Histon-deacetylasinhibitorer underlättar partnerpreferensbildningen hos kvinnliga prärievolymer (2013)

Nat Neurosci. Författarens manuskript; tillgänglig i PMC Jan 1, 2014.

Publicerad i slutredigerad form som:

PMCID: PMC3703824

NIHMSID: NIHMS477621

Förlagets slutredigerade version av denna artikel finns tillgänglig på Nat Neurosci

Se andra artiklar i PMC som citerar den publicerade artikeln.

Gå till:

Abstrakt

I den socialt monogamiska prairie vole (Microtus ochrogaster) inducerar parning varaktiga parbindningar initierade genom partnerpreferensbildning och regleras av en mängd olika neurotransmittorer innefattande oxytocin, vasopressin och dopamin. Här undersöktes potentiella epigenetiska mekanismer som medierar parbindningsreglering. Vi visar att histon-deacetylasinhibitorerna natriumbutyrat och TrichoStatin A (TSA) underlättar partnerpreferensbildningen i kvinnliga prairievolymer i frånvaro av parning. Detta var förknippat med en specifik uppreglering av oxytocin (OTR) och vasopressin V1a-receptorer (V1aR) i kärnan accumbens, genom en ökning av histon-acetylering vid respektive promotor. Vidare förekom TSA-underlättad partnerpreferens genom OTR eller V1aR-blockad i kärnan accumbens. Viktigt är att parningsprocent partnerpreferens utlöste samma epigenetiska reglering av OTR- och V1aR-genpromotorer som TSA. Dessa observationer visar således att TSA och parning underlättar partnerpreferensen genom epigenetiska händelser, vilket ger den första direkta bevisen för en epigenetisk reglering av parbindning.

Beskrivning

Social anknytning är en väsentlig egenskap för mänskliga sociala beteenden och sociala kognitiva underskott är vanliga egenskaper i en mängd neuropsykiatriska störningar inklusive schizofreni och autismspektrum störningar, såväl som beroende och depression1. De socialt monogamiska prärievolymerna (Microtus ochrogaster) har framkommit som en mycket intressant modell för undersökning av de neurobiologiska grundarna för socialt bindande, eftersom både laboratorie- och frittstående individer etablerar långsiktiga parobligationer2-4, som först initieras av bildandet av selektiva anslutningsbeteenden mot partnern, som kallas partnerpreferens5. Denna bildning av partnerpreferensen innefattar en mängd neurotransmittorer och hormonella system, inklusive neuropeptiderna oxytocin och vasopressin (AVP) och mesolimbisk dopamin5.

In generellt är partnerpreferensbildningen medierad genom AVP-neurotransmission i ventral pallidum och lateral septum (LS) hos män och oxytocin-neurotransmission i nukleusaccumbens (NAcc) och prelimbisk cortex hos kvinnliga prärievolymer6-8.

Dopamin är vanligtvis inblandad i naturlig belöning som parning, och dopamin fungerar också som en kritisk medlare av partnerpreferensen i prärievolymer. Aktivering av dopamin D2-typreceptorerna (D2R) i NAcc underlättar medan aktivering av receptorer av dopamin D1-typ (D1R) inhiberar partnerpreferensbildning i både manliga och kvinnliga prärievolymer9-11.

Viktigt är att variationer i genuttryck av oxytocin och AVP V1a-receptorer, OTR respektive V1aR, själva kan drabba partnerpreferensen dramatiskt. I kvinnliga prairievoles möjliggör till exempel överuttrycket av OTR i NAccs partnerpreferensen i frånvaro av parning12-14.

Utöver reglering av parbindning är oxytocin och AVP också inblandade i ett brett spektrum av sociala beteenden, inklusive socialt erkännande, aggression och mammasjukvård15, 16. I synnerhet orsakar störningar av det senare beteendet hos gnagare långvariga neuroadaptationer genom epigenetiska mekanismer, innefattande DNA-metylering av östrogenreceptor alfa17 och AVP-gener18, såväl som histonacetylering av glukokortikoidreceptorpromotorn19. Dessutom ökar histon-deacetylas (HDAC) -hämmare, vilket förstärker genuttryck genom ökad histonacetylering i gnagarehjärnan20, kan vända om dessa förändringar19, och direkt påverka sociala beteenden som sexuell mottaglighet21. Viktigt är att i en lungcancercellinje förstärker HDAC-hämmaren trichostatin A (TSA) direkt OTR-transkription genom lokalt promoterande histonacetylering22.

Därför kan en epigenetisk bas i partnerpreferensbildningen i prärievolymer föreslås. För att testa denna hypotes bedömde vi först effekterna av två HDAC-hämmare, natriumbutyrat (NaB) och TSA, på partnerpreferensbildning hos vuxna kvinnliga prärievolymer. Därefter undersökte vi de molekylära mekanismerna som medierade effekterna av TSA vid inducering av partnerpreferens hos kvinnliga prärievolymer. Slutligen försökte vi bestämma huruvida de epigenetiska förändringar som inducerades av TSA under samboende också utlöstes genom parning.

Resultat

TSA-behandling underlättar partnerpreferensen

Sexuellt naiva kvinnliga prärievolymer injicerades intracerebroventricularly (icv.) med CSF eller CSF som innehåller 0.08, 0.4 eller 4 ng av TSA omedelbart före 6-timmars samlevnad med en man utan parning, och deras partnerpreferens testades därefter. Sex timmars samlevnad med en man utan parning inducerar inte partnerpreferensbildning i kvinnliga prärievolymer4 och sålunda har detta beteendeparadigm använts i stor utsträckning för att bedöma effekterna av olika droger på att underlätta partnerpreferensbildningen5.

CSF-behandlade djur visade icke-selektiv sida vid sida-kontakt med partnern eller den främling som följde 6-timmars samlevnad utan parning (t15= 0.76, P = 0.46; Fig. 1a). Djur som behandlades med TSA vid alla doser testade emellertid företrädesvis mer tid med partnern än hos främlingen (t8= 4.35, P = 0.002 för TSA 0.08 ng-grupp; t15= 3.63, P = 0.002 för TSA 0.4 ng-grupp; och t8= 2.58, P = 0.03 för TSA 4 ng-gruppen). Det är viktigt att inga gruppskillnader hittades i lokomotorisk aktivitet (F3,46 = 1.25, P= 0.30, Fig. 1b) och inget aggressivt beteende från provkvinnan gentemot antingen främlingen eller partnern observerades, vilket visade att effekterna av TSA var specifika för en social preferens snarare än att vara sekundär mot en förändring av lokomotion eller social aversion mot främlingen.

