiga. 2a, d), litheolelo tse fihlelletsoeng li fumane feela ~ 33% ea likhalori tsa bona tsa letsatsi le letsatsi ho tloha chow (feiga. 2b, d), e bonts'a hore ba ntlafalitse mokhoa oa ho itlhatsoa le ho ja ~ 66% ea lijo tsa bona tsa letsatsi le letsatsi tsa caloric nakong ea bona ea 1 h ea ho fihlella lijong tsa jareteng15 (sa feiga. 2d). Likhoto tse kenelletseng-li fumane karoloana e nyane feela (~ 5%) ea li-caloric tsa tsona ka kakaretso tse tsoang ho chow (Fig. 2b); ba qetile ho ja lijo tsa jareteng ka mokhoa o ikhethileng (sa feiga. 2d). Phetoho ea khetho ea lijo lihlopheng tse thibetsoeng le tse fihletsoeng le tsona li bontšitsoe ka keketseho e kholo ea ho ja mafura ha ho bapisoa le likhoto tsa chow-feela (Fig. 2c le Supplementary Fig. 2). Tumellanong le litlaleho tsa nakong e fetileng16, ho ne ho na le tšekamelo ea tšebeliso ea lijo tsa k'habeche ho fokotseha ha nako ho litheko tse fihlelehang. Sena se ka bontša nts'etsopele ea mamello ho tlisoang ke matla a lijo tse fanoeng e le karolo ea lijo tsa khefu ea nako e telele. Leha ho le joalo, likhetho tsa lijo tsa kefir le phokotseho e tloaelehileng li lula li le maemong a holimo ho litoeba tsena (Supplementary Fig. 3). Lintlha tsena li bonts'a ho fihlella ha lijo tse matlafatsang tse nang le mafura a mangata ho etsa hore motho a lemale joalo ka moputso, ho tšela matla le tahlehelo ea matla a lapeng. Ka lehlakoreng le leng, phihlello e lekantsoeng ea lijo tse matlafatsoang e hlahisa mekhoa e meng ea ho itlopa joala, empa ha e senye matla a lapeng le matla a phello ea boko. Leha ho le joalo, ho ka etsahala hore thibelo ea ho kena lijong tsa cafeteria bakeng sa matsatsi a fetang a 40 a latellanang e ka etsa hore motho a eketse boima ba 'mele le ho sitisa mosebetsi oa moputso oa boko.

Setšoantšo sa 2: Methati ea tšebeliso ho likhoto tse nang le phihlello ea ho ja li-cafeteria.

(a) Ho bolela (± sem) ho ja k'halori ea letsatsi le letsatsi ka chow-feela, lithibelo-phihlello le likhoto tse atolositsoeng tsa phihlello (phihlello: F1,324 = 100.6, P <0.0001; nako: F18,324 = 7.8, P <0.0001; phihlello Ho sebelisana ha nako: F18,324 = 4.6, P <0.0001; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test). (b) Ho bolela ho ja lijo tsa caloric tsa letsatsi le letsatsi (± sem) ho tloha chow (phihlello: F2,504 = 349.1, P <0.0001; nako: F18,504 = 5.9, P <0.0001; phihlello ea tšebelisano le nako: F36,504 = 3.52, P <0.0001; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test). (c) Ho boleloa ho ja khalori ea letsatsi le letsatsi (± sem) ho tsoa mafura (phihlello: F2,486 = 118.7, P <0.0001; nako: F18,486 = 8.8, P <0.0001; phihlello ea tšebelisano le nako: F36,486 = 6.2, P <0.0001; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test). (d) Papiso ea kakaretso ea (± sem) palo e felletseng ea likhalori, le likhalori tse sebelisoang feela ho tsoa ho chow, nakong eohle ea phihlello ea matsatsi a 40 (phihlello: F2,54 = 25.0, P <0.0001; mohloli oa khalori: F2,54 = 1235.2, P <0.0001; phihlello ea khokahano ea mohloli oa khalori: F2,54 = 485.7, P <0.0001; *** P <0.001 ha e bapisoa le likhalori tsohle sehlopheng sa chow-only, ### P <0.001 ha e bapisoa le likhalori tsohle tsa sehlopha se tšoanang sa likhoto, teko ea post hoc).

Kamora 40 d, likhoto li ne li se li sa lumelloe ho fihlella phepong e monate empa li ile tsa tsoela pele ho ba le ad libitum phihlello ho chow ea standard ea laboratori. Re lekantse meeli ea moputso le ts'ebeliso ea chow letsatsi le letsatsi nakong ena e tiisitsoeng ea 'ho ithiba'. Ho phahama ha meeli ea moputso ho ile ha phehella bonyane libeke tsa 2 ho likhoto tse fihletsoeng ha ba se ba sa fumane lijo tse monate (Setšoantšo sa 3a). Sena se fapana le khaello ea nakoana (~ 48 h) ts'ebetsong ea moputso e tlalehiloeng ka likhoto tse ithiba ho tsoa ho cocaine13 e ikemetseng. Ho boetse ho na le phokotso e totobetseng ea phepelo ea `` caloric '' (Setšoantšo sa 3b) le ho fokotseha butle butle ha boima ba 'mele (Setšoantšo sa 3c) ho likhoto tse atolositsoeng tsa phihlello, le hanyane ka hanyane ho likhoto tse thibetsoeng tsa ho fihlella, nakong ena ea boithaopo, e tsamaellanang le litlaleho tse fetileng11, 15. Kamora hore 14 d ea ho ithiba, likhoto li ile tsa bolaoa mme ho beoa li-electrode ho ile ha khethoa ke pente ea cresyl violet (Setšoantšo sa 3d).

Setšoantšo sa 3: Ho hloka khaello ea moputso le hypophagia ka nako e sa lekanyetsoang nakong ea litšebeliso ho likhoto tse nang le phihlello ea ho ja lireschorente.

(a) Ho bolela phetoho ea liperesente ho tloha meeling ea mantlha ea moputso (± sem) nakong ea ho ila lijo tse nang le mafura a mangata (phihlello: F2,112 = 3.7, P <0.05; nako: F4,112 = 2.3, P> 0.05; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test). (b) Ho bolela ho ja lijo tse nang le khalori (± sem) ka letsatsi la ho qetela la phihlello ea lijo tse nang le mafura a mangata (motheo) le nakong ea 14 d ea ho ithiba ha ho ne ho fumaneha feela chow e tloaelehileng (phihlello: F2,168 = 41.7, P <0.0001 ; nako: F6,168 = 65.6, P <0.0001; phihlello ea ho sebelisana ha nako: F12,168 = 38.3, P <0.0001; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test). (c) Phetoho ea boima ba 'mele bo bolelang (± sem) ha e bapisoa le boima ba' mele ka letsatsi la ho qetela la phihlello ea lijo tse nang le mafura a mangata (motheo) le nakong ea 14 d ea ho ithiba ha ho ne ho fumaneha chow e tloaelehileng feela (phihlello: F1,126) = 37.2, P <0.0001; nako: F7,126 = 3.1, P <0.01; phihlello ho sebelisana ha nako: F7,126 = 40.9, P <0.0001; * P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only, post hoc test). (d) Ho aha bocha nalane ea sebaka sa li-electrode tse hlasimollang tsa BSR ho lateral hypothalamus ea chow-feela (likhutlo-tharo), lithibelo tsa phihlello (likwere) le likhoto tse atolositsoeng tsa ho fihlella.

