การสร้างกระดูกสันหลัง dendritic โคเคนใน D1 และ D2 dopamine ตัวรับที่มีตัวรับหนามปานกลางเซลล์ประสาทในนิวเคลียส accumbens (2006)

Proc Natl Acad Sci US A. ก.พ. 28, 2006; 103 (9): 3399 – 3404
เผยแพร่ออนไลน์ Feb 21, 2006 ดอย:  10.1073 / pnas.0511244103
PMCID: PMC1413917
Neuroscience
บทความนี้ได้รับ อ้างถึงโดย บทความอื่น ๆ ใน PMC

นามธรรม

Psychostimulant ที่เกิดจากการเปลี่ยนแปลงของ dendritic กระดูกสันหลังในเซลล์ประสาท dopaminoceptive ในนิวเคลียส accumbens (NAcc) ได้รับการตั้งสมมติฐานว่าการตอบสนองของเซลล์ประสาทปรับตัวที่เชื่อมโยงกับพฤติกรรมการเสพติดในระยะยาว NAcc นั้นประกอบไปด้วยสองเซลล์ย่อยที่แตกต่างกันของเซลล์ประสาทหนามขนาดกลางที่แสดงระดับสูงของตัวรับ dopamine D1 หรือ D2 ในการศึกษาครั้งนี้เราวิเคราะห์ความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง dendritic หลังการรักษาโคเคนเรื้อรังใน D1 หรือ D2 ที่มีตัวรับที่มีเซลล์ประสาทหนามขนาดกลางที่แตกต่างกันใน NAcc การศึกษาเหล่านี้ใช้ประโยชน์จากหนูดัดแปรพันธุกรรมที่แสดง EGFP ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ตัวรับ D1 หรือ D2 (Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP) หลังจากการรักษาโคเคน 28 วันและการถอน 2 วันความหนาแน่นของกระดูกสันหลังเพิ่มขึ้นทั้ง Drd1-EGFP- และเซลล์ประสาทบวก Drd2-EGFP อย่างไรก็ตามการเพิ่มขึ้นของความหนาแน่นของกระดูกสันหลังนั้นยังคงอยู่ในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd1-EGFP บวก 30 วันหลังจากการถอนตัวยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งการแสดงออกของΔFosBที่เพิ่มขึ้นยังพบในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd1-EGFP- และ Drd2-EGFP ที่เป็นบวกหลังจากเซลล์ 2 วันที่ถอนตัวยา แต่เฉพาะในเซลล์ประสาท Drd1-EGFP ที่เป็นบวก ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่เพิ่มขึ้นที่สังเกตได้หลังจากการรักษาโคเคนเรื้อรังนั้นเสถียรในเซลล์ประสาทที่ประกอบด้วยตัวรับ D30 เท่านั้นและการแสดงออกของΔFosBนั้นสัมพันธ์กับการก่อตัวและ / หรือการบำรุงรักษากระดูกสันหลัง dendritic ใน D1 ใน NAcc

ทางเดิน dopaminergic mesolimbic ประกอบด้วยเซลล์ประสาทในพื้นที่หน้าท้อง tegmental ที่ทำให้เกิดการเสื่อมของนิวเคลียส accumbens (NAcc), ตุ่มรับกลิ่น, prefrontal cortex และ amygdala (1) ในขณะที่เซลล์ประสาท dopaminergic nigrostriatal ใน substantia นิโกร (pars compacta) ให้การฉายภาพจากน้อยไปหามากไปที่หลัง striatum (2) Psychostimulants ยกระดับความเข้มข้นของ synaptic ของโดปามีนใน NAcc: โคเคน, โดยการปิดกั้นการดูดซึมของโดปามีนจากแหว่ง synaptic, และยาบ้า, โดยการส่งเสริมการปลดปล่อยโดปามีนจากขั้วประสาท (3-5) ซ้ำการบริหารต่อเนื่องของผล psychostimulants ในการตอบสนองพฤติกรรมเพิ่ม (อาการแพ้) เพื่อผลกระตุ้นการแหลมของยาเหล่านี้ (6-8) หลักฐานส่วนใหญ่ชี้ให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงแบบปรับตัวในพื้นที่หน้าท้องที่ - ระบบ dopaminergic ncc เป็นหัวใจสำคัญของการเปลี่ยนแปลงในพลาสติกที่ขึ้นกับประสบการณ์ซึ่งเป็นพฤติกรรมของยากระตุ้น

นอกเหนือจากโดปามีนแล้วยังจำเป็นต้องมีกลูตาเมตในการพัฒนาพฤติกรรมไวต่อการตอบสนองต่อสารกระตุ้นจิต (9, 10) เซลล์สมองหนามขนาดกลาง (MSNs) ใน ventral striatum ได้รับการกระตุ้นด้วยกลูตามาเทอจิคจากเยื่อหุ้มสมอง prefrontal ที่ synapse บนหัวของกระดูกสันหลัง dendritic MSNs ยังเป็นเป้าหมายสำคัญสำหรับ axon dopaminergic ที่ synapse บนคอกระดูกสันหลัง (1, 11, 12) ดังนั้น dendritic spines ใน MSNs จึงเป็นช่องเซลเซลซึ่งการส่ง dopaminergic และ glutamatergic นั้นถูกรวมเข้าด้วยกัน

โดปามีนทำหน้าที่กับตัวรับที่สำคัญสองตัวคือตระกูลย่อย D1 (ชนิดย่อย D1 และ D5) และกลุ่มย่อย D2 (ชนิดย่อย D2, D3 และ D4) (13) ใน dorsal striatum การศึกษาทางกายวิภาคแสดงให้เห็นว่า striatonigral MSNs มีระดับสูงของตัวรับ D1 (พร้อมกับสาร P และ dynorphin) ในขณะที่ MSN ของ striatopallidal ส่วนใหญ่แสดงตัวรับ D2 (พร้อมกับ enkephalin)14-17) การคาดการณ์จาก NAcc มีความซับซ้อนมากกว่าใน dorsal striatum โดยมีเปลือกและชิ้นส่วนหลักของ NAcc ที่ฉายไปยัง subregions ที่แตกต่างของ ventral pallidum และพื้นที่ tegmental ventral และ substantia nigra (18) ในขณะที่ผู้รับ D2 และ enkephalin มีการแสดงออกอย่างมากในการคาดการณ์ไปยังท้อง pallidum, ผู้รับ D1 และสาร P ถูกกระจายอย่างเท่าเทียมกันในการฉายภาพไปยัง pallidum หน้าท้องและหน้าท้องบริเวณหน้าท้อง (19) การศึกษาของ agonists และคู่อริคัดสรรสำหรับผู้รับ D1 หรือ D2 แสดงให้เห็นว่าทั้งผู้รับ D1 และ D2 มีความจำเป็นสำหรับการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมขึ้นอยู่กับ psychostimulant ขึ้นอยู่กับ (20-25) อย่างไรก็ตามบทบาทของตัวรับเหล่านี้ดูเหมือนจะแตกต่างกัน ตัวอย่างเช่นการกระตุ้นให้ผู้รับ D1 ลดการโคเคนที่เกิดจากการฉีดโคเคนและการชี้นำด้านสิ่งแวดล้อมที่เกี่ยวข้องกับโคเคนในขณะที่การกระตุ้นให้ผู้รับ D2 เอื้อต่อสถานะการกระตุ้นโคเคน (26-28).

ความผิดปกติของพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการติดยาเสพติด psychostimulant นั้นยาวนานมาก ดังนั้นจึงมีความสนใจอย่างมากในการระบุการเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากยาที่ยาวนานในระดับโมเลกุลและโครงสร้างในวงจรประสาทควบคุมโดยโดปามีนและกลูตาเมต (29-32) โดยเฉพาะการสัมผัสโคเคนหรือแอมเฟตามีนในระยะยาวพบว่ามีการเพิ่มจำนวนของจุด dendritic และหนามของ MSNs ใน NAcc (33-35) การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงการคงอยู่นานถึง≈1 – 3.5 เดือนหลังจากการสัมผัสกับยาครั้งสุดท้าย (30, 35) และได้รับการแนะนำเพื่อรองรับการเปลี่ยนแปลงที่ยาวนานในพลาสติกซินแนปที่เกี่ยวข้องกับการสัมผัสกับยาจิต

เป้าหมายของการศึกษาครั้งนี้คือการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างโคเคนที่เกิดจากการ dendritic กระดูกสันหลังในประชากรย่อยของ MSN accumbal ที่แสดงทั้งผู้รับ D1 หรือ D2 ในการศึกษาเหล่านี้เราได้ใช้หนูแปลงพันธุกรรมโครโมโซม (BAC) ที่แสดง EGFP ภายใต้การควบคุมของ D1 (Drd1-EGFP) หรือ D2 (Drd2-EGFP) ตัวรับ dopamine36) ผลลัพธ์บ่งชี้ว่าถึงแม้ว่าความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่เพิ่มขึ้นในขั้นต้นจะเกิดขึ้นใน MSNN ที่มีตัวรับ D1 และ MSNN ที่มีตัวรับ D2 แต่ความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่ถูกเปลี่ยนแปลงนั้นมีความเสถียรในเซลล์ประสาทที่มีตัวรับ D1 เท่านั้น ยิ่งไปกว่านั้นเราพบการเปลี่ยนแปลงที่คล้ายกันในการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสΔFosBซึ่งชี้ให้เห็นว่าΔFosBอาจมีส่วนร่วมในการก่อตัวและ / หรือการบำรุงรักษากระดูกสันหลัง dendritic ใน D1 เช่นเดียวกับเซลล์ประสาทที่มีตัวรับ D2 ใน NAcc

ผลสอบ

การวิเคราะห์ MSNs ใน Drd1-EGFP และ Drd2-EGFP BAC Transgenic Mice

รูปแบบการฉายภาพของ MSNs จากด้านหลังและหน้าท้อง ventatum ใน Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP BAC หนูพันธุ์ได้รับการถ่ายทอดผ่านการวิเคราะห์การแสดงออกของ GFP (36) การแสดงออกที่แตกต่างของ GFP ใน MSNs ของ dorsal striatum นั้นสอดคล้องกับตัวรับภายนอก D1 หรือตัวรับ D2 ตามลำดับ (36) เราวิเคราะห์การแสดงออกที่แตกต่างของ GFP ใน NAcc ใน Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP เมาส์ (มะเดื่อ. 1a และ b) ถึงแม้ว่า≈58% ของเซลล์ประสาทใน NAcc แสดง GFP ในหนู Drd1-EGFP (มะเดื่อ. 1a) ≈48% ของเซลล์ประสาทใน NAcc แสดง GFP ในหนู Drd-2-EGFP (มะเดื่อ. 1b) MSN เป็นตัวแทนของ 90 – 95% ของเซลล์ประสาททั้งหมดใน NAcc (12, 37) ตัวรับ D1 จะแสดงเฉพาะใน MSNs และตัวรับ D2 จะแสดงใน MSNs และใน cholinergic interneurons ซึ่งเป็นตัวแทนของ 1 – 3% ของเซลล์ประสาทส่วนบน (37) เมื่อคำนึงถึงปัจจัยเหล่านี้ผลลัพธ์แนะนำว่าอย่างน้อยที่สุด≈10 – 15% ของ MSNs ใน NAcc มีแนวโน้มที่จะแสดงทั้งตัวรับ D1 และ D2

มะเดื่อ. 1 

การวิเคราะห์ MSNs ในเมาส์ Drd1-EGFP และ Drd2-EGFP (a และ b) แก้ไขส่วนสมองจาก NAcc ของ Drd1-EGFP (a) หรือ Drd2-EGFP (b) หนูแปลงพันธุกรรม BAC ถูก immunostained สำหรับ GFP และ NeuN (เป็นเครื่องหมายของเส้นประสาททั่วไป) รูปภาพที่ผสานแสดงเป็นสีเหลือง colocalization ...

การวิเคราะห์กระดูกสันหลัง Dendritic ใน Drd1-EGFP และหนู Drd2-EGFP

การแสดงออกของ GFP ในหนู Drd1-EGFP และ Drd2-EGFP นั้นมีประโยชน์ในการย้อมสีเซลล์ประสาท อย่างไรก็ตามสัญญาณ GFP ใน dendrites และ dendritic spines นั้นอ่อนแอเกินกว่าจะอนุญาตให้ทำการวิเคราะห์หลังจาก immunostaining ด้วยแอนติบอดีต่อต้าน GFP การส่งมอบขีปนาวุธย้อมสีของอนุภาคเรืองแสงเมื่อเร็ว ๆ นี้ถูกนำมาใช้ในการติดฉลากประชากรของเส้นประสาทในลักษณะที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพ (38) เซลล์ประสาททั้งหมดสามารถติดป้ายกำกับโดยใช้เทคนิคนี้และวิธีการนี้ดูเหมือนจะเปรียบเทียบกับการย้อมสี Golgi – Cox ในการวิเคราะห์สัณฐานวิทยา dendritic ของเซลล์ประสาทใน NAcc ชิ้น accumbal คงที่ถูกติดป้ายด้วย lipophilic fluorescence ย้อม 1,1′-diotadecyl-3,3,3 ′, 3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) โดยใช้ปืนยีน ตัวอย่างของ MSN DiI-stained แสดงขึ้นมา มะเดื่อ. 1c. ภายใต้เงื่อนไขที่ใช้เรามักสังเกตเซลล์ประสาทที่มีป้ายกำกับโดยไม่มี dendrites ที่ทับซ้อนกันจากเซลล์ประสาทที่มีป้ายกำกับอื่น ๆ ที่กำลังขยายที่สูงขึ้นสัณฐานวิทยาของเดนไดรต์ที่มีรายละเอียดรวมถึงกระดูกสันหลังเอ็นดรินิติสามารถสังเกตได้ (มะเดื่อ. 1d).

