Am J Physiol Regul Compact Comp Comp Physiol. 2011 Apr; 300 (4): R876-R884.
E hatisitsoe Inthaneteng 2011 Feb 9. doi: 10.1152 / ajpregu.00655.2010
PMCID: PMC3075076
1,2 inahaneloang
Re kile ra tlaleha hore tsamaiso ea insulin ho arcuate nucleus ea hypothalamus e fokotsa tšusumetso ea ho ikemela, ho hlahlojoa ke mosebetsi oa ho itaola, ka likhoto. Hobane sebopeho sa ts'ebetso ea methapo ea methapo (CNS) e kopaneng le boikemelo ba boits'oaro ha se so hlahlojoe, thutong ea hona joale, re lekantse polelo ea c-Fos e le index ea ts'ebetso ea methapo ea methapo. Re koetliselitse likhoto ho hatella mochine oa "bar" ho latela mochini (FR) kapa kemiso e tsoetseng pele (PR) le polelo ea 'mapa oa c-Fos ho CNS, ha re bapisoa le polelo ea c-Fos maemong a laoloang ka letsoho. Re hlokometse polelo e ikhethileng ea c-Fos ho medial hypothalamus (arcuate, paraventricular, retrochiasmatic, dorsomedial, le ventromedial nuclei) ka ho ikopanya le ho qala ts'ebetso ea PR, le polelo ea c-Fos ho latela hypothalamus ea morao-rao le mokokotlo oa bethe ea stria terminalis e amanang le ho qala ha ts'ebetso ea FR. polelo ea c-Fos e ile ea eketseha ka har'a li-nucleus tsa li-rats tsa bobeli le tsa PR. Boithuto ba rona bo hatisa bohlokoa ba bobeli ba "hypothalamic energy homeostasis circry" le "limbic" potoloho ea mosebetsi oa moputso oa lijo. Ka lebaka la karolo ea medial hypothalamus ho taolo ea tekanyetso ea matla, boithuto ba rona bo fana ka maikutlo a hore potoloho ena e kanna ea kenya letsoho ho phumoleng melaoana maemong a maholo a matla a homeostasis.
mesolimbic dopaminergic (DA) potoloho, ho kenyelletsa le sebaka sa "ventral tegmental tegmental" (VTA) le lipalo tsa libaka tsa striatum le cortical, li fumanoe li bapala karolo ea bohlokoa mererong e susumetsang kapa e lefisang ea lihlopha tse ngata tsa lithethefatsi tsa tlhekefetso (13, 22-24, 26, 48). Patlisiso ea morao-rao e tsoang laboratoring ea rona le ba bang e fana ka maikutlo a hore potoloho ena ka tsela e tšoanang e bapala karolo ea bohlokoa lithutong tsa lijo le tse khotsofatsang. Tšebelisano e sebetsang le ea sebopeho sa potoloho e tsamaisang matla homeostasis e khothaletsoa ke litlaleho tsa phetoho ea moputso oa lijo ka boemo ba phepo ea liphoofolo (10, 14, 16, 43). Modulation ea moputso, ho kenyelletsa le moputso oa lijo, ka boemo ba phepo e nepahetseng kapa metabolic, e susumetsoa ka matla ke matšoao a neural le endocrine, ho kenyelletsa insulin (15), leptin (11, 18, 21, 30, 32), ghrelin (35), hormone ea melanin (MCH) (45), le orexin (5, 7): boteng ba li-receptors, ts'ebetso ea biochemical le ea cellular, le vivo kapa boits'oaro bo sebetsang ba lipontšo tsena tsamaisong ea methapo ea methapo (CNS) li bontšitsoe haholo lilemong tsa morao tjena.
Li-circry tsa li-legion li atolositsoe ka tsela e tšoanang ho bapala karolo ea ho fepa le ho fumana moputso oa lijo (2, 19, 28). Leha ho le joalo, ho na le libaka tse ling tsa tlatsetso tsa CNS. Haholo-holo, hamorao "hypothalamus" (LH) e 'nile ea tsejoa e le sebaka se kopanyang litaba tsa ho iphepa le boitšoaro ba ho ikhatholla (4, 31). Li-neuron tsa Orexinergic le signature ea leptin ho LH li bontšitsoe e le tsa bohlokoa bakeng sa ho fepa le moputso oa lijo (5, 29, 30). Haufinyane tjena re hlokometse hore insulin e laetsoeng ka har'a "cerebral" ea methapo ea kutlo kapa e ka 'na ea kena ka har'a arcuate nucleus ea hypothalamus (ARC) e ka fokotsa ho ikemela, empa tsamaiso ea "insulin" ho "VTA" kapa "nucleus accumbens" ha e na phello ho moputso ona o khethehileng ("paradigm").15). Kahoo, ho bonahala eka libaka tse ngata tsa "hypothalamic" li ka bapala karolo ea bohlokoa ho khothalletseng lijo le phihlello ea lijo, 'me li lumellana le sena, motho a ka nahana hore libaka tsa hypothalamic li hlophisitsoe hantle ho ikopanye le tsamaiso ea lijo. Ho qala ho etsa tlhahlobo-kholo ena, re nkile 'mapa oa c-Fos ho CNS ea likhoto tse koetliselitsoeng ho ikarabela ka boits'oaro, kamora thupelo e tsitsitseng (FR), kapa kamora boikoetliso bo tsoetseng pele (PR), mosebetsi o thata. bakeng sa ho hlahloba tšusumetso (20).
LISEBELISOA LE MEKHOA
Lintho.
Lihlooho e ne e le likhoto tse tona tsa Albino (325-425 g) tse tsoang Simonsen (Gilroy, CA). Likhoto li ne li bolokiloe ho chow ad libitum. Li ile tsa bolokoa ka potoloho ea lefifi le lefifi la 12: 12-h le mabone a bonesitsoeng ka 6 AM mme ba ile ba koetlisoa le ho lekoa lipakeng tsa 7 AM le motšehare, maemong a postpandial le postabsorptive. Mekhoa eohle e etsoang likhoto e ile ea latela litataiso tsa Mekhatlo ea Naha ea Bophelo bakeng sa tlhokomelo ea liphoofolo 'me ea amoheloa ke Komiti ea Komiti ea Ts'ebeliso ea Liphoofolo le Ts'ebeliso ho VA Puget Sound Health Care System.
Itokolle boithapollo.