Li-D2R tsa Striatal likotong tse feteletseng: li nka karolo ho fokotseng moputso

Ka mor'a moo re ile ra leka khopolo-taba ea hore tšebeliso e fetelletseng ea lijo tse hlabosang tsa ho jella e ka fokotsa letsoalo la D2R, e leng se tlatsetsang ho nts'etsopele ea moputso o tšoanang le moputso. Sehlopha se secha sa li-chow-feela, lithibelo tse fihletsoeng le ho atolosoa ha likhoto li ile tsa lumelloa ho fihlella lijong tsa ho jella ho fihlela ho ba le keketseho e kholo ea boima ba 'mele likhoto tse fihletsoeng ha li bapisoa le sehlopha sa chow-feela (P <0.05 ; Setšoantšo sa 4a). Ponahalo ea Striatal ea foromo e tlamang ea glycosylated (~ 70 kDa) ea D2R e ne e le tlase ho likhoto tse fihletsoeng haholo ho feta likhoto tse thibetsoeng kapa tsa chow-only (Setšoantšo sa 4b; bona Mekhoa ea Marang-rang). Ha re arola likhoto sehlopheng ka seng sa phihlello ka lihlotšoana tse peli ka lebaka la karohano e bohareng ea boima ba 'mele (bo bobebe kapa bo boima), re fumane kamano e hlakileng e fapaneng lipakeng tsa boima ba' mele le polelo ea striatal D2R (Setšoantšo sa 4a, c). Ha rea ​​fumana phokotso ea lipalo-palo e bonts'ang semela se senngoeng (~ 39 kDa) le mefuta e meng ea glycosylated cytoplasmic (~ 51 kDa) ea D2R (Setlatsetso sa Tlatsetso. 4) 17, e bonts'ang polelo ea striatal D2R ka likhoto tsa phihlello e kanna ea etsahala e laoloa ka mekhoa ea kamora ho ngola.

Setšoantšo sa 4: Phaello ea boima ba 'mele e tsamaisana hampe le maemo a DriNUMXR ea striatal.

(a) Chow-only, limited-access and access-access rats e ile ea aroloa ka lihlopha tse peli ka boemo ba phihlello ho ipapisitsoe le karohano ea boima ba 'mele ea mmele: leseli (L) kapa boima (H). (b) Mohaho oohle oa striatal o ile oa bokelloa ho tsoa likhoto tsohle le maemong a D2R sehlopheng ka seng se lekantsoeng ke ho hlakola hoa bophirima. Sehlopha se amanang le lera la D2R se rarollotsoe ho 70 kDa, mme taolo ea ho laola liprotheine e bonts'itsoe ka tlase (β-actin, 43 kDa). Li-immunoblots tse bolelele bo felletseng li bonts'itsoe ho Setšoantšo sa Tlatsetso ea 12. (c) Litekanyo tse amanang tsa D2R ho striatum ea chow-feela, lithibelo tsa ho fihlella le likhoto tse atolositsoeng li ile tsa ntlafatsoa ke densitometry (F2,6 = 5.2, P <0.05, ka sehloohong phello ea phihlello; * P <0.05 le ** P <0.01 ha e bapisoa le sehlopha sa chow-only-L).

E latelang, ho leka bohlokoa ba ts'ebetso ea phokotso-e kenyelletsoeng ea ho ja li-D2R ho ts'ebetso ea moputso oa boko, re qapile le ho netefatsa vevis ea lentivir ho fana ka karete ea nakoana e kenang ea RNA (shRNA) e le hore e kobe D2R (Lenti-D2Rsh; Fig. 5 le feiga e tlatsetsang. 5). Monyako oa meputso o ile oa qala ho eketseha ho likhoto tse tšoaroang ka Lenti-D2Rsh hang hang hoba a lumelloe ho fihlella ho lijo tsa k'habeche, athe meputso ea meputso e ile ea lula e sa phahamisoe ho likhoto tse atolositsoeng tsa kalafo tse sebelisoang ka vemet ea lentivirus e se nang letho ka nako e khutšoane. mabapi le phihlello ea lijo tsa ka jareteng (14 d; Fig. 6a). Likarabo tsa karabelo li ne li sa phahamisoe ka lihlopha tsohle tsa litoeba, ho bonts'a hore phello ena e ne e se ea bobeli ho khaello ea ts'ebetso ea ts'ebetso (Supplementary Fig. 6). Monyako oa meputso o ne o boetse o sa phahamisoe lipakeng tse tšoaroang ka Lenti-D2Rsh kapa Lenti-control e neng e na le phihlello ea chow feela ka nako e le 'ngoe (sa feiga. 6b).

Liketane li ile tsa lula li phahamisitsoe ka mokhoa o phetheselang nakong ea ho nyahlatsoa ha 15 d ha lithapo tsohle li ne li fihlella feela ho chow e tloaelehileng (Supplementary Fig. 7). Knockdown of striatal D2R ka hona e ile ea eketsa tlokotsi ea ho susumetsoa ke moputso oa meputso empa ha ea ka ea fetola tšebetso ea mantlha ea tsamaiso ea meputso ea boko.

Setšoantšo sa 5: Ho kokota ha lentivirus-mediated ho polelo ea striatal D2R.

(a) Pontšo e hlakileng ea libaka tsa pelehi moo Lenti-D2Rsh e ileng ea hatisoa haholo. Masakana a matala karolong e ka lehlakoreng le letšehali la bokhachane a emela libaka tseo tšoaetso ea vaerase e neng e lebisitsoe ho tsona. Ho silafatsa botala sebakeng se nepahetseng sa striatal ke moemeli oa 'mele oa ho itšireletsa mafung bakeng sa protheine e tala ea fluorescent (GFP) e tsoang bokong ba rat ea Lenti-D2Rsh. (b) Boemeli ba immunoblot ba polelo e fokotsehileng ea D2R ho striatum ea likhoto tsa Lenti-D2Rsh. Li-immunoblots tse bolelele bo felletseng li bonts'itsoe ho Setšoantšo sa Tlatsetso ea 13. (c) Litekanyo tse amanang tsa D2R ho striatum ea Lenti-control le likhoto tsa Lenti-D2Rsh, e lekantsoeng ke densitometry (* P <0.05 ha e bapisoa le sehlopha sa taolo ea Lenti, teko ea post hoc ). (d) Ho tšoaetsoa ha llial glial ka striatum ke vektara ea Lenti-D2Rsh ha hoa fumanoa. Ho silafatsa botala ke GFP ho tsoa ho vaerase; khubelu ke protheine ea astrocyte marker glial fibrillary acidic (GFAP); li-nuclei tsa sele li totobatsoa ke DAPI e silafatsa ka botala. Metsu e tšoeu e bonts'a sebaka sa lehae sa gliosis se fumanoang feela sebakeng sa ente ea vaerase ho striatum mme eseng liseleng tse haufi tse tšoaelitsoeng ke vaerase. Le sebakeng sena, ha ho le ea mong oa linaleli ea nang le ts'oaetso ea GFP. Metsu e mosehla setšoantšong se hōlisitsoeng e totobatsa li-astrocyte tse tloaelehileng tsa GFP tse fumanoeng. (e) Maemo a phahameng a tšoaetso ea methapo ea kutlo ho striatum ke vektara ea Lenti-D2Rsh. Ho silafatsa botala ke GFP ho tsoa ho vaerase; bofubelu ke lets'oao la nyutlelie la neuronal NeuN; li-nuclei tsa sele li totobatsoa ke DAPI e silafatsa ka botala. Metsu e mosehla setšoantšong se holisitsoeng e totobatsa li-neuron tse ntle tsa GFP le NeuN tse ntle ho striatum. (f) Setšoantšo se holisang haholo sa neuron e nang le tšoaetso ea vaerase (GFP-positive) ho striatum ea likhoto tsa Lenti-D2Rsh tse bonts'ang likarolo tse tloaelehileng tsa morphological tsa li-spiny neurons tse mahareng.

Setšoantšo sa 6: Knockdown of striatal D2R e eketsa tlokotsi ea ho putsa ho se sebetse ka likhoto ka phihlello e atolohileng ea ho ja lijo tsa kharebe.

