CRF-receptorer i kärnan accumbens modulerar partnerpreferensen i prairievoles (2007)

Horm Behav. Författarens manuskript; tillgänglig i PMC Dec 10, 2007.

Publicerad i slutredigerad form som:

PMCID: PMC2128037

NIHMSID: NIHMS22254

Förlagets slutredigerade version av denna artikel finns tillgänglig på Horm Behav

Se andra artiklar i PMC som citerar den publicerade artikeln.

Gå till:

Abstrakt

Nya bevis tyder på en roll för kortikotropinfrigörande faktor (CRF) vid reglering av parbindning i prärievolymer. Vi har tidigare visat att monogamiska och icke-monogamala volearter har dramatiskt olika fördelningar av CRF-receptor typ 1 (CRF1) och CRF-receptortypen 2 (CRF2) i hjärnan, och den CRF1 och CRF2 receptordensiteter i nukleär accumbens (NAcc) är korrelerade med social organisation. Monogamiska prärie- och tallvolymer har signifikant lägre nivåer av CRF-receptor typ 1 (CRF1) och signifikant högre nivåer av typ 2 (CRF2) bindande, i NAcc än icke-monogamiska äng och montane voles. Här rapporterar vi att mikroinjektioner av CRF direkt in i NAcc-accelerationspartnerpreferensbildningen hos manliga prärievolymer. Kontrollinjektioner av CSF i NAcc och CRF i caudat-putamen, underlättade inte partnerpreferensen. På samma sätt underlättade CRF-injektioner i NAcc av icke-monogamiska ängvolymer inte heller partnerpreferensen. I prairievolymer blockerades denna CRF-faciliteringseffekt genom saminjektion av antingen CRF1 eller CRF2 receptorantagonister i NAcc. Immunocytokemisk färgning för CRF och Urocortin-1 (Ucn-1), två endogena ligander för CRF1 eller CRF2 receptorer i hjärnan, avslöjade att CRF, men inte Ucn-1, immunreaktiva fibrer var närvarande i NAcc. Detta stöder hypotesen att lokal CRF-frisättning till NAcc skulle kunna aktivera CRF1 eller CRF2 receptorer i regionen. Tillsammans avslöjar våra resultat en ny roll för ackumulerade CRF-system i socialt beteende.

Nyckelord: kärnan accumbens, attachment, CRF1, CRF2, kortikotropinfrisättande faktor, kortikotropinfrisättande hormon, vole, neuropeptidreceptorer, parbindning, socialt beteende, monogami, artskillnader

Kortikotropinfrisättningsfaktorn (CRF) -systemet är involverat i neurobiologin underliggande stress och ångest, men mycket mindre är känt om sin roll i socialt beteende. Microtin gnagare uppvisar olika sociala organisationer och erbjuder sålunda ett utmärkt jämförande tillvägagångssätt i studien av neurobiologin för socialt beteende (Young och Wang, 2004). Prärie (Microtus ochrogaster) och tallvolymer (Microtus pinetorum) är monogamiska; vuxna kompisar bildar långvariga selektiva parbindningar i fältet och laboratoriet (Getz, Carter och Gavish, 1981; Salo, Shapiro och Dewsbury, 1993). Däremot nära närliggande äng (Microtus pennsylvanicus) och montane voles (Microtus montanus) är promiskuösa och ensamma (Gruder-Adams och Getz, 1985; Shapiro och Dewsbury, 1990). Tidigare forskning har visat att hjärnans fördelning av neuropeptidreceptorer för oxytocin och vasopressin verkar vara ansvarig för artskillnaderna i social organisation (Insel och Shapiro, 1992; Insel, Wang och Ferris, 1994; Lim, Wang, Olazabal, Ren, Terwilliger och Young, 2004b). Nyare bevis tyder dock på att ett annat neuropeptidsystem, CRF, också verkar modulera parbindning i prärievolymer (DeVries, Guptaa, Cardillo, Cho och Carter, 2002).

Det finns relativt få studier som studerar stresshormons roll i socialt beteende. En studie visade att administrering av exogen kortikosteron till manliga prärievolymer underlättade parbindningsbildning med en ny kvinna (DeVries, DeVries, Taymans och Carter, 1996). En efterföljande studie visade att CRF administrerade intracerebroventricularly (icv) underlättad partnerpreferens hos manliga prärievolymer, även vid extremt låga doser som inte verkar påverka lokomotorisk aktivitet eller ångestliknande beteende (DeVries et al., 2002). Vidare blockerades partnerpreferensen genom icv administrering av alfa-spiralformig CRF som blockerar selektivt CRF-receptorer i hjärnan (DeVries et al., 2002). Dessa data antyder att CRF kan spela en roll i parbindningsbildning genom ångestoberoende mekanismer genom involvering av centralt verkande hjärnreceptorer. Emellertid kan icv-infunderad CRF potentiellt fungera på vilket antal hjärnregioner som helst för att underlätta partnerpreferensen, och det är för närvarande okänt vilka hjärnregioner som är specifikt involverade.

Eftersom CRF-systemet har blivit involverat i reglering av parbindningsbildning, förutspådde vi att neurala kretsar för detta system skulle skilja sig mellan monogamiska och icke-monogamiska arter. Vi har tidigare visat att, även om fördelningarna av CRF-mRNA och peptid verkar starkt konserverade bland vilda arter, fördelar CRF-receptortyperna 1 och 2 (CRF1 och CRF2) varierar dramatiskt genom hjärnan i fyra vole arter som uppvisar olika sociala organisationer (Lim, Nair och Young, 2005; Lim, Tsivkovskaia, Bai, Young och Ryabinin, 2006). Receptorbindning verkade korrelera med monogamisk social struktur i flera hjärnregioner; emellertid, endast kärnan accumbens (NAcc) segregeras konsekvent med både monogamous vole arter och båda icke monogamiska vole arter. Monogamiska prärie- och tallvolymer har signifikant lägre nivåer av CRF-receptor typ 1 (CRF 1) och signifikant högre nivåer av typ 2 (CRF2) bindning, i NAcc än icke-monogamiska äng och montane voles (Lim et al., 2005).

