Kronisk självadministrering av alkohol resulterar i förhöjd ΔFosB: jämförelse av hybridmöss med olika drinkmönster (2012)

BMC Neurosci. 2012 Oct 29;13:130. doi: 10.1186/1471-2202-13-130.
 

källa

Wagoner Center för Alkoholism och Addiction Forskning, Institutet för neurovetenskap, University of Texas i Austin, Austin, TX, 78712, USA. [e-postskyddad]

Abstrakt

ABSTRAKT:

BAKGRUND:

Oförmågan att minska eller reglera alkoholintaget är ett kännetecken för alkoholhändelser. Forskning om nya beteendemässiga och genetiska modeller av erfarenhetsinducerad förändring av dricks kommer att öka vår kunskap om alkoholhändelser. Distinktiva självbetjäningsbeteenden för alkohol observerades tidigare när man jämförde två F1 hybridstammar av möss: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) visa minskad alkoholpreferens efter erfarenhet av höga alkoholkoncentrationer och perioder av avhållsamhet medan C57BL / 6J x FVB / NJ (BxF) visar fortsatt alkoholpreferens. Dessa fenotyper är intressanta eftersom dessa hybrider visar förekomsten av genetisk additivitet (BxN) och överdominans (BxF) vid etanolintag på ett erfarenhetsberoende sätt.

Specifikt uppvisar BxF upprepad alkoholpreferens och BxN uppvisar reducerad alkoholpreferens efter erfarenhet med höga etanolkoncentrationer; Erfarenheter med låga etanolkoncentrationer ger emellertid fortsatt alkoholpreferens för båda hybriderna.

I den föreliggande studien testade vi hypotesen att dessa fenotyper representeras av differentialproduktion av den inducerbara transkriptionsfaktorn, ΔFosB, i belöning, aversion och stressrelaterade hjärnområden.

RESULTAT:

Förändringar i neuronal plasticitet (mätt med ΔFosB-nivåer) var erfarenhetsberoende, såväl som hjärnområde och genotypsspecifika, ytterligare stödja den neuronala kretsen baserar sig på motivationsaspekter av etanolförbrukning.

BxN-möss som uppvisade reducerad alkoholpreferens hade lägre AFosB-nivåer i Edinger-Westphal-kärnan än möss som uppvisade fortsatt alkoholpreferens och ökade FosB-nivåer i central medial amygdala jämfört med kontrollmöss.

BxN-möss som uppvisade fördröjd alkoholpreferens uppvisade högre ΔFosB-nivåer i den ventrala tegmentala arean, Edinger-Westphal-kärnan och amygdala (centrala och laterala avdelningar).

Dessutom, i BxN-möss ΔFosB-nivåer i Edinger-Westphal-kärnan och ventrala tegmentala regioner korrelerade signifikant positivt med etanolpreferens och intag. Dessutom visade hierarkisk klusteranalys att många etanol-naiva möss med övergripande låga FosB-nivåer ligger i ett kluster, medan många möss som uppvisar fortsatt alkoholpreferens med övergripande höga FosB-nivåer ligger i ett kluster tillsammans.

SLUTSATSER:

Genom att jämföra och kontrastera två alkoholfenotyper, visar denna studie att de belönings- och stressrelaterade kretsarna (inklusive Edinger-Westphal-kärnan, ventral-tegmentalområdet, amygdala) genomgår betydande plasticitet som manifesterar sig som minskad alkoholpreferens.

Bakgrund

Det finns kända känslighetsfaktorer, miljö och genetik, i samband med alkoholmissbruk och alkoholism. Möjligheten att dricka rikliga mängder alkohol med liten konsekvens för individen är ett primärt inledande symptom hos många alkoholister, vilket indikerar att en låg nivå på alkoholresponsen är en viktig sårbarhetsfaktor vid utvecklingen av alkoholism [1,2]. Att definiera neurobiologiska faktorer som bidrar till alkoholmätning kommer att bidra till vår förståelse av alkoholanvändning och missbruk, och är en effektiv strategi för utveckling av förbättrade behandlingar för individer som diagnostiserats med alkoholhändelser. Användning av gnagaremodeller för att imitera mänsklig sjukdom har varit ett kraftfullt verktyg för att förstå denna sjukdom och förbättra behandlingarna. Det finns flera gnagare modeller på plats för att studera aspekter av alkoholmissbruk och alkoholism, men ingen modellalkoholism helt. I vilken utsträckning en mus muntligt administrerar etanollösningar under liknande miljöförhållanden muntligt beror på dess genetiska bakgrund [3].

Nyligen fann vi att C57BL / 6JxFVB / NJ (BxF) och FVB / NJxC57BL / 6J (FVBxB6) F1-hybridmus själv administrerar ovanligt höga alkoholnivåer under tvåflaskans preferenstest (kvinnliga konsumerar 20-35 g / kg / dag och män 7-25 g / kg / dag, beroende på koncentration och paradigm) [4]. Denna nya genetiska modell har en signifikant fördel jämfört med befintliga inavlade stammar, inklusive bevis på överdominant fenotyp och drickning till högt blodalkoholnivåer [4]. Dessutom ses den höga etanolförbrukningen som uppvisas av BxF-möss i två ytterligare etanoldryckparadigmer (dricks i mörkret och etanolaccept under planerad vätsketillgång) [4]. Vi observerade då separata metoder för självadministrering av alkohol vid jämförelse av två F1-hybridstammar av möss: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) visar minskad alkoholpreferens efter erfarenhet av höga alkoholkoncentrationer och perioder av abstinens och BxF visar fortsatt alkoholpreferens [5]. Med hjälp av ett batteri av beteendestest har vi visat att BxN är känsligare än BxF-möss till aversiv och lugnande, men inte givande, effekter av etanol [6].

Grundforskning om nya beteendemässiga och genetiska modeller av hög alkoholkonsumtion och erfarenhetsinducerad förändring av dricks kommer att öka vår kunskap om alkoholmissbruk och alkoholism. Den reducerade alkoholpreferensfenotypen är intressant eftersom BxN-möss initialt visar en hög preferens för etanollösningar. Även om den motivativa aspekten av att minska alkoholintaget efter erfarenhet av höga etanolkoncentrationer och abstinens är okänd, kan BxN-möss liknas med måttliga alkoholdrycker, eftersom de fortfarande konsumerar etanollösningar men på en reducerad nivå, förmodligen på grund av en aversiv erfarenhet.

