Dopamin är nödvändig för Cue Dependent Fear Conditioning (2009)

Jonathan P. Fadok, 1,2 Tavis MK Dickerson, 2 och Richard D. Palmiter2 *
J Neurosci. Författarens manuskript; tillgänglig i PMC 2010 March 9.
Publicerad i slutredigerad form som:
J Neurosci. 2009 September 9; 29 (36): 11089-11097.
doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1616-09.2009.

1 Graduate Program i Neurobiology and Behavior, University of Washington, Seattle, WA 98195
2 Institutionen för biokemi och Howard Hughes Medical Institute, University of Washington, Seattle, WA, 98195
* Korrespondens ska adresseras till: Richard D. Palmiter, HHMI och Institutionen för biokemi, Box 357370, University of Washington, Seattle, WA 98195. E-post: [e-postskyddad]
Förläggarens slutredigerade version av den här artikeln finns gratis på J Neurosci
Se andra artiklar i PMC som citerar den publicerade artikeln.

Abstrakt

Dopamin (DA) är inblandad i många beteenden, inklusive motorfunktion, kognition och belöning dock är DA: s roll i rädslan bearbetning förblir tvetydig. För att undersöka DA: s roll i rädsla-relaterad inlärning testades dopamin-bristande (DD) möss i ett rädsla-potentierat paradis. DA-syntes kan återställas i DD-möss genom administrering av 3, 4-dihydroxi-L-fenylalanin (L-Dopa), vilket möjliggör bedömning av räddningshantering i antingen en DA-utarmad eller -replete stat. Fear-potentierad startle var frånvarande i DD-möss men kunde återställas genom L-Dopa-administration omedelbart efter räddningskonditionering. Selektiv viralmedierad återställning av DA-syntes inom det ventrala tegmentala området, fullständigt återställd rädsla för lärande i DD-möss och återställande av DA-syntes till DA-neuroner som projicerar för det basolaterala amygdalaåterställda kortsiktiga minnet, men inte långsiktigt minne eller chocksensibilisering. Vi visar också att DA D1-receptorn (D1R) och D2-liknande receptorer är nödvändiga för cueberoende främmande lärande.
Dessa fynd indikerar att DA som verkar på flera receptorsubtyper inom multipla målregioner underlättar stabiliseringen av rädsla minne.

Nyckelord: Dopamin, rädsla, rädsla-potentierad startle, amygdala, dopamin D1-receptor, dopamin D2-receptor

Beskrivning

Neuromodulatorn DA är viktigt för belöningsrelaterat lärande och drogsökande beteende (Schultz, 2002, Wise, 2004) och ackumulerande bevis tyder på att DA också kan vara viktigt för rädslelaterat lärande (Lamont och Kokkinidis, 1998; Guarraci et al . 1999; Greba och Kokkinidis, 2000; Guarraci et al., 2000; Greba et al., 2001; Pezze och Feldon, 2004; de Oliveira et al., 2006). DA neuroner i det ventrala midbrainprojektet till limbiska hjärnområden som är viktiga för rädsla för lärande och DA-nivåer i dessa hjärnområden ökar under avkommande händelser (Abercrombie et al., 1989, Kalivas och Duffy, 1995; Doherty och Gratton, 1997; Inglis och Moghaddam , 1999). Dessutom ökar vissa neurbränna DA-neuroner sina bränningshastigheter till aversiva stimuli och prediktiva signaler (Guarraci och Kapp, 1999, Horvitz, 2000, Joshua et al., 2008). Vidare har DA visat sig underlätta långsiktig potentiering, ett nyckelnoralt korrelat av minne, på områden som är kritiska för rädsla för lärande, såsom hippocampus och amygdala (Bissiere et al., 2003; Citron and Manahan-Vaughan, 2006; Swant och Wagner, 2006).

Trots de framsteg som gjorts när det gäller DA neuron fysiologi att frukta, är DAs exakta roll och dess kognitiva receptorer i rädslelaterad lärande oupplöst. Injektioner av D1R-liknande antagonister systematiskt eller i amygdala har visats blockera förvärv eller uttryck av rädslelaterad inlärning; Andra har dock visat att dessa läkemedel inte har någon effekt (Guarraci et al., 1999; Greba and Kokkinidis, 2000; de Oliveira et al., 2006). Dessutom har D1R-liknande agonister visat sig antingen förbättra eller inte har någon effekt på rädslaskonditionering (Guarraci et al., 1999; Greba et al., 2000; Inoue et al., 2000; de Oliveira et al., 2006). Analoga skillnader har konstaterats i studier som använder agonister eller antagonister för D2R-liknande receptorer (Guarraci et al., 2000; Greba et al., 2001; Ponnusamy et al., 2005; de Oliveira et al., 2006). Dessa skillnader kan bero på beteendemetodik, dosberoende effekter av injicerade läkemedel eller skillnader i val av farmakologiska medel. Exempelvis varierar DA-receptorantagonister i stor utsträckning i deras selektivitet, medan vissa studier kan vara mer selektivt antagoniserande av D2-receptorer, andra kan antagoniseras bredare mot D2-, D3- och D4-receptorer (Missale et al., 1998).

För att förklara DA: s roll i rädsla-relaterad inlärning utnyttjade vi möss som saknade DA (DD-möss), såväl som möss som saknade antingen D1R- eller DA D2-receptorerna (D2R) och testade dem i ett rädsla-potentierat paradis. Fear-potentiated startle är ett paradis för Pavlovian-rädslan, där en neutral stimulans framkallar ökningar i det akustiska startle-svaret efter parning med en fotskock (Koch, 1999). Fear-potentiated startle är ett idealiskt paradigm för dessa studier eftersom det inte är beroende av en bedömning av frysningsbeteende, vilket är svårt att mäta i hypoaktiva DD-möss (Zhou och Palmiter, 1995). Eftersom DD-möss kan studeras i antingen ett DA-utarmat eller DA-fyllt tillstånd, ger de ett idealiskt tillfälle att studera DA: s roll i lärande och minnesbildning. Vidare kan användandet av virusmedierad leverans av Cre-rekombinas återställas selektivt till specifika målregioner genom reaktivering av en Th-allel av DD-möss (Hnasko et al., 2006). Selektiv restaurering av DA till specifika målområden möjliggör bedömning av hjärnregioner som regleras av DA-signalering under räddningskonditionering.

Material och metoder

Djur och behandlingar
DD-möss genererades som beskrivet (Hnasko et al., 2006). I korthet bär DD (Thfs / fs, DbhTh / +) möss två icke-funktionella tyrosinhydroxylas (Th) alleler, vilka har inaktiverats genom införande av en neomycinresistens (NeoR) gen flankerad av lox P-sidor i den första intronen av Th-genen . Dessa möss bär också en intakt dopamin-p-hydroxylas (Dbh) allel och en Dbh-allel med en målinriktad införing av Th-genen. Kontrolldjur bär minst en intakt Th-allel och en intakt Dbh-allel. Nivåer av icke-dopaminerga katekolaminer är normala hos DD-djur och nivåer av alla katekolaminer är normala hos kontrolldjur (Zhou och Palmiter, 1995, Szczypka et al., 1999). Möss upprätthölls på en blandad C57BL / 6 X 129 / Sv genetisk bakgrund. På grund av svår hypofagi injicerades DD-möss dagligen (ip) med L-Dopa vid 50 mg / kg vid en volym 33 μl / g (Zhou och Palmiter, 1995), som startade vid ungefär postnatal dag 10. Dessa injektioner återställer DA-funktionen för 8 till 10 hr (Szczypka et al., 1999). D1R knockout (KO) och D2R KO-möss har beskrivits (Drago et al., 1994; Kelly et al., 1997). Båda stammarna bibehölls på en C57BL / 6-bakgrund. På grund av tillväxthämning i D1R KO-möss avvenades de efter fyra veckor och matades sedan med fuktad chow för att främja tillväxt. Alla djur genotyperades genom PCR-analys. Manliga och kvinnliga möss utsattes för beteendestestning mellan åren av 2-5 månader. Alla möss hölls under en 12: 12 (ljus: mörk) cykel i en temperaturstyrd miljö med mat (5LJ5; PMI Feeds, St. Louis, MO) och vatten tillgängligt ad libitum. Alla beteendexperiment utfördes under ljuscykeln. Alla möss behandlades i enlighet med riktlinjer som fastställdes av National Institute of Health och University of Washington Institutionella djurvård och användningskommitté

För att bedöma om andra D2-liknande receptorer är viktiga för att lära sig rädsla, administrerades D2R KO-mössen D2-liknande antagonistetikloprid (Sigma, St. Louis, MO) vid 0.5 mg / kg (ip). Etikloprid löstes i 0.9% saltlösning och gavs vid en slutlig volym 10 / il. D2R vildtyps (WT) möss injicerades med vehikel.