จากนั้นเราใช้การรวมกันของการติดฉลาก DiI และ immunohistochemistry สำหรับ GFP ใน Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP transgenic หนูซึ่งทำได้โดยใช้ความเข้มข้นต่ำของสารซักฟอกสำหรับการซึมผ่านเนื้อเยื่อ (ดู วิธีการ) ด้วยการเปรียบเทียบอย่างระมัดระวังของ DiI stain และการแสดงออกของ GFP ในเซลล์ร่างกายของ MSNs เราสามารถระบุเซลล์ประสาท DiI- และ GFP-positive หรือ DiI-positive และ GFP-positive ใน Drd1-EGFP (มะเดื่อ. 2a) หรือ Drd2-EGFP (มะเดื่อ. 2bหนู) สำหรับการศึกษาต่อไปนี้เราวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของ dendritic เฉพาะเซลล์ประสาท DiI- และ GFP-positive จาก Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP

มะเดื่อ. 2 

การวิเคราะห์กระดูกสันหลัง dendritic ในหนู Drd1-EGFP และหนู Drd2-EGFP เซลล์ประสาทใน NAcc ของหนูทั้ง Drd1-EGFP (a) หรือเมาส์ Drd2-EGFP (b) มีการระบุครั้งแรกด้วย DiI (สีแดง) จากนั้นภายใต้อิมมูโนฮิสโตเคมีโดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน -GFP (EGFP, สีเขียว) เท่านั้น ...

การรักษาโคเคนเรื้อรังส่งผลให้ความหนาแน่นของกระดูกสันหลังเพิ่มขึ้นใน MSN Accumbal ซึ่งแสดง Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP

Drd1-EGFP หรือ Drd2-EGFP หนูถูกฉีดซ้ำด้วยโคเคน (30 mg / kg) หรือน้ำเกลือเป็นเวลาสี่สัปดาห์ติดต่อกัน (ดู วิธีการ) สองวัน (2WD) หรือ 30 วัน (30WD) หลังจากการรักษาด้วยยาครั้งสุดท้ายสมองจะถูกประมวลผลสำหรับการติดฉลาก DiI และ immunohistochemistry ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าการรักษาด้วยแอมเฟตามีนเรื้อรังเพิ่มความหนาแน่นของกระดูกสันหลังในส่วนปลายส่วนปลายของเอ็นดีเอ็นของ MSNs ใน NAcc35) ดังนั้นเราจึง จำกัด การวิเคราะห์ของเราไว้ที่ dendrites ส่วนปลาย (เช่นที่มีสาขาที่สองหรือสาม) รวมถึงภูมิภาคปลายทาง เมื่อวิเคราะห์ที่ 2WD ความหนาแน่นของกระดูกสันหลังจะเพิ่มขึ้นใน MSNs Drd1-EGFP-positive (128% ของกลุ่มน้ำเกลือ) (มะเดื่อ. 3a และ c) และในระดับที่น้อยกว่าในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd2-EGFP (115% ของกลุ่มน้ำเกลือ) (มะเดื่อ. 3 b และ d) หลังจาก 30WD ความหนาแน่นของกระดูกสันหลังเพิ่มขึ้นจะถูกรักษาไว้ในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd1-EGFP (118% ของการควบคุมน้ำเกลือ) (มะเดื่อ. 3 a และ c) แต่ไม่ใช่ในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd2-EGFPมะเดื่อ. 3 b และ d).

มะเดื่อ. 3 

การเพิ่มขึ้นของโคเคนที่เกิดขึ้นเรื้อรังในความหนาแน่นของกระดูกสันหลังใน Drd1-EGFP- หรือ MSNs Drd2-EGFP-positive ใน NAcc (a และ b) Drd1-EGFP (a) หรือ Drd2-EGFP (bหนูทดลองได้รับการรักษาด้วยน้ำเกลือ (Sal) หรือโคเคน (Coc, 30 mg / kg) เป็นเวลา 4 สัปดาห์ ประมวลผลสมองของเมาส์ 2WD หรือ 30WD ...

สัณฐานวิทยาของกระดูกสันหลัง dendritic เป็นตัวแปรในแง่ของความยาวและความกว้างของหัวของกระดูกสันหลัง ดังนั้นเราจึงจัดหมวดหมู่ dendritic ส่วนที่ยื่นออกมาเป็นกระดูกสันหลังสี่ชั้น (ม่อต้อ, เห็ด, บางและ filopodia) ที่ 2WD จากโคเคน (ไม่แสดงข้อมูล) ความหนาแน่นของเห็ดชนิด (119.7 ± 4.0%, P <0.01) และเงี่ยงบาง ๆ (120.0 ± 3.4%, P <0.01) เพิ่มขึ้นโดยการบำบัดโคเคนใน MSN ที่เป็นบวก Drd1-EGFP ในขณะที่ความหนาแน่นของต้นขั้ว (182.4 ± 21.6%, P <0.05) และเงี่ยงเห็ด (122.5 ± 5.0%, P <0.01) เพิ่มขึ้นใน MSN ที่เป็นบวก Drd2-EGFP ไม่มีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของกระดูกสันหลังที่เป็นมะเร็งในเซลล์ประสาทบวก Drd1-EGFP หรือกระดูกสันหลังบาง ๆ ในเซลล์ประสาทบวก Drd2-EGFP

โคเคนเรื้อรังก่อให้เกิด ExpressFosB Expression ใน Drd1-EGFP- หรือ MSN ที่เป็นบวกของ Drd2-EGFP- DrdXNUMX-EGFP

ΔFosBเป็นสมาชิกของตระกูล Fos ของปัจจัยการถอดความ ในขณะที่การบริหารโคเคนอย่างฉับพลันทำให้เกิดการเหนี่ยวนำอย่างรวดเร็วและชั่วคราวของไอโซฟอร์ม Fos หลายชนิดใน NAcc การได้รับโคเคนซ้ำ ๆ จะเพิ่มระดับของΔFosB ยิ่งไปกว่านั้นการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของ osFosB ยังคงอยู่ใน NAcc เป็นเวลาหลายสัปดาห์ถึงหลายเดือนหลังจากหยุดยาและได้รับการแนะนำให้มีส่วนร่วมในการควบคุมการแสดงออกของยีนที่ยาวนานถึงแม้ว่าจะหยุดยาแล้วก็ตาม29, 39, 40).