(a) Liphetoho tsa liperesente tsa (± sem) ho tloha meeling ea mantlha ea taolo ea Lenti le Lenti-D2Rsh tse neng li atolositse phihlello ea lijo tsa ho jella ka matsatsi a 14 a latellanang (vaerase: F1,156 = 5.9, P <0.05; nako: F13,156 = 2.2, P <0.05; ho sebelisana ha vaerase × nako: F13,156 = 2.2, P <0.05; #P <0.05, ts'ebetso ea tšebelisano). (b) Liphetoho tsa liperesente tsa (± sem) ho tloha meeling ea mantlha ea taolo ea Lenti-control le likhoto tsa Lenti-D2Rsh tse neng li na le phihlello ea chow feela. (c) Bolela (± sem) khalori e jang likhoto nakong ea 14 d ea chow feela kapa phihlello e atolositsoeng (phihlello: F2,28 = 135.6, *** P <0.0001). (d) Boima ba boima ba ± sem nakong ea 14 d ea chow kapa phihlello e atolositsoeng (phihlello: F2,28 = 96.4, P <0.0001; *** P <0.001, phello e kholo ea phihlello).

Re fumane hore "caloric ulae" (Fig. 6c) le phaello ea boima ba 'mele (sa feiga. 6d) li ne li ts'oana le tsa Lenti-D2Rsh le lihlopha tse tsamaellanang tsa taolo ea Lenti tlasa maemo a ho fana-feela kapa a atolositsoeng-phihlello (Li-Supplementary Figs. 8 le 9). Ka hona, ho ts'oaroa ha D2R ha hoa fetoloa kapa hona ho ja lijo tsa kofi kapa lijo tse nang le khalori e felletseng ha lijo tse fumanehang habonolo li fumaneha ka bolokolohi hore li ka jeoa.

Lijo tse qobelloang ho litoebeng tse tlotsitsoeng: karolo ea striatal D2R

Ka mor'a moo re ile ra leka khopolo-taba ea hore ho ja ka mokhoa o qobelloang ho ka hlaha likhotleng tse nang le phihlello e atolositsoeng lijong tsa ho jella le hore likhaello tsa lets'oao la D2R le ka tlatsetsang pheletsong ena. Sehlopha se secha sa li-chow-feela, tse thibeloang-ho fihlella le likhoto tse atolositsoeng li ile tsa lumelloa ho fihlella lijong tsa ho jella bakeng sa> 40 d ho fihlela palo ea lipalo e bohlokoa e eketsehile likhoto tse atolositsoeng (P <0.05 ha e bapisoa le likhoto feela tsa chow; data not bontšitsoe). Lihlopha tsohle tse tharo tsa likhoto li ile tsa lumelloa ho kena feela ka metsotso e 30 ka letsatsi lijong tsa ho jella bakeng sa 5-7 d ka phapusing ea ts'ebetso ho fihlela phepelo e tsitsitseng e fumaneha (e hlalosoang e le phapang ea <10% ea ho ja ka letsatsi le letsatsi). Halofo ea likhoto boemong bo bong le bo bong ba phihlello e ile ea pepesetsoa khanya (e matlafalitsoeng) e kopantsoeng le phepelo ea maoto (sehlopha se fuoeng kotlo), athe likhoto tse setseng sehlopheng ka seng li ile tsa pepesetsoa leseli la leseli ha ho se na maoto (sehlopha se sa otloang) ). Letsatsing la liteko, re ile ra lekola litlamorao tsa ho pepeseha ha leseli le le leng ka tšebeliso e monate ea lijo (Setšoantšo sa 7; bona Mekhoa ea Marang-rang). Re fumane hore ho bolela ho kenoa ka "caloric" nakong ea likhechana tsa mantlha tsa 30-min ho ne ho phahame ho likhoto tsa chow-feela le ho thibela ho fihlella ho feta likhoto tse fihletsoeng (Fig. 7a, b). Sena se fana ka maikutlo a hore likhoto tsa chow-feela le tse thibetsoeng tse kenngoang lijong tse hlabosehang nakong ea lipuisano tsa metsotso e 30-min, li bonts'oa ke hore likhoto tsena li jele ~ 40-50% ea lijo tsa bona tsa letsatsi le letsatsi tsa caloric, hangata ~ 100 kCal, nakong ea mananeo ana (sa feiga 7a, b). Ka lehlakoreng le leng, likhoto tse atolositsoeng li bonahala li le khahlanong le ho nts'etsapele boitšoaro bona ba ho itlopa joala, mohlomong hobane nalane ea bona ea phihlello e se nang moeli ea lijo tse monate tsa> matsatsi a 40 a latellanang a thehile mekhoa ea ho ja e neng e batla e sa fetohe. Letsatsing la liteko, ha rea ​​ka ra bona litlamorao tsa khanya ea khanya ea cue mabapi le ts'ebeliso ea lijo ho likhoto tse sa otloang tse tsoang ho chow-feela, lithibelo tsa phihlello kapa lihlopha tsa phihlello ha li bapisoa le ho kenella nakong ea motheo (Setšoantšo sa 7a). Leseli la leseli feela ka hona le ne le se na boikemisetso bo susumetsang. Likhoto tse otloang, leseli le nang le pherekano le tšosang le fokotsehile haholo ho jeoa ha lijo ka har'a likhoto tsa chow-feela le tse thibetsoeng. Leha ho le joalo, leseli la cue le ne le se na phello lijong tse hlabosehang tsa likhoto tse atolositsoeng, ho bonts'a hore ts'ebeliso ea bona e ne e sa tsotelle maikutlo a tikoloho a sa lebelloang a neng a bolela esale pele mathata. Motsoako oa matla a mantlha ho likhoto tse fihletsoeng o ne o le tlase ho feta oa lihlopha tse ling. Leha ho le joalo, hobane ho ja chow ka linako tse tšoanang ho ne ho le tlase haholo (Setšoantšo sa 7d), ho ke ke ha etsahala hore sena se emetse 'phello ea fatše' e ferekanyang seo re se fumaneng. Hammoho, tlhaiso-leseling ea rona e ts'ehetsa mohopolo oa hore boitšoaro bo qobelloang joaloka ho ja bo ka hlaha ka likhoto tse pharalletseng ka mokhoa o ts'oanang le ho nkuoa ha cocaine ka likhoka ho bonoang ho likhoto tse nang le nalane ea phihlello e pharalletseng ea lithethefatsi18.

Setšoantšo sa 7: Ho arabela ka mokhoa o qobelloang bakeng sa lijo tse fumanehang habonolo.

(a) Ho bolela (± sem) ho ja lijo tse hlabosehang ka likhoto tse sa otloang nakong ea metheo ea 30-min le ka letsatsi la liteko ha likhoto li pepesetsoa ts'usumetso e neng e sa nke lehlakore e neng e sa tsamaisoa ka leoto le tšosang la maoto (phihlello: F2,20) = 5.2, P <0.05; #P <0.05 ha e bapisoa le likhoto tsa chow-feela). (b) Ho bolela (± sem) ho ja lijo tse hlabosang ka likhoto tse otloang nakong ea metheo ea 30-min le ka letsatsi la liteko ha likhoto li ne li pepesetsoa ts'isinyeho e neng e kopantsoe le ts'isinyeho e mpe ea maoto (phihlello: F2,21 = 3.9 , P <0.05; leqheka: F1,21 = 8.6, P <0.01; phihlello ea ts'ebelisano le maikutlo: F2,21 = 4.7, P <0.05; * P <0.05 ha e bapisoa le ho kenella nakong ea seboka sa mantlha, #P <0.05 ha e bapisoa le likhoto tsa chow-feela). (c) Bolela (± sem) tšebeliso ea lijo tse hlabosehang nakong ea likhechana tsa mantlha tsa 30-min le ka letsatsi la liteko ho Lenti-control le likhoto tsa Lenti-D2Rsh tseo pele li neng li e-na le monyetla oa ho fumana lijo tsa ho jella feela (temoso: F1,26, 29.7 = 0.0001, P <0.05; * P <0.01, ** P <30 ha e bapisoa le ho kenella nakong ea metheo ea mantlha, teko ea poso hoc). (d) Ho sebelisoa (± sem) chow tshebediso nakong ea likopano tsa mantlha tsa 2-min le ka letsatsi la liteko ho Lenti-control le likhoto tsa Lenti-D1,26Rsh tseo pele li neng li na le chow kapa li atolosetse phihlello ea lijo tsa ho jella (temo: F44.9 = 0.0001, P <0.05; * P <0.01, ** P <XNUMX ha e bapisoa le ho kenella nakong ea metheo ea mantlha, teko ea post hoc).