Den fördröjda alkoholpreferensmodellen är också intressant, eftersom BxF-mössen konsekvent förbrukar extremt höga etanolnivåer oavsett tidigare erfarenhet. Hållbar och reducerad alkoholpreferens kan relateras till en alkoholberoende effekt, ett fenomen där djur uppvisar signifikant ökad alkoholkonsumtion efter en period av tvingad abstinense [7]. Alkoholberövande effekten är ett användbart fenomen för att studera ökat alkoholdryckbeteende. Även om det experimentella schemat som är känt för att inducera alkoholavskrivningseffekten är helt annorlunda än det schema som används här, jämförs uppehållen och reducerad alkoholpreferens till en alkoholberoende effekt de olika beteendefenotyperna som diskuteras här till ett viktigt fenomen i gnagaremodeller av alkoholforskning. Minskad alkoholpreferens skulle vara motsatt av en alkoholberoende effekt och en fortsatt alkoholpreferens kan beskrivas som avsaknaden av en alkoholberoende effekt. Användningen av olika genetiska djurmodeller, såsom BxF och BxN, bidrar starkt till framdrivningen av fältet, eftersom alkoholanvändningsstörningar tros uppstå genom komplexa interaktioner mellan genetik och miljö. Identifiering av differentiellt omedelbart tidigt genuttryck för dessa hybrider ger insikt i hjärnkretsar som är viktiga för de givande och aversiva egenskaperna hos etanol.

Etanol och andra läkemedelsförlovade neurokretsar har studerats i specifika gnagare-modeller med användning av molekylära markörer av neuronal plasticitet och / eller aktivitet [8-15]. Självadministrerad och experimentell administrerad etanol resulterar inte i ekvivalenta hjärnans metaboliska kartor, vilket föreslår specifika kretsar som ligger bakom armeringseffekterna av etanol [8,9].

En nyckelkomponent, som ändå undersöks i alkoholforskning, är undersökning av hållbara och reducerade alkoholpreferensbeteenden och identifiering av neuronkretsar som är involverade under dessa beteenden. Målet med detta experiment var att identifiera hjärnregioner som fördjupades av en fortsatt och minskad alkoholpreferens. Eftersom kronisk alkoholadministration (tillsammans med andra missbruksmissbruk) har visat sig orsaka hjärnans regionala skillnader i ΔFosB-nivåer, testade vi hypotesen att dessa beteendemässiga fenotyper representeras av differentiell produktion av den inducerbara transkriptionsfaktorn, FFB, i hjärnregioner som är kända för vara inblandad i belöning, aversion och stress [10].

Kroniska stimuli som orsakar regionala skillnader i ΔFosB-nivåer inkluderar missbruksmedel (alkohol, kokain, amfetamin, nikotin, morfin och antipsykotika), kronisk stress (spärrbelastning, oförutsägbar fotstötning, elektrokonvulsiva anfall) och tvångshjul [11]. Som en potentiell medlare av långvariga anpassningar i hjärnan är en viktig skillnad att identifiera den dominerande varianten av FosB (FosB eller FosB) som svar på kronisk etanolbehandling.

Det finns flera studier som uppmätt FosB och ΔFosB efter kroniska stimuli, för vilka det inte har verifierats att ΔFosB var den dominerande isoformen (såsom de som beskrivs nedan). Det finns emellertid starka bevis på att ΔFosB, inte FosB, är den dominerande isoformen efter kronisk stimuli [10-12]. En studie av Ryabinin och Wang (1998) visade att fyra dygn av upprepade etanolinjektioner med låga alkoholhaltiga preferenser resulterade i kraftiga ökningar av FosB-uttryck i följande hjärnområden: främre kortikal amygdaloidkärna, lateral septum ventral, central amygdala , lateral amygdala, lateral hypotalamus, kärnan accumbens skal, sängkärnan av stria terminalis och paraventrikulära kärnor av thalamus [13]. Deras resultat identifierar en etanol-responsiv neurokrets. FosB-uttryck har också uppmättes i den höga alkoholpreparerade C57BL / 6J-musen under förvärv och upprätthållande av etanolens självadministrering under begränsade tillträdesförhållanden. Det fanns inga förändringar i FosB-nivåerna vid förvärv av självadministration [14]. Emellertid efter två veckors begränsad åtkomst av etanol självadministration ökade FosB-nivåerna i den centrala medialkärnan i amygdala- och Edinger-Westphal-kärnan [15]. Sammanfattningsvis identifierar rapporter nya regioner som engagerar sig i självständig administration av etanol, samt innebär en roll för den mesokortikolimbiska vägen och förlängd amygdala [16]. Det är emellertid viktigt att notera att förändringar i ΔFosB-nivåer beror på administreringssätt för etanol, dos och tidsperiod som utsätts för behandling eller schema [13-15].

Musstammarna som används i denna studie ger intressanta modeller för jämförelse av fördröjd och reducerad alkoholpreferens och de underliggande mekanismer som är ansvariga för dessa distinkta alkoholresponser. Denna studie visar att möss som uppvisar minskad alkoholpreferens också uppvisar signifikant plasticitet i belönings- och stressrelaterade kretsar (inklusive Edinger-Westphal-kärnan, ventral-tegmentalområdet, amygdala, nucleus accumbens och cingulate cortex).

Resultat

Effekten av alkoholkoncentrationer och abstinensperioder vid självadministration i BxF- och BxN-möss

För att visa att varierande etanolkoncentrationer och / eller abstinensperioder ändrade efterföljande etanolförbrukning, utformade vi fyra scheman (grupper) för att mäta etanolförbrukning (Figur (Figure1a, b).1a, b). Det fanns fyra experimentella grupper för varje hybrid: Höga koncentrationer, höga koncentrationer med abstinensperioder, låga koncentrationer och låga koncentrationer med abstinensperioder. Kompletterande data för etanolpreferens (Figur (Figure2)2) och förbrukning (Figur (Figure3)3) data (för alla grupper och båda genotyperna) presenteras som referens. För att fastställa och illustrera de beteendemässiga fenotyperna för upprätthållen och reducerad alkoholpreferens presenteras 9% etanolpreferens och konsumtionsdata i figurerna Figures44 och and5.5. Dessa beteendemässiga fenotyper baseras på jämförelse av 9% etanolpreferens och konsumtion från den första, andra, tredje och fjärde presentationen i High Concentrations-grupperna och motsvarande experimentella dagar för grupperna med låg koncentration. En tvåvägs ANOVA (genotyp x tid) av 9% etanolpreferens och -förbrukning utfördes. För gruppen High Concentrations, etanolpreferens (Figur (Figure4a)4a) och förbrukning (Figur (Figure5a)5a) var större för BxF än BxN, och BxF uppvisade ihållande alkoholpreferens och konsumtion medan BxN uppvisade minskad alkoholpreferens och konsumtion (ETANOLFÖREDRAG - interaktion F (3,54) = 4.83, P <0, 01, genotyp F (1,54, 24.10) = 0.001, P <3,54, tid F (9.92) = 0.0001, P <1,54; ETANOLKONSUMTION - interaktion N / S, genotyp F (50.73) = 0.0001, P <3,54, tid F (11.68, 0.0001) = XNUMX, P <XNUMX). För gruppen Höga koncentrationer med avhållsamhet, etanolpreferens (figur (Figure4b)4b) och förbrukning (Figur (Figure5b)5b) var större för BxF än BxN, och BxF uppvisade ihållande alkoholpreferens och konsumtion medan BxN uppvisade minskad alkoholpreferens och konsumtion (ETANOLFÖREDRAG - interaktion F (3,132) = 15.89, P <0.0001, genotyp F (1,132) = 250.43, P <0.0001, tid F (3,132) = 27.48, P <0.0001; ETANOLFÖRBRUKNING - interaktion F (3,132) = 11.35, P <0.0001, genotyp F (1,132) = 510.88, P <0.0001, tid F (3,132) = 22.42, P <0.0001). För gruppen med låga koncentrationer, etanolpreferens (figur (Figure4c)4c) och förbrukning (Figur (Figure5c)5c) var större för BxF än BxN, och båda hybriderna uppvisade ihållande alkoholpreferens och konsumtion (ETANOLFÖREDRAG - interaktion N / S, genotyp F (1,54) = 12.2, P <0.01, tid N / S; ETANOLKONSUMTION - interaktion N / S, genotyp F (1,54) = 74.83, P <0.0001, tid N / S). För gruppen med låga koncentrationer med avhållsamhet, etanolpreferens (figur (Figure4d)4d) och förbrukning (Figur (Figure5d)5d) var större för BxF än BxN, och båda hybriderna uppvisade måttlig minskning av alkoholpreferens och konsumtion (ETANOLFÖREDRAG - interaktion N / S, genotyp F (1,132 166.58) = 0.0001, P <3,132, tid N / S; ETANOLKONSUMTION - interaktion F (3.61) = 0.05, P <1,132, genotyp F (480.64) = 0.0001, P <3,132, tid F (7.87) = 0.0001, P <6). Sammanfattningsvis uppvisade BxF i grupper med höga koncentrationer (utan avhållsamhet) ihållande alkoholpreferens medan BxN uppvisade minskad alkoholpreferens och i grupperna med låga koncentrationer (utan avhållsamhet) uppvisade både BxF och BXNUMXxN ihållande alkoholpreferens. Eftersom fenotyperna av intresse fångas bäst i grupper utan avhållsamhet är de i fokus för resten av studien.

