Proc Natl Acad Sci สหรัฐ A. 2013 29 ม.ค.;110(5):1923-8. ดอย: 10.1073/pnas.1221742110.
Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC.
แหล่ง
ห้องปฏิบัติการแนนซี่พริตซ์เกอร์ภาควิชาจิตเวชศาสตร์และพฤติกรรมศาสตร์คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยสแตนฟอร์ดพาโลอัลโตแคลิฟอร์เนีย 94305 สหรัฐอเมริกา
นามธรรม
การปรับเปลี่ยน Synaptic ในนิวเคลียส accumbens (NAc) เซลล์ประสาทหนามขนาดกลาง (MSNs) มีบทบาทสำคัญในการเรียนรู้ที่ขึ้นอยู่กับรางวัลแบบปรับตัวและทางพยาธิวิทยา รวมถึงการตอบสนองที่ไม่เหมาะสมที่เกี่ยวข้องกับการติดยา. NAc MSN มีส่วนร่วมในวงจรคู่ขนานสองวงจร เส้นทางตรงและทางอ้อมที่สนับสนุนการทำงานของพฤติกรรมที่แตกต่างกัน- การปรับเปลี่ยน NAc MSN synapses อาจเกิดขึ้นบางส่วนผ่านการเปลี่ยนแปลงศักยภาพในการถอดรหัสของยีนบางตัวในลักษณะเฉพาะของเซลล์ ปัจจัยการถอดรหัส [เพิ่มขึ้น] FosB เป็นหนึ่งในโปรตีนสำคัญที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของยีนใน NAc ที่เกิดจากการใช้ยาในทางที่ผิด แต่ยังไม่ทราบผลกระทบต่อการทำงานของ synaptic ใน NAc MSN ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกที่มากเกินไปของ DeltaFosB ลดความแข็งแรงของไซแนปติกที่ถูกกระตุ้นและมีแนวโน้มที่จะเพิ่มไซแนปส์แบบเงียบไปยังตัวรับโดปามีน D1 ซึ่งแสดง MSN ของวิถีทางโดยตรงทั้งในเปลือก NAc และแกนกลาง
ในทางตรงกันข้าม deltaFosB น่าจะลดไซแนปส์เงียบ ๆ ลงบนเชลล์ NAc แต่ไม่ใช่คอร์ ตัวรับโดปามีน D2 ซึ่งแสดง MSN ของวิถีทางอ้อม- การวิเคราะห์สัณฐานวิทยาของกระดูกสันหลังของเดนไดรต์ NAc MSN เผยให้เห็นว่า [การเพิ่มขึ้น] FosB เพิ่มความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะใน D1 โดยตรง แต่ไม่ใช่ MSN ของวิถีทางทางอ้อมของ D2 ในการพิจารณาผลที่ตามมาจากพฤติกรรมของการกระทำเฉพาะประเภทเซลล์ของ [การเพิ่มขึ้น] FosB เราได้คัดเลือกการแสดงออกมากเกินไป [การเพิ่มขึ้น] FosB ใน MSN ทางตรง D1 หรือทางอ้อม D2 ใน NAc ในวิฟ และพบว่าการแสดงออก MSN ของเส้นทางโดยตรง (แต่ไม่ใช่ทางอ้อม) ช่วยเพิ่มการตอบสนองทางพฤติกรรม โคเคน ผลลัพธ์เหล่านี้เผยให้เห็นว่า [การเพิ่มขึ้น] FosB ใน NAc ปรับคุณสมบัติซินแนปติกและพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลที่แตกต่างกันในรูปแบบเซลล์และรูปแบบเฉพาะของภูมิภาคย่อย
เพื่อกำหนดผลที่ตามมาจากพฤติกรรมของการกระทำเฉพาะประเภทเซลล์ของ ∆FosBเราเลือกแสดงออกมากเกินไป ∆FosB ใน D1 โดยตรง หรือ D2 ทางอ้อม MSNs ใน NAc ใน vivo และพบว่า โดยตรง (แต่ไม่ ทางอ้อม) ทางเดิน การแสดงออกของ MSN ช่วยเพิ่มการตอบสนองทางพฤติกรรมต่อโคเคน ผลลัพธ์เหล่านี้เผยให้เห็นว่า ∆FosB ในเอ็นเอซี แตกต่างออกไป ปรับ คุณสมบัติซินแนปติกและพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลในรูปแบบเซลล์และแบบเฉพาะภูมิภาคย่อย
นิวเคลียส แอคคัมเบนส์ (NAc) เป็นสารตั้งต้นสำคัญในการบูรณาการข้อมูลสร้างแรงบันดาลใจเพื่อจุดประสงค์ในการควบคุมพฤติกรรมที่มุ่งเป้าหมาย มากกว่า 90% ของเซลล์ภายใน NAc เป็นเซลล์ประสาทที่มีหนามปานกลาง (MSN) ซึ่งสามารถแบ่งออกเป็นสองกลุ่มย่อยหลัก ๆ MSN วิถีทางตรง ซึ่งแสดงออกถึงตัวรับโดปามีน D1 (D1 MSN) เป็นหลัก ส่งสัญญาณไปยังนิวเคลียสของโดปามีนในสมองส่วนกลาง (DA) เป็นหลัก ในขณะที่ MSN วิถีทางอ้อม ซึ่งแสดงออกถึงตัวรับ D2 (D2 MSN) เป็นหลัก ส่งสัญญาณไปที่หน้าท้องสีซีดเป็นส่วนใหญ่ ดังนั้นจึงมีอิทธิพลทางอ้อม เซลล์ประสาท DA (1, 2). กิจกรรมของ NAc MSN ส่วนใหญ่ขับเคลื่อนโดยปัจจัยกระตุ้นจากเยื่อหุ้มสมองส่วนหน้า ฮิบโปแคมปัส และต่อมทอนซิล มีการเสนอแนะว่ากิจกรรมทางพยาธิวิทยาที่ NAc excitatory synapses ที่เกิดจากประสบการณ์เชิงพฤติกรรม เช่น การสัมผัสกับยาเสพติด ทำให้เกิดการจัดระเบียบใหม่ของทั้งกลไกการถอดรหัสและ synapses บน NAc MSNs ซึ่งจะเป็นสื่อกลางในการปรับเปลี่ยนพฤติกรรมในระยะยาวที่เกี่ยวข้องกับการติดยาเสพติด (1-3).
การศึกษาล่าสุดได้แสดงให้เห็นว่า D1 MSN และ D2 MSN ในภูมิภาคย่อยหลักของ NAc แสดงคุณสมบัติทางไฟฟ้าฟิสิกส์และซินแนปติกที่แตกต่างกัน (4) และ MSN ทั้งสองประเภทย่อยมีