ஒரு ஒற்றை எலெக்ட்ரிக் ஸ்ட்ரடட்மில் இருந்து மெதம்பெடமைன்-செயல்பாட்டுக்குட்பட்ட ஃபோஸ்-எக்ஸ்பிசிங் நியூரான்களில் மூலக்கூறு மாற்றங்களை கண்டறிதல் ஃபுளோரேசன்ஸ்-செயலாக்கப்பட்ட செல் வரிசையாக்கம் (FACS) (FACS) (2013)

ஜே நரம்பு. 29 ஜனவரி; 2014 (128): 1-173. doi: 85 / jnc.10.1111. ஈபூப் ஆகஸ்ட் 29 ஆக.

லியு QR1, ரூபியோ FJ, போசர்ட் ஜே.எம், மார்ச்சண்ட் NJ, ரசிகர் எஸ், ஹூ எக்ஸ், ஷாஹாம் ஒய், BT ஐ நம்புகிறேன்.

சுருக்கம்

மெத்தம்பீடமைன் மற்றும் பிற மருந்துகள் மூளையில் உள்ள அனைத்து நியூரான்களின் சிறிய விகிதத்தை செயல்படுத்துகின்றன. முன்பு நாம் ஒரு ஃப்ளூரெஸ்சென்ஸ்-செயலாக்கப்பட்ட செல் வரிசையாக்கம் (FACS) உருவாக்கியது - மூலக்கூறு மாற்றங்களை குணாதிசயப்படுத்துவதற்கு அடிப்படையிலான வழிமுறையானது, நரம்பியல் செயல்திறன் FOS ஐ வெளிப்படுத்தும் செயல்படுத்தும் நியூரான்களில் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டதாகும். எனினும், இந்த முறை பல எலிகள் இருந்து பூல் மாதிரிகள் தேவைப்படுகிறது. ஒரு மல்டிலெக்ஸ் முன்கூட்டிய உந்துதல் மூலோபாயத்தை பயன்படுத்தி ஒரே எலி இருந்து FOS- வெளிப்படுத்தும் dorsal ஸ்ட்ரீட்டல் நரம்பணுக்கள் உள்ள மூலக்கூறு மாற்றங்களை குணாதிசயமாக்குவதற்கு ஒரு FACS- அடிப்படையிலான முறைமையை நாம் இப்போது விவரிக்கிறோம்.

ஃபோஸ் மற்றும் நியூன் (ஒரு நரம்பியல் மார்க்கர்) இம்முனோஹிஸ்தோகெமிஸ்ட்ரி 5-6% பல்வகை நீராவி நரம்பணுக்கள் கடுமையான மெத்தம்பேட்டமைன் இன்ஜின்கள் (90 mg / kg, ip) பின்னர் நியூட்ரான்களின் 5% குறைவான உப்பு உட்செலுத்துதல்கள் மூலம் செயலாக்கப்பட்டன என்று சுட்டிக்காட்டுகின்றன.

ஃபோஸ்-பாஸிட்டிவ் மற்றும் ஃபோஸ்-எதிர்மறை நரம்புக்களாக நியூஸ்-பெயரிடப்பட்ட நியூரான்களை பிரிக்க FACS ஐப் பயன்படுத்தினோம், RT-QPCR ஐப் பயன்படுத்தி எம்.ஆர்.என்.என்.என்-ஐ பயன்படுத்தி 5 FOS- நேர்மறை நரம்பணுக்களைப் பயன்படுத்தி எம்.ஆர்.என். மேத்தாம்பெடமைன் உடனடியாக ஆரம்பகால மரபணுக்கள், ஹோமர்- 3, சி-ஃபோஸ், ஃபோஸ் பி மற்றும் அதன் ஐசோஃபார்ம்களை (XXX-20-ΔfosB மற்றும் ஒரு நாவல் ஐசோஃபார்ம் ΔfosB-2) ஃபோஸ் நேர்மறை ஆனால் போஸ் எதிர்மறை நியூரான்கள் அல்ல. உடனடியாக ஆரம்பகால மரபணு mRNA தூண்டுதல் ஒற்றைத் துடிப்பு ஸ்ட்ரட்டட் ஹோமியோஜெனெட்கள் மூலம் வரிசைப்படுத்தப்படாத மாதிரிகள் மதிப்பீடு செய்யும்போது குறைவாக அல்லது இல்லாமலாகும். நமது திருத்தப்பட்ட முறை மருந்துகள் அல்லது போதை மருந்து தொடர்புடைய சிக்கல்கள் பழக்கமான போதை மாதிரிகள் மூலம் இயக்கப்படுகிறது நரம்புகள் தனிப்பட்ட மூலக்கூறு மாற்றங்களை படிக்க சாத்தியம் செய்கிறது.

மெத்தம்பீடமைன் மற்றும் பிற மருந்துகள் மூளையில் உள்ள அனைத்து நியூரான்களின் சிறிய விகிதத்தை செயல்படுத்துகின்றன. நரம்பு செயல்திறன் Fos ஐ வெளிப்படுத்தும் செயற்படுத்தப்பட்ட நியூரான்களில் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட மூலக்கூறு மாற்றங்களை குணாதிசயப்படுத்துவதற்கு மேம்படுத்தப்பட்ட முறைமையை நாங்கள் இங்கே குறிப்பிடுகிறோம். நாங்கள் FACS ஐப் பயன்படுத்தி இலக்கான பி.ஆர்.ஆர் முன்-பெருக்கம் கொண்டு கடுமையான மீத்தம்பேட்டமைன்-தூண்டப்பட்ட மரபணு வெளிப்பாட்டை ஒரு ஒற்றை எலி துருவ ஸ்ட்ரெடமத்தில் இருந்து XMS FOS- வெளிப்படுத்தும் நியூரான்களைக் குறைவாக மதிப்பிடுவதற்குப் பயன்படுத்தினோம். மேத்தாம்பெடமைன் ஃபோஸ்-பாஸிடின்போது உடனடியாக ஆரம்பகால மரபணுக்களின் (IEG கள்) 5-3 மடங்கு அதிகரிக்கிறது, ஆனால் ஃபோஸ் எதிர்மறை நியூரான்கள் அல்ல. இலக்கு கொண்ட பி.ஆர்.ஆர் முன்-பெருக்கம் போதை மருந்துகள் அல்லது சிக்கலான போதை பழக்கவழக்கங்களில் போதை மருந்து சார்ந்த சாயல்கள் மூலம் இயக்கப்படும் நியூரான்களில் தனிப்பட்ட மூலக்கூறு மாற்றங்களை ஆய்வு செய்ய இயலும்.

வெளியிடப்பட்டது 2013. இந்த கட்டுரை ஒரு அமெரிக்க அரசு வேலை மற்றும் அமெரிக்காவில் பொது டொமைன் உள்ளது.