Figur 1  

Experimentellt schema för kontinuerlig åtkomst frivillig etanol konsumtion. a. Experimentellt schema för grupper med låg koncentration och hög koncentration. b. Experimentellt schema för låga koncentrationer med abstinensperioder och höga koncentrationer .
Figur 2  

Etanolpreferensen är beroende av genotyp och etanolkoncentration. a. I High Concentrations-grupperna är etanolförbrukning (etanolförbrukning / total vätskekonsumtion) större för BxF än BxN och varierar med etanolkoncentration som erbjuds. b .
Figur 3  

Etanolförbrukningen är beroende av genotyp och etanolkoncentration. a. I grupperna med höga koncentrationer är etanolförbrukningen (g / kg / dag ren etanol) större för BxF än BxN och varierar med den etanolkoncentration som erbjuds. b. I de höga koncentrationerna .
Figur 4  

Hållbara och reducerade alkoholpreferens beteendefenotyper. Jämförelse av 9% etanolpreferens från den första, andra, tredje och fjärde presentationen visas för att fastställa beteendemässiga fenotyper av fördröjd eller reducerad alkoholpreferens. a. .
Figur 5  

Hållbara och minskade alkoholkonsumtionsbeteendefenotyper. Jämförelse av 9% etanolkonsumtion från den första, andra, tredje och fjärde presentationen visas för att fastställa beteendemässiga fenotyper för fortsatt eller minskad alkoholkonsumtion. .

ΔFosB-nivåer

ΔFosB-kvantifiering och analys användes för att identifiera neurokretsen som aktiverades kroniskt under hållbar och reducerad alkoholpreferens. Det fanns tre experimentella grupper för varje hybrid: Höga koncentrationer, låga koncentrationer och vatten (kontroll). ΔFosB-data presenteras som procent av ΔFosB-positiva neuroner [(# avFosB-positiva neuroner) / (# avFosB-positiva neuroner + # av Nissl-positiva neuroner)] (Table1).1). Tidigare arbete har visat att etanol erfarenhet kan inducera neurodegenerering [17]. Därför undersökte vi neurontal i denna studie och rapporterade ingen signifikant skillnad baserat på genotyp eller grupp för hjärnregionerna kvantifierade i denna studie. Följande tre analyser av ΔFosB-data utfördes: 1) trevägs ANOVA (genotyp x grupp x hjärnområde), 2) tvåvägs ANOVA (hjärnområde x-grupp) för varje genotyp och 3) korrelationsmatriser utvecklades för att kartlägga korrelation nätverk.

Tabell 1  

Procent ΔFosB Positiva Neuroner

Upprepade mått trevägs ANOVA (genotyp x grupp x hjärnregion) avslöjade en genotyp x hjärnregionsinteraktion [F (15,375) = 2.01, P <05], en grupp x hjärnregionsinteraktion [F (15.375) = 1.99, P <0.01] och en huvudeffekt av hjärnregionen [F (15,375) = 43.36, P <000]. Upprepade mått tvåvägs ANOVA (hjärnregion x-grupp) för varje genotyp visade att det fanns en huvudeffekt av grupp- och hjärnregion för både BxF och BxN [BxF-F (2,374 11.79) = 0001, P <15,374, huvudeffekt av grupp; F (25.64 0001) = 2,360, P <43.38, huvudeffekt av hjärnregionen; BxN - F (0001) = 15,360, P <.23.73, huvudeffekt av grupp; F (0001 XNUMX) = XNUMX, P <XNUMX, huvudeffekt av genotyp]. Post-hoc-analys avslöjade sex signifikanta gruppskillnader för BxN (Figur (Figure6a-c).6växelström). Procent ΔFosB-nivåer var högre i gruppen med låg koncentration än i vattengruppen i La, CeC / CeL, EW och VTA. Procent ΔFosB var högre i gruppen High Concentrations än i Vattengruppen i CeMPV. Procent ΔFosB var högre i gruppen Low Concentrations än i High Concentrations-gruppen i EW. ΔFosB-data för alla andra hjärnregioner kvantifierade presenteras i tabell Table1.1. Pearsons r-korrelationsanalys användes för att bestämma om% av ΔFosB-positiva nervceller i en viss hjärnregion korrelerade med etanolkonsumtion eller preferens. Etanolförbrukning och preferens uppvisade en signifikant positiv korrelation med% ΔFosB i EW och VTA för BxN-möss (ETANOLFÖRBRUKNING - EW r = 0.85; VTA r = 0.85; ETANOLFÖREDRAG - EW r = 0.83, VTA r = 0.88; p <0.05 för alla).

Figur 6  

Hållbar och reducerad alkoholpreferens inducerar ΔFosB i amygdala, EW och VTA. Procent ΔFosB positiva neuroner i regioner av amygdala (a.), EW (b.) och VTA (c.). d. och e. Representativa bilder av ΔFosB / Nissl-färgning .

