Glukokortikoider Reglering av FosB / ΔFosB-uttryck inducerad av kronisk opiatexponering i hjärnbelastningssystemet (2012)

PLoS One. 2012;7(11):e50264. doi: 10.1371/journal.pone.0050264. Epub 2012 21 november.
 
García-Pérez D, Laorden ML, Milanés MV, Núñez C.

Källa

Grupp för cellulär och molekylär farmakologi, Institutionen för farmakologi, University School of Medicine, Murcia, Spanien.

Abstrakt

Kronisk användning av droger förändrar djupt det stresskänsliga systemet. Upprepad exponering för morfin leder till ansamling av transkriptionsfaktorn ΔFosB, särskilt i hjärnområden som är associerade med belöning och stress. De ihållande effekterna av ΔFosB på målgener kan spela en viktig roll i den plasticitet som induceras av missbruksdroger. Nyligen publicerade bevis tyder på att stressrelaterade hormoner (t.ex. glukokortikoider, GC) kan inducera anpassningar i hjärnans stresssystem som sannolikt involverar förändringar i genuttryck och transkriptionsfaktorer. Denna studie undersökte GC:s roll i regleringen av FosB/ΔFosB i både hypotalamiska och extrahypotalamiska hjärnans stressystem under morfinberoende. För detta ändamål mättes uttrycket av FosB/ΔFosB hos kontrollråttor (sham-opererade) och adrenalektomiserade (ADX) råttor som gjordes opiatberoende efter tio dagars morfinbehandling. Hos skenopererade råttor inducerades FosB/ΔFosB efter kronisk morfinadministrering i alla undersökta hjärnstresområden: nucleus accumbens (skal) (NAc), bäddkärnan i stria terminalis (BNST), central amygdala (CeA), hypotalamisk paraventrikulär kärna (PVN) och kärnan i den noradrenerga cellgruppen i solitärkanalen (NTS-A(2)). Adrenalektomi dämpade den ökade produktionen av FosB/ΔFosB som observerades efter kronisk morfinexponering i NAc, CeA och NTS. Dessutom minskade ADX uttrycket av FosB/ΔFosB inom CRH-positiva neuroner i BNST, PVN och CeA. Liknande resultat erhölls i NTS-A(2) TH-positiva neuroner och NAc pro-dynorfin-positiva neuroner. Dessa data tyder på att neuroadaptation (uppskattad som ackumulering av FosB/ΔFosB) till opiater i hjärnområden associerade med stress moduleras av GC, vilket stöder bevisen för ett samband mellan hjärnstresshormoner och beroende.

Beskrivning

Opiatläkemedel, såsom morfin, är effektiva smärtstillande medel som används för att behandla många former av akut och kronisk smärta. Allvarliga biverkningar såsom tolerans och abstinens bidrar dock till opiatberoende och begränsar deras användning. Dessutom har den icke-medicinska användningen av opiater (heroin, morfin) ökat under de senaste åren. Ökande bevis pekar på att olika mekanismer för genreglering (inklusive epigenetiska, molekylära, cellulära och kretsnivåeffekter) är en del av de förändringar som missbruksdroger inducerar i hjärnan, vilket indikerar en potentiell terapeutisk strategi för beroendebehandling [1] – [4].

En central fråga inom drogmissbruksområdet har varit att identifiera proteiner som medierar övergången från akuta till långsiktiga effekter av dessa läkemedel. Av särskilt intresse för studier av beroende är Fos-familjen av transkriptionsfaktorer. Denna familj inkluderar c-Fos, Fra-1 och Fra-2, FosB och ΔFosB, en trunkerad splitsningsvariant av fullängds-FosB [5] . Till skillnad från andra medlemmar av Fos-familjen induceras ΔFosB måttligt i hjärnan efter akut läkemedelsadministrering, men på grund av dess ovanligt långa halveringstid kvarstår det i veckor, till och med månader, efter att droganvändningen upphört. Som ett resultat ackumuleras ΔFosB-nivåerna gradvis vid upprepad läkemedelsexponering [6] , [7] , vilket tyder på att ΔFosB skulle kunna representera en mekanism genom vilken missbruksdroger producerar varaktiga förändringar i genuttrycksmönstret långt efter att läkemedlet har avbrutits [8].

Det har rapporterats att upprepad exponering för kokain, amfetamin, cannabinoider eller morfin leder till en ökning av ΔFosB i hjärnområden relaterade till drogernas positiva förstärkande effekter, såsom nucleus accumbens (NAc), prefrontal cortex och dorsal striatum. Denna ökning har föreslagits vara en neuroadaptation som leder till ökad känslighet för missbruksdroger och sårbarhet för att utveckla karakteristiska beroendebeteenden [9] – [13] . Vi har nyligen visat att ökningen av FosB/ΔFosB-nivåer efter kronisk morfinadministrering inte bara är begränsad till belöningssystemet, utan även sker i hjärnans stresssystem (vilket har relaterats till drogernas negativa förstärkande effekter), såväl som i kärnan i den noradrenerga cellgruppen solitary tract-A2 (NTS-A2 , det huvudsakliga noradrenerga systemet som innerverar stressneurokretsarna) [14] . I överensstämmelse med dessa fynd inducerar flera former av kronisk stress också ΔFosB i NAc och andra hjärnregioner [15] , [16].

Beroende är en komplex sjukdom eftersom många faktorer bidrar till utvecklingen och upprätthållandet av denna neurologiska sjukdom. En faktor är stress, som har varit involverad i specifika aspekter av drogberoende [17] – [21] . Både hypotalamus-hypofys-binjureaxeln (HPA, den primära endokrina stressvägen) och det extrahypotalamiska stresssystemet (som omfattar den utökade amygdalan och NTS-A2 ) dysregleras av kronisk administrering av läkemedel med beroendepotential [14] , [22] . Dessutom är HPA-axelns respons likartad efter både stressiga stimuli och akut exponering för missbruksdroger [23] , [24] , med förhöjd frisättning av kortikotropinfrisättande hormon (CRH), adrenokortikotrop hormon (ACTH) och glukokortikoider (GC) . Denna respons underlättar anpassning till akuta miljöförändringar, men kan också leda till beteendepatologier under kroniska stresstillstånd, såsom beroende och depression [25] . Studier har ännu inte undersökt sambandet mellan GC och morfinberoende-inducerad FosB/ΔFosB-induktion i hjärnans stresssystem. Vi utvärderade därför GC:s inverkan på FosB/ΔFosB-uttryck efter kontinuerlig administrering av morfin i hjärnans stressrelaterade områden. För att besvara denna fråga undersökte vi först effekterna av bilateral adrenalektomi (ADX) på FosB/ΔFosB-immunreaktivitet (IR) i stresssystemets huvudkärnor hos morfinberoende råttor.