Mekhoa e ne e ipapisitse le mekhoa ea rona e phatlalalitsoeng (15) mme li ne li etsoa ho likhoto tse fepehileng. Teko e kenyelelitse mekha e meraro: ho itlhahisa ho qala boikoetliso, Koetliso ea FR, le koetliso e tsoetseng pele ea (PR) sebelisa PR algorithm ea Richardson le Roberts (38). Algorithm ea PR e hloka 1, 2, 4, 6, 9, 12, 16, 20, 28, 36, 48, 63, 83, 110, 145, 191, 251, 331, 437, 575 jj.) Mechini ea khatiso ea lever bakeng sa ho tlisa meputso nakong ea thuto (38). Likhoto li ile tsa koetlisetsoa ho itaola 5% sucrose (moputso oa 0.5 ml) e hlahisoang moamohelong oa mokolokeli oa metsi. Mabokose a sebetsang, a laoloang ke sistimi ea Med Associates (Georgia, VT), a ne a e-na le levers tse peli, empa lever e le 'ngoe feela (lever e sebetsang, e khutšoang) e ile ea kenya pampiri ea infusion. Mechine ea khatiso ho lever e ngoe (ea sa sebetseng, ea litheko) le eona e tlalehiloe. Joalokaha re hlokometse pejana, palo ea likhatiso ho lever e sa sebetseng e ne e le tlase haholo (e le tlase ho mechine ea khatiso ea 10 / seboka). Tharollo ea sucrose e ile ea kenngoa ka setsing sa pokello ea metsi bakeng sa ts'ebeliso ea molomo (Med Associates, St. Albans, VT). Koetliso ea mantlha e ile ea etsoa nakong ea lithuto tsa 1-h tlasa kemiso e ntlafatsang e tsoelang pele (FR1: mochine o mong le o mong oa lever o ile oa matlafatsoa). Seboka se seng le se seng se ne se qala ka ho kenngoa ha serethe se sebetsang le khanya ea leseli la ntlo e tšoeu e neng e lutse thutong eohle. Molumo oa 5-s (2900 Hz, 20 dB e kaholimo) le leseli (7.5 W tšoeu e holimo ka holimo ho lever e sebetsang) senepe sa discrete sa konkreite se tsamaisana le phano e ngoe le e ngoe ea moputso, ka nako ea 20-s ea ho qala ka nehelano ea sucrose. Koetliso ea FR e ile ea etsoa matsatsi a 10; ho araba ka botsitso ho fihlellwa ke karolo ea bohlano. Koetliso ea PR e ile ea etsoa bakeng sa 3 h / letsatsi le phahameng ka ho fetisisa bakeng sa matsatsi a 10. Likarolo tsa PR li ile tsa fela kamora 30 min ea ha ho na mochini oa khatiso o sebetsang o neng o arabela, ka nako eo lebone la ntlo le ileng la tima ka boits'oaro mme lever e sebetsang e ile ea hlakoloa; likhoto li ne li ntšoa ka kamoreng ebe li khutlisetsoa malapeng a tsona. "Nako ea ho emisa" e tlalehiloe Lethathamo 2 e emela nako eo sisteme e ileng ea felisoa ka eona; ka hona, mochini oa khatiso oa ho qetela o sebetsang o ka be o etsahetse 30 min pele ho nako ea ho emisa. Lintlha tsa boitšoaroLethathamo 2) emela li-average mananeo 6-10 bakeng sa koetliso ea FR, le mananeo 1-9 bakeng sa thupelo ea PR. Likhoto tse laoloang ka letsoho li ile tsa nkuoa kamoreng ea matlo 'me tsa beoa ka kamoreng e sebetsang e hloekileng e bonesitsoeng ka ntlo bakeng sa 60 min, ka phapusing ea ts'ebetso, ho etsa lipapatso le liphihlelo tsa kamoreng ea likhoto tse ipusetsang. Ha baa ka ba fuoa letho la ho ja kapa ho noha ha ba le ka har'a mabokose a tšebetso, 'me ba ne ba sena monyetla oa ho ba levers.
Letsatsing la ho qetela, likhoto li ile tsa beoa ka likamoreng ho latela matsatsi a thupelo mme tsa bolokoa ka likamoreng tsa 90 min, kamora moo tsa tlosoa, bakeng sa anesthesia, perfusion, le immunohistochemistry e latelang. Likhoto tsa taolo le tsona li ile tsa tlisoa ka phapusing ea ts'ebetso 'me tsa bolokoa ka phapusing e hloekileng, joalo ka matsatsi a koetliso, bakeng sa 90 min, kamora moo li ile tsa thethesoa le ho tšeloa. Hang kamora seboka sa ho qetela sa 90-min, likhoto li ile tsa thethesoa haholo ke inofation ea isoflurane mme ea tšeloa ka 0.9% NaCl e lateloa ke tharollo ea serame ea 4% paraformaldehyde. Nako ea ho thethefatsa bohloko le euthanasia e ne e ipapisitse le nako e tsebahalang ea polelo ea tlhoro ea protheine ea c-Fos ho 90-120 min kamora ketsahalo eo. Kahoo, polelo ea c-Fos e ne e tla bonts'a ts'ebetso ea CNS qalong ea mosebetsi oa boits'oaro, ho fapana le ho ba sephetho sa ha liphoofolo li fumana mosebetsi le ho noa sucrose. Boko bo ile ba tlosoa 'me ba hlophisoa ka paraformaldehyde matsatsi a' maloa; joale, li ile tsa beoa ka 20% sucrose-PBS, ka mor'a moo tsa kenngoa 30% ea tharollo ea sucrose-PBS. Boko bo ne bo arotsoe ka cryostat (Leica CM 3050S cryostat) bakeng sa immunohistochemistry.
c-Fos immunohistochemistry le palo ea lipalo.