Figur 1  

En akut injektion av trichostatin A (TSA) underlättar partnerpreferensbildningen i kvinnliga prairievolymer i frånvaro av parning. (a) Cerebrospinalvätska (CSF) -behandlade honor utsatt för en man i 6 timmar i frånvaro av parning visade icke selektiv .

För att undersöka huruvida TSA ökar histonacetyleringen i hjärnstrukturer som är involverade i bildandet av partnerpreferensen, injicerades en separat grupp av honor med medeldosen TSA (0.4 ng) och samlevde med en man i frånvaro av parning under 30 min, 2 eller 9 timmar. I synnerhet kunde ingen signifikant variation i histon H3-acetyleringsnivåerna (Lys14) nivåer detekteras vid vilken tidpunkt som helst i både NAcc och caudate putamen (P > 0.05 för alla grupper, Fig. 1c & d). Detta visar att TSA underlättar partnerpreferensbildningen i frånvaro av parning, trots att den inte påverkar global histon H3-acetylering i NAcc eller caudat putamen.

Viktigt är att natriumbutyrat också underlättar partnerpreferensen hos kvinnliga prärievolymer efter samlevnad med en manlig för 6-timmar utan parning, förknippad med en ökning av global histon H3-acetylering (Lys14) i NAccKompletterande figur 1). Effekterna av TSA på partnerpreferensbildningen kan således reproduceras med en annan HDAC-hämmare, vilket föreslår involvering av HDAC-hämning, snarare än en icke-specifik effekt av TSA vid underlättande av partnerpreferensen. Med tanke på att TSA är en mer specifik och affine klass I / II HDAC-hämmare23, 24, och att beteendeeffekterna av TSA var mer uttalade än NaB valde vi att använda TSA över NaB för att undersöka specifika molekylära korrelater i följande delar av studien.

Molekylära korrelater av TSA-facilitated partner preference

Eftersom variationer i genuttrycksnivåer i den fulla NAcc har associerats med olika parringsstrategier mellan monogamiska och icke-monogamiska volymer och med förändring av partnerpreferensbildning i speciella prairievolymer i synnerhet12, 13, 25, 26, vi bedömde huruvida TSA-underlättad partnerpreferensbildning associerades med variationer av genuttryck i NAcc.

TSA behandling (0.4 ng, icv.) inducerad en ökning i OTR-mRNA-nivåer i NAcc efter 2-timmars samlevnad jämfört med CSF-behandlade kontroller (t10 = 2.38, P = 0.038, Fig. 2a), som tenderade att upprätthållas efter 9-timmars samlevnad (t9 = 2.17, P = 0.058, Fig. 2b). Även om en liten men inte signifikant ökning av V1aR-mRNA kunde observeras i NAcc 2-timmarna efter TSA-injektionen, upptäcktes inga andra gruppskillnader vid någon tidpunkt för någon av de andra mRNA-mätena, inklusive D1R eller D2R (P > 0.05, Fig. 2a, b). Det är viktigt att inga gruppskillnader observerades i de caudata putamen vid vilken tidpunkt som helst och för varje mRNA som mättes (P > 0.05 för alla grupper, Fig. 2c, d), vilket tyder på att ökningen av OTR-mRNA observerad i TSA-behandlade djur var specifik för NAcc. Vidare var sådan uppreglering närvarande endast efter samlevnad med en man, eftersom OTR- och V1aR-mRNA-nivåerna i NAcc var oförändrade 2 timmar efter TSA-injektion utan samboende (OTR: 100.0% ± 11.70 för CSF-grupp, 86.7% ± 12.11 för TSA grupp, t12 = 0.79, P = 0.444; V1aR: 100.0% ± 26.24 för CSF-grupp, 92.3% ± 13.75 för TSA-grupp, t9 = 0.27, P =

Figur 2  

TSA behandling (0.4 ng) uppreglerar oxytocin (OTR) och vasopressin (V1aR) receptorer i kvinnliga prairievolymer under samboende med en man i frånvaro av parning. OTR-mRNA (a, b) och protein (e, f) -nivåerna reglerades upp efter 2 (a, e) och 9 timmar .

I linje med högre OTR-mRNA-nivåer uppvisade även TSA-behandlade djur högre OTR-proteinnivåer vid båda tidpunkterna i NAcc (2 timmar: t10 = 2.34, P = 0.041; 9 timmar: t10 = 3.16, P = 0.01, Fig. 2e, f), men inte caudate putamen (t10 = 0.41, P = 0.69, Fig. 2g, h). Intressant, medan ingen signifikant förändring av V1aR-mRNA-nivåer kunde detekteras i NAcc vid 2 eller 9 timmar efter TSA-injektionen (Fig. 2a, b) ökade V1aR-proteinnivåerna signifikant vid 9-timmar, jämfört med CSF-behandlade djur, i NAcc (t9 = 3.46, P = 0.007, Fig. 2f) men inte caudate putamen (t10 = 0.98, P = 0.35, Fig. 2h). Även om D1R- och D2R-proteinnivåerna i NAcc och caudate putamen inte var signifikant påverkade av TSA-administrering (med vissa variationer) (P > 0.05, Fig. 2e-h).

TSA underlättar histonacetylering av oxtr och avpr1a

Ökningen i både mRNA- och proteinhalterna för OTR efter samboende efter TSA-behandling föreslog att TSA troligen ökade transkriptionen av oxtr, genen som kodar för OTR, snarare än att ändra proteinets omsättning eller omsättning. Dessutom var V1aR-proteinhalterna högre i NAcc, associerad med en liten men inte signifikant ökning av mRNA-nivåer efter TSA-behandling (Fig 2). Med tanke på att TSA är en kraftfull klass I och II HDAC-hämmare23, 24, 27, vi antog att TSA ökade histon acetylering vid oxtr och avpr1a promotorer i NAcc, därefter förstärkning av deras transkription. Ett nytt parti djur mottagna icv. injektion av TSA (0.4 ng) och omedelbart samlevde med en man utan parning i 30 minuter innan den offrades. 30-min-tidsfönstret valdes baserat på tidigare arbete som rapporterade en maximal ökning av histonacetylering efter lokal TSA-injektion hos råttor och möss28, 29. H3K14 acetylering vid oxtr och avpr1a promotorer analyserades sedan genom kromatinimmunutfällning.

I linje med ökningen av OTR-mRNA och proteinnivåer som tidigare observerats uppvisade TSA-behandlade djur en mycket hög ökning (+ 460%) vid histon H3-acetylering vid oxtr genpromotorn jämfört med CSF-behandlade kontroller i NAcc (t10 = 5.88, P = 0.0002), men inte caudat putamen (t9= 0.31, P = 0.76, Fig. 3a). Dessutom histon H3 acetylering vid avpr1a promotorn var signifikant förhöjd 30 min efter TSA-administrering (+ 196%) i NAcc (t10 = 3.12, P = 0.01) men inte caudat putamen (t9= 0.38, P = 0.71), jämfört med CSF-behandlade kontroller (Fig. 3b). Därför ökade TSA-histon-acetyleringsstället specifikt i NAcc så tidigt som 30-minuter efter början av samboet med en manlig.