Aktiviteten i hjärnans stresssystem medieras av ett antal neurotransmittorer/neuromodulatorer. CRH är den huvudsakliga neuropeptiden som reglerar stresssystemets aktivitet och det har postulerats att det bidrar till både en redan existerande sårbarhet för beroendeframkallande droganvändning och senare sårbarhet för återfall [26] . Dessutom stöder rikligt med forskning vikten av att NTS-A2 innerverar hjärnans stresssystem vid drogberoende och den centrala rollen för noradrenalin (NA) som en neurotransmittor som modulerar denna neurokrets [27] . Slutligen tyder betydande bevis på att dynorfinuttryck aktiveras i striatum och amygdala under akut och kronisk läkemedelsadministrering [28] . Med tanke på dessa fakta var följande syfte med denna studie att identifiera GC:s roll på FosB/ΔFosB-uttryck i specifika populationer av hjärnans stresssystem under morfinberoende.

Gå till:

Resultat

Effekter av adrenalektomi på kroppsviktsökning och plasma ACTH och kortikosteronkoncentration hos morfinberoende råttor

Innan vi utförde immunodetektionsanalyserna utvärderade vi effekten av kronisk behandling med morfin. För detta ändamål registrerades djurens vikt på dagen för implantation av pellets och på dagen för avlivning (dag 10). Tvåvägs ANOVA avslöjade signifikanta huvudsakliga effekter på kroppsviktsökning för adrenalektomi [F(1,47) = 13.24, sid = 0.0007), morfinbehandling [F(1,47) = 281.05, sid<0.0001] och en interaktion mellan ADX och morfinbehandling [F(1,47) = 4.13, sid = 0.0479]. I enlighet med tidigare fynd [29], [30], post hoc analys indikerade att både sken- och ADX-grupper som gjorts beroende av morfin visade en signifikant (p<0.001) lägre viktökning (−13.75±5.0 g, n = 12; 3.84±2.45 g, n = 13 respektive) än det som observerats hos sken- och ADX-djur som fick placebopellets (44.58±1.7 g, n) = 12; 49.57±2.4 g, n = 12, respektive), vilket har tillskrivits det minskade födointaget som observerats hos dessa djur [29].

För att kontrollera effektiviteten av adrenalektomi mättes hormonkoncentrationer i plasma. Tvåvägs ANOVA som undersökte effekterna av adrenalektomi och morfin på ACTH och kortikosteron plasmakoncentration visade signifikanta huvudeffekter av adrenalektomi [ACTH: F(1,18) = 68.12, sid<0.0001; kortikosteron: F(1,45) = 10.42, sid = 0.0023). Som väntat, Newmans post hoc testet visade (Fig. S1) det i placebo (n = 6)- och morfin (n = 4)-ADX råttor plasmakoncentration av ACTH var högre (s<0.001) jämfört med skenopererade djur för de två utvärderade behandlingarna (placebo, n = 6; och morfin, n = 6). Inga förändringar observerades i plasmakoncentrationen av kortikosteron mellan ADX-placebo (n = 14) och ADX-morfin (n = 13) behandlade råttor. Koncentrationen av kortikosteron i ADX-morfinbehandlade råttor var signifikant (s<0.01) lägre än de som ses i sham-morfin (n = 10) behandlade råttor. Inga signifikanta förändringar sågs i sham-morfingruppen jämfört med sham-placebo (n = 12).

Adrenalektomi dämpar differentiellt morfinberoende-inducerad FosB/ΔFosB i hjärnstresssystemets underregioner

Hos kontrolldjur (placeboimplanterade råttor) identifierades svagt konstitutivt uttryck av FosB/ΔFosB-IR i alla områden av det stressrelaterade hjärnsystemet. Kronisk morfinbehandling resulterade i uppkomsten av FosB/ΔFosB i alla undersökta hjärnområden. I NAc (skal) visade tvåvägs ANOVA signifikanta huvudeffekter av adrenalektomi [F(1,16) = 6.44, sid = 0.0220] och kroniska morfinbehandlingar [F(1,16) = 19.98, sid = 0.0004]. Newman-Keuls post hoc-test visade (Fig. 2A–E) att det hos morfinbehandlade råttor fanns en signifikant (p<0.01) ökning av FosB/ΔFosB-uttryck. Hos morfinberoende ADX-råttor fanns en signifikant (p<0.05) minskning av FosB/ΔFosB-proteinuttryck i NAc. Tvåvägs ANOVA för BNST visade signifikant huvudeffekt av kronisk morfinbehandling [F(1,16) = 48.92, sid<0.0001]. Post hoc-analys visade en ökning (s<0.001) i FosB/ΔFosB i både sken- och ADX-morfinberoende djur, vilket indikerar att reglering av FosB/ΔFosB var relaterad till kronisk morfinexponering oavsett GC-koncentration (Fig. 2F–J). Tvåvägs ANOVA för FosB/ΔFosB i CeA visade signifikanta effekter av adrenalektomi [F(1,15) = 20.51, sid = 0.0004] och morfinförbehandling [F(1,15) = 27.52, sid<0.0001]. Post hoc testet visade en signifikant ökning (p<0.01) i FosB/ΔFosB-nivåer hos skenmorfinråttor jämfört med skenplaceboråttor, som försvagades (p<0.01) i den ADX-morfinberoende gruppen (Fig. 2K–O). Dessutom visade ADX placebo-pelleterade råttor lägre nivåer (p<0.01) av FosB/ΔFosB än skenplacebogruppen.

Figur 2  

Adrenalektomi reglerar differentiellt FosB/ΔFosB-proteinuttryck i hjärnans stresssystem.

Tvåvägs ANOVA som undersökte effekterna av adrenalektomi och morfin på FosB/ΔFosB-uttryck i PVN (parvocellulär underavdelning) visade signifikant effekt av morfinbehandling [F(1,16) = 16.31, sid<0.0001]. Post hoc analys visade en signifikant (Fig. 3A–E) öka (sid<0.05) i FosB/ΔFosB-IR i PVN från både sken- och ADX-morfinbehandlade råttor. I NTS-A2 katekolaminerg cellgrupp, tvåvägs ANOVA avslöjade en huvudeffekt av morfinbehandling [F(1,11) = 76.33, sid<0.0001]. Post hoc analys visade en signifikant (Fig. 3F–J) ökning av FosB/ΔFosB-IR hos sham-morfinråttor jämfört med sham-placebogruppen (p<0.001), som försvagades (p<0.05) i den ADX-morfinberoende gruppen.

Figur 3  

Effekter av adrenalektomi på FosB/ΔFosB-proteinuttryck i PVN och NTS-A2 från morfinberoende råttor.

