Gynnsamma effekter av mycket god mat på de beteende- och neurala motgångarna som orsakas av tidigt livssituation hos kvinnliga råttor (2015)

Int J Biol Sci. 2015; 11 (10): 1150-1159.

Publicerad online 2015 Aug 1. doi:  10.7150 / ijbs.12044

PMCID: PMC4551751

Gå till:

Abstrakt

Denna studie undersökte effekterna av mycket välsmakande mat under ungdomar på de psyko-emotionella och neurala störningarna som orsakats av tidig livsstressupplevelse hos kvinnliga råttor. Kvinnliga Sprague-Dawley-pups separerades från dammen för 3 h dagligen under de första två veckorna av födseln (MS) eller lämnad ostörd (NH). Hälften av MS-honorarna fick gratis tillgång till chokladkakor utöver AD libitum chow från postnatal dag 28. Valpar utsattes för beteendestest under ung vuxen ålder. Plasmakortikosteronresponsen mot akut stress, ΔFosB och hjärnavledande neurotrofisk faktor (BDNF) -nivåer i hjärnområdena analyserades. Total försämring av kaloriintag och kroppsvikt under hela försöksperioden skilde sig inte mellan de experimentella grupperna. Tillträde till kakor under ungdomar och ungdomar förbättrade ångest- / depressionliknande beteenden genom MS-upplevelse. ΔFosB-uttrycket minskade, men BDNF ökade i kärnans accumbens av MS-kvinnor och AFosB-uttryck normaliserades och BDNF ökades ytterligare efter kaketillgång. Cortikosteron svar på akut stress stannades av MS-upplevelse och cookieåtkomst förbättrade inte det. Resultaten tyder på att kaketillgång under ungdomar förbättrar de psyko-emotionella störningarna hos MS-kvinnor, och ΔFosB och / eller BDNF-uttryck i kärnan accumbens kan spela en roll i dess underliggande neurala mekanismer.

Nyckelord: Tidig livslängd, Mycket välsmakande mat, Nucleus accumbens, Female

Beskrivning

Det finns en växande bevisning för att identiska dietmekanismer kan ha divergerande svar mellan könen. På molekylär nivå har det visats att det finns sexuellt dimorfa svar på hippocampaltranscriptomen mellan manliga och kvinnliga råttor utsatta för samma diet 1. På metabolisk / neuroendokrin nivå uppvisar kvinnliga råttor olika hypotalamiska neuropeptidsvar på en långvarig hög fet diet 2 och högre kapacitet än män för att kompensera en hög lipidtillströmning 3. Kortfristiga, högt feta matade vuxna kvinnor har minskat glukokortikoidreceptor-mRNA-nivåer i hippocampus och deras hypotalamus-hypofys-adrenal (HPA) -axel svarar annorlunda från män till en efterföljande stress 4, 5. På beteendemässig nivå minskar risken för kortvarig exponering av vuxna råttor till fettdieten ångest och ökar prospektering hos män, medan den har motsatt effekt hos kvinnor 6. Pubertet är en viktig utvecklingsperiod som kännetecknas av ökad endokrin plasticitet och förändringar i stressresponsivitet 7. Studier har föreslagit att posten-avvänjning med hög fetthalt kan modifiera den basala HPA-axelaktiviteten och de endokrina reaktionerna på en akut stress genom att påverka både stress och metaboliska mediatorer på ett sexuellt dimorft sätt 8, 9. Vi har tidigare funnit att långvarig konsumtion av mycket välsmakande mat under tonåren ökar ångest- och depressionliknande beteenden hos hanrotter, men inte hos honrottas 10. Långvarig konsumtion av cafeteriediet med hög fetthalt (32% fettinnehåll) förbättrade beteendemotstånd både hos han- och honrotter som utsattes för ett liknande protokoll för maternal separation (MS) som användes i denna studie, med större fördelaktiga effekter hos män 11. De beteendemässiga och neuroendokrina motgångarna som observerats i våra kvinnliga MS-råttor 12 verkade skilja sig från de hos manliga MS-råttor 13, 14.

I vår tidigare studie, långvarig tillgång till mycket välsmakande mat, en måttlig fet diet (~ 21% fett) 6, 15, under ungdomar och ungdomar förbättrade vissa ångestrelaterade symptom och HPA-axelns dysfunktion hos manliga MS-råttor 14. Studier har föreslagit att modulering av stressaxelfunktionen är inblandad i det positiva känslomässiga beteendet med mycket välsmakande diet. Det är; exponering för en mycket föredragen diet med hög fett föreslogs för att minska stresskänsligheten 16; individer som erbjuds med mycket välsmakande mat hade mer trevliga känslor som tillfredsställelse, njutning och lust 17 och konsumtion av smaklig mat minskade sympatiska svar efter psykologiska och immunologiska påfrestningar 18, stresshormonnivåer efter återhållsamhet 19 och ångestliknande beteenden under det förhöjda plus-labyrintet i råttor 20. I denna studie förbättrades dock inte den måttliga feta kosten (~ 21% fett) under ungdomar och ungdomar HPA-axelns dysfunktion hos MS-kvinnor, även om det förbättrade inte bara ångest-, utan också depressionsliknande beteenden.

För att undersöka de neurala mekanismerna som ligger till grund för den psyko-emotionella effekten av mycket välsmakande dietåtkomst hos våra MS-kvinnor har vi undersökt neurotrofisk faktor (BDNF) och ΔFosB-nivåer i nukleär accumbens (NAc). Den NAc, en basal forebrain struktur som utgör en mesolimbic dopaminerg vägen, har en roll i belöning, motivation och förstärkning 21. Utveckling av anhedonia, ett kärnsymptom av stor depressiv sjukdom, har tillskrivits dysfunktion av belöningsbanan, där NAc spelar en central roll 22, 23. NAc-neuronerna aktiveras att reagera på beteendestressparadigm 24, 25, och har blivit involverade i ångestsjukdomar 26, 27. Den mesolimbiska dopaminerga aktiviteten och den spänningsinducerad aktiveringen av NAc-neuronerna var stummade i våra manliga MS-råttor som visade ångest och depression-liknande beteenden 13, 28. BDNF föreslogs vara involverad i hedonisk matning via modulering av mesolimbic dopaminsystemet 29, 30, och exponering för en godtagbar diet ökade BDNF- och FosB-nivåer och dopaminreceptor D1-bindning i NAc 16, 31, 32.