Det komplexa förhållandet mellan ΔFosB uttryck, genotyp, hjärnområde och etanolförbrukning undersöktes vidare med hjälp av principiell komponentanalys och hierarkisk klustring. Huvudkomponentanalysen visade att majoriteten av variabiliteten (~ 80%) i data representerades av 5-komponenter. Oövervakad hierarkisk gruppering (grupperad av individer och hjärnregioner) utfördes sedan och beställdes med användning av den första huvudkomponenten (Figur (Figure7).7). Den individuella klustringen avslöjade starka, men inte perfekta, grupperingsmönster baserat på etanolförbrukning, oavsett genotyp. Många av de etanol-naiva mössen klustrade ihop och uppvisade mindre övergripande ΔFosB än medelvärdet och många av mössen som uppvisade fortsatt alkoholpreferens grupperade tillsammans och uppvisade mer övergripande ΔFosB än medelvärdet. Dessa två kluster var de mest divergerande. De tre klyftorna däremellan representerade en större än, mindre än och medelhög blandning av ΔFosB-värden och etanoldryckfenotyper.

Figur 7  

ΔFosB-nivåerna drivs inte ensamma av etanolförbrukning. Hierarkisk clustering utfördes och den resulterande värmekartan över individuella ΔFosB-nivåer och motsvarande 9% etanolförbrukning visas. Grön = ΔFosB mindre än .

Diskussion

Distinktiva självbetjäningsbeteenden hos alkohol observerades vid jämförelse av två F1-hybridstammar av möss: BxN visar minskad alkoholpreferens efter erfarenhet av höga alkoholkoncentrationer och perioder av avhållsamhet medan BxF visar fortsatt alkoholpreferens. BxF-modellerna stabila, hög konsumtion (hållbar alkoholpreferens) och BxN-modeller måttlig dricks (minskad alkoholpreferens). Neuronal plasticitet (eller aktivitet, mätt med ΔFosB nivåer) var olika beroende på etanol erfarenhet, ytterligare stödja en underliggande roll av specifika neuronala kretsar i hållbar och reducerad alkoholpreferens.

För den höga alkoholkonsumtionen, C57BL / 6, etanolpreferens och konsumtion är mycket beroende av initial etanolkoncentration, längd av abstinens och substam (C57BL / 6Cr eller C57BL / 6J) [7,18]. Vi fann att etanolpreferensen och konsumtionen som ses i BxF-möss var konsekvent högre (och stabilare än i BxN) i de fyra olika scheman som testades. Den förhållandevis höga etanolförmågan och konsumtionen i BxN var endast upprätthållen med ett schema för kronisk dricks (låga koncentrationer utan abstinens), medan minskningar av preferens och konsumtion observerades med alla andra testade kroniska dricksscheman. BxN-reducerad alkoholpreferens erbjuder en ny djurmodell där erfarenhet (upprepad presentation av etanol efter erfarenhet av flera höga etanolkoncentrationer och / eller flera korta perioder av abstinens) dramatiskt minskar deras svar på en tidigare mycket föredragen etanolkoncentration.

Självadministrerad och experimentell administrerad etanol producerar olika hjärnmetaboliska kartor, vilket föreslår specifika kretsar som ligger bakom armeringseffekterna av etanol [8,9]. Vi testade hypotesen att de hållbara och reducerade alkoholpreferensbeteendemässiga fenotyperna representeras av differentialproduktion av den inducerbara transkriptionsfaktorn, ΔFosB, i hjärnområden som är kända för att vara involverad i belöning, aversion och stress. ΔFosB är en transkriptionsfaktor med en unik långsiktig stabilitet och desensibiliserar inte stimuli som c-Fos gör, utan ackumuleras vid kroniska behandlingar. Ökningar i ΔFosB beror på ökad neuronaktivitet och anses vara reflekterande långvarig neuronal plasticitet. Vi fann att procenten av ΔFosB-positiva neuroner i hjärnregioner beror på genotyp (BxF och BxN) och grupp (Vattenstyrning, låga koncentrationer och höga koncentrationer).

Feller BxN, post-hoc-analys visade att frivillig etanolförbrukning resulterade i ökad ΔFosB i EW-kärnan, VTA och amygdala: vilket indikerar ökad neuronal plasticitet i hjärnregioner som är kända för att vara involverad i etanol, belöning och stressresponser. BxN-möss i gruppen High Concentrations (reducerad alkoholpreference) har minskat neuronal plasticitet i EW, vilket tyder på att dessa neuroner svarar på alkoholintag med en erfarenhetsberoende plasticitet. I gruppen med låga koncentrationer (uppvisad hållbar alkoholpreferens) är neuronal plasticitet i EW större än i High Concentrations and Water-kontrollgrupperna. Även om det genomfördes med olika etanoldryckparamigmer och genetiska musmodeller, överensstämmer våra resultat i EW hos BxN-möss med tidigare etanolkonsumtestudier [14,15]. Den icke-preganglioniska EW har nyligen karakteriserats som innehållande periokulomotorisk urokortin (Ucn) -innehållande neuroner [19]. Ucn1 är en kortikotropinfrigörande faktor (CRF) -liknande peptid som binder CRF1- och CRF2-receptorer. Tidigare studier med användning av genetiska, farmakologiska och lesionsmetoder har visat att Ucn1 är involverad i reglering av alkoholkonsumtion [19-22]. Thär är en känd genetisk predisposition för hög alkoholintag hos gnagare som är korrelerat med högre basala nivåer av Ucn1 i EW och LSi [23]. Således var bristen på post-hoc-betydelse som vi observerade i EW för hög alkohol föredragande och konsumtion av BxF-möss oväntat. Kanske beror detta på den något förhöjda procenten av FosB-nivåer i BxF-vattengruppen jämfört med BxN-vattengruppen. Faktum är att procenten av ΔFosB-nivåer för alla möss som uppvisar fortsatt alkoholpreferens (BxF High Concentrations-grupp, BxF Low Concentrations-grupp och BxN Low Concentrations-grupp) var ganska lika.

För BxN ökade etanolförbrukningen i gruppen Low Concentrations neuronal plasticitet i VTA (större än i High Concentrations and Water Control Groups). Etanolpreferensen och förbrukningen var också större för gruppen med låg koncentration. Bristen på posthoc-betydelse som vi observerade i VTA för hög alkohol som föredrog och konsumerar BxF-möss var oväntat och kan bero på något högre basala nivåer av ΔFosB i vattenkontrollgruppen. Procent ΔFosB-nivåer var något förhöjda i BxF-vattengruppen jämfört med BxN-vattengruppen, medan procenten av FFB-nivåer var ganska lika för alla möss som uppvisade fortsatt alkoholpreferens (grupp BxF High Concentrations, BxF Low Concentrations group och BxN Low Concentrations group) . VTA-dopamin-systemet spelar en viktig roll för att förmedla armeringseffekterna av etanol och deltar i många ömsesidiga förbindelser viktiga för etanol och belöningsrelaterade beteenden [24-26]. Dessutom går VTA till amygdala- och EW-kärnan. Råttor har visat sig själv administrera etanol direkt i VTA [27]. Även etanolexponering ökar brännhastigheten för dopaminerga neuroner i VTA [28,29]. Ökad avfyrningsgrad kan kopplas till ΔFosB-induktionen i VTA som vi observerade efter kronisk frivillig etanoladministration i BxN.