Kronisk morfinexponering inducerar FosB/ΔFosB-uttryck i CRH-neuroner i PVN, BNST och CeA. Påverkan av glukokortikoider

Tvåvägs ANOVA för FosB/ΔFosB-positiva/CRH-positiva neuroner i BNST visade huvudeffekten av adrenalektomi [F(1,20) = 64.43, sid<0.0001] och signifikant interaktion mellan adrenalektomi och morfinbehandling [F(1,20) = 6.80, sid = 0.0169]. I PVN avslöjade tvåvägs ANOVA signifikant huvudeffekt av adrenalektomi [F(1,19) = 11.35, sid = 0.0032]. Tvåvägs ANOVA för FosB/ΔFosB-positiva/CRH-positiva neuroner i CeA visade en signifikant huvudeffekt av adrenalektomi [F(1,20) = 106.85, sid<0.0001], morfinbehandling [F(1,20) = 7.33, sid = 0.0136] och signifikant interaktion mellan adrenalektomi och läkemedelsförbehandling [F(1,20) = 7.07, sid = 0.0151]. Figurer 4, , 5,5, ,66 visa representativa bilder av BNST-, PVN- och CeA-sektioner från sken- eller ADX-kontroller och morfinberoende råttor. Post hoc analys avslöjade att ett betydande antal FosB/ΔFosB-positiva neuroner befanns samuttrycka CRH i BNST (p<0.01; Fig. 4E), PVN (sid<0.05; Fig. 6E) och CeA (s<0.01; Fig. 6E) hos sken-morfinråttor jämfört med sken-placebogruppen. Dessutom var antalet FosB/ΔFosB-positiva neuroner som samtidigt uttrycker CRH i ADX placebo-pelleterade råttor och i morfinberoende råttor signifikant lägre i de tre kärnorna jämfört med motsvarande behandling hos skendjur, som visas i Figurer 4, , 5,5, ,66 (BNST: sid<0.01 mot sken plus placebo; sid<0.001 mot sken plus morfin; PVN: sid<0.05 mot sken plus placebo; sid<0.001 mot sken plus morfin; CeA: sid<0.001 vs sken plus placebo och vs sken plus morfin).

Figur 4  

Adrenalektomi försvagade FosB/ΔFosB-proteinuttryck i BNST CRH-positiva neuroner.
Figur 5  

Adrenalektomi försvagade FosB/ΔFosB-proteinuttryck i PVN CRH-positiva neuroner.
Figur 6  

Adrenalektomi antagoniserade FosB/ΔFosB-proteinuttryck i de CeA CRH-positiva neuronerna.

På BNST-nivå visade tvåvägs ANOVA för antalet CRH-positiva neuroner att det fanns en huvudeffekt av ADX [F(1,20) = 103.92, p<0.0001] samt kronisk morfin [F(1,20) = 4.35, p<0.05]. Som visas i Tabell 1, Newman–Keuls post hoc test avslöjade att ADX-placebo- och morfinpelleterade råttor visade lägre CRH-neuroner (p<0.001) än de sken-placebo- eller morfinberoende grupperna. Vid PVN visade tvåvägs ANOVA en signifikant effekt av adrenalektomi [F(1,19) = 11.35, sid = 0.0032]. Tvåvägs ANOVA för totala CRH-neuroner på CeA-nivå avslöjade signifikanta effekter av ADX [F(1,20) = 240.09, p<0.0001] och huvudsaklig interaktion mellan ADX och kronisk morfin [F(1,20) = 4.49, sid = 0.0467]. Tabell 1 visar att det fanns en signifikant minskning av CRH-neuroner vid CeA från ADX-placebo- eller morfinbehandlade råttor. Tabell 1 visar också att kronisk morfinexponering inducerar en höjning (p<0.05) av CRH-positiva neuroner vid BNST- och CeA-nivåer.

Tabell 1  

Bord 1. Effekter av adrenalektomi på antalet CRH-positiva neuroner i BNST, PVN och CeA, pro-DYN-positiva neuroner i NAc och TH-positiva neuroner i NTS, i placebo- eller morfinpelleterade djur.

Effekter av adrenalektomi på FosB/ΔFosB till DYN-positiva neuroner i NAc(Shell)

Vi observerade inga signifikanta förändringar i antalet pro-DYN-positiva celler som samuttrycker FosB/ΔFosB i NAc (skal) efter kronisk morfinexponering (Fig 7) angående placebogruppen. Tvåvägs ANOVA för FosB/ΔFosB-positiva/pro-DYN-positiva neuroner i NAc (skal) visade huvudeffekten av ADX [F(1,19) = 10.11, sid = 0.0049]. Som visas i Fig. 7C, antalet FosB/ΔFosB-positiva neuroner som samuttrycker pro-DYN i ADX morfinberoende råttor var signifikant (p<0.05) lägre med avseende på motsvarande behandling hos skendjur. Som visas i Tabell 1ADX inducerade inga förändringar i total pro-DYN-cell från NAc (skal).

Figur 7  

Effekter av adrenalektomi på FosB/ΔFosB-proteinuttryck i NAc (skal) pro-DYN-positiva neuroner och i NTS TH-positiva neuroner från morfinberoende råttor.

Adrenalektomi hämmar Morfinberoende-inducerad FosB/ΔFosB till TH-positiva neuroner i NTS-A2 Noradrenergic Cell Group

Tvåvägs ANOVA för FosB/ΔFosB-positiva/TH-positiva neuroner i NTS-A2 visade huvudeffekten av ADX [F(1,15) = 64.86, sid<0.0001], morfinbehandling [F(1,15) = 29.62, sid<0.0001], och signifikant interaktion mellan adrenalektomi och morfinbehandling [F(1,15) = 19.24, sid = 0.0005]. Newman-Keuls post hoc testet indikerar att ett betydande antal FosB/ΔFosB-positiva neuroner visade sig samuttrycka TH i NTS (p<0.001; Fig. 7F) hos skenmorfinråttor. Dessutom var antalet FosB/ΔFosB-positiva neuroner som samuttrycker TH i ADX morfinberoende råttor signifikant lägre (p<0.001) jämfört med motsvarande behandling hos skendjur, som visas i Fig. 7F. Å andra sidan, som visas i Tabell 1ADX inducerade inga förändringar i totala TH-positiva neuroner i NTS.

Gå till:

Diskussion

De aktuella resultaten indikerade för första gången att hjärnans GC-signalering modulerade kronisk morfinadministration-inducerat FosB/ΔFosB-uttryck i hjärnstresssystemet på ett regionspecifikt sätt.

Sammanhängande bevislinjer tyder på att stress ökar risken för beroendeframkallande beteenden [18] . Ihållande stressiga stimuli förändrar syntes, uttryck och signalering i stressrelaterade signalvägar (t.ex. CRH, GC, NA, etc.). Dessutom påverkar missbruksdroger stressvägarna, vilket resulterar i förändringar i genuttryck, med signaleffekter på belöning och stressrelaterade molekyler [31] . Stress och missbruksdroger delar förmågan att utlösa överlappande mönster av neuronal aktivering i det centrala nervsystemet, vilket resulterar i aktivering av omedelbart genuttryck.

Det har utförligt beskrivits att beroendeframkallande substanser och kroniskt stressande stimuli ökar uttrycket av transkriptionsfaktorn ΔFosB i de huvudsakliga kärnorna som är involverade i deras positiva förstärkande effekter [12] , [13] , [32] , [33] , och det har föreslagits att de ihållande effekterna av ΔFosB på målgener kan spela en viktig roll i utvecklingen av anpassningar som kännetecknar beroende [9] , [34] . Emellertid är lite känt om vare sig uttrycket av ΔFosB i hjärnans stresssystem efter kronisk administrering av missbruksdroger eller de molekylära mekanismerna för morfinframkallad ΔFosB-ackumulering i stressrelaterade områden.

I den föreliggande studien undersökte vi GC:s inblandning i det morfininducerade FosB/ΔFosB-uttrycket i det hormonella stresssystemet (HPA-axeln), vilket kontrolleras av CRH i PVN, såväl som i de extrahypotalamiska stresssystemen (som inkluderar den utsträckta amygdalan; [35] ), medierade av CRH och andra stressrelaterade system (inklusive NA och dynorfin; [19] ).