Material och metoder

djur

Sprague-Dawley-råttor köptes (Samtako Bio, Osan, Korea) och omhändertagits i ett specifikt patogenfritt barriärområde med konstant temperaturkontroll (22 ± 1), fuktighet (55%) och en 12 / 12 ljus / mörk cykel (lyser på 07: 00 AM). Standard laboratoriemat (Purina Rodent Chow, Purina Co., Seoul, Korea) och membranfiltrerat renat vatten var tillgängliga AD libitum. Djur var omhändertagna enligt Guidelines for Animal Experiments, 2000, redigerad av koreanska akademin för medicinska vetenskaper, vilket överensstämmer med NIH: s riktlinjer för vård och användning av laboratoriedjur, reviderad 1996. Alla djurförsök godkändes av kommittén för vård och användning av laboratoriedjur vid Seoul National University.

Experimentellt protokoll

Nulliparösa honor och beprövade uppfödare hanar användes för avel i djuranläggningens laboratorium, och valparna uppföddes på ett kontrollerat sätt för att minimera och standardisera oönskade miljöstimuleringar från i livmodern liv. Tolv timmar efter bekräftelse av leverans [postnatal dag (PND) 1] manipulerades valpar som vi tidigare beskrivit 13, 14, 33 - 35. Varje kull tilldelades antingen för moderseparationsgruppen (MS) eller för gruppen som inte hanterades (NH). MS-valpar togs bort från deras damm och hembur och placerades nära varandra i en ny bur med flis (Aspen-rakning, Animal JS-sängkläder, Cheongyang, Korea) under 9:00 - 12:00 och återvände sedan till sitt hem bur och damm. Ingen ytterligare behandling för att hålla valparna varma under separationsperioden erbjöds. MS utfördes dagligen från PND 1 till 14, och sedan lämnades valparna med sin damm ostörd till avvänjning på PND 22. NH-gruppen förblev ostörd tills avvänjning med undantag för rutinmässig burrengöring utförd två gånger i veckan. På avvänjningsdagen valdes 2 NH och 4 MS honungar slumpmässigt från varje NH- eller MS-kull respektive placerades 2 NH- eller 2 MS-valpar tillsammans i varje bur. Två kvinnliga MS-valpar inrymda tillsammans fick fri tillgång till mycket välsmakande mat (HPF) (Oreo cookie, Kraft Foods Global, Inc., East Hanover, NJ, USA), förutom AD libitum Chow från PND 28 (MS + HPF-gruppen) och övriga 2-kvinnliga MS-valpar i varje kull (MS-grupp) och NH-valpar (NH-grupp) mottog endast standard chow. Näringsämneskompositionerna för standardchow och Oreo cookie visas i tabell Table1.1. Dagligt matintag och viktökning registrerades från PND 29. För utvärdering av 24 h-matintag gavs förutbestämd mängd chow och kakor, och på nästa dag vägdes vänster mängd chow och kakor och subtraherades från värdet på föregående dag. Särskild vård togs för att inbegripa spill. Kaloriintag beräknades i enlighet med näringsmedelskompositionerna för chow och kakor. Summa mängder mat som konsumeras av valparna i varje bur dividerades med antalet valpar i varje bur och varje beräknat värde betraktades som n = 1. Vatten var fritt tillgängligt för alla försöksgrupper och matförhållandena fortsatte under hela försöksperioden. Schematiskt diagram för experimentellt protokoll finns i figuren Figure11.

Figur 1 

Experimentellt protokoll.
Tabell 1 

Näringsinnehåll (%) i standard chow och Oreo cookie

Ambulatorisk aktivitet

NH, MS och MS + HPF-honor (n = 8 från 4 olika kullar i varje grupp, totalt 24-valpar från 8 olika kullar) utsattes för det ambulatoriska testet på PND 54. Vid varje försök placerades råttan i mitten av aktivitetskammaren (43.2 cm i längd, 42.2 cm i bredd och 30.5 cm i höjd, MED Associates, VT, USA), en transparent akrylkammare utrustad med två horisontella plan av 16 infraröda fotocelldetektorpar placeras i x, y dimension, åtskilda 2.5 cm från varandra, och dess ambulatoriska aktivitet övervakades av det datoriserade systemet för 30 min. Ljustillståndet i testrummet behölls på samma intensitet med djurrum under dagsljus. Ambulatorisk aktivitet mättes som totala antalet strålningsavbrott i den horisontella sensorn under varje konsekutiv 5 min-session. Defekeringsaktivitet, vikt av fekal boli, under ambulationstestet för varje råtta blev också poäng. Grooming aktivitet analyserades ytterligare; dvs förpaw och huvudstallning betraktades som rostral grooming och kropp, ben och svans / könsbestämning som caudal grooming 36. Aktivitetskammaren rengjordes med 70% etanol efter varje användning för att eliminera eventuella olfaktoriska signaler av den tidigare testade råttan.

Elevated Plus Maze

Två dagar efter det ambulatoriska aktivitetsprovet (PND 56) utsattes råttorna för beteendevurderingen i en förhöjd plus labyrint, en plusformad akrylmaze med två motsatta öppna armar (50 cm i längd och 10 cm i bredd) och två motsatta stängda armar (50 cm i längd, 10 cm i bredd och 31 cm i höjd), sträcker sig ut från en central plattform (10 cm x 10 cm). Hela apparaten var förhöjd 50 cm över golvet. Testförfarandet följdes som tidigare beskrivits 37. Varje råtta placerades i mitten av labyrinten mot en av de öppna armarna och fick sedan utforska labyrintens öppna eller stängda armar för 5 min. Den tid som spenderades i de olika armarna registrerades. Fyra tassar måste vara inuti ingångsledningen till varje arm, vilket signalerade början på den tid som spenderades i den specifika armen, och då togs sluttiden upp när alla fyra tassarna var utanför linjen igen. Labyrinten rengjordes med 70% etanol efter varje test för att förhindra påverkan av den tidigare testade råttan.

Tvångsvattentest

Tre dagar efter det förhöjda plus-labyrintestet (PND 59) utsattes råttorna för det tvångsvimmade provet enligt den tidigare beskrivna metoden 38. Varje råtta fick simma i en glascylinder (54 cm i höjd och 24 cm i diameter) fylld med vatten i 40 cm djup (23-25 ​​℃) under 5 minuter, och testsessionerna spelades in av en videokamera från sidan av cylindern. Varaktigheten för råttans rörlighet i vattnet bestämdes från videoband med hjälp av ett stoppur. Immobilitet definierades som det tillstånd i vilket råttor bedömdes utföra endast de rörelser som var nödvändiga för att hålla huvudet ovanför vattenytan.