Alkoholberoende inducerar långvariga neuroadaptationer, vilket resulterar i negativa känslomässiga tillstånd. en viktig mekanism i negativ förstärkning är corticotropin-frisättande faktor (CRF) -signalering inom amygdala [30]. Farmakologiska manipuleringar av neuroner i CeA har riktade sig mot GABA, CRF, opioid, serotonin, dynorfin och norepinefrinreceptorer [25,31-34]. GABA-antagonister, såväl som CRF-antagonister, minskar etanolförbrukningen [32,33,35]. Lera av CeA minskar kontinuerlig tillgång frivillig etanol konsumtion [36]. Våra resultat understödjer dessutom en roll för CeA i regleringen av alkoholdryckbeteende. GABAerga neuroner i den centrala amygdalaen bildar en heterogen population vars anslutningar verkar relaterade till deras peptidinnehåll. Dessa GABAergiska neuroner integrerar CeAs utgående aktivitet. Som omprövat i [Wee och Koob (2010]), sEveral-studier har identifierat en roll för dynorfin- och kappa-opioidreceptorer vid underhåll och eskalering av etanolintage [37]. Mer nyligen har Walker et al visat att K-opioidreceptorantagonisten, nor-binaltorphimin, inom den förlängda amygdalen reducerar selektivt etanol-självadministrering i beroende djur [38]. Kappa opioidreceptorsignaler är fortfarande ett viktigt intresse för forskning vid korsningen av stress, belöning och aversion. Det har också visat sig att stressinducerad etanol-självadministrering medieras av kappa-opioidreceptorsignalering [39]. Centrala CeA kan delas in i latero-kapseln (CeL / CeC) och medial bakre ventral. GABAerga neuroner av CeL / CeC mottar dopaminerga innervationer från VTA; som tidigare noterat aktiveras dessa neuroner efter akut etanoladministration och visar ökade ΔFosB-möss som visar fortsatt alkoholpreferens. Se även Mc [Brud (2002]) för en utmärkt recension på CeA och effekterna av alkohol [40]. I vår studie uppvisade BxN-möss med fördröjd alkoholpreferens (lågkoncentrationsgrupp) ökad neuronal plasticitet i CeC / CeL- och La- och BxN-möss med nedsatt alkoholpreference (High Concentrations group) uppvisad ökad neuronal plasticitet i CeMPV. Dessa resultat tyder på att specifik etanol erfarenhet innebär plasticitet i GABAergic neurons i amygdala. Med dessa data, tillsammans med motsvarande förändringar i neuronal plasticitet i VTA och EW, föreslår vi att denna krets genomgår signifikant plasticitet under fördrivna alkoholpreferensförhållanden.

Tidigare forskning har visat att C57BL / 6J-möss kan uppnå högt blodalkoholnivå genom att dricka två flaskor, men dessa blodalkoholnivåer håller inte på sig och ofta uppfyller inte dricksen kriterierna för farmakologisk motivation som anges av Dole och Gentry (1984) [41,42]. BxN-möss som uppvisar reducerad alkoholpreferens förbrukas mindre än vad som skulle förväntas från en typisk C57BL / 6J-mus [1]. Därför, även om vi inte tog blodalkoholprover, är det inte troligt att BxN-möss med minskad alkoholpreferens uppnådde upprätthållda farmakologiskt relevanta blodalkoholnivåer, vilket tyder på att koncentrationer av högt blodalkohol inte är nödvändiga för att inducera plasticitet i dessa hjärnregioner. Det är viktigt att notera att en väldigt signifikant effekt av gruppen också finns i BxF, även om post-hoc-resultat (korrigerat för multipla jämförelser) för BxF-hjärnregioner inte indikerar signifikanta förändringar i procent av ΔFosB-positiva neuroner för någon region efter kronisk etanolförbrukning med dessa olika scheman.

För att visualisera potentiella relationer bland variabler utfördes hierarkisk klustring. Värmekartan för den resulterande analysen visar en allmän trend mellan ΔFosB-nivåer och etanolförbrukning oavsett genotyp. Högre ΔFosB-nivåer associerades med högt dricks och lägre FFosB-nivåer associerades med kontrolldjur; Förhållandet var emellertid inte tillräckligt för att noggrant förutsäga dricksfenotyper baserade endast på FFB-nivåer.

Slutsatser

Distinktiva självbetjäningsbeteenden hos alkohol observerades med två F1-hybridstammar av möss: BxN visar minskad alkoholpreferens efter erfarenhet med höga koncentrationer av alkohol medan BxF visar fortsatt alkoholpreferens. BxF-modellerna stabila, hög konsumtion (hållbar alkoholpreferens) och BxN-modeller måttlig dricks (minskad alkoholpreferens). Förändringar i neuronal plasticitet (mätt med ΔFosB-nivåer) var erfarenhetsberoende, såväl som hjärnområde- och genotypsspecifika, vilket ytterligare definierar neuronalkretsen underlag för motivationsaspekter av etanolförbrukning. Dessa resultat visar att förändringen av en föräldrarad i hybridmöss resulterar i förändringar i mönster av alkoholkonsumtion och markerade förändringar i mönster av ΔFosB-uttryck, vilket tyder på att distinkta hjärnanätverk är involverade i dessa olika hybridmöss.

Metoder

Etik

Denna studie utfördes i strikt överensstämmelse med rekommendationerna i handledningen för vård och användning av laboratoriedjur i National Institute of Health. Protokollet godkändes av Institutionen för djurvård och användningskommitté vid University of Texas i Austin (AUP 2010-00028). All operation utfördes under natriumpentobarbitalanestesi, och alla ansträngningar gjordes för att minimera lidande.

djur

Studier utfördes med användning av intercross kvinnliga F1 hybrid möss härledda från C57BL / 6J och antingen FVB / NJ eller NZB / B1NJ möss (BxF F1 och BxN F1, maternal stam x paternal stam). C57BL / 6J, FVB / NJ och NZB / B1NJ uppfödare köptes från The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) och parades vid 7-8 veckor. Avkommor avvänjdes till isoseksuella grupper av var och en av genotyperna (BxF F1, BxN F1). Vi testade endast kvinnliga möss för att underlätta jämförelse med tidigare insamlade data [1,5,6]. Mössen hölls i standardburar med mat och vatten AD libitum. Koloninrummet och testrummet var på ett 12 h-ljus: 12 h mörkcykel (lyser på 07: 00).

Tvåflaskans val av etanolprestanda

Tvåflaskans valmetod användes för att bestämma frivilliga etanol-självadministrationsmönster i kvinnliga BxF- och BxN-möss [1,6]. F1-hybrid-kvinnliga möss (ålder 63 dagar) var individuellt inrymda i standardburar medan de veckades i en vecka till flaskor med tipprör innehållande vatten före införande av en etanollösning. Efter tillställning hade möss tillgång till två identiska flaskor: en innehållande vatten och den andra innehållande en etanollösning. Rörpositioner ändrades dagligen för att styra för positionsinställningar. För att ta hänsyn till eventuellt spill och förångning subtraherades den genomsnittliga vikten från rör i kontrollburar utan möss från individuella dricksvärden varje dag. Möss vägdes varje 4-dag under hela experimentet. All vätskekonsumtion mättes dagligen under experimentet. Mängden etanolförbrukad och etanolpreferens beräknades för varje mus, och dessa värden var medelvärda för varje koncentration av etanol. Effekten av alkoholkoncentrationer och abstinensperioder vid självadministration i BxF- och BxN-möss demonstrerades genom att man utsåg en experimentell grupp med tillgång till höga koncentrationer (eskalerande tillgång till 3-35-etanollösningar följt av 3-upprepade cykler av 9, 18, och 27% etanol, slutar med en slutlig presentation av 9% etanol) och en annan grupp med låga koncentrationer (eskalerande tillgång till 3-9% etanol, med återstoden av experimentet utfört med tillgång till 9% etanol). Var och en av dessa grupper hade en undergrupp som upplevde eller inte upplevde tre veckors perioder av abstinens. Kontrollmöss upplevde liknande tillstånd samtidigt som experimentella möss, men erbjöds endast en flaska vatten.