Figur 3  

TSA behandling ökar histon acetylering av oxtr och avpr1a promotorer under samboende med en man i frånvaro av parning. Histon H3-acetylering (Lys14) vid oxtr (a) och avpr1a (b) promotorer ökades i nucleus accumbens (NAcc) men inte .

TSA underlättar partnerpreferensen via OTR och V1aR

Från den tidigare uppsättningen experiment uppträder en molekylär handlingsmodell, där TSA vid samboet förstärker histonacetylering vid oxtr och avpr1a promotorer, därefter höja deras transkription och resultera i högre OTR- och V1aR-proteinnivåer upp till 9 timmar efter början av samlevnadsperioden. Viktigt är att denna TSA-effekt är platsspecifik eftersom de caudate putamen förblir opåverkade. Här testade vi huruvida denna TSA-inducerad ökning av OTR och V1aR är relaterad till att underlätta för partnerpreferensbildning. Kvinna prärievolymer erhöll en intra-NAcc-injektion av TSA (0.04ng per sida) med eller utan föregående injektion (30minutes före TSA-injektion, 0.5ng per sida) av CSF eller CSF innehållande en av två olika OTR-antagonister, OTA (B) och OTA (T) eller en V1aR-antagonist (V1aRA). Omedelbart efter TSA-injektionen samlevde kvinnorna med en man i 6 timmar utan parning, följt av ett partnerpreferensprov.

CSF-behandlade djur visade inte en partnerpreferens (t5 = 0.17, P = 0.87, Fig. 4a). TSA-behandlade djur spenderade emellertid betydligt mer tid i sida vid sida kontakter med "partner" än med "främlingen", vilket tyder på att en enda TSA-injektion direkt i NAcc är tillräcklig för att underlätta partnerpreferensbildning utan parning (t5 = 7.04, P = 0.0009). Intressant nog hindrade blockad av antingen OTR eller V1aR genom förbehandling med OTA (B), OTA (T) eller V1aRA effekterna av TSA (P > 0.05 för alla grupper). Eftersom inga gruppskillnader påträffades i rörelseaktivitet (F4,32 = 1.89, P = 0.14, Fig. 4b), tyder dessa data på att TSA i NAcc underlättar partnerpreferensbildning via OTR- och V1aR-medierade mekanismer på ett beteendespecifik sätt.

Figur 4  

TSA-underlättad partnerpreferens kräver oxytocin (OTR) och vasopressin (V1aR) -receptormedierad neurotransmission i honkärnans accumbens. (a) TSA underlättar partnerpreferensen när den infunderas i kärnan accumbens (0.04 ng per sida), .

Parning inducerar liknande neuroadaptationer som TSA

Efter våra tidigare observationer konstaterade vi att epigenetisk förstärkning av oxytocin och vasopressin-neurotransmission i den kvinnliga NAcc var tillräcklig för att underlätta partnerpreferensbildningen i frånvaro av parning. För att undersöka huruvida dessa neuroadaptationer också uppträder under naturlig bildning av partnerpreferensen, var kvinnliga prärievolymer samboende med en man under 24 timmar i närvaro av parning, vilket framkallar partnerpreferens4, och offrade. Vi observerade en ökning av både OTR- och V1aR-mRNA och proteinnivåer i NAcc, jämfört med sexuellt naiva kvinnor (OTR: + 38% t10 = 2.68, P = 0.02 för mRNA och + 58% t8 = 3.05, P = 0.01 för protein; V1aR: + 89%, t14= 2.53, P = 0.02 för mRNA och + 26% t20 = 2.23, P = 0.037 för protein, Fig. 5a, b).

Figur 5  

Samboende med parning inducerar en uppreglering av oxytocin (OTR) och vasopressin (V1aR) -receptorerna i nukleär accumbens (NAcc) hos kvinnliga prärievolymer. 24h Samboende med en man med parning uppreglerar OTR (a) och V1aR (b) mRNA och protein .

Eftersom både mRNA- och proteinhalter för OTR och V1aR ökades genom samlevnad med parning undersökte vi därefter om denna uppreglering var associerad med en epigenetisk förstärkning av oxtr och avpr1a gener transkription. En ny sats av honor var således samboend med en man i 6 timmar med parning och H3K14 acetylering vid oxtr och avpr1a promotorer uppmätta genom kromatinimmunutfällning. I linje med OTR- och V1aR-mRNA- och proteinhalterna uppvisar kvinnliga prärievolymer högre H3K14-acetylering vid oxtr och avpr1a promotorer i NAcc, jämfört med sexuellt naiva kvinnor (oxtr: t9 = 2.64, P = 0.02; avpr1a: t9 = 2.91, P = 0.017 Fig. 5c, d). Dessa data tyder på att samlevnadsparadigmer som på ett tillförlitligt sätt framkallar partnerpreferens hos kvinnliga prärievolymer utlöser en uppreglering av OTR- och V1aR-uttryck i NAcc genom epigenetiska mekanismer, som observerats efter TSA-behandling.

Diskussion

I den aktuella studien rapporterar vi för första gången en epigenetisk reglering av partnerpreferensbildning. Först visade vi att ökad histonacetylering i NAcc genom administrering av en HDAC-hämmare underlättar partnerpreferensbildningen hos vuxna kvinnliga prärievolymer i frånvaro av parning. Thöna, vi avslöjade direkta bevis på att partnerpreferensbildningen hos kvinnor är epigenetiskt driven, eftersom sambo och parning med en hane ökade oxtr och avpr1a gener uttryck genom förbättrad histonacetylering i NAcc. TSA-administration i den NAcc-inducerade partnerpreferensen och ledde till högre nivåer av OTR-mRNA och proteiner i NAcc. Vidare, även om den globala histon-H3-acetyleringen var opåverkad hos TSA-behandlade honor, en markerad anrikning av histonacetylering vid oxtr promotor i NAcc observerades så tidigt som 30 minuter efter TSA-administrering. Slutligen var blockering av OTR i NAcc tillräcklig för att förhindra TSA-facilitated partner preference. Eftersom liknande epigenetiskt drivna modifieringar detekterades efter samlevnad med parning, under förfaranden som är kända för att inducera partnerpreferensen, presenterade våra data en modell för en epigenetisk reglering av socialt beteende. Dsammankoppling med en man, TSA eller parning inducerar snabbt en specifik histon H3-acetylering vid oxtr promotorn i NAcc som förbättrar dess transkription, vilket resulterar i högre OTR-mRNA- och proteinnivåer, vilket därefter underlättar partnerpreferensbildning.

