neuroplasticity opioid ที่เกิดจากภายนอกของเซลล์ประสาท dopaminergic ในพื้นที่หน้าท้อง tegmental มีอิทธิพลต่อธรรมชาติและรางวัลยา (2014)

ความคิดเห็น: พื้นที่ การศึกษา DeltaFosB เรามักจะกล่าวถึงจุดเน้นทั้งหมด นิวเคลียส accumbens (ศูนย์ให้รางวัล) และพบว่าเซ็กส์มีส่วนช่วยในการทำงานของสมองเช่นเดียวกับยาปรุงยาและโคเคน จากการศึกษาสถานที่สำคัญโดยนักวิจัยคนเดียวกันนี้ (รางวัลจากธรรมชาติและยาดำเนินการเกี่ยวกับกลไกพลาสติกประสาททั่วไปที่มี withFosB เป็นสื่อกลางสำคัญ (2013)):

ดังนั้นผลตอบแทนจากธรรมชาติและยาไม่เพียง แต่มาบรรจบกันในวิถีประสาทเดียวกันเท่านั้น แต่ยังรวมเข้ากับตัวกลางของโมเลกุลเดียวกันและมีแนวโน้มที่จะอยู่ในเซลล์ประสาทเดียวกันใน Nucleus Accumbens เพื่อมีอิทธิพลต่อความรู้สึกจูงใจและความ "ต้องการ" ของรางวัลทั้งสองประเภท

Take away: ปรุงยาโคเคนและเพศล้วนทำสิ่งพื้นฐานเดียวกันกับเซลล์ประสาทเดียวกันในศูนย์รางวัล (นิวเคลียส accumbens) ไม่ว่าพวกเขาจะทำอะไรที่อื่นในสมอง สิ่งนี้แยกออกจากจุดพูดคุยปกติที่ผลตอบแทนตามธรรมชาติและยาเสพติดแตกต่างกันในกลไกและผลกระทบ

การศึกษาใหม่นี้ตรวจสอบว่าเพศสัมพันธ์กับ VTA อย่างไร VTA เป็นจุดเริ่มต้นของเซลล์ประสาทที่สร้างโดปามีนและแตกแขนงไปยังนิวเคลียสแอคคัมเบนคอร์เทกซ์หน้าผากและอะมิกดาลา โดยทั่วไป VTA เป็นแหล่งที่มา (บ่อ) ของโดพามีนส่วนใหญ่ของเรา ดูภาพวงจรรางวัล 2 ภาพนี้: Pic1, Pic2

นักวิจัยพบว่าการมีเพศสัมพันธ์ (จุดสุดยอด) ทำให้ร่างกายเซลล์ใน VTA หดตัวชั่วคราว (ในเพศชาย) เซลล์ของร่างกายและ dendrites ประกอบด้วยเรื่องสีเทาของสมอง นี่คือสิ่งที่เฮโรอีนติดอยู่ที่ VTA (ไม่ใช่การใช้เฮโรอีนเพียงครั้งเดียว แต่เป็นการใช้เฮโรอีนแบบเรื้อรัง) โปรดทราบว่าการหดตัวของเซลล์ VTA เดียวกันนี้ เกิดขึ้นในผู้เสพเฮโรอีน.

การหดตัวของเซลล์ที่มีเพศสัมพันธ์เป็นเวลาอย่างน้อย 7 วัน การเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากเพศนั้นกลับสู่ปกติในวันที่ 30 แต่นักวิจัยประเมินเฉพาะวันที่ 1, 7 และ 30

การหดตัวของเซลล์ในการเสพติดเฮโรอีนส่งผลให้โดพามีนในนิวเคลียสแอคคัมเบนลดลง - หรือที่เราเรียกว่า desensitization. นักวิจัยให้มอร์ฟีนกับหนูเพื่อประเมินการตอบสนอง (หลังมีเพศสัมพันธ์) แต่ไม่มีอะไรเกิดขึ้น โดยปกติหนูชอบมอร์ฟีนมาก แต่ที่นี่พวกมันถูกทำให้รู้สึกไวขึ้นชั่วคราว ในระยะสั้นวงจรการให้รางวัลของหนูหลังคลอดไม่ตอบสนองต่อเฮโรอีนในระดับต่ำ นักวิจัยคาดการณ์ว่าจำเป็นต้องใช้ปริมาณที่สูงขึ้นเพื่อกระตุ้นให้เกิดปฏิกิริยาของหนู "ปกติ"

สรุป - เพศ (ชั่วคราว) ทำสิ่งเดียวกันใน VTA เช่นเดียวกับการเสพติดเฮโรอีน: การหดตัวของโดพามีนที่สร้างร่างกายเซลล์ประสาท สิ่งนี้นำไปสู่การลดโดปามีนในศูนย์ให้รางวัลและการตอบสนองต่อยาเสพติดน้อยลงและสมองของหนูจะฟื้นตัวอย่างน้อย 7 วัน


 

J Neurosci 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014

เหยือกน้ำ KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, ฟูลเลอร์เจ2, แวนเอส2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, เลห์แมนมินนิโซตา4, ทำให้เย็นลง LM5.

นามธรรม

ผลตอบแทนตามธรรมชาติและยาเสพติดจากการละเมิดมาบรรจบกันบนทางเดิน mesolimbic และเปิดใช้งานกลไกสามัญของปั้นพลาสติกประสาทในนิวเคลียส accumbens การได้รับสาร opiates เรื้อรังทำให้พลาสติกในเซลล์โดปามีนรวมถึงบริเวณหน้าท้อง (VTA) ซึ่งควบคุมความทนทานต่อมอร์ฟีน

ที่นี่เราทดสอบสมมุติฐานว่าการปล่อย opioids ที่เกิดจากการผสมพันธุ์ใน VTA ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของเซลล์โดปามีน VTA ในรูปร่างของหนูเพศผู้

ประการแรกประสบการณ์ทางเพศลดลง VTA dopamine soma ขนาด 1 และ 7 วัน แต่ไม่ใช่ 30 วันหลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย. ผลกระทบนี้ถูกบล็อกด้วย naloxone ก่อนการผสมพันธุ์แต่ละครั้ง ดังนั้น VTA ของโดปามีนเซลล์พลาสติกจึงขึ้นอยู่กับการกระทำของ opioids ภายนอก

ในทางกลับกันความเป็นพลาสติกของ VTA มีความสัมพันธ์กับการให้รางวัลยาเสพติดที่เปลี่ยนแปลงเนื่องจากเพศชายที่มีประสบการณ์ทางเพศไม่ได้สร้างความพึงพอใจให้กับมอร์ฟีน 0.5 mg / kg

ถัดไปจะพิจารณาว่าการกระทำ opioid ภายนอกเป็นสื่อกลางในการให้รางวัลทางเพศและความทรงจำในหนูตัวผู้ที่รักษาด้วย naloxone ในช่วงการผสมพันธุ์ไม่ว่าจะเป็นระบบหรือภายใน VTA Naloxone ไม่ได้ป้องกันพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ในช่วงเริ่มแรกของการผสมพันธุ์ซ้ำ อย่างไรก็ตามการรักษา naloxone ลดการแสดงออกในระยะยาวของการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ของพฤติกรรมทางเพศและการกระตุ้นประสาทในพื้นที่ mesolimbic ที่เกิดจากตัวชี้นำที่เกี่ยวข้องกับการผสมพันธุ์.

ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า opioids จากภายนอกในระหว่างการผสมพันธุ์ทำให้เกิดความยืดหยุ่นของเซลล์ประสาทในเซลล์ประสาทโดพามีน VTA ที่ปรากฏว่ามีความสำคัญต่อการให้รางวัลมอร์ฟีน

 

บทนำ

พฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาตินั้นถูกสื่อโดยระบบ mesocorticolimbic (Meisel และ Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader และคณะ, 2010a; Pitchers และคณะ, 2010a; Young และคณะ, 2011; Blum และคณะ, 2012) การใช้ยาในทางที่ผิดทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางประสาทในระบบนี้ซึ่งในทางกลับกันจะนำไปสู่การพัฒนาและการแสดงออกของสารเสพติด (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012) ก่อนหน้านี้เราได้ตัดสินว่าประสบการณ์ที่มีพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติคือประสบการณ์ทางเพศในหนูตัวผู้ยังทำให้เกิดความผิดปกติของระบบประสาทในนิวเคลียส accumbens (NAc) รวมถึงกระดูกสันหลัง dendritic ที่เพิ่มขึ้น (Pitchers และคณะ, 2010a) และ deltaFosB (Pitchers และคณะ, 2013) ในทางกลับกันปั้นพลาสติกที่มีเพศสัมพันธ์นี้มีความสำคัญต่อผลกระทบของประสบการณ์ทางเพศต่อการผสมพันธุ์ที่ตามมาซึ่งแสดงให้เห็นว่าเป็นการอำนวยความสะดวกในการเริ่มต้นและประสิทธิภาพของพฤติกรรมทางเพศ (Pitchers และคณะ, 2010b, 2012, 2013) นอกจากนี้ประสบการณ์ทางเพศยังเปลี่ยนแปลงการตอบสนองต่อยาจิตเวชรวมถึงการทำให้ไวต่อกิจกรรมเคลื่อนไหวและการเพิ่มรางวัล (Frohmader และคณะ, 2010a; Pitchers และคณะ, 2010a, 2013).

NAc เป็นหนึ่งในเป้าหมายปลายน้ำของเซลล์ประสาทโดปามีนในพื้นที่หน้าท้อง (VTA) เซลล์โดปามีน VTA ถูกกระตุ้นในระหว่างการผสมพันธุ์และหลังจากได้รับการชี้นำที่มีเงื่อนไขเพื่อทำนายรางวัลทางเพศ (Balfour et al., 2004; Frohmader และคณะ, 2010a) ผ่านเปปไทด์ opioid ภายนอก (EOP) - จับที่ตัวรับμ-opioid (MORs; Matthews และ German, 1984; จอห์นสันและนอร์ ธ 1992; Klitenick และคณะ, 1992; Ikemoto และคณะ, 1997; Balfour et al., 2004) ดังนั้นการเปิดรับการชี้นำที่มีเงื่อนไขในการทำนายพฤติกรรมทางเพศทำให้เกิดการเปิดใช้งานการกระตุ้นเซลล์โดปามีน EOP และ VTA ซึ่งช่วยกระตุ้นแรงกระตุ้นทางเพศ (Mitchell and Stewart, 1990; Van Furth และคณะ, 1995; Van Furth และ Van Ree, 1996) และโดปามีนปล่อยใน NAc (Fiorino และคณะ, 1997).

การได้รับสาร opiates จากภายนอกซ้ำ ๆ ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาใน VTA (Mazei-Robison และคณะ, 2011; Mazei-Robison และ Nestler, 2012) ลดขนาด soma ของเซลล์ประสาทโดพามีน VTA (Sklair-Tavron และคณะ, 1996; Spiga และคณะ, 2003; Chu et al., 2007; รุสโซและคณะ, 2007; Mazei-Robison และคณะ, 2011) ลดระดับโปรตีน neurofilament (Beitner-Johnson และคณะ, 1992) เพิ่มความตื่นเต้นง่ายของเซลล์โดปามีนและลดการขนส่ง axoplasmic และส่งออกโดปามีนไปยัง NAc (Beitner-Johnson และคณะ, 1992; Mazei-Robison และคณะ, 2011) การเปลี่ยนแปลงโดปามีนของเซลล์ประสาท VTA เหล่านี้ทำให้มอร์ฟีนมีความทนทานต่อการให้รางวัลและชั่วคราวเมื่อพวกเขาสลายตัวภายในหนึ่งเดือนหลังเลิกยา (รุสโซและคณะ, 2007) ในปัจจุบันยังไม่ชัดเจนว่าพลาสติกในเซลล์ประสาทโดปามีน VTA นั้นมีลักษณะพิเศษเฉพาะกับการกระทำของผู้หลับในหรือหากผลิตโดยการปลดปล่อย EOP ในระหว่างพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติ

ที่นี่เราทดสอบสมมติฐานว่าประสบการณ์การให้รางวัลตามธรรมชาติทำให้เกิดระบบประสาทคล้ายกับที่เกิดจากผู้หลับในและผู้ที่หลับในมาบรรจบกันบนกลไกพลาสติกที่มีความสำคัญต่อพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติและรางวัลความจำ เราทดสอบว่าประสบการณ์ทางเพศในหนูเพศชายลดขนาด Soma ของเซลล์โดปามีน VTA ผ่านกระบวนการขึ้นอยู่กับการกระทำของ EOP ใน VTA หรือไม่ นอกจากนี้เราตรวจสอบว่าการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้น EOP ในเซลล์ประสาทโดพามีน VTA นั้นเกี่ยวข้องกับการเสริมแรงพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติหรือไม่และการอ้างถึงสิ่งกระตุ้นที่เป็นแรงจูงใจในการชี้นำที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลตามธรรมชาติ

วัสดุและวิธีการ

สัตว์

หนู Sprague-Dawley ผู้ใหญ่เพศชาย (200 – 225 g) ได้รับจาก Charles River และอยู่คู่ในห้องที่มีแสงส่องสว่างบนรอบแสง 12 h / มืดในทุกการทดลอง (ไฟที่ 10: 00 AM ยกเว้นการทดสอบความทนต่อมอร์ฟีน ดับลงที่ 5: 00 PM) อาหารและน้ำก็ใช้ได้ โฆษณาฟรี ยกเว้นในระหว่างการทดสอบพฤติกรรม ตัวกระตุ้นอวัยวะเพศหญิงจะถูกตัดรังไข่และฝังใต้ผิวหนังด้วย 5% 17-β-estradiol benzoate แคปซูลพลาสติกซิลิโคน (เส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 1.98 มม., ความยาว 0.5 ซม., Dow-Corning) การฉีดฮอร์โมนโปรเจสเตอโรน (ใต้ผิวหนัง, 500 μgในน้ำมันงา 0.1 ml) ได้รับการจัดการ 3 – 6 ชั่วโมงก่อนการทดสอบเพื่อชักนำให้เกิดการมีเพศสัมพันธ์ ขั้นตอนทั้งหมดได้รับการอนุมัติจาก University of Western Ontario และคณะกรรมการการดูแลสัตว์ของมหาวิทยาลัยมิชิแกนและสอดคล้องกับสภาแคนาดาด้านการดูแลสัตว์และสถาบันสุขภาพแห่งชาติแนวทางด้านสุขภาพที่เกี่ยวข้องกับสัตว์มีกระดูกสันหลังในการวิจัย

หลักสูตรเวลาของการเปลี่ยนแปลงขนาดโดปามีน soma VTA

เซสชันผสมพันธุ์รายวัน

เพื่อศึกษาระยะเวลาของการเปลี่ยนแปลงของขนาดเซลล์ประสาทโดปามีนใน VTA สัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศและไร้เดียงสาถูกฆ่าตายที่ 1, 7 หรือ 31 d (n = 5 – 8 ต่อกลุ่ม) หลังจากวันสุดท้ายของการผสมพันธุ์ (มีประสบการณ์) หรือการจัดการ (ไร้เดียงสา) กลุ่มที่มีประสบการณ์เกี่ยวกับเรื่องเพศถูกจับคู่กับพฤติกรรมทางเพศในช่วงการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายรวมถึงจำนวนการพุ่งออกมาทั้งหมดห้าครั้ง (ค่าเฉลี่ยของ 5 สำหรับแต่ละกลุ่ม) และไม่แตกต่างกันในพารามิเตอร์ของพฤติกรรมทางเพศ