Råttor placerades i testrummet minst 2 h före varje test för att minimera oönskade stresseffekter och alla beteendevurderinger utfördes mellan 9: 00 AM och 12: 00 PM av dagen för att undvika influenser av cirkadianvariationer. Behavioral scoring gjordes med observatören blind av behandlingen av råttorna.

Plasma kortikosteronanalys

En vecka efter slutet av beteendemöten placerades råttor i en fasthållningsbox i 2 timmar, där råttor kunde flytta sina fyra lemmar men inte ändra sin kroppsorientering. Svansblod uppsamlades vid 0, 30, 60 och 120 min tidpunkter under begränsningsperioden och centrifugerades vid 2,000 rpm under 20 min. Plasmaproverna frystes i flytande kväve och förvarades vid - 80 ° C tills de användes för analysen. Plasmanivåer av kortikosteron bestämdes genom radioimmunanalys med användning av 125I-märkt Coat-A-Count kit (Siemens, CA, USA). Analysens känslighet var 5.7ng / ml. Variationskoefficienten för analys var 4-12.2%.

Western blot-analys

Råttor som är naiva från beteendestesterna (n = 6 från 3 olika kullar i varje grupp; totalt 18 valpar från 6 olika kullar) offrades på PND 62 för Western blot-analys av ΔFosB- och BDNF-nivåer i hjärnregionerna. Retroperitoneala fettkuddar samlades vid tidpunkten för offringen och hjärnorna avlägsnades omedelbart efter avhuggning. Vävnadsprover av nucleus accumbens (NAc) och hippocampus dissekerades snabbt på is, frystes i flytande kväve och förvarades vid - 80 ° C tills de användes. NAc-vävnadsdissektionen utfördes med ett fint blad enligt metoden som användes i våra tidigare studier 28, 39; Emellertid kan en eventuell inkludering av närliggande ventromedialstriatum inte undvikas. Vävnaderna homogeniserades i en enda detergentlysbuffert (50 mM Tris, pH 8.0; 150 mM NaCl; 1% Triton X-100; proteas och fosfatasinhibitor cocktail 0.5%) och centrifugerades sedan vid 13,000 g för 20 min vid 4oC. Supernatanterna som överfördes till nya rör mättes med avseende på proteininnehåll med användning av ett proteinanalyspaket (Biorad DC, Biorad, Inc., Hercules, CA), alikvoterades vid en koncentration på 80 | ig / 20 | il i lysbuffert och lagrades vid - 80 ° C, annars används samma dag. Proverna blandades med laddningsbuffert (100 mM Tris, pH 6.8; 200 mM ditiotreitol; 4% SDS; 20% glycerol; 0.2% bromfenolblått) vid 1: 1 spädning, kokades i 5 minuter, kyldes snabbt på is och därefter elektroforaserad på 12% SDS-polyakrylamid-Tris-glycingeler. Proteinerna som överfördes till nitrocellulosamembran (Hybond-C, Amersham, Bucks, UK) behandlades med 5% icke-fettfri torrmjölk i 1X Tris-buffrad saltlösning-Tween (10 mM C4H11NEJ3; 0.145 M NaCl; 0.2% SDS; 0.1% Tween 20) över natten vid 40C. Membranen reagerades med polyklonal kanin-anti-FosB (1: 1000-utspädning; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA) eller anti-BDNF (1: 500-utspädning; Millipore, Temecula, CA, USA), och bundna antikroppar detekterades med kemiluminescens enligt tillverkarens instruktioner (Lumi-light western blotting substrat; Roche, Indianapolis, IN, USA) och kvantifierades med ett digitalt bildanalyssystem (LAS-1000, Fuji film, Tokyo, Japan). Digitaliserade värden för varje prov normaliserades till laddningskontrollen β-aktin, och sedan konverterades alla värden till relativa värden till det genomsnittliga värdet för NH-gruppen.

Statistisk analys

Data analyserades med en- eller tvåvägs [kortikosterondata; behandling (hantering eller livsmedelsförhållande, 2-nivåer vardera) X-tid (4-nivåer)] variansanalys (ANOVA) och förplanerade jämförelser mellan grupper utfördes av post hoc Fishers PLSD-test vid behov med hjälp av StatView-programvaran (Abacus, Berkeley, CA, USA). Kroppsvikt och matintagsdata analyserades vidare genom upprepade mått ANOVA, följt av Bonferroni-korrigering för P värdejustering. Nivån av betydelse sattes till P <0.05, och alla värden presenterades som medel ± SEM

Resultat

Matintag och viktökning

MS-kvinnor verkade vara lättare än de ålderspassande NH-kvinnorna tills PND 39 och viktskillnaden observerades inte därefter (Figur (Figure2A) .2EN). Statistiskt signifikanta skillnader (P<0.05) mellan NH- och MS-honor observerades under PND 32 - 39, förutom PND 36 och 37. Välsmakande livsmedelsåtkomst minskade viktdifferensen genom MS-erfarenhet, och den statistiska signifikansen mellan NH och MS + HPF försvann efter PND 36. Upprepad åtgärder ANOVA avslöjade att kroppsviktökning över tid skiljer sig mellan MS och MS + HPF [F(1,780) = 2.146; P= 0.0008], men inte mellan NH och MS. Daglig chowintag av MS-kvinnor skilde sig inte från de åldersrelaterade NH-kvinnorna (Figur (Figure2B) .2B). Cookieåtkomst undertryckte det dagliga chowintaget av MS-kvinnor, men det dagliga kaloriintaget tenderade att öka genom cookie-åtkomst utan statistiska signifikanser. Analys av kaloriintaget med upprepade åtgärder ANOVA avslöjade inga effekter av moderns separation och livsmedelsförhållanden. Det totala kaloriintaget under hela experimentperioden (PND 28-62) skilde sig inte mellan experimentgrupperna (Figur (Figure2C) .2C). Om 40% av den totala kaloriförbrukningen som användes av MS + HPF-kvinnor kom från kakorna (3259.921 ± 211.657 kcal från chow, 2184.641 ± 186.077 kcal från kakor). Retroperitoneal fettkudde av MS-kvinnor på PND 62 skilde sig inte från de åldrande matchande NH-kvinnorna och tenderade att öka med cookieåtkomst utan statistisk signifikans (P= 0.0833, MS vs MS + HPF) (Figur (Figure22D).