Kamora nako, re ile ra lekola litlamorao tsa ts'usumetso ea boemo ba kotlo mabapi le ho ja lijo Lenti-control le likhoto tsa Lenti-D2Rsh tse neng li kile tsa khona ho fumana chow kapa ho eketsa phihlello ea lijo tsa ho jella (likhoto ho tsoa ho feiga 6). Re fumane hore tlhahiso ea mantlha ea lijo tse hlabosehang nakong ea likhaolo tsa motheo tsa 30-min le tsona li ne li le holimo (~ 40 kCal) lihlopheng tsohle tse 'ne (Setšoantšo sa 7c). Ntle le moo, ts'ebeliso ea letsatsi le letsatsi ea chow (ka hoko ea lapeng) e ne e ts'oana lipakeng tsa lihlopha tsohle tse 'ne tsa likhoto nakong ea maemo a boemo le ka letsatsi la teko (Supplementary Fig. 10). 14 d ea phihlello ea pele ho lijo tsa ho jella ka hona e ne e sa lekana ho thibela boits'oaro bo kang ho itlopa joala ka mokhoa o ts'oanang le o bonoang ho likhoto tse nang le> 40 d e atolositseng phihlello ea lijo tsa ho jella (Setšoantšo sa 7a, b). Tsosoloso e bobebe ea leseli e sitisitse ho ja lijo tse monate ho Lenti-control le likhoto tsa Lenti-D2Rsh tse neng li na le phihlello ea chow-only (Setšoantšo sa 7c). Ka mokhoa o ts'oanang, ts'usumetso e matlafatsang e sitisitse ho ja lijo tse hlabosehang likhotleng tsa taolo ea Lenti tseo pele li neng li na le 14 d atolosetsa phihlello lijong tsa phepelo. Ka lehlakoreng le leng, ts'usumetso e khelositsoeng e ne e se na tšusumetso phepong e bonolo ea lijo ho likhoto tsa Lenti-D2Rsh tseo pele li neng li na le phihlello ea lijo tsa ho jella (Setšoantšo sa 14c). Meeli ea BSR e ile ea lula e phahame haholo ho likhoto tsena ha e ne e tlalehiloe 7 h kamora nako ea teko, athe meeli e ile ea lula e tsitsitse ebile e sa fetoha lihlopheng tse ling tse tharo tsa likhoto.

(Tlatsetso ea feiga. 11). Ho netefatsa hore ho hana ho kenella ha lijo tse matlafatsoang tse khothalletsoang ho ja lijo tse matlafatsang tsa Lenti-D2Rsh litheolelo tsa nako e telele li ne li sa ts'oane le ho sitisoa hoa ts'ebetso ea maemo a maemo, re lekile litlamorao tsa tšusumetso e mpe ea tšebeliso ea tšebeliso e mpe e tloaelehileng ea chow ho lihlopha tsohle tse 'ne tsa likhoto. Ho fapana le tšebeliso e tšoanang le ea lijo tse matlafatsoang, re fumane hore lihlopha tsohle tse 'ne tsa likhoto li ja li-chow (~ 2 kCal) nakong ea li-basement tsa 30 min baseline (Fig. 7d) le hore ho ja ho hong ho ile ha sitisoa ka lihlopha tsohle tse' ne bophahamo bo ts'oanang ha bo pepesetsoa khothalletso e hlohlontšitsoeng (feiga. 7d). Lintlha tsena li bonts'a hore ho kokota ha li-D2R tsa striatal ho ile ha potlakisa ho hlaha ha lijo tse matlafatsoang joalo ka li-rats, empa li le litlalehong tse nang le nalane ea phihlello e atolositsoeng. Ho feta moo, hobane lijo tse qobelloang li fumanoe feela ho litheko tsa Lenti-D2Rsh tse neng li phahamisitse menyako ea BSR, meputso e hlahisoang ke ho ja lijo e ka ba lebaka le hlokahalang ho hlaheng ha ho batla lijo tse qobelloang.

Puisano

Monyetla oa ho fihlella lijo tse matlafatsang tse nang le mafura a mangata e nkuoa e le karolo ea bohlokoa ea kotsi ea tikoloho bakeng sa botenya19. Re hlokometse hore phihlello e atolositsoeng ea ho ja lijo tse nang le phepo e ntle haholo e felletseng ka ho nona haholo le ho nona ka boima hammoho le ho phahamisa litheko tsa BSR mohato ka mohato lithupelong. Tšusumetso ena likhutlong tsa BSR e ka hlalosoa ka ho fokotsa butle-butle karabelo ea li-circuits tsa moputso oa boko, tlhaloso e lumellanang le taba ea hore lithibelo tsa lijo le ho theola boima ba 'mele li ka eketsa20, athe ho fetelletsa litaba haholo ho fokotsa21, ha ho arabeloa ha BSR litekong. Phumano ena e emela ho eketsoa ha mosebetsi o bonts'ang hore ho fetisoa hoa litoeba haholo ka mothapo o mong oa phepelo ea mothapo oa phepelo ea glucagon, le tšenyo ea gastric kapa infravenous glucagon infusions eo e etsisang postprandial satiety21, 22, 23, e fokotseha ho arabela bakeng sa moputso oa morao oa hypothalamic BSR hlohlelletsa24. Mosebetsi oa nakong e fetileng o boetse o bonts'itse hore hangata ho fepa likhoto ka li-tubes tsa intragastric ho fihlela boima ba tsona bo eketsehile ka ~ 25 g ka mokhoa o ts'oanang le litheko tsa ho arabela BSR, phello e phehellang ho fihlela boima ba 'mele bo na le standardized200. Joalo liphumatsong tsena ho litoeba, ho araba likatse bakeng sa hypothalamic BSR ho ne ho thibetsoe ke ho fepa pele ho satiation23, ho bonts'ang hore likhohlano pakeng tsa ts'ebetso ea moputso oa boko le mmuso oa metabolism li bolokiloe mme ka hona li ka etsahala ho batho. Ho nolofalloa ho fihlella le ho nona ho ja lijo tse nang le mokhoa oa ho ja kahare ho batho ho nkoang e le karolo ea bohlokoa ea tikoloho seoa sa ho nona hona joale mekhatlong ea Bophirima26. Lintlha tsa rona li bontša hore moputso oa kelello oa moputso o hlaha likhoto tseo ka tloaelo li jang lijo tse matlafatsang tsa kofi e ts'oanang le e jeoang ke batho le hore phello ena e tsoela pele ho mpefala ha ba ntse ba eketsa boima ba 'mele. Haholo, likhoto tsohle tse nang le meputso ea meputso reward19% li ne li na le li-electrodes tsa BSR tse ka har'a ~ 20 μm ea fornix dorsolaterally. Boikutlo ba li-neurons tse amanang le moputso sebakeng sena bo eketseha ka thibelo ea lijo ka mokhoa o ikhethileng ho leptin e tsoang mafura, mme sebaka sena sa boko se nkuoa e le karolo ea bohlokoa bakeng sa moputso oa lijo500. Li-circuits tsa boko tse laolang li-hedonics tsa lijo ka hona li thibeloa ke lipontšo tsa postingestive tse bolelang esale pele ho satiety, ho lumellana le lithuto tsa morao-rao tsa monahano oa motho tse bonts'ang hore gastric distention27 le gut-based postprandial factor peptide YY28-3 (PYY) 36 e hlophisa tšebetso ea libaka tsa boko. kenya letsoho ts'ebetsong ea moputso. Ntle le moo, litsamaiso tsa moputso li boetse li thibetsoe ke ho phahamisa boima ba 'mele haholo. Litlaleho tsa morao-rao li bonts'a hore leptin e potolohang, molaoli oa bohlokoa oa matla, e ka kenella ka har'a lisele tsa boko mme ea thibela ts'ebetso ea li-circuits tsa moputso29, 3, 27, 30.