I kvinnliga prärievolymer inducerar 6-timmars samlevnad med en man utan parning inte någon partnerpreferensbildning4, och detta beteendeparadigm har använts för att undersöka effekterna av farmakologiska manipulationer på inducering av partnerpreferens5. I vår studie, medan saltlösning eller CSF-behandlade kontroller inte utvecklade partnerpreferensen, gjorde kvinnliga prärievolymer behandlade med NaB eller TSA. Eftersom varken NaB eller TSA påverkade den totala rörelsen, verkade deras effekter på partnerpreferensen vara beteendespecifika snarare än sekundära effekter på lokomotion. Denna specifika effekt av TSA bekräftades ytterligare av våra molekylära observationer. Faktum är att även om det administreras icv. Vi kunde upptäcka en specifik förändring av genuttryck i NAcc men inte i en angränsande struktur, caudate putamen. Dessutom var även inom NAcc, D1R och D2R mRNA och proteinnivåer oförändrade. Sådan specificitet förefaller vara överraskande för en bred HDAC-hämmare, såsom TSA, som påverkar både HDI i klass I och II. Ändå har TSA rapporterats att påverka uttrycket av endast en liten delmängd av gener i däggdjursgenomet30-32, inklusive hos möss20.

Vi visade här att acetylering av histon H3 på Lys14 vid oxtr promotor, en modifiering associerad med förbättrad gentransskription inkluderande under cerebral plastisitet33, 34, understryker högre OTR-mRNA och proteinnivåer. Som svar på TSA, histon acetylering vid oxtr promotorn ökar och underlättar aktiveringen av dess transkription i humant cellinje22, stödja vårt resultat att oxtr kan regleras epigenetiskt. Eftersom en lokal blockad av OTR i NAcc var tillräcklig för att förhindra beteendeeffekter av TSA, föreslår våra data att det TSA-inducerade uttrycket av OTR i NAcc under samlevnad medierade förenkling av partnerpreferensbildning. Dessutom inducerade 24-timmars samlevnad med parning, ett förfarande som känt att på ett tillförlitligt sätt framställa partnerpreferens hos kvinnliga prairievolymer, en liknande ökning av OTR-uttryck i den kvinnliga NAcc. Detta är fullständigt överens med det kända engagemanget för oxytocin och dess receptor i neurobiologin av partnerpreferensbildningen hos kvinnliga volymer. Parning inducerar en ökning av extracellulära oxytocinnivåer i NAcc25, och lokal infusion av oxytocin i NAcc underlättar partnerpreferensbildningen i frånvaro av parning8. Vidare blockerar OTR-antagonister partnerpreferensbildning inducerad genom oxytocinadministrering eller parning8, 35. Det är viktigt att den virala medierade överuttrycket av OTR i den kvinnliga NAcc är tillräcklig för att underlätta partnerpreferensbildningen12, 13.

Förutom att stärka OTR: s roll, ger våra resultat också bevis för en aktivering av OTR-genuttryck genom epigenetiska mekanismer under samlevnad med en man i frånvaro av parning. Faktum är att, även om det inte är tillräckligt att inducera partnerpreferens, aktiverar sådan samboende utan parning under korta tidsperioder de neurobiologiska processerna underliggande partnerpreferensbildning. Till exempel orsakar två timmars fri exponering för en man en liten men icke-signifikant höjning av oxytocinfrisättning i den kvinnliga NAcc25. Det kan därför föreslås att TSA eller NaB förstärker de neuroadaptationer som induceras genom samliv med en man, vilket underlättar utvecklingen av partnerpreferensen. Intressant har sådan förstärkning redan rapporterats hos gnagare där klass I och II HDAC-hämmare, inklusive NaB och TSA, underlättar konsolidering av en lärande händelse som inte resulterar i långtidsminnebildning i kontrolldjur36, 37. Till stöd för detta begrepp, längre samlevnadsperioder (t.ex., 48hours) kan framkalla partnerpreferens även i frånvaro av parning4. Det är också viktigt att notera att samboende med parning utlöstes i den kvinnliga NAcc en uppreglering av uttrycket OTR och V1aR genom samma epigenetiska mekanismer som de som observerades efter sambo med TSA-behandling, vilket visar att TSA och parning påverkar samma vägar för att främja partner preferensbildning. Viktigt är att TSA inte inducerar en uppreglering av OTR och V1aR i den kvinnliga NAcc i frånvaro av sambo med en manlig. Sammantaget stöder detta hypotesen att TSA underlättar bildandet av partnerpreferens genom potentiering av endogena neuroadaptationer som naturligt utlöses av samlivet med en man, istället för att aktivera dessa eller olika neuroadaptationer på egen hand.

OStudien belyser också en kritisk roll för NAcc V1aR hos kvinnans partnerpreferensbildning, eftersom TSA-behandlade djur uppvisar högre V1aR-nivåer, vars blockad förhindrade TSA-underlättad partnerpreferensbildning. Dessutom var dessa effekter associerade med högre histonacetylering vid avpr1a promotor, trots att ingen signifikant höjning av V1aR-mRNA troligen beror på en icke-optimal tidpunkt. Även om vi inte kan utesluta en reglering av proteinstabilitet genom TSA genom acetylering av icke-histonproteiner38, detta resultat tyder på att, liknar oxtr promotor kan TSA främja avpr1a transkription genom lokal histonacetylering. Medan bidraget från AVP i manliga parbindning har beskrivits5, dess roll i kvinnans beteende är fortfarande kontroversiell. Å ena sidan, en icv. AVP-injektion underlättar partnerpreferensbildningen i både han- och honvolymer, vilket förhindras genom blockering av antingen V1aR eller OTR39. Å andra sidan en icv. injektion av V1aR-antagonisten blockerar den parningsinducerade partnerpreferensen hos han, men inte hos kvinnliga, prairievolymer40. Men alla dessa studier använde icv. injektioner, vilket hindrar ytterligare inblick i de involverade strukturerna. Här tillhandahåller vi de första bevisen att AVP-neurotransmission inom NAcc kan vara involverad i partnerpreferensbildningen i honvolymerna, medan det mesta av litteraturen beskriver sitt engagemang på olika områden som ventral pallidum, lateral septum, kärnan i sängen stria terminalis och amygdala hos män5. Det blir därför intressant att notera att blockaden av antingen OTR eller V1aR i kvinnans NAcc var tillräcklig för att förhindra partnerpreferensbildning efter TSA-behandling, vilket föreslår att partnerpreferensbildning kräver aktivering av både V1aR och OTR. Thans upptäckt är i linje med och stöder en tidigare observation i manliga prärievolymer att samtidig åtkomst till både OTR och V1aR i LS är avgörande för AVP-inducerad partnerpreferens6. Dessutom understödjer observationen av en specifik ökning av både OTR- och V1aR-nivåer i TSA-behandlade djur ytterligare kravet på en samtidig aktivering av AVP- och oxytocin-neurotransmissions för parbindning.