Re sebelisitse mokhoa oa rona oa ho theha protheine ea c-Fos e sebetsang likarolong tsa boko (12). Sesebelisoa sa mantlha sa bokong bohle se ile sa etsetsoa polelo ea c-Fos. Likarolo tsa li-coronal tsa li-slide tse kentsoeng ka li-Slide tsa 12-μm li ile tsa hlatsuoa makhetlo a 3 ho PBS (Oxoid, Hampshire, UK). Likarolo li ne li koalloa 1 h ka mocheso oa kamoreng ho PBS e nang le 5% poli e tloaelehileng kapa serum ea esele. Likarolo li ne li hlatsuoa makhetlo a mangata ho PBS ebe li kenella bosiu bosiu ho 4 ° C ho tharollo ea mantlha ea antibody e entsoeng ka PBS. Likarolo li ne li hlatsuoa makhetlo a mararo ho PBS ebe li kenngoa ka lefifi mocheso oa kamore ho tharollo ea antibody ea bobeli e entsoeng ka PBS ea 1 h. Likarolo li ile tsa hlatsuoa kamora PBS 'me tsa beoa' me tsa koaheloa ka sekepeng sa Vectashield se behang bohareng (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Litšoantšo tsa dijithale tsa likarolo li fumanoe ho sebelisoa microscope ea Nikon Eclipse E-800 fluorescence e hokahantsoeng le k'hamera ea Optiphot le ho sebelisa software Pro Image (Media Cybernetics, Silver Spring, MD).
Kamora nako, re ile ra shebisisa libaka tse fokolang tse bonts'ang phapang e hlakileng lipakeng tsa maemo, bakeng sa bongata, le neuronal phenotyping. Ka ho khetheha, re ne re tsepamisitse maikutlo ho li-nucleus accumbens mantlha le khetla (NAc); nucleus ea anterior le ea ka morao ea stria terminalis (aBNST, pBNST); medial hypothalamic region [ventromedial nucleus (VMH), dorsomedial hypothalamus (DMH), paraventricular nucleus (PVN), sebaka sa retrochiasmatic (RCh), le ARC]; lateral hypothalamus (LH), ho kenyelletsa libaka tsa dorsal le ventral le sebaka sa pericileical (peF); VTA; brain stem [oli ea mohloaare e tlaase, hypoglossal (nXII) ea mochine o le mong, "nucleus ea morao-rao ea morao-rao" le "C1 / A1 adrenaline / noradrenaline nuclei]. Likarolo tsa Atlas-matched 12-μm li ile tsa hlahlojoa bakeng sa polelo ea c-Fos le ho eketseha ha likarolo tse lumellanang le libaka, ho ipapisitsoe le sethala sa Paxinos le Watson (34). Ka kopo bona Lethathamo 1 bakeng sa li-organiser tse ikhethang tsa li-stereotaxic. Sepheo sa mantlha sa lits'oants'o e ne e le ho bapisa mosebetsi o mong le o mong oa boits'oaro le taolo e fapaneng (PR vs. PRC; FR vs. FRC). Ho eketsa phapang e ka bang teng ho latela maemo a taolo ea boitšoaro, baetsi ba phahameng ba sehlohlolong ba lihlopha tsa PR le FR ba ile ba khethoa hore ba e hlahlojoe. Kahoo, ho ile ha hlahlojoa likhoto tsa 4 / 12 PR le 3 / 12 FR: Liroto tsena li ne li e-na le nomoro ea khatiso ea lever (sephetho sa mantlha sa boitšoaro) se neng se le seholo ho feta se fapaneng se khelohileng ka mokhoa o hlalositsoeng ke sehlopha sa bona sa boits'oaro. Setsi sa likhoto tsa taolo (likhoto tsa 5 PRC le 3 FRC, tse teng ka kamoreng e le ngoe ka nako e ts'oanang le likhoto tsa PR kapa PR) le tsona li ile tsa hlahlojoa. Sehlopha se eketsehileng sa likhoto tse tharo se ile sa nkuoa ka mokhoa oa FR ("FRext") ho lekanya nako ea ts'ebetso ea PR (ke hore, ka matsatsi a 20 kaofela, ha likhoto tsa PR li nkuoa ho tsoa ho FR ebe PR) ho lekola hore na phapang lipakeng tsa FR le PR e ne e le ka lebaka la mosebetsi oa boits'oaro kapa nako ea ts'ebetso. Masapo a FRext ha a ka a hlahlojoa le ho hlahlojoa ka mokhoa o hlophisehileng, empa libaka tse ikhethang tsa khahleho li ile tsa bapisoa le lihlopha tse ling tse 'ne, ho lumella palo e lekantsoeng, joalo ka ha ho bonts'itsoe ka kotloloho liphetho.
Bakeng sa boholo (40 × holisa), libaka tse lumellanang le atlas li ile tsa khethoa. Software ea ImagePro Plus (Media cybernetics) e ile ea sebelisoa ho nka setšoantšo sa sebaka se lakatsehang. Sebaka se ne se reretsoe ho baloa, 'me sebaka sa ho fumana lipalo tse ntle tsa lisele se thehiloe. Sebaka se ts'oanang le semelo (monyako) li ile tsa sebelisoa bakeng sa likarolo tse tsoang lihlopheng tse fapaneng tsa liteko, 'me palo ea software e baloang ka lisele tse ntle (palo ea tsona) e ile ea etsoa sehlopheng se le seng bakeng sa lihlopha tsohle tsa liteko, ho thibela liphetoho lipakeng tsa seboka ka morao. Bakeng sa tlhahlobo ea lipalo-palo, lipalo li ne li nkuoa ho tsoa ho rat e le 'ngoe feela haeba likarolo tse lumellanang kapa tse felletseng kahara sebaka ka seng (joalo ka ha li hlalositsoe ho Lethathamo 1) li ne li fumaneha; Lintlha tsa sebaka se itseng li ne li sa nkuoe khoebong haeba ho ne ho e-na le boemeli bo sa phethahalang ba linaha tse ling sebakeng seo.
Ts'ebetso ea tekano ea habeli ea tse nang le nomoro ea immunofluorescence.