Baserat på våra neuroanatomiska studier som visar artskillnader i CRF1 och CRF2 tätheter i NAcc, antog vi att CRF-åtgärder inom NAcc var särskilt kritiska för monogamiskt socialt beteende i prärievolymer. Först bestämde vi oss för huruvida CRF injiceras direkt i NAcc kan underlätta partnerpreferensbildning efter en förkortad samlivstid med partnern. Därefter utförde vi samma experiment i icke-monogamiska ängvolymer. Då manipulerade vi CRF1 och CRF2 i NAcc med användning av farmakologiska antagonister för att bestämma deras relativa bidrag till CRF-underlättad partnerpreferensbildning. Slutligen visar vi bevis för immunoreaktiv färgning av två endogena ligander för CRF1 och CRF2 receptorer i hjärnan, CRF- och Urocortin-1 (Ucn-1), i NAcc i prairievoles. Resultaten från dessa studier visar för första gången att CRF, som agerar i NAcc, kan främja social anslutning och dessutom att både CRF1 och CRF2 receptorer är involverade i denna process.

METODER

Ämnen

Djur var vuxna, sexuellt naiva, manliga och kvinnliga prärie (70-100 dagar i ålder) från en laboratorieuppfödningskoloni vid Florida State University som ursprungligen härrörde från fältupptagna voles i Illinois, USA. Vuxna sexuellt naiva ängvingar var från laboratorieuppfödningskolonien vid Emory University. Efter avvänjning vid 21-ålders alder inhölls personer i samma kön syskonpar eller trior och vatten och Purina kanin chow tillhandahölls ad libitum. Alla burar bibehölls på en 14: 10-ljus: mörk cykel med temperaturen vid 20 ° C. Data från 87-manliga prärievolymer ingick i CRF-farmakologiska experimenten, tillsammans med lika många stimulus-kvinnliga prärievolymer för parbindningsanalysen. Data från 10 manliga ängvolymer användes också, tillsammans med lika många stimulansjuka ängvolymer. Åtta prärievolymer användes i CRF immunocytokemistudierna (n = 4 för varje kön).

CRF-förenkling av partnerpreferensen

Vuxna manliga prärievolymer (n = 31) kanades bilateralt i NAcc med användning av stereotaxiska metoder som tidigare beskrivits (Aragona, Liu, Curtis, Stephan och Wang, 2003a; Liu och Wang, 2003). Ämnen bedövades med natriumpentobarbital (2.5 mg per 40 gm kroppsvikt) och 26 gauge bilaterala styrkanyler (Plast One, Roanoke, VA) riktade mot NAcc implanterades stereotaxiskt (Anterior 1.7 mm, Bilateral ± 1 mm, Ventral-4.0 mm till bregma). Kontrollinjektioner (n = 6) riktades mot caudat-putamen (Anterior 1.7 mm, Bilateral ± 1 mm, Ventral-2.5 mm till bregma). Efter återvinning av 3-5-dagar mottog individer mikroinjektioner (200 nl per sida) av antingen artificiell CSF eller läkemedel upplöst i CSF. Injektioner gjordes med en 33 gauge nål som förlängde 1 mm under ledningskanylen in i målområdet. Nålen var ansluten till en Hamilton-spruta (Hamilton, Reno, NV) via polyeten-20-rör, genom vilken lösningen långsamt infusionerades av en pump (MasterFlex L / S-standarddrift, modell 7016-21) med en hastighet av 200 nl / min, per sida. Human / råtta CRF erhölls från Sigma (St. Louis, MO).

Djur uppdelades i en av fyra grupper: CSF-kontroll (n = 7), 0.01 pg CRF till NAcc (n = 9), 0.1 pg CRF till NAcc (n = 15) och 0.1 pg CRF i caudat-putamen (n = 6). Caudate-putamen (CP) är en hjärnregion som bara är dorsal mot NAcc och innehåller även CRF2 receptorer, vilket således tjänar som en anatomisk kontrollregion för CRF-effekter. Varje djur fick bilaterala injektioner av 200 nl-volymen före en förkortad 6-timmars samlevnad med en ny kvinna. Koncentrationen av 0.01 pg CRF i 200 nL är 10 nM, medan koncentrationen av 0.1 pg CRF i 200 nL är 100 nM. Den beräknade Ki för CRF1 är 11 nM, medan den beräknade Ki för CRF2 är 25 nM i förhållande till 125I-sauvagin (Primus, Yevich, Baltazar och Gallager, 1997). Samlevnad för 6-timmar utan parning konsekvent framkallar inte partnerpreferens, vilket framgår av tidigare studier (Aragona et al., 2003a; Aragona, Liu, Yu, Curtis, Detwiler, Insel och Wang, 2006). Omedelbart efter samlevnad testades individer för partnerpreferens.

Partnerpreferensprovning bestod i att manen placerades i en 3-kammareapparat, där kvinnliga partnern var bunden i en bur och en ny kvinnlig ("främling") av samma ålder och socioseksuell erfarenhet var bunden i en andra bur, som tidigare beskrivna (Carter, DeVries och Getz, 1995). Varje stimuluskvinna användes i två separata partnerpreferensprov, en gång som partner och igen som ett annat ämnes främling, och därför hade varje kvinnlig jämn social och sexuell exponering under 20-timmarsboende. Ämnen fick stå fritt i hela apparaten, och tiden som spenderades i kontakt med partnern och främlingen kvantifierades under 3-timtestet.

Lokomotorisk aktivitet uppmättes under partnerpreferensprovet för att bestämma huruvida utvalda doser av CRF-behandling påverkade generell lokomotorisk aktivitet eller ångestliknande beteende, såsom tidigare beskrivits (Hotta, Shibasaki, Arai och Demura, 1999). Antalet korskorsningar genom båda tunnlarna i partnerpreferensapparaten utvärderades med användning av infraröda detektorer. Det finns fyra infraröda strålar över de tre burarna i partnerpreferensapparaten, med två strålar som flankerar varje tunnel som förbinder två burar. Det totala antalet fotostrålbrott uppnåddes för varje djur under tre timmarsperioden. Efter beteendestest avlivades ämnen och injektionsställen verifierades histologiskt.

Vuxna manliga ängvolymer (n = 10) testades också för CRF-underlättande av partnerpreferens. Djur kanaliserades bilateralt i NAcc såsom beskrivits ovan och slumpmässigt tilldelades till en av två grupper: CSF-kontroll (n = 4) eller CRF 0.1 pg (n = 6). Samlevnads- och partnerpreferenstest utfördes exakt som beskrivet ovan för prairievolymer. Vuxna manliga ängar från vår koloni utgör vanligtvis inte partnerpreferenser när de bor ihop med en kvinna (Lim et al., 2004b).