Apparater
Ljuddämpande startkamrar (SR-Lab, San Diego Instruments, San Diego, CA) användes för att mäta prepulseinhibering, startljusresponser och rädsla-potentierad skymning. För svåra responser togs 65 1-msec-avläsningar, som startade vid pulsstart. För att mäta svaret på fotstötn, togs 500 1-msec-avläsningar, som startade vid chockstart. Toppansamplituden för svaret användes för att beräkna prepulseinhibering, startleaktioner, rädsla-potentierad start och chokreaktivitet. Vitt brus ljud producerades av en högfrekvent högtalare belägen i kammarens tak. Bakgrundsljudet behölls vid en konstant 65 dB-nivå. Ljudnivåer mättes i decibel (A-skala) med hjälp av en ljudnivåläsare (RadioShack, Fort Worth, TX). En kalibreringsenhet användes för att säkerställa integriteten hos de svaga reaktionsavläsningarna (San Diego Instruments, San Diego, CA). Ett 8-watt-ljus monterades på bakluckan i startboxen för användning som en cue.

Starta svarkurvorna
Efter en 5-min-behandlingsperiod presenterades djuren med en serie av sju försök med eskalerande ljudnivåer: från 80 till 120 dB, med en ITI av 30 sek. Denna serie presenterades 10 gånger för totalt 70-försök. I alla försök, förutom nollförsök där det inte fanns något ljud, var ljudpulsen 40 msec.

Prepulsinhibering
Djur gavs en 10-min-omvandlingsperiod efter vilken ämnen presenterades med 5 40-msec, 120-dB, puls-ensamma försök. Mössen presenterades sedan med 50-försök av antingen en startel puls-ensam test, en av tre prepulse-försök (5, 10 och 15-dB ovanför bakgrunden) eller en nollprovning där det inte fanns någon akustisk stimulans. Intertrialintervallet (ITI) var i genomsnitt 15 sek (intervall 5-25 sek). En uppskattad försök bestod av en 40-msec, 120-dB-puls av vitt brus. Prepulse-försök bestod av en 20-msec-varaktighet för XpxX, 70 eller 75-dB-intensitet, som föregick 80-msec 40-dB-puls av 120 msec. Prepulseinhibering beräknades för varje prepulsnivå med användning av följande formel:% hämning = [(medelstartad respons på prepulse-försök / medelstark respons på puls-ensam försök) × 100]. DD-möss testades i ett DA-utarmat tillstånd, 100-18-tim efter L-Dopa-injektion.

Fear-potentiated startle (7-dags paradigm)
På dag 1 (baslinje), efter en 5-min-behandlingsperiod, fick möss en pseudo-slumpmässigt beställd serie 20-försök, delade jämnt mellan cue och no-cue-förhållanden. För icke-cue-försök presenterades djur med en 40-msec, 105-dB akustisk puls. För cue-försök presenterades djuren med en 10-sek-ljuskue, som sammankopplades med en 40-msec, 105-dB-puls. ITI-medelvärdet var 120 sek (intervall 60 till 180 sek).

Utbildning uppstod på dagar 2, 4 och 6. Efter en 10-min-uppehållsperiod fick möss 10-presentationer av cue-ljuset, vilket sammankopplades med en 0.2-mA, 0.5-sek fotshock. ITI-medelvärdet var 120 sek (intervall 60 till 180 sek). Test sessionerna inträffade på dagar 3, 5 och 7 och var identiska med baslinjens session som beskrivs ovan. DD-möss var i DA-utarmat tillstånd, 18 till 24-tim efter deras sista L-Dopa-injektion, under baslinje, träning och test sessioner. L-Dopa injicerades efter träningstillfällen enligt vad som anges i figurlegenden. Följande formel användes för att beräkna rädsla-potentierad startle:% potentiation = [(medelvärden av svar på cue-försök / genomsnitt av svar på icke-cue-försök-1) × 100].

Fear-potentiated startle (3-dags paradigm)
Dagarna 1 och 3 (baslinje och test) av detta paradigm var identiska med de som beskrivits för 7-dagen, rädsla-potentierad startparadigm. På dag 2 (träning) fick möss 30-parning av 10-sek-ljuset med en 0.2-mA, 0.5-sek fotshock. ITI-metoden var 120 sek (intervall 60 till 180 sek). DD-möss var DA-utarmade under baslinjen, träning och testning.

Korttidsminne
Baslinje och test sessioner var identiska med de som beskrivs för 7-dagen paradigmet. På dag 2, efter en 5-min-fördröjningsperiod, fick möss 30-parningar av ett 10-sek-ljus som sammankopplades med en 0.5-sek, 0.2-mA-fotshock. ITI: s genomsnittliga 120 sek (intervall 60 till 180). Efter träning placerades mössen i sina hemburar för 10 min före testning. Kortsiktigt minne utvärderades genom att använda samma formel som användes för rädsla-potentierad skymning.

Stötkänslighet
Svar på det icke-cue-tillståndet under korttidsminnet baslinjen och test sessioner var i genomsnitt för varje djur och följande formel användes för att beräkna chock sensibilisering:% sensibilisering = [(medelstark respons vid testning / 1) × 100].

Cre rekombinasmedierad återställning av Th-genfunktionen
Isofluran (1.5-5%) anestetiserade möss placerades i ett stereotaxiskt instrument (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). För återställande av Th-genfunktionen i det ventrala tegmentala området injicerades rekombinant AAV1-Cre-GFP-virus (titrerat vid 1.2 × 1012-partiklar / ml) bilateralt in i den ventrala midbrainen (koordinater i mm: 3.5 bakom Bregma, 0.5 lateral till midline , 4.5 ventral till Bregma; 0.5 μl / hemisfär). För specifikt återställande av BLA DA injicerades rekombinant CAV2-Cre-virus (titrerat vid 2.1 × 1012-partiklar / ml) bilateralt (koordinater i mm: 1.5 bakom Bregma, 3.25 lateral till midline, 5 ventral till Bregma; 0.5 μl / hemisfär) . Detaljerad beskrivning av båda virala vektorerna har publicerats (Hnasko et al., 2006; Zweifel et al., 2008). Virus injicerades under en 10-min-period med hjälp av en 32-gauge-sprutnål (Hamilton, Reno, NV) fäst vid en mikroinfusionspump (WPI, Sarasota, FL).

immunohistokemi
Efter anestesi med xNUMX mg / ml natriumpentobarbital (50-0.2 ml / djur) perficerades mössen kortfattat med fosfatbuffrad saltlösning följt av 0.3% paraformaldehyd i fosfatbuffrad saltlösning. Dissected hjärnor postfixerades i 4% paraformaldehyd över natten, kryoprotekterades i 4% sackaros i fosfatbuffrad saltlösning och därefter snabbfryst i isopentan. Frittflytande koronala sektioner (30 ^ im) immunstainades med antingen antikroppar mot anti-TH (30: 1, Chemicon) eller kanin anti-TH (1000: 1, Chemicon). Immunflourescens uppnåddes genom användning av Cy2000- eller Cy2-konjugerade IgG-sekundära antikroppar (3: 1, Jackson ImmunoResearch). Färgade sektioner monterades på glidbanor, täckte och fotograferades med ett upprätt ljusfältmikroskop (Nikon).

Statistiska analyser
Analyser utfördes inkluderade upprepade åtgärder och envägs ANOVA, Fisher post-hoc, och Studentens t-tester som noteras i resultaten. Statistisk analys utfördes med hjälp av Statistica-mjukvaran (Statsoft, Tulsa, Oklahoma).