เพื่อตรวจสอบการเหนี่ยวนำของΔFosBใน NAcc จาก Drd1-EGFP หรือหนู Drd2-EGFP หลังการรักษาโคเคนเราวิเคราะห์การแสดงออกของ FosB และ GFP โดยการติดฉลากสองครั้ง (มะเดื่อ. 4 และ 1 ตาราง) แอนติบอดีต่อต้าน FosB รับรู้ทุกรูปแบบของ FosB แต่เราคิดว่าภูมิคุ้มกันที่เพิ่มขึ้นหมายถึงΔFosB (ดู วิธีการ สำหรับการสนทนาเพิ่มเติม) ในหนูที่ใช้น้ำเกลือ 16% ของเซลล์ประสาทที่เป็นบวกของ Drd1-EGFP และ 15% ของเซลล์ประสาทที่เป็นบวกของ Drd2-EGFP จะแสดงปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันของ FosB ที่ค่อนข้างรุนแรง (มะเดื่อ. 4 a และ b และ 1 ตาราง) การรักษาโคเคนซ้ำแล้วซ้ำอีกตามด้วย 2WD ส่งผลให้จำนวนเซลล์ประสาทที่เป็นบวกของ Drd1-EGFP เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญซึ่งได้กล่าวถึงΔFosB (55% ของเซลล์ประสาทที่เป็นบวก GFP) (มะเดื่อ. 4c และ 1 ตาราง) พบนิพจน์ΔFosBที่เล็กลง แต่ยังเพิ่มขึ้นอย่างมากในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd2-EGFP (25% ของเซลล์ประสาทที่เป็นบวก GFP) (มะเดื่อ. 4d และ 1 ตาราง) เช่นเดียวกับการเปลี่ยนแปลงของความหนาแน่นของกระดูกสันหลังการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของΔFosBจะถูกเก็บรักษาไว้ในเซลล์ประสาทที่เป็นบวก Drd1-EGFP (46% ของเซลล์ประสาทที่เป็นบวก GFP) แต่ไม่ได้อยู่ในเซลล์ประสาทที่เป็นบวกของ Drd2-EGFP 15WD (มะเดื่อ. 4 e และ f และ 1 ตาราง) โปรดทราบว่านิพจน์ΔFosBที่เพิ่มขึ้นสังเกตได้จาก มะเดื่อ. 4f มีอยู่ในเซลล์ประสาทที่ติดลบ Drd2-EGFP

มะเดื่อ. 4 

โคเคนเรื้อรังก่อให้เกิดการแสดงออกของ osFosB ใน Drd1-EGFP- หรือ MSNs Drd2-EGFP-positive ใน NAcc Drd1-EGFP (a, cและ e) หรือ Drd2-EGFP (b, dและ fหนูถูกรักษาด้วยน้ำเกลือหรือโคเคนเรื้อรังตามที่อธิบายไว้ใน มะเดื่อ. 3. 2WD (c และ d) หรือ 30WD (e และ ...
1 ตาราง 

ปริมาณของเซลล์ประสาทบวก EGFP แสดงΔFosB

การสนทนา

การปรับตัวในระยะยาวของสารสื่อประสาทโดปามีนรวมถึงพฤติกรรมการเสพติดที่เกี่ยวข้องกับยาเสพติด โดยเฉพาะอย่างยิ่งการเพิ่มขึ้นของความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง dendritic ที่กระตุ้นให้เกิด psychostimulant ของ MSNs ใน NAcc ได้รับการตั้งสมมติฐานที่จะเชื่อมโยงกับการปรับโครงสร้างของการเชื่อมต่อ synaptic (30) NAcc นั้นประกอบไปด้วยสองกลุ่มย่อยที่แตกต่างกันของ MSN ซึ่งแสดงระดับสูงของตัวรับ dopamine D1 หรือ D2 ในการศึกษาปัจจุบันเราได้วิเคราะห์ความหนาแน่นของกระดูกสันหลังใน MSNNN หรือ D1 ที่มีตัวรับที่แตกต่างกันของ MSN ใน NAcc หลังจากการรักษาโคเคนเรื้อรัง ผลที่ได้รับแสดงให้เห็นว่าถึงแม้ว่าความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่เพิ่มขึ้นในขั้นต้นจะเกิดขึ้นใน MSNN ที่มีตัวรับ D2 และ MSNNX ที่มีตัวรับ D1 แต่ความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่ถูกเปลี่ยนแปลงนั้นเสถียรในเซลล์ประสาทที่มีตัวรับ D2 เท่านั้น ยิ่งไปกว่านั้นเราพบว่ารูปแบบของการเปลี่ยนแปลงที่คล้ายกันในการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสΔFosBใน D1 และ D1 ตัวรับที่มี MSNs

การศึกษาเหล่านี้ใช้ประโยชน์จากหนูพันธุ์ BAC ที่แสดงออกถึง GFP ในประชากรย่อยของ MSNs ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ตัวรับ D1 หรือ D2 ยิ่งกว่านั้นเราได้พัฒนาวิธีการติดฉลากสองครั้งที่รวมอิมมูโนฮิสโตเคมีสำหรับ GFP กับการติดฉลากแบบ ballistic ของเซลล์ประสาทโดยใช้ DiI การศึกษาก่อนหน้านี้ได้ใช้วิธี Golgi-Cox เพื่อวิเคราะห์ผลของ psychostimulants ต่อความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง (34) และวิธี DiI ที่ใช้ที่นี่ให้ผลลัพธ์ที่เปรียบเทียบได้เชิงปริมาณ เราพัฒนาวิธี double-labeling เนื่องจากการย้อมสี Golgi ไม่สามารถใช้ร่วมกับอิมมูโนวิทยา การฉีดภูมิคุ้มกันมักจะต้องใช้การแทรกซึมของเนื้อเยื่อด้วยผงซักฟอกซึ่งเป็นกระบวนการที่มักนำไปสู่การละลายสี lipophilic จากเยื่อ (38) อย่างไรก็ตามในการศึกษาของเราในปัจจุบันการกระตุ้นภูมิคุ้มกันแบบ GFP ไม่จำเป็นต้องใช้ผงซักฟอกเข้มข้นสำหรับการซึมผ่านของเนื้อเยื่อจึงสามารถใช้ร่วมกับการติดฉลากสีย้อม lipophilic โดยทั่วไปแล้ววิธีการติดฉลากแบบ double-labeling ของเราควรเป็นประโยชน์สำหรับการศึกษาการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างในกระดูกสันหลัง dendritic เช่นเมื่อใช้สำหรับการวิเคราะห์ BAC transgenic mice บรรทัดที่ GFP แสดงในเซลล์ประสาทของประชากรเฉพาะในเยื่อหุ้มสมอง (36).

แม้ว่าจะยังมีข้อโต้แย้งอยู่บ้าง แต่เชื่อว่าตัวรับ D1 และ D2 นั้นส่วนใหญ่จะถูกแยกทางกายวิภาคกับทางตรง (striatonigral) และทางอ้อม (striatopallidal) เซลล์รับแสงแบบ striatopallidal ตามลำดับ (17, 41) การระบุลักษณะเริ่มต้นของการแปล GFP ในหนู Drd1-EGFP และหนู Drd2-EGFP สอดคล้องกับข้อสรุปนี้ (36) ยิ่งกว่านั้นการวิเคราะห์ของเราจำนวนเซลล์ประสาทบวก GFP ใน NAcc จาก Drd1-EGFP และ Drd2-EGFP หนูสอดคล้องกับข้อสรุปที่≈50% ของ MSNs แสดงตัวรับ D1 – 35% เท่านั้น และ≈40 – 2% coexpress ทั้งตัวรับ D10 และ D15 ค่าของ coexpression นี้คล้ายกับที่บ่งบอกโดยการศึกษาของ dorsal striatum ที่รวมการวิเคราะห์ patch-clamp ของ neurons striatal เดี่ยวด้วยเทคนิค RT-PCR เพื่อแยกและขยาย mRNAs (≈1% coexpression ของ enkephalin และสาร P) (42) ควรสังเกตว่าการศึกษาในปัจจุบันของเราไม่ได้ตอบคำถามการแสดงออกของผู้รับ D3, D4 และ D5 และพวกเขาไม่ได้แก้ไขปัญหาการแสดงออกของผู้รับ D1 ในระดับต่ำใน MSNs ที่แสดงผู้รับ D2 ในระดับสูงหรือในทางกลับกัน