การผสมพันธุ์

เพศชายที่ไร้เดียงสาถูกกำหนดให้เป็นหนึ่งในสองเงื่อนไขการทดลอง: เพศที่ไร้เดียงสาหรือมีเพศสัมพันธ์ สัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศได้รับอนุญาตให้ผสมพันธุ์ห้าครั้งในวันติดต่อกันกับผู้หญิงที่เปิดกว้างในกรงทดสอบรูปสี่เหลี่ยมผืนผ้า (60 × 45 × 50 ซม.) จนกระทั่งมีการหลั่งออกมาหรือสูงถึง 1 h (แล้วแต่อย่างใดมาก่อน) ทำความสะอาดกรงอย่างละเอียดด้วยสารละลายเอทานอล 70% และมีการเพิ่มผ้าปูที่นอนสดระหว่างการผสมพันธุ์ พฤติกรรมทางเพศเกิดขึ้นในช่วงมืด (2 – 6 ชั่วโมงหลังจากเริ่มมีอาการมืด) มีเพียงสัตว์ที่พุ่งออกมาในช่วงการผสมพันธุ์อย่างน้อยสี่ในห้าครั้งเท่านั้นที่ถือว่าเป็นประสบการณ์ทางเพศและรวมอยู่ในการทดลอง พบการผสมพันธุ์ทุกครั้งและบันทึกพฤติกรรมทางเพศ จำนวนของการเมานต์ (M) intromissions (IMs), เวลาในการตอบสนองการเมาท์ (ML; เวลาจากการแนะนำของผู้หญิงไปที่เมาท์แรก), เวลาแฝง intromission (IL; เวลาจากการแนะนำของหญิงสาวไปยังการหายใจครั้งแรก), เวลาจากการแจ้งเตือนครั้งแรกถึงการหลั่ง) ถูกบันทึก (Agmo, 1997) สัตว์ไร้เดียงสาถูกวางไว้ในกรงทดสอบที่สะอาดสำหรับ 1 ชั่วโมงพร้อมกับผสมพันธุ์เพศผู้ที่มีประสบการณ์ทางเพศในห้องเดียวกันเช่นพวกมันสัมผัสกับกลิ่นของผู้หญิงที่อยู่ห่างไกลและระดับการรบกวนและสภาพแวดล้อมที่แปลกใหม่

การติดฉลาก Immunofluorescence

สัตว์ถูกทำให้หมดความรู้สึกอย่างล้ำลึกโดยใช้โซเดียม pentobarbital (270 mg / kg, ip) และ perfused intracardially ด้วย 50 ml ของน้ำเกลือ 0.9% ตามด้วย 500 ml ของ 4% paraformaldehyde ใน 0.1 m paraformaldehyde สมองถูกนำออกและโพสต์ไว้สำหรับ 1 h ที่อุณหภูมิห้อง (RT) ในฟิกซ์เจอร์เดียวกันจากนั้นแช่ใน 20% sucrose และ 0.01% โซเดียมอะไซด์ใน 0.1 m PB สำหรับการจัดเก็บที่ 4 ° C ส่วนชเวียนถูกตัดที่ 35 μmบน microtome แช่แข็ง (H400R, Microm) และเก็บในซีรีย์สี่ขนานในสารละลาย cryoprotectant (30% ซูโครส 30% Ethylene glycol ใน 0.1 m PB) เก็บไว้ที่ 20 m PB การบ่มทั้งหมดดำเนินการที่ RT ด้วยความปั่นป่วนอย่างอ่อนโยนและการล้างที่หลากหลายด้วย 0.1 m PBS, pH 7.35 ระหว่างการบ่ม ส่วนถูกสัมผัสกับ 1% H2O2 สำหรับ 10 นาทีเพื่อทำลาย peroxidases ภายนอกจากนั้นบล็อก 1 h ในสารละลายฟักไข่ (PBS +: PBS ที่มี 0.4% Triton X-100, Sigma-Aldrich) และ 0.1% bovine serum albumin (Jackson Immuno Research Laboratories) ถัดไปส่วนที่ถูกบ่มในชั่วข้ามคืนที่ RT ในเมาส์ tyrosine hydroxylase (TH) --antibody (1: 20 000; อร์ค) หลังจากการบ่มแอนติบอดีปฐมภูมิส่วนที่ถูกบ่มใน AlexaFluor 555-conjugated แพะแอนติบอดีต่อต้านเมาส์ (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) เป็นเวลา 30 นาที ในที่สุดส่วนถูกล้างด้วย 0.1 m PB ติดตั้งบนสไลด์แก้ว Superfrost Plus แห้งและปิดด้วย gelvatol ที่มีสารต่อต้านการซีดจาง 1,4-diazabicyclo (2,2) ออกเทน (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

การวิเคราะห์ข้อมูล: ขนาดเซลล์ประสาท

ภาพของเซลล์ประสาท TH-immunoreactive (IR) ใน VTA ถูกถ่ายที่กำลังขยาย 40 ×ที่สาม rostral ถึงระดับหาง (Balfour et al., 2004) ไม่พบความแตกต่างระหว่างเซลล์ในระดับต่าง ๆ ขนาดเซลล์ของ TH-IR ขนาด Soma ถูกวิเคราะห์โดยใช้ ImageJ (สถาบันสุขภาพแห่งชาติ) วัดค่าเฉลี่ยพื้นที่ปริมณฑลและวงกลมตามที่อธิบายโดย Sklair-Tavron และคณะ (1996). ค่าเฉลี่ยของเซลล์ 25 ต่อสัตว์ (รวมระดับ 3 VTA ทั้งหมด) ได้รับการวิเคราะห์และรวมเซลล์ที่มีนิวเคลียสที่มองเห็นได้ชัดเจนเท่านั้น สำหรับสัตว์แต่ละตัวจะคำนวณพื้นที่เฉลี่ยปริมณฑลและวงกลม สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทาง [ปัจจัย: ประสบการณ์ทางเพศ (ประสบการณ์ทางเพศหรือความไร้เดียงสาทางเพศ) และเวลา (1, 7 หรือ 31 d)] ตามด้วย โพสต์เฉพาะกิจ เปรียบเทียบโดยใช้วิธี Holm – Sidak กับระดับความสำคัญของ 0.05

การเปลี่ยนแปลง VTA ที่ไม่ใช่โดปามีน

ช่วงผสมพันธุ์ทุกสองสัปดาห์

เพื่อทดสอบว่าประสบการณ์ทางเพศในช่วงการผสมพันธุ์ประจำวันนั้นจำเป็นหรือไม่สำหรับการลดขนาดของเซลล์ประสาท TH-IR ขนาดเซลล์ VTA dopamine neurons ของสัตว์ที่มีการผสมพันธุ์ในช่วงการผสมพันธุ์ห้าครั้งต่อสัปดาห์ถูกวิเคราะห์ เซสชันการผสมพันธุ์เป็นไปตามที่อธิบายไว้ข้างต้น แต่เป็นช่วงเวลา 2.5 สัปดาห์ สมองถูกรวบรวม 7 d หลังจากผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายหรือการจัดการ

การติดฉลาก Immunoperoxidase

นอกจากนี้ยังมีการทดสอบว่าใช้เทคนิคการย้อมสีที่ละเอียดอ่อนด้วย immunoperoxidase และการตรวจจับ chromogen หรือไม่นอกจากนี้ยังช่วยให้สามารถมองเห็นการเปลี่ยนแปลงขนาดของ Som-IR ได้ด้วย การปะทุและการประมวลผลเนื้อเยื่อได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น การรักษาด้วย 1% H2O2 และพีบีเอส +, ส่วนถูกบ่มในชั่วข้ามคืนที่ RT ในเมาส์ polyclonal tyrosine hydroxylase (TH) -antibody (1: 20 000; อร์ค) หลังจากการบ่มแอนติบอดีเบื้องต้นส่วนที่ถูกบ่มด้วยแพะ - ไบโอตินคอนจูต่อต้านกระต่าย IgG (1 h, 1: 500 ใน PBS +; ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์), avidin-biotin-peroxidase (1 h, ABC elite; 1: 1 PBS ; Vector Laboratories) และ 000′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (3,3 min, 10%, DAB; Sigma-Aldrich) ปรับปรุงด้วยซัลเฟตนิกเกิลใน (0.02% ใน 0.02 m PB) ด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (0.1%) มีการล้างส่วนต่างๆอย่างทั่วถึงใน 0.015 m PB เพื่อยุติการเกิดปฏิกิริยาและติดตั้งลงบนแผ่น Superfrost พร้อมแก้วสไลด์ (ฟิชเชอร์) ด้วย 0.1% เจลาตินใน ddH2O. หลังจากการคายน้ำสไลด์ทั้งหมดถูกปิดด้วย DPX mountant (dibutyl phthalate xylene; Sigma-Aldrich)

การวิเคราะห์ข้อมูล: ขนาดเซลล์ประสาท

เซลล์ TH-IR ได้รับการวิเคราะห์สำหรับพื้นที่ปริมณฑลและวงกลมดังที่อธิบายไว้ข้างต้น นอกจากนี้ยังได้วิเคราะห์เซลล์ TH-IR ใน substantia nigra (SN) ในส่วนเดียวกับที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์เซลล์ VTA TH-IR สุดท้ายจากการวิเคราะห์เซลล์ VTA และ SN TH-IR ส่วนต่าง ๆ ถูกขัดจังหวะโดยใช้เครสซิลไวโอเลตและเซลล์ที่ไม่ใช่ TH-IR โดยใช้วิธีการเดียวกับที่อธิบายไว้ข้างต้น ความแตกต่างระหว่างกลุ่มไร้เดียงสาและกลุ่มที่มีประสบการณ์ถูกนำมาเปรียบเทียบโดยใช้สองนักศึกษา t ทดสอบด้วยระดับนัยสำคัญของ 0.05

ผลของ naloxone ต่อการลดขนาดโดปามีนที่เกิดจากประสบการณ์

เพื่อตรวจสอบว่า MORs มีบทบาทในการเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศในขนาดเซลล์ประสาทโดปามีน, MOR ถูกบล็อกในระหว่างพฤติกรรมทางเพศ สัตว์ครึ่งหนึ่งได้รับประสบการณ์ทางเพศในขณะที่สัตว์อีกครึ่งหนึ่งได้รับการดูแล แต่ยังคงไร้เดียงสาทางเพศ สัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศได้รับอนุญาตให้ผสมพันธุ์ในวันที่ 5 ติดต่อกัน ภายในกลุ่มที่มีประสบการณ์ทางเพศและไร้เดียงสาสัตว์ได้รับการรักษาด้วย MAL antagonist MAL antagonist naloxone (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich ละลายใน 0.9% saline) หรือ saline 30 ขั้นต่ำก่อนที่จะเปิดตัวหญิง (มีประสบการณ์) หรือก่อนจัดการ (ไร้เดียงสา); ดังนั้นการสร้างกลุ่มทดลองสี่กลุ่ม: ความไร้เดียงสาทางเพศสัมพันธ์ (Naive Sal), naloxone ทางเพศที่ไร้เดียงสา (Naive NLX), saline ที่มีประสบการณ์ทางเพศ (exp Sal) และ naloxone ที่มีประสบการณ์ทางเพศ (Exp NLX; n = 5 – 8 ต่อกลุ่ม) การรักษา Naloxone ไม่ได้มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติในพารามิเตอร์ของพฤติกรรมทางเพศใด ๆ ของ 5 d ใด ๆ และกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย naloxone และ saline เหมือนกันในประสบการณ์ทางเพศ สัตว์ทุกตัวถูกฆ่าตายผ่านการปะทุของสมอง 7 d หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย การแบ่งส่วน, อิมมูโนวิทยาและการวิเคราะห์ข้อมูล (การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทางปัจจัย: ประสบการณ์ทางเพศและการรักษาด้วยยา) ขนาดโดปามีนได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

การตั้งค่าสถานที่ปรับอากาศมอร์ฟีน

การออกแบบการทดลอง

ก่อนหน้านี้ รุสโซและคณะ (2007) แสดงให้เห็นว่ามอร์ฟีนเรื้อรังก่อให้เกิดความอดทนต่อการได้รับรางวัลมอร์ฟีน เนื่องจากประสบการณ์ทางเพศและมอร์ฟีนเรื้อรังทำให้ขนาดโดปามีนเซลล์ประสาทใน VTA ลดลงในทำนองเดียวกันความเกี่ยวข้องในหน้าที่การทำงานของการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่เกิดจากเพศถูกทดสอบเพื่อรับรางวัลมอร์ฟีน สัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศและไร้เดียงสาแบ่งออกเป็นหกกลุ่มทดลองที่แตกต่างกัน (n = 9 – 13 ต่อกลุ่ม) ขึ้นอยู่กับพฤติกรรมทางเพศ (ความไร้เดียงสาทางเพศหรือประสบการณ์) และปริมาณมอร์ฟีน (0.5, 5.0, หรือ 10.0 mg / kg, ip) และได้รับการทดสอบสำหรับการตั้งค่าสถานที่ที่เกิดจากมอร์ฟีน

มอร์ฟีน CPP

การปรับสภาพเกิดขึ้น 1 d หลังจากช่วงการผสมพันธุ์ครั้งล่าสุดและกลุ่มได้รับการจับคู่เพื่อประสิทธิภาพทางเพศในช่วงการผสมพันธุ์ครั้งล่าสุด กระบวนทัศน์ CPP ที่ใช้ประกอบด้วยการทดสอบวันปรับสภาพและหลังการทดสอบและเครื่องมือใช้พื้นฐาน Tenk และคณะ (2009). โดยสังเขปเครื่อง CPP (MED Associates) ประกอบด้วยสามห้องที่แตกต่างกัน ระหว่างแต่ละเซสชันอุปกรณ์จะถูกทำความสะอาดอย่างทั่วถึงด้วยสารละลายเอธานอล 70% เพื่อลดสัญญาณการดมกลิ่นที่ค้างอยู่ ในการพิจารณาความต้องการของแต่ละบุคคลได้ทำการทดสอบก่อนหน้านี้ในระหว่างที่สัตว์ได้รับสิทธิ์เข้าถึงอุปกรณ์ทั้งหมดฟรีเป็นเวลา 15 นาที ในฐานะที่เป็นกลุ่มสัตว์ไม่ได้แสดงความชอบอย่างมีนัยสำคัญสำหรับห้องใดห้องหนึ่ง แต่สัตว์แต่ละตัวมีความชอบในตอนแรกเล็กน้อย หนูที่แสดงความชื่นชอบอย่างมากสำหรับห้องใดห้องหนึ่ง (ความแตกต่าง> 200 วินาทีระหว่างเวลาที่ใช้ในแต่ละห้อง; <5% ของสัตว์) ในระหว่างการทดสอบก่อนวัยเรียนจะถูกแยกออกจากการศึกษา ในระหว่างการปรับสภาพยาจะถูกจับคู่กับห้องที่ต้องการหรือไม่ต้องการในตอนแรกโดยใช้กระบวนทัศน์ที่เป็นกลาง (Tzschentke, 2007) และสัตว์ถูกกักขังไว้ในห้องเป็นเวลา 30 นาที สัตว์ถูกฉีดด้วยน้ำเกลือ (ip) ในตอนเช้า (9: 00 AM ถึง 12: 00 PM) และถูกคุมขังในห้องควบคุมคู่ที่มีน้ำเกลือ ในช่วงบ่าย (1: 00 – 4: 00 PM) สัตว์ถูกฉีดด้วยมอร์ฟีน (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg, 10.0 mg / kg หรือ 0.9 mg / kg; morphine sulfate ละลายใน 3% saline, Johnson Matthey) ไปยังห้องมอร์ฟีนที่จับคู่ สัตว์อยู่ภายใต้เงื่อนไขสองวัน ในวันถัดไป (XNUMX d หลังจากวันสุดท้ายของการผสมพันธุ์) ได้ทำการทดสอบหลังการทดลอง สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติเวลาที่ใช้ในห้องมอร์ฟีนที่จับคู่ระหว่างการทดสอบหลังการเปรียบเทียบกับเวลาที่ใช้ในห้องคู่เกลือในระหว่างการโพสต์การทดสอบสำหรับเพศชายไร้เดียงสาหรือมีประสบการณ์ทางเพศภายในแต่ละปริมาณโดยใช้คู่ t ทดสอบ p <0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ กลุ่มควบคุมเพิ่มเติมของสัตว์ที่ไร้เดียงสาและมีประสบการณ์ทางเพศได้รับน้ำเกลือทั้งในห้องที่จับคู่และไม่มีคู่เพื่อใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ ไม่พบความแตกต่างของเวลาที่ใช้ระหว่างห้องสำหรับกลุ่มใดกลุ่มหนึ่ง

ผลของ naloxone ระบบในการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ของพฤติกรรมทางเพศ