Resultat

DD-möss har intakt akustisk startleaktion och normal prepulsinhibering
Fear-potentiated startle kräver intakta akustiska startleaktioner och sensorimotorisk gating. För att bestämma om det akustiska startle-svaret förändras i frånvaro av DA mättes svaren på DA-utarmade DD-möss (18 till 24-tim efter L-Dopa) till flera decibelnivåer av ljud och jämfördes med kontroller (Figur 1A). Upprepade åtgärder ANOVA visade ingen huvud effekt av genotyp och ingen signifikant interaktion mellan genotyp och ljudnivå.

Figur 1
DA är avgörande för att lära sig rädsla-potentierad skräck. A, Akustisk skrämselrespons av kontroll (n=10, svarta rutor) och DD-möss (n=10, öppna rutor) på olika ljudintensiteter. Svar rapporteras i godtyckliga enheter. B, Prepulse-inhibering testades vid 3 olika förpulsintensiteter i kontroll (n=10, svarta staplar) och DD-möss (n=10, öppna staplar). Asterisker anger p<0.05, upprepade mätningar ANOVA. C, Schematisk som illustrerar det 7-dagars rädsla-potentierade paradigmet. På baslinje- och testdagarna fick mössen 10 presentationer av no-cue (40 msek varaktighet presentation av en 105-dB skräckpuls) och 10 presentationer av signalförsök (10 sekunders lätt signal som avslutas med skrämselpulsen) pseudoslumpmässigt beställa. På träningsdagar fick mössen 10 parningar av 10-sekunders ljussignalen som avslutades med 0.5-sekunders varaktighet, 0.2 mA fotchock. Inlärning utvärderades på testdagar som en procentandel av potentieringen på cue-försök jämfört med no-cue-försök. D, DD möss (n=10, öppna staplar) som fick L-Dopa 3 timmar efter träning (dag 2 och 4) lyckades inte lära sig (test 1 och 2). Men när DD-möss injicerades omedelbart efter träning (dag 6) visade de signifikant rädsla-potentierad skräck (test 3). Asterisker anger p<0.05, upprepade mätningar ANOVA. E, Mätningar av stötreaktivitet under träningspass (Kontroll n=10, svarta staplar; DD n=10, öppna staplar). Svar rapporteras i godtyckliga enheter. F, Schematisk illustration som illustrerar det 3-dagars rädsla-potentierade skrämselparadigmet som används för att bestämma den kritiska tidsperioden under vilken DA är viktig. Alla 30 cue-shock-par gavs på en träningsdag och DD-möss behandlades med L-Dopa omedelbart, 1 timme eller 3 timmar efter träning. G, Endast kontroll- (n=8, heltäckande svarta staplar, C) och DD-möss injicerade omedelbart efter träning (n=7, vertikala ränder, 0 timmar) uppvisade rädsla-potentierad skräck på testdagen. Denna nivå av rädsla förstärkt skräck var signifikant högre än den som sågs hos DD-möss som fick L-Dopa 1 timme (n=6, diagonala ränder) eller 3 timmar (n=6, öppna staplar) efter träning. Asterisker anger p<0.05 jämfört med baslinjen, Fisher post-hoc. Alla värden som rapporterats är medelvärden ± SEMDA-utarmad DD och kontrollmöss testades också i ett prepulse-inhiberingsparadigm, som vanligtvis används för att upptäcka brister i sensorimotorisk gating. Prepulsinhibering förstärktes i DD-möss (Figur 1B; upprepade mätningar ANOVA, genotyp: F1, 18=5.37; p<0.05; ingen signifikant genotyp av prepulsnivåinteraktion detekterades). Dessa data indikerar att DD-möss inte har brister i skrämselsvar eller minskningar av sensorimotoriska grindmekanismer medan de är i ett DA-utarmat tillstånd och validerar deras användning i rädsla-potenterade skrämselexperiment.

Dopamin är nödvändig vid en kritisk tid för att lära sig rädslapotential

För att avgöra om DA är nödvändigt för att lära sig en cued-fear-konditioneringsuppgift, utsattes DD- och kontrollmöss för ett 7-dagars rädslapotentierat skräckparadigm (Figur 1C). DD-möss tränades och testades i ett DA-utarmat tillstånd. När de testades 24 timmar efter träning, uppvisade kontrollmöss rädsla förstärkt skräck efter ett enda träningspass som inte observerades i DD-möss (Figur 1D; upprepade mätningar ANOVA, genotyp, F1, 18=7.4590, p<0.05). Även efter en extra träningssession misslyckades DD-möss att uttrycka rädsla-potentierad skräck, medan kontrollmöss fortsatte att uttrycka robust inlärning. Intressant nog, när de gavs L-Dopa omedelbart efter träning på dag 6, visade DD-möss rädsla förstärkt skräck som var signifikant högre än baslinjen (envägs ANOVA F1, 18=9.1999, p<0.01) och skilde sig inte från kontrollnivåerna ( figur ID). Chockreaktiviteten över träningsdagar för DD- och kontrollmöss skilde sig inte signifikant mellan genotyperna på någon träningsdag, vilket tyder på att inlärningsunderskottet hos DD-möss inte berodde på en oförmåga att känna av fotchocken (Figur 1E). För att karakterisera det kritiska tidsfönstret för DA-åtgärder varierade en ytterligare studie tiden för administrering av L-Dopa. DD- och kontrollmöss fick ett träningspass bestående av 1 parningar med lätta stötar (Figur 30F) och injicerades sedan med L-Dopa antingen direkt, 1 timme eller 1 timmar efter träning och de testades 3 timmar senare. DD-möss som injicerades omedelbart efter träningen uttryckte en stark rädsla-potentierad skräck på testdagen, liknande den för kontroller, medan DD-möss som injicerades med L-Dopa 24 timme eller 1 timmar efter träning inte visade någon inlärning (Figur 3G; upprepade åtgärder ANOVA; behandling × session F1, 3=23, p<5.1032). Dessa data indikerar att DA är nödvändig inom en begränsad tidsperiod för inlärning i ett rädsla-potentierat skräckparadigm. Däremot är DA inte nödvändigt för uttrycket av cued-fear-minne eftersom DD-djur alltid testades i frånvaro av DA. Dessutom försämrar frånvaron av DA inte chockreaktiviteten.

D1R är nödvändig för rädsla-potentierad skymning

För att utforska vilka DA-receptorer som är nödvändiga för rädsla-potentierad skräck, analyserade vi först D1R KO-möss. D1R KO och kontroll, vildtyp (WT) möss testades vid flera nivåer av skräckpulsintensitet, som beskrivits för DD möss (Figur 2A). Det fanns ingen signifikant skillnad mellan D1R KO- och WT-möss vid någon testad ljudnivå, vilket indikerar att D1R KO-möss har ett intakt akustiskt skrämselsvar. I överensstämmelse med tidigare studier har vi observerat intakt prepulse-hämning hos D1R KO-möss (Ralph-Williams et al., 2002). När de testades i det 7-dagars rädsla-potentierade skrämselparadigmet, misslyckades D1R KO-möss att uttrycka inlärning på någon av testdagarna (Figur 2B; upprepade mätningar ANOVA genotyp × testdag F3, 48=6.28; p<0.01), medan WT möss hade signifikant rädsla-potentierad skräck på testdag 2 och 3 (p<0.05 och p<0.01, kontrollbaslinje kontra test 2 respektive 3, Fisher post-hoc). D1R KO-möss hade större chockreaktivitet än WT på alla tre träningsdagarna (Figur 2C; upprepade mätningar ANOVA, genotyp F1, 16=10.18; p<0.01; ingen signifikant genotyp × träningsdag observerades). Således, även om D1R KO-möss har förhöjda svar på fotchock jämfört med WT-möss, har de signifikant försämrad rädsla-potentierad skräck, även efter 3 dagars träning. Dessa data indikerar en inlärningsstörning hos D1R KO-djur och implicerar D1R i att mediera effekterna av DA i cue-beroende rädslakonditionering. Figur 2 D1R KO-möss har signifikant försämrad inlärning. A, akustisk skrämselsvar från D1R WT (n=9, svarta rutor) och KO (n=9, öppna rutor) möss. B, Resultat av 7-dagars rädsla-potentierad skräckparadigm med D1R-möss. D1R WT-möss (n=9, heltäckande svarta staplar) men inte D1R KO-möss (n=9, öppna staplar), visade rädsla-potentierad skräck vid testdag 3. Asterisker anger p<0.01, jämför KO med WT, Fisher efter- hoc. C, Mätningar av stötreaktivitet. D1R KO-möss (n=9, öppna staplar) har högre svar på fotchock än WT (n=9, solida staplar). Asterisker anger p<0.05, upprepade mätningar ANOVA. Alla värden som rapporteras är medelvärden ± SEM För skrämselsvar och chockreaktivitet, siffror rapporterade i godtyckliga enheter.