CRF1- och CRF2-selektiv farmakologi och partnerpreferens

Vuxna prärievolymer kanyleras bilateralt i NAcc såsom beskrivits ovan och uppdelas i en av tre grupper: 0.1 pg CRF (n = 10), 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF1 antagonist (CP-154,526) (n = 25) och 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF2 antagonist (anti-sauvagine-30) (n = 15). Anti-sauvagine-30 erhölls från Sigma (St. Louis, MO) och CP-154,526 från Michael Owens, Ph.D. (Emory University, Atlanta, GA). Koncentrationen av 10 pg CRF1 antagonist (CP-154,526) i 200 nL-lösning är 100 nM, medan koncentrationen av 10 pg CRF2 antagonist (anti-sauvagine-30) i 200 nL-lösning är 10 nM. Varje djur mottog bilaterala injektioner av 200 nl-volymen direkt i NAcc före en förkortad 6-timmars samlevnad med en ny kvinna. Omedelbart efter samlevnad testades individer för partnerpreferens som beskrivits ovan. Efter beteendestest avlivades ämnen och injektionsställen verifierades histologiskt. Djur vars cannulationsställen placerades utanför NAcc var uteslutna från dataanalys och reflekterades inte i det totala antalet använda djur.

Dataanalys

Data från partnerpreferensprov för varje experiment analyserades med hjälp av en 2-väg ANOVA, i vilken stimulans (partner eller främling) och behandling var faktorer. Studiens t-tester användes dessutom för att jämföra tiden i kontakt med partnern och främlingen inom varje behandlingsgrupp. Bonferroni-korrigeringar för signifikansnivå gjordes för varje experiment för att minimera risken för typ I-felrisk på grund av flera jämförelser. Manspersoner kategoriserades som att ha utvecklat en partnerpreferens om de spenderade mer än dubbelt så mycket tid i kontakt med partnern än främlingen.

Data som samlats in för lokomotorisk aktivitet uppgick till totalt antal infraröda strålar för varje djur och i genomsnitt inom varje behandlingsgrupp. Resultaten analyserades med användning av en envägs ANOVA med behandling som den oberoende faktorn.

CRF och Urocortin-1 Immunohistochemistry

Vuxna prärievolymer bedövades djupt mellan timmarna 10: 00 och 14: 00 med isofluran och perfusionerades med saltlösning följt av 2% paraformaldehyd i 10 mM (pH 7.4) fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Dissected hjärnor postfixed över natten i 2% paraformaldehyd / PBS-lösningen och kryoprotekterades i 30% sackaros / PBS. Trettio μm tjocka fritt flytande koronala sektioner skivades på en kryostat och behandlades för immunhistokemi enligt standardprotokoll (Ryabinin, Criado, Henriksen, Bloom och Wilson, 1997; Weitemier, Tsivkovskaia och Ryabinin, 2005) med justeringar för fuktig vävnad gjord i tidigare experiment (Lim et al., 2006). I korthet släcktes endogen peroxidasaktivitet genom 15-minuters inkubation med 0.3% väteperoxid. För den Urocortin-1-specifika antikroppen utfördes blockeringen genom en inkubation med fem timmar med 2% bovint serumalbumin, 0.1% heparin, 0.01% Triton X-100 i PBS. För den CRF-specifika antikroppen utfördes blockeringen genom en inkubation med fem timmar med 4.5% get serum, 0.3% Triton X-100 i PBS. De primära kaninantikropparna som igenkände Urocortin-1 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) användes i utspädning 1: 5,000. De primära antikropparna som igenkänner CRF (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA) användes i utspädning 1: 15,000. Biotynylerade anti-kanin sekundära antikroppar (Vector Laboratory Inc., Burlingame, CA) användes för att detektera de primära antikropparna. Detektion av de sekundära antikropparna gjordes med användning av Vectastain ABC kit (Vector) och enzymatisk utveckling gjordes med Metal Enhanced DAB kit (Pierce, Rockford, IL, USA). Specificiteten av immunförstärkning bedömdes genom en fullständig brist på immunreaktivitet i områden som inte är kända för att uttrycka CRF eller Urocortin-1. Vidare utfördes kontrollpreabsorptionsexperiment för dessa antikroppar tidigare (Bachtell, Weitemier, Galvan-Rosas, Tsivkovskaia, Risinger, Phillips, Grahame och Ryabinin, 2003).

Kvalitativ bildanalys utfördes med hjälp av ett system som består av ett Olympus BX40-mikroskop och en högupplösande digital videokamera (Olympus Qcolor3) ansluten till en Macintosh-persondator som kör OS-X. Bilder från ett enda avsnitt som passade bäst över djur för varje hjärnområde samlades digitalt i samma ljusintensitet. Eftersom ingen immunopositiv färgning observerades i cellkroppar i NAcc, räknades antalet immunoreaktiva neuroner inte kvantitativt.

RESULTAT

Farmakologisk manipulering av CRF-receptorer i NAcc

Det hade tidigare visats att infusion av CRF icv underlättar partnerpreferensen i prairievoles (DeVries et al., 2002). Baserat på våra neuroanatomiska data som visar artskillnader i CRF1 och CRF2 i NAcc, antog vi att NAcc var handlingsplatsen för CRF-underlättande av partnerpreferensen. Den tidigare studien visade att dosberoende ICV-administrering av CRF skulle kunna underlätta partnerpreferenser hos manliga prärievoles efter en förkortad sambo med en kvinna (DeVries et al., 2002). Baserat på denna studie konstruerade vi CRF-doser för platsspecifika injektioner i NAcc. Doserna som vi använde, 0.1 pg och 0.01 pg CRF upplöst i 200 nL isotonisk lösning (respektive 100 nM respektive 10 nM) var långt under de minsta effektiva ICV-doserna av 0.1 ng och 1 ng CRF löst i 1 μL (eller 210 nM respektive 2.1 μM) (DeVries et al., 2002). Fastän CRF har visat sig binda företrädesvis till CRF1, det binder också till CRF2 med betydande affinitet (Ki lika med 11 respektive 25) (Primus et al., 1997).