Vi visade nyligen att kronisk morfinadministrering i sju dagar ökade FosB/ΔFosB-uttrycket i den utsträckta amygdalan, PVN och NTS-A2 [ 14] . I överensstämmelse med dessa data visar nuvarande resultat att kronisk morfinadministrering framkallade en ökning av FosB/ΔFosB i CeA, BNST och NAc(skal) samt i PVN och NTS-A2 . Den utsträckta amygdalan har associerats med drogbelöning. Faktum är att alla större missbruksdroger aktiverar dopaminerg överföring från VTA till NAc(skal) och CeA. Denna aktivering och de därmed följande positiva förstärkande effekterna av missbrukssubstanser har visat sig vara relaterade till GC-effekter på GR lokaliserad i VTA [28] . För att stödja denna hypotes visar våra resultat att FosB/ΔFosB-IR i NAc(skal) och CeA var försvagat hos ADX-djur, vilket kan indikera en överhörning mellan AP-1-transkriptionsfaktorer och GR under morfinberoende [36] . I motsats till de observerade effekterna av ADX på FosB-uttryck i NAc och CeA, tyder nuvarande resultat på att kronisk morfin ökade Fos/ΔFosB-uttryck i PVN och BNST på ett GC-oberoende sätt.

Flera signalsubstanser i hjärnans stresssystem, såsom CRH, NA och DYN, har relaterats till de aversiva tillstånden som är karakteristiska för beroendeprocessen [35], [37]-[39]. Nuvarande fynd visade att kronisk morfinexponering framkallade en signifikant ökning av Fos/ΔFosB-uttryck inom CRH-innehållande neuroner i BNST, CeA och PVN. Fos-familjen av transkriptionsfaktorer kan verka vid cykliska AMP-responselement (CRE) platser [40]. Betydande bevis tyder på att ΔFosB kan fungera som antingen en transkriptionsrepressor eller aktivator [40], [41]. Gom CRH-genen har ett CRE-motiv i sin promotorsekvens, kan det föreslås att FosB/ΔFosB-ackumulering i CRH-neuroner kan mediera de morfininducerade förändringarna i CRH-nivåer, som rapporterats för kokaineffekter [42], särskilt i CeA och BNST, där vi för första gången rapporterade en förbättring av antalet CRH-positiva neuroner under morfinberoende. Som stöd för denna hypotes har en ökning av CRH-mRNA-nivåer beskrivits i CeA efter kronisk administrering av morfin [43]. Emellertid var antalet CRH-positiva neuroner oförändrat i PVN efter kronisk morfinbehandling. Dessa resultat är i enlighet med tidigare fynd som visar att kronisk morfinexponering inte inducerar förändringar i PVN CRH hnRNA [44]. Eftersom PVN CRH-uttryck nedregleras av GC [45], och med tanke på att nuvarande arbete och andra [29], [44] visade att kronisk opiatexponering inte modifierade kortikosteronfrisättning, verkar det logiskt att kronisk morfinadministrering inte förändrade antalet CRH-celler.

Perifer administrering av kortikosteron ökar CRH mRNA-uttryck i CeA och BNST [46] , [47] . Dessutom minskade ADX CRH-uttryck i CeA [48] , [49] . Följaktligen har vi observerat att ökningen av antalet CRH-neuroner i BNST och CeA under morfinberoende avtog efter adrenalektomi. Med tanke på att ökningen av Fos/ΔFosB inom CRH-neuroner under morfinberoende dämpades hos ADX-djur, kan det föreslås en roll för Fos/ΔFosB i regleringen av CRH-uttryck av GC i den utsträckta amygdalan. Å andra sidan är det välkänt att GC negativt reglerar uttrycket av CRH-genen i PVN [45] . I överensstämmelse visade nuvarande data tydligt att adrenalektomi avskaffade ökningen av Fos/ΔFosB-IR i CRH-innehållande neuroner under morfinberoende i denna kärna.

I denna studie visade immunkemiska data att kronisk morfinbehandling signifikant ökade färgningen för Fos/ΔFosB i NTS-A2, som minskade efter ADX. När vi undersökte de specifika neurala populationerna som uttryckte FosB/ΔFosB fann vi en robust ökning av Fos/ΔFosB-IR inom TH (det hastighetsbegränsande enzymet i katekolaminsyntes)-positiva neuroner. NA har visat sig spela en huvudroll vid missbruk [50]. I tidigare arbete framkallade kronisk morfinexponering en förbättring av TH-nivåerna i NTS-A2 [14], [29]. Det är känt att TH-genen har ett AP-1-ställe i sin promotor [51]. Våra resultat kan tyda på att FosB/ΔFosB är involverad i opiatinducerad ökning av TH-nivåer i NTS-A2. Hjärnstammens noradrenerga cellgrupp uttrycker höga nivåer av GC-receptorer (GR). Det har visats att GC har en tillåtande roll i noradrenerg neurotransmission [29], [30], [52]. Följaktligen påverkade administrering av GR-antagonister flera aspekter av NA-aktivitet, inklusive TH-aktivering och neuronal aktivitet [30]. Nuvarande resultat visade att efter ADX var det en minskning av TH-positiva celler som uttrycker FosB/ΔFosB i NTS-A2. Med tanke på att adrenalektomi blockerade ökningen av TH-proteinnivåer i NTS-A2 under morfinberoende [29]och att ett GRE/AP-1-ställe har beskrivits i TH-genpromotorn [53], kan våra data peka ut ΔFosB som en mediator i effekterna av GC på noradrenerg aktivitet i NTS-A2 under opiatberoende.

DYN har postulerats som en möjlig målgen för ΔFosB [54] , [55] . Våra resultat visar att kronisk morfinexponering inte signifikant förändrade FosB/ΔFosB-uttrycket inom pro-DYN-uttryckande neuroner i NAc (skal ). Beträffande ΔFosB-reglering av DYN-uttryck rapporterade Zachariou et al [33] en liten men signifikant minskning av DYN mRNA-nivåer i NAc från ΔFosB-överuttryckande möss, vilket postulerar att denna transkriptionsfaktor hämmar DYN-uttryck. Utifrån våra data kan man inte dra slutsatsen att kronisk morfin modifierar DYN-uttryck genom FosB/ΔFosB-aktivitet, med tanke på att våra resultat har erhållits på proteinnivå.

Det har postulerats att DYN/kappa-opioidsystemet verkar inducera prodepressiva tillstånd som involverar element av aversion. Denna aversiva respons kan involvera ömsesidiga interaktioner med NAc, DA och det extrahypotalamiska CRH-systemet [35] . Emellertid är lite känt om en möjlig GC-reglering av DYN-uttryck i NAc. Det har föreslagits att ΔFosB i NAc, delvis genom repression av DYN-uttryck, ökar känsligheten för de belönande effekterna av morfin och kokain och leder till motståndskraft mot stress [9] , [33] . Våra data stöder en roll för GC i att reglera de positiva förstärkande effekterna av morfin medierade av det mesokortikolimbiska DA-systemet, givet att antalet FosB/ΔFosB/pro-DYN-positiva neuroner minskar i NAc från ADX-råttor. Dessa effekter kan medieras direkt av GR, som finns i hela den mesolimbiska belöningsvägen, eller indirekt via CRH-projektioner som härrör från CeA och/eller BNST till VTA och NAc, vilka är underaktiverade under morfinberoende hos ADX-råttor.