Rädsla-potentierad skymning är intakt i D2R KO-möss, men kräver andra D2-liknande receptorer

För att undersöka huruvida D2-liknande receptorer är nödvändiga för rädslestimulerad skymning, utsattes D2R KO och WT-möss för de startade responsen och rädslestimulerade starttester. WT- och D2R-KO-möss har likvärdiga startleaktioner vid alla dB-nivåer som testats, vilket indikerar att D2R KO-möss har ett intakt akustiskt startreaktion (Figur 3A). På liknande sätt som D1R KO-möss har vi observerat att D2R KO-möss har intakt prepulseinhibering (Ralph-Williams et al., 2002). När testades i 7-dagens räddningspotentierade startparadigm, uppvisade både WT- och D2R-KO-mössen räddningspotentierad startling vid motsvarande nivåer på alla 3 testdagar (Figur 3B) och chockreaktivitet var inte olika mellan grupper (Figur 3C). Dessa data tyder på att D2R inte är nödvändig för att lära sig rädsla-potentierad startle.

Figur 3
D2R KO-möss har intakt rädsla-potentierad skräck. A, Akustisk skrämselrespons av D2R WT (n=8, svarta rutor) och KO-möss (n=8, öppna rutor). B, Resultat av 7-dagars rädsla-potentierat skräckparadigm med D2R-möss. Både WT-möss (n=8, heldragna staplar) och KO-möss (n=8, öppna staplar) uppvisade signifikanta nivåer av rädsla-potentierad skrämsel. C, Mätningar av stötreaktivitet under träning (WT, n=8, solida staplar; KO, n=8, öppna staplar). D-, WT- och D2R KO-möss (n=11 vardera) utsattes för det 3-dagars rädslapotentierade skrämselparadigmet. D2R KO-möss administrerades etikloprid (0.5 mg/kg) före träning och misslyckades med att uttrycka rädsla-potentierad skräck vid testning. Asterisker anger p<0.01, KO kontra WT, Fisher post-hoc. Alla rapporterade värden är medelvärde ± SEM För skrämselsvar och chockreaktivitet rapporteras svar i godtyckliga enheter. Tidigare studier har visat att administrering av D2-liknande antagonister, antingen systemiskt eller direkt in i amygdala, försämrar betingad rädsla (Guarraci et al., 2000; Greba et al., 2001; Ponnusamy et al., 2005). För att undersöka skillnaden mellan deras resultat och våra, administrerades D2R KO-möss den D2R-liknande antagonisten etikloprid (0.5 mg/kg; levererad ip) innan de tränades i det 3-dagars rädsla-potentierade paradigmet. När de testades 24 timmar efter träning uppvisade vehikelinjicerade WT-möss robust rädsla-potentierad skräck, medan etiklopridinjicerade D2R KO-möss inte visade inlärning (Figur 3D; upprepade mätningar ANOVA-genotyp × dag F1, 20=7.5698, p<0.05) . Dessa resultat tyder på att, förutom D1R, en medlem av den D2-liknande familjen av DA-receptorer, men inte D2R, är avgörande för rädsla-potentierad skrämsel.

Kortsiktigt minne är nedsatt i DD och D1R KO möss

DA krävs inom en timme efter träning för att lära sig skrämmande potens. I dessa experiment analyserades långtidsminnet för rädsla-potentierad skrämma 24 timmar efter träning. Vi gick ut för att testa om DA också krävs för korttidsminne. DD-djur och kontroller utsattes för ett 2-dagars paradigm som testade korttidsminnet 10 minuter efter träning (figur 4A). På testdagen utvärderades chocksensibilisering och korttidsminne. Korttidsminnet definierades som cue-beroende ökningar i skrämmande svar, medan chocksensibilisering är en kontextberoende förstärkning av det akustiska skrämmande svaret efter fotchock som är oberoende av cue (McNish et al., 1997; Richardson, 2000; Risbrough et al., 2008). DD-möss hade signifikant mindre stötsensibilisering än kontroller (Figur 4B, p <0.05; Studentens t-test). På samma sätt visade kontrollmöss ett robust korttidsminne som saknades i DD-möss (Figur 4B, p <0.05, DD kontra kontroll, Studentens t-test). Dessa data tyder på att DA krävs för korttids- och långtidsminne av rädsla-potentierad skrämsel. Dessutom är DA nödvändigt för kontextberoende rädsla lärande, som analyseras av chocksensibilisering. Dessa data förstärker också den tidigare slutsatsen att DA krävs under en kritisk period för att stabilisera det rädslakonditionerande minnesspåret. Figur 4 Korttidsminne och chocksensibilisering beror på DA. A, Design av beteendeparadigmet. På dag 1 erhölls baslinjesprångsvar. På dag 2 fick möss alla 30 cue-shock-parningar och placerades sedan tillbaka i sitt hem i 10 minuter innan test. B, kontrollmöss (n = 10, svarta staplar) har signifikant större stötsensibilisering och rädsla-potentierad skrämsel jämfört med DD (n = 10, öppna staplar). Asterisker betecknar p <0.05; Studentens t-test. C, WT (n = 7, svarta staplar) och D1R KO (n = 7, öppna staplar) möss har intakt chocksensibilisering. Endast WT har rädsla-potentierad skrämma under korttidsminnestestet. Asterisker betecknar p <0.05, KO kontra WT; Studentens t-test. D, WT (n = 8, svarta staplar) möss har signifikant större stötsensibilisering än D2R KO (n = 8, öppna staplar). Nivåerna av rädsla-potentierade är likartade mellan WT- och D2R KO-möss. Asterisker betecknar p <0.05, KO kontra WT; Studentens t-test. Alla värden som rapporteras är medelvärden ± SEM För att utforska vilka receptorsubtyper som förmedlar rollen av DA i korttidsminne och chocksensibilisering testades D1R och D2R KO-möss i samma paradigm som DD-möss. D1R KO-möss hade signifikant lägre nivåer av korttidsminne än WT-möss (Figur 4C, p <0.05; Studentens t-test); emellertid fanns det ingen signifikant skillnad mellan nivåerna av chocksensibilisering i D1R KO och kontrollmöss, vilket tyder på att kontextberoende inlärning var intakt. D2R KO-möss hade signifikant lägre nivåer av chocksensibilisering än WT (Figur 4D, p <0.05; Studentens t-test), men det fanns ingen signifikant skillnad mellan WT- och KO-mössnivåerna av korttidsminnet.

Återställande av DA till den basolaterala amygdala är tillräcklig för att möjliggöra kortvarigt minne

Den basolaterala amygdalaen är kritisk för förvärv av cueberoende rädsla minne (Maren, 2003, Maren och Quirk, 2004, Sigurdsson et al., 2007). Vidare finns det bevis som tyder på en viktig roll för DA för att underlätta basolateral amygdalafunktionen (Rosenkranz och Grace, 2002, Bissiere et al., 2003, Marowsky et al., 2005). För att undersöka huruvida DA i den basolaterala amygdalaen är nödvändig för rädslestimulerad skymning, injicerades DD och kontrollmöss bilateralt med en CAV2-Cre-vektor i den basolaterala amygdalaen (Figur 5A). Denna vektor transporteras retrogradlyst från injektionsstället till DA neuroner där den återställer Th-genaktiviteten (Hnasko et al., 2006). Immunohistokemi avslöjade att TH var närvarande i den basolaterala amygdalaen av CAV2-Cre-injicerade DD-möss (Figur 5J), men frånvarande i dorsalstriatum och kärnan accumbens (Figur 5G). TH återställdes i första hand till ett litet antal neuroner i de kaudala delarna av det ventrala tegmentala området (Figur 5D). Det fanns vanligtvis färre än 10 TH-positiva celler per 30-μm-sektion i de injicerade DD-mössen, vilket överensstämmer med det lilla antalet amygdala-projicerande DA-neuroner som rapporterats i litteraturen (Ford et al., 2006; Lammel et al. , 2008; Margolis et al., 2008).