Figur 2Figur 2Figur 2 

Kroppsviktförstärkning (A), dagligt intag av chow och kalori (B), totalt kaloriintag (C) och vikt av retroperitonealt fettkudde (D). NH; icke hanterad matad med endast chow, MS; Möderseparation matad med endast chow, MS + HPF; mödraseparation matad med chow .

Behavioral bedömningar

Ambulerande aktiviteter av NH, MS och MS + HPF-kvinnor mättes i en datoriserad aktivitetskammare på PND 54. Ambulerande räkningar av MS-kvinnor under den första (0 - 15 min) och den senare sessionen (15 - 30 min) minskade signifikant jämfört med med NH-kvinnor; dock en betydande minskning (P<0.05) i förhållande till NH observerades endast under den senare sessionen i MS + HPF-gruppen (Figur (Figure3A) .3EN). Total avstånd som reste under den första 15 min-sessionen minskade avsevärt i MS (P<0.05), men inte i MS + HPF, jämfört med NH (Figur (Figure3B) .3B). Grooming beteende och defecation aktivitet blev poäng under det ambulatoriska aktivitetstestet (Figur (Figure3C3CD). MS upplevde signifikant ökad rostral grooming (P<0.05, NH vs. MS) medan kakåtkomst minskade det (P<0.05, MS vs MS + HPF) (Figur (Figure3C) .3C). Defektionsaktivitet hos MS-kvinnor tenderade att öka i förhållande till NH utan statistisk signifikans, och kaketillgången reducerade signifikant det (P<0.05, MS vs MS + HPF) (Figur (Figure33D).

Figur 3 

Ambulatoriskt aktivitetstest utfört på PND 54. Ambulanta räkningar skedde i följd vid varje 5 min-session. Grooming beteenden och defecation aktivitet under 30 min av det ambulatory aktivitet testet blev poäng. Totala ambulatoriska räkningar (A) och reste .

För att ytterligare bedöma angstliknande beteenden utsattes råttorna för ett förhöjt plus labyrintest 2 dagar efter det ambulatoriska aktivitetsprovet (PND 56). Den tid som spenderades i de öppna armarna minskade avsevärt hos MS-kvinnor (P <0.05), men inte i MS + HPF, jämfört med NH (Figur (Figure4A) .4EN). Procentandelen för öppen arm skiljer sig inte mellan de experimentella grupperna (Figur (Figure4B) .4B). För att bedöma depressionliknande beteenden utsattes råttor för tvångstestning 3 dagar efter det förhöjda plus-labyrintet (PND 59). Immobilitetslängden under 5 mina tvingade simningstest ökade signifikant hos MS-kvinnor (P <0.05) jämfört med NH och immobilitetspoängen för MS + HPF-kvinnor skilde sig inte från NH (figur (Figure44C).

Figur 4 

Tid spenderad i och tillträde till öppna armar under förhöjt plus labyrintest (A, B) och immobilitet under tvingat simtest (C). Råttor utsattes för det förhöjda plus-labyrintet på PND 56 och det tvångsvimmade testet på PND 59. NH; obehandlad matad med chow bara, .

Plasmakortikosteronnivåer

En vecka efter simtestet mottog råttor fasthållningsbelastning och svansblodarna samlades vid 0, 30, 60 och 120 mina tidspunkter under 2h av restraint-sessionen och användes för plasmakortikosteronanalysen (Figur (Figure5) .5). Basalkortikosteronnivåerna (0-tidpunkten) skilde sig inte mellan grupperna; De stressinducerade ökningarna av kortikosteronnivå var emellertid lägre hos MS-kvinnor än i NH vid 30 och 60 mina tidspunkter efter stressstart (P<0.05, NH mot MS vid varje tidpunkt). Plasmakortikosteronnivåerna av MS + HPF skilde sig inte från NH vid 30 minuter efter stressens början, men var lägre än NH vid 60 minuters tidpunkt (P <0.05; 394.29 ± 38.35 ng / ml i NH vs. 247.48 ± 24.57 ng / ml i MS + HPF). Analys av stressinducerade kortikosteronnivåer med 2-vägs ANOVA avslöjade huvudeffekter av moderns separation [F(1,56) = 8.814, P= 0.0045] och tid [F(3,56) = 9.335, P<0.0001] och ingen effekt av livsmedelsförhållandet. Betydande interaktioner mellan moderns separation och tid eller mellan mattillstånd och tid hittades inte.

Figur 5 

Plasmakortikosteronnivåer under 2 h av fasthållningssession. Råttor utsattes för spärrspänning efter en veckas återhämtning från det tvångsvimmade provet. Matningsförhållandet fortsatte under återhämtningsperioden. Råttor placerades i fasthållningsboxen .

ΔFosB och BDNF western blots

ΔFosB- och BDNF-nivåer i NAc undersöktes med western blot-analys (Figur (Figure6) .6). ΔFosB reducerades signifikant, men BDNF ökade i NAc hos MS-kvinnor (P <0.05) jämfört med NH (Figur (Figure6A6A & B). ΔFosB-nivån i NAc hos MS-kvinnor normaliserades genom kakåtkomst; dvs ingen skillnad mellan NH och MS + HPF och BDNF-nivån ökade ytterligare (P <0.05, MS vs. MS + HPF). BDNF-nivåer i hippocampus hos MS-kvinnor minskade markant i förhållande till NH (P <0.05) och det återhämtades inte genom åtkomst till kakor (Figur (Figure66C).

Figur 6 

Western blot-analyser av ΔFosB- och BDNF-nivåer i NAc (A, B) och BDNF-nivån i hippocampus (C). Råttor som är naiva från beteendestestningarna offrades på PND 62 för att samla vävnadsproverna för western blot-analys. NH; .