การออกแบบการทดลอง

ประสบการณ์ทางเพศส่งผลให้เกิดการอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศที่ได้รับการดูแลอย่างน้อยเดือน 1 (Pitchers และคณะ, 2012) เพื่อวิเคราะห์ผลของการปิดกั้น MOR ต่อการอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศสัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศได้รับ naloxone หรือ saline ก่อนการผสมพันธุ์ 5 ครั้งติดต่อกันn = 12 แต่ละรายการ) ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น หนึ่งสัปดาห์หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายได้ทำการทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายในระหว่างที่สัตว์ทุกตัวได้รับอนุญาตให้ผสมพันธุ์จนกระทั่งหนึ่งพุ่งออกมาหรือสูงถึง 1 ชั่วโมง ไม่ได้ทำการรักษา naloxone หรือ saline ก่อนผสมพันธุ์ในวันทดสอบสุดท้าย เปรียบเทียบพารามิเตอร์ของการผสมพันธุ์เพื่อตรวจสอบว่า naloxone มีผลต่อการอำนวยความสะดวกในการผสมพันธุ์ทางเพศหรือไม่ (วัน 1 เทียบกับวัน 5) หรือการบำรุงรักษาสิ่งอำนวยความสะดวกนี้ (วัน 5 เทียบกับการทดสอบ) โดยใช้ ANOVA สองทาง ) และวัน (วัน 1, วัน 5 หรือการทดสอบ)] และวิธีการ Holm – Sidak สำหรับ โพสต์เฉพาะกิจ เปรียบเทียบ สำหรับการทดสอบทางสถิติทั้งหมด p <0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

การทดลองควบคุมเพิ่มเติม

ระบบ naloxone ในวันทดสอบ

เพื่อแสดงให้เห็นว่าพฤติกรรมทางเพศที่เปลี่ยนแปลงไปในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายนั้นไม่ได้เกิดขึ้นเนื่องจากการไม่มี naloxone เราจึงให้ยา naloxone หรือ saline ในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายกับสัตว์ที่ได้รับการจับคู่กับ naloxone ในขณะที่พวกเขาได้รับประสบการณ์ทางเพศ โดยเฉพาะสัตว์ทุกตัวได้รับการฉีด naloxone (10 mg / kg, sc) 30 นาทีก่อนผสมพันธุ์เพื่อการหลั่งหนึ่งครั้งในช่วง 5 ติดต่อกัน ในวันทดสอบ 7 d ภายหลังสัตว์ประมาณครึ่งหนึ่งได้รับการฉีด naloxone (10 mg / kg n = 7) หรือน้ำเกลือ (n = 6) 30 ขั้นต่ำก่อนที่จะมีเพศหญิง สังเกตพฤติกรรมทางเพศและบันทึก เปรียบเทียบพารามิเตอร์ของการผสมพันธุ์เพื่อตรวจสอบว่า naloxone มีผลต่อการอำนวยความสะดวกในการผสมพันธุ์ทางเพศหรือไม่ (วัน 1 เทียบกับวัน 5) หรือการบำรุงรักษาสิ่งอำนวยความสะดวกนี้ (วัน 5 เทียบกับการทดสอบ) โดยใช้ ANOVA สองทาง ) และวัน (วัน 1, วัน 5 หรือทดสอบ)] และวิธีการ Holm-Sidak สำหรับ โพสต์เฉพาะกิจ เปรียบเทียบ สำหรับการทดสอบทางสถิติทั้งหมด p <5% ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลของ naloxone ต่อการแสดงออกในระยะสั้นของพฤติกรรมทางเพศที่อำนวยความสะดวก

ผลของการรักษา naloxone (10 mg / kg, sc) ในระหว่างการผสมพันธุ์ถูกทดสอบต่อพฤติกรรมทางเพศที่ตามมาในช่วงวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายซึ่งได้ดำเนินการเพียง 1 d หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย (น้ำเกลือ n = 5; naloxone, n = 4)

การปรับสภาพระบบ naloxone

เพื่อตรวจสอบว่าการรักษา naloxone ซ้ำเพียงอย่างเดียวทำให้เกิดความเสื่อมของพฤติกรรมทางเพศ 7 d หลังจากการรักษาครั้งล่าสุดสัตว์ที่ไร้เดียงสาทางเพศได้รับ naloxone ห้าวันต่อวัน (10 mg / kg, sc) หรือการฉีดน้ำเกลือในวันติดต่อกัน หรือการฉีดน้ำเกลือ ในวันทดสอบสุดท้ายนี้สัตว์ไม่ได้รับการฉีดยาใด ๆ สังเกตพฤติกรรมทางเพศและบันทึกตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เปรียบเทียบพารามิเตอร์ของการผสมพันธุ์ระหว่างกลุ่มโดยใช้คู่ t การทดสอบ สำหรับการทดสอบทางสถิติทั้งหมด p <5% ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

naloxone ระบบและรางวัลทางเพศ

ความเป็นไปได้ทางหนึ่งสำหรับผลกระทบที่ลดทอนของ naloxone ในการแสดงการบำรุงรักษาพฤติกรรมทางเพศที่อำนวยความสะดวกคือ naloxone ปิดกั้นผลตอบแทนที่เป็นประโยชน์ของพฤติกรรมทางเพศ เพื่อทดสอบความเป็นไปได้นี้กระบวนทัศน์ CPP ได้ถูกดำเนินการสำหรับพฤติกรรมทางเพศทันทีหลังการฉีด naloxone หรือ saline ในเพศชายที่ไม่มีประสบการณ์ทางเพศมาก่อน ขั้นตอน CPP คล้ายกับที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับ morphine-CPP รวมถึงการทดสอบก่อนวันปรับสภาพและหลังการทดสอบ

พฤติกรรมทางเพศถูกจับคู่กับห้องที่ไม่ได้ถูกกล่าวถึงในตอนแรก สัตว์แต่ละตัวได้รับการฉีดสาร naloxonen = 12) หรือน้ำเกลือ (n = 11) 30 ขั้นต่ำก่อนได้รับสิทธิ์เข้าถึงหญิงที่เปิดกว้าง ระยะเวลาเฉลี่ยของเซสชันการผสมพันธุ์คือ ∼13 ขั้นต่ำ หนึ่งนาทีหลังจากการพุ่งออกมาสัตว์ถูกวางไว้ในห้องคู่สำหรับ 30 นาที ในวันปรับอากาศอื่น ๆ สัตว์ได้รับการฉีด naloxone หรือ saline (ไม่ว่าพวกเขาจะได้รับอะไรก่อนการผสมพันธุ์) และถูกวางไว้ในห้องที่ไม่มีการจับคู่เป็นเวลา 30 นาที ถัดไปทำการทดสอบหลังการทดสอบเหมือนกับการทดสอบก่อน เพื่อกำหนดลักษณะของห้องที่ต้องการเปรียบเทียบเวลาที่ใช้ในห้องคู่ในระหว่างการทดสอบก่อนและหลังการทดสอบ สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติให้จับคู่ t การทดสอบใช้เพื่อเปรียบเทียบความพึงพอใจและคะแนนความแตกต่างและเวลาในห้องคู่ในระหว่างการทดสอบก่อนและหลังการทดสอบเพื่อตรวจสอบว่า CPP ที่สำคัญถูกสร้างขึ้นสำหรับพฤติกรรมทางเพศ p <0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญ

ผลของ intra-VTA naloxone ต่อการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากพฤติกรรมทางเพศ

การออกแบบการทดลอง

เพื่อตรวจสอบว่าการกระทำ EOP โดยเฉพาะใน VTA มีความรับผิดชอบต่อผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศต่อพฤติกรรมทางเพศหรือไม่สัตว์ที่ได้รับยา naloxone หรือน้ำเกลือเข้าไปใน VTA ก่อนการผสมพันธุ์ทุกห้าวัน กระบวนทัศน์เชิงพฤติกรรมมีความคล้ายคลึงกับการทดลอง naloxone อย่างเป็นระบบ สัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศได้รับอนุญาตให้ผสมพันธุ์ในช่วง 5 ติดต่อกันจนกว่าจะมีการพุ่งออกมาหนึ่งครั้งหรือมากถึง 1 ชั่วโมง สิบห้านาทีก่อนที่จะแนะนำตัวเมียที่เปิดกว้างหนูตัวผู้ได้รับการฉีดยาทั้งสองข้างของ naloxone (10 μg / μlต่อซีกโลกปริมาณปริมาตร 0.5 μlละลายใน 0.9 μlต่อซีกโลก) microinjections ระดับทวิภาคีได้รับการจัดการที่อัตราการไหลของ 0.5 μl / นาทีในช่วงเวลา 0.5 นาทีตามด้วย 1 นาทีขั้นต่ำเพิ่มเติมโดยมี cannula ฉีดอยู่ในตำแหน่งเพื่อการแพร่กระจาย ฉีด cannula แล้วแทนที่ด้วยหุ่น cannula และหมวกฝุ่น หนึ่งสัปดาห์หลังจากวันสุดท้ายของการผสมพันธุ์ (วันทดสอบ) สัตว์ทุกคู่แต่งงานอีกครั้งเพื่ออุทานโดยไม่ต้องแช่ naloxone หรือน้ำเกลือ รูป 3A สรุปการออกแบบการทดลอง การวิเคราะห์ข้อมูลดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในการทดลองระบบ naloxone

ศัลยกรรมผ่าตัด

หนูเพศผู้ได้รับการดมยาสลบด้วยการฉีดเยื่อบุช่องท้อง (0.1 ml / kg) คีตา (0.87 mg / ml) และไซลาซีน (0.13 mg / ml) และวางไว้ในเครื่อง stereotaxic (Kopf Instruments) กระบอกวัดคู่มือทวิภาคี 21 (พลาสติกหนึ่ง) ถูกลดระดับลงผ่านรูเจาะเล็ก ๆ ในกะโหลกศีรษะเข้าสู่สมองไปทาง VTA ที่ −4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML จาก bregma และ −7.8 mm DV จากด้านบนของกะโหลกศีรษะตาม Paxinos and Watson (2013). Cannulas ถูกยึดด้วยอะครีลิคทางทันตกรรมซึ่งยึดติดกับสกรูสามตัวในกะโหลก สัตว์ได้รับระยะเวลาการฟื้นฟู 2 สัปดาห์และได้รับการจัดการทุกวันสำหรับการทำให้คุ้นเคยกับการจัดการและขั้นตอนการฉีดที่ใช้ในระหว่างการทดสอบพฤติกรรม

การตรวจสอบตำแหน่ง Cannula

การวางตำแหน่งของ cannulas ถูกตรวจสอบโดยใช้ TH-immunostaining เพื่อยืนยันว่า VTA มีการกำหนดเป้าหมายอย่างถูกต้อง มีเพียงสัตว์ที่มีตำแหน่งที่เหมาะสมเท่านั้นในการวิเคราะห์ (ขนาดกลุ่มสุดท้าย: น้ำเกลือที่มีประสบการณ์ n = 8; naloxone ที่มีประสบการณ์ n = 6) สัตว์เพิ่มอีกสามตัวที่ได้รับการฉีด naloxone ภายใน VTA นั้นถูกจัดกลุ่มเข้าด้วยกันเป็นกลุ่มที่“ พลาด” กลุ่มที่ไม่ได้รับการวิเคราะห์แยกต่างหากเพื่อทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมทางกายวิภาคและ Mann Whitney U การทดสอบใช้เพื่อเปรียบเทียบพฤติกรรมในวันทดสอบสุดท้ายกับผู้ชายที่มีประสบการณ์ naloxone และที่ได้รับน้ำเกลือ

นิพจน์ pERK ที่สัมพันธ์กับบริบทที่เกี่ยวข้องกับการผสมพันธุ์

การออกแบบการทดลอง

การสัมผัสกับกรงที่ผู้ชายได้รับประสบการณ์การผสมพันธุ์ได้แสดงให้เห็นว่าการกระตุ้น MOR ใน VTA และการทำงานของระบบประสาทใน VTA และ NAc (Balfour et al., 2004) ดังนั้นสภาพแวดล้อมการผสมพันธุ์ทำหน้าที่เป็นตัวชี้นำการทำนายผลรางวัลทางเพศ การศึกษาในปัจจุบันได้ทดสอบว่าการกระตุ้นด้วย MOR ในระหว่างมีประสบการณ์ทางเพศนั้นเป็นสิ่งจำเป็นหรือไม่ Naloxone หรือ saline ได้รับการจัดการอย่างเป็นระบบ (ip) 30 ขั้นต่ำก่อนการจัดวางในเวทีผสมพันธุ์และการแนะนำของหญิงที่เปิดกว้างสำหรับการผสมพันธุ์ (มีประสบการณ์) หรือก่อนการควบคุมการจัดการซึ่งประกอบด้วยตำแหน่งในกรงการจัดการ สภาพแวดล้อมไร้เดียงสา) ดังนั้นจึงสร้างกลุ่มการทดลองสี่กลุ่ม ได้แก่ Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​และ Exp NLX หนึ่งสัปดาห์หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายสัตว์ครึ่งตัวในแต่ละกลุ่มได้รับการสัมผัสกับกรงผสมพันธุ์ (ตัวผู้ Exp: ตัวชี้นำที่เกี่ยวข้องกับเพศ) หรือการจับกรง (ตัวผู้ที่ไร้เดียงสา: ตัวชี้นำที่ไม่มีเหตุผล / เป็นกลาง) ในขณะที่อีกครึ่งหนึ่ง ตัวชี้นำใด ๆ และอยู่ในกรงบ้านแทน (เพื่อกำหนดนิพจน์ pERK พื้นฐาน) กระบวนทัศน์การทดลองนี้สร้างกลุ่ม 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, EXP NLX-Cue Exp (n = 4 แต่ละรายการยกเว้น Naive NLX-No Cue n = 3) สัตว์ถูกทำให้สมบูรณ์ 10 – 15 ขั้นต่ำหลังจากได้รับแสง สัตว์ควบคุมถูกย้ายออกจากกรงบ้านของพวกเขา

immunohistochemistry

การแบ่งส่วนและอิมมูโนวิทยาได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ที่นี่เราใช้แอนติบอดี polyclonal กระต่ายกับ p42 และ p44 แผนที่ Kinases ERK1 และ ERK2 (pERK; 1: 4 000 เทคโนโลยีการส่งสัญญาณของเซลล์) แอนติบอดีปฐมภูมิมีลักษณะเด่นในวรรณกรรม (Roux และ Blenis, 2004; Murphy and Blenis, 2006; Frohmader และคณะ, 2010b) ยิ่งกว่านั้นการละเว้นแอนติบอดีปฐมภูมิสามารถยับยั้งการสร้างภูมิคุ้มกันทั้งหมดและการวิเคราะห์แบบ Western blot ของเนื้อเยื่อสมองหนูเผยสองแถบที่น้ำหนักโมเลกุลที่เหมาะสม

การวิเคราะห์ข้อมูล.