Analys av den totala datamängden med användning av en 2-vägs ANOVA avslöjade en signifikant huvudeffekt av stimulusdjur (F (1,66) = 6.77, p <0.05), men inga andra huvudeffekter eller interaktioner detekterades. För att bestämma vilka grupper som företrädesvis spenderade tid i kontakt med partnerna över de främlingar utfördes Studentens t-test med Bonferroni-korrigeringar av p-värdet. Kontrollera prärievolymer med bilaterala injektioner av konstgjord CSF i NAcc septalpolen, eller 0.1 pg CRF i caudat-putamen, tillbringade inte betydligt mer tid i kontakt med partnern än det främmande stimulusdjuren (p> 0.3, Studentens t-test , Bonferroni-nivå inställd på p <0.01) (Figur 1A). Prairie voles injicerade med den lägre CRF-dosen, 0.01 pg, tenderade att spendera mer tid i kontakt med partnern än främlingen (p> 0.08, Studentens t-test, Bonferroni-nivå inställd på p <0.01). Däremot tillbringade prärievolymer som fick bilaterala injektioner av den 10 gånger högre CRF-dosen, 0.1 pg i NAcc-septumpolen, betydligt mer tid i kontakt med partnern än främlingen (p <0.01, Studentens t-test, Bonferroni-nivå satt vid p <0.01) (Figur 1A). Vidare, medan endast 6 hos 13-kontrolldjuren visade en partnerpreferens, definierad som att spendera dubbelt så mycket tid i kontakt med partnern jämfört med främlingen, visade 12 av 15-djuren som fick 0.1 pg av CRF en partnerpreferens (Figur 1B). 3-djuren som inte visade en partnerpreferens hade starka främlingspreferenser, vilket sannolikt bidrog till avsaknaden av en huvudsaklig effekt av behandling eller en interaktionseffekt på 2-sättet ANOVA. Således medförde CRF-infusioner i NAcc signifikant ökad tid i kontakt med partnern relativt den främling, vilket inte resulterade i en övergripande ökning av kontakttiden med partnern.

Figur 1 

Bilaterala mikroinjektioner av CRF till NAcc underlättar partnerpreferensen hos manliga prärievolymer. (A) Kontrolldjur som fick artificiell CSF i NAcc eller 0.1 pg CRF i caudat-putamen (CP) föredrog inte signifikant partnern över .

På grund av dramatiska artskillnader i CRF1 och CRF2 densiteter i NAcc, antog vi att CRF-handling inom NAcc bara skulle underlätta bildandet av partnerpreferenser i prärievolymer, och inte i icke-monogama ängsvängar. I själva verket tillbringade ängvolvor injicerade med CSF, eller högdos 0.1 pg CRF, inte betydligt mer tid i kontakt med partnern än främlingen (p> 0.5, Studentens t-test) (Figur 2).

Figur 2 

Bilaterala mikroinjektioner av CRF till NAcc misslyckas med att underlätta partnerpreferensen hos icke-monogamala äggvingar. Vuxna ängvingar injicerade med artificiell CSF, eller 0.1 pg CRF till NAcc, spenderade inte mer tid i kontakt med partnern än .

Baserat på artskillnaderna i CRF1 och CRF2 distribution i NAcc, vi antydde att båda CRF1 och CRF2 skulle modulera partnerns preferensbeteende, kanske i motsatta riktningar. Analys av den totala datamängden med användning av en 2-vägs ANOVA avslöjade en signifikant huvudeffekt av stimulusdjur (F (1,94) = 7.52, p <0.05), men inga andra huvudeffekter eller interaktioner detekterades. Prairie voles injicerade med en cocktail av 0.1 pg CRF, plus 10 pg selektiv CRF2 antagonist anti-sauvagine-30, tillbringade inte betydligt mer tid med partnern eller främlingen (p> 0.3, Studentens t-test, Bonferroni-nivå inställd på p <0.016) (Figur 3A). Intressant är att pririevolymer injiceras med en cocktail av 0.1 pg CRF, plus 10 pg selektiv CRF1 antagonist CP-154,526-1, visade också en blockad av partnerpreferens (p> 0.5, Studentens t-test, Bonferroni-nivå inställd på p <0.016) (Figur 3A). Kontrollpräirvolymer injicerade med 0.1 pg CRF i NAcc testades samtidigt och befanns replikera de ursprungliga resultaten för underlättande av partnerpreferens (p <0.01, Studentens t-test, Bonferroni-nivå inställd på p <0.016) (Figur 3A). Dessutom, medan 8 av de 10 CRF-behandlade prärievolymerna visade en partnerpreferens, var bara 11 hos 25-djuren som fick CRF1 antagonist och 6 från 15-djur som mottar CRF2 antagonist, visade en partnerpreference (Figur 3B). Våra resultat tyder på att aktiveringen av både CRF1 och CRF2 receptorer i NAcc är nödvändiga för CRF-inducerad underlättande av partnerpreferens i prairievolymer.

Figur 3 

Båda CRF1 och CRF2 receptorer i NAcc är nödvändiga för CRF-underlättad partnerpreferensbildning i prärievolymer. (A) Djur injicerade med 0.1 pg CRF i NAcc tillbringade mer tid i kontakt med partnern än främlingen (p <0.01, studentens .

Lokomotorisk aktivitet skilde sig inte signifikant mellan behandlingsgrupper (F (1,80) = 1.37, p> 0.05, enkelriktad ANOVA), även om rörelseaktiviteten tenderade att vara lägre hos djuren som fick CRF i NAcc. Resultaten visas i Tabell 1. En representativ histologi sektion som visar kanyleringsplatsen för NAcc visas i Figur 4.

Figur 4 

Histologisk kontroll av kanylplacering. (a) Receptor autoradiogram på vänster halvdel visar platsen för CRF2 i prairie vole NAcc. (b) Representativa fotomikrografer av Nissl-färgad hjärnavsnitt som visar kanylplacering avslutas inom .
Tabell 1 

Lokomotorisk aktivitet representerad av det totala antalet infraröda strålbrytningar eller burkorsningar, genomsnitt i varje behandlingsgrupp. Det finns inga signifikanta skillnader mellan behandlingsgrupperna (F = 1.37, p> 0.05, enkelriktad ANOVA).