Figur 5
Regionspecifik restaurering av endogent TH-uttryck i DD-möss. A, schematiskt illustrerande injektionskoordinater för basolaterala amygdala (BLA) räddningsexperiment. DD (n = 7) och kontroll (n = 7) möss injicerades bilateralt i BLA med CAV2-Cre-vektorer (0.5 uL / ​​hemisfär). B, schematisk som illustrerar injektionskoordinater för räddningsexperiment för ventral tegmental area (VTA). AAV1-Cre-GFP injicerades bilateralt (0.5 uL / ​​hemisfären) i VTA av DD (n = 7) och kontrollmöss (n = 10). Siffror anpassade från Paxinos och Franklin, 2001. C-E, Jämförelse av TH-färgning i koronalskiva (4 × förstoring) som visar ventral mittbråck av virusinjicerad WT-kontroll, BLA-injicerad DD och VTA-injicerad DD. C, TH-immunhistokemi i kontrollmyrsyra demonstrerar närvaron av DA-neuroner i VTA och substantia nigra pars compacta (SNpc; indikerad med pilen). D, BLA-räddade DD-möss hade ett litet antal TH-positiva neuroner i VTA. Inset är en 40 × förstoring av den boxade regionen, som visar TH-uttryck i soma och processer. E, VTA-räddade DD-möss hade TH-uttryck övervägande i VTA. Observera frånvaro av TH-färgning i SNpc (indikerad med pil). F-H, Coronal-sektionen (4 × förstoring) från WT-virusinjicerad kontroll, BLA-räddad och VTA-räddad DD-möss, vilket visar TH-uttryck i dorsalstriatum och kärnan accumbens. F, WT-virusinjicerade kontroller har TH-uttryck i hela dorsalt (indikerat med pil) och ventralstriatum. G, Det finns inget TH-uttryck som detekteras i striatumet av BLA-räddade DD-möss. H, VTA-räddade DD-möss har TH-uttryck i kärnan accumbens, med endast en paucity av färgning i dorsalstriatumen (indikerad med pilen). I-K, Coronal-sektionen (10 × förstoring) som visar TH-uttryck i BLA av virusinjicerad WT-kontroll, BLA-räddade och VTA-räddade DD-möss.

Basolaterala amygdala-injicerade möss utsattes för ett 3-dagars rädsla-potentierat skräckparadigm. Korttidsminne och chocksensibilisering utvärderades 10 minuter efter träning och långtidsminne för rädsla förstärkt skrämsel utvärderades 24 timmar efter träning (Figur 6A). Intressant nog återställdes endast korttidsminnet i basolaterala amygdala-injicerade DD-möss. Nivåer av korttidsminne var desamma som kontroller, men nivåerna av långtidsminne (p<0.05; Students t-test) och chocksensibilisering (p<0.05; Students t-test) var signifikant lägre än kontroller. Under träning var nivåerna av chockreaktivitet desamma mellan grupperna (Kontroll: 1613±333 mot BLA-räddad DD: 1758±260). Dessa data tyder på att DA-projektioner till den basolaterala amygdala, som huvudsakligen härrör från den kaudala aspekten av det ventrala tegmentala området, är tillräckliga för korttidsförvärv av cued-fear-minne, men DA-projektioner till andra kortikala eller limbiska hjärnområden är sannolikt väsentliga för kontextuell inlärning och långtidsstabilisering av rädslaminnesspåret.Figur 6 Basolaterala amygdala (BLA)-räddade DD-möss har återställt korttidsminnet, medan ventral tegmental area (VTA)-räddade DD-möss har återställt inlärningen helt. A, virusinjicerade WT-kontroll (n=7) och BLA-räddade DD-möss (n=7) utsattes för det 3-dagars rädslapotentierade skrämselparadigmet. Till vänster är chocksensibilisering betydligt lägre hos BLA-räddade möss. Mellan, korttidsminne (STM) återställdes till kontrollnivåer i BLA-räddade möss. Höger, långtidsminne (LTM), bedömd 24 timmar efter träning, saknas hos BLA-räddade möss. B, Resultat från WT-kontroll (n=10) och VTA-räddade DD-möss (n=7) i det 3-dagars rädslapotentierade skrämselparadigmet. Till vänster, chocksensibilisering i VTA-räddade DD-möss skilde sig inte signifikant från kontroll. Mitt och höger, nivåerna av STM och LTM-minne var desamma som kontroll i VTA-räddningsmöss. Asterisker anger p<0.05, räddning mot kontroll, Students t-test. Alla värden som rapporteras är medelvärden ± SEM

Restaurering av TH till ventral tegmental area DA neuroner är tillräckliga för inlärning

Det finns två stora DA-kretsar som härrör från den ventrala midjen den mesostriatala kretsen, som huvudsakligen härrör från substantia nigra pars compacta och den mesokortikolimbiska kretsen, härstammar huvudsakligen från den ventrala tegmentala arean. Den mesokortikolimbiska kretsen är allmänt känd för hjärnkärnor som är känd för att vara viktig för cueberoende räddningskonditionering, inklusive den basolaterala amygdalen (Bjorklund och Dunnett, 2007, Lammel et al., 2008). För att undersöka huruvida mer fullständig restaurering av mesokortikolimbisk DA krävs för långtidsminne och chocksensibilisering. DD och kontrollmöss injicerades bilateralt med en AAV1-Cre-GFP-vektor i den ventrala tegmentala arean för att specifikt aktivera den endogena Th-genen (Figur 5B).

Immunohistokemi användes för att detektera vilka DA-neuroner och vilka mål som hade återställt TH-uttryck. TH-färgning är frånvarande i icke-räddade DD-möss (Hnasko et al., 2006). Immunohistokemi avslöjade att restaurering av TH i ventral-tegmentala area-injicerade DD-möss var mycket specifik för det ventrala tegmentala området och dess mål (Figur 5E, H, K). Det fanns en paucity av TH-färgning i dorsalstriatumet, ett huvudmål för DA-neuroner som härrör från substantia nigra pars compacta (Figur 5H), medan kärnan accumbens och basolateral amygdala hade robust TH-uttryck (Fig 5H, K).

Ventral-tegmentala area-injicerade möss utsattes för samma 3-dags räddningspotentierad startparadigm som basolaterala amygdala-injicerade möss (Figur 6B). Stölsensibilisering, korttidsminnet och långsiktigt minne återställdes för att kontrollera nivåer i de ventrala tegmentala area-injicerade DD-mössen. Stötreaktivitet under träning var densamma mellan grupper (Kontroll: 1653 ± 268 kontra VTA-räddad DD: 1602 ± 198). Dessa data tyder på att DA-projiceringar från ventral tegmentalområdet är tillräckliga för bildandet av kortvarigt och långsiktigt cued-fear-minne samt kontextberoende chocksensibilisering.

Diskussion

Dessa resultat visar att DA är nödvändig för cued-fear konditionering som uppmätt av rädsla-potentierad skymning. DD-möss misslyckades med att uppvisa rädsla-potentierad skymning om inte DA återställdes omedelbart efter träning. DD-möss har också nedsatt korttidsminnet och chocksensibilisering. Det är viktigt att prepulsinhibering inte var lägre i DA-utarmade DD-möss, vilket indikerar att sensorimotorisk gating inte minskar i frånvaro av DA. Tidigare forskning har visat att psykostimulanter som förbättrar DA-överföring kan sänka prepulshämning (Schwarzkopf et al., 1992; Bubser och Koch, 1994; Ralph et al., 1999; Swerdlow et al., 2006; Doherty et al., 2007) Andra har visat att farmakologisk inhibering av dopaminreceptorer ökar prepulshämning (Schwarzkopf et al., 1993; Depoortere et al., 1997). I överensstämmelse med dessa fynd hade DD-möss en liten men signifikant ökning av prepulseinhibering över kontrollmöss. Tidigare studier har också visat att farmakologisk inhibering av DA-receptorer kan minska det akustiska startle-svaret (Davis och Aghajanian, 1976, Schwarzkopf et al., 1993). Dopaminutarmade DD-möss hade inte signifikant förändrade akustiska startleaktioner; Det fanns emellertid en trend mot reducerade responser jämfört med kontroller, särskilt vid höga stimulansintensiteter, i överensstämmelse med tidigare rapporter (Schwarzkopf et al., 1993).