I kombination med oxytocin och AVP modulerar dopamin-neurotransmissionen i NAcc i partnerpreferensbildningen i honvolymerna9. Även om parning inducerar dopaminfrisättning i NAcc9, variationer i receptornivåer observeras endast efter en längre period - längre än 24h - av samboende med parning, viktigt för upprätthållandet av parbindning10. I linje med dessa observationer uppvisade kvinnliga prärievolymer behandlade med TSA partnerföreträdande utan signifikant variation i dopamin D1R- och D2R-receptorerna. Därför ger denna frånvaro av dopaminreceptorreglering ett annat bevis på TSAs specificitet.

Våra data rapporterar för första gången en epigenetisk komponent i parobindingens neurobiologi, och föreslår att TSA inducerar ett "tillåtet tillstånd" i kvinnliga prärievolymer, vilket förstärker det naturliga molekylära svaret på samlevnaden och främjar bildandet av starkare sociala interaktioner vilket leder till partnerpreferens. Det är därför frestande att förutse att en TSA-underlättad partnerpreferens skulle kunna stärkas ytterligare och leda till fortsatt bindning. Även om de specifika HDAC: erna kvarstår identifieras, skulle det därför vara intressant att ytterligare undersöka effekterna av TSA på andra beteenden som är förknippade med den monogamala livsstrategin i prärievolymer, såsom selektiv aggression och bi-föräldravård. Med tanke på relevansen av prärievolymerna i modellering av de neurobiologiska mekanismerna för parbindning hos människor5, och de lovande HDAC-hämmarna redan i kliniska prövningar24, 41, 42, våra data banar vägen för nya farmakologiska möjligheter att påverka sociala beteenden.

Metoder

Ämnen

Sexuellt naiva kvinnliga prärievolymer (Microtus ochrogaster) från en laboratorieuppfödningskoloni avvänjdes vid 21-ålders alder och inrymdes i samma kön syskonpar i plastburar (12 × 28 × 16 cm) med vatten och mat som tillhandahölls AD libitum. Alla burar bibehölls under en 14: 10 h ljusmonk cykel och temperaturen var approximativt 20 ° C. Alla djur fördelades slumpmässigt i försöksgrupper när de nådde 70-90-åldersdagar. Antalet använda djur baserades på tidigare studier inom fältet av vår grupp och andra, i kombination med en effektanalys. Experimentella förfaranden godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee vid Florida State University.

Läkemedel

Natriumbutyrat (NaB), upplöst i saltlösning och trichostatin A (TSA), upplöst i artificiell cerebrospinalvätskebärare (CSF, BioFluids, Rockville, MD) köptes båda från Sigma-Aldrich (St Louis, MO). NaB injicerades intraperitonealt (ip) i en dos av 600 mg / kg, vilket är känt att inducera histonacetylering i flera hjärnstrukturer hos möss43, 44. På liknande sätt baserades det dosområde som användes för TSA baserat på tidigare arbete som bestämde dess effektivitet vid inducering av lokala histonacyleringshändelser och variationer i genuttryck hos gnagare19, 20. Den selektiva V1aR-receptorantagonisten V1aRA, d(CH2)5[Tyr (Me)] AVP och OTR-antagonisten OTA (B), [d(CH2)5, Tyr (Me)2, Thr4, Tyr-NH29] -OVT), erhölls från Bachem (Torrance, CA). En andra mer selektiv OTR-antagonist, OTA (T), dGly-NH2-d(CH2)5 [Tyr (Me)2, Thr4] OVT45, var vänlig tillhandahållen av Dr. Maurice Manning (University of Toledo, OH). Dessa antagonister och doser som användes har valts utifrån tidigare studier som demonstrerar deras selektivitet för respektive V1aR respektive OTR35, 39, 46-49.

Stereotaxisk kanylering och mikroinjektion

Kvinnorna bedövades med natriumpentobarbital (1mg / 10g kroppsvikt) och 26-mätare av rostfritt stål (Plastics One, Roanoke, VA) implanterades stereotaxalt, riktade mot lateral ventrikel (ensidigt, nässtång vid -2.5 mm, 0.6 mm rostral, 1.0 mm lateral och 2.6 mm ventral till bregma) eller platsspecifikt till NAcc (bilateralt näsan på -2.5 mm, 1.7 mm rostral, ± 1.0 mm bilateralt och 4.5 mm ventral till bregma). Efter 3-dagar med återhämtning mottog individer mikroinjektioner av antingen CSF eller CSF innehållande olika koncentrationer av TSA. När selektiva antagonister för OTR eller V1aR användes injicerades de 30 minuter före TSA. Injektioner gjordes med en 33-gauge nål som förlängde 1 mm under ledningskanylen in i målområdet, i en injektionsvolym av 500 nL i lateral ventrikel (icv.) eller 200 nL per sida in i NAcc. Nålen var ansluten till en Hamilton-syra (Hamilton, Reno, NV) genom polyetylen-20-slang och kolv-depression utfördes långsamt, vilket krävde 1-minut per injektion. Vid slutet av försöket offrades alla ämnen genom snabb avkapning och hjärnorna extraherades för att verifiera kanylplacering av en observatör som var blind för experimentella förhållanden. Ämnen med felplacerad kanyler uteslutes från dataanalys.

Samlevnads- och partnerpreferensprov

Omedelbart efter ip., icv, eller intra-NAcc-injektioner av läkemedel, hunnarna samlevdes med en manlig för 6-timmar utan parning. Frånvaron av parning verifierades genom att undersöka det videobildade beteendet. För undersökningen av de neuroadaptationer som utlöses av samboende med parning, östrogen-primerade honor (2μg per dag, ip., för 3 dagar) samlevde med en man under 6 eller 24 timmar, och närvaron av parning verifierades i efterhand på videoband (från 6 till 11-spel under de första 6-timmarna av sambo).