Sammanfattningsvis visar denna studie att GC är kritiskt involverade i FosB/ΔFosB-ackumulering i hjärnans stresssystem efter kronisk morfinexponering, vilket kan resultera i bestående förändringar i genuttrycksmönstret i stressrelaterade områden. De aktuella resultaten indikerar också att FosB/ΔFosB kan bidra till de GC-beroende förändringarna i hjärnans stresssystems plasticitet under opiatberoende. Ytterligare studier är nödvändiga för att fastställa de intracellulära mekanismer genom vilka kroniska opiater inducerar FosB/ΔFosB i utvalda stressrelaterade regioner, samt den mekanism som är ansvarig för undertryckandet av morfininducerat FosB/ΔFosB-uttryck av GC.

Gå till:

Metoder

material

Kortikosteron och kolesterol köptes från Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, USA). Pellets av kortikosteron gjordes av Dr Márton Vajna, (Apoteksadministrationen, Pharmacy University, Semmelweis University, Budapest, Ungern). Pellets av morfinbas (Alcaliber Laboratories, Madrid, Spanien) eller laktos (kontroll) framställdes vid Institutionen för farmaci och farmaceutisk teknologi (Apotekskolan, Granada, Spanien). Pentobarbital köptes från Hospira (Hoofddorp, Nederländerna). Ketaminklorhydrat och xylazin köptes från Labs. Merial (Lyon, Frankrike) och Labs. Calier (Barcelona, ​​Spanien), respektive.

djur

Sprague-Dawley-hanråttor (220–240 g i början av experimentet; Harlan, Barcelona, ​​Spanien) hölls i par i burar (längd 45 cm; bredd 24 cm; höjd 20 cm) vid ankomsten till ett rum med kontrollerad temperatur (22±2°C) och luftfuktighet (50±10%), med fri tillgång till vatten och mat (Harlan Teklad standardgnagarfoder; Harlan Interfauna Ibérica, Barcelona, ​​Spanien). Djuren anpassades till en standard 12 timmars ljus-mörkercykel (ljus på: 08 h 00 min – 20 h 00 min) i 7 dagar före början av experimenten. Alla kirurgiska och experimentella procedurer utfördes i enlighet med Europeiska gemenskapernas rådsdirektiv av den 24 november 1986 (86/609/EEC) och godkändes av de lokala kommittéerna för djurforskning (REGA ES300305440012). Studien godkändes av Murcias bioetiska kommitté (RD 1201/2005) och Ministerio de Ciencia y Tecnología (SAF/FEDER 2009-07178), Spanien.

adrenalektomi

Råttorna adrenalektomiserades bilateralt och en kortikosteronpellet implanterades för att säkerställa låga men stabila nivåer av GC [29] . Råttorna adrenalektomiserades bilateralt (ADX) via en dorsal metod under 90 mg/kg ketaminklorhydrat och 8 mg/kg xylazin (ip) anestesi, och implanterades subkutant (sc) med långsamt frisättande kortikosteronpellets vid operationen. Sammansättningen av steroidpellets (25 mg kortikosteron plus 75 mg kolesterol) valdes för att ge en stabil kortikosteronkoncentration motsvarande dygnsrytmiskt nadir upp till 20 dagar efter implantation [56] . ADX-råttor med kortikosteronersättning (ADX plus kortikosteron) uppvisar inte en provokationsinducerad ökning av plasmakortikosteron [56] . Efter operationen hade ADX plus kortikosteron-råttor fritt val att dricka isoton saltlösning (0.9 % NaCl) för att ersätta utarmat natrium sekundärt till förlusten av aldosteron på grund av adrenalektomi. Kontrollråttorna genomgick samma kirurgiska ingrepp (sham) utan binjureextirpation. Siham- och ADX plus kortikosteronråttor fick återhämta sig från operationen i 5 dagar innan morfinberoendeproceduren. Lyckad bilateral adrenalektomi bekräftades genom plasmakoncentrationen av kortikosteron och ACTH och genom obduktion av ADX-djuren.

Läkemedelsbehandling och experimentell procedur

Fem dagar efter operationen implanterades råttorna subkutant med två 75 mg morfinpellets under lätt eterbedövning. Kontrollråttorna fick placebopellets innehållande laktos. Denna procedur har visat sig ge konstanta plasmakoncentrationer av morfin som börjar några timmar efter implantationen av pelletsen och ett fullständigt abstinenssyndrom efter akut injektion av opioidantagonister [57] . Beroende av morfin uppnås 24 timmar efter implantationen av pelletsen och förblev konstant i 15 dagar [58] . Tio dagar efter implantationen av morfin- eller placebopellets avlivades råttorna. De fyra experimentella förhållandena som undersöktes för HPA-axelaktivitet (plasmakoncentration av kortikosteron och ACTH), FosB/ΔFosB-uttryck, CRH-uttryck, DYN-uttryck, TH-uttryck och FosB/ΔFosB-uttryck i CRH-, DYN- och TH-positiva neuroner var: (i) sham-placebo; (ii) sham-morfin; (iii) ADX-placebo; (iv) ADX-morfin. Råttornas viktökning kontrollerades under behandlingen för att säkerställa att morfinet frigjordes korrekt från pelletsen, eftersom det är känt att långvarig morfinbehandling inducerar en minskning av kroppsviktökning orsakad av lägre kaloriintag [29].

Hjärnperfusion och sektionering

Råttorna djupt sövdes med en överdos av pentobarbital (100 mg/kg ip) och perfunderades transkardiellt med saltlösning följt av fixativ innehållande paraformaldehyd (4 % paraformaldehyd i 0.1 M boratbuffert, pH 9.5). Efter att de perfunderade hjärnorna hade tagits bort, efterfixerades de i samma fixativ i 3 timmar och förvarades vid 4 °C i PBS innehållande 10 % sackaros tills koronala sektioner (30 µm tjocklek) skars rostrokaudalt på en frysmikrotom (Leica, Nussloch, Tyskland). Paxinos och Watsons (2007) atlas [59] användes för att identifiera olika hjärnregioner hos råttor: NAc (skal), BNST, PVN, CeA och NTS-A2 ( Figur 1 ). Sektionerna kryoskyddades och förvarades vid −20 °C fram till användning.

Figur 1  

Schematiska ritningar av koronala sektioner som indikerar hjärnområden (rektanglar) i vilka FosB/ΔFosB-positiva kärnor räknades i NAc(skalet), BNST, CeA, PVN och NTS [59].