CRF- och Ucn-1-immunreaktivitet i NAcc

För att visa mikrofotografier av vilka endogena CRF-receptorligander är närvarande i NAcc utförde vi CRF- och Urocortin-1 (Ucn-1) immunreaktivitet hos vuxna prairievolymer. Representativa hjärnsektioner bearbetade för CRF-immuncytokemi visas i Figur 5. CRF-immunoreaktiva fibrer sågs i NAcc i båda könen utan uppenbara skillnader i fördelning eller täthet av fibrer (Figur 5b). Ucn-1-fibrer detekterades inte i NAcc i antingen manliga eller kvinnliga prärievolymer (Figur 5c). Det är sålunda möjligt att CRF är en av de endogena liganderna vilka kan fysiologiskt binda CRF1 och CRF2 receptorer i den fulla NAcc för att underlätta partnerpreferensen. Observera, CRF har visat sig binda till båda CRF1 och CRF2, med ungefär två till tiofaldig affinitet högre affinitet för CRF1 (Primus et al., 1997). Vi kan emellertid inte utesluta möjligheten att andra endogena ligander, såsom Urocortin-2 eller Urocortin-3, också kan bidra till den neurala kontrollen av parbindningsbildning.

Figur 5 

CRF och Ucn-1 immunreaktivitet i prärievolymer. (a) Schematisk råttatlas som visar området för 10x förstoring av NAcc (se rektangel) (Paxinos och Watson, 1998). (b) Prairie vole-sektionen som visar CRF-immunoreaktiva fibrer i NAcc (se pilar). (c) Prairie .

DISKUSSION

I de tidigare studierna identifierade vi artskillnaderna i ackumbal CRF1- och CRF2 uttryck som korrelerade med social organisation över fyra vole arter. Monogamiska prärie- och tallvolymer hade högre nivåer av CRF2 i NAcc och lägre nivåer av CRF1 i NAcc, jämfört med icke-monogamisk äng och montane vole arter (Lim et al., 2005). Baserat på dessa data antog vi att CRF-åtgärder inom NAcc var kritiska för monogamiskt socialt beteende i prärievolymer. I den föreliggande studien visar vi för första gången att mikroinjektioner av CRF direkt i NAcc underlättar faktiskt partnerpreferensen hos manliga prärievolymer. Tvåvägs ANOVA-analys påvisade en stimulansdjurs huvudsakliga effekt, dvs mer tid spenderades i kontakt med partnern än främlingen, men ingen huvud effekt av behandling eller interaktion upptäcktes. Starka främlingens preferenser hos 3-djur i 0.1 pg CRF NAcc-gruppen uppblåste variansen, förhindrande av detektering av en interaktionseffekt. Separata jämförelser av tid som spenderades med partnervers främling avslöjade signifikanta preferenser för partnern i gruppen 0.1 pg CRF NAcc. Denna effekt replikerades i antagoniststudien, vilket bekräftade effektens robusthet. Denna förändring av partnerpreferenser var inte förknippad med en statistiskt signifikant ökning av tiden som spenderades hos partnern eller en minskning av tid som spenderades med främling, utan snarare var resultatet av en övergripande ökad preferens för partnern i förhållande till främlingen. Däremot har CRF ingen effekt på partnerpreferensen i icke-monogamiska ängvolymer. Dessutom visar vi att denna underlättningseffekt moduleras genom åtgärd av CRF vid båda CRF1 och CRF2 receptorer. Slutligen visar vi fotomikrografiska bevis på att CRF-immunoreaktiva fibrer är närvarande inom prairie vole NAcc, vilket indikerar att CRF kan vara en av de endogena liganderna som verkar på CRF1 och CRF2 receptorer i NAcc under partnerpreferensbildning. Tillsammans visar dessa data en ny roll för CRF-system som verkar inom NAcc i socialt beteende.

Våra data som visar att CRF i NAcc underlättar partnerpreferensen stöder vår initiala hypotes att ackumulerade CRF-system är involverade i parbindningsbildning i prairievoles. Vi hade ytterligare hypoteser om att CRF2 receptorer, var särskilt kritiska med tanke på överflödigheten av CRF2 receptorer i de två monogamiska vole-arterna men inte de två icke-monogamala vole-arten (Lim et al., 2005). Resultaten från det enga experimentet stöder denna hypotes, eftersom CRF-infusion inte har någon effekt på partnerpreferensen hos en art som saknar effektivt CRF2 receptorer i NAcc. Dessutom fann vi att samtidig administrering av en CRF2-selektiv antagonist blockerar partnerpreferens i prairievolymer. Dessa data avslöjar en potentiellt kritisk roll för CRF2 receptorer i parbindningsbildning.

Vi fann emellertid också att samtidig administrering av en CRF1-selektiv antagonistblockerad partnerpreferens i prärievolymer. Detta resultat var mer överraskande, med tanke på att CRF1 receptorer uttrycks i NAcc i både icke-monogamiska och monogamiska arter. Tillsammans understryker dessa data vikten av båda receptorsubtyper för uttryck av partnerpreferens och peka på möjligheten att receptorspecificitet är en komplex fråga som kan dra nytta av ytterligare undersökning. Det är möjligt att det kan finnas dynamiskt samspel mellan de två receptorundertyperna i NAcc under parbindningsbeteende, och det kan vara intressant att ytterligare utforska de cellulära fenotyperna av CRF1- och CRF2-expressa neuroner, eller för att se om CRF1 och CRF2 receptorer kan till och med samlokalisera till samma neuroner. Det är också möjligt att andra medel, såsom det CRF-bindande proteinet, som kan fungera som en reservoar för endogen CRF, kan vara involverade (Jahn, Eckart, Brauns, Tezval och Spiess, 2002).

De effektiva CRF-doserna för platsspecifika injektioner i NAcc som underlättar partnerpreferensen resulterade inte i någon signifikant effekt av läkemedelsbehandling på lokomotorisk aktivitet, vilken vanligen tolkas som ångestliknande beteende. DeVries och Carter (2002) hittade effektiva CRF-icv-doser för partnerpreferens vid 0.1 respektive 1.0 ng (210 nM respektive 2.1 μM) och detekterade inte skillnader i lokomotorisk aktivitet mellan behandlingsgrupper (DeVries et al., 2002). Deras doser var 1000 till 10,000-vikning större och åtminstone två gånger till tjugo gånger högre i koncentration än de doser som vi använde platsspecifikt i NAcc (10 nM och 100 nM). I vår studie, även om vi inte upptäckte signifikanta skillnader i lokomotorisk aktivitet över behandlingsgrupper, var det emellertid en liten trend mot färre burkorsningar i djuren som mottog CRF enbart i NAcc. Även om det är möjligt att CRF kan utöva subtila effekter på ångestliknande beteende och därmed lokomotion, vilket i sin tur kan påverka partnerpreferensbildningen, tror vi att den mer troliga förklaringen är att minskad burkorsning i CRF-ensam gruppen är en biprodukt av ökad partner preferens, dvs. tid som spenderas endast i partnerns bur. Detta stöder hypotesen att CRF kan ha en ny, separat roll för att reglera socialt beteende, eventuellt oberoende av HPA-axelns effekter på ångest.