Likarolo tsa boko li ile tsa nkuoa ho likhoto moo c-Fos e neng e lekantsoe, bakeng sa immunohistochemistry e nang le mabitso a mabeli. Hobane re ne re sa lakatse ho senya boitšoaro ba liphoofolo, ha lia ka tsa etsoa pele ka colchicine molemong oa ho ntlafatsa pono ea li-neurotransmitters tsa peptide. Ka hona, pono ea li-neuronal phenotypes tse sebelisitsoeng hammoho le mosebetsi oa boipheliso li ne li lekantsoe. Leha ho le joalo, ho qala tlhahlobo ea li-phenotypes tsa li-neuron tse sebelisitsoeng libakeng tse 'maloa tsa CNS, litšoantšo tsa dijithale (tse fumanoeng joalo ka ha ho hlalositsoe karolong e kaholimo) li nkuoe ka 20 ×, 40 ×, kapa 60 × (joalo ka ha ho bonts'itsoe litšomong) . Tsamaiso e silafatsang lintho tse peli bakeng sa glutamate decarboxylase (GAD), tyrosine hydroxylase (TH), CRF, neuropeptide Y (NPY), peptide e amanang le Agouti (AgRP), le tryptophan hydroxylase e ne e ka bapisoa le tlhahlobo ea c-Fos-immunoreactivity ho eona ea hae, ntle le hore motsoako oa c-Fos-Ab le e 'ngoe ea lithibela-mafu tse ka sehloohong e sebelisitsoe bakeng sa poloko bosiu bo le bong ho 4 ° C; Ka mokhoa o ts'oanang, li-antibodies tsa bobeli li ne li le ka tharollo e le 'ngoe' me li kenellelitsoe 1 h lefifing mohatsela oa kamore. Ho hlatsoa ethanol ea metsotso e 20 ho isa ho e 50 pele ho mohato o thibelang ho sebelisitsoe tlhahlobo ea orexin. Liteko tsa pele tsa ho ntlafatsa li ne li etsoa ho fumana hore na li-antibodies tsa mantlha li hlapolisoa ka nepo. Masole a mmele a mantlha a sebelisitsoeng e ne e le anti-c-Fos ea mmutla (1: 500) (sc-52) le anti-c-Fos ea mouse, (1: 800) (ka bobeli e tsoa Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA); mouse anti-GAD (1: 1,000), anti-tyrosine hydroxylase (1: 500), le anti-tryptophan hydroxylase ea linku (kaofela li tsoa Chemicon, Temecula, CA); anti-CRF ea mmutla (1: 500) (mpho e tsoang ho Dr. Wylie Vale, Salk Institute, CA); anti-NPY ea mmutla (1: 1,000), anti-AGRP (1: 1,000), le anti-orexin A ea pōli (1: 5,000) kaofela li tsoa Phoenix Pharmaceutical (St. Joseph, MO). Li-antibodies tsa bobeli tse neng li sebelisoa e ne e le anti-mmutla oa poli kapa anti-mouse ea Cy3-conjugated goat (Jackson Immunoresearch; West Grove, PA), Alexa Fluor 488 anti-mouse kapa anti-mmutla kapa esele e loantšang linku IgG (Molecular Probes, Eugene, OR) ; masole a mmele ohle a mahareng a hlapollotswe ho 1: 500. c-Fos / MCH li-immunostain tse peli li ile tsa lekoa ka tatellano; pele, bakeng sa lesole la mmele la bobeli la MCH (1: 2,500 antibody ea mantlha, Millipore) e nang le lesole la mmele la bobeli la anti-mmutla oa Alexa-488. Li-slide li ile tsa ts'oaroa hape ka 1% serum e tloaelehileng ea poli 'me ea silafatsoa bakeng sa anti-c-Fos (500: 5) le anti-mmutla oa cy1-poli e le lesole la mmele la bobeli. Ho hlatsoa ethanol ea 500-min 3% pele ho mohato o thibelang e sebelisitsoe bakeng sa tlhahlobo ea MCH.
Tlhahlobo ea lipalopalo.
Lintlha tsa sehlopha li hlahisoa e le mokhoa ± SE sengoloeng, litafoleng le lipalo. Bohlokoa bo hlalosoa e le P ≤ 0.05. Papiso ea lipalo-palo e etsoa lipakeng tsa lihlopha tsa liteko (FR vs. PR) kapa lipakeng tsa lihlopha tsa liteko le taolo e tsamaellanang (PR vs. PRC; FR le FRC) ho sebelisoa Liithuti tse sa sebetseng t-teko. Pearson coefficients pakeng tsa likhatiso tse sebetsang tsa lever le polelo ea c-Fos libakeng tse fapaneng tsa boko, hammoho le khokahano ea polelo ea c-Fos lipakeng tsa libaka tse fapaneng tsa boko tlasa maemo a tšoanang a liteko, li baliloe ho sebelisoa StatPlus: mac LE lenane la tlhahlobo ea lipalo bakeng sa mofuta oa Mac OS 2009 ke AnalystSoft. Re lekile likamano tse fapaneng (Pearson's R statistic) lipakeng tsa polelo ea c-Fos libakeng tse fapaneng tsa CNS. Re boetse re ile ra lekola kamano lipakeng tsa polelo ea c-Fos libakeng tse fapaneng tsa boitšoaro tsa CNS le boits'oaro. Lintlha tsa FR le PR tse tsoang ho likhoto, tseo boholo ba c-Fos bo neng bo entsoe ho tsona, li ne li sebelisetsoa likhokahanyo tsena.
LIPOTSO
c-Fos bongata.