FosB/ΔFosB immunhistokemi

Sektioner bearbetades för immunhistokemi enligt beskrivning av Núñez et al [29]. Kortfattat, efter blockering med 0.3 % H2O2 och 2 % normalt getserum (Sigma, USA) vävnadssnitt inkuberades i primärt anti-FosB/ΔFosB-antiserum (polyklonalt kanin, #sc-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA; 1[förhållande]1000). Den primära antikroppen som används i denna studie skiljer inte mellan FosB och dess stabila splitsningsvariant ΔFosB. Upprepad exponering för FosB-inducerande stimuli har visat sig desensibilisera akut FosB-induktivitet [15], [40], [60]. Därför kan skillnader mellan FosB/ΔFosB-färgning hos morfinförbehandlade och icke-förbehandlade råttor tolkas som att de främst återspeglar skillnader i ΔFosB-ackumulering. Antigener visualiserades med konventionellt avidin-biotin-immunoperoxidasprotokoll (Vectastain ABC Elite Kit; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). 3,3'-diaminobensidintetrahydroklorid (DAB; Sigma, USA) reaktion intensifierades med nickel-ammoniumsulfat. Sektioner monterades på krom-alun gelatinbelagda objektglas, dehydratiserades och täckglas.

Dubbelmärkning av immunhistokemi av FosB/ΔFosB-immunoreaktiva kärnor och CRH-, TH- och DYN-positiva neuroner

För FosB/ΔFosB-TH dubbelmärkning bearbetades vävnadssnitt från varje råtta i varje behandlingsgrupp för FosB/ΔFosB-immunreaktivitet med användning av DAB-nickelintensifiering och sedan avslöjades TH med endast DAB-kromogen. FosB/ΔFosB-immunfärgning utfördes som beskrivits tidigare. Efter FosB/ΔFosB-färgningen sköljdes sektioner i PBS, behandlades med 2 % normalt getserum och inkuberades sedan över natten med den polyklonala anti-TH-antikroppen från kanin (AB152, Chemicon, USA; 1)[förhållande]6000) vid rumstemperatur. Samma immunhistokemiska förfaranden som beskrivits ovan följdes. TH-antikropp-peroxidaskomplexet utvecklades i DAB. Sektionerna monterades på krom-alun gelatinbelagda objektglas och täckglas.

För dubbelmärkningen FosB/ΔFosB-CRH och FosB/ΔFosB-pro-DYN var processen densamma som beskrivits tidigare för FosB/ΔFosB-TH. För att detektera DYN-uttryckande neuroner i NAc tillämpades en antigenåtervinningsprocedur genom att inkubera hjärnsektioner i citratbuffert (10 mM citronsyra, 0.05 % Tween 20, pH 6.0) vid 60°C under 20 minuter före blockeringsproceduren. Det primära anti-CRH-kaninantiserumet tillhandahölls av Wylie W. Vale (The Salk Institute, La Jolla, CA, USA) och användes vid 1[förhållande]500 spädning i 72 timmar vid 4°C. Den primära pro-DYN-antikroppen köptes från Neuromics (# GP10110, Neuromics, Edina, MN, USA) och späddes 1[förhållande]2000 (72 h, 4°C).

Bildanalys

Bilder togs med hjälp av ett Leica-mikroskop (DM 4000B; Leica) anslutet till en videokamera (DFC290, Leica). FosB/ΔFosB-positiva cellkärnor räknades med hjälp av ett datorstödd bildanalyssystem (QWIN, Leica). Gränserna för NTS-A2 , BNST, CeA, NAc (skal) och den parvocellulära underavdelningen av PVN skisserades och antalet positiva profiler registrerades. Antalet FosB/ΔFosB-kärnprofiler inom gränserna för de intressanta cellgrupperna räknades bilateralt i fyra till fem sektioner från varje råtta och medelvärdet beräknades för att erhålla ett enda värde för varje råtta. För att undvika observatörsbias kvantifierades alla sektioner av en blindad forskare. Totalt antal för olika hjärnregioner uttrycks som medelvärde ± SEM.

Kvantifiering av TH-, CRH- och DYN-positiva celler och FosB/ΔFosB dubbelfärgade profiler

Positiva kärnor för FosB/ΔFosB-immunreaktivitet detekterades med användning av samma konventionella ljusmikroskopi som beskrivs ovan och räknades vid x40-förstoring. FosB/ΔFosB-positiva CRH-, TH- eller DYN-celler identifierades som celler med bruna cytosoliska avlagringar för CRH-positiv, TH-positiv och DYN-positiv färgning och blå/mörk kärnfärgning för FosB/ΔFosB. Ett kvadratiskt fält (195 µm) lades ovanpå den fångade bilden för att använda som referensarea. Antalet dubbelmärkta neuroner som observerades bilateralt räknades i fyra till fem sektioner från varje djur i PVN, BNST och CeA för CRH-neuroner, NTS för TH-neuroner och NAc för DYN-neuroner. De CRH-, TH- och DYN-positiva cellerna utan en synlig kärna (FosB/ΔFosB-negativa CRH-, TH- eller DYN-celler) inkluderades också i analysen.

radioimmunoanalys

Blod samlades in i iskylda rör innehållande 5 % EDTA och centrifugerades sedan (500 g ; 4 °C; 15 min). Plasman separerades, delades in i två alikvoter och förvarades vid −80 °C tills den analyserades för kortikosteron eller ACTH. Plasmakoncentrationen av kortikosteron och ACTH kvantifierades med specifika kortikosteron- och ACTH-antikroppar för råttor ([ 125I ]-CORT och [ 125I ]-ACTH RIA; MP Biomedicals, Orangeburg, NY, USA). Analysens känslighet var 7.7 ng/ml för kortikosteron och 5.7 pg/ml för ACTH.

Statistisk analys

Data presenteras som medelvärde ± SEM och analyserades med hjälp av statistikpaketet GraphPad Prism (San Diego, CA, USA). Data analyserades med tvåvägsvariansanalys (ANOVA) med behandling (placebo, morfin) och kirurgi (sham, ADX) som oberoende variabler. Newman-Keuls post hoc- test användes för individuella gruppjämförelser. Skillnader med p < 0.05 ansågs vara signifikanta.

Gå till:

Stödjande information

Figur S1

Effekter av adrenalektomi (ADX) på plasmakoncentrationer av ACTH (A) och kortikosteron (B) hos kontrollpersoner och hos morfinbehandlade djur. Kirurgisk ADX ökade ACTH-nivåerna både hos placebo- och morfinbehandlade råttor, medan den minskade plasmakoncentrationen av kortikosteron hos morfinbehandlade råttor. Data representerar medelvärdet ± SEM av plasmanivåer av ACTH och kortikosteron hos råttor som förbehandlats med placebo eller morfin i 10 dagar. ***p < 0.001 jämfört med placebo; ++ p < 0.01, +++ p < 0.001 jämfört med placebo med morfin.

(TIF)

Klicka här för ytterligare datafil.(734K, tif)
Gå till:

Erkännanden

Vi tackar Dr Márton Vajna och Anna Földes, från Semmelweis University (Budapest, Ungern) för beredning av kortikosteronpellets.