เซลล์ pERK-immunoreactive (-IR) ถูกนับในหลายส่วนของสมองโดยใช้หลอดวาดภาพ lucida ที่ติดกับกล้อง Leica กล้องจุลทรรศน์ DMRD: NAc [core (C) และ shell (S); 400 × 600 μm; เยื่อหุ้มสมอง prefrontal อยู่ตรงกลาง; mPFC; บริเวณหน้า cingulate (ACA); เยื่อหุ้มสมองก่อนวัยอันควร (PL); infralimbic cortex (IL); 600 × 800 μmแต่ละตัว, Caudate – putamen (CP; 800 × 800 μm), และ amygdala basolateral (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader และคณะ, 2010b; Pitchers และคณะ, 2010b) สองส่วนถูกนับต่อส่วนสมองและจำนวนเซลล์ในพื้นที่มาตรฐานของการวิเคราะห์แล้วคำนวณเป็นจำนวนเซลล์ต่อมม2. ค่าเฉลี่ยสองค่าเฉลี่ยต่อสัตว์สำหรับการคำนวณค่าเฉลี่ยของกลุ่ม เปรียบเทียบค่าเฉลี่ยของกลุ่มในกลุ่มที่มีประสบการณ์ทางเพศหรือไร้เดียงสาโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทาง [ปัจจัย: การรักษาด้วยยา (NLX หรือ Sal) และคิว (คิวหรือไม่มีคิว) ตามด้วย โพสต์เฉพาะกิจ เปรียบเทียบโดยใช้การทดสอบผลรวมของ Holm – Sidak หรือ Mann – Whitney ตามความเหมาะสมกับระดับนัยสำคัญ p <0.05 ในเปลือก NAc ของสัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศมีแนวโน้มที่ดีต่อความสำคัญของปัจจัยดังนั้นจึงทำการเปรียบเทียบแบบคู่เพื่อเปรียบเทียบกลุ่มน้ำเกลือ (Sal-No Cue) และกลุ่มคิวน้ำเกลือ (Sal + Cue) เท่านั้น

ภาพ

ภาพดิจิตอลถูกจับโดยใช้กล้อง CCD (Macrofire, Optronics) ที่แนบมากับ Leica กล้องจุลทรรศน์ (DM5000B) พร้อมการตั้งค่ากล้องคงที่ ภาพถูกนำเข้าสู่ซอฟต์แวร์ Adobe Photoshop 9.0 ภาพไม่ได้เปลี่ยนแปลง แต่อย่างใดยกเว้นการปรับความสว่างและความคมชัด

Results

การเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศในเซลล์ VTA dopamine

ประสบการณ์ทางเพศส่งผลให้ขนาด VTA โดปามีนลดลง (มะเดื่อ. 1A-C) ประสบการณ์ทางเพศลดพื้นที่และปริมณฑลของ Soma ของเซลล์ VTA TH-IR (พื้นที่: F(1,31) = 23.068, p <0.001; ปริมณฑล, F(1,31) = 18.225, p <0.001) นอกจากนี้ยังมีผลกระทบที่สำคัญหลักของเวลา (พื้นที่: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; ปริมณฑล, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) และการโต้ตอบที่สำคัญระหว่างประสบการณ์และเวลา (พื้นที่: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; ปริมณฑล, F(2,31) = 4.347, p = 0.022) การเปรียบเทียบแบบคู่พบว่าพื้นที่และปริมณฑลของเซลล์ TH-IR ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ 1 และ 7 d หลังจากวันสุดท้ายของพฤติกรรมทางเพศในสัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศสัมพันธ์กับการควบคุมทางเพศที่ไร้เดียงสา [มะเดื่อ. 1Bพื้นที่ p = 0.002 (1 d) p <0.001 (7 วัน); Cปริมณฑล: p = 0.009 (1 d) p <0.001 (7 วัน)] ผลของพฤติกรรมทางเพศจะหายไปเมื่อตามด้วยระยะเวลาการงดให้รางวัลเนื่องจากขนาดโสมของเซลล์ประสาท TH-IR เปลี่ยนกลับเป็นค่าพื้นฐาน 31 วันหลังจากช่วงการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย (มะเดื่อ. 1Bพื้นที่ p = 0.798; Cปริมณฑล: p = 0.785) ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศในลักษณะเป็นวงกลม ณ จุดเวลาใด ๆ (มะเดื่อ. 1D) การลดขนาดโดปามีน soma VTA ไม่ได้ขึ้นอยู่กับช่วงการผสมพันธุ์รายวันเนื่องจากประสบการณ์การผสมพันธุ์ในช่วงการผสมพันธุ์สองครั้งต่อสัปดาห์จะทำให้ขนาด VTA โดปามีนลดลงด้วย (มะเดื่อ. 2A,B, E-Hพื้นที่ p = 0.004; ปริมณฑล: p <0.001) ในทางตรงกันข้ามประสบการณ์ทางเพศไม่ส่งผลกระทบต่อขนาดของ TH-IR soma ในคอนสเตียนิกรา (มะเดื่อ. 2C, I-Jพื้นที่ p = 0.13; ปริมณฑล: p = 0.16) หรือเปลี่ยนแปลงขนาดโสมในเซลล์ประสาท VTA ที่ไม่ใช่ TH-IR ใกล้เคียง (มะเดื่อ. 2D, E-Hพื้นที่ p = 0.46; ปริมณฑล: p = 0.45)

รูป 1 

การเปลี่ยนแปลงขนาด soma ของ opioid ที่เกิดจากภายนอกของ VTA dopamine neurons Aภาพตัวแทนของเซลล์ประสาทโดปามีน VTA จากสัตว์ไร้เดียงสาและสัตว์ที่มีประสบการณ์แสดงให้เห็นการลดลงของขนาดโซมา 7 d หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย สเกลบาร์, 5 μm ข้อมูลเชิงปริมาณแสดงว่าประสบการณ์ทางเพศ (ค่าประสบการณ์แถบสีดำ) ทำให้เกิดการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในพื้นที่ (B; ในμm2) และปริมณฑล (C; เป็นμm) ของเซลล์ VTA dopamine, 1 d (Naive, Exp; n = 6) และ 7 d (ไร้เดียงสา n = 5; EXP, n = 6) แต่ไม่ใช่ 31 d (ไร้เดียงสา n = 6; EXP, n = 8) หลังจากผสมพันธุ์สุดท้ายเมื่อเทียบกับการควบคุมทางเพศที่ไร้เดียงสา (ไร้เดียงสาแถบสีขาว) พื้นที่ถูกลดลงเหลือ 84% ในผู้ชายที่มีประสบการณ์เปรียบเทียบกับการควบคุมที่ไร้เดียงสาที่ 1 หรือ 7 d ขอบเขตถูกลดเหลือ 91.6 และ 90% ในกลุ่มที่มีประสบการณ์เปรียบเทียบกับตัวควบคุมที่ 1 และ 7 d resp ไม่มีผลกระทบต่อ Circularity (D) เซลล์พลาสติกโดปามีนในพื้นที่ (E) และปริมณฑล (F) ถูกป้องกันโดย naloxone (NLX, n = 8) แต่ไม่ใช่น้ำเกลือ (Sal, n = 7) การรักษาระหว่างการผสมพันธุ์ 7 d หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายเมื่อเทียบกับการควบคุมทางเพศที่ไร้เดียงสา (Sal, n = 5; NLX, n = 6) ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM; * บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมทางเพศที่ไร้เดียงสาของวันเดียวกัน (B, C) หรือเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไร้เดียงสาที่ได้รับการบำบัดด้วยน้ำเกลือE, F).

รูป 2 

ประสบการณ์ทางเพศไม่ได้ลดขนาด Soma ในเซลล์ substantia nigra dopamine หรือ VTA nondopamine neurons VTA TH-IR พื้นที่เซลล์ประสาทโสม (A; ในμm2) และปริมณฑล (B; เป็นμm) ในสัตว์ที่ไร้เดียงสาทางเพศ (สีขาว) และสัตว์ที่มีประสบการณ์ (สีดำ) ที่ได้รับประสบการณ์โดยการผสมพันธุ์สองครั้งต่อสัปดาห์มากกว่าในช่วงวันติดต่อกัน Substantia nigra TH-IR soma พื้นที่ (C) และพื้นที่ VTA ที่ไม่ใช่ TH-IR Soma (D) ในสัตว์ที่ไร้เดียงสาทางเพศ (สีขาว) และสัตว์ที่มีประสบการณ์ (สีดำ) ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM; * บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมทางเพศที่ไร้เดียงสา ภาพตัวแทนแสดงเซลล์ประสาท TH-IR (สีน้ำตาล) ใน VTA ของความไร้เดียงสาทางเพศ (E) และมีประสบการณ์ (F) เพศชาย G, H, รูปภาพกำลังขยายสูงขึ้นของเซลล์ประสาทที่ระบุโดยลูกศรใน E และ F ตามลำดับ เซลล์ประสาทที่มีสี Nissl จะแสดงเป็นสีน้ำเงินในภาพเหล่านี้ ภาพตัวแทนแสดงเซลล์ประสาท TH-IR ใน SN ของความไร้เดียงสาทางเพศ (I) และมีประสบการณ์ (J) เพศชาย สเกลบาร์: E-J, 20 μm

การลดขนาด Soma ที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศของเซลล์ประสาทโดปามีน VTA นั้นขึ้นอยู่กับการกระตุ้นการรับ opioid

การลดขนาดของเซลล์ประสาทโดปามีน VTA ขนาดที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศถูกบล็อกโดย naloxone MOR ศัตรูที่ไม่ได้รับการคัดเลือก MOR ซึ่งดำเนินการก่อนการผสมพันธุ์แต่ละครั้ง การรักษา Naloxone ก่อนการผสมพันธุ์มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อพื้นที่ (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) และแนวโน้มที่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อปริมณฑล (F(1,22) = 2.892, p = 0.052) พบปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญระหว่างประสบการณ์กับการรักษาด้วย naloxone สำหรับพื้นที่ (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) และปริมณฑล (F(1,22) = 8.167, p = 0.009) การเปรียบเทียบแบบคู่แสดงให้เห็นว่าประสบการณ์ทางเพศในสัตว์ที่ได้รับการบำบัดด้วยน้ำเกลือช่วยลดพื้นที่และปริมณฑลของ VTA dopamine neurons 7 d หลังจากช่วงการผสมพันธุ์ครั้งล่าสุดเมื่อเทียบกับการบำบัดทางเพศด้วยน้ำเกลือมะเดื่อ. 1Eพื้นที่ p = 0.018; Fปริมณฑล: p = 0.007) ในทางตรงกันข้ามสัตว์ที่ได้รับยา naloxone มีประสบการณ์ทางเพศไม่แตกต่างจากผู้ชายที่ได้รับยา naloxone ที่ได้รับการรักษาทางเพศ (มะเดื่อ. 1Eพื้นที่ p = 0.483; Fปริมณฑล: p = 0.330) นอกจากนี้ขนาดของสัตว์น้ำเกลือที่มีประสบการณ์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับสัตว์ที่มีประสบการณ์ naloxone (มะเดื่อ. 1Eพื้นที่ p = 0.002; Fปริมณฑล: p = 0.002) ผลของ naloxone นี้มีความเฉพาะเจาะจงสำหรับประสบการณ์ทางเพศเนื่องจากการรักษาด้วย naloxone เพียงอย่างเดียวไม่ส่งผลต่อขนาดของเซลล์ TH-IR ขนาด soma ในเพศชายที่ได้รับ naloxone ที่ได้รับการรักษาทางเพศเปรียบเทียบกับการควบคุมด้วยน้ำเกลือมะเดื่อ. 1E,F) นอกจากนี้ผลของ naloxone ต่อการลดขนาด Soma ที่เกิดขึ้นนั้นไม่ได้เกิดจากผลของ naloxone ต่อพฤติกรรมทางเพศเนื่องจากพฤติกรรมการผสมพันธุ์ไม่แตกต่างกันระหว่าง naloxone- และตัวผู้ที่ได้รับการบำบัดด้วยน้ำเกลือยกเว้นเวลานานในการเริ่มผสมพันธุ์ (ช่วงโพสต์พุ่งออกมา) ในผู้ชายที่ได้รับการรักษาด้วย naloxone ในช่วงการผสมพันธุ์ครั้งแรกและครั้งที่ห้า (p = 0.03 และ p = 0.004 ตามลำดับ) ทั้งชายและหญิงที่ได้รับน้ำเกลือและ naloxone ได้รับการบำบัดเพื่ออุทานในระหว่างการผสมพันธุ์แต่ละครั้ง

ความทนทานต่อมอร์ฟีนจากการกระตุ้นจากประสบการณ์ทางเพศ

ผลกระทบของประสบการณ์ทางเพศต่อขนาด VTA โดปามีนโดยการกระทำของ EOP ใน VTA นั้นคล้ายกับที่รายงานสำหรับ opiates จากภายนอก (Sklair-Tavron และคณะ, 1996; รุสโซและคณะ, 2007) ดังนั้นจึงมีการทดสอบว่าโดปามีนแบบเซลล์ VTA ที่ได้รับรางวัลตามธรรมชาตินั้นมีผลต่อรางวัลสำหรับมอร์ฟีน opiate หรือไม่ อันที่จริงแล้วประสบการณ์ทางเพศทำให้มอร์ฟีนให้รางวัลความอดทนคล้ายกับผลของ opiates เรื้อรัง (รุสโซและคณะ, 2007) เพศชายที่มีประสบการณ์ทางเพศล้มเหลวในการพัฒนา CPP สำหรับปริมาณมอร์ฟีน 0.5 mg / kg; ในขณะที่เพศชายที่ไร้เดียงสามีรูปแบบ CPP สำหรับขนาดนี้ตามที่ระบุโดยการใช้เวลาในห้องมอร์ฟีนคู่ที่จับคู่มากกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับห้องเกลือคู่ในช่วงหลังการทดสอบ (มะเดื่อ. 3; p = 0.039) ทั้งกลุ่มที่ไร้เดียงสาทางเพศและกลุ่มที่มีประสบการณ์ใช้เวลาอย่างมีนัยสำคัญในห้องมอร์ฟีนที่จับคู่เมื่อเทียบกับห้องคู่ที่เค็มที่มีมอร์ฟีนในปริมาณที่สูงกว่า: 5.0 mg / kg (มะเดื่อ. 3; ไร้เดียงสา: p = 0.029; ประสบการณ์: p = 0.012) และ 10.0 mg / kg (มะเดื่อ. 3; ไร้เดียงสา: p <0.001; ประสบการณ์: p = 0.002)

รูป 3 

ผลของประสบการณ์ทางเพศต่อการให้รางวัลมอร์ฟีน จำนวนครั้งที่ใช้ใน saline- (Sal) หรือ morphine- คู่ (Mor; 0.5, 5 หรือ 10 mg / กก. น้ำหนักตัวห้อง) ระหว่างการทดสอบหลังคลอดในเรื่องไร้เดียงสาทางเพศ (ไร้เดียงสา, n = 10 – 13) หรือมีประสบการณ์ (Exp, n = 9 – 13) ตัวผู้ ข้อมูลที่นำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SEM; * บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับห้องที่จับคู่ Sal ภายในสัตว์เดียวกัน NS, ไม่สำคัญ

การอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศของพฤติกรรมการผสมพันธุ์นั้นขึ้นอยู่กับการเปิดใช้งานตัวรับ opioid

การค้นพบนี้แสดงให้เห็นว่า EOP ที่ทำหน้าที่ใน VTA ในช่วงการผสมพันธุ์ระยะสั้น 5 รายวันทำให้พลาสติกของเซลล์ประสาท Dopamine VTA ที่มีความคล้ายคลึงกับผลของมอร์ฟีนเรื้อรังหรือการบริหารเฮโรอีนด้วยตนเอง (รุสโซและคณะ, 2007; Mazei-Robison และคณะ, 2011) เราตั้งสมมติฐานว่าการลดขนาดโสโครก VTA โดปามีนเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการเรียนรู้รางวัลและโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศของพฤติกรรมทางเพศในแง่ของแรงจูงใจและประสิทธิภาพ สมมติฐานนี้ถูกทดสอบโดยการปิดกั้น MOR โดยใช้ naloxone ระหว่างการผสมพันธุ์และตรวจสอบผลกระทบต่อการอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศในช่วงการผสมพันธุ์ห้าครั้งต่อวัน ข้อมูลจะถูกนำเสนอใน รูป 4 สำหรับช่วงการผสมพันธุ์ครั้งแรกและครั้งที่ห้าเท่านั้นเนื่องจากเป็นข้อมูลที่แสดงให้เห็นถึงการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์การจับคู่ที่ดีที่สุด นอกจากนี้ผลกระทบระยะยาวของการรักษา naloxone ในระหว่างการผสมพันธุ์จะถูกทดสอบในการบำรุงรักษาสิ่งอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ของพฤติกรรมการผสมพันธุ์ในระหว่างการทดสอบการผสมพันธุ์ขั้นสุดท้าย 1 ในสัปดาห์ต่อมา รูป 4A แสดงให้เห็นถึงการออกแบบการทดลอง มีผลกระทบหลักอย่างมีนัยสำคัญของเซสชั่นการผสมพันธุ์ในพารามิเตอร์ทั้งหมดของพฤติกรรมทางเพศ (แฝงติด: F(2,55) = 11.286, p <0.001; เวลาแฝงของ intromission: F(2,55) = 8.767, p <0.001; เวลาแฝงในการหลั่ง: F(2,55) = 10.368, p <0.001) และการรักษา naloxone ในเวลาแฝงที่จะติดตั้ง (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) และ Intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007) การเปรียบเทียบแบบคู่แสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย naloxone ส่งผลกระทบต่อพฤติกรรมทางเพศในช่วงการผสมพันธุ์ครั้งแรกเนื่องจากสัตว์ naloxone มีระยะเวลาในการตอบสนองนานกว่าการติดเชื้อครั้งแรกอย่างมีนัยสำคัญ (p = 0.002) และ Intromission (p = 0.002) เปรียบเทียบกับการควบคุมน้ำเกลือในวันแรกของการผสมพันธุ์ ผลกระทบ naloxone นี้ต่อพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ครั้งแรกถูกลดทอนลงจากประสบการณ์ทางเพศและไม่ได้สังเกตระหว่างการผสมพันธุ์ครั้งต่อไป (1 ตาราง) นอกจากนี้การบริหาร naloxone ก่อนการผสมพันธุ์ห้าครั้งแต่ละครั้งไม่ได้ช่วยป้องกันการเริ่มต้นพฤติกรรมทางเพศด้วยประสบการณ์ทางเพศ สอดคล้องกับผลกระทบที่เสริมจากประสบการณ์ทางเพศชายที่รับน้ำเกลือแสดงเวลาแฝงที่ลดลงเพื่อเมานต์ (มะเดื่อ. 4B; p = 0.032) การบุกรุก (มะเดื่อ. 4C; p = 0.033) และการพุ่งออกมา (มะเดื่อ. 4D; p <0.001) ในช่วงการผสมพันธุ์ครั้งที่ห้าเปรียบเทียบกับช่วงการผสมพันธุ์ครั้งแรกซึ่งระบุถึงการเอื้อต่อพฤติกรรมทางเพศ ในทำนองเดียวกันผู้ชายที่ได้รับ naloxone จะแสดงเวลาแฝงที่สั้นกว่าอย่างมีนัยสำคัญในการเมานต์ (มะเดื่อ. 4B; p <0.001), intromission (มะเดื่อ. 4C; p <0.001) และการหลั่ง (มะเดื่อ. 4D; p = 0.017) ในวันที่ห้าเมื่อเทียบกับวันแรก นอกจากนี้เพศผู้ที่ได้รับ naloxone ไม่แตกต่างจากการควบคุมน้ำเกลือในเวลาแฝงใด ๆ ในช่วงการผสมพันธุ์ครั้งที่ห้า