Joalokaha re bone pejana, palo ea mechine ea khatiso ea lever e neng e sebetsa e ne e le kholo haholo ts'ebetsong ea PR vs. FR (Lethathamo 2), mme palo ea meputso ea sucrose e ne e le kholoanyane nakong ea ts'ebetso ea FR. Bolelele ba thuto bakeng sa likhoto tsa PR e ne e ka ba metsotso ea 90 (nako ea ho emisa - 30). Lethathamo 3 e thathamisa lipalo tsa lisele tsa c-Fos tse sa sebetseng libakeng tsohle tsa CNS moo palo ea tsona e ileng ea etsoa. Paterone ea polelo ea c-Fos bakeng sa likhoto tsa FR le PR e khutsufalitsoe ho Feie. 1. Ho bile le ts'ebetso ea bohlokoa ea medial hypothalamus (MHoko, composite ea ARC, PVN, RCh, DMH, le VMH) ea likhoto tse kenang PR lever e hatella sucrose, empa ha ho ts'ebetso e akaretsang litekong tse kenelletseng ho FR lever tobetsa sucrose, ha e bapisoa le taolo e amehang. Ka har'a medial hypothalamus ea litoeba tsa PR, ts'ebetso ena e etsahetse PVN, ARC, le VMH (Feie. 2). Ho hatella ha FR lever, empa eseng PR ho lever, ho ne ho amana le ts'ebetso e kholo kahare ho LH (e thehiloe haholo ts'ebetsong kahare ho sebaka sa potoloho). Mechini ea khatiso ea lever e sebetsang ka bobeli le polelo ea c-Fos ea bobeli li ne li bapisoa pakeng tsa lihlopha tsa FRext le FR (MHoko, 946 ± 26 le 911 ± 118; ARC, 176 ± 18 le 186 ± 10; LHoko, 468 ± 79 le 378 ± 34; LHpeF, 200 ± 31 le 173 ± 15, ka ho latellana), e fana ka tlhahiso ea hore phapano ea sebopeho sa polelo pakeng tsa lihlopha tsa FR le PR ha e amane le nako ea thupelo / boiphihlelo empa mofuta oa mosebetsi oa bohlokoa. Bakeng sa sehlopha sa FR, ho bile le keketseho e kholo ea polelo ea c-Fos ho BNST, e hlokometsoeng ho aBNST le pBNST ka bobeli. Ho hatella ka bobeli ha FR le PR ho ne ho amana le ho eketseha ha li-c-Fos-immunopositive neurons ka har'a khetla ea NAc; lipalo tsa c-Fos li ile tsa eketseha haholo mokokotlong oa NAc ho tloha ho likhoto tse kenelletseng mochining oa FR lever, ka mokhoa o sa tsotelleng o lebisang polelo ea c-Fos ho likhoto tse kenelletseng khatisong ea PR lever. c-Fos ha ea ka ea eketseha ho VTA ka mosebetsi oa PR, leha mokhoa o sa nahaneleng oa keketseho o ile oa bonoa ka mosebetsi oa FR. Kamora nako, c-Fos e ile ea eketseha ka matla holima "hypoglossal" (cranial nerve XII) bokong ba boko ba litoeba tse koetliselitsoeng PR, empa eseng bakeng sa FR.
polelo ea c-Fos e ile ea bonoa libakeng tse ling tsa CNS, ho kenyelletsa amygdala le cortex ea amygdala (Feie. 3). Leha ho le joalo, polelo e ile ea bonoa maemong ohle a taolo hammoho le ho ikamahanya le mesebetsi ea PR le FR, ho fana ka maikutlo a hore likarolo tse sa hlatsuoang tsa ts'ebetso (ho sebetsana, ho kenella ka phapusing ea ts'ebetso) li kanna tsa baka ts'ebetso ena. Keketseho libakeng tsena ha ea ka ea etsoa. Ka mokhoa o ts'oanang, ts'ebetso kahare ho likarolo tsa boko ntle le nXII e ile ea bonoa, empa e etsahetse ka kopanelo le maemo a taolo le a amanang le mesebetsi, hape e fana ka maikutlo a karolo ho tšebetso e sa hlasimoloheng ea boits'oaro kapa ea ts'ebetso.
Re lekile likamano lipakeng tsa polelo ea c-Fos libakeng tse fapaneng tsa CNS. Ha re kopanya lintlha tse tsoang lihlopheng tse hatellang ka lever, re fumane khokahano e mpe lipakeng tsa polelo ea c-Fos ho LH le VMH; ka hona, ts'ebetso ea VMH e ne e amahanngoa le ho fokotseha ha ts'ebetso ea LH (Pearson's R, −0.7986; t = −3.7534; P = 0.0056). Hape, re bone khokahano e ntle lipakeng tsa polelo ea c-Fos sebakeng se haelloang sa LH le VTA (Pearson's R, 0.7772; t = 3.493; P = 0.0082), e tsamaellanang le khokahano e tsebahalang ea monosynaptic pakeng tsa libaka tsena tse peli (bona puisano ho Ref. 2 'me 13). Re fumane khokahano e mpe e mpe lipakeng tsa polelo ea c-Fos ho VTA khahlanong le NAc-shell, hore na e lekoa ka thoko bakeng sa ts'ebetso ea FR (Pearson's R, −0.9262; t = −4.9125; P = 0.008) kapa bakeng sa ts'ebetso ea PR (Pearson's R, −0.9897; t = −9.7624; P = 0.0103), e lumellanang le ho kenella ho tsejoang ka ho pheta-pheta lipakeng tsa libaka tse haufi ho ea hoantiganti ea nigra le VTA (2, 13). Re boetse re lekile likamano lipakeng tsa polelo ea c-Fos libakeng tse fapaneng tsa CNS, le boits'oaro. Ha re kopanya tlhaiso-leseling e tsoang lihlopheng tse hatellang ka lever, re bone kamano e ntle lipakeng tsa c-Fos ho ARC, le likhatiso tsa lever tse sebetsang R, 0.8208; t = 3.8017; P = 0.0067).
Boitsebiso ba li-neuron bo hlahisitsoeng ka tšebeliso ea sucrose le tšusumetso ea sucrose.
Ho bokong ba boko, li-neuron tsa c-Fos-positive ha lia ka tsa bontša ho enta ho nepahetseng bakeng sa TH, enzymme e fokotsang litekanyetso tsa epinephrine le norepinephrine (le dopamine); ka hona, li-neuron tsena tsa catecholaminergic ha lia ka tsa bonahala eka li qaptjoa ke mesebetsi ea FR kapa PR. Leha ho le joalo, li-neurons tse ling tse nang le c-Fos-positive li bontšitse ts'ireletso e ntle bakeng sa tryptophan hydroxylase, ho bonts'a hore palo ea li-neuron tsa serotonin e qalile. Joalokaha ho bontšitsoe Feie. 4, ho ARC, 'mele ea lisele tse ntle tsa c-Fos e ne e lika-likelitsoe ke likhoele tse emisitsoeng ke AGRP,' me mokhoa o ts'oanang oa ts'ebetso ea NPY fiber / c-Fos o ile oa bonoa (ha oa bontšoa). Ho PVN, li-neurons tse nang le c-Fos-positive li ile tsa hlaha li pota-potile li-neuron tse ntle tsa CRF, empa ha ho colocalization e ileng ea bonoa (data e sa bontsitsoeng). Feie. 5 e bonts'oa litlamorao bakeng sa orexin le MCH ho LH. Li-neuron tsa Orexin li fumanoe ka har'a dLH le peLH. Le ha re hlokometse li-neuron tse ntle tsa MCH ho PeLH, ha e le hantle ho ne ho se na colocalization le c-Fos sebakeng seo sa LH. Leha ho le joalo, re bone c-Fos colocalization ho li-neuron tse nang le li-neuron kahare ho PeLH (Feie. 6, tlhōrōng), le c-Fos colocalization e fokolang haholo le MCH ho vLH (Feie. 6, Tlase). Ho lokela ho hopoloa hore ts'ebeliso ea lehae ka bobeli, le colocalization le c-Fos, li kanna tsa nyenyefatsoa bakeng sa li-neurotransmitters tsa peptide tse kang CRH, hobane likhoto li ne li sa khethoa ka colchicine. Kamora nako, kahare ho nucleus e bokella mantlha le khetla (Feie. 7), c-Fos e kopantseng le GAD, enzyme ea maiketsetso bakeng sa neurotransmitter GABA, e ile ea bonoa bakeng sa likhoto tsa FR le PR. Ho bile le maemo a thata bakeng sa TH ka hara VTA; leha ho le joalo, li-neurons tse nang le c-Fos-positive li ne li sa bonoe hangata ebile li sa hlahe li ikhethile feela ka TH.
TŠOHLOA
Phuputsong ea morao-rao, re sebelisitse polelo ea mofuta oa pele oa c, F-Fos, ho sekaseka sebopeho sa ts'ebetso e mpe ea CNS e amanang le ho qala ha boits'ebetso bo matla ba ho itaola, ebang ke mosebetsi o hatellang (FR) kapa mosebetsi o sa hlokeng letho. mosebetsi o boima o tsoelang pele ho nahanoa ho bonts'a ho batla moputso, joalo ka ho ikatisa, le ho kenyelletsa litho tsa maoto le matsoho ka thata.22, 24, 49) (PR). Mekhoa ea ts'ebetso ea Hypothalamic e ne e fapane pakeng tsa mesebetsi e 'meli, ka ts'ebetso ea LH / limbic e etelletsang pele mosebetsing oa FR le medial hypothalamic / limbic activation predominating in the PR task (bona Feie. 1). Ho na le mabaka a mangata a sena. Taba ea pele, lipapatso tsena li ka "etsa 'mapa" joalo ka liphihlelo tse fapaneng ho CNS. Likhoto tse koetliselitsoeng tšebetso ea FR li ka lebella ketsahalo e bonolo, e nang le moputso o moholo. Tebello ea lijo tse nang le moputso e ntle e lokela ho susumetsa haholo mokhoa oa c-Fos o bonts'itsoeng litlelong tsa FR. Phapang e totobetseng ea sebopeho sa ts'ebetso e fana ka maikutlo a hore monyetla oa bobeli-hore liphoofolo tsa PR li na le boiphihlelo bo eketsehileng ka mosebetsi-ha o na monyetla o mongata, mme sena se tšehelitsoe ke tekanyo ea rona ea c-Fos ho hypothalamus ea likhoto tse amohetseng 20 FR , e bonts'ang ts'ebetso e ts'oanang le sehlopha sa FR, eseng sehlopha sa PR. Monyetla ona ka bobeli o ka lekoa ka ho eketsa ka thata boikoetliso ba FR le ho lekola liphetoho ts'ebetsong ea CNS, moo motho a ka bolelang phetoho ea maemo molemong oa ts'ebetso. Leha ho le joalo, athe palo ea liphihlelo tsa boikoetliso e kanna ea se ke ea ikarabella bakeng sa ts'ebetso ea ts'ebetso ea CNS, palo e tloaelehileng ea meputso e loketseng thutong e kanna ea: mosebetsi oa PR o ka ithutoa feela joaloka boiphihlelo bo "sa ruiseng letho", mme sena se ka amahanngwa ka tsela e sebetsang le khaello ea ts'ebetso ea LH. Kahoo, sebopeho sa ts'ebetso ea CNS qalong ea seboka se ka bonts'a maemo a ho se utloisise, joalo ka a paradigm ea sebaka se boemo: matla a ts'ebetso ka hare ho litho tsa maoto a maoto a khokahane ho ithuta le ho susumetsa. Re hlokometse phapang ea polelo ea c-Fos ho medial hypothalamus ea liphoofolo tsa FRC. Haholo-holo ka har'a PVN, phapang ena e ka ba ts'ebetso e kholo ho likhoto tsa FR, moo tloaelo e lebileng ho likhahla tsa c-Fos vs. FRC e hlokometsoeng (Lethathamo 3). Leha ho le joalo, ts'ebetso e akaretsang ea medial hypothalamic activation e ne e sa fapana pakeng tsa liphoofolo tsa FR le FRC.
Re lokela ho hlokomela hore le ha sepheo sa rona e ne e le ho khetholla libaka tsa CNS tse kenyang letsoho ho qalang boits'oaro, qeto ea nakoana ke ho hong ho lokelang ho nahanoa. Joalokaha ho hlalositsoe ka tlase, joale ho ananeloa hore li-subcompriers tse fapaneng tsa boits'oaro ba ts'ebetso kapa tse sebetsang li tsamaisoa ka ts'ebetso ea lipalo tse fapaneng tsa li-neurons (13, 23, 33, 49). Re ke ke ra bolela ka botlalo hore ts'ebetso ka lebaka la ho hatella pele haholo kapa ho nyekeloa ha meputso e kanna ea kenya letsoho ho itseng lits'ebetsong tseo re li boneng. Seo re se fumaneng se fana ka motheo oa lipatlisiso tse ling mabapi le likarolo tsa libaka tsa CNS ka likarolo tse fapaneng kapa likarolo tsa mosebetsi oa ho itaola, 'me lithutong tse joalo, tekanyo ea mefuta e meng ea pele e nang le linako tse fapaneng tsa “ho” le ho “tima” (36) e tla ba molemo haholo.