Diskussion

God tillgång till mat förbättrade psyko-emotionella beteenden hos MS-kvinnor

I denna studie visar beteendemässiga poäng som representerar ångest och depression, såsom ambulatorisk aktivitet, rostral grooming och defecation aktivitet under aktivitetstest; öppna armar stanna under förhöjt plus labyrint test; Immobilitet under tvingad simtest, förbättrades hos MS-kvinnor med fri tillgång till Oreo-kakor under ungdomar och ungdomar. Kortikosteronresponsen mot akut stress stannades hos MS-kvinnor, vilket rapporterades hos MS-män 14. Det trubbiga kortikosteronsvaret verkar vara en konsekvens av MS-erfarenhet; dvs erfarenhet av upprepad stress, eftersom HPA-axelns svar på akut stressutmaning verkade vara trubbig efter upplevelser av kronisk upprepad stress 40, 41. Studier föreslog att exponering för högt föredragen diet med hög fett kan ändra den basala HPA-axelaktiviteten och de endokrina reaktionerna på en akut stress 9, förbättra stressresponsen 17, 19 och minska ångestliknande beteende 18, 20. Också fri tillgång till Oreo-kakor (~ 21% fetthalt, en måttlig fet diet) under ungdomar och ungdomar normaliserade den ojämna HPA-axelfunktionen och förbättrade ångestliknande beteenden hos manliga MS-råttor 14. Det är troligt att adolescent cookieåtkomst kan förbättra den ojämna HPA-axelfunktionen genom MS-upplevelse, upprepad stress i det tidiga livet och förbättra beteendemotstånden. I denna studie förbättrade dock inte tillgången till kakor under ungdomar och ungdomar HPA-axelaktiviteten som svarade på akut stress hos kvinnliga MS-råttor. Det föreslås att den anxiolytiska och / eller antidepressiva effekten av adolescenskakatillträde hos kvinnliga MS-råttor inte kan relateras till HPA-axelfunktionen, fastän den var i manliga MS-råttor. Manliga och kvinnliga råttor skiljer sig åt i många neuroendokrina och beteendemässiga parametrar, och sårbarhet för stress är könsberoende 42, 43. Tidigare studie rapporterade att ett 7-dagsmåttigt fettdiet protokoll leder till en man-selektiv överdriven kortikosteron frisättning efter en akut stress 6.

God tillgång till mat och neuronfunktion i NAc hos kvinnliga råttor

Den föreliggande studien visade att ΔFosB-uttrycket minskade och BDNF ökade i NAc hos kvinnliga råttor genom MS-upplevelse. Det har rapporterats att antingen psykologisk eller metabolisk stress ökar ΔFosB-uttryck i NAc 44-46. Studier har föreslagit att transkriptionsfaktorn ΔFosB är relaterad till BDNF-uttryck i NAc-neuronerna 32, 47-49. Tillsammans föreslås att minskat ΔFosB och ökat BDNF-uttryck i NAc kan vara en långsiktig följd av MS-stress i det tidiga livet, eventuellt modulera NAc-neuronfunktionen. NAc-neuronfunktionen föreslogs att moduleras av beteendestressparadigm 24, 25 och dess dysfunktion har blivit implicerad i depression och ångestsjukdomar 22, 23, 26, 27. Faktum är att ökad BDNF-signalering i NAc har rapporterats i stressinducerade modeller av depression 50-52, och stressinducerad depressiv effekt blottades hos möss överuttryckande ΔFosB i striatum 53. Det är sålunda troligt att depression- och / eller ångestliknande beteenden hos kvinnliga MS-råttor kan relateras till minskat ΔFosB och ökat BDNF-uttryck i NAc.

I denna studie ökade kaketillgången under ungdomar ΔFosB och BDNF-uttryck i kvinnliga MS-råttor. Detta resultat överensstämmer med tidigare rapporter som visar att exponering för en godtagbar diet resulterar i ökade nivåer av ΔFosB i NAc 31, och den höga fetthalten ökade BDNF-nivåerna i NAc hos ΔFosB-överuttryckande möss 32. Med tanke på tidigare rapport som visar att ökat ΔFosB-uttryck i striatum utövar motståndskraft mot stressinducerade depressiva effekter 53, dras slutsatsen att ökad ΔFosB i NAc av våra MS-kvinnor med kakadåtkomst; dvs normaliserad till sin basala nivå, kan ha bidragit till antidepressiva och / eller anxiolytiska effekten av adolescent kaka tillgång. Det är emellertid inte klart om ökad BDNF-nivå i NAc hos MS-kvinnor med kakadåtkomst är inblandad i dess antidepressiva och anxiolytiska effekter, eftersom ökad BDNF-signalering i NAc rapporterades mestadels i depressiva modeller 50-52, men sällan i antidepressiva modeller. Ytterligare studier är motiverade.

Effekter av MS och HPF på hippocampala BDNF-nivåer

Minskad BDNF-nivå i hippocampus har rapporterats både hos han- och honrotter som utsattes för ett liknande MS-protokoll som användes i denna studie 54, 55. Samtidigt minskade BDNF-nivån i hippocampus hos våra kvinnliga MS-råttor i förhållande till NH-kontroller i denna studie. Hippocampal neurogenes har blivit involverad i symptom på ångest och depression 56, 57, och hippocampus är välkänt för att vara involverad i återkopplingsreguleringen av HPA-axelaktiviteten. Påminner om att HPA-aktiviteten stannades i våra MS-kvinnor, är det troligt att minskad BDNF-nivå i hippocampus kan vara involverad i ångest och / eller depressionstörningar vid MS-upplevelse, möjligen i samband med den trubbiga HPA-axelaktiviteten. Förhållandet mellan den hippocampala BDNF-nivån och HPA-axelaktiviteten i våra MS-kvinnor stöddes ytterligare av att tillgången till kakor inte förbättrade dem båda i denna studie. Tidigare studie visade att långvarig konsumtion av hög fetthalt (32% fett) ökar BDNF-uttryck i hippocampus hos manliga MS-råttor som utsattes för ett liknande MS-protokoll som användes i denna studie 58. Effekten av cookieåtkomst under tonåren (~ 21% fett) på hippocampala BDNF-nivåer av manliga MS-råttor undersöks för närvarande.