Partnerpreferensprovet utfördes omedelbart efter 6-timmars samlevnad, som tidigare beskrivits11. Kortfattat bestod testkammaren med tre kammare av en neutral bur kopplad till två parallella identiska burar, var och en rymmer ett stimulusdjur - en okänd manlig "främling" eller en bekant manlig "partner" som används under samboendeperioden. Kvinnliga försökspersoner var fria att röra sig genom apparaten under 3-timmarsprovningen och stimulushankarna var bundna i sina burar, vilket gav ingen direkt kontakt med varandra. Hela sessionen filmades och varaktigheten av ämnets sida vid sida-kontakt med antingen partnern eller främlingen kvantifierades senare av en utbildad experimenter som inte var medveten om de biologiska grupperna. En partnerpreferens definierades som försökspersoner som spenderade betydligt mer tid i kroppskontakt med partnern kontra främlingen, vilket bestämdes av en parad, tvåsidig t-testa. Dessutom var trekammarapparaten utrustad med fotobelys-sensorer, vilket möjliggör bestämning av lokomotorisk aktivitet indikerad av antalet inmatningar av honan i stimuluskamrarna. Detta lokomotoriska poäng gör det möjligt för oss att kontrollera för förmodade sekundära effekter av drogerna på kvinnornas beteende, såsom allmän aktivitet, ångest eller förändrad utforskning av en ny miljö, som vanligt används av vår grupp och andra12.

RNA och proteiner extraktion

Kvinnor offrades genom snabb avkapning, och hjärnorna extraherades omedelbart och frystes på torris. Koronala sektioner (200 μm) skars på en kryostat och frost monterad på mikroskopskivor. Bilaterala vävnadsstansar med en 1 mm-diameter togs från hela NAcc och caudate putamen, sistnämnda är ett kontrollområde och lagrades vid -80 ° C tills de bearbetades. Total RNA och proteiner extraherades med användning av TRI-reagensprotokollet enligt tillverkarens instruktioner (Molecular Research Center, Cincinnati, OH).

Proteinuttrycksanalys av Western-blot

Efter separering på en 10% polyakrylamidgel (15% för histoner) överfördes proteiner till en nitrocellulosemembran och inkuberades med följande primära antikroppar: anti-OTR (sc-8102, 1: 1000), -V1aR (sc-18096, 1: 500), -D1R (sc-33660, 1: 1000), -D2R (sc-9113, 1: 1000, Santa Cruz-bioteknik, Santa Cruz, CA), -aktin (A2066, 1: 1000, Sigma Aldrich. St Louis, MO) eller anti-acetylhiston H3 (Lys14, # 06-911, 1: 1000) och totalt H3 (# 05-928, 1: 1000, Millipore, Temecula, CA). Alla antikroppar valideras för användning hos människor, råttor och möss, med vilka prärievolymer delar höga procentandelar homologi (från 81 till 96%). Efter hybridisering med en HRP-konjugerad sekundär antikropp avslöjs membran med ECL (ECL SuperSignal West Dura-substrat, Pierce Biotechnologies, Rockford, IL) och exponeras på Fuji XAR-film (Fuji Film, Tokyo, Japan). Kvantifiering utfördes med användning av AIS 6.0 Image-mjukvaran (Imaging Research, St. Catharines, Ontario, Kanada) och alla signaler normaliserades inom samma membran till aktin, förutom acetyl-H3-signalen som normaliserades till den totala histon H3-signalen. Normaliserad data uttrycks sedan i procent av CSF-behandlade djur.

Halvkvantitativ realtids polymeras kedjereaktion (RT-PCR)

0.5 μg total RNA behandlades för komplementär DNA-syntes och analyserades sedan som tidigare beskrivet50 med normalisering till nikotinamidadenindinukleotiddehydrogenasgenen (NADH) -genen. Alla reaktioner gjordes i triplikat och deras specificitet verifierad genom smältkurvanalys och separation på en 2% Agarosegel. Primersekvenserna som användes var följande: 5'-TCCAAGGCCAAAATCCGCACGG-3 '(Fwd) och 5'-GGCAGAAGCTTCCTTGGGCGC-3' (Rev) för OTR, 5'-GAGGTGAACAATGGCACTAAAACC-3 '(For) och 5'-CCAGATGTGGTAGCAGATGAAGC-3' (Rev) för AVP1aR, 5'- TTAACAACAATGGGGCTGTG-3 '(För) och 5'-GGCATGAGGGATCAGGTAAA-3' (Rev) för D1R, 5'-GTGAAGGCGCTGTAGAGGAC-3 '(For) och 5'-CGGTGTGTTCATCATCTGCT-3' ) för D2R och 5'-CTATTAATCCCCGCCTGACC-3 '(For) och 5'-GGAGCTCGATTTGTTTCTGC-3' (Rev) för NADH. Den normaliserade data uttrycks som en procentandel av CSF-behandlade djur.

Kromatinimmunutfällning

Histon H3-acetylering (Lys14) i NAcc- och caudat putamenvävnadsstansar analyserades med användning av Magna ChIP-protein G-vävnadssatsen (Millipore, Temecula, CA) enligt tillverkarens instruktioner. Kort efter, efter tvärbindning med 1% formaldehyd, skjuvades kromatin med användning av en Misonix XL-2000 till fragment av 200-600 bp. Immunfällning av acetylerad histon H3 (Lys14) realiserades sedan med 10jg anti-acetyl-H3 (Lys14) -antikropp (Millipore) över natten vid 4 ° C. Efter tvättning renades eluering från pärlor och reversering av tvärbindningsimmunprecipiterat DNA och analyserades i triplicater med RT-PCR på en iCycler-plattform (se ovan) med en intern standardkurva gjord av poolade INPUT-prover. Primerna konstruerades för att amplifiera en 236 bp-lång region belägen 128 bp uppströms den första exonen som kodar för prairie vole OTR (oxtr, Genbank anslutning #AF079980) eller 192 bp-lång region belägen 141 bp uppströms den första exon som kodar för prairie vole V1aR (avpr1a, Genbank anslutning #AF069304). Sekvenserna var följande: 5'-CTCCGGAGCCGGGGCTAAGT-3 '(Fwd) och 5'-ACCGCTTCCCCGAGAGTAGGG-3' (Rev) för oxtr, och 5'-GGTGGACCAGCCAGACCCCA-3 '(Fwd) och 5'-TGCAGAGCCAGGCGCTTTCC-3' (Rev) för avpr1a. Varje prov normaliserades med respektive INPUT-värde och data uttrycks sedan som en procentandel av CSF-behandlade djur.