Data som presenteras här visar tydligt att DA inte är viktigt för hämtning eller uttryck av cueberoende rädsla, eftersom DD-mössen inte kräver DA under testperioden för att uttrycka rädsla-potentierad skymning som tidigare förvärvades genom att injicera L-Dopa direkt efter Träning. Vidare hävdar våra experiment att DA behövs för initial stimulansbehandling under träning, eftersom DD-möss var dopaminutarmade under alla träningssessioner. I stället föreslår våra data att DA är nödvändig för tidig stabilisering av minnesspårningen, eftersom DD-möss inte uttrycker korttidsminnet, och långsiktigt minne ses bara när L-Dopa ges omedelbart men inte 1 hr efter Träning. Förmodligen injicerar DD-möss med L-Dopa omedelbart efter träning stabiliserat minnesspåret, så att det går in i en långsiktig form. Aversive stimuli orsakar långvariga stigningar i DA-nivåer inom hjärnregioner som är avgörande för rädsla-konditionering som skulle möjliggöra en sådan stabilisering av rädsla-minne (Abercrombie et al., 1989, Kalivas och Duffy, 1995; Doherty och Gratton, 1997; Inglis och Moghaddam, 1999). I överensstämmelse med våra data har andra visat att DA-funktionen efter träningshantering förändrar rädslelaterat minne (Bernaerts och Tirelli, 2003, Lalumiere et al., 2004, LaLumiere et al., 2005).

Våra funderingar indikerar att flera DA-receptorsubtyper är nödvändiga för rädsla-potentierad skymning. D1R KO-möss saknar kortsiktigt och långsiktigt minne för rädslestimulerad skymning, vilket föreslår en avgörande roll för denna receptorsubtyp för att förmedla effekterna av DA i cueberoende främmande lärande. Intressant var kontextberoende rädslärning intakt i D1R KO-möss. Dessa data bekräftar andra studier som visar att D1R-liknande antagonister dämpar cue-konditionerad rädslelärning utan att påverka chocksensibilisering och visar att de farmakologiska manipuleringarna i dessa experiment var specifika för D1R (Lamont och Kokkinidis, 1998, Guarraci et al., 1999) . Dessa data överensstämmer också med studier som visar en kritisk roll för D1R i andra cueberoende lärandeparadigmer (Smith et al., 1998, Eyny och Horvitz, 2003).

D2R KO hade intakt rädslestabiliserad skymning, men saknade fortfarande chocksensibilisering. Greba et al. (2001) har visat att intra-amygdalar-antagonism av D2R ledde till en försämring av chocksensibilisering och rädslestimulerad skumlöshet utan att påverka baslinjens start eller respons på fotstöt. Aktivering av D2R leder till induktion av långsiktig potentiering i BLA, vilket förmodligen skulle vara avgörande för rädsla-potentierat startleminne (Bissiere et al., 2003). Våra data visar att D2R inte är nödvändig för cueberoende rädsla, men snarare att denna DA-receptorsubtyp är viktig för kontextberoende chocksensibilisering. Injektion av D2R KO-möss systemiskt med D2-liknande antagonistetikloprid före träning förhindrad räddningspotentierad skymning; Därför är det sannolikt att andra D2R-liknande receptorer, vilka också inhiberas av etikloprid, är kritiska i rädsla-potentierad startle (Sigala et al., 1997; Bernaerts och Tirelli, 2003; Laviolette et al., 2005; Swant och Wagner , 2006). Sålunda kan nedskrivningar i cueberoende lärande som orsakas av D2-liknande antagonister i tidigare studier tillskrivas dessa läkemedel som hämmar andra medlemmar i D2R-familjen.

Den selektiva restaureringen av endogen TH specifikt till det ventrala tegmentala området ledde till en restaurering av inlärning i DD-möss. Immunohistokemi indikerade att TH återställdes till viktiga limbiska kärnor, såsom kärnans accumbens och basolateral amygdala, men inte till dorsalstriatumet. Vidare fanns det väldigt få neuroner positiva för TH i substantia nigra pars compacta. Dessa data indikerar att DA från ventrala tegmentala områdena neuroner är viktig för cued- och kontextuell rädsla konditionering.

Möss med selektiv restaurering av DA till den basolaterala amygdalaen uttryckte korttidsminnet, men inte långsiktigt minne eller chocksensibilisering. Tidigare studier har visat att DA underlättar amygdalafunktionen via förändringar i GABAergisk hämmande ton och denna effekt medieras av antingen D1R eller D2R (Bissiere et al., 2003, Kroner et al., 2005, Marowsky et al., 2005). De data som presenteras här visar att DA i den basolaterala amygdalaen är kritisk för förvärvet av korttidsminnet för rädslestimulerad skymning, men är inte tillräckligt för minnets långsiktiga stabilitet. Återställande av korttidsminnet medieras av ett litet antal basolaterala amygdala-projicerande DA-neuroner som kommer från det ventrala tegmentala området. Mer utbredd restaurering av endogen TH i ventral-tegmentala area-räddade DD-möss ledde till intakt kort- och långsiktigt minne; därför krävs återställande av TH till andra mesokortikolimbiska kretsar sannolikt för att fastställa långsiktigt minne för rädsla-potentierad skymning. Tidigare studier tyder på att kärnan accumbens och prefrontal cortex kan också vara viktiga mål för DA under rädsla konditionering (Kalivas och Duffy, 1995; Murphy et al., 2000; Pezze et al., 2003; LaLumiere et al., 2005; Laviolette et al., 2005; Floresco och Tse, 2007). Därför är det möjligt att DA-signalering i antingen kärnans accumbens eller prefrontal cortex är nödvändig för bildandet av långsiktigt minne.

Sammanfattningsvis använde vår studie en kombination av genetiska musmodeller, farmakologi och regionsspecifika räddning av funktion för att visa att DA är nödvändigt för rädsla-potentierad skum, en cueberoende räddningskonditioneringsuppgift. Dessa fynd betonar en viktig roll för denna neurotransmittor utanför belöningsbehandling. Vidare indikerar vår studie ett behov av DA som verkar på flera DA receptorer samtidigt i flera hjärnregioner för cueberoende räddningskonditionering. Tidigare studier har visat att ventral tegmental area DA neuroner varierar signifikant i deras molekylära och fysiologiska egenskaper enligt målplatsen (Ford et al., 2006; Margolis et al., 2006; Bjorklund och Dunnett, 2007; Lammel et al., 2008; Margolis et al., 2008). De experiment som vi utförde, där Th-genen selektivt reaktiverades i DA-neuroner som projicerar till den basolaterala amygdalen avslöjar att de är en liten, vald population av ventrala tegmentala area-neuroner, snarare än collaterals av DA-neuroner som projicerar till andra hjärnregioner. Våra data, i kombination med studier som visar heterogeniteten hos DA neuronpopulationer, betonar behovet av att förstå rollen för var och en av dessa diskreta DA-kretsar. Att öka kunskapen om DA: s många beteendemässiga och fysiologiska funktioner för att inkludera rädslelaterat lärande kan leda till en bättre förståelse av utbredda rädslelaterade störningar, såsom posttraumatisk stressstörning, tvångssyndrom och generaliserad ångestsyndrom.