Beteendeeffekter av fett / sockerinnehåll i Oreo cookie

I denna studie förbättrade fri tillgång till Oreo-kakor de psyko-emotionella motgångarna hos kvinnliga råttor med tidigt livsstresserad upplevelse. Oreo cookie är en chokladkaka, inte bara hög i fett men också hög socker som visas i Tabellen Table1.1. I mänsklig studie minskade choklad med negativ humör jämfört med dricksvatten, medan inga effekter på neutralt och positivt humör uppstod 59. Och chokans stämningsförbättrande effekt var beroende av chokladens smaklighet (mjölkchoklad vs vanlig choklad), vilket tyder på att äta söt smaklig mat förbättrar en experimentellt inducerad negativ humörstatus. Det rapporterades att sackarosbegäran ökas hos deprimerade djur med kronisk mild stress och smaklig mjölkchokladbehov ökas specifikt hos personer med nedsatt humör 60. Fria val av sackaros och / eller svamp förutom att chada alla modulerade spänningsaxens svar på akut stress 61. Även kortvarig exponering för en måttlig fet diet (20% majsolja, liknande fettinnehåll med Oreo-kakor) inducerade neuroendokrina och beteendeförändringar på ett sexuellt dimorfiskt sätt 4-6. Sammantaget sluts det att socker- och fettinnehållet i Oreo-kakor kan ha bidragit till att förbättra de neurala och beteendemässiga motgångarna hos MS-kvinnor. Ytterligare studier är berättigade att undersöka om samma mängd fett eller sockerbeställning som Oreo cookie-åtkomst skulle ge liknande förbättringar hos MS-kvinnor som observerades i denna studie.

Slutligen tenderade retroperitonealt fettförråd att öka i MS-kvinnor genom att få tillgång till kakor i denna studie. Förutom sin moduleringseffekt på stressaxelfunktionen ökade välsmakande mattillträde markant cirkulationen av leptin och insulinnivåer med ökat fettförråd 15, 61. Både leptin och insulin har föreslagits att utöva en reglerande funktion i det meso-limbiska belöningssystemet, och speciellt insulin ökat uttryck av dopamintransportörer i det ventrala tegmentala området 62, 63. Såsom beskrivits ovan är meso-limbisk belöningssystemet starkt implicerat i de psyko-emotionella störningarna i samband med stressaxelfunktionen 22-27. Således föreslås en preliminär modulering, om någon, i meso-limbisk belöningssystemet genom ökat leptin och / eller insulin med ökat fettdeponering att spela en roll i humörhöjd med godtagbar tillgång till mat. En långvarig konsumtion av en hög fetthalt (32% fettinnehåll) minskade ångestliknande beteenden och ökad plasma leptin och insulin nivåer med markant ökat fettdepot hos kvinnliga råttor som utsattes för ett liknande MS-protokoll som användes i denna studie 11. Det är emellertid inte klart huruvida de beteendeförbättringar som observerats hos våra MS-kvinnor med kaketillgång (en måttlig fet diet med ~ 21% fetthalt) är relaterade till ökat fettdepot, eftersom ökningen av retroperitonealt fettdepot genom kaketillgång nådde inte en statistisk signifikans och vidare uppmättes inte cirkulerande leptin eller insulin i den aktuella studien.

Sammanfattningsvisdysfunktioner i HPA-axeln, NAc-neuronerna och hippocampus verkade impliceras i de psyko-emotionella motgångarna hos unga kvinnliga MS-råttor genom erfarenhet av materiell separation under de första två veckorna av födseln. Fri tillgång till mycket välsmakande mat, en måttlig fet kost, under ungdomar och ungdomar förbättrade ångest- och depressionliknande beteenden hos MS-kvinnor utan att påverka kroppsviktförstärkningen och funktionell modulering i NAc-neuronerna kan spela en roll i dess underliggande neurala mekanismer.

Erkännanden

Författare tackar Dr. SB Yoo för hjälp med statistisk analys och Dr. JY Lee med experimentella tekniker. Denna studie stöddes av bidrag från National Research Foundation (2013R1A1A3A04-006580) och genom Ormaxillofacial Dysfunction Research Center för äldre på Seoul National University (2014050477) som finansieras av Koreas regering (ministeriet för vetenskap, IKT och framtidsplanering).