รูป 4 

opioids ภายนอกมีบทบาทสำคัญในการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ของพฤติกรรมทางเพศ Aการออกแบบการทดลอง B-D, พารามิเตอร์พฤติกรรมทางเพศสำหรับผู้ชายที่รับน้ำเกลือ (แซล, แท่งสีขาว, n = 11) หรือ naloxone (NLX; แถบสีดำ, n = 12) พร้อมการดูแลระบบ ข้อมูลที่แสดงเป็นเวลาในการตอบสนอง (B; วินาที), intromission (C; วินาที) และการหลั่ง (D; วินาที) ในวันที่ 1 และ 5 เป็นเวลาห้าวันติดต่อกัน นอกจากนี้ข้อมูลจะถูกแสดงสำหรับการทดสอบการผสมพันธุ์สุดท้าย 7 d หลังจากเซสชันการผสมพันธุ์ที่ห้า ข้อมูลถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SEM; + บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวัน 1 และ 5 ภายในการรักษา; * บ่งชี้ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างวันทดสอบและวัน 5 ภายในการรักษา # บ่งชี้ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง naloxone และกลุ่ม saline ภายในวัน

1 ตาราง 

การบริหาร Naloxone ก่อนการผสมพันธุ์เพิ่มเวลาแฝงในการเมานต์และ Intromission เฉพาะในวันแรกของการผสมพันธุ์

ในทางตรงกันข้ามการรักษาด้วย naloxone ในช่วงประสบการณ์ทางเพศก็ส่งผลต่อการบำรุงรักษาพฤติกรรมทางเพศในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย วันทดสอบได้ดำเนินการ 7 d หลังจากช่วงการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายในกรณีที่ไม่มีการฉีด naloxone เพศชายที่ได้รับการควบคุมด้วยน้ำเกลือแสดงให้เห็นถึงการอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศที่คาดหวัง โดยเฉพาะความล่าช้าในการติดตั้ง, การหายใจเข้าและการหลั่งไม่แตกต่างกันระหว่างการจับคู่ครั้งที่ห้าและวันทดสอบสุดท้าย (มะเดื่อ. 4B-D) ในขณะที่ชายที่ได้รับการรักษาด้วย naloxone มีความล่าช้าในการติดเชื้อเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (มะเดื่อ. 4B; p = 0.033) Intromission (มะเดื่อ. 4C; p = 0.036) และการพุ่งออกมา (มะเดื่อ. 4D; p = 0.049) ในวันทดสอบเปรียบเทียบกับเซสชันการจับคู่ที่ห้า นอกจากนี้ในวันทดสอบสัตว์ naloxone พบว่าช้ากว่าเพศชายที่รับน้ำเกลืออย่างมีนัยสำคัญมะเดื่อ. 4B; p = 0.017) และ Intromission (มะเดื่อ. 4C; p = 0.043) ดังนั้นการรักษา naloxone จึงปิดกั้นการบำรุงรักษา แต่ไม่ใช่การเริ่มต้นการพัฒนาสิ่งอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ของพฤติกรรมทางเพศ การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทที่สำคัญสำหรับ VOP ของโดปามีนเซลล์ประสาท VOP ที่เกิดจาก EOP ต่อการแสดงออกในระยะยาวของการเสริมแรงของพฤติกรรมรางวัลธรรมชาติ

มีการทดลองควบคุมเพิ่มเติมหลายครั้งเพื่อพิจารณาว่าผลของการปิดกั้นตัวรับ opioid ต่อการสูญเสียการเสริมแรงในระยะยาวของพฤติกรรมทางเพศเกิดขึ้นจากการขาดการบริหาร naloxone ในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย (มะเดื่อ. 5A,B) มีความเฉพาะเจาะจงต่อการสูญเสียระยะยาว แต่ไม่ใช่การบำรุงรักษาระยะสั้นของการอำนวยความสะดวกในการผสมพันธุ์ (มะเดื่อ. 5E,F) ไม่ได้เกิดจากการสัมผัสกับ naloxone ทุกวันเพียงลำพัง (มะเดื่อ. 5C,D) และไม่ได้เกิดจากการสูญเสียของรางวัลทางเพศในผู้ชายที่รับการรักษาด้วย naloxone (มะเดื่อ. 5G,H) ประการแรกเพื่อแสดงให้เห็นว่าพฤติกรรมทางเพศที่เปลี่ยนแปลงไปในการทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายนั้นไม่ได้เกิดขึ้นเนื่องจากการไม่มี naloxone ไม่ว่าจะเป็น naloxone หรือ saline ในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายกับสัตว์ที่ได้รับการจับคู่กับ naloxoneมะเดื่อ. 5A) มีผลกระทบหลักที่สำคัญของวันผสมพันธุ์ต่อเวลาในการตอบสนองต่อการเมานต์ (มะเดื่อ. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) และ Intromission (2 ตาราง; F(2,27) = 10.686, p = 0.048) ไม่มีผลกระทบหลักของวันผสมพันธุ์ต่อความล่าช้าในการหลั่ง (2 ตาราง; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) เช่นเดียวกับที่อธิบายไว้ข้างต้นการรักษา naloxone ในระหว่างการผสมพันธุ์ไม่ส่งผลกระทบต่อการอำนวยความสะดวกของพฤติกรรมทางเพศในช่วงห้าประสบการณ์ทางเพศครั้งแรก ทั้งสองกลุ่ม (กลุ่มที่ได้รับน้ำเกลือและ naloxone ตามที่กำหนดโดยการรักษาที่ได้รับระหว่างการทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายทั้งสองกลุ่มที่ได้รับ naloxone ระหว่างการผสมพันธุ์) แสดงพฤติกรรมทางเพศที่อำนวยความสะดวกในวัน 5 เปรียบเทียบกับวัน 1มะเดื่อ. 5B; น้ำเกลือ: p = 0.033; naloxone: p = 0.014) และ Intromission (2 ตาราง; น้ำเกลือ: p = 0.034; naloxone: p = 0.026) สัตว์ที่ได้รับ naloxone หรือ saline ในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายนั้นมีเวลาแฝงที่นานกว่าในการติดตั้ง (มะเดื่อ. 5B; น้ำเกลือ: p = 0.018; naloxone: p = 0.029) และ Intromission (2 ตาราง; น้ำเกลือ: p = 0.019; naloxone: p = 0.020) เปรียบเทียบกับวันที่ห้าของการผสมพันธุ์ ดังนั้นการบริหารยา naloxone หรือ saline ในวันทดสอบทันทีก่อนการผสมพันธุ์ไม่มีผลต่อการรักษา naloxone ในระหว่างการมีเพศสัมพันธ์และการลดทอนความสะดวกในระยะยาวของพฤติกรรมทางเพศเหมือนกับสัตว์ที่ไม่ได้รับการฉีดยาใด ๆ ในวันทดสอบการผสมพันธุ์สุดท้ายมะเดื่อ. 4).

รูป 5 

opioids ภายนอกมีความสำคัญในการแสดงออกในระยะยาวของการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากประสบการณ์ของพฤติกรรมทางเพศ Aการออกแบบการทดลองเพื่อทดสอบผลของการรักษาด้วย NLX ในวันทดสอบ B, ติดตั้ง latency ในวันที่ 1 และ 5 เป็นเวลาห้าวันติดต่อกันของการผสมพันธุ์และการทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย (Test) หลังจากการฉีดน้ำเกลือ (สีเทา) หรือ naloxone (สีดำ) ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM * บ่งชี้ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวัน 1 และวัน 5 ภายในการรักษา # บ่งชี้ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างวันทดสอบและวัน 5 ภายในการรักษา Cการออกแบบการทดลองสำหรับการทดลองเพื่อทดสอบผลของ naloxone ก่อนการรักษาเพียงอย่างเดียวโดยไม่มีประสบการณ์ทางเพศต่อพฤติกรรมการผสมพันธุ์ D, ติดตั้ง latency ในวันทดสอบการจับคู่สุดท้าย, 7 วันต่อมา 5 วันของการฉีดน้ำเกลือหรือ naloxone ในกรณีที่ไม่มีการผสมพันธุ์ ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM Eการออกแบบการทดลองสำหรับการทดลองเพื่อทดสอบว่าการรักษาด้วย naloxone ส่งผลต่อการแสดงพฤติกรรมทางเพศระยะสั้นในสัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศหรือไม่ F, เวลาแฝงที่ติดตั้งในวันที่ 1 และวัน 5 ของห้าวันติดต่อกันของการผสมพันธุ์และวันทดสอบการผสมพันธุ์ขั้นสุดท้าย, 1 ทุกวัน 5 ต่อวัน 1 ในที่ที่มีการฉีดน้ำเกลือ (สีเทา) หรือ naloxone (ดำ) ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM * บ่งชี้ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวัน 5 และวัน XNUMX ภายในการรักษา Gการออกแบบการทดลองสำหรับการทดลองเพื่อทดสอบว่าการรักษา naloxone บล็อกผลกระทบของพฤติกรรมทางเพศหรือไม่ H, เวลาที่ใช้ในการผสมพันธุ์ในห้องจับคู่ (เป็นวินาที) ระหว่างการทดสอบ (สีขาว) และหลังการทดสอบ (สีดำ) สำหรับสัตว์ที่ได้รับ naloxone หรือ saline ก่อนการผสมพันธุ์ ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM; * บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการทดสอบก่อน

2 ตาราง 

ข้อมูลที่แสดงเป็นเวลาแฝงถึงการบุกรุกและการหลั่ง (วินาที) จากการทดลองควบคุมที่ดำเนินการเพื่อตรวจสอบว่าผลของการปิดกั้น MOR ต่อการสูญเสียการเสริมแรงในระยะยาวของพฤติกรรมทางเพศที่เกิดขึ้นเป็นอิสระจากการขาดการบริหาร naloxone

เพื่อตรวจสอบว่ามันเป็นการรักษา naloxone เมื่อจับคู่กับประสบการณ์ทางเพศและไม่ซ้ำกับ naloxone ต่อ se ที่ทำให้เกิดความเสื่อมของพฤติกรรมทางเพศ 7 d หลังการรักษาครั้งล่าสุดสัตว์ที่ไร้เดียงสาทางเพศได้รับการฉีด naloxone หรือการฉีดน้ำเกลือห้าครั้งทุกวัน d ภายหลังมะเดื่อ. 5C) ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญสำหรับพารามิเตอร์การผสมพันธุ์ใด ๆ ระหว่างกลุ่มน้ำเกลือและ naloxoneมะเดื่อ. 5D; ความล่าช้าในการติดตั้ง; เวลาแฝง Intromission: น้ำเกลือ 139.7 ± 40.3 เทียบกับ naloxone 121.83 ± 42.55; เวลาในการหลั่ง: saline 887.9 ± 70.0 เทียบกับ naloxone 1050.8 ± 327.31) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า naloxone เพียงอย่างเดียวไม่เพียงพอที่จะเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมทางเพศที่ตามมาคล้ายกับการขาดผลของ naloxone เพียงอย่างเดียวต่อ VTA dopamine ของเซลล์ประสาทของ VTA

เราตั้งสมมติฐานว่าการรักษาด้วย naloxone ในระหว่างการได้รับประสบการณ์ทางเพศทำให้การแสดงออกทางอารมณ์ในระยะยาวของพฤติกรรมทางเพศเอื้ออำนวย เพื่อทดสอบนี้เพิ่มเติมผลของการรักษา naloxone ในระหว่างการผสมพันธุ์ถูกทดสอบต่อพฤติกรรมทางเพศที่ตามมาในระหว่างการทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้ายซึ่งดำเนินการเพียง 1 d หลังจากการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย (การออกแบบการทดลอง; มะเดื่อ. 5E) มีผลกระทบหลักที่สำคัญของวันผสมพันธุ์บนภูเขา (มะเดื่อ. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) และเวลาแฝงในการบุกรุก (2 ตาราง; F(2,20) = 19.041, p <0.001) ไม่มีผลกระทบหลักอย่างมีนัยสำคัญของวันต่อความล่าช้าในการหลั่ง (2 ตาราง; F(2,20) = 3.042, p = 0.070) เช่นเดียวกับที่อธิบายไว้ข้างต้นเพศชายทุกคน (แม้จะมีการรักษาด้วยน้ำเกลือหรือ naloxone) แสดงให้เห็นถึงการอำนวยความสะดวกของพฤติกรรมทางเพศในช่วงห้าประสบการณ์ทางเพศที่ระบุโดยเวลาแฝงที่สั้นลงอย่างมีนัยสำคัญมะเดื่อ. 5F; น้ำเกลือ: p = 0.002; naloxone: p = 0.018) และ Intromission (2 ตาราง; น้ำเกลือ: p = 0.006; naloxone: p = 0.009) ในวันที่ 5 เปรียบเทียบกับวันที่ 1 ในทำนองเดียวกันพฤติกรรมทางเพศที่อำนวยความสะดวกนั้นแสดงให้เห็นในวันทดสอบเมื่อเทียบกับวันที่ 1 บ่งชี้โดยเวลาแฝงที่สั้นกว่าในการติดตั้ง (มะเดื่อ. 5F; น้ำเกลือ: p = 0.001; naloxone: p = 0.020) และ Intromission (2 ตาราง; น้ำเกลือ: p = 0.004; naloxone: p = 0.009) ที่สำคัญกว่าการรักษา naloxone ในระหว่างการผสมพันธุ์ไม่มีผลต่อการอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศเมื่อทำการทดสอบ 1 d หลังจากประสบการณ์ทางเพศโดยไม่ขึ้นอยู่กับการรักษา naloxone ในวันทดสอบการผสมพันธุ์ครั้งสุดท้าย

ในที่สุดเราได้ทดสอบความเป็นไปได้ที่ผลของการลดทอนของ naloxone ในการแสดงออกทางเพศในระยะยาวของพฤติกรรมทางเพศที่อำนวยความสะดวกนั้นเกิดจากการปิดกั้นผลของ naloxone ต่อคุณสมบัติที่คุ้มค่าของพฤติกรรมทางเพศ อย่างไรก็ตาม naloxone บริหารทันทีก่อนการผสมพันธุ์ไม่ได้เปลี่ยนการก่อตัวของ CPP สำหรับการผสมพันธุ์ (มะเดื่อ. 5G) การแนะนำว่าการรักษาด้วย naloxone ไม่ได้เปลี่ยนรางวัลทางเพศ ทั้งกลุ่มที่ได้รับน้ำเกลือและ naloxone ได้สร้าง CPP ที่สำคัญสำหรับพฤติกรรมทางเพศตามที่ระบุโดยการเพิ่มเวลาที่ใช้ในห้องคู่เพศเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (มะเดื่อ. 5H; น้ำเกลือ: p = 0.038; naloxone: p = 0.002) ระหว่างการทดสอบหลังการเปรียบเทียบกับข้อสอบ ดังนั้น naloxone จึงไม่ส่งผลเสียต่อการบำรุงรักษาพฤติกรรมทางเพศโดยการปิดกั้นรางวัลที่เกี่ยวข้องกับพฤติกรรมทางเพศ

การอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศนั้นขึ้นอยู่กับการกระทำ EOP ใน VTA