Totalt var det fem grupper för varje hybrid: Vatten (n = 14-16), Höga koncentrationer (n = 10), Höga koncentrationer med abstinensperioder (n = 20), Låga koncentrationer (n = 10) och låga koncentrationer med abstinensperioder (n = 20). Se Figur Figure11 för detaljerade två flaskvalsgruppscheman.

ΔFosB immunohistokemi och kvantifiering

ΔFosB immunhistokemi (IHC) mättes i 16 hjärnregioner från möss som upplevde 72 dagars kontinuerlig tillgång till antingen vatten (kontroll) eller vatten och alkohol [höga koncentrationer och låga koncentrationer]. Effekten av höga koncentrationer på etanolpreferens och konsumtion var mycket större än effekten av avhållsamhet; därför inkluderades grupper som upplevde perioder av avhållsamhet inte i ΔFosB IHC-mätningar. Vidare utfördes experimentet bortom det första utseendet av ihållande eller reducerad alkoholpreferens för att visa att beteendefenotyperna är stabila med upprepade cykler av etanolkoncentrationsförändringar för att undersöka effekterna av kronisk etanolkonsumtion. Fyra till åtta timmar efter avlägsnande av alkohol på den 73: e dagen av experimentet bedövades möss djupt (175 mg / kg natriumpentobarbital) och perfunderades intrakardiellt med 20 ml 0.01 M fosfatbuffrad saltlösning (PBS), följt av 100 ml 4% paraformaldehyd i PBS. Hjärnor avlägsnades, efterfixerades i 4% paraformaldehyd vid 4 ° C, inbäddade i 3% agaros, sektionerade (50 um, koronal) på en vibratom, placerade i kryskyddande medel (30% sackaros, 30% etylenglykol och 0.1% polyvinyl pyrrolidon i PBS) över natten vid 4 ° C och förvarades vid -20 ° C tills den behandlats för IHC. Tina sektioner tvättades med PBS, behandlades med 0.3% H2O2 och inkuberades under en timme i 3% normalt getserum för att minimera icke-specifik märkning. Vävnadsavsnitt inkuberades sedan över natten vid 4 ° C i 3% normalt getserum och anti-FosB (SC-48, 1: 5000 utspädning, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Sektioner tvättades, inkuberades i biotinylerad get-anti-kanin-Ig (1: 200-utspädning, Vector Laboratories, Burlingame, CA) under en timme, tvättades och inkuberades i avidin-biotinkomplex (1: 200-utspädning, Elite kit-Vector Laboratories) . Peroxidasaktivitet visualiserades genom reaktion med 0.05% diaminobensidin (innehållande 0.015% H2O2). Tissuesektionerna var Nissl motsträckta (med användning av metylenblå / azurblå II). Skivor kodades för blindräkning. ΔFosB-IR-neuroner räknades vid 50X (olja) förstoring med användning av den optiska fraktionsmetoden och StereoInvestigator datorsoftware. Samplingsparameterinformation: räkningsramen (50um x 50um x 10um) var densamma för alla regioner som kvantifierades; Gridstorleken bestämdes dock för varje hjärnområde för att säkerställa att totala bilaterala cellantal skulle motsvara 100-300 för att uppnå en variationskoefficient mindre än 0.1. Data beräknades som procent av ΔFosB-positiva kärnor (antal ΔFosB-positiva kärnor / antal neuroner) för varje region.

FosB-antikroppen som användes i denna studie (SC-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) höjdes mot en intern region av FosB och känner igen både FosB och FosB. Fastän denna antikropp känner igen både FosB ochAFos B, kommer de immunopositiva neuronerna som kvantifieras i denna studie att kallas ΔFosB-positiva neuroner, eftersom det har visat sig att missbruksmedel, inklusive alkohol, specifikt inducerar ΔFosB, inte FosB, i neuroner. Perrotti et al. ([2008]) uppmätt ΔFosB induktion (som svar på kronisk administrering av missbruk, inklusive alkohol) med användning av två antikroppar: en som känner igen FosB och FosB (SC-48) och en selektiv för FosB (inte kommersiellt tillgänglig) och fann att för alla droger studerades, är immunoreaktiviteten observerad med användning av FosB-antikroppen (SC-48) beroende av AFosB, eftersom de inte upptäckte några immunoreaktiva neuroner med användning av en antikroppsselektiv för FosB i full längd [10]. Dessutom är ΔFosB känt att induceras i hjärnområde och celltypsspecifikt sätt, genom olika kroniska behandlingar och utmärkta recensioner om detta ämne är tillgängliga [11,43,44].

Förkortningar och placeringar av neuroanatomiska strukturer

Il - infralimbisk cortex (+1.70 mm); Cg1 - cingulate cortex 1 (+1.1 mm); Cg2 - cingulate cortex 1 (+1.10 mm); NAcc-kärna - nucleus accumbens core (+1.10 mm); NAcc skal - nucleus accumbens skal (+1.10 mm); LSi - mellanliggande mellanliggande septum (+1.10 mm); La - lateral amygdala (-1.22 mm); Bla - basolateral amygdala (-1.22 mm); CeC / CeL - central kapsel och central lateral amygdala (-1.22 mm); CeMPV - medial posterioventral del av amygdalas centrala kärna (-1.22 mm); PAG - periaquaductal grey (-3.64 mm); EW - Edinger-Westphal kärna (-3.64 mm); VTA - ventralt tegmentalt område (-3.64 mm); DR - dorsal raphe (- 4.60 mm); PBN - parabrakial kärna (-5.2 mm); NTS - nucleus tractus solitarius (−6.96 mm). Musen Hjärna i Stereotaxiska Koordinater[45] användes för att subjektivt matcha en till tre sektioner för kvantifiering av varje hjärnområde.