Ho haelloa ke moputso ka likhoto tse nang le boima bo feteletseng ho ka bonts'a ho fokotseha ha maiketsetso maemong a mantlha a li-circuits tsa moputso oa boko ho hanyetsa ho fetelleha ha bona ka lijo tse monate. Boitšoaro bo joalo bo bakoang ke lijo bo ka tlatsetsang nts'etsopele ea botenya ka ho eketsa tšusumetso ea ho ja lijo tse phahameng tsa 'obesogenic' ho qoba kapa ho fokotsa boemo bona ba moputso o mobe6, 32. Sena se kanna sa ikarabella bakeng sa hypophagia eo re e boneng phihlellong-phihlello likhoto le ho isa tekanyong e nyane ho likhoto tsa phihlello tse thibetsoeng ha lijo tse hlabosang li ne li huloa 'me ho ne ho fumaneha feela chow e sa rateheng. Boemo bo joalo bo boetse bo tsamaellana le tlhaiso-leseling e tsoang liphuputsong tsa ho nka litšoantšo tsa boko ba motho moo ho kentsoeng ts'ebetso ea striatum ho arabeleng lijo tse monate haholo, haholo ho batho ba nang le liphatsa tsa lefutso tsa lefutso tse nkoang li fokotsa polelo ea striatal D2R, e amanang le ho nona boima ba nako e telele4. Ho ntse ho sa hlaka hore na moputso o joalo oa hyposensitivity ho batho ba batenya ho feta o bonahala pele ho nts'etsopele ea botenya mme o amana feela le liphatsa tsa lefutso ('moputso defence syndrome') kapa hore na ho ja ho tlola ho ka baka tšitiso ts'ebetsong ea moputso. Lintlha tsa rona li bonts'a phihlello e atolositsoeng ea lijo tse matlafatsang tse matlafatsang le ho ja ho fetelletseng ka mokhoa o fetelletseng oa moputso mme ka hona e ka emela mochini oa bohlokoa oa hedonic o khothalletsang nts'etsopele ea botena. Ho se sebetse hantle ha moputso ho se tlalehiloeng mona ka likhoto tse nonneng ho boetse ho fumanoa ka likhoto tse nang le nalane ea phihlello e atileng ea koae e kenang methapong kapa heroine, empa eseng ho ba nang le nalane ea phihlello e thibetsoeng12, 13, 14. Ho feta moo, phetoho ho tloaela ho batla lithethefatsi ka mokhoa o qobelloang ho hlahisitsoe ka lebaka la boiteko ba ho fokotsa boemo bo phehellang ba moputso o fokotsehileng o bakoang ke ho se sebetse ha moputso ona o bakoang ke lithethefatsi12, 32, 33. Kahoo, tlhaiso-leseling ea rona e bonts'a hore botenya le ho lemalla lithethefatsi li ka arolelana mekhoa ea motheo ea hedonic.

Ho fokotseha ha polelo ea striatal D2R ke karabelo e hlokomelehang ea karabo e fetelletseng ea lijo tse matlafatsoang. Ho joalo, phokotso ea khatello ea methapo ea D2R e bonoa ho batho ba fetang boima ba 'mele4, 34 le rodents35, 36. Ka lehlakoreng le leng, batho ba nang le bothata ba ho ipolaisa tlala ba phahamisitse D2R37, 'me ho fokotsa boima ba' mele ka bongata ka mor'a ho buuoa ka bariatric (gastric bypass) ho kopantsoe le boemo bo phahameng ba bohloeki ba D2R. Pholororphism ea gene e bitsoang TaqIA A28 allele e fella ka ho fokotseha ha maikutlo a D1R, mme batho ba nang le allele ena ba emeloa haholo ke batho ba feteletseng2. TaqIA allele e boetse e eketsa tlokotsi ea joala, opioid le psychomotor e khothalletsang tšebeliso ea tahi4. Phokotso ea mathata a amanang le lefu la sethoathoa D38R e etsahala ka lebaka la liphatsa tsa lefutso kapa ka lebaka la ho nona ho tlola ho ka kenya letsoho methating ea methapo ea methapo ea methapo. Re fumane hore maemo a isang ea 2 kDa D70R, e nahanoang hore e bonts'a D2R e amanang le membrane, e ne e amana ka bongata le boima ba 'mele ho likhoto tse tsoang ho chow-feela, li-ukufinyelela le lihlopha tse atolositsoeng tsa ho fihlella (sa feiga. 2). Knockdown of striatal D4R expression, most most clearly in the dorsolateral striatum (Fig. 2), e entse hore menyako ea BSR e eketsehe hanghang hang ha e pepesetsoa lijong tsa jarete. Ho theoha ha polelo ea methapo ea D5R ka hona ho potlakisitse ho hlaha ha moputso ka har'a likhoto ka phihlello e atolositsoeng ea lijo tse fumanehang habonolo, ho fumana ho lumellanang le data ea ho nahana ka bokong ba motho e bonts'ang liphoso ho tsitsipano ea D2R ea letsoalo e thusa ho putsa hypeleloction ho batho ba natefileng2.

Likarolo tse tharo tsa likhoto tsa Lenti-D2Rsh le tsona lia bohlokoa. Taba ea pele, le ha ho theoleloa ha striatal D2R ho kopantsoe le phihlello e atolositsoeng ea lijo tse matlafatsoang ho hlahisitse menyako ea BSR, ho ne ho se na phapang lipapaling tsa caloric kapa phaello ea boima litepising tsena ha li bapisoa le likhoto. Sena se ka bontša 'nete ea hore likhoto li ne li na le 14 d feela ea ho fihlella lijong tsa jareteng; nako e telele ea phihlello e kanna ea baka ho phahamisa boima ba 'mele ka nako e telele, ka mokhoa o ts'oanang le boiketsetso bo phahameng ba boima ba mmele bo bonoang bathong ba nang le bofokoli ba striatal D2R signaling4. Leha ho le joalo, monyetla oa ho thibela ho fihlella lijong tsa cafeteria ho 14 d feela ke hore likhakanyo tsa knockout tse nang le phihlello e atolositsoeng e ne e le tsona feela sehlopha ho bonts'a likhahla tse phahameng tsa BSR, mme sena se re lumelletse ho lekola karolo e ka bang teng ea moputso oa moroalo nts'etsopele ea khatello ho ja (bona ka tlase). Taba ea bobeli, menyako ea BSR e ile ea lula e tsitsitse ebile e sa phahamisoe lipapatsong tsa likolopata tse neng li fihlella chowong feela. Sena se bonts'a hore polelo e fokotsehileng ea maikutlo a D2R e le 'ngoe e ne e sa lekana ho susumetsa moputso oa hyposensitivity; ho fapana le moo, e ne e bonahala e sebetsana le ho natefeloa ke lijo tse matlafatsoang ho potlakisa ho hlaha hoa boemo bona ba maikutlo a theotsoeng a meputso. Likarabo tse ling tse feto-fetohang liphatlalatsong tsa moputso oa boko li ka baka ts'abo ea moputso liphatseng ka phihlello ea nako ea ho ja lireschorenteng. Ka sena kelellong, re hlokomela hore D2R agonist bromocriptine e fokotsa mekhahlelo ea potoloho ea leptin39, mme leptin e thibela ho fepa hanyane ka karolo ka ho thibela libaka tsa striatal tse laolang likarabo tsa hedonic ho lijo3, 30, 31. Kahoo, ho ka etsahala hore ho fokotseha ha "striatal D2R" ka lebaka la ho eketsa boima ba 'mele ho eketsa ho supa leptin mme ka hona ho eketsa litlamorao tsa adipokine ena lits'ebetsong tsa moputso oa boko. Kamora nako, re hlokometse hore re lebisitse lits'ebetso tsa rona tsa lentivirus ho leba dorsolateral striatum. Sena e ne e le haholo mabaka a tekheniki, ha ho beoa cannulae bakeng sa phetisetso ea vaerase ka har'a striatum ho re nolofalelitse ho amohela polokelo ea eletso ea methapo ea methapo ea methapo ea kutlo bakeng sa boikemisetso ba BSR. Ka hona, ho ka etsahala hore ho lebisoa ha D2Rs bakeng sa ho kokota libakeng tse ling tsa striatum, haholo libaka tsa dorsomedial le ventral (li-nucleus accumbens msingi le khetla), li kanna tsa phahamisetsa menyako ea BSR leha ho se na lijo tse matlafatsang.