Erkännanden

Denna undersökning stöddes delvis av Public Health Service, National Research Service Award, T32 GM07270, från National Institute of General Medical Sciences och NIH National Institute of General Medical Sciences Grant 4 R25 GM 058501-05. Vi tackar Ilene Bernstein, Lisa Beutler, Charles Chavkin och Larry Zweifel för användbara kommentarer på manuskriptet, Albert Quintana för hjälp med histologi och Valerie Wall för underhåll av muskoloni. Vi tackar också Dr Miguel Chillon (Vector Production Unit av CBATEG vid Universitat Autonoma of Barcelona) för CAV2 och Matthew During för AAV1 virus.

referenser

1. Abercrombie ED, Keefe KA, DiFrischia DS, Zigmond MJ. Differentiell effekt av stress på in vivo dopaminfrigörande i striatum, kärnbortfall och medial frontal cortex. J Neurochem. 1989; 52: 1655-1658. [PubMed]
2. Bernaerts P, Tirelli E. Facilitatorisk effekt av dopamin D4-receptoragonisten PD168,077 på minneskonsolidering av ett inhiberande undvikande lärt svar i C57BL / 6J-möss. Behav Brain Res. 2003; 142: 41-52. [PubMed]
3. Bissiere S, Humeau Y, Luthi A. Dopamin grindar LTP induktion i lateral amygdala genom att undertrycka frammatningsinhibering. Nat Neurosci. 2003; 6: 587-592. [PubMed]
4. Bjorklund A, Dunnett SB. Dopaminneuronsystem i hjärnan: en uppdatering. Trender Neurosci. 2007; 30: 194-202. [PubMed]
5. Bubser M, Koch M. Prepulseinhibering av råttans akustiska uppstötningsrespons reduceras med 6-hydroxydopaminsår i den mediala prefrontala cortexen. Psykofarmakologi (Berl) 1994; 113: 487-492. [PubMed]
6. Davis M, Aghajanian GK. Effekter av apomorfin och haloperidol på det akustiska uppstötningssvaret hos råttor. Psykofarmakologi (Berl) 1976; 47: 217-223. [PubMed]
7. de Oliveira AR, Reimer AE, Brandao ML. Dopamin D2-receptormekanismer vid uttryck av konditionerad rädsla. Pharmacol Biochem Behav. 2006; 84: 102-111. [PubMed]
8. Depoortere R, Perrault G, Sanger DJ. Potentiering av prepulshämning av startreflex hos råttor: Farmakologisk utvärdering av proceduren som en modell för detektering av antipsykotisk aktivitet. Psykofarmakologi (Berl) 1997; 132: 366-374. [PubMed]
9. Doherty JM, Masten VL, Powell SB, Ralph RJ, Klamer D, Låg MJ, Geyer MA. Bidrag av Dopamin D1-, D2- och D3-receptor subtyp till de störande effekterna av kokain på prepulsinhibering hos möss. Neuropsychopharmacology. 2007; 12: 12.
10. Doherty MD, Gratton A. NMDA-receptorer i nukleinsymboler modulerar spänningsinducerad dopaminfrisättning i nukleär accumbens och ventral tegmental area. Synapse. 1997; 26: 225-234. [PubMed]
11. Drago J, Gerfen CR, Lachowicz JE, Steiner H, Hollon TR, Kärlek PE, Ooi GT, Grinberg A, Lee EJ, Huang SP, et al. Förändrad striatal funktion i en mutantmus som saknar D1A-dopaminreceptorer. Proc Natl Acad Sci USA A. 1994; 91: 12564-12568. [PMC gratisartikel] [PubMed]
12. Eyny YS, Horvitz JC. Motsatta roller av D1 och D2 receptorer i appetitiv konditionering. J Neurosci. 2003; 23: 1584-1587. [PubMed]
13. Floresco SB, Tse MT. Dopaminerg reglering av inhiberande och excitatorisk överföring i den basolaterala amygdala-prefrontala kortikala vägen. J Neurosci. 2007; 27: 2045-2057. [PubMed]
14. Ford CP, Mark GP, Williams JT. Egenskaper och opioidinhibering av mesolimbiska dopaminneuroner varierar beroende på målplats. J Neurosci. 2006; 26: 2788-2797. [PubMed]
15. Greba Q, Kokkinidis L. Peripheral och intraamygdalar administrering av dopamin D1-receptorantagonisten SCH 23390 blockerar räddningspotentierad skum, men inte chockreaktivitet eller chocksensibilisering av akustisk startle. Behav Neurosci. 2000; 114: 262-272. [PubMed]
16. Greba Q, Munro LJ, Kokkinidis L. Inblandning av ventrala tegmentala areal-kolinerga muskarinreceptorer i klassiskt betingat rädslauttryck som uppmätt med rädsla-potentierad skymning. Brain Res. 2000; 870: 135-141. [PubMed]
17. Greba Q, Gifkins A, Kokkinidis L. Inhibering av amygdaloiddopamin D2-receptorer påverkar känslomässigt lärande uppmätt med rädsla-potentierad skymning. Brain Res. 2001; 899: 218-226. [PubMed]
18. Guarraci FA, Kapp BS. En elektrofysiologisk karaktärisering av ventrala tegmentala områdena dopaminerga neuroner under differentialpavlovian räddar kondition i vaken kanin. Behav Brain Res. 1999; 99: 169-179. [PubMed]
19. Guarraci FA, Frohardt RJ, Kapp BS. Amygdaloid D1-dopaminreceptors engagemang i Pavlovian-rädslan. Brain Res. 1999; 827: 28-40. [PubMed]
20. Guarraci FA, Frohardt RJ, Falls WA, Kapp BS. Effekterna av intra-amygdaloid infusioner av en D2 dopaminreceptorantagonist på Pavlovian-rädslan. Behav Neurosci. 2000; 114: 647-651. [PubMed]
21. Hnasko TS, Perez FA, Scouras AD, Stoll EA, Gale SD, Luquet S, Phillips PE, Kremer EJ, Palmiter RD. Cre rekombinasmedierad återställning av nigrostriataldopamin hos dopamin-bristande möss reverserar hypofagi och bradykinesi. Proc Natl Acad Sci USA A. 2006; 103: 8858-8863. [PMC gratisartikel] [PubMed]
22. Horvitz JC. Mesolimbokortikala och nigrostriatala dopaminreaktioner till framträdande icke-belöningshändelser. Neuroscience. 2000; 96: 651-656. [PubMed]
23. Inglis FM, Moghaddam B. Dygamergisk innervation av amygdala är mycket mottaglig för stress. J Neurochem. 1999; 72: 1088-1094. [PubMed]
24. Inoue T, Izumi T, Maki Y, Muraki I, Koyama T. Effekt av dopamin D (1 / 5) antagonisten SCH 23390 vid förvärv av konditionerad rädsla. Pharmacol Biochem Behav. 2000; 66: 573-578. [PubMed]
25. Joshua M, Adler A, Mitelman R, Vaadia E, Bergman H. Midbrain dopaminerga neuroner och striatalkolinerga interneuroner kodar skillnaden mellan belöning och aversiva händelser vid olika epoker av probabilistiska klassiska konditioneringsförsök. J Neurosci. 2008; 28: 11673-11684. [PubMed]
26. Kalivas PW, Duffy P. Selektiv aktivering av dopaminöverföring i kärnan av kärnan accumbens genom stress. Brain Res. 1995; 675: 325-328. [PubMed]
27. Kelly MA, Rubinstein M, Asa SL, Zhang G, Saez C, Bunzow JR, Allen RG, Hnasko R, Ben-Jonathan N, Grandy DK, Låg MJ. Hypofysellaktotroperplasi och kronisk hyperprolactinemi hos dopamin D2-receptorbristande möss. Nervcell. 1997; 19: 103-113. [PubMed]
28. Koch M. Neurobiologin av skymning. Prog Neurobiol. 1999; 59: 107-128. [PubMed]
29. Kroner S, Rosenkranz JA, Grace AA, Barrionuevo G. Dopamin modulerar excitabilitet för basolaterala amygdala neuroner in vitro. J Neurophysiol. 2005; 93: 1598-1610. [PubMed]