การศึกษาก่อนหน้าจำนวนมากได้ตรวจสอบการแปลเส้นประสาทของการแสดงออก Fos psychostimulant ที่เกิดขึ้นและบทบาทของผู้รับ D1 และ D2 (43-45) การศึกษาเหล่านั้นสนับสนุนข้อสรุปว่าการเหนี่ยวนำ Fos และΔFosBเป็นสื่อกลางโดยการเปิดใช้งานตัวรับ D1 อย่างไรก็ตามการโลคัลไลเซชันการแปลเซลลูล่าร์ได้รับอิทธิพลจากบริบทด้านสิ่งแวดล้อมที่มีการใช้ยา46, 47) ตัวอย่างเช่นแอมเฟตามีนหรือโคเคนที่ได้รับในกรงบ้านทำให้เกิดยีนเริ่มต้นทันที (รวมถึง Fos) โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเซลล์ P-positive ของสารที่ coex D1 รับ ในทางตรงข้ามยาเหล่านี้สามารถชักนำให้เกิดการแสดงออกของ Fos ใน MSN ที่มีตัวรับ D1 และ D2 เมื่อจัดการในสภาพแวดล้อมที่แปลกใหม่ โปรโตคอลที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันของเราไม่รวมถึงการจับคู่ยาฉีดที่สัมผัสกับสภาพแวดล้อมใหม่ อย่างไรก็ตามเราไม่สามารถแยกแยะความเค้นที่ขึ้นกับบริบทบางอย่างที่รับผิดชอบในการแสดงออกของ expressionFosB ใน MSN ที่มีตัวรับ D2

คุณลักษณะที่โดดเด่นของผลลัพธ์ในปัจจุบันคือรูปแบบคู่ขนานของความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่เพิ่มขึ้นและการแสดงออกของΔFosB เพิ่มความหนาแน่นของกระดูกสันหลังและการแสดงออกของΔFosBในขั้นต้นเกิดขึ้นใน MSNs ที่แสดง Drd1-EGFP และ Drd2-EGFP อย่างไรก็ตามการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้มีความเสถียรในเซลล์ประสาทที่มีตัวรับ D1 เท่านั้น คำอธิบายที่เป็นไปได้ประการหนึ่งสำหรับการสังเกตที่เพิ่มความหนาแน่นของกระดูกสันหลังและการแสดงออกของΔFosBพบได้ในเซลล์ประสาทที่ประกอบด้วยตัวรับ D2 คือสิ่งนี้เกิดขึ้นในส่วนเล็ก ๆ ของ MSN ที่ coexpress ทั้ง D1 และ D2 dopamine receptor ดังนั้นลักษณะชั่วคราวของการเพิ่มขึ้นเหล่านี้อาจเกี่ยวข้องกับผลของการเปิดใช้งานตัวรับ D2 ซึ่งเป็นปฏิปักษ์ในเส้นทางการส่งสัญญาณที่ขึ้นอยู่กับ D1 (48) เป็นที่น่าสนใจว่าการเปลี่ยนแปลงของความหนาแน่นของกระดูกสันหลังและการแสดงออกของΔFosBสามารถย้อนกลับได้ซึ่งอาจสะท้อนถึงความสามารถของเส้นทางการส่งสัญญาณที่ขึ้นอยู่กับตัวรับ D2 ที่มีอิทธิพลต่อความมั่นคงของΔFosB

การสังเกตว่ามีการเปลี่ยนแปลงแบบขนานในการแสดงออกของΔFosBและความหนาแน่นของกระดูกสันหลังสอดคล้องกับแนวคิดที่ว่าΔFosBมีส่วนร่วมในการก่อตัวครั้งแรกและการบำรุงรักษาต่อมาของกระดูกสันหลัง dendritic ในเซลล์ประสาทที่มีตัวรับ D1 ใน NAcc การแสดงออกของΔFosBถูกควบคุมโดยเส้นทางการส่งสัญญาณ D1 / DARPP-32 / PP1 ขึ้นอยู่กับ MSNs (49) มีงานวิจัยหลายชิ้นที่แสดงให้เห็นว่าΔFosBมีบทบาทสำคัญในการกระตุ้นและกระตุ้นการเคลื่อนไหวของยาจิตเวช (39) มีแนวโน้มโดยการมีอิทธิพลต่อการแสดงออกของยีนหลายตัวซึ่งรวมถึงตัวรับสารสื่อประสาทสัญญาณโปรตีนและโปรตีนที่เกี่ยวข้องในการควบคุมของสัณฐานของเซลล์ประสาท (50) อย่างไรก็ตามกลไกโมเลกุลเฉพาะที่เกี่ยวข้องกับการสร้างกระดูกสันหลังที่เกิดจากโคเคนเรื้อรังยังไม่เป็นที่รู้จักในปัจจุบัน การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่าการแช่โคเลสเตอรอลในยา Cdk5 ยับยั้ง roscovitine ลดการเพิ่มโคเคนเนื่องจากความหนาแน่นของโคเคน (51) ยิ่งไปกว่านั้น Cdk5 เป็นยีนเป้าหมายดาวน์สตรีมสำหรับΔFosBและมีส่วนเกี่ยวข้องในการเปลี่ยนแปลงการปรับตัวชดเชยที่เกี่ยวข้องกับการรักษาโคเคนเรื้อรัง (52) ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงของฟอสโฟรีเลชั่นที่พึ่งพา Cdk5 จึงเป็นกลไกที่เป็นไปได้ในการก่อตัวของกระดูกสันหลังที่เกิดจากโคเคนและ / หรือความมั่นคงของกระดูกสันหลัง ปาก (53), β-catenin (54), PSD-95 (55) และ Spinophilin (56) เป็นพื้นผิวสำหรับ Cdk5 และมีส่วนร่วมในการควบคุม morphogenesis กระดูกสันหลัง (57-60) การหาลักษณะของสารตั้งต้น Cdk5 เหล่านี้และอื่น ๆ ในเงี่ยงหวังว่าจะทำให้กลไกที่เกี่ยวข้องกับกฎระเบียบของการก่อตัวของกระดูกสันหลังถูกกระตุ้นโดย psychostimulants