Statistiska förfaranden

Data rapporteras som medelvärdet ± SEM, utom när annat anges. Data fördelades normalt. Statistik utfördes med hjälp av Statistica version 6 (StatSoft, Tulsa, OK, USA) och GraphPad Prism-versionen 4.00 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Upprepade åtgärder tvåvägs ANOVAs utfördes för etanolförbrukning och preferensdata för att utvärdera skillnader mellan grupper. Två- och trevägs ANOVAs utfördes för ΔFosB-data för att utvärdera interaktioner och huvudeffekter för grupp (höga koncentrationer, låga koncentrationer och vatten), hjärnområde och genotyp. Bonferronis korrigering för flera jämförelser och Bonferronis post-hoc utfördes vid behov. Specifikt föreställde vi att stress- och belöningskretsarna skulle ha ökat FosB hos möss med minskad alkoholpreferens. För varje hybridkors användes Pearson's r för att identifiera närvaron av signifikanta korrelationer mellan ΔFosB-nivåer och etanolpreferens och konsumtion i etanol-erfarna möss.

Hierarkisk clustering utfördes för att visualisera hur dataen varierar och utvärdera hur datagruppen tillsammans. Imputerade medianvärden ersatte saknade procent ΔFosB-data, som inte översteg 15% av data. Även om det finns en större grad av osäkerhet än om de införda värdena faktiskt hade observerats, kräver hierarkisk gruppanalys fullständig medlemskap eller fullständig radering för fallvisa jämförelser. Hierarkisk clustering utfördes med användning av Wards metod och de resulterande klusterna beställdes av den första principiella komponenten av en huvudkomponentanalys (JMP®, Version 8, SAS Institute Inc., Cary, NC). För vatten och etanol-erfarna grupper omvandlades ΔFosB-data för varje hjärnområde till z-poäng och analys av huvudkomponenter utfördes för att bestämma antalet kluster. Uppgifterna kluster sedan av hjärnregioner och individer som använder övervakad hierarkisk klusteranalys.

Konkurrerande intressen

Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande intressen.

Författarnas bidrag

ARO, YAB, RAH, TAJ bidrog till utformningen av studien. ARO förvärvade data. ARO, IP, RDM analyserade data. ARO, RDM, IP, TAJ, YAB och RAH var inblandade i att utarbeta och revidera manuskriptet. Alla författare läste och godkände det slutliga manuskriptet.

Tack

Vi vill tacka Drs. Jody Mayfield och Colleen McClung för användbara diskussioner och Marni Martinez, Jennifer Stokes, Michelle Foshat, Jose Cienfuegos, Jamie Seymour och Darshan Pandya för tekniskt bistånd. Denna forskning stöddes av Integrative Neuroscience Initiative på Alkoholism Consortium Grant AA13520, och National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism Grants AA06399-S och AA16424.