Dorsolateral striatum e kentsoe letsoho haholo thutong ea mofuta oa karabelo ea karabelo, joalo ka ha e bonts'oa ke nts'etsopele ea boits'oaro bo sa tsotelleng ho theoha ka ho fepa pele ho khotsofatsa kapa ka ho ikamahanya le tšusumetso e mpe40. Ka ho lebisa tlhokomelo haholo ho li-dorsolateral striatum, re kanna ra ba ra theola batho ba li-D2R tse laolang ts'oaetso ea rat ho nts'etsopele ea ho ja ka mokhoa o qobelloang. Tumellanong le karolo ea li-D2R tsa ho itšoaea ka boits'oaro bo qobelloang, TaqIA e thehiloe sebakeng sa lefutso sa motho sa DRD2-ANKK1-se hlahisang letsoalo le tlase la D2R, le hlasimollang ts'ebetso ea ho bolaoa ha lijo ho amohela lijo tse hlabosang5 le ho phahamisa ts'oaetso ea botenya4 -e boetse e amahanngoa le Dikgaello tsa ho ithuta ho qoba diketso tse nang le ditlamorao tse mpe 4. Tahlehelo ea taolo e thibelang boitšoaro bo ka bang le litlamorao tse mpe ke tšobotsi ea botenya le ho lemalla lithethefatsi, moo boitšoaro bo fetelletseng bo tsoelang pele leha ho bile le litlamorao tse mpe sechabeng, bophelo bo botle kapa lichelete. Boitšoaro ba ho nka k'hok'heine ka likhoto tse nang le nalane ea tšebeliso e kholo ea lithethefatsi bo ka fetoha bo feto-fetohang le ho hanela pherekano ka lebaka la ts'usumetso e ferekanyang e bolelang esale pele sephetho se setle (ts'abo ea maoto) 41. Ka mokhoa o ts'oanang, litoeba tse neng li na le phihlello ea lijo tse nang le mafura a mangata li tla qeta nako e ngata tikolohong e hlohlontšang mahlo (e boneselitsoeng hantle) ho fumana lijo tse hlabosehang ho feta litoeba tse neng li se na boiphihlelo ka lijo18. Re fumane hore ts'ebeliso e monate ea lijo ka likhoto tse nang le phihlello e atolositsoeng ea lijo tsa ho jella ka tsela e ts'oanang e ne e sa tsotelle ts'isinyeho e khathollang. Tumellanong le karolo ea li-D42R tsa pelehi ka lebaka lena, ho ja ka mokhoa o qobelloang ho fumanoe likhopong tsa D2R tsa ho kokota tse neng li na le 2 ea nako e telele ea ho fihlella lijong tsa ho jella empa eseng lihlopheng tsa taolo. Ho latela pono ea methapo ea pelo, ho atolosoa ha phihlello ea lijo tse hlabosehang ho ka baka polasetiki litseleng tsa corticostriatal, ka tsela eo ho etsa hore liphoofolo li be tlokotsing ea nts'etsopele ea boits'oaro bo ts'oanang, ka likhaello tsa lets'oao la D14R le bontšang ts'ebetso ena. Ka 'nete, ho fokotseha ha letsoalo la D2R ho batho ba batenya ho feta ho amana le phokotso ea metabolism libakeng tsa pele le tsa orbitofrontal cortical2 tse fanang ka taolo ea thibelo ea boits'oaro43.

Haholo-holo, tšebeliso e kang ea lijo tse matlafatsoang e ile ea fumanoa feela litlamong tse khaotsoeng tse neng li atisitse phihlello ea lijo jareteng, eseng ka likhoto tse neng li atisitse phihlello ea lijo tsa nako e tšoanang ka nako e ts'oanang, kapa litheko tse oeleng tse oeleng. phi-op Phapang e kholo lipakeng tsa likhoto tse oelang holimo ka phihlello e atolositsoeng le lihlopha tse ling e ne e le likheo tsa BSR tse phahameng. Sena se ka bonts'a tšimoloho ea "neurobiological" e tloaelehileng ea moputso le ho hlaha ha lijo tse qobelloang, tseo e leng liketsahalo tsa nakoana feela empa li ikemetse. Ntle le moo, hypofunction e hlahisoang ke ho ja e ka sebetsa e le karoloana ea ts'usumetso e mpe e tataisang nts'etsopele ea ho jella-joaloka ho ja14, 32, 33. Ho sa tsotelehe mekhoa e ka sehloohong, liphumano tsa rona li bonts'a hore karabelo e ts'oarang joaloka lijo tse fumanehang habonolo e ka hlaha ho litoeba tse feteletseng, mme e bonts'a liphoso ho D2R ea tšoaetso e eketsa ho ba tlokotsing ea kholo ea boitšoaro bona.

Ka bokhutšoanyane, re fumane hore ts'usumetso e fetisisang ea litefiso tsa moputso oa boko ka tšebeliso e matla ea lijo tse matlafatsoang, tse matlafatsang lijo tse matlafatsang boemo bo matla ba meputso le nts'etsopele ea ho ja joalo ka phepelo. Likarabo tsena tse mpe tsa boitšoaro bo bobe literekong tse feteletseng mohlomong li hlaha ho tsoa mefokolong e susumetsoang ke ho ja li-D2R signaling. Tšebeliso e feteletseng ea lithethefatsi tsa tlhekefetso ka mokhoa o ts'oanang e fokotse letsoalo la D2R, e etsa hore boemo bo be le moputso o matla 'me e tsosetsane ho hlaha ha boits'oaro bo joalo ba ho nka lithethefatsi. Liphumano tsa rona ka hona li ts'ehetsa mosebetsi o fetileng4, 19, 42, 45, 46, 47 ho bontša hore botenya le lithethefatsi tsa lithethefatsi li ka hlaha ho tsoa likarabo tse tšoanang tsa neuroadaptive makaleng a moputso oa boko.

mekhoa

Likhoto.

Likhoto tsa Male Wistar tse boima ba 300-350 g qalong ea liteko li fumanoe ho Charles River. Ha a fihla, likhoto li ne li beoa ka mokhoa o le mong ka mocheso o sa fetoheng mochining o lefifi oa 12-h (mabone ho 2200 h). Likhoto li ile tsa lumelloa ho fihlella libpter bakeng sa ho fumana laboratori e tloaelehileng le metsi bakeng sa nako eohle ea tlhahlobo. Ts'ebetso tsohle li amohetsoe ke Komiti ea Tlhokomelo ea Liphoofolo le Ts'ebeliso ea Lisebelisoa tsapsps Florida, 'me likhoto li ile tsa tšoaroa ho latela tataiso e behiloeng ke Litsebi tsa Naha tsa Bophelo mabapi le melaoana ea tlhokomelo ea liphoofolo.