เพื่อยืนยันว่า EOP ดำเนินการโดยเฉพาะใน VTA เพื่อชักนำให้เกิดการอำนวยความสะดวกในพฤติกรรมทางเพศในระยะยาวการออกแบบการทดลองที่ระบุไว้ใน รูป 3A ซ้ำกับ intra-VTA naloxone infusions มากกว่าการฉีดแบบเป็นระบบ ผลลัพธ์ที่ได้เหมือนกับการบริหารระบบที่อธิบายไว้ข้างต้น มีผลหลักอย่างมีนัยสำคัญของวันผสมพันธุ์กับพารามิเตอร์ทั้งหมดของพฤติกรรมทางเพศ (มะเดื่อ. 6A, เวลาในการตอบสนอง: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; Bแฝง Intromission: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, ความล่าช้าในการหลั่ง: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) และการรักษา naloxone ภายใน VTA สำหรับเวลาแฝงที่จะเมานต์ (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) และ Intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019) Intra-VTA naloxone ไม่ได้ป้องกันพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ในช่วงเริ่มต้นของการผสมพันธุ์ 5 d ของการผสมพันธุ์เนื่องจาก naloxone เพศชายที่ได้รับการรักษาแสดงให้เห็นถึงความล่าช้าในการติดเชื้อที่ลดลง (มะเดื่อ. 6A; p = 0.001) Intromission (มะเดื่อ. 6B; p <0.001) และการหลั่ง (มะเดื่อ. 6C; p = 0.001) ในวันที่ 5 เปรียบเทียบกับวันที่ 1 ผู้ชายที่ได้รับ Naloxone ไม่แตกต่างจากผู้ชายที่รับน้ำเกลือในวันที่ห้าของการผสมพันธุ์ในเวลาแฝงใด ๆ การรักษาด้วย naloxone Intra-VTA เช่นการบริหารระบบทำให้เมาท์เพิ่มขึ้นอย่างมาก (มะเดื่อ. 6A; p <0.001) และเวลาแฝงในการบุกรุก (มะเดื่อ. 6B; p <0.001) ในวันผสมพันธุ์แรกเทียบกับตัวผู้ที่ได้รับน้ำเกลือซึ่งไม่พบในระหว่างการผสมพันธุ์ครั้งต่อ ๆ ไป (ในระหว่างที่ตัวผู้ที่ได้รับ naloxone- และน้ำเกลือไม่แตกต่างกัน) ข้อสังเกตที่ไม่คาดคิดอย่างหนึ่งคือในการทดลองนี้ผู้ชายที่ได้รับน้ำเกลือไม่ได้แสดงการอำนวยความสะดวกอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของเวลาแฝงหรือเวลาแฝงของ intromission (ดังที่แสดงในการทดลองทั้งหมดที่อธิบายไว้ข้างต้น) และเวลาในการตอบสนองของการหลั่งจะสั้นลงในวันที่ห้าเมื่อเทียบกับวันแรก (น้ำเกลือ: p = 0.001)

รูป 6 

opioids ภายนอกใน VTA ไกล่เกลี่ยการอำนวยความสะดวกที่เกิดจากพฤติกรรมทางเพศและการบำรุงรักษาในระยะยาว พารามิเตอร์พฤติกรรมทางเพศสำหรับผู้ชายที่รับน้ำเกลือ (แซล, แท่งสีขาว, n = 8) หรือ NLX (แถบสีดำ n = 6) ด้วยการดูแลภายใน VTA ข้อมูลที่แสดงเป็นเวลาในการตอบสนอง (A) intromission (B) และการพุ่งออกมา (C) ในวันที่ 1 และ 5 เป็นเวลาห้าวันติดต่อกัน นอกจากนี้ข้อมูลจะถูกแสดงสำหรับวันทดสอบการผสมพันธุ์ขั้นสุดท้าย 7 d ในวันถัดไป 5 ในกรณีที่ไม่มีการฉีดน้ำเกลือหรือ naloxone ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM; + บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวัน 1 และ 5 ภายในการรักษา; * บ่งชี้ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างวันทดสอบและวัน 5 ภายในการรักษา # บ่งชี้ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างกลุ่ม naloxone และกลุ่ม Sal ภายในวัน แผนผังภาพวาดของส่วน VTA โคโรนา (H, −4.60; I, −5.00; J, −5.25 จาก bregma) แสดงบริเวณที่ฉีด VTA สำหรับสัตว์ทุกตัวในห้องทดลอง 5 (น้ำเกลือ, สีขาว, สีเทา, สีเทา, สีเทา) ใช้ภาพวาดเทมเพลตจาก Swanson Brain Maps (สเวนสัน, 2004) Cannulas เป็นแบบทวิภาคี แต่บริเวณที่ฉีดจะแสดงเพียงด้านเดียวเพื่อความสะดวกในการนำเสนอ fr, Fasciculus retroflexus; ML, lemniscus ที่อยู่ตรงกลาง; SN, substantia nigra

การรักษาด้วยยา naxolone ภายในตัวเป็นการปิดกั้นการบำรุงรักษาพฤติกรรมทางเพศที่อำนวยความสะดวกในเพศชายที่มีประสบการณ์ทางเพศคล้ายกับผลของ naloxone ในระบบ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในวันทดสอบสุดท้ายชายที่ได้รับการรักษาด้วย naloxone มีเวลาแฝงที่นานกว่าในการเมานต์ (มะเดื่อ. 6A; p = 0.011) Intromission (มะเดื่อ. 6B; p = 0.010) และการพุ่งออกมา (มะเดื่อ. 6C; p = 0.015) เปรียบเทียบกับเซสชันการผสมพันธุ์ที่ห้าของพวกเขาและเปรียบเทียบกับตัวผู้ที่รับน้ำเกลือในวันทดสอบสุดท้าย (มะเดื่อ. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008) ในทางตรงกันข้ามสัตว์ที่ได้รับการบำบัดด้วยน้ำเกลือไม่ได้มีความล่าช้าในการติดตั้งและการหายใจที่ไม่แน่นอนระหว่างวันทดสอบสุดท้ายและวันที่ 5 ของการผสมพันธุ์ ผลกระทบเหล่านี้มีเฉพาะกับการส่งมอบ naloxone ให้กับ VTA เนื่องจากผู้ชายที่มีไซต์การฉีดยาใกล้เคียง แต่ไม่ได้กำหนดเป้าหมาย VTA (มะเดื่อ. 6D; n = 3) แสดงการอำนวยความสะดวกในระยะยาวของพฤติกรรมทางเพศคล้ายกับการควบคุมด้วยเกลือ (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 และแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับสัตว์ intra-VTA naloxone ในวันทดสอบการผสมพันธุ์ อิลลินอยส์: p = 0.029; EL: p = 0.0395)

ต้องมีการดำเนินการ EOP สำหรับการเปิดใช้งานระบบประสาทที่กระตุ้นด้วยการกระตุ้นทางเพศสัมพันธ์

จากการค้นพบในตอนนี้เราตั้งสมมติฐานว่าการกระตุ้นด้วย EOP ใน VTA ในระหว่างการผสมพันธุ์และการลดขนาด Vop โดปามีน soma ของ VTA ที่ตามมานั้นมีความสำคัญสำหรับการระบุลักษณะของสิ่งกระตุ้นเพื่อการจับคู่สิ่งเร้า เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้ผลของการปิดกั้นตัวรับ opioid ในระหว่างการผสมพันธุ์ต่อกิจกรรมของระบบประสาทที่เกิดจากการสัมผัสกับการชี้นำตามบริบทตามเงื่อนไขที่ทำนายเงื่อนไขการให้รางวัลทางเพศ (การเชื่อมโยงบริบททางเพศ) สัตว์ที่ไร้เดียงสาทางเพศก็สัมผัสกับสิ่งแวดล้อม แต่สิ่งเหล่านี้ไม่เกี่ยวข้องกับประสบการณ์การผสมพันธุ์ก่อนหน้า ในที่สุดระดับ pERK พื้นฐานถูกกำหนดในกลุ่มควบคุมที่มีประสบการณ์ทางเพศและไร้เดียงสาที่ยังคงอยู่ในกรงที่บ้านและไม่ได้สัมผัสกับตัวชี้นำใด ๆ (-No Cue) การยืนยันและขยายการค้นพบก่อนหน้า (Balfour et al., 2004) การได้รับการชี้นำตามบริบทที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลทางเพศก่อนหน้านั้นเพิ่มการแสดงออกของ pERK อย่างมีนัยสำคัญในเพศชายที่มีประสบการณ์ทางเพศใน NAc (มะเดื่อ. 7) และ mPFC (มะเดื่อ. 8A-C) แต่ไม่ทำให้เกิดการกระตุ้นของเซลล์ประสาทใน BLA (มะเดื่อ. 8D) หรือ CPu (ไม่แสดงข้อมูล) มีผลกระทบหลักของการเปิดรับคิวในแกน NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) และ PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) และการรักษา naloxone ในแกน NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) และ PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019) มีปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญในแกน NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) และ IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022) ประการแรกการสัมผัสคิวที่เกี่ยวข้องกับการผสมพันธุ์เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ pERK ในสัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศด้วยเกลือ (Exp Sal ​​+ Cue) เปรียบเทียบกับการควบคุมที่ไม่ได้สัมผัสกับตัวชี้นำใด ๆ และนำมาจากกรงบ้าน (Exp Sal-No Cue) ในแกน NAcมะเดื่อ. 7A; p <0.001) และ mPFC อนุภูมิภาค ACA (มะเดื่อ. 8A; p = 0.001), PL (มะเดื่อ. 8B; p = 0.003) และ IL (มะเดื่อ. 8C; p = 0.029) ในทางตรงกันข้ามในสัตว์ที่ได้รับการบำบัดด้วยน้ำเกลือการสัมผัสกับการชี้นำตามบริบทซึ่งไม่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลทางเพศไม่ได้ชักนำให้เกิด pERK ในบริเวณสมองใด ๆ (Naive Sal + Cue เทียบกับไร้เดียงสา Sal-No Cue; มะเดื่อ 7, 8) แสดงให้เห็นว่าการเหนี่ยวนำ pERK นั้นจำเพาะกับการสัมผัสของตัวชี้นำที่เกี่ยวข้องกับประสบการณ์ทางเพศ ยิ่งกว่านั้นประสบการณ์ทางเพศเพียงอย่างเดียวไม่ได้เปลี่ยนแปลงการแสดงออกของ pERK พื้นฐานในบริเวณสมองใด ๆ เนื่องจากไม่มีความแตกต่างระหว่างกลุ่มที่ถูกนำมาจากกรงบ้านไม่ว่าจะไร้เดียงสาทางเพศหรือประสบการณ์และรับการบำบัดด้วยน้ำเกลือหรือ naloxone

รูป 7 

การกระทำ opioid ภายนอกเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการกระตุ้นระบบประสาทใน NAc ที่เกิดจากตัวชี้นำที่มีเพศสัมพันธ์ จำนวนเซลล์ pERK-IR ต่อมม2 ในนิวเคลียส accumbens แกน (A) และเชลล์ (B) ในเพศที่ไร้เดียงสา (สีขาว) และสัตว์ที่มีประสบการณ์ (Exp; black) ที่ถูกปรับสภาพด้วย NLX ที่เป็นระบบหรือ Saline (Sal) ในระหว่างการผสมพันธุ์ (ตัวผู้ Exp) หรือการจัดการ (ตัวผู้ไร้เดียงสา) กลุ่มต่าง ๆ ได้รับการสัมผัสกับบริบท (คิว) ซึ่งเป็นคู่ที่เกี่ยวข้องกับตัวชี้นำในการสืบพันธุ์เพศชายและตัวชี้นำที่เป็นกลางในสัตว์ไร้เดียงสาหรือนำมาจากกรงบ้าน (ไม่มีคิว; ไม่มีคิว; ข้อมูลถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SEM; * บ่งชี้ถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมด้วยเกลือที่ไม่มีการสัมผัสคิว (Naive Sal-No Cue และ Exp Sal-No Cue) # บ่งชี้ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม Exp Cue ที่ได้รับการปฏิบัติด้วย Sal (Exp Sal ​​+ Cue) ภาพตัวแทนของเซลล์ pERK-IR ต่อมม2 ในแกน NAc ของผู้ชายที่มีประสบการณ์ทางเพศกับ Sal (C, D) หรือ NLX (E, F) ที่ถูกนำมาจากกรงบ้าน (ไม่มีคิว, C, E) หรือสัมผัสกับบริบทที่เกี่ยวข้องกับการผสมพันธุ์ (คิว; D, F). N = 4 แต่ละกลุ่มยกเว้น Naive NLX (ไม่มีคิว) n = 3 ac, การมอบอำนาจล่วงหน้า สเกลบาร์, 100 μm

รูป 8 

ผลกระทบของ naloxone ต่อการแสดงออกของการจับคู่การแสดงออกของ pERK ในบริเวณเป้าหมาย VTA อื่น จำนวนเซลล์ pERK-IR ต่อมม2 ในเพศที่ไร้เดียงสาทางเพศ (สีขาว) และสัตว์ที่มีประสบการณ์ (Exp; black) ที่ได้รับการเตรียมด้วยระบบ NLX หรือ saline (Sal) ระหว่างการผสมพันธุ์และได้สัมผัสกับตัวชี้นำบริบท (Cue) หรือกรงที่บ้าน (ไม่มีตัวชี้นำ) ใน ACAA) PL (B), IL (C) และ BLA (D) ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM; * บ่งชี้ถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมด้วยเกลือที่ไม่มีการสัมผัสคิว (Naive Sal-No Cue และ Exp Sal-No Cue) # บ่งชี้ถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมด้วยการสัมผัสทางเพศที่ไร้เดียงสาด้วยเชื้อ Sal

ในการสนับสนุนสมมติฐานของเราการรักษา naloxone ในช่วงประสบการณ์ทางเพศได้ลดการเหนี่ยวนำ pERK อย่างมีนัยสำคัญโดยการชี้นำที่มีเพศสัมพันธ์ การแสดงออกของ pERK ในผู้ป่วยที่ได้รับยาคิวคิว (ประสบการณ์ NL คิว + คิว) เหล่านี้ไม่แตกต่างจากการแสดงออกพื้นฐานของ pERK ในกลุ่มควบคุมที่ไร้เดียงสาหรือมีประสบการณ์ทางเพศใด ๆ ที่นำมาจากกรงที่บ้าน ไม่มีคิว) นอกจากนี้การแสดงออกของ PERK ในผู้ป่วยที่ได้รับการสัมผัสคิว naloxone (Exp NLX + Cue) ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับสัตว์ที่ได้รับการสัมผัสจากการแช่น้ำเกลือ (EXP Sal + Cue) ในแกน NAc (มะเดื่อ. 7A; p = 0.002) และภูมิภาคย่อย mPFC (มะเดื่อ. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, อิลลินอยส์: p = 0.015)

ในเปลือก NAc การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางไม่ได้ผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของปัจจัยที่ได้รับการสัมผัสและการรักษาด้วย naloxone อย่างไรก็ตามจากการเปรียบเทียบแบบคู่พบว่าการได้รับสัญญาณคิวทำให้ PERK ในกลุ่มที่มีประสบการณ์ทางเพศสัมพันธ์กับน้ำเกลือ (EXP SAL + Cue) เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมไร้เดียงสาที่ไม่มีคิวแบบสัมผัสคิว (มะเดื่อ. 7B; ไร้เดียงสา SAL-No Cue: p = 0.0163)

การสนทนา

การศึกษาในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่า EOP ที่ทำหน้าที่ใน VTA ในระหว่างพฤติกรรมทางเพศซึ่งเป็นพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติทำให้เกิดการลดขนาดโซม่าของเซลล์โดปามีนที่มีขนาดชั่วคราว แต่ชั่วคราว การลดขนาดของ Soma นั้นไม่พบในเซลล์ประสาทที่ไม่ใช่โดพามีน VTA หรือในเซลล์โดปามีนในนิกิร่า substantia ใกล้เคียงซึ่งบ่งบอกว่าการเปลี่ยนแปลงนี้เป็นเฉพาะเซลล์โดปามีน VTA โดปามีนพลาสติก VTA นี้มีลักษณะคล้ายกับที่เกิดจากการได้รับสาร opiate แบบเรื้อรัง (Sklair-Tavron และคณะ, 1996; รุสโซและคณะ, 2007; Mazei-Robison และคณะ, 2011) และทำให้เกิดความอดทนคล้าย ๆ กับรางวัลมอร์ฟีนจากภายนอก (มอร์ฟีน) เราแสดงให้เห็นว่าพลาสติกโดปามีน VTA มีความสำคัญสำหรับระยะยาว (การบำรุงรักษา) แต่ไม่ใช่ระยะสั้น (การพัฒนา) การเสริมสร้างพฤติกรรมทางเพศและกิจกรรมของระบบประสาทที่กระตุ้นด้วยคิว (pERK) ที่เกี่ยวข้องกับรางวัลในภูมิภาคเป้าหมาย VTA: NAc และ mPFC การค้นพบเหล่านี้บ่งบอกถึงบทบาทของพลาสติก VTA โดปามีนในการแสดงออกในระยะยาวของการกระตุ้นแรงจูงใจของการชี้นำการทำนายตามธรรมชาติหรือรางวัลความทรงจำ