Lits'ebetso tseo re li fumaneng polelong ea c-Fos lipakeng tsa likarolo tse fapaneng tsa boko li tšehetsa ts'ebetso e tsebahalang ea libaka tsa hypothalamic le li-legic legic bakeng sa mosebetsi ona oa moputso, joalo ka lipakeng tsa LH le VMH, le lipakeng tsa sebaka sa potoloho ea LH le VTA (bona puisano ho Ref. 2 'me 13). Re boetse re ile ra hlahloba likhohlano lipakeng tsa polelo ea c-Fos libakeng tse fapaneng tse sebetsitsoeng. Khokahano pakeng tsa c-Fos ho ARC le metjeko ea khatiso ea lever e lumellanang le karolo e hlalositsoeng hantle ea ts'ebetso ea ARC ho ja lijo (1); ka maikutlo a rona a pejana a hore ente ea insulin ka ho khetheha ho ARC e fokotsa ho ikemela (15); ka litlaleho tsa pele tsa karolo e mahlonoko ea ARC, le li-neuron tsa eona tsa morao-rao, ho fumana le ho etsa ts'ebetso ea ts'ebetso ea cocaine (40-42); le ka likhakanyo tse boletsoeng ho tloha ho ARC ho ea ho NAc (17). Kahoo, ARC e kanna ea nka karolo ea bohlokoa boits'ebetsong bo susumetsoang ba ho batla le ho fumana mefuta e mengata ea mehopolo e khotsofatsang, e kenyelletsang, empa e sa lekanyetsoe, ea lijo. Kamora nako, re hlokometse ts'ebetso e kholo ea PVN le VMH ka ho qala ha PR ho batla. Sena se tsamaisana le likarolo tse tsebahalang tsa li-medial hypothalamic nuclei taolong ea takatso ea lijo, khokahano ea synaptic e tobileng le ARC, le ho hokahanya khokahano le limbic circry (1, 27, 37).
Re fumane kamano e mpe pakeng tsa polelo ea c-Fos ho VTA vs. NAc-shell, ekaba e lekiloe bakeng sa ts'ebetso ea FR kapa PR. Ho ne ho makatsa hore ts'ebetso e matla ea VTA ha e e-so bonoe ka ho kopanngoa le tsamaiso ea PR kapa FR sucrose (lits'ebetso tse fapaneng). Mohlomong ho fumana hona ho bonts'a nako ea tekanyo ea rona, ho shebana le libaka tsa CNS tse ka bang teng tse qalang mosebetsing, tseo liphoofolo tsena li neng li koetlisitsoe hantle ho tsona. Sena se ka tsamaellana le se hlokometsoeng le mohopolo oa Schultz (44), ts'ebetso ea dopamine neuronal e sebetsa e le lets'oao la monyaka kapa meputso e sa lebelloang, mme ts'ebetso ena e fokotsehe ka lebaka la boikoetliso. Leha ho le joalo, ho lokolloa ha dopamine nakong ea ho ts'oara liphoofolo tse koetlisitsoeng ho bontšitsoe e le ketsahalo e hlakileng haholo le e fokolang ea nakoana (39). Kahoo ho ka etsahala hore mekhoa eo re e boneng e ka ba ea bohlokoa haholo le sehlopha se seholo sa ho ithuta (ke hore, matla a lipalo). Re hlokometse ts'ebetso ea NAc ka kopanelo le ho nka nako ea ho iketela ha FR le PR ka linako tsohle. Ka bobeli ts'ebetso le ts'oaetso ea li-neuron tsa NAc li tlalehiloe li kopane le ts'ebetso ea moputso oa karolo ea bohlokoa, mme mokhoa oa ts'ebetso / ts'ebetso o itšetlehile ka koetliso le tikoloho, 'me e amana le likarolo tse fapaneng tsa boitšoaro (mohlala, boits'oaro, mokhoa oa ho kena, tšebeliso).6, 33, 50). Joalokaha ho boletsoe ka holimo, tekanyo ea c-Fos e ne e ke ke ea khahlisa ketsahalo e joalo. Carlezon e hlahisitse tlhahiso ea hore "moputso" o amahanngoa haholo le ho fokotseha hoa ts'ebetso ea li-neuron tsa NAc, ke hore, li-spiny neurons tse mahareng ("spiny neurons").3). Sena ha se lumellane le seo re se hlokometseng — se ntlafalitsoeng haholo-NAC c-Fos ha se bapisoa le taolo ea ho sebetsana le li-neurons tsa c-Fos-colocalized le GAD, e lumellanang le ts'ebetso ea li-neuron tsa spiny tsa kati (GABAergic) - empa ha re a ka ra hlahloba ka kotloloho thibelo ea "neurc" ea neuronal ”. Ts'ebetso ea NAc le ts'ebetso li ka hlaha ka nako ea mesebetsi ea bohlokoa, ka tatellano ea bohloeki le ba nakoana. Ho latela pono ea thupelo ena, motho a ka fihlela qeto ea hore NAc e nka karolo ho qaleng ha ho etsa lintho ka mokhoa oa tšebeliso ea bohlanya, ka karolo ea mantlha ea NAc e kentse letsoho ts'ebetsong ea makoloi le khetla ea NAc e kenyang likarolo tsa mosebetsi le sepheo sa mosebetsi.
Re boetse re hlokometse ts'ebetso ea libaka tse peli tse kholo tsa BNST (ka pele le ka morao) literekeng tsa FR. BNST ke karolo ea "legic circry" e fetolang likarabo tsa neuroendocrine ho liphihlelo tse pheta-phetoang tsa khothatso (8, 9), hape, ka tsela e kh, ol associated o, e hokahana le thuto ea ho phehella. Leha karolo ea eona e hlalositsoe ka botlalo haholo mabapi le liphihlelo tsa khatello ea maikutlo khafetsa, sepheo sa rona se bonts'a karolo e pharalletseng bakeng sa BNST: BNST e ka fetola likarabo tsa CNS ho pheta-phetoang, hammoho le maikutlo a mabe kapa a khatello. Kaha re bone ts'ebetso ena qalong ea FR, empa eseng PR, ts'ebetso, ho hloa BNST ho kanna ha tlangoa le moputso o eketsehileng oa koetliso ea FR. Ho shebella ha rona ha ho ts'ebetso e tobileng ea li-neuron tsa CRF ho fana ka maikutlo a hore ho arabela ka matla bakeng sa sucrose ha ho khatello e kholo; leha ho le joalo, polelo ea c-Fos ho li-neuron tse ling tsa PVN e tsamaisana le phetoho ea khatello ea maikutlo (46). Ebile, Ulrich-Lai le basebetsi mmoho ba tlalehile hore, ba sebelisa mokhoa o fapaneng oa ho ja / ho fepa paradigm, li-sucrose ente modulates mosebetsi oa PVN (47). Qetellong, re hlokometse ts'ebetso ea methapo ea methapo ea kutlo e amanang le PR empa eseng ts'ebetso ea FR. Bohlokoa ba sena bo ka hakanngoa feela; Monyetla o mong ke oa hore boleng ba tatso ea sucrose bo ka phahamisoa ho likhoto tse sa fumanang meputso e fokolang ea sucrose.