วิธีการ

สัตว์

หนูที่ถือยีน EGFP ภายใต้การควบคุมของตัวรับโดปามีน D1 หรือ D2 ถูกสร้างขึ้นโดยโครงการแปลงพันธุกรรม Gensat BAC (36) หนูดัดแปลงพันธุกรรมที่ใช้ในการศึกษานี้มีอายุ 4 – 5 สัปดาห์และอยู่ในพื้นหลังของสวิส - เว็บสเตอร์ หนูถูกรักษาใน 12: 12-h รอบแสง / มืดและตั้งอยู่ในกลุ่มของ 2 – 5 ด้วยอาหารและน้ำที่มีอยู่ โปรโตคอลสัตว์ทั้งหมดเป็นไปตามสถาบันสุขภาพแห่งชาติเพื่อการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองและได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของสถาบัน Rockefeller University

ยารักษาโรค

การรักษาโคเคนเรื้อรัง (30 mg / kg, รายวัน) มีรายงานว่าเพิ่มความหนาแน่นของกระดูกสันหลังใน MSNs ทั้งในแกนกลางและเปลือกของ NAcc จากหนู แต่เพิ่มขนาดความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง (15 mg / kg) ลดลงเท่านั้น เปลือก (61) ดังนั้นเราจึงใช้ปริมาณโคเคนในปริมาณที่สูงกว่าเพื่อกระตุ้นการปรับโครงสร้างในทั้งสองส่วนของ NAcc หนูได้รับการฉีดหนึ่งครั้ง (ip) ของ 30 mg / kg โคเคน -HCl (หรือน้ำเกลือ) ในแต่ละวันเป็นเวลาติดต่อกัน 5 ตามด้วยวันปลอดการฉีด 2 และขั้นตอนนี้ซ้ำสำหรับสัปดาห์ที่ติดต่อกันของ 4 ฉีดเข้าไปในกรงที่บ้าน 2WD หรือ 30WD สมองถูกประมวลผลสำหรับการติดฉลาก DiI และ / หรืออิมมูโนฮิโตเคมี

การติดฉลากแบบขีปนาวุธด้วยสีย้อมฟลูออเรสเซนต์

หนูได้รับยาสลบด้วย 80 mg / kg sodium pentobarbital และทำ perfused transcardially ด้วย 5 ml ของ PBS ตามด้วยการกระจายอย่างรวดเร็วด้วย 40 ml 4% paraformaldehyde ใน PBS (20 ml / min) สมองถูกถอดออกจากกะโหลกศีรษะอย่างรวดเร็วและต่อท้ายด้วย 4% paraformaldehyde เป็นเวลา 10 นาที ชิ้นสมอง (100 μm) ถูกติดฉลากด้วยการส่ง ballistic ของ Dii สีย้อมเรืองแสง (Molecular Probes) ตามที่อธิบายในเอกสารอ้างอิง 38. วิธีการติดฉลาก DiI - immunohistochemistry แบบรวมได้รับการพัฒนาด้วยผงซักฟอกเข้มข้นต่ำ ส่วนที่มีป้ายกำกับ DiI ถูกดูดซับด้วย 0.01% Triton X-100 ใน PBS สำหรับ 15 min และจากนั้นบ่มใน 0.01% Triton X-100 และ 10% เซรั่มแพะปกติใน PBS สำหรับ 1 h เพื่อลดการติดฉลากแบบไม่ระบุชื่อ ส่วนเนื้อเยื่อถูกบ่มด้วย 1% เซรั่มแพะปกติ / 0.01% ไทรทัน X-100 และแอนติบอดีต่อต้าน GFP (Abcam, Cambridge, MA) สำหรับ 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องล้างและบ่มใน 1: การเจือจางของ FITC- ผันแอนติบอดีทุติยภูมิ (Molecular Probes) ส่วนถูกวางไว้บนสไลด์กล้องจุลทรรศน์และครอบคลุมกับสื่อการติดตั้ง วิธีการติดฉลากแบบ ballistic อนุญาตให้ทำการวิเคราะห์รายละเอียดของโครงสร้างกระดูกสันหลัง dendritic และผลลัพธ์ที่ได้นั้นมีคุณภาพและเชิงปริมาณเทียบเคียงกับการศึกษาก่อนหน้าโดยใช้วิธีการทำให้ท้อง Golgi - Cox ในชิ้นสมองหนู (34) อย่างไรก็ตามในทางตรงกันข้ามกับการศึกษาก่อนหน้านี้เราไม่ค่อยสังเกตกระดูกสันหลังสองหัวในเซลล์ประสาทที่มีสี DiI ความแตกต่างนี้อาจเกิดจากความไวของวิธีการย้อมหรือความแปรปรวนของเมาส์ (การศึกษานี้) เมื่อเทียบกับเนื้อเยื่อหนู (34).

immunohistochemistry

สัตว์ถูกทำให้หมดความรู้สึกและถูกทำให้เป็นสัตว์ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น สมองถูกนำออกและเก็บไว้ข้ามคืนใน 4% paraformaldehyde ที่ 4 ° C สมองถูกถ่ายโอนไปยังซูโครส 30% ในสารละลาย PBS สำหรับการแช่แข็ง ส่วนโคโรนา (12 μm) ถูกตัดในการแช่แข็ง microtome (Leica) แล้วประมวลผลสำหรับอิมมูโนฮิสโตเคมี ส่วนของสมองถูกดูดซึมใน 0.3% Triton X-100 ใน PBS เป็นเวลา 15 นาทีและล้างสองครั้งใน PBS ส่วนถูก preincubated ในซีรั่มแพะ 10% ปกติใน PBS สำหรับ 1 h ที่ 37 ° C สัมผัสกับแอนติบอดีปฐมภูมิ (เจือจางในซีรั่มแพะปกติ 1% ใน PBS) ค้างคืนที่ 4 ° C และล้างใน PBS และบ่มด้วยรอง แอนติบอดีสำหรับ 1 ชั่วโมงที่ 37 ° C แอนติบอดีต่อไปนี้ถูกนำมาใช้: กระต่าย anti-pan-FosB (SC-48, 1: 500; เทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ), เมาส์ต่อต้าน NeuN (Chemicon), กระต่ายต่อต้าน GFP, แอนติบอดีต่อต้านกระต่าย -GGG และ rhodamine- คอนจูเกต Anti-mouse IgG (Molecular Probes) สำหรับการติดฉลากสามระดับ (ΔFosB, NeuN และ GFP) สมองส่วนแรกจะได้รับการสร้างภูมิคุ้มกันด้วยแอนติบอดีต่อต้านแพน FosB และแอนติบอดีต่อต้าน NeuN จากนั้นบ่มด้วยแอนติบอดีรอง (rhodamine-conjugated anti-rabbit IgG และ cyan-conjugated anti-mouse IgG ) สมองส่วนที่ถูกย้อมสีสองชั้นได้รับการประมวลผลต่อไปสำหรับการสร้างภูมิคุ้มกันด้วย GFP โดยใช้เทคโนโลยีการทำฉลากของ Zenon (Zenon Alexa Fluor 488, การวัดระดับโมเลกุล) แอนติบอดีต่อต้าน pan-FosB ถูกยกขึ้นสู่ N ปลายทางของ FosB และรู้จักΔFosBและ FosB แบบเต็มความยาว (62) จากการศึกษาก่อนหน้านี้ที่แสดงให้เห็นว่าΔFosB แต่ไม่ใช่ FosB หรือแอนติเจนที่เกี่ยวข้องกับ Fos จะแสดงออกอย่างมีเสถียรภาพหลังจากการรักษาโคเคนเรื้อรังเราคิดว่าการเพิ่มขึ้นของภูมิคุ้มกันในระยะยาวแสดงให้เห็นถึงการแสดงออกที่มั่นคงของΔFosB อย่างไรก็ตามยังไม่ทราบข้อมูลประจำตัวของสัญญาณ FosB immunoreactive ในหนูที่ได้รับน้ำเกลือ การวิเคราะห์ทางสถิติใน 1 ตาราง ใช้ของนักเรียน t ทดสอบ