มีการบันทึกไว้อย่างดีว่าประสบการณ์ทางเพศนั้นส่งผลให้เกิดพฤติกรรมทางเพศที่ตามมารวมถึงการเริ่มต้นการผสมพันธุ์และประสิทธิภาพที่เพิ่มขึ้น (Balfour et al., 2004; Pitchers และคณะ, 2010a,b, 2012) การอำนวยความสะดวกหรือการเสริมสร้างพฤติกรรมทางเพศนี้ได้รับการดูแลอย่างน้อย 28 d หลังจากผสมพันธุ์ (Pitchers และคณะ, 2012) นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่าพฤติกรรมทางเพศและการชี้นำที่มีเงื่อนไขในการทำนายผลรางวัลทางเพศทำให้เกิดการ MOR internalization ใน VTA และกระตุ้นให้เกิดการกระตุ้นของเซลล์ประสาทในระบบ mesolimbic รวมถึงใน VTA (dopamine และ nondopamine neurons), NAc PFC และ BLABalfour et al., 2004, 2006) มันเป็นที่ยอมรับดีโดปามีนเซลล์ประสาท VTA มีบทบาทสำคัญในการเรียนรู้และแสดงที่มาของแรงจูงใจของสิ่งเร้าที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล (Berridge และ Robinson, 1998; Berridge และคณะ, 2009; Flagel et al., 2011) และมีความสำคัญสำหรับการทำนายผลตอบแทน (ชูลท์ซ 2010) การค้นพบในปัจจุบันเพิ่มขึ้นจากความรู้ในปัจจุบันของเราโดยการแสดงให้เห็นว่าการทำ VTA neuroplasticity นั้นเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการทำงานเหล่านี้และขึ้นอยู่กับการเปิดใช้งาน MOR โดย EOP ใน VTA ปัจจุบันยังไม่เป็นที่รู้จักซึ่ง EOP เป็นลิแกนด์ MOR ที่ทำหน้าที่ใน VTA ระหว่างพฤติกรรมทางเพศชาย แม้ว่า endorphin และ enkephalin ทั้งสองนั้นมีส่วนเกี่ยวข้องในการสร้างแรงจูงใจให้กับผู้เสริมอาหาร (เฮย์เวิร์ดและคณะ 2002) สิ่งนี้ยังคงเป็นที่ยอมรับสำหรับพฤติกรรมทางเพศชาย ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าเซลล์ประสาท end-endorphin ไม่ได้เปิดใช้งานในระหว่างการผสมพันธุ์และไม่มีการเพิ่มขึ้นของ POMC mRNA; ดังนั้นการแนะนำว่าβ endorphin อาจไม่ใช่ EOP ที่สำคัญที่ทำหน้าที่ใน VTA ระหว่างการผสมพันธุ์ (Davis et al., 2007) พลาสติกโดปามีนแบบ VTA นี้มีความสำคัญต่อการทำงานของระบบประสาทใน mPFC, NAc และ VTA หลังจากได้รับผลกระทบทางเพศจากการทำนายทางสิ่งแวดล้อม นอกจากนี้ VTA โดปามีนยังมีความสำคัญต่อการแสดงออกในระยะยาวของการเริ่มต้นที่เพิ่มขึ้นและประสิทธิภาพของพฤติกรรมทางเพศ ในทางตรงกันข้าม VTA neuroplasticity ที่เกิดจากประสบการณ์ทางเพศไม่จำเป็นสำหรับการตอบสนองความสุขเป็นรางวัลทางเพศ (กำหนดโดย CPP) และการอำนวยความสะดวกในระยะสั้นของแรงจูงใจทางเพศและการปฏิบัติงานMehrara และ Baum, 1990) แต่ข้อมูลแนะนำว่า VTA dopamine neuroplasticity เป็นสื่อกลางในระยะยาว (7 d หลังจากประสบการณ์ทางเพศครั้งล่าสุด; Pitchers และคณะ, 2012) การแสดงออกของ "ต้องการ" ของรางวัลทางเพศและการตอบสนองแรงบันดาลใจที่มีความคิดริเริ่มที่จะชี้นำการจับคู่มิลเลอร์และ Baum, 1987; Berridge และ Robinson, 1998).

สัตว์ที่มีประสบการณ์ทางเพศแสดงให้เห็นถึงความอดทนต่อการให้รางวัลมอร์ฟีนคล้ายกับผลของการหมุนพวงมาลัยในหนูทดลองพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติอื่น ๆ ผลที่ถูกบล็อกด้วยการรักษาด้วย naloxone (Lett et al., 2001, 2002) และมุ่งมั่นที่จะขึ้นอยู่กับ VTA ของโดปามีนเซลล์พลาสติก (การค้นพบในปัจจุบัน) เช่นเดียวกับการรับรางวัลตามธรรมชาติการได้รับมอร์ฟีน opiates หรือเฮโรอีนซ้ำหลายครั้งทำให้ลดขนาดชั่วคราวของ VTA dopamine soma (Sklair-Tavron และคณะ, 1996; Spiga และคณะ, 2003; รุสโซและคณะ, 2007; Mazei-Robison และคณะ, 2011) ยิ่งไปกว่านั้นการได้รับยาที่มีระยะเวลาสั้น ๆ ในการถอนทำให้เกิดความทนทานต่อผลตอบแทนเนื่องจากเกี่ยวข้องกับการใช้ยาในปริมาณที่สูงกว่าShippenberg และคณะ, 1987; รุสโซและคณะ, 2007) และทำให้สัตว์ที่ดูแลตนเองเพิ่มการบริโภคยา (Ahmed et al., 2000; Walker และคณะ, 2003) ดังนั้น EOP และ opiates ทำหน้าที่บนพื้นผิวของระบบประสาททั่วไปเพื่อชักนำให้เกิดความทนทานต่อรางวัลในระหว่างการถอนต้นซึ่งอาจสะท้อนให้เห็นถึงกลไก homeostatic ชดเชยเพื่อตอบโต้การกระตุ้นโดยการสัมผัสซ้ำ ๆ (Koob และ Le Moal, 2005) ในทางตรงกันข้ามในช่วงระยะยาวยาเสพติดยาเสพติดยาเสพติดยาเสพติดในระยะยาว, ความอดทนจะถูกเปลี่ยนกลับเป็นความไวต่อคุณสมบัติที่คุ้มค่ากับยาเสพติด (แฮร์ริสและแอสตันโจนส์ 2003; แอสตันโจนส์และแฮร์ริส 2004; Harris และ Gewirtz, 2004) สิ่งที่น่าสนใจคือประสบการณ์ทางเพศตามมาด้วยช่วงเวลาเลิกบุหรี่ทางเพศของ 7 – 28 d ถูกค้นพบว่าก่อให้เกิดความรู้สึกไวต่อการรับรางวัล psychostimulant (Pitchers และคณะ, 2010a) ซึ่งขึ้นอยู่กับการแสดงออก deltaFosB การผสมพันธุ์และการรับ Dopamine ตัวรับ 1 ใน NAc (Pitchers และคณะ, 2013) ดังนั้นประสบการณ์การให้รางวัลทางเพศทำให้เกิดความอดทนต่อการให้รางวัลและยากระตุ้นจิตประสาทในเวลาเดียวกันพร้อม ๆ กันแม้ว่าจะมีการงดเว้นการมีเพศสัมพันธ์กับการทนต่อการให้รางวัลมอร์ฟีนนานขึ้น เราวางตัวว่าผลตรงข้ามเหล่านี้ในการให้รางวัลยาอาจจะเป็นสื่อกลางโดยรูปแบบต่าง ๆ ของระบบประสาทในพื้นที่ต่าง ๆ ของระบบ mesolimbic: การกระทำ VTA EOP และพลาสติกโดปามีนเป็นสื่อกลางในการควบคุมการให้รางวัลยาเสพติด (การศึกษาในปัจจุบัน) (Pitchers และคณะ, 2013) เหตุการณ์ทั้งสองนี้สามารถช่วยเพิ่มการใช้ยา (Ahmed และ Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker และคณะ, 2003).

กลไกระดับโมเลกุลที่ EOP มีอิทธิพลต่อเซลล์ประสาทโดปามีน VTA ในระหว่างพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติยังไม่ทราบ เส้นทาง IRS2-Akt-mTORC2 เป็นตัวกลางไกล่เกลี่ยขนาด Soma ที่ลดลงใน VTA ที่เกิดจากมอร์ฟีนซ้ำ ๆ (Jaworski et al., 2005; รุสโซและคณะ, 2007; Mazei-Robison และคณะ, 2011) การบริหารมอร์ฟีนซ้ำ ๆ ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในขนาดของเซลล์โดปามีนใน VTA สามารถป้องกันได้โดยการฉีดเข้าเส้นเลือดดำภายใน VTA ของปัจจัย neurotrophic ที่มาจากสมอง (BDNF; Sklair-Tavron และ Nestler, 1995) BDNF เปิดใช้งานเส้นทางนี้ผ่านการส่งสัญญาณ TrkB (รุสโซและคณะ, 2007) ตัวรับไคเนสที่มีความสัมพันธ์สูงสำหรับ BDNF และเป็นส่วนหนึ่งของเส้นทาง IRS2-Akt (Seroogy and Gall, 1993; Numan และ Seroogy, 1999) และแสดงในโดปามีนและเซลล์ประสาท GABA ใน VTA การลดลงของส่วนประกอบต่าง ๆ ของเส้นทาง IRS2-Akt โดยใช้เทคโนโลยีการถ่ายโอนยีนเวกเตอร์ของไวรัสเลียนแบบผลกระทบจากการสัมผัสกับยาเสพติดเรื้อรัง นอกจากนี้เอฟเฟกต์ของการเปิดรับแสงสามารถช่วยได้โดยการฟื้นฟูเส้นทางการส่งสัญญาณนี้ (รุสโซและคณะ, 2007) และการแสดงออกที่มากเกินไปขององค์ประกอบของ mTORC2 ช่วยป้องกัน Morphine-induced VTA dopamine soma reduction (Mazei-Robison และคณะ, 2011) ดังนั้นงานก่อนหน้านี้ที่ตรวจสอบผลกระทบของ opiates เรื้อรังต่อขนาด VTA dopamine soma แสดงให้เห็นว่า downregulation ที่เกิดจากมอร์ฟีนของเส้นทาง IRS2-Akt-mTOR นั้นเพียงพอและจำเป็นสำหรับผลกระทบนี้ (Mazei-Robison และ Nestler, 2012) ดังนั้นจึงเป็นที่ดึงดูดที่จะคาดการณ์ว่าผลกระทบของประสบการณ์ทางเพศต่อ VTA dopamine neuroplasticity นั้นมีความคล้ายคลึงกันโดย BDNF และ IRS2-Akt-mTORC2

โดยสรุปการศึกษาในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่า VTA neuroplasticity เกิดจากประสบการณ์กับพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติโดยเฉพาะอย่างยิ่งพฤติกรรมทางเพศชายซ้ำ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง EOP ทำหน้าที่ใน VTA เพื่อลดขนาดโดปามีนซึ่งเป็นสมมติฐานที่เกี่ยวข้องกับความตื่นเต้นง่ายของระบบประสาทที่เพิ่มขึ้นและการส่งออกโดปามีนน้อยลงส่งผลให้ระบบ hypodopaminergic และเปลี่ยนแปลงระบบ mesolimbic เพื่อตอบสนองการชี้นำทางเพศ นอกจากนี้ Vpl neuroplasticity มีความสำคัญต่อแรงจูงใจและรางวัลความทรงจำ แต่ไม่ใช่สำหรับผลกระทบทางอารมณ์จากพฤติกรรมทางเพศ ในที่สุด VTA neuroplasticity ที่เกิดจากพฤติกรรมการให้รางวัลตามธรรมชาติในระยะเวลาสั้น ๆ ของการงดเว้นการให้รางวัลมีผลต่อรางวัลยาเสพติดและอาจส่งผลกระทบต่อความอ่อนแอต่อการพัฒนาของการติดยาเสพติด

เชิงอรรถ

  • รับมกราคม 12, 2014
  • ได้รับการแก้ไขพฤษภาคม 17, 2014
  • ยอมรับพฤษภาคม 20, 2014
  • งานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนสนับสนุนจากสถาบันวิจัยสุขภาพแคนาดาให้แก่ LMC และสภาวิทยาศาสตร์ธรรมชาติและวิศวกรรมการวิจัยถึง KKP

  • ผู้เขียนประกาศไม่มีผลประโยชน์ทางการเงินในการแข่งขัน

  • ควรติดต่อจดหมายไปยัง Dr Lique M. Coolen, ศูนย์การแพทย์มหาวิทยาลัยมิสซิสซิปปี, ภาควิชาสรีรวิทยาและชีวฟิสิกส์, 2500 North State Street, แจ็กสัน, MS 39216-4505 [ป้องกันอีเมล]

อ้างอิง

    1. Agmo A

    (1997) พฤติกรรมทางเพศของหนูชาย Brain Res Protoc สมอง 1: 203 209-

    1. อาเหม็ด SH
    2. Koob GF

    (1998) การเปลี่ยนผ่านจากการบริโภคยาในระดับปานกลางถึงมากเกินไป: การเปลี่ยนแปลงในจุด hedonic set วิทยาศาสตร์ 282: 298 300-

    1. อาเหม็ด SH
    2. Koob GF

    (1999) การเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องในจุดที่กำหนดสำหรับการจัดการโคเคนด้วยตนเองหลังจากการเพิ่มในหนู Psychopharmacology 146: 303 312-

    1. อาเหม็ด SH
    2. วอล์คเกอร์ JR
    3. Koob GF

    (2000) การเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องของแรงจูงใจที่จะใช้เฮโรอีนในหนูที่มีประวัติของการเพิ่มขึ้นของยาเสพติด Neuropsychopharmacology 22: 413 421-

    1. อาเหม็ด SH
    2. เคนนี PJ
    3. Koob GF
    4. Markou A

    (2002) หลักฐานทางประสาทวิทยาเกี่ยวกับอัลลอฮasisที่มีความสัมพันธ์กับการใช้โคเคนที่เพิ่มขึ้น Nat Neurosci 5: 625 626-

    1. อาเหม็ด SH
    2. หลินดี
    3. Koob GF
    4. พาร์สันส์ LH

    (2003) การเพิ่มขึ้นของการจัดการโคเคนด้วยตนเองไม่ได้ขึ้นอยู่กับนิวเคลียสโคเคนที่เหนี่ยวนำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงระดับ accubens โดพามีน J Neurochem 86: 102 113-

    1. แอสตันโจนส์
    2. แฮร์ริส GC

    (2004) พื้นผิวสมองสำหรับการค้นหายาเสพติดที่เพิ่มขึ้นในระหว่างการถอนออกเป็นเวลานาน Neuropharmacology 47: 167 179-

    1. ฟอร์ ME
    2. ยูแอล
    3. ทำให้เย็นลง LM

    (2004) พฤติกรรมทางเพศและการชี้นำสิ่งแวดล้อมที่เกี่ยวข้องกับเพศเปิดใช้งานระบบ mesolimbic ในหนูตัวผู้ Neuropsychopharmacology 29: 718 730-

    1. ฟอร์ ME
    2. น้ำตาล JL
    3. ยูแอล
    4. ทำให้เย็นลง LM

    (2006) การมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของ efferents จากเยื่อหุ้มสมอง prefrontal ตรงกลางกับการเปิดใช้งานระบบประสาทตามพฤติกรรมทางเพศในหนูชาย ประสาทวิทยาศาสตร์ 137: 1259 1276-