Ho ts'oara le ho nka lintho ka mokhoa oa ho khetha ho lokela ho nkuoa e le boiphihlelo ba bongata, bo matla ka nako, kaha ho ts'oaroa ho ka baka matšoao a amanang le "caloric" ea "sucrose", hammoho le ho lula le alliesthesia kahare ho seboka.25). Ha lipatlisiso tsa rona li shebile tšusumetsong ea matšoao a pheritine ea endocrine, joalo ka, insulin le leptin, ho fetola moputso oa lijo, litlamorao tsa tsona li ka fetoha ka kotlolloho lipakeng tsa bo-ralitaba ka li-transmitter le li-neuropeptides tse etsang karolo ea nakoana kapa ea nako e telele Moputso oa ho fepa kapa oa lijo (bona lipuisano ho Ref. 14). Boithuto ba hona joale bo fana ka leseli ho sena; re bone tšebetso e 'ngoe ea li-neuron tse hlahisang MCH kapa orexin, li-neuropeptide tse peli tse bitsoang orexigenic. Liphumano tsena li kanna tsa nyenyefatsa karolo ea MCH kapa orexin moputsong oa lijo, kaha immunocytochemistry literekeng tse sa tšoaroang ke colchicine ha ho pelaelo hore e fokolitse pono ea bobeli ba li-neuropeptide tsena. Ts'oaetso ea li-neuron tse sebetsitsoeng ka hara LH e lumellana ka kakaretso le lithuto tse ngata tse kenyang li-neurone tsa orexin ho fepa, moputso oa lijo, le moputso oa kakaretso oa ts'usumetso (mohlala, 5, 7, 29). Re bone ts'ebetso ea li-neuron tsa peFLH orexin. Aston-Jones le basebetsi-'moho (5) ba qapetse karolo ea palo e fapaneng ea bongata ba LH orexin neurons ka boitšoaro ba moputso mme ba kentse li-neurons tsa peFLH orexin ka mokhoa o khahlisang, ho fapana le moputso ka mong. Ka hona, ho fumana ha rona ho fana ka maikutlo a karolo bakeng sa LH orexin ka mokhoa o khahlisang, mme mohlomong le ho sekamela ho "lever" e sebetsang kapa ho etsa lintho tse ling bakeng sa ho ipolaea.
E lokelang ho nahanoa ka bokamoso ke ho ikhetholla kapa ho akaretsa ha sucrose e le tšusumetso e ntle. Hore na mokhoa oa ts'ebetso ea pele ea CNS eo re e tlalehang mona o ikemiselitse bakeng sa lijo e le tšusumetso, kapa o akaretsa ho tse ling tse nang le moputso o motle, o sa ntse o lokela ho ikemisetsa. Joalokaha ho boletsoe kaholimo, haholo mosebetsing oa FR, ho inka meputso e mengata ea sucrose ho ka lebelloa ho ba le litlamorao tsa metabolic, ka modumo ea tokollo ea li-hormone (mohlala, cholecystokinin, ghrelin, insulin) le liphetoho ts'ebetsong ea peripheral le CNS neural. Liphetoho tsena li ne li ke ke tsa lebelloa ho bapala karolo e tobileng mekhoeng ea pele ea ts'ebetso ea CNS eo re e lekantseng empa e ka bapala karolo ho ithuteng mabapi le moputso oa sucrose nakong ea thupelo. Hape, li-neuropeptide tse kang orexin li ka ba le tšusumetso e matla.
Boithuto ba rona bo emetse, ho tsebo ea rona, pontšo ea pele ea ts'ebetso ea methapo e ikhethileng ea medial hypothalamic nuclei qalong ea boikemelo ba ho ikemela, ho kenyelletsa PVN, e kentsoeng ts'ebetsong ea homeostasis le karabelo ea khatello ea maikutlo, le ARC, e bohlokoa bakeng sa homeostasis ea matla, maikutlo a phepo, le taolo ea lijo. Habohlokoa, re hlokometse ts'ebetso ea "medial hypothalamus" le NAc, hammoho le PR ho qala, ho fana ka maikutlo a hore libaka tsa homeostatic le tse ling tsa maiketsetso li bapala karolo ho theheng tsamaiso ea boitaolo. Liwebsaete tse ling tsa maoto tse potolohileng li ka hokelloa ka nako e 'ngoe ea mosebetsi o tlang nakong e tlang.
Mehopolo le Bohlokoa
Le ha ho le joalo, nalaneng, lithuto tsa boits'oaro bo susumetsang le moputso li ka baka tšitiso ea "CNS limbic circry", ho na le bopaki bo bongata bo hatisang tšebelisano e matla ea tšebelisano lipakeng tsa litho tsa maoto le matla a homeostasis. Phuputso ea morao-rao hona joale e fana ka maikutlo a bohlokoa ba mohlomong ba medial hypothalamic nuclei mosebetsing o susumetsoang oa sucrose. Ho tloha tlhahlobong ena, lithuto tsa nako e tlang li ka lekola hore na karolo ea medial hypothalamus ea hlokahala le hore na ts'ebetso ea eona e kenelletse ho batleng meputso e meng e kang lithethefatsi tsa tlhekefetso. Ho kenyelletsa moo, liphumano tsa thuto ena li fana ka lebaka la ho ithuta liphetoho tse mabapi le boits'oaro bo khothalletsoang maemong a kopanang le physiology e fetotsoeng ea methapo ea maikutlo, joalo ka ho nona.
LITABA
Patlisiso ena e ne e tšehelitsoe ke Institutes tsa Naha tsa Bophelo Grant DK40963. Dr. Dianne Figlewicz Lattemann ke Setsebi sa Lipatlisiso sa Tlhahlobo ea Boithuto bo Holimo, Lenaneo la Lipatlisiso la Li-biomedical Laborator, Lefapha la Litaba tsa Veterans Puget Sound Health Care System, Seattle, Washington. Dr. Sipols o tšehelitsoe ke Lekhotla la Mahlale la Latvia of Science Grant 04.1116.
LITLHAHISO
Ha ho na likhohlano tsa phaello, tsa lichelete kapa tse ling, tse phatlalatsoang ke bangoli.
LINTLHA TSA LITLHAHO
Re leboha Drs. Yavin Shaham, Stephen Benoit, Christine Turenius, le JE Blevins bakeng sa likeletso le lipuisano tse thusang.
LITLHAHISO
;