referenser

1. Martin B, Pearson M, Brenneman R. et al. Konserverade och differentiella effekter av kostenergiintag på hippocampala transkriptomerna hos kvinnor och män. PLOS ONE. 2008; 3: e2398. [PMC gratis artikel] [PubMed]
2. Priego T, Sa'nchez J, Pico'C. et al. Sexrelaterade skillnader i leptin- och ghrelinsystem relaterade till induktion av hyperfagi vid hög fetthaltsexponering hos råttor. Horm Behav. 2009; 55: 33-40. [PubMed]
3. Priego T, Sa'nchez J, Pico'C. et al. Sex-differential uttryck av metabolism-relaterade gener som svar på en fetthaltig diet. Fetma. 2008; 16: 819-26. [PubMed]
4. Kitraki E, Soulis G, Gerozissis K. Nedsatt neuroendokrin svar på stress efter en kortfristig fettberikad diet. Neuroendokrinologi. 2004; 79: 338-45. [PubMed]
5. Soulis G, Kitraki E, Gerozissis K. Tidiga neuroendokrina förändringar hos kvinnliga råttor efter en diet som är måttligt berikad i fett. Cell Mol Neurobiol. 2005; 25: 869-80. [PubMed]
6. Soulis G, Papalexi E, Kittas C. et al. Tidig inverkan av en fettrik diet på beteendemässiga svar hos manliga och kvinnliga råttor. Behav Neurosci. 2007; 121: 483-90. [PubMed]
7. Romeo RD, McEwen BS. Stress och ungdomar i hjärnan. Ann NY Acad Sci. 2006; 1094: 202-14. [PubMed]
8. Boukouvalas G, Antoniou K, Papalexi E. et al. Efter avvänjning med hög fetthalt påverkar råttornas beteende och hypotalamus hypofysen binjuraxeln i början av puberteten på ett sexuellt dimorfiskt sätt. Neurovetenskap. 2008; 153: 373–82. [PubMed]
9. Boukouvalas G, Gerozissis K, Markaki E. et al. Mjölkfodring påverkar de endokrina reaktionerna hos pubertalet råttor till en akut stress. Neuroendokrinologi. 2010; 92: 235-45. [PubMed]
10. Jahng JW, Kim JY, Lee JY, Fri tillgång till mycket välsmakande mat under tonåren ökar ångest- och depressionliknande beteende hos män, men inte hos kvinnor. AChemS2013 Abstract.
11. Maniam J, Morris MJ. Smaklig kafeteria diet förbättrar ångest och depression-liknande symtom efter en negativ tidig miljö. Psychon. 2010; 35: 717-28. [PubMed]
12. Yoo SB, Kim BT, Kim JY. et al. Adolescent-fluoxetin ökar serotonerg aktivitet på raphe-hippocampus-axeln och förbättrar depressionsliknande beteenden hos honråttor som upplevde neonatal mödrarseparation. Psychon. 2013; 38: 777-88. [PubMed]
13. Lee JH, Kim HJ, Kim JG. et al. Depressiva beteenden och minskat uttryck av serotoninåterupptagningsbefordran hos råttor som upplevde neonatal mödrarseparation. Neurosci Res. 2007; 58: 32-9. [PubMed]
14. Lee JH, Kim JY, Jahng JW. Mycket välsmakande mat under tonåren förbättrar ångestliknande beteenden och HPA-axelns dysfunktion genom erfarenhet av neonatal mödrarseparation. Endokrinol Metab (Seoul) 2014; 29: 169-78. [PMC gratis artikel] [PubMed]
15. le Fleur SE, Houshyar H, Roy M. et al. Val av svamp, men inte totala svavelkalorier, dämpar adrenokortikotrofinreaktioner mot fasthållning. Endokrinologi. 2005; 146: 2193-9. [PubMed]
16. Teegarden SL, Bale TL. Minskningar i kosttillskott ger ökad känslighet och risk för återfall av kost. Biol Psychiatr. 2007; 61: 1021-9. [PubMed]
17. Desmet PM, Schifferstein HN. Källor av positiva och negativa känslor i matupplevelse. Aptit. 2008; 50: 290-301. [PubMed]
18. Buwalda B, Blom WA, Koolhaas JM. et al. Beteende och fysiologiska reaktioner på stress påverkas av fetthaltig matning hos hanrotter. Physiol Behav. 2001; 73: 371-7. [PubMed]
19. Pecoraro N, Reyes F, Gomez F. et al. Kronisk stress främjar välsmakande matning, vilket minskar tecken på stress: frammatning och återkopplingseffekter av kronisk stress. Endokrinologi. 2004; 145: 3754-62. [PubMed]
20. Prasad A, Prasad C. Kortsiktig konsumtion av en diet rik på fett minskar ångestsvaret hos vuxna hanrotter. Physiol Behav. 1996; 60: 1039-142. [PubMed]
21. Salamone JD, Correa M. Motivational synpunkter på förstärkning: konsekvenser för förståelse av beteendefunktionerna hos kärnan accumbens dopamin. Behav Brain Res. 2002; 137: 3-25. [PubMed]
22. Di Chiara G, Loddo P, Tanda G. Ömsesidiga förändringar i prefrontal och limbisk dopaminreaktion för aversiva och givande stimuli efter kronisk mild stress: konsekvenser för psykobiologin av depression. Biol Psychiatr. 1999; 46: 1624-33. [PubMed]
23. Yadid G, Overstreet DH, Zangen A. Limbisk dopaminerg anpassning till en stressfull stimulans i en råttmodell av depression. Brain Res. 2001; 896: 43-7. [PubMed]
24. Imperato A, Angelucci L, Casolini P. et al. Upprepade stressiga upplevelser påverkar annorlunda limbisk dopaminfrisättning under och efter stress. Brain Res. 1992; 577: 194-9. [PubMed]
25. Saal D, Dong Y, Bonci A. et al. Narkotika av missbruk och stress utlöser en vanlig synaptisk anpassning i dopaminneuroner. Nervcell. 2003; 37: 577-82. [PubMed]
26. da Cunha IC, Lopes APF, Steffens SM. et al. Mikroinjektionen av AMPA-receptorantagonisten i accumbens-skalet, men inte i accumbens-kärnan, inducerar anxiolys i en djurmodell av ångest. Behav Brain Res. 2008; 188: 91-9. [PubMed]
27. Kochenborger I, Zanatta D, Berretta LM. et al. Modulation av rädsla / ångestreaktioner, men inte matintag, efter a-adrenoceptoragonistmikroinjektioner i nukleinspaltskalet av fria råttor. Neuro. 2012; 62: 427-35. [PubMed]
28. Jahng JW, Ryu V, Yoo SB. et al. Mesolimbisk dopaminergaktivitet som svarar mot akut stress är avblåst hos ungdomar som upplevde neonatal mödrarseparation. Neuroscience. 2010; 171: 144-52. [PubMed]
29. Cordeira JW, Frank L, Sena-Esteves M. et al. Hjärnavledad neurotrofisk faktor reglerar hedonisk matning genom att verka på mesolimbisk dopaminsystem. J Neurosci. 2010; 30: 2533-41. [PMC gratis artikel] [PubMed]
30. Xu B, Goulding EH, Zang K et al. Hjärnavledad neurotrofisk faktor reglerar energibalans nedströms melanokortin-4-receptorn. Nat Neurosci. 2003; 6: 736-42. [PMC gratis artikel] [PubMed]
31. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: En hållbar molekylärbrytare för missbruk. Proc Natl Acad Sci USA. 2001; 98: 11042-6. [PMC gratis artikel] [PubMed]