referenser

  • Garcia-Andrade C, Wall TL, Ehlers CL. Firewater myten och svar på alkohol i Mission indianer. Am J Psykiatri. 1997;154: 983-988. [PubMed]
  • Schuckit MA, Smith TL, Kalmijn J. Fynden över undergrupper om alkoholhalten som en riskfaktor för alkoholanvändning: en högskolepopulation av kvinnor och latinos. Alkoholklin Exp Exp. 2004;10: 1499-1508. [PubMed]
  • Belknap JK, Crabbe JC, Young ER. Frivillig konsumtion av etanol i 15 innavlade musstammar. Psychopharmacology. 1993;112: 503-510. doi: 10.1007 / BF02244901. [PubMed] [Cross Ref]
  • Blednov YA, Metten P, Finn DA, Rhodos JS, Bergeson SE, Harris RA, Crabbe JC. Hybrid C57BL / 6J x FVB / NJ-möss dricker mer alkohol än C57BL / 6J-möss. Alkoholklin Exp Exp. 2005;29:1949–1958. doi: 10.1097/01.alc.0000187605.91468.17. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Blednov YA, Ozburn AR, Walker D, Ahmed S, Belknap JK. et al. Hybridmus som genetiska modeller med hög alkoholkonsumtion. Behav Genet. 2010;40:93–110. doi: 10.1007/s10519-009-9298-4. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Ozburn AR, Harris RA, Blednov YA. Beteendemässiga skillnader mellan C57BL / 6JxFVB / NJ och C57BL / 6JxNZB / B1NJ F1 hybridmöss: förhållande till kontroll av etanolintag. Behav Genet. 2010;40:551–563. doi: 10.1007/s10519-010-9357-x. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Melendez RI, Middaugh LD, Kalivas PW. Utveckling av alkoholavskrivning och eskaleringseffekt i C57BL / 6J. Alkoholklin Exp Exp. 2006;30:2017–2025. doi: 10.1111/j.1530-0277.2006.00248.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Porrino LJ, Whitlow CT, Samson HH. Effekter av självadministrering av etanol och etanol / sackaros på graden av lokal cerebral glukosutnyttjande hos råttor. Brain Res. 1998;791(1-2): 18-26. [PubMed]
  • Williams-Hemby L, Porrino LJ. Låga och måttliga doser etanol ger distinkta mönster av cerebrala metaboliska förändringar hos råttor. Alkoholklin Exp Exp. 1994;18(4):982–988. doi: 10.1111/j.1530-0277.1994.tb00070.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Distinkta mönster av DeltaFosB induktion i hjärnan av missbruk. Synapse. 2008;62(5):358–369. doi: 10.1002/syn.20500. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: en molekylär växel för långsiktig anpassning i hjärnan. Brain Res Mol Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Perrotti LI, Bolaños CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB ackumuleras i en GABAergic cellpopulation i den bakre delen av det ventrala tegmentala området efter psykostimulerande behandling. Eur J Neurosci. 2005;21:2817–2824. doi: 10.1111/j.1460-9568.2005.04110.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Wang YM. Upprepad alkoholadministration påverkar differentiellt c-Fos- och FosB-proteinimmunoreaktiviteten i DBA / 2J-möss. Alkoholklin Exp Exp. 1998;22:1646–1654. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03962.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Bachtell RK, Freeman P, Risinger FO. ITF uttryck i mus hjärnan under förvärv av alkohol självadministration. Brain Res. 2001;890:192–195. doi: 10.1016/S0006-8993(00)03251-0. [PubMed] [Cross Ref]
  • Bachtell RK, Wang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE. Alkoholdryck producerar hjärnområde-selektiva förändringar i uttryck av inducerbara transkriptionsfaktorer. Brain Res. 1999;847(2):157–165. doi: 10.1016/S0006-8993(99)02019-3. [PubMed] [Cross Ref]
  • Kalivas PW. Hur bestämmer vi vilka läkemedelsinducerade neuroplastiska förändringar som är viktiga? Nat Neurosci. 2005;8:1440–1441. doi: 10.1038/nn1105-1440. [PubMed] [Cross Ref]
  • Crews FT, Nixon K. Mekanismer för neurodegenerering och regenerering i alkoholism. Alkohol. 2009;44: 115-127. doi: 10.1093 / alcalc / agn079. [Cross Ref]
  • Khisti RT, Wolstenholme J, Shelton KL, Miles MF. Karakterisering av etanol-deprivationseffekten i substrainer av C57BL / 6-möss. Alkohol. 2006;40: 119-126. doi: 10.1016 / j.alcohol.2006.12.003. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Urocortin 1-fördelning i mushinnan är stamberoende. Neuroscience. 2005;132: 729-740. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2004.12.047. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE. Lesioner av Edinger-Westphal-kärnan i C57BL / 6J-möss störan etanolinducerad hypotermi och etanolförbrukning. Eur J Neurosci. 2004;20:1613–1623. doi: 10.1111/j.1460-9568.2004.03594.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Yoneyama N, Tanchuck MA, Mark GP, Finn DA. Urocortin 1 mikroinjektion i musens laterala septum reglerar förvärv och uttryck av alkoholkonsumtion. Neuroscience. 2008;151: 780-790. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2007.11.014. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Turek VF, Tsivkovskaia NO, Hyytia P, Harding S, Lê AD, Ryabinin AE. Urocortin 1 uttryck i fem par råttor linjer selektivt uppfödas för skillnader i alkoholdryck. Psychopharmacology. 2005;181:511–517. doi: 10.1007/s00213-005-0011-x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Weitemier AZ. Urokortin 1-neurokretsen: etanolkänslighet och potentiellt deltagande i alkoholkonsumtion. Brain Res Rev. 2006;52: 368-380. doi: 10.1016 / j.brainresrev.2006.04.007. [PubMed] [Cross Ref]
  • Samson HH, Tolliver GA, Haraguchi M, Hodge CW. Alkohol självadministration: roll av mesolimbisk dopamin. Ann NY Acad Sci. 1992;654:242–253. doi: 10.1111/j.1749-6632.1992.tb25971.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • McBride WJ, Li TK. Djurmodeller av alkoholism: neurobiologi av högt alkoholhaltigt beteende hos gnagare. Crit Rev Neurobiol. 1998;12:339–369. doi: 10.1615/CritRevNeurobiol.v12.i4.40. [PubMed] [Cross Ref]
  • Koob GF, Roberts AJ, Schulteis G, Parsons LH, Heyser CJ, Hyytiä P, Merlo-Pich E, Weiss F. Neurokretsen mål i etanolbelöning och beroende. Alkoholklin Exp Exp. 1998;22:3–9. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03611.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Rodd ZA, Melendez RI, Bell RL, Kuc KA, Zhang Y, Murphy JM, McBride WJ. Intrakraniell självadministration av etanol inom det ventrala tegmentala området hos manliga Wistar-råttor: bevis för involvering av dopaminneuroner. J Neurosci. 2004;24:1050–1057. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1319-03.2004. [PubMed] [Cross Ref]
  • Gessa GL, Muntoni F, Collu M, Vargiu L, Mereu G. Lågdoser etanol aktiverar dopaminerga neuroner i det ventrala tegmentala området. Brain Res. 1985;348:201–203. doi: 10.1016/0006-8993(85)90381-6. [PubMed] [Cross Ref]
  • Brodie MS, Shefner SA, Dunwiddie TV. Etanol ökar avfyrningsgraden för dopaminneuroner i råtta ventral tegmentalområdet in vitro. Brain Res. 1990;508:65–69. doi: 10.1016/0006-8993(90)91118-Z. [PubMed] [Cross Ref]
  • Heilig M, Koob GF. En nyckelroll för kortikotropinfrisättande faktor i alkoholberoende. Trender Neurosci. 2007;30(8):399–406. doi: 10.1016/j.tins.2007.06.006. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Dyr W, Kostowski W. Bevis för att amygdala är involverad i de inhiberande effekterna av 5-HT3-receptorantagonister vid alkoholdryck hos råttor. Alkohol. 1995;12:387–391. doi: 10.1016/0741-8329(95)00023-K. [PubMed] [Cross Ref]
  • Gilpin NW, Richardson HN, Koob GF. Effekter av CRF1-receptor och opioidreceptorantagonister på beroendeframkallade ökningar av alkoholdryck av alkoholföreträdande (P) råttor. Alkoholklin Exp Exp. 2008;32:1535–1542. doi: 10.1111/j.1530-0277.2008.00745.x. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Hyytiä P, Koob GF. GABAA-receptorantagonism i den förlängda amygdalen minskar självtillförsel av etanol hos råtta. Eur J Pharmacol. 1995;283:151–159. doi: 10.1016/0014-2999(95)00314-B. [PubMed] [Cross Ref]
  • Roberto M, Madamba SG, Moore SD, Tallent MK, Siggins GR. Etanol ökar GABAergic överföring på både pre- och postsynaptiska ställen i råtta centrala amygdala neuroner. Proc Natl Acad Sci. 2003;100: 2053-2058. doi: 10.1073 / pnas.0437926100. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Roberts AJ, Cole M, Koob GF. Intra-amygdala muscimol minskar operant etanol självförvaltning i beroende råttor. Alkoholklin Exp Exp. 1996;20:1289–1298. doi: 10.1111/j.1530-0277.1996.tb01125.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Möller C, Wiklund L, Sommer W, Thorsell A, Heilig M. Minskad experimentell ångest och frivillig etanolförbrukning hos råttor efter centrala men inte basolaterala amygdala skador. Brain Res. 1997;760:94–101. doi: 10.1016/S0006-8993(97)00308-9. [PubMed] [Cross Ref]
  • Wee S, Koob GF. Dynorphin-Kappa opioidsystemets roll i de förstärkande effekterna av missbruksmedel. Psykofarmakologi (Berl) 2010;210:121–135. doi: 10.1007/s00213-010-1825-8. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Walker BM, Valdez GR, McLaughlin JP, Bakalkin G. Targeting dynorfin / kappa opioidreceptorsystem för att behandla alkoholmissbruk och beroende. Alkohol. 2012;46: 359-370. doi: 10.1016 / j.alcohol.2011.10.006. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Sperling RE, Gomes SM, Sypek EI, Carey AN, McLaughlin JP. Endogen kappa-opioidmediering av stressinducerad förstärkning av etanolkonditionerad platspreferens och självadministrering. Psykofarmakologi (Berl) 2010;210:199–209. doi: 10.1007/s00213-010-1844-5. [PubMed] [Cross Ref]
  • McBride WJ. Amygdala centrala kärnor och effekterna av alkohol och alkoholdryck beteende hos gnagare. Pharmacol Biochem Behav. 2002;71:509–515. doi: 10.1016/S0091-3057(01)00680-3. [PubMed] [Cross Ref]
  • Dole VP, Gentry RT. Mot en analog av alkoholism hos möss: Skalfaktorer i modellen. Proc Natl Acad Sci. 1984;81: 3543-3546. doi: 10.1073 / pnas.81.11.3543. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Dole VP, Gentry RT. Mot en analog av alkoholism hos möss: Kriterier för erkännande av farmakologiskt motiverad dricks. Proc Natl Acad Sci. 1985;82: 3469-3471. doi: 10.1073 / pnas.82.10.3469. [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Nestler EJ. Molecular neurobiology of addiction. Är j addict 2001;10: 201-217. doi: 10.1080 / 105504901750532094. [PubMed] [Cross Ref]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: en molekylär mediator av långvarig neural och beteendets plasticitet. Brain Res. 1999;835:10–17. doi: 10.1016/S0006-8993(98)01191-3. [PubMed] [Cross Ref]
  • Franklin KJ, Paxinos G. Mushjärnan i stereotaxiska koordinater. 2. San Diego, CA: Akademisk; 2001.