Statistiska analyser och databehandling

För analyser av partnerpreferens uteslöts djur som visade parningsbeteenden under samlevnadsperioden eller med missplacerade kanyler. För alla andra molekylära analyser uteslutades högst en datapunkt per biologisk grupp när den identifierades som outlier. De flesta experimenten replikerades, förutom när resultaten var mycket tydliga. Den tid som använts vid sida vid sida-kontakt med antingen stimulusdjur under partnerpreferensprovet analyserades med en två-tailed parad t-testa. Lokationspoängen analyserades med hjälp av en två-tailed t-test (för två grupper) eller en enkelriktad ANOVA (för mer än två grupper) och, när så är lämpligt, Fischer's PLSD post-hoc tester utfördes med en betydelse tröskel på P <0.05. Efter verifiering av normalitet analyserades alla andra data med en tvåsidig t-test förutsatt att samma eller ojämna avvikelser testas i förväg. Alla statistiska analyser utfördes med hjälp av StatView-programmet (SAS Institute). När data standardiseras till sina respektive kontroller (% av CSF-, salt- eller parringsgrupper), utfördes de statistiska analyserna på rådata.

Extramaterial

Erkännanden

Detta arbete stöddes av National Institute of Mental Health (NIMH) beviljar MHR21-083128 till MK och ZW, och MHR01-058616 till ZW Vi tackar också Dr. Maurice Manning för den generösa gåvan till OTR-antagonisten OTA (T).

fotnoter

 

Intressekonflikt: Författarna förklarar ingen intressekonflikt.

Författarbidrag

HW, FD och YL utförde experimenten. HW och FD analyserade data. HW, FD, ZW och MK utformade studien. FD, ZW och MK skrev papperet. Alla författare diskuterade resultaten och kommenterade manuskriptet.