Gå till:

Finansieringsdeklaration

Detta arbete stöddes av följande bidrag: Ministerio de Ciencia e Imnovación (SAF/FEDER 2009-07178 och SAF/FEDER 2010-17907), Spanien; Red de Trastornos Adictivos (RD06/0001/1006 och RD06/0001/1001), Spanien; Fundación Séneca, Agencia Regional de Ciencia y Tecnología Región de Murcia (15405/PI10), Spanien. DG-P stöds av ett stipendium från Ministerio de Ciencia e Innovación (AP2009-2379). Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera eller förberedelse av manuskriptet.
Gå till:

Referensprojekt

1. Volkow ND, Skolnick P (2012) Nya mediciner för missbruksrubbningar: utmaningar och möjligheter. Neuropsychopharmacology 37: 290-292. [PMC gratis artikel] [PubMed]
2. Robison AJ, Nestler EJ (2011) Transkriptionella och epigenetiska mekanismer för missbruk. Nat Rev Neurosci 12: 623-637. [PMC gratis artikel] [PubMed]
3. Hutchison ER, Okun E, Mattson MP (2009) Den terapeutiska potentialen hos mikroRNA vid skador på nervsystemet, degeneration och reparation. Neuromolekylär Med 11: 153-161. [PMC gratis artikel] [PubMed]
4. Li MD, van der Vaart AD (2011) MikroRNA i missbruk: anpassningens mellanhänder? Mol psykiatri 16: 1159-1168. [PubMed]
5. Mumberg D, Lucibello FC, Schuermann M, Muller R (1991) Alternativ splitsning av fosB-transkript resulterar i differentiellt uttryckta mRNA som kodar för funktionellt antagonistiska proteiner. Gener Dev 5: 1212-1223. [PubMed]
6. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Kroniska Fos-relaterade antigener: stabila varianter av ΔFosB inducerade i hjärnan av kroniska behandlingar. J Neurosci 17: 4933-4941. [PubMed]
7. Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel AM (1996) Förändringar på nätverksnivå i uttryck av inducerbara Fos-Jun-proteiner i striatum under kronisk kokainbehandling och uttag. Neuron 17: 147-156. [PubMed]
8. Chao J, Nestler EJ (2004) Molekylär neurobiologi av drogberoende. Årlig granskning av medicin 55: 113-132.
9. Muschamp JW, Nemeth CL, Robison AJ, Nestler EJ, Carlezon J (2012) ΔFosB förstärker de givande effekterna av kokain samtidigt som de minskar de pro-depressiva effekterna av Kappa-Opioid Receptor Agonist U50488. Biologisk psykiatri 71: 44-50. [PMC gratis artikel] [PubMed]
10. Gago B, Suárez-Boomgaard D, Fuxe K, Brené S, Reina-Sánchez MD, et al. (2011) Effekt av akut och kontinuerlig morfinbehandling på transkriptionsfaktoruttryck i subregioner av råttans caudate putamen. Markerad modulering genom D4-receptoraktivering. Brain Res 1407: 47-61. [PubMed]
11. Kaplan GB, Leite-Morris KA, Fan WY, Young AJ, Guy MD (2011) Opiatsensibilisering inducerar FosB/ΔFosB-uttryck i prefrontala kortikala, striatala och amygdala hjärnregioner. PLoS ONE 6: e23574. [PMC gratis artikel] [PubMed]
12. Nye HE, Nestler EJ (1996) Induktion av kroniska fos-relaterade antigener i råtthjärna genom kronisk morfinadministrering. Mol Pharmacol 49: 636-645. [PubMed]
13. McClung CA, Nestler EJ, Zachariou V (2005) Reglering av genuttryck genom kronisk morfin- och morfinabstinens i Locus Ceruleus och ventraltegmentalområdet. J Neurosci 25: 6005-6015. [PubMed]
14. Núñez C, Martín F, Földes A, Laorden ML, Kovács KJ, et al. (2010) Induktion av FosB / FosB i hjärnspänningssystemrelaterade strukturer under morfinberoende och uttag. Journal of Neurochemistry 114: 475-487. [PubMed]
15. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, et al. (2004) Induktion av ΔFosB i belöningsrelaterade hjärnstrukturer efter kronisk stress. J Neurosci 24: 10594-10602. [PubMed]
16. Vialou V, Robison AJ, LaPlant QC, Covington HE, Dietz DM, et al. (2010) ΔFosB i hjärnbelöningskretsar medierar motståndskraft mot stress och antidepressiva reaktioner. Nat Neurosci 13: 745-752. [PMC gratis artikel] [PubMed]
17. Ambroggi FC, Turiault M, Milet A, Deroche-Gamonet V, Parnaudeau S, et al. (2009) Stress och beroende: glukokortikoidreceptor i dopaminoceptiva neuroner underlättar kokainsökning. Nat Neurosci 12: 247-249. [PubMed]
18. Sinha R (2008) Kronisk stress, droganvändning och sårbarhet för beroende. Ann NY Acad Sci 1141: 105-130. [PMC gratis artikel] [PubMed]
19. Koob GF, Volkow ND (2010) Neurokretsen av missbruk. Neuropsychopharmacology 35: 217-238. [PMC gratis artikel] [PubMed]
20. Koob G, Kreek MJ (2007) Stress, oreglering av drogbelöningsvägar och övergången till drogberoende. Am J Psykiatri 164: 1149-1159. [PMC gratis artikel] [PubMed]
21. Koob GF, Le Moal M (2008) Neurobiologiska mekanismer för motståndare motiverande processer i beroende. Phil Trans R Soc B 363: 3113-3123. [PMC gratis artikel] [PubMed]
22. Koob GF (2006) Neurobiologi av missbruk: en neuroadaptational syn relevant för diagnos. Addiction 101: 23-30. [PubMed]
23. Carrasco GA, Van de Kar LD (2003) Neuroendokrin farmakologi av stress. European Journal of Pharmacology 463: 235-272. [PubMed]
24. Piazza PV, Le Moal M (1997) Glukokortikoider som ett biologiskt substrat av belöning: fysiologiska och patofysiologiska konsekvenser. Brain Research recensioner 25: 359-372. [PubMed]
25. Cleck JN, Blendy JA (2008) Att göra en dålig sak värre: negativa effekter av stress på drogberoende. J Clin Invest 118: 454-461. [PMC gratis artikel] [PubMed]
26. Goodman A (2008) Beroendes neurobiologi. En integrerad recension. Biochem Pharmacol 75: 266-322. [PubMed]
27. Dunn AJ, Swiergiel AH (2008) Rollen av kortikotropinfrisättande faktor och noradrenalin i stressrelaterade reaktioner och de inbördes förhållandena mellan de två systemen. European Journal of Pharmacology 583: 186-193. [PMC gratis artikel] [PubMed]
28. Koob GF, Le Moal M (2008) Addiction och hjärnans antireward system. Ann Rev Physiol 59: 29-53.
29. Núñez C, Földes A, Pérez-Flores D, García-Borrón JC, Laorden ML, et al. (2009) Förhöjda glukokortikoidnivåer är ansvariga för induktion av tyrosinhydroxylas (TH) mRNA-uttryck, fosforylering och enzymaktivitet i kärnan i det solitära området (NTS-A2) under morfinabstinens. Endokrinologi 150: 3118-3127. [PMC gratis artikel] [PubMed]
30. Navarro-Zaragoza J, Hidalgo JM, Laorden ML, Milanés MV (2012) Glukokortikoidreceptorer deltar i den opiatabstinensinducerade stimuleringen av NTS noradrenerg aktivitet hos råttor och i de somatiska tecknen på morfinabstinens. Br J Pharmacol DOI: 10.1111/j.1476–5381.2012.01918.x .