Vi visar också mikrofotografiska bevis på CRF-immunreaktivitet i NAcc i samma region som CRF2 receptorer i monogamiska prärievolymer. Detta föreslår att CRF kan vara en av de endogena liganderna som verkar på CRF1 och CRF2 receptorer i NAcc. Fastän CRF har visat sig binda företrädesvis till CRF1, det binder också till CRF2 med väsentlig affinitet (Primus et al., 1997). Ucn-1-immunoreaktiva fibrer observerades inte i NAcc, men observerades i andra delar av hjärnan, såsom Edinger-Westphal-kärnan (Lim et al., 2006). Vi kunde inte kartlägga Urocortin-2- eller Urocortin-3-fibrer i den fulla hjärnan på grund av brist på specifik immunostaining; Det skulle emellertid vara intressant att bestämma om dessa potentiella ligander, som också binder CRF2 receptorer med hög affinitet finns också i NAcc tillsammans med CRF2 receptorer.

Den ventrala forkanten, och i synnerhet NAcc, har upprepade gånger identifierats som den kritiska hjärnregionen för parbindningsbildning i prairievolymer. Med tanke på NAccs roll i den mesolimbiska dopaminbelöningsbanan har det antagits att naturbelöning och förstärkningsmekanismer ligger till grund för bildandet av parbindningar, så att partnern selektivt förknippas med belöning (Aragona et al., 2003a; Lim, Murphy och Young, 2004a). Vi har tidigare visat genom farmakologiska och genetiska manipuleringar att ventrala förkärningsvasopressin V1a-receptorer är nödvändiga för bildning av hanparbindning, även när de är överuttryckta i icke-monogamala vilda arter (Lim et al., 2004b; Lim och Young, 2004). Oxytocinreceptorer i NAcc är nödvändiga för partnerpreferens hos kvinnliga prärievolymer (Young, Lim, Gingrich och Insel, 2001). Accumbal dopamin D1- och D2-receptorer har också visat sig modulera partnerpreferensbildning och underhåll hos både män och kvinnor, och faktiskt interagerar dopamin med oxytocin under denna beteendeprocess (Aragona et al., 2003a; Aragona et al., 2006; Aragona, Liu, Yu, Damron, Perlman och Wang, 2003b; Liu och Wang, 2003). Således bidrar CRF-receptoraktivering sannolikt till en större krets som konvergerar i NAcc för att producera detta komplexa sociala beteende. I överensstämmelse med denna hypotes finns det bevis för att CRF-receptorer i NAcc kan modulera dopaminfrisättning i striatumet (Lu, Liu, Huang och Zhang, 2003) och nyligen preliminära bevis som antyder att NAcc CRF-receptoraktivering kan stimulera barpressning för naturlig förstärkning (Berridge, Pecine och Schulkin, 2004). En annan studie har visat att CRF2 receptorer i det ventrala tegmentala området, som skickar dopaminerga projektioner till NAcc, kan inducera långsiktig potentiering, ett fysiologiskt korrelat av beteendeinlärning och belöningsförening (Ungless, Singh, Crowder, Yaka, Ron och Bonci, 2003). Eftersom partnerpreferensen postuleras som en form av naturlig belöningsinlärning kan CRF-receptorer i NAcc spela en liknande roll i underliggande synaptisk potensiering under parbindningsbildning i prairievoles.

Parbindningsbildning i naturen är en komplex kognitiv process som kräver integration av många yttre stimuli och interna tillstånd. Parbindningsbildning resulterar från syntesen av flera beteendeprocesser, inklusive socialt erkännande, tillvägagångssätt och social motivation, och innefattar lärande och minne. Oxytocin och vasopressin är integrerade i neuralt bearbetning av sociala stimuli och bildandet av sociala minnen (Bielsky, Hu, Szegda, Westphal och Young, 2004; Ferguson, Young, Hearn, Matzuk, Insel och Winslow, 2000). Dopamin kan vara inblandad i det ökade motivationstillståndet som driver social interaktion med ens partner, och förstärkningen behövs för att skapa en partnerpreferens. CRF kan tillhandahålla en mekanism genom vilken det interna spänningsstaten modulerar partnerpreferensen. CRF-signalering kan också möjliggöra de långsiktiga förändringarna i neural plasticitet under parbindningsbildning. Varje neurotransmittersystem spelar en annan men avgörande roll i det komplexa beteendet hos parbindning, och blockering av något system skulle störa bildandet av ett parbindning.

CRF: s roll i reglering av socialt beteende har undersökts minimalt, trots det stora antalet studier som rör CRF för stress och ångestbeteenden. Det finns starka bevis på att CRF2 receptoraktiveringsfunktioner för att minska ångest och depression-liknande beteenden hos möss (Bale, Contarino, Smith, Chan, Guld, Sawchenko, Koob, Vale och Lee, 2000; Bale och Vale, 2003). Socialt beteende, stress och ångest är starkt inbördes, särskilt i beteenden som involverar socialt stöd eller hanterar social isolering. Prärievolymer som har bildat parbindningar uppvisar förhöjda plasmakortikosteronnivåer under social avskiljning från partnern, och återförening med partner returnerar dessa nivåer tillbaka till baslinjen (Carter, DeVries, Taymans, Roberts, Williams och Getz, 1997). Manliga prärievolymer som genomgår tvingad simning, en psykologisk stressor, visar en underlättande av parbindningsbildning efter en förkortad sambo med partnern (DeVries et al., 1996). Slutligen visar par-bundna män som är separerade från sina partners mer passiva copingstrategier i tvångsvimptestet än deras syskon-separerade motsvarigheter, och sådana beteendeförändringar åtföljs av en ökning av CRF-mRNA i NAccBosch, Nair, Neumann och Young, 2005).