    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) โปรตีน Neurofilament และระบบโดปามีน mesolimbic: การควบคุมร่วมกันโดยมอร์ฟีนเรื้อรังและโคเคนเรื้อรังในพื้นที่บริเวณหน้าท้องของหนู Neurosci J 12: 2165 2176-

    1. Berridge KC
    2. Robinson TE

    (1998) บทบาทของโดปามีนคืออะไรในการให้รางวัล: ผลกระทบทางความชอบ, การให้รางวัลการเรียนรู้หรือการกระตุ้นสิ่งจูงใจ Brain Res Brain Res Rev 28: 309 369-

    1. Berridge KC
    2. โรบินสัน TE
    3. Aldridge JW

    (2009) การแยกองค์ประกอบของรางวัล:“ ความชอบ”,“ ต้องการ” และการเรียนรู้ Pharmacol Curr Minnes 9: 65 73-

    1. บลัมเค
    2. เวอร์เนอร์ที
    3. Carnes S
    4. คาร์เนสพี
    5. Bowirrat A,
    6. จิออร์ดาโนเจ
    7. Oscar-Berman M,
    8. โกลด์เอ็ม

    (2012) เพศยาเสพติดและการหมุนของก้อนหิน 'n': ตั้งสมมติฐานการกระตุ้น mesolimbic ทั่วไปเป็นหน้าที่ของการให้ความหลากหลายของยีนที่ให้รางวัล ยาเสพติดทางจิตเวช J 44: 38 55-

    1. ชู NN
    2. Zuo YF
    3. Meng L
    4. ลี DY
    5. ฮัน JS
    6. Cui CL

    (2007) การกระตุ้นด้วยไฟฟ้าจากอุปกรณ์ต่อพ่วงกลับการลดขนาดของเซลล์และเพิ่มระดับ BDNF ในบริเวณหน้าท้องส่วนล่างในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนเรื้อรัง สมอง Res 1182: 90 98-

    1. เดวิสบริติชแอร์เวย์
    2. ฟิตซ์เจอรัลด์ฉัน
    3. น้ำตาล JL
    4. Amstalden KA
    5. ทำให้เย็นลง LM

    (2007) การกระตุ้นเซลล์ประสาท POMC ในระหว่างการเร้าอารมณ์ทั่วไป แต่ไม่ใช่พฤติกรรมทางเพศในหนูตัวผู้ Behav Neurosci 121: 1012 1022-

    1. Fiorino DF
    2. Coury A
    3. Phillips AG

    (1997) การเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกในนิวเคลียส accumbens dopamine efflux ระหว่างผล Coolidge ในหนูตัวผู้ Neurosci J 17: 4849 4855-

    1. Flagel SB
    2. คลาร์คเจเจ
    3. โรบินสัน TE
    4. Mayo L
    5. Czuj A
    6. ฉันจะ
    7. Akers CA,
    8. คลินตัน SM
    9. ฟิลลิป PE
    10. Akil H

    (2011) บทบาทเฉพาะสำหรับโดปามีนในการกระตุ้นการเรียนรู้ - รางวัล ธรรมชาติ 469: 53 57-

    1. Frohmader KS
    2. Pitchers KK
    3. ฟอร์ ME
    4. ทำให้เย็นลง LM

    (2010a) ความสุขในการผสม: ทบทวนผลกระทบของยาต่อพฤติกรรมทางเพศในมนุษย์และสัตว์จำลอง Behav Horm 58: 149 162-

    1. Frohmader KS
    2. Wiskerke J
    3. ปรีชาญาณ RA
    4. Lehman MN,
    5. ทำให้เย็นลง LM

    (2010b) ยาบ้าทำหน้าที่ย่อยประชากรของเซลล์ประสาทที่ควบคุมพฤติกรรมทางเพศในหนูตัวผู้ ประสาทวิทยาศาสตร์ 166: 771 784-

    1. แฮร์ริส AC
    2. Gewirtz JC

    (2004) ตกใจสูงขึ้นในระหว่างการถอนจากมอร์ฟีนเฉียบพลัน: รูปแบบของการถอนยาเสพติดและความวิตกกังวล Psychopharmacology 171: 140 147-

    1. แฮร์ริส GC
    2. แอสตันโจนส์

    (2003) การเปลี่ยนแปลงแรงจูงใจและการเรียนรู้หลังจากถอนยาเสพติด: หลักฐานสำหรับ dysregulation นานของการประมวลผลรางวัล Neuropsychopharmacology 28: 865 871-

    1. เฮย์เวิร์ดแมริแลนด์
    2. Pintar JE
    3. ต่ำ MJ

    (2002) การขาดดุลของรางวัลที่ได้รับเลือกในหนูที่ไม่มีเบต้าเอนดอร์ฟินและเอ็นคิฟาลิน Neurosci J 22: 8251 8258-

    1. Hoebel BG
    2. Avena NM
    3. Bocarsly ME
    4. รดาพี

    (2009) การเสพติดตามธรรมชาติ: โมเดลพฤติกรรมและวงจรตามการติดน้ำตาลในหนู J Addict Med 3: 33 41-

    1. Hyman SE
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) กลไกประสาทของการติด: บทบาทของการเรียนรู้และความทรงจำที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล Annu Rev Neurosci 29: 565 598-

    1. Ikemoto S
    2. Kohl RR
    3. แมกไบรด์ WJ

    (1997) การปิดกั้นตัวรับ GABA (A) ในบริเวณหน้าท้องส่วนหน้าเพิ่มระดับเซลล์นอกเซลล์ของโดปามีนในนิวเคลียสของหนู J Neurochem 69: 137 143-

    1. Jaworski J
    2. Spangler S
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC
    5. Sheng M

    (2005) การควบคุมการทำลายของ dendritic โดย phosphoinositide-3′-kinase-Akt-mammalian เป้าหมายของเส้นทาง rapamycin Neurosci J 25: 11300 11312-

    1. จอห์นสัน SW
    2. ร.ต.อ.

    (1992) Opioids กระตุ้นเซลล์โดปามีนโดยการทำ hyperpolarization Neurosci J 12: 483 488-

    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P
    3. Kalivas PW

    (1992) กฎระเบียบของการปลดปล่อยโดปามีน somatodendritic ในพื้นที่หน้าท้องโดย opioids และ GABA: การศึกษาในไมโครดีซิสไตเทียม Neurosci J 12: 2623 2632-

    1. Koob GF
    2. เลอโมล

    (2005) ความแข็งแรงของรางวัลด้านประสาทวิทยาและ "ด้านมืด" ของการติดยาเสพติด Nat Neurosci 8: 1442 1444-

    1. Lennette DA

    (1978) สื่อการติดตั้งที่ได้รับการปรับปรุงสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ Am J Clin Pathol 69: 647 648-

    1. Lett BT
    2. ให้ VL
    3. เกาะ MT

    (2001) Naloxone ลดการตั้งค่าสถานที่ที่มีการเหนี่ยวนำโดยล้อวิ่งในหนู Physiol Behav 72: 355 358-

    1. Lett BT
    2. ให้ VL
    3. เกาะ MT
    4. Flynn G

    (2002) ประสบการณ์ก่อนหน้านี้ที่มีการวิ่งด้วยล้อช่วยให้สามารถทนต่อผลกระทบที่ได้รับจากมอร์ฟีน Pharmacol Biochem Behav 72: 101 105-

    1. Matthews RT
    2. ภาษาเยอรมัน DC

    (1984) หลักฐานทางอิเล็กโทรวิทยาสำหรับการกระตุ้นของเซลล์โดปามีนบริเวณหน้าท้องหนูโดยใช้มอร์ฟีน ประสาทวิทยาศาสตร์ 11: 617 625-

    1. Mazei-Robison MS,
    2. คูเจดับบลิว
    3. ฟรีดแมน AK
    4. Lansink CS
    5. Robison AJ
    6. Vinish M
    7. กฤษณะวี
    8. คิมเอส
    9. Siuta MA,
    10. กัลลี
    11. Niswender KD
    12. Appasani R,
    13. MC Horvath
    14. นีฟ RL
    15. Worley PF,
    16. สไนเดอร์ SH
    17. Hurd YL
    18. เชียร์ JF
    19. ฮัน MH
    20. รุสโซ SJ
    21. เอตอัล

    (2011) บทบาทสำหรับการส่งสัญญาณ mTOR และกิจกรรมของเซลล์ประสาทในการปรับตัวที่เกิดจากมอร์ฟีนในเซลล์ประสาทโดปามีนในพื้นที่หน้าท้อง เซลล์ประสาท 72: 977 990-

    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) ความหนาแน่นของโมเลกุลและเซลลูลาร์แบบโอเพนที่เกิดขึ้นในบริเวณหน้าท้องส่วนล่างและเซลล์ cousuleus catecholamine Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070

    1. Mehrara BJ
    2. Baum MJ

    (1990) Naloxone รบกวนการแสดงออก แต่ไม่ใช่การได้มาโดยหนูเพศผู้ที่มีการตอบสนองต่อการตั้งค่าตามเงื่อนไขสำหรับหญิงที่เป็นสัด Psychopharmacology 101: 118 125-

    1. Meisel RL
    2. Mullins AJ

    (2006) ประสบการณ์ทางเพศของหนูเพศเมีย: กลไกของเซลล์และผลที่ตามมาจากการทำงาน สมอง Res 1126: 56 65-

    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloxone ยับยั้งการตั้งค่าการผสมพันธุ์และการกำหนดสถานที่สำหรับผู้หญิงที่เป็นสัดในหนูตัวผู้ไม่นานหลังจากการตัดอัณฑะ Pharmacol Biochem Behav 26: 781 789-

    1. มิตเชลล์เจบี
    2. สจ๊วตเจ

    (1990) การอำนวยความสะดวกพฤติกรรมทางเพศในหนูตัวผู้ที่เกี่ยวข้องกับการฉีดยาเสพติดภายใน VTA Pharmacol Biochem Behav 35: 643 650-

    1. Murphy LO
    2. Blenis J

    (2006) ความจำเพาะสัญญาณ MAPK: สถานที่ที่เหมาะสมในเวลาที่เหมาะสม เทรนด์ Biochem Sci 31: 268 275-

    1. Nestler EJ

    (2012) กลไกการถอดรหัสของการติดยาเสพติด Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136 143-

    1. Paxinos G
    2. วัตสันซี

    (2013) สมองหนูในพิกัด stereotaxic (วิชาการบอสตัน), Ed 7

    1. Pitchers KK
    2. ฟอร์ ME
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM
    5. ยูแอล
    6. ทำให้เย็นลง LM

    (2010a) ระบบประสาทในระบบ mesolimbic ที่เกิดจากการได้รับรางวัลตามธรรมชาติและการเลิกบุหรี่ตามมา จิตเวช Biol 67: 872 879-

    1. Pitchers KK
    2. Frohmader KS
    3. Vialou V
    4. Mouzon E
    5. Nestler EJ
    6. Lehman MN,
    7. ทำให้เย็นลง LM

    (2010b) DeltaFosB ในนิวเคลียส accumbens เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการเสริมผลกระทบของรางวัลทางเพศ ยีนสมอง Behav 9: 831 840-

    1. Pitchers KK
    2. Schmid S
    3. Di Sebastiano AR,
    4. วัง X
    5. Laviolette SR
    6. Lehman MN,
    7. ทำให้เย็นลง LM

    (2012) ประสบการณ์การให้รางวัลตามธรรมชาติจะเปลี่ยนการกระจายตัวของ AMPA และ NMDA และการทำงานในนิวเคลียส accumbens PLoS One 7: e34700

    1. Pitchers KK
    2. Vialou V
    3. Nestler EJ
    4. Laviolette SR
    5. Lehman MN,
    6. ทำให้เย็นลง LM

    (2013) รางวัลจากธรรมชาติและยาเสพติดทำหน้าที่เกี่ยวกับกลไกพลาสติกที่เป็นระบบประสาทร่วมกันโดย DeltaFosB เป็นสื่อกลางที่สำคัญ Neurosci J 33: 3434 3442-

    1. Roux PP
    2. Blenis J

    (2004) ERK และ p38 MAPK เปิดใช้งานโปรตีนไคเนส: ตระกูลไคเนสโปรตีนที่มีฟังก์ชั่นทางชีวภาพที่หลากหลาย Microbiol Mol Biol Rev 68: 320 344-

    1. รุสโซ SJ
    2. โบลาโนสแคลิฟอร์เนีย
    3. เธโอบาลด์ DE
    4. DeCarolis NA
    5. เรนฮาล
    6. Kumar A
    7. Winstanley แคลิฟอร์เนีย
    8. Renthal NE,
    9. ไวลีย์แมรี่แลนด์
    10. DW ตนเอง
    11. รัสเซลดีเอส
    12. นีฟ RL
    13. Eisch AJ
    14. Nestler EJ

    (2007) ทางเดิน IRS2-Akt ในเซลล์ประสาทโดปามีนในสมองส่วนกลางควบคุมการตอบสนองเชิงพฤติกรรมและเซลล์ต่อ opiates Nat Neurosci 10: 93 99-

    1. Schultz W

    (2010) ฟังก์ชั่นหลายอย่างของเซลล์ประสาทโดปามีน F1000 ตัวแทน Biol 2: 2

    1. Seroogy KB,
    2. CM ดี

    (1993) การแสดงออกของนิวโรโทรฟินโดยเซลล์ประสาทโดปามิเนจิกระดับกลาง Exp Neurol 124: 119 128-

    1. Shippenberg TS
    2. Bals-Kubik R
    3. Herz A

    (1987) คุณสมบัติสร้างแรงบันดาลใจของ opioids: หลักฐานว่าการเปิดใช้งานตัวรับสัญญาณเดลต้าเป็นสื่อกลางในกระบวนการเสริมกำลัง สมอง Res 436: 234 239-

    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) ผลตรงข้ามของมอร์ฟีนและนิวโรโทรฟิน, NT-3, NT-4 และ BDNF ต่อเซลล์ประสาท coeruleus ในหลอดทดลอง สมอง Res 702: 117 125-

    1. Sklair-Tavron L,
    2. ชิ WX
    3. Lane SB
    4. แฮร์ริส HW
    5. Bunney BS
    6. Nestler EJ

    (1996) มอร์ฟีนเรื้อรังทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงที่มองเห็นได้ในสัณฐานวิทยาของเซลล์ประสาทโดปามีน mesolimbic Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 93: 11202 11207-

    1. สปิกา S
    2. Serra GP
    3. MC Puddu
    4. Foddai M
    5. ไดอาน่าเอ็ม

    (2003) ความผิดปกติที่เกิดจากการถอนมอร์ฟีนใน VTA: กล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกน confocal Eur J Neurosci 17: 605 612-

    1. สเวนสัน LW

    (2004) แผนที่สมอง: โครงสร้างของสมองหนู (ด้านวิชาการ, ซานดิเอโก), Ed 3

    1. Tenk CM
    2. วิลสันเอช
    3. จางคิว
    4. Pitchers KK
    5. ทำให้เย็นลง LM

    (2009) รางวัลทางเพศในหนูเพศผู้: ผลของประสบการณ์ทางเพศต่อการตั้งค่าตามสถานที่ที่เกี่ยวข้องกับการหลั่งและการเกิดอาการไม่พึงประสงค์ Behav Horm 55: 93 97-

    1. Tzschentke TM

    (2007) การวัดรางวัลด้วยกระบวนทัศน์สถานที่แบบกำหนดเงื่อนไข (CPP): อัปเดตของทศวรรษที่ผ่านมา ติดยาเสพติด Biol 12: 227 462-

    1. Van Furth WR
    2. Van Ree JM

    (1996) แรงจูงใจทางเพศ: การมีส่วนร่วมของ opioids จากภายนอกในพื้นที่บริเวณหน้าท้อง สมอง Res 729: 20 28-

    1. Van Furth WR
    2. Wolterink G
    3. Van Ree JM

    (1995) ระเบียบเกี่ยวกับพฤติกรรมทางเพศของชาย: การมีส่วนร่วมของสมอง opioids และโดปามีน Brain Res Brain Res Rev 21: 162 184-

    1. วอล์คเกอร์ JR
    2. เฉิน SA
    3. Moffitt H
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) การได้รับ opioid เรื้อรังจะเพิ่มการบริหารเฮโรอีนด้วยตนเองในหนู Pharmacol Biochem Behav 75: 349 354-

    1. Young KA
    2. Gobrogge KL
    3. Liu Y
    4. วังซี

    (2011) ชีววิทยาของการเชื่อมคู่: ข้อมูลเชิงลึกจากหนูคู่สมรสในสังคม Neuroendocrinol ด้านหน้า 32: 53 69-

  •