Mekhoa ea ho buoa.

Likhoto tse lokisitsoeng ka li-elektrone tse hlasimollang tsa BSR li qalile ho hlahisoa ke ho inhalation ea 1-3% isoflurane ka oksijene 'me e behiloe ka sebopeho sa stereotaxic (Kopf). Li-electrodes tsa Bipolar BSR (11 mm bolelele) li ile tsa kenngoa ka posterior lateral hypothalamus (anteroposterior, −0.5 mm ho tloha bregma; Mediolateral, ± 1.7 mm ho tloha bohareng; dorsoventral, 8.3 mm ho tloha dura; incisor bar e fetotsoe ho moeli oa 5 ) 47. Liroto tse amohelang liente tsa vaerase li ne li boetse li lokiselitsoe ka cannulae ea bonase e 'ngoe (23 gauge, 14 mm bolelele) e behiloeng kaholimo ho striatum (anteroposterior, 2.8 mm ho tloha bregma; mediolateral, ± 3.1 mm ho tloha bohareng; dorsoventral, N2.4 mm ho tloha bohareng ba dura) 48 ka mefuta ea 14-mm. Likarolo tse 'ne tsa tšepe tsa tšepe tse se nang tšepe le acrylic ea meno li ne li tšoere motlakase le cannulae sebakeng. Leqeba la ho buoa le ile la phekoloa ka kalafo e thibelang likokoana-hloko hang ka mor'a 12 h bakeng sa 5 d kamora ts'ebetso ea bongaka. Likhoto li ile tsa lumelloa 7-10 d ho hlaphoheloa opereisheneng 'me li ile tsa koetlisoa ts'ebetsong ea BSR.

Tsamaiso ea BSR.

Likhoto li ile tsa koetlisetsoa ho arabela bakeng sa ts'usumetso ea BSR ho latela ts'ebetso ea morao-rao ea discrete e tšoanang le e hlalositsoeng kae kae10, 14. Ka bokhutšoanyane, maemo a hona joale a BSR a ne a fapane ka ho fapanyetsana mefuta ea ho theoha le ho hloa mohato ka mehato ea 5-μA. Sebokeng se seng le se seng sa liteko, ho ile ha hlahisoa letoto la mefuta e mene ea ho theoha / ho nyoloha. Monyako oa letoto le leng le le leng o ile oa hlalosoa e le bohareng ba matla a latellanang a hona joale ao litheko li arabetseng bonyane ho tse tharo tsa liteko tse hlano, le likhakanyo tse peli tse latellanang tsa hona joale tseo likhoto li sa arabeleng tekong tse tharo kapa ho feta. Karolelano ea kakaretso ea thuto e hlalositsoe e le moelelo oa menyako bakeng sa letoto la batho ba bane. Seboka se seng le se seng sa liteko se ne se ka ba metsotso e ka bang 30 nakong ea nako. Mehato e tsitsitseng ea BSR e ile ea hlalosoa e le phapang ea ≤10% likhutlong tse fetang matsatsi a 5 a latellanang, hangata a thehiloe kamora koetliso ea 10-14 d. Karabelo ea karabelo bakeng sa karolo ka 'ngoe ea tlhahlobo e hlalositsoe e le mokhoa oa ho arabela oa liteko tsohle nakong eo karabelo e ntle e ileng ea etsahala.

Ho paka le ho tsamaisa vaerase.

RNA e khuts'oane ea moriri e ile ea tlisoa 'me ea hlahisoa ka mokhoa o hlakileng ho sebelisoa sistimi ea vector ea pRNAT-U6.2 / Lenti (GenScript). Likaroloana tsa vaerase li ne li lokiselitsoe ho latela melaoana ea moetsi. Ka bokhutšoanyane, lisele tsa HEK 293FT li ile tsa fetisoa ka vector e nang le kenyelletso ea shRNA (5'-GGATCCCGCGCAGCAGTCGAGCTTTCTTCAAGAGAGAAAGCTCGACTGCTGCGCTTTTTCCAACTCGAG-3 ') kapa vector e se nang letho, hammoho le ViraPower medium bakeng sa ho kopanya Mix (Invit). Supernatant e ile ea bokelloa 'me ea tsepamisoa ke ultracentrifugation (72g, Beckman Coulter SW 24 TI rotor., 76,755 min, 32 ° C) mme titer ea vaerase e ne e khethoa ke sele e hlophisitsoeng ea fluorescence e hlophisitsoeng ho latela litaelo tsa moetsi. Kokoana-hloko e ile ea qhekelloa 'me ea bolokoa ka mabokoseng a sirelelitsoeng ka khanya ho -90 ° C ho fihlela e sebelisoa.

Likhoto tse nang le methati e tsitsitseng ea BSR li amohetse liente tse peli tsa vaerase libakeng tse tharo kaharong ea hemisphere e 'ngoe le e' ngoe ea kelello (2 μl ka ente e ngoe, 1 μl min − 1, 1 min pakeng tsa ente, kakaretso ea liente tse ts'eletseng ka ngoe). Likhoto li ne li lumelletsoe bonyane ho hlaphoheloa ha 2-3 d ho tsoa litsing tse amanang le boemo ba pele ho tlhatlhobo ea tekanyetso ea BSR. Tlhahlobo ea letsatsi le letsatsi ea BSR e ile ea tsoela pele bakeng sa 33 d kamora ho entoa ka vaerase ho netefatsa ho putlama ha D2R ho fihlella pele ho lumella likhoto ho fihlella lijong tsa jarete. Ho ne ho se na phapang likhethong tsa BSR pakeng tsa likhakanyo tsa Lenti-D2Rsh nakong ea li-33 d (data e sa bontsitsoeng).

Ho ts'oara.

Likhoto li ile tsa bolaoa hoo e ka bang 1 h ka mor'a ho fihlella nako le nako ho fumana lijo tsa kofi, 'me likelello li ile tsa tlosoa kapele. Likarolo tsa methapo ea ~ 1-2 mm ka boteng li ne li hlophisitsoe ho sebelisoa mokelikeli oa bokong ba coronal (1-mm slice interval; Plastics One) ka sethaleng sa leqhoa, le litla-morao tsa tiske tsa dorsal striatum (bregma: ~ 2.2 ho −0.26 mm) li nkuoe. Lithapo tsa "tishu" li ile tsa bokelloa ka potlako, tsa hoama ka leqhoa 'me tsa bolokoa ho −80 ° C ho fihlela e sebelisoa. Mehlala ea batho ka bomong e ne e theotsoe leqhoeng mme litekanyo tse lekanang tsa lithane tsa striatal li kentsoe motheong oa karohano e kholo e itšetlehileng ka boima ba lihlopha tsa phihlello (7-10 rats per pool). Tissue e ile ea ts'oaroa hape ka 500 μl buffer ea serame ea RIPA (Thermo Science) e nang le sodium orthovanadate, phosphatase cocktail inhibitors 1 le 2 (Sigma-Aldrich), leupeptin le pepstatin pele ho homogenization. Li-lisiat tsa lithane li ile tsa belisoa bakeng sa 10 min ka buffer ea sampole 'me ea lahleloa 4% –20% kapa 10% Tris-glycine SDS gels (Invitrogen). Protein e fetisetsoe ho li-membrane tsa nitrocellulose, e thibetsoe 1 h ho ~ 23-25 ° C (5% lebese le sa omang le se nang mafura le 0.2% Tween-20 ho PBS, pH 7.4), 'me la kenngoa kahare ho antibody bosiu bosiu ho 4 ° C. Li-antibodies tse latelang tsa mantlha li ile tsa kenngoa ka tharollo ea block: D2R mouse monoclonal (Santa Cruz, 1: 100) kapa β-Actin mouse monoclonal (Santa Cruz, 1: 200). Chemiluminescent ECL reagent e ile ea eketsoa kamora ho incubation le li-antibodies tsa sekherini tsa horseradish peroxidase- tse kopantsoeng le li-antibodies tsa bobeli (Amersham, 1: 2,000). Sebopeho se amanang le membrane se kopaneng le D2DR (~ 70 kDa) 17, 49 e ne e tloaelehile hore e be taolo ea ho tsamaisa liprotheine (β-Actin; 43 kDa) mme e hlalosoe ke densitometry e sebelisang software ea NIH Image J.