Dessa data tyder på att sociala och stressbeteenden har ett ömsesidigt förhållande, och dessutom spelar samma molekyler som är inblandade i stress och ångest också en viktig roll i socialt beteende. Faktum är att det finns bevis för att "sociala" neuropeptiderna vasopressin och oxytocin kan modulera stress och ångestbeteende (Bielsky et al., 2004; Landgraf, Gerstberger, Montkowski, Probst, Wotjak, Holsboer och Engelmann, 1995; Liebsch, Wotjak, Landgraf och Engelmann, 1996; Mantella, Vollmer, Li och Amico, 2003; Ring, Malberg, Potestio, Ping, Boikess, Luo, Schechter, Rizzo, Rahman och Rosenzweig-Lipson, 2006; Windle, Shanks, Lightman och Ingram, 1997). Således kan samma molekyler som modulerar det interna stressläget bidra till att reglera sociala beteenden, såsom parbindningsbildning, och att de molekyler och kretsar som utvecklas för ändamålet med ett beteende faktiskt kan styra den andra dynamiskt.

Erkännanden

På Emory University vill vi tacka Dr. Michael J. Owens för att vi nådigt ger oss CP-154,526-föreningen. Vi skulle också vilja tacka Lorra Miller och Meera Modi för deras hjälp med det enga experimentet. Slutligen vill vi tacka Drs. A. Courtney DeVries vid Ohio State University och C. Sue Carter vid University of Illinois, Chicago för deras banbrytande arbete med CRF i prairie voles och Dr. DeVries korrespondens om farmakologiska experimenten.

Bevilja stöd: Denna forskning stöddes av NIH-bidrag MH65050 till MML, AA13738 till AER, MH58616 till ZXW, MH64692 till LJY och NSF STC IBN-9876754 och Yerkes Center Grant RR00165.

fotnoter

Ansvarsfriskrivning för förlag: Detta är en PDF-fil av ett oediterat manuskript som har godkänts för publicering. Som en tjänst till våra kunder tillhandahåller vi denna tidiga version av manuskriptet. Manuskriptet kommer att genomgå copyediting, uppsättning och granskning av det resulterande beviset innan det publiceras i sin slutliga formulär. Observera att under tillverkningsprocessen kan det upptäckas fel som kan påverka innehållet och alla juridiska ansvarsfrister som gäller för tidskriften avser.