การวิเคราะห์กระดูกสันหลัง Dendritic

MSNs ส่วนบุคคลใน NAcc ได้รับเลือกสำหรับการวิเคราะห์กระดูกสันหลังตามเกณฑ์หลายประการ (i) มีความเหลื่อมล้ำน้อยที่สุดหรือไม่มีเลยกับเซลล์ที่ติดฉลากอื่น ๆ เพื่อให้แน่ใจว่ากระบวนการจากเซลล์ต่าง ๆ จะไม่สับสน (ii) อย่างน้อยสาม dendrites หลักจะต้องมองเห็นได้สำหรับเซลล์ที่จะใช้สำหรับการวิเคราะห์ (iii) ตรวจสอบเดนไดรต์ส่วนปลาย (เดนไดรต์เทอร์มินัลหรือใกล้กับเดนไดรต์เทอร์มินัล) วิเคราะห์ Dendrites จาก MSN ทั้งสองในแกนกลางและเปลือกของ NAcc แม้ว่าเราจะสังเกตเห็น MSN ที่กระจัดกระจาย (spiny type II) แต่เราวิเคราะห์เฉพาะ MSN ที่มีหนามอย่างหนาแน่น (spiny type I) ในการคำนวณความหนาแน่นของกระดูกสันหลังความยาวของเดนไดรต์ (ยาว> 20 ไมครอน) ถูกตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอล (Zeiss LSM 510) พร้อมเลนส์แช่น้ำมัน (× 40) ภาพทั้งหมดของเดนไดรต์ถูกถ่ายที่แตกต่างกัน z ระดับ (0.5 – 1 μmช่วงความลึก) เพื่อตรวจสอบสัณฐานวิทยาของเงี่ยง dendritic การวัดทั้งหมดทำด้วยซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพ Metamorph (Universal Imaging, Downingtown, PA) การวิเคราะห์ทางสถิติใช้การทดสอบ Kolmogorov – Smirnov

ส่วนที่ยื่นออกมาจาก dendrites แบ่งออกเป็นสี่ประเภทตามความยาวตามที่อธิบายในอ้างอิง 63 และ 64. ส่วนที่ยื่นออกมาคลาส 1 เรียกอีกอย่างว่าส่วนที่ยื่นออกมามีความยาว <0.5 μmขาดหัวกระดูกสันหลังขนาดใหญ่และไม่มีคอ ชั้นที่ 2 หรือเงี่ยงรูปเห็ดมีความยาวระหว่าง 0.5 ถึง 1.25 ไมครอนและมีลักษณะคอสั้นและหัวกระดูกสันหลังขนาดใหญ่ ชั้น 3 หรือเงี่ยงบาง ๆ อยู่ระหว่าง 1.25 ถึง 3.0 μmและมีคอกระดูกสันหลังที่ยาวและมีหัวเล็ก คลาส 4 หรือส่วนขยายเส้นใยเป็นส่วนที่ยื่นออกมาเป็นเส้นใยยาวซึ่งไม่มีหัวกระดูกสันหลังที่มองเห็นได้

กิตติกรรมประกาศ

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย United States Public Health Service Grant DA10044 (ถึง PG และ ACN) และโดยมูลนิธิ Simons มูลนิธิ Peter J. Sharp Foundation Picower Foundation และ FM Kirby Foundation

ตัวย่อ

  • ป.ป.ช.
  • นิวเคลียส accumbens
  • MSN
  • เซลล์ประสาทหนามขนาดกลาง
  • บัค
  • โครโมโซมเทียมจากแบคทีเรีย
  • Drd1
  • ตัวรับ dopamine D1 ตัวเร่งปฏิกิริยา
  • Drd2
  • ตัวรับ dopamine D2 ตัวเร่งปฏิกิริยา
  • DII
  • 1,1′-diotadecyl-3,3,3 ′, 3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
  • 2WD
  • 2 วันหลังการรักษาด้วยยาครั้งสุดท้าย
  • 30WD
  • 30 วันหลังการรักษาด้วยยาครั้งสุดท้าย

เชิงอรรถ

 