Referensprojekt

1. Bora E, Yucel M, Allen NB. Neurobiologi av mänskligt affiliativt beteende: konsekvenser för psykiatriska störningar. Nuvarande yttrande inom psykiatrin. 2009; 22: 320-325. [PubMed]
2. Thomas JA, Birney EC. Föräldravård och parningssystem av prärievole, (Microtus ochrogaster) Beteendeekologi och sociobiologi. 1979; 5: 171-186.
3. Getz LL, Hofmann JE. Social organisation i fritt levande prärievolymer, (Microtus ochrogaster) Beteendeekologi och sociobiologi. 1986; 18: 275-282.
4. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Utveckling av partnerpreferenser hos kvinnliga prärievolymer (Microtus ochrogaster): Social och sexuell erfarenhet. Hormoner och beteende. 1992; 26: 339-349. [PubMed]
5. Young KA, Gobrogge KL, Liu Y, Wang Z. Neurobiologi av parbindning: Insikter från en socialt monogamisk gnagare. Gränser i Neuroendocrinology. 2011; 32: 53-69. [PMC gratis artikel] [PubMed]
6. Liu Y, Curtis JT, Wang Z. Vasopressin i lateral septum reglerar parbindningsbildning i manliga prärievoles (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience. 2001; 115: 910-919. [PubMed]
7. Lim MM, Young LJ. Vasopressinberoende neurala kretsar som ligger bakom parbindningsbildning i den monogamiska prairie vole. Neuroscience. 2004; 125: 35-45. [PubMed]
8. Liu Y, Wang ZX. Nucleus accumbens oxytocin och dopamin interagerar för att reglera parbindningsbildning i kvinnliga prairievolymer. Neuroscience. 2003; 121: 537-544. [PubMed]
9. Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. Dopamin D2-receptorer i kärnan accumbens är viktiga för social bindning i kvinnliga prärievoles (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience. 2000; 114: 173-183. [PubMed]
10. Aragona BJ, et al. Nukleusaccumbensdopamin medierar differentiellt bildandet och upprätthållandet av monogamiska parbindningar. Nat Neurosci. 2006; 9: 133-139. [PubMed]
11. Liu Y, et al. Nukleär accumbensdopamin medierar amfetamininducerad försämring av social bindning i en monogamisk gnagare. Förlopp av National Academy of Sciences. 2010; 107: 1217-1222. [PMC gratis artikel] [PubMed]
12. Keebaugh AC, Young LJ. Ökande oxytocinreceptoruttryck i kärnans accumbens av prepbertal kvinnliga prärievolymer ökar alloparental responsivitet och partnerpreferensbildning som vuxna. Hormoner och beteende. 2011; 60: 498-504. [PMC gratis artikel] [PubMed]
13. Ross HE, et al. Variation i Oxytocin Receptor Density i Nucleus Accumbens har olika effekter på Affiliative Behavior i Monogamous och Polygamous Voles. Journal of Neuroscience. 2009; 29: 1312-1318. [PMC gratis artikel] [PubMed]
14. Pitkow LJ, et al. Underlättande av anslutning och par-bindningsformation genom vasopressinreceptorgenöverföring till ventralförbränningen av en monogamisk vole. Journal of Neuroscience. 2001; 21: 7392-7396. [PubMed]
15. Veenema AH. För att förstå hur sociala sociala erfarenheter i tidigt liv förändrar oxytocin- och vasopressinreglerade sociala beteenden. Hormoner och beteende. 2012; 61: 304-312. [PubMed]
16. Francis DD, Young LJ, Meaney MJ, Insel TR. Naturligt förekommande skillnader i materiell vård är associerade med uttrycket av oxytocin och vasopressin (V1a) receptorer: könsskillnader. Journal of Neuroendocrinology. 2002; 14: 349-353. [PubMed]
17. Champagne FA, et al. Maternell vård associerad med metylering av östrogenreceptor-a1b-promotorn och östrogenreceptor-a-uttryck i det mediala preoptiska området av kvinnliga avkommor. Endokrinologi. 2006; 147: 2909-2915. [PubMed]
18. Murgatroyd C, et al. Dynamiska DNA-metyleringsprogram har vidhållna negativa effekter av tidig stress. Nat Neurosci. 2009; 12: 1559-1566. [PubMed]
19. Weaver ICG, et al. Epigenetisk programmering av moderns beteende. Nat Neurosci. 2004; 7: 847-854. [PubMed]
20. Weaver ICG, Meaney MJ, Szyf M. Maternalvårdseffekter på hippocampaltranscriptomen och ångestförmedlade beteenden hos avkomman som är reversibla i vuxen ålder. Förhandlingar vid National Academy of Sciences i USA. 2006; 103: 3480-3485. [PMC gratis artikel] [PubMed]
21. Bonthuis PJ, Patteson JK, Rissman EF. Förvärv av sexuell mottaglighet: Roller av kromatinacetylering, östrogenreceptor-a och äggstockshormoner. Endokrinologi. 2011; 152: 3172-3181. [PMC gratis artikel] [PubMed]
22. Zhong S, Fält CR, Su N, Pan YX, Robertson KD. Farmakologisk inhibering av epigenetiska modifieringar, i kombination med genuttrycksprofilering, avslöjar nya mål av avvikande DNA-metylering och histon-deacetylering i lungcancer. Oncogene. 2007; 26: 2621-2634. [PubMed]
23. Yoshida M, Horinouchi S, Beppu T. Trichostatin A och trapoxin: Nya kemiska prober för rollen av histonacetylering i kromatinstruktur och funktion. BioEssays. 1995; 17: 423-430. [PubMed]
24. Monneret C. Histon-deacetylasinhibitorer. European Journal of Medicinal Chemistry. 2005; 40: 1-13. [PubMed]
25. Ross HE, et al. Karakterisering av oxytocinsystemet som reglerar associerat beteende hos kvinnliga prärievolymer. Neuroscience. 2009; 162: 892-903. [PMC gratis artikel] [PubMed]
26. Young LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. Artskillnader i centraloxytocinreceptorgenuttryck: jämförande analys av promotorsekvenser. Journal of Neuroendocrinology. 1996; 8: 777-783. [PubMed]
27. Witt O, Deubzer HE, Milde T och Oehme I. HDAC-familj: Vilka är cancerrelevanta mål? Cancer bokstäver. 2009; 277: 8–21. [PubMed]
28. Vecsey CG, et al. Histon-deacetylasinhibitorer förstärker minne och synaptisk plasticitet via CREB: CBP-beroende av transkriptionell aktivering. Journal of Neuroscience. 2007; 27: 6128-6140. [PMC gratis artikel] [PubMed]
29. Monsey MS, Ota KT, Akingbade IF, Hong ES, Schafe GE. Epigenetiska förändringar är kritiska för rädsla för minneskonsolidering och synaptisk plasticitet i den laterala Amygdala. PLoS ONE. 2011; 6: e19958. [PMC gratis artikel] [PubMed]
30. Van Lint C, Emiliani S, Verdin E. Uttrycket av en liten fraktion av cellulära gener ändras som svar på histon-hyperacetylering. Genexpression. 1996; 5: 245-253. [PubMed]
31. Mariadason JM, Corner GA, Augenlicht LH. Genetisk omprogrammering i vägar av kolonisk cellmognad inducerad av kortkedjiga fettsyror: Jämförelse med Trichostatin A, Sulindac och Curcumin och Implikationer för kemoprevention av kolonkreft. Cancerforskning. 2000; 60: 4561-4572. [PubMed]
32. Halsall J, Gupta V, O'Neill LP, Turner BM, Nightingale KP. Gener skyddas ofta från Global Histone Hyperacetylation inducerad av HDAC-hämmare. PLoS ONE. 2012; 7: e33453. [PMC gratis artikel] [PubMed]
33. Ito K, Adcock I. Histonacetylering och histon-deacetylering. Molekylärbioteknik. 2002; 20: 99-106. [PubMed]
34. Molfese DL. Förbättra neurovetenskap genom epigenetik: Molekylära mekanismer för lärande och minne. Utvecklingsneuropsykologi. 2011; 36: 810-827. [PMC gratis artikel] [PubMed]
35. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Mobila mekanismer för socialt stöd. Hormoner och beteende. 2001; 40: 133-138. [PubMed]
36. Hawk JD, Florian C, Abel T. Intrahippocampus hämning efter klass I-histondeacetylaser förbättrar det långsiktiga minnet för objektläge. Lärande och minne. 2011; 18: 367–370. [PMC gratis artikel] [PubMed]
37. Stefanko DP, Barrett RM, Ly AR, Reolon GK, Wood MA. Modulation av långsiktigt minne för objektigenkänning via HDAC-hämning. Förlopp av National Academy of Sciences. 2009; 106: 9447-9452. [PMC gratis artikel] [PubMed]
38. Yang XJ, Seto E. Lysine Acetylation: Codified Crosstalk med andra posttranslationella modifieringar. Molecular Cell. 2008; 31: 449-461. [PMC gratis artikel] [PubMed]
39. Cho MM, DeVries AC, Williams JR, Carter CS. Effekterna av oxytocin och vasopressin på partnerpreferenser hos manliga och kvinnliga prärievolymer (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience. 1999; 113: 1071-1079. [PubMed]
40. Insel TR, Hulihan TJ. En könsspecifik mekanism för parbindning: Oxytocin och partnerpreferensbildning i monogamiska volymer. Beteende neurovetenskap. 1995; 109: 782-789. [PubMed]
41. Stimson L, La Thangue NB. Biomarkörer för att förutsäga kliniska svar på HDAC-hämmare. Cancer Letters. 2009; 280: 177-183. [PubMed]
42. Iannitti T, Palmieri B. Kliniska och experimentella tillämpningar av natriumfenylbutyrat. Läkemedel inom FoU. 2011; 11: 227–249. [PMC gratis artikel] [PubMed]
43. Kumar A, et al. Chromatin Remodeling är en nyckelmekanism som ligger bakom kokaininducerad plasticitet i Striatum. Nervcell. 2005; 48: 303-314. [PubMed]
44. Schroeder FA, Lin CL, Crusio WE, Akbarian S. Antidepressiva-liknande effekter av histon-deacetylasinhibitoren, natriumbutyrat, i musen. Biologisk psykiatri. 2007; 62: 55-64. [PubMed]
45. Manning M et al. Peptid- och icke-peptidagonister och antagonister för vasopressin och oxytocin V1a, V1b, V2 och OT-receptorer: forskningsverktyg och potentiella terapeutiska medel. I: Inga DN, Rainer L, redaktörer. Framsteg i hjärnforskning. Elsevier; 2008. pp. 473-512. [PubMed]
46. Witt DM, Insel TR. En selektiv oxytocinantagonist dämpar progesteronfacilitering av kvinnligt sexuellt beteende. Endokrinologi. 1991; 128: 3269-3276. [PubMed]
47. Winslow JT, Hastings N, Carter CS, Harbaugh CR, Insel TR. En roll för central vasopressin i parbindning i monogamiska prärievolymer. Natur. 1993; 365: 545-548. [PubMed]
48. Insel T. Oxytocin - en neuropeptid för tillhörighet: bevis från beteendestudier, autoradiografiska och jämförande studier. Psykoneuroendokrinologi. 1992; 17: 3–35. [PubMed]
49. Insel T, Wang Z, Ferris C. Mönster av hjärnt vasopressinreceptorfördelning associerad med social organisation i mikrotina gnagare. Journal of Neuroscience. 1994; 14: 5381-5392. [PubMed]
50. Hollis F, Duclot F, Gunjan A, Kabbaj M. Individuella skillnader i effekten av social nederlag på anhedonia och histonacetylering i råttahippocampus. Hormoner och beteende. 2011; 59: 331-337. [PMC gratis artikel] [PubMed]