Tlhahlobo ea immunochemical.

Lits'ila li ile tsa hlahisoa ka mokhoa o sa ananeleng 'me tsa hlahisoa ka mokhoa o phollatsi ka 4% paraformaldehyde ho PBS (pH 7.6). Li-brains li tlositsoe, li khangoa bosiu bo le bong 'me li bolokiloe ka sucrose (30% tharollo ho PBS, pH 7.4) bonyane 72 h. Likarolo tsa "tishu" tsa Frozen (30 μm thickness) li ile tsa bokelloa ho tloha microtome le ho koaloa (3% BSA, 5% serum e tloaelehileng ea poli le 0.3% Triton X-100 ho PBS) bakeng sa 1 h ho ~ 23-25 ° C. Li-antibodies tse latelang tsa mantlha li ile tsa eketsoa tharollo ea li-block mme tsa kenella bosiu ho 4 ° C: kuku polyclonal ho GFP (Abcam, 1: 1,000); Rabi monoclonal ho GFAP (Millipore, 1: 1,000); mouse monoclonal ho NeuN (Millipore, 1: 1,000). Likarolo li ne li entsoe ka dae ea fluorescent-dye-conjugated ea bobeli antibodies ho ~ 23-25 ° C: dae ea kuku-488-nm dae (Jackson ImmunoResearch, 1: 1,000), anti-rabi-594-nm dae (Invitrogen, 1: 1,000: 594: 1) ), le dae ea anti-mouse-1000-nm (Invitrogen, 61: 2). Likarolo li ne li ts'oaretsoe ka li-media tsa Vectashield tse nang le DAPI (Vector Labs) 'me e koaetsoe. Litšoantšo li ile tsa nkuoa ho sebelisoa microscope ea Olympus BX10 fluorescence (× 100) kapa microscope ea confusti (x XNUMX le x XNUMX).

Mokhoa oa ho fepa.

Liraka li ne li beoa ka bonngoe lipampiring tsa alpha (liphahlo tsa alpha; lipampiri tse khethehileng tsa balisa) ho thibela lihlahisoa tsa lijo hore li se ke tsa silafatsoa ka thepa ea ho robala. Lijo tsa k’habeche e ne e le bacon, soseji, cheesecake, kuku ea pound, serame le chokolete, tseo ka bomong li neng li lekanngoa pele li fuoa litoeba. Lijo tsa lijo tsa kofi li ne li isoa ka mekotlong e meholo ea tšepe. Lintho tsohle tsa lijo, ho kenyelletsa le laboratori e tloaelehileng ea laboratori, li ile tsa bekha hape ha ho phetheloa seboka. Ho kenella ka har'a caloric ho tsoa ho macronutrients e fapaneng ho ile ha baloa ho sebelisoa tlhahisoleseling le phepo e fanoeng ke moetsi.

Ho khothaletsoa ke boitšoaro bo ferekanyang

Mekhoa ea ho fepa e etsahetse likamoreng tse sebetsang tse nang le molumo o ts'oanang ka boholo le tse sebelisitsoeng litekong tsa BSR. Likhoto li ne li beoa ka phapusing e sebetsang 'me li ne li khona ho fumana lijo tsa ho jella kapa chow bakeng sa 30 min. Lihlahisoa tsa lijo li ne li tlisoa ka lipitsa tse nyane tsa tšepe. Lijo tsohle li ne li lekanngoe pele le kamora nako ea phepo, e neng e etsoa nakong ea phepo e tloaelehileng ea likhoto. Ts'ebeliso ea chow e ile ea hlahlojoa ka ts'ebeliso ea li-chow-pellets tsa 45-mg tse ts'oanang hantle ka sebopeho sa chow e fanoeng ka matlung a likhoto. Likhoto li ile tsa lumelloa ho kena ka metsotso e 30 ka letsatsi lijong tsa ho jella ho fihlela phepelo e tsitsitseng e fumaneha (e hlalosoa e le phapano ea <10% ea lijo tsa letsatsi le letsatsi), e hlokang 5-7 d. Kamora ho tsitsisoa ha lijo tse hlabosehang nakong ena ea mantlha, likhoto maemong ohle a phihlello li ile tsa abeloa lihlopha tse peli: ba fuoa kotlo (ba fumanang ts'oaetso ea maoto) mme ba sa otloe (ba sa fumane ts'abo ea leoto). Likhoto li ile tsa fuoa likarolo tse 'ne tsa maemo a phomolo ka matsatsi a latellanang ka phapusing e le' ngoe eo ba neng ba kile ba fumana lijo tse monate ho eona. Nakong ea lipuisano tsa 30-min maemo a khanya (khanya e matlafalitsoeng) e ile ea buloa bakeng sa 10 min, ea tima bakeng sa 10 min, ebe ea khutlela morao bakeng sa 10 min. Likhoto tse otlang li ile tsa ts'oaroa ke leoto feela nakong ea tlhahiso ea leseli la cue (0.5 mA bakeng sa 1.0 s; 10 stimulations with ~ 1-min intervals). Likhoto tse sa ahlotsoeng li ile tsa hlahisoa ka leseli la cue ka tsela e ts'oanang, empa ntle le ts'abo ea maoto. Letsatsing la liteko, letsatsing le hlahlamang la boemo ba ho qetela ba maemo, likhoto lihlopheng tse fuoeng kotlo li ile tsa ts'oaroa ke leoto (makhetlo a mahlano ka kakaretso) a kopantsoeng le ts'ebetso ea leseli la cue bakeng sa 5 min. Likhoto tse sa otloang li ile tsa boela tsa pepesetsoa leseli la cue ka ho ba sieo ha maoto. Kamora nako ea kotlo ea 5-min, likhoto tsohle li ile tsa lumelloa ho fihlella lijo tse hlabosehang bakeng sa seboka sa 30-min le ts'usumetso e nang le maemo e ts'oaroang hanyane ka hanyane (10 min cue light on, 10 min cue light off, 10 min cue light on).

Tlhahlobo ea lipalopalo.

Litheko tsa moputso oa motheo li ne li hlalosoa e le boleng bo tlase ba 5 d pele ho phihlello ea lijo tsa jarete bakeng sa sehlooho ka seng. Likheo tsa meputso li ile tsa hlahisoa e le phetoho ea liperesente ho tloha boleng bo tlase ba motheo. Lintlha tse mabapi le liperesente tsa meputso ea meputso ea motheo, boleng ba boima, tšebeliso ea caloric le tšebeliso ea mafura li ile tsa hlahlojoa ke lintlha tse peli, tlhahlobo e lekantsoeng ea phapang, ka phihlello (chow feela, phihlello e fihletsoeng kapa phihlello e atolositsoeng), mohloli oa khalori ( standard chow kapa cafeteria ja), vaerase (Lenti-control kapa Lenti-D2Rsh) le cue (paired kapa e sa lefelloeng ka kotlo) e le lintlha tse lipakeng tsa nako le nako e le sesosa sa kahare. Ha ho loketse, litlamorao tsa mantlha litlhahlobisong tsa phapang li ile tsa hlahlojoa hape ke liteko tsa Bonferroni post hoc. Litlhahlobo tsohle tsa lipalo li entsoe ka software ea GraphPad Prism.

References

References

Phetolelo ho:

· Paul J Kenny ([imeile e sirelelitsoe])