คำชี้แจงความขัดแย้งทางผลประโยชน์: ไม่มีการประกาศความขัดแย้ง

อ้างอิง

1 Totterdell S. , Smith ADJ Chem Neuroanat 1989; 2: 285 298- [PubMed]
2 Smith Y. , Bevan MD, Shink E. , Bolam JP ประสาทวิทยาศาสตร์ 1998; 86: 353 387- [PubMed]
3 Heikkila RE, Orlansky H. , Cohen G. Biochem Pharmacol 1975; 24: 847 852- [PubMed]
4 MC Ritz, Lamb RJ, Goldberg SR, Kuhar MJ Science 1987; 237: 1219 1223- [PubMed]
5 Nestler EJ Trends Pharmacol วิทย์ 2004; 25: 210 218- [PubMed]
6 Kalivas PW, Stewart J. Brain Res Rev. 1991; 16: 223 – 244 [PubMed]
7 Pierce RC, Kalivas PW Brain Res Rev. 1997; 25: 192 – 216 [PubMed]
8 Robinson TE, Berridge KC Annu รายได้ Psychol 2003; 54: 25 53- [PubMed]
9 Wolf ME, Khansa MR Brain Res 1991; 562: 164 168- [PubMed]
10 Vanderschuren LJ, Kalivas PW Psychopharmacology 2000; 151: 99 120- [PubMed]
11 Sesack SR, Pickel VMJ Comp Neurol 1992; 320: 145 160- [PubMed]
12 Smith AD, Bolam JP Trends Neurosci 1990; 13: 259 265- [PubMed]
13 Sibley DR, Monsma FJ, Jr. เทรนด์ Pharmacol วิทย์ 1992; 13: 61 69- [PubMed]
14 Beckstead RM, Cruz CJ ประสาทวิทยาศาสตร์ 1986; 19: 147 158- [PubMed]
16 Gerfen CR, Young WS, III Brain Res 1988; 460: 161 167- [PubMed]
16 Gerfen CR Trends Neurosci 2000; 23: S64-S70 [PubMed]
17 Gerfen CR, Engber TM, Mahan LC, Susel Z. , Chase TN, Monsma FJ, Jr. , วิทยาศาสตร์ Sibley DR 1990; 250: 1429 1432- [PubMed]
18 Zahm DS Neurosci Biobehav Rev. 2000; 24: 85 – 105 [PubMed]
19 Lu X.-Y. , Ghasemzadeh MB, Kalivas PW ประสาทวิทยาศาสตร์ 1998; 82: 767 780- [PubMed]
20 Koob GF, Le HT, Creese I. Neurosci เลทท์ 1987; 79: 315 320- [PubMed]
21 Woolverton WL, Virus RM Pharmacol Biochem Behav 1989; 32: 691 697- [PubMed]
22 Bergman J. , Kamien JB, Spealman RD Behav Pharmacol 1990; 1: 355 363- [PubMed]
23 เอ็ป - จอร์แดน MP, Markou A. , Koob GF Brain Res 1998; 784: 105 115- [PubMed]
24 เคน SB, Negus SS, Mello NK, Bergman JJ Pharmacol ประสบการณ์ Ther 1999; 291: 353 360- [PubMed]
25 De Vries TJ, Cools AR, Shippenberg TS NeuroReport 1998; 9: 1763 1768- [PubMed]
26 DW ตนเอง, Barnhart WJ, Lehman DA, Nestler EJ Science 1996; 271: 1586 1589- [PubMed]
27 Khroyan TV, Barrett-Larimore RL, Rowlett JK, Spealman RDJ Pharmacol ประสบการณ์ Ther 2000; 294: 680 687- [PubMed]
28 Alleweireldt AT, Weber SM, Kirschner KF, Bullock BL, Neisewander JL Psychopharmacology 2002; 159: 284 293- [PubMed]
29 Nestler EJ Nat รายได้ Neurosci 2001; 2: 119 128- [PubMed]
30 โรบินสัน TE, Kolb B. Neuropharmacology 2004; 47: 33 46- [PubMed]
31 Kalivas PW Curr Opin Pharmacol 2004; 4: 23 29- [PubMed]
32 Hyman SE, Malenka RC Nat. รายได้ Neurosci 2001; 2: 695 703- [PubMed]
33 โรบินสัน TE, Kolb BJ Neurosci 1997; 17: 8491 8497- [PubMed]
34 Robinson TE, Kolb B. Eur. J. Neurosci 1999; 11: 1598 1604- [PubMed]
35 Li Y. , Kolb B. , Robinson Neuropsychopharmacology 2003; 28: 1082 1085- [PubMed]
36 Gong S. , Zheng C. , Doughty ML, Losos K. , Didkovsky N. , Schambra UB, Nowak NJ, Joyner A. , Leblanc G. , Hatten ME, et al. ธรรมชาติ. 2003; 425: 917 925- [PubMed]
37 Zhou FM, Wilson CJ, Dani JAJ Neurobiol 2002; 53: 590 605- [PubMed]
38 Grutzendler J. , Tsai J. , Gan วิธีการ WB ยินดี 2003; 30: 79 85- [PubMed]
39 Kelz MB, Chen J. , Carlezon WA, Jr. , Whisler K. , Gilden L. , Beckmann AM, Steffen C. , Zhang YJ, Marotti L. , DW ตนเองและคณะ ธรรมชาติ. 1999; 401: 272 276- [PubMed]
40 Nestler EJ Neuropharmacology 2004; 47: 24 32- [PubMed]
41 Le Moine C. , Bloch BJ Comp. Neurol 1995; 355: 418 426- [PubMed]
42 Surmeier DJ, Song WJ, Yan ZJ Neurosci 1996; 16: 6579 6591- [PubMed]
43 Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M. , Nestler EJJ Pharmacol ประสบการณ์ Ther 1995; 275: 1671 1680- [PubMed]
44 Gerfen CR, Keefe KA, Gauda EBJ Neurosci 1995; 15: 8167 8176- [PubMed]
45 Moratalla R. , Elibol B. , Vallejo M. , Graybiel AM Neuron 1996; 17: 147 156- [PubMed]
46 Badiani A. , Oates MM, HE HE, Watson SJ, Akil H. , Robinson TE Behav สมอง. Res 1999; 103: 203 209- [PubMed]
47 Uslaner J. , Badiani A. , Norton CS, HE HE, Watson SJ, Akil H. , Robinson TE Eur J. Neurosci 2001; 13: 1977 1983- [PubMed]
48 Huff RM, Chio CL, Lajiness ME, Goodman LV Adv Pharmacol 1998; 42: 454 457- [PubMed]
49 Zachariou V. , Sgambato-Faure V. , Sasaki T. , Svenningsson P. , Berton O. , Fienberg AA, Nairn AC, Greengard P. , Nestler EJ Neuropsychopharmacology 2005 ส.ค. 3; 10.1038 / sj.npp.1300832
50 McClung CA, Nestler EJ Nat Neurosci 2003; 6: 1208 1215- [PubMed]
51 Norrholm SD, Bibb JA, Nestler EJ, Ouimet CC, Taylor JR, Greengard P. Neuroscience 2003; 116: 19 22- [PubMed]
52 Bibb JA, Chen J. , Taylor JR, Svenningsson P. , Nishi A. , Snyder GL, Yan Z. , Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC และคณะ ธรรมชาติ. 2001; 410: 376 380- [PubMed]
53 Nikolic M. , Chou MM, Lu W. , Mayer BJ, Tsai LH Nature 1998; 395: 194 198- [PubMed]
54 Kesavapany S. , Lau KF, McLoughlin DM, Brownlees J. , Ackerley S. , Leigh PN, Shaw CE, Miller CC Eur J. Neurosci 2001; 13: 241 247- [PubMed]
55 Morabito MA, Sheng M. , Tsai LHJ Neurosci 2004; 24: 865 876- [PubMed]
56 Futter M. , Uematsu K. , Bullock SA, Kim Y. , Hemmings HC, Jr. , Nishi A. , Greengard P. , Nairn AC Proc Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา. 2005; 102: 3489 3494- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
57 Hayashi ML, Choi SY, BS BS, Jung HY, Lee HK, Zhang D. , Chattarji S. , Kirkwood A. , Tonegawa S. Neuron 2004; 42: 773 787- [PubMed]
58 Murase S. , Mosser E. , Schuman EM เซลล์ประสาท 2002; 35: 91 105- [PubMed]
59 Prange O. , Murphy THJ Neurosci 2001; 21: 9325 9333- [PubMed]
60 Feng J. , Yan Z. , Ferreira A. , Tomizawa K. , Liauw JA, Zhuo M. , Allen PB, Ouimet CC, Greengard P. Proc Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา. 2000; 97: 9287 9292- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
61 Li Y. , Acerbo MJ, Robinson TE Eur J. Neurosci 2004; 20: 1647 1654- [PubMed]
62 Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S. , Ulery PG, Wallace DL, DW ตนเอง, Nestler EJ, Barrot M. Eur J. Neurosci 2005; 21: 2817 2824- [PubMed]
63 Harris KM, Jensen FE, Tsao BJ Neurosci 1992; 12: 2685 2705- [PubMed]
64 Vanderklish PW, Edelman GM Proc Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา. 2002; 99: 1639 1644- [บทความฟรี PMC] [PubMed]