31. Renthal W, Nestler EJ (2008) Epigenetiska mekanismer i narkotikamissbruk. Trends in Molecular Medicine 14: 341-350. [PMC gratis artikel] [PubMed]
32. Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, et al. (2011) Effekt av ΔFosB-överuttryck på opioid- och cannabinoidreceptormedierad signalering i kärnan accumbens. Neuro 61: 1470-1476. [PMC gratis artikel] [PubMed]
33. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, et al. (2006) En viktig roll för ΔFosB i nucleus accumbens i morfinverkan. Nat Neurosci 9: 205-211. [PubMed]
34. Hyman SE, Malenka RC (2001) Beroende och hjärnan: Tvångsens neurobiologi och dess uthållighet. Nat Rev Neurosci 2: 695-703. [PubMed]
35. Koob GF (2008) En roll för Brain Stress System i missbruk. Neuron 59: 11-34. [PMC gratis artikel] [PubMed]
36. Deroche-Gamonet V, Sillaber I, Aouizerate B, Izawa R, Jaber M, et al. (2003) Glukokortikoidreceptorn som ett potentiellt mål för att minska kokainmissbruk. J Neurosci 23: 4785-4790. [PubMed]
37. Nestler EJ (2001) Molekylär grund för långvarig plasticitet underliggande beroende. Nat Rev Neurosci 2: 119-128. [PubMed]
38. Laorden ML, Ferenczi S, Pintér-Kübler B, González-Martín LL, Lasheras MC, et al. (2012) Hypothalamiska Orexin-A-neuroner är inblandade i hjärnstresssystemets reaktion på morfinabstinens. PLoS ONE 7: e36871. [PMC gratis artikel] [PubMed]
39. Navarro-Zaragoza J, Núñez C, Ruiz-Medina J, Laorden ML, Valverde O, et al. (2011) CRF(2) förmedlar den ökade noradrenerga aktiviteten i den hypotalamiska paraventrikulära kärnan och det negativa tillståndet av morfinabstinens hos råttor. Br J Pharmacol 162: 851-862. [PMC gratis artikel] [PubMed]
40. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, et al. (2004) DFosB: en molekylär switch för långsiktig anpassning i hjärnan. Molecular Brain Research 132: 146-154. [PubMed]
41. Nestler EJ (2008) Transkriptionsmekanismer för beroende: DFosBs roll. Phil Trans R Soc B 363: 3245-3255. [PMC gratis artikel] [PubMed]
42. Crespo JA, Manzanares J, Oliva JM, Corchero J, Garcia-Lecumberri C, et al. (2003) Utrotning av självadministrering av kokain ger förändringar i genuttryck av kortikotropinfrisättande faktor i den paraventrikulära kärnan i hypotalamus. Molecular Brain Research 117: 160-167. [PubMed]
43. Maj M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B (2003) Morfin och kokain påverkan på CRF-biosyntes i råttkärnan i amygdala. neuropeptider 37: 105-110. [PubMed]
44. Núñez C, Foldes A, Laorden ML, Milanes MV, Kovács KJ (2007) Aktivering av stressrelaterat hypotalamisk neuropeptidgenuttryck under morfinabstinens. J Neurochem 101: 1060-1071. [PubMed]
45. Swanson LW, Simmons DM (1989) Differentiella steroidhormon och neurala influenser på peptid-mRNA-nivåer i CRH-celler i den paraventrikulära kärnan: en hybridiseringshistokemisk studie i råtta. J Comp Neurol 285: 413-435. [PubMed]
46. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Effekter av kortikosteron på CRH-mRNA och innehåll i bäddkärnan i stria terminalis; jämförelse med effekterna i den centrala kärnan av amygdala och den paraventrikulära kärnan i hypotalamus. Brain Res 657: 141-149. [PubMed]
47. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Kortikosteroneffekter på kortikotropinfrisättande hormon mRNA i den centrala kärnan av amygdala och den parvocellulära regionen av den paraventrikulära kärnan i hypotalamus. Brain Res 640: 105-112. [PubMed]
48. Viau V, Soriano L, Dallman MF (2001) Androgener ändrar kortikotropinfrisättande hormon och arginin Vasopressin mRNA inom framhjärnans platser som är kända för att reglera aktiviteten i hypotalamus-hypofys-binjureaxeln. Journal of Neuroendocrinology 13: 442-452. [PubMed]
49. Palkovits M, Young WS, Kovács K, Tóth Z, Makara GB (1998) Förändringar i kortikotropinfrisättande hormongenuttryck av centrala amygdaloidneuroner efter långvariga paraventrikulära lesioner och adrenalektomi. Neuroscience 85: 135-147. [PubMed]
50. Smith RJ, Aston-Jones G (2008) Noradrenergisk överföring i den förlängda amygdalaen: roll i ökad läkemedelssökning och återfall under långvarig drogmissbruk. Brain Struct Funct 213: 43-61. [PubMed]
51. Sabban EL, Hiremagalur B, Nankova B, Kvetnanský R (1995) Molekylärbiologi av stressframkallad induktion av katekolaminbiosyntetiska enzymer. Ann NY Acad Sci 771: 327-338. [PubMed]
52. Roozendaal B, Okuda S, de Quervain DJF, McGaugh JL (2006) Glukokortikoider interagerar med känsloinducerad noradrenerg aktivering för att påverka olika minnesfunktioner. Neuroscience 138: 901-910. [PubMed]
53. Rani CSS, Elango N, Wang SS, Kobayashi K, Strong R (2009) Identifiering av en aktivatorprotein-1-liknande sekvens som glukokortikoidresponselementet i råtttyrosinhydroxylasgenen. Mol Pharmacol 75: 589-598. [PMC gratis artikel] [PubMed]
54. Hughes P, Dragunow M (1995) Induktion av omedelbart-tidiga gener och kontroll av neurotransmittorreglerat genuttryck i nervsystemet. Pharmacol Rev 47: 133-178. [PubMed]
55. Kovacs GL, Telegdy G (1988) Hypothalamo-neurohypofyseala neuropeptider och experimentellt drogberoende. Brain Res Bull 20: 893-895. [PubMed]
56. Kovács KJ, Földes A, Sawchenko PE (2000) Glukokortikoid negativ feedback riktar sig selektivt till vasopressintranskription i parvocellulära neurosekretoriska neuroner. J Neurosci 20: 3843-3852. [PubMed]
57. Frenois F, Cador M, Caille S, Stinus L, Le Moine C (2002) Neurala korrelat av de motiverande och somatiska komponenterna av naloxonutfälld morfinabstinens. Eur J Neurosci 16: 1377-1389. [PubMed]
58. Guld LH, Stinus L, Inturrisi CE, Koob GF (1994) Förlängd tolerans, beroende och abstinens efter implantation av subkutan morfinpellets hos råtta. Eur J Pharmacol 253: 45-51. [PubMed]
59. Paxinos G. och Watson C (2007) Råtthjärnan i stereotaxiska koordinater. Amsterdam: Academic Press.
60. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, et al. (2008) Distinkta mönster av FosB-induktion i hjärnan av missbruksdroger. Synapsen 62: 358-369. [PMC gratis artikel] [PubMed]