32. Teegarden SL, Nestler EJ, Bale TL. Delta FosB-medierade förändringar i dopamin-signalering normaliseras av en godtagbar fetthaltig diet. Biol Psychiatr. 2008; 64: 941-50. [PMC gratis artikel] [PubMed]
33. Kim HJ, Lee JH, Choi SH. et al. Fasta-inducerad ökning av bågformigt NPY-mRNA och plasmakortikosteron stryks i råttaupplevd neonatal mödraseparation. Neuropeptider. 2005; 39: 587-94. [PubMed]
34. Ryu V, Lee JH, Yoo SB. et al. Hållbar hyperfagi hos ungdomar som upplevde neonatal mödrarseparation. Int J Obes. 2008; 32: 1355-62. [PubMed]
35. Ryu V, Yoo SB, Kang DW. et al. Post-weaning isolering främjar matintag och kroppsviktökning hos råttor som upplevde neonatal mödrarseparation. Brain Res. 2009; 1295: 127-34. [PubMed]
36. Kalueff AV, Aldridge JW, LaPorte JL. et al. Analysera grooming mikrostruktur i neurobehavioral experiment. Nat Protoc. 2007; 2: 2538-44. [PubMed]
37. Daniels WM, Pietersen CY, Carstens ME. et al. Maternaseparation hos råttor leder till ångestliknande beteende och ett trubbigt ACTH-svar och förändrade neurotransmitternivåer som svar på en efterföljande stressor. Metab Brain Dis. 2004; 19: 3-14. [PubMed]
38. Porsolt RD, Le Pichon M, Jalfre M. Depression: en ny djurmodell känslig för antidepressiva behandlingar. Natur. 1977; 266: 730-2. [PubMed]
39. Choi YJ, Kim JY, Jin WP. et al. Förstöring av oralt sensoriskt relä till hjärnan ökade ångest- och depressionliknande beteenden hos råttor. Arch Oral Biol. 2013; 58: 1652-8. [PubMed]
40. Jahng JW, Yoo SB, Ryu V. et al. Hyperfagi och depressionliknande beteende genom ungdomars sociala isolering hos kvinnliga råttor. Int J Devl Neurosci. 2012; 30: 47-53. [PubMed]
41. Lee JY, Kim JY, Ryu V. et al. Bicucullin förbättrade kronisk, men inte akut, stressinducerad matningsundertryckning. Int J Pharmacol. 2015; 11: 335-42.
42. Faraday MM, O'Donoghue VA, Grunberg NE. Effekter av nikotin och stress på rörelse hos Sprague-Dawley och Long-Evans han- och honråttor. Pharmacol Biochem Behav. 2003; 74: 325–33. [PubMed]
43. Wigger A, Neumann ID. Periodisk maternell berövande inducerar könsberoende förändringar i beteendemässiga och neuroendokrina reaktioner på känslomässig stress hos vuxna råttor. Physiol Behav. 1999; 66: 293-302. [PubMed]
44. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG. et al. Induktion av deltaFosB i belöningsrelaterade hjärnstrukturer efter kronisk stress. J Neurosci. 2004; 24: 10594-602. [PubMed]
45. Stämpel JA, Mashoodh R, van Kampen JM. et al. Livsmedelsbegränsning ökar topportikosteronnivåerna, kokaininducerad lokomotorisk aktivitet och deltaFosB-uttryck i råttans nukleobatteri. Brain Res. 2008; 1204: 94-101. [PubMed]
46. Vialou V, Cui H, Perello M. et al. En roll för ΔFosB i kalori-restriktionsinducerad metabolisk förändring. Biol Psychiatr. 2011; 70: 204-7. [PMC gratis artikel] [PubMed]
47. Benavides DR, Bibb JA. Rollen av Cdk5 i drogmissbruk och plasticitet. Ann NY Acad Sci. 2004; 1025: 335-44. [PubMed]
48. Bogush A, Pedrini S, Pelta-Heller J. et al. AKT och CDK5 / p35 medierar hjärnavledad neurotrof faktorinduktion av DARPP-32 i medelstora snygga neuroner in vitro. J Biol Chem. 2007; 282: 7352-9. [PubMed]
49. Svenningsson P, Nairn AC, Greengard P. DARPP-32 medierar åtgärderna av flera missbruksmissbruk. AAPS J. 2005; 7: E353-60. [PMC gratis artikel] [PubMed]
50. Bessa JM, Morais M, Marques F. et al. Stressinducerad anhedonia är förknippad med hypertrofi av medelstarka nervceller hos kärnans accumbens. Transl Psychiatry. 2013; 3: e266. [PMC gratis artikel] [PubMed]
51. Krishnan V, Han MH, Graham DL. et al. Molekylära anpassningar som ligger bakom känslighet och motstånd mot socialt nederlag i hjärnbelöningsregioner. Cell. 2007; 131: 391-404. [PubMed]
52. Weiss F, Ciccocioppo R, Parsons LH. et al. Kompulsivt läkemedelssökande beteende och återfall. Neuroadaptation, stress och konditioneringsfaktorer. Ann NY Acad Sci. 2001; 937: 1-26. [PubMed]
53. Donahue RJ, Muschamp JW, Russo SJ. et al. Effekter av striatalafFosB-överuttryck och ketamin på socialt nederlagsspänningsinducerad anhedoni hos möss. Biolpsykiatri. 2014; 76: 550-8. [PMC gratis artikel] [PubMed]
54. Hill RA, Klug M, Von Soly SK. et al. Sexspecifika störningar i rumsminne och anhedonia i en "två träff" råttmodell motsvarar förändringar i hippocampal hjärnavledande neurotrofisk faktoruttryck och signalering. Hippocampus. 2014; 24 (10): 1197-211. [PubMed]
55. Lippmann M, Bress A, Nemeroff CB. et al. Långsiktiga beteendemässiga och molekylära förändringar i samband med mödraseparation hos råttor. Eur J Neurosci. 2007; 25: 3091-8. [PubMed]
56. Hanson ND, Owens MJ, Nemeroff CB. Depression, antidepressiva medel och neurogenes: en kritisk omprövning. Neuropsychopharmacology. 2011; 36: 2589-602. [PMC gratis artikel] [PubMed]
57. Sahay A, Hen R. Vuxen hippocampal neurogenes i depression. Nat Neurosci. 2007; 10: 1110-5. [PubMed]
58. Maniam J, Morris MJ. Frivillig träning och välsmakande fetthalt både förbättrar beteendeprofil och stressrespons hos hanrotter utsatta för tidig livsstress: Hippocampus roll. Psychon. 2010; 35: 1553-64. [PubMed]
59. Macht M, Muller J. Omedelbara effekter av choklad på experimentellt inducerade humörtillstånd. Aptit. 2007; 49: 667-74. [PubMed]
60. Willner P, Benton D, Brown E. et al. "Depression" ökar "begär" för söta belöningar i djur och mänskliga modeller av depression och begär. Psychopharmacology. 1998; 136: 272-83. [PubMed]
61. Foster MT, Warne JP, Ginsberg AB. et al. Pålitliga livsmedel, stress och energilager skulpterar kortikotropinfrisättande faktor, adrenokortikotrofin och kortikosteronhalter efter fasthållning. Neuroendokrinologi. 2009; 150: 2325-33. [PMC gratis artikel] [PubMed]
62. Figlewicz DP, Evans SB, Murphy J. et al. (Expression av receptorer för insulin och leptin i råtta i ventral tegmental / substantia nigra (VTA / SN). Hjärnrester. 2003; 964: 107-15.PubMed]
63. Figlewicz DP, Szot P, Chavez M. et al. Intraventrikulärt insulin ökar dopamintransportörens mRNA i råtta VTA / substantia nigra. Brain Res. 1994; 644: 331-4. [PubMed]