30. Lalumiere RT, Nguyen LT, McGaugh JL. Intrabasolateral amygdala-infusioner efter dopaminmodulering efter konsolidering av hämmande undvikande minne: involvering av noradrenerga och kolinerga system. Eur J Neurosci. 2004; 20: 2804-2810. [PubMed]
31. LaLumiere RT, Nawar EM, McGaugh JL. Modulering av minneskonsolidering av det basolaterala amygdala- eller kärnblockskalans skal kräver samtidig aktivering av dopaminreceptor i båda hjärnregionerna. Lär Mem. 2005; 12: 296-301. [PMC gratisartikel] [PubMed]
32. Lammel S, Hetzel A, Hackel O, Jones I, Liss B, Roeper J. Unika egenskaper hos mesoprefrontala neuroner inom ett dubbel mesokortikolimbiskt dopaminsystem. Nervcell. 2008; 57: 760-773. [PubMed]
33. Lamont EW, Kokkinidis L. Infusion av dopamin D1-receptorantagonisten SCH 23390 i amygdala-blocken rädslauttryck i ett förstärkt paradis. Brain Res. 1998; 795: 128-136. [PubMed]
34. Laviolette SR, Lipski WJ, Grace AA. En subpopulation av neuroner i den mediala prefrontala cortexen kodar emotionellt lärande med spräng- och frekvenskoder genom en dopamin D4-receptorberoende basolateral amygdala-ingång. J Neurosci. 2005; 25: 6066-6075. [PubMed]
35. Citron N, Manahan-Vaughan D. Dopamin D1 / D5 receptorer hämtar uppköp av ny information genom hippocampal långsiktig potentiering och långsiktig depression. J Neurosci. 2006; 26: 7723-7729. [PubMed]
36. Maren S. Amygdala, synaptisk plasticitet och rädsla minne. Ann NY Acad Sci. 2003; 985: 106-113. [PubMed]
37. Maren S, Quirk GJ. Neuronal signalering av rädsla minne. Nat Rev Neurosci. 2004; 5: 844-852. [PubMed]
38. Margolis EB, Mitchell JM, Ishikawa J, Hjelmstad GO, Fields HL. Midbrain dopaminneuroner: projektionsmål bestämmer aktivitetspotentialens varaktighet och dopamin D (2) receptorinhibering. J Neurosci. 2008; 28: 8908-8913. [PubMed]
39. Margolis EB, Lås H, Chefer VI, Shippenberg TS, Hjelmstad GO, Fields HL. Kappa opioider kontrollerar selektivt dopaminerga neuroner som skjuter ut till prefrontal cortex. Proc Natl Acad Sci USA A. 2006; 103: 2938-2942. [PMC gratisartikel] [PubMed]
40. Marowsky A, Yanagawa Y, Obata K, Vogt KE. En specialiserad subklass av interneuroner medierar dopaminerg förenkling av amygdalafunktionen. Nervcell. 2005; 48: 1025-1037. [PubMed]
41. McNish KA, Gewirtz JC, Davis M. Bevis på kontextuell rädsla efter skador på hippocampus: en störning av frysning men inte rädsla-potentierad skymning. J Neurosci. 1997; 17: 9353-9360. [PubMed]
42. Missale C, Nash SR, Robinson SW, Jaber M, Caron MG. Dopaminreceptorer: från struktur till funktion. Physiol Rev. 1998; 78: 189-225. [PubMed]
43. Murphy CA, Pezze M, Feldon J, Heidbreder C. Different involvering av dopamin i kärlet och kärnan i kärnan accumbens vid uttryck av latent inhibering till en aversiellt konditionerad stimulans. Neuroscience. 2000; 97: 469-477. [PubMed]
44. Pezze MA, Feldon J. Mesolimbic dopaminerga vägar i rädsla kondition. Prog Neurobiol. 2004; 74: 301-320. [PubMed]
45. Pezze MA, Bast T, Feldon J. Betydelsen av dopaminöverföring i råttmedial prefrontal cortex för konditionerad rädsla. Cereb Cortex. 2003; 13: 371-380. [PubMed]
46. Ponnusamy R, Nissim HA, Barad M. Systemisk blockad av D2-liknande dopaminreceptorer underlättar utrotning av konditionerad rädsla hos möss. Lär Mem. 2005; 12: 399-406. [PMC gratisartikel] [PubMed]
47. Ralph RJ, Varty GB, Kelly MA, Wang YM, Caron MG, Rubinstein M, Grandy DK, Low MJ, Geyer MA. Dopamin D2, men inte D3 eller D4, receptorsubtyp är väsentlig för störningen av prepulshämning producerad av amfetamin hos möss. J Neurosci. 1999; 19: 4627-4633. [PubMed]
48. Ralph-Williams RJ, Lehmann-Masten V, Otero-Corchon V, Low MJ, Geyer MA. Differentiella effekter av direkta och indirekta dopaminagonister på prepulsinhibering: en studie i D1- och D2-receptor-knock-out-möss. J Neurosci. 2002; 22: 9604-9611. [PubMed]
49. Richardson R. Shock sensibilisering av startle: Lärt eller olärd frysta? Behav Brain Res. 2000; 110: 109-117. [PubMed]
50. Risbrough VB, Geyer MA, Hauger RL, Coste S, Stenzel-Poore M, Wurst W, Holsboer F. CRF (1) och CRF (2) Receptorer är nödvändiga för potentiell start till kontextuella men inte diskreta signaler. Neuropsychopharmacology. 2008; 19: 19.
51. Rosenkranz JA, Grace AA. Dopaminmedierad modulering av luktframkallade amygdala-potentialer under pavlovian-konditionering. Natur. 2002; 417: 282-287. [PubMed]
52. Schultz W. Komma formellt med dopamin och belöning. Nervcell. 2002; 36: 241-263. [PubMed]
53. Schwarzkopf SB, Mitra T, Bruno JP. Sensorisk gating hos råttor utarmad av dopamin som nyfödda: Potentiell relevans för fynd hos schizofrena patienter. Biolpsykiatri. 1992; 31: 759-773. [PubMed]
54. Schwarzkopf SB, Bruno JP, Mitra T. Effekter av haloperidol och SCH 23390 på akustisk start och prepulshämning under basala och stimulerade förhållanden. Prog Neuropsychopharmacol Biolpsykiatri. 1993; 17: 1023-1036. [PubMed]
55. Sigala S, Missale C, Spano P. Motsatta effekter av dopamin D2 och D3 receptorer på lärande och minne i råtta. Eur J Pharmacol. 1997; 336: 107-112. [PubMed]
56. Sigurdsson T, Doyere V, Cain CK, LeDoux JE. Långtidsförstärkning i amygdala: en cellulär mekanism för rädsla för lärande och minne. Neuro. 2007; 52: 215-227. [PubMed]
57. Smith DR, Striplin CD, Geller AM, Mailman RB, Drago J, Lawler CP, Gallagher M. Behavioral bedömning av möss som saknar D1A-dopaminreceptorer. Neuroscience. 1998; 86: 135-146. [PubMed]
58. Swant J, Wagner JJ. Dopamintransportblockad ökar LTP i CA1-regionen hos råtthippocampus via aktivering av D3 dopaminreceptorn. Lär Mem. 2006; 13: 161-167. [PMC gratisartikel] [PubMed]
59. Swerdlow NR, Shoemaker JM, Kuczenski R, Bongiovanni MJ, Neary AC, Tochen LS, Saint Marie RL. Forebrain D1-funktion och sensorimotorisk gating hos råttor: effekter av D1-blockad, frontalskador och dopamin-denervering. Neurosci Lett. 2006; 402: 40-45. [PubMed]
60. Szczypka MS, Rainey MA, Kim DS, Alaynick WA, Marck BT, Matsumoto AM, Palmiter RD. Foderbeteende hos dopamin-bristande möss. Proc Natl Acad Sci USA A. 1999; 96: 12138-12143. [PMC gratisartikel] [PubMed]
61. Wise RA. Dopamin, lärande och motivation. Nat Rev Neurosci. 2004; 5: 483-494. [PubMed]
62. Zhou QY, Palmiter RD. Dopamin-bristande möss är allvarligt hypoaktiva, adipsiska och aphagiska. Cell. 1995; 83: 1197-1209. [PubMed]
63. Zweifel LS, Argilli E, Bonci A, Palmiter RD. Roll av NMDA-receptorer i dopaminneuroner för plasticitet och beroendeframkallande beteenden. Nervcell. 2008; 59: 486-496. [PMC gratisartikel] [PubMed]