Referensprojekt

  1. Aragona BJ, Liu Y, Curtis JT, Stephan FK, Wang Z. En kritisk roll för kärnan accumbens dopamin i partnerpreferensbildning i manliga prärievolymer. J Neurosci. 2003a; 23 (8): 3483-90. [PubMed]
  2. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Curtis JT, Detwiler JM, Insel TR, Wang Z. Nukleär accumbensdopamin medierar differentiellt bildandet och underhållet av monogamiska parbindningar. Nat Neurosci. 2006; 9 (1): 133-9. [PubMed]
  3. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Damron A, Perlman G, Wang ZX. Motsatt modulering av social bindning genom D1- och D2-typ dopaminreceptoraktivering i nukleinsymbolskal. Horm Behav. 2003b; 44: 37.
  4. Bachtell RK, Weitemier AZ, Galvan-Rosas A, Tsivkovskaia NO, Risinger FO, Phillips TJ, Grahame NJ, Ryabinin AE. Den Edinger-Westphal-laterala septum urokortinvägen och dess förhållande till alkoholkonsumtion. J Neurosci. 2003; 23 (6): 2477-87. [PubMed]
  5. Bale TL, Contarino A, Smith GW, Chan R, Guld LH, Sawchenko PE, Koob GF, Vale WW, Lee KF. Möss bristande för kortikotropinfrisättande hormonreceptor-2 visar ångestliknande beteende och är överkänsliga för stress. Nat Genet. 2000; 24 (4): 410-4. [PubMed]
  6. Bale TL, Vale WW. Ökad depressionliknande beteende hos kortikotropinfrigörande faktorreceptor-2-bristande möss: sexuellt dikotoma svar. J Neurosci. 2003; 23 (12): 5295-301. [PubMed]
  7. Berridge KK, Pecine S, Schulkin J. Applikativ effekt av CRF i accumbens skal på villkorat sätt för sackaros belöning. Samhälle för neurovetenskap Abstrakt Viewer / Reseplanerare. 2004: 437.12.
  8. Bielsky IF, Hu SB, Szegda KL, Westphal H, Young LJ. Djupgående försämring i socialt erkännande och minskning av ångestliknande beteende hos vasopressin V1a-receptor-knockout-möss. Neuropsychopharmacology. 2004; 29 (3): 483-93. [PubMed]
  9. Bosch OJ, Nair HP, Neumann ID, Young LJ. Depressivt liknande beteende efter isolering från en kvinnlig partner är förknippad med förändrad hjärnans CRF-mRNA och HPA-axelaktivitet i hanpririe-vole. Samhälle för neurovetenskap Abstrakt Viewer / Reseplanerare; 2005. (Programnummer 420.4)
  10. Carter CS, DeVries AC, Getz LL. Fysiologiska substrat av däggdjursmonogami: prairie vole-modellen. Neurosci Biobehav Rev. 1995; 19 (2): 303-14. [PubMed]
  11. Carter CS, DeVries AC, Taymans SE, Roberts RL, Williams JR, Getz LL. Peptider, steroider och parbindning. Ann NY Acad Sci. 1997; 807: 260-72. [PubMed]
  12. DeVries AC, DeVries MB, Taymans SE, Carter CS. Effekterna av stress på sociala preferenser är sexuellt dimorfa i prärievolymer. Proc Natl Acad Sci USA A. 1996; 93 (21): 11980-4. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  13. DeVries AC, Guptaa T, Cardillo S, Cho M, Carter CS. Cortikotropin-frisättande faktor inducerar sociala preferenser hos manliga prärievolymer. Psychon. 2002; 27 (6): 705-14. [PubMed]
  14. Ferguson JN, Young LJ, Hearn EF, Matzuk MM, Insel TR, Winslow JT. Social amnesi hos möss som saknar oxytocingenen. Nat Genet. 2000; 25 (3): 284-8. [PubMed]
  15. Getz LL, Carter CS, Gavish L. Prärieparets parningssystem Microtus ochragaster: Fält- och laboratoriebevis för parbindning. Beteendeekologi och sociobiologi. 1981; 8: 189-194.
  16. Gruder-Adams S, Getz LL. Jämförelse av parningssystemet och faderbeteendet i Microtus ochragaster och M. pennsylvanicus. Journal of Mammalogy. 1985; 66 (1): 165-167.
  17. Hotta M, Shibasaki T, Arai K, Demura H. Cortikotropin-frisättande faktorreceptortyp 1 medierar emotionell stressinducerad inhibering av matintag och beteendeförändringar hos råttor. Brain Res. 1999; 823 (1-2): 221-5. [PubMed]
  18. Insel TR, Shapiro LE. Oxytocinreceptorfördelning speglar social organisation i monogamiska och polygamiska volymer. Proc Natl Acad Sci USA A. 1992; 89 (13): 5981-5. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  19. Insel TR, Wang ZX, Ferris CF. Mönster av hjärnvassopressinreceptorfördelning associerad med social organisation i mikrotina gnagare. J Neurosci. 1994; 14 (9): 5381-92. [PubMed]
  20. Jahn O, Eckart K, Brauns O, Tezval H, Spiess J. Det bindande proteinet av kortikotropinfrigörande faktor: ligandbindande ställe och subenhetstruktur. Proc Natl Acad Sci USA A. 2002; 99 (19): 12055-60. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  21. Landgraf R, Gerstberger R, Montkowski A, Probst JC, Wotjak CT, Holsboer F, Engelmann M. V1 vasopressinreceptor-antisenseoligodeoxynukleotid i septum minskar vasopressinbindning, sociala diskrimineringsförmåga och ångestrelaterat beteende hos råttor. J Neurosci. 1995; 15 (6): 4250-8. [PubMed]
  22. Liebsch G, Wotjak CT, Landgraf R, Engelmann M. Septal vasopressin modulerar ångestrelaterat beteende hos råttor. Neurosci Lett. 1996; 217 (2-3): 101-4. [PubMed]
  23. Lim MM, Murphy AZ, Young LJ. Ventral striatopallidala oxytocin och vasopressin V1a receptorer i monogamisk prairie vole (Microtus ochrogaster) J Comp Neurol. 2004a; 468 (4): 555-70. [PubMed]
  24. Lim MM, Nair HP, Young LJ. Arter och könskillnader i hjärnfördelning av kortikotropinfrisättningsfaktorreceptorsubtyper 1 och 2 i monogamiska och promiskuösa vilda arter. J Comp Neurol. 2005; 487 (1): 75-92. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  25. Lim MM, Tsivkovskaia NO, Bai Y, Young LJ, Ryabinin AE. Distribution av Corticotropin-Releasing Factor och Urocortin 1 i Vole Brain. Brain Behav Evol. 2006; 68 (4): 229-240. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  26. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Förbättrad partnerpreferens i en promiskuös art genom att manipulera uttrycket av en enda gen. Natur. 2004b; 429 (6993): 754-7. [PubMed]
  27. Lim MM, Young LJ. Vasopressinberoende neurala kretsar som ligger bakom parbindningsbildning i den monogamiska prairie vole. Neuroscience. 2004; 125 (1): 35-45. [PubMed]
  28. Liu Y, Wang ZX. Nucleus accumbens oxytocin och dopamin interagerar för att reglera parbindningsbildning i kvinnliga prairievolymer. Neuroscience. 2003; 121 (3): 537-44. [PubMed]
  29. Lu L, Liu Z, Huang M, Zhang Z. Dopaminberoende responser på kokain beror på kortikotropinfrisättningsfaktorreceptorsubtyper. J Neurochem. 2003; 84 (6): 1378-86. [PubMed]
  30. Mantella RC, Vollmer RR, Li X, Amico JA. Kvinnliga oxytocin-bristande möss visar ökat ångestrelaterat beteende. Endokrinologi. 2003; 144 (6): 2291-6. [PubMed]
  31. Paxinos G, Watson C. Råttahjärnan i stereotaxiska koordinater. 4. Academic Press; 1998.
  32. Primus RJ, Yevich E, Baltazar C, Gallager DW. Autoradiografisk lokalisering av CRF1- och CRF2-bindningsställen i vuxen råtthjärna. Neuropsychopharmacology. 1997; 17 (5): 308-16. [PubMed]
  33. Ring RH, Malberg JE, Potestio L, Ping J, Boikess S, Luo B, Schechter LE, Rizzo S, Rahman Z, Rosenzweig-Lipson S. Anxiolytisk-liknande aktivitet av oxytocin hos hanmöss: beteende- och autonoma bevis, terapeutiska följder. Psykofarmakologi (Berl) 2006: 1-8. [PubMed]
  34. Ryabinin AE, Criado JR, Henriksen SJ, Bloom FE, Wilson MC. Differentiell känslighet av c-Fos uttryck i hippocampus och andra hjärnregioner till måttliga och låga doser alkohol. Mol psykiatri. 1997; 2 (1): 32-43. [PubMed]
  35. Salo AL, Shapiro LE, Dewsbury DA. Affiliativt beteende hos olika arter av volymer (Microtus) Psychol Rep. 1993; 72 (1): 316-8. [PubMed]
  36. Shapiro LE, Dewsbury DA. Skillnader i anslutningsbeteende, parbindning och vaginal cytologi i två arter av vole (Microtus ochrogaster och M. montanus) J Comp Psychol. 1990; 104 (3): 268-74. [PubMed]
  37. Unglösa MA, Singh V, Crowder TL, Yaka R, Ron D, Bonci A. Cortikotropinfrigörande faktor kräver CRF-bindande protein för att potentiera NMDA-receptorer via CRF-receptor 2 i dopaminneuroner. Nervcell. 2003; 39 (3): 401-7. [PubMed]
  38. Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Urocortin 1-fördelning i mushinnan är stamberoende. Neuroscience. 2005; 132 (3): 729-40. [PubMed]
  39. Windle RJ, Shanks N, Lightman SL, Ingram CD. Central oxytocinadministration minskar stressinducerad kortikosteronfrisättning och ångestbeteende hos råttor. Endokrinologi. 1997; 138 (7): 2829-34. [PubMed]
  40. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Cellmekanismer av socialt bindande medel. Horm Behav. 2001; 40 (2): 133-8. [PubMed]
  41. Young LJ, Wang Z. Den neurobiologi av parbindning. Nat Neurosci. 2004; 7 (10): 1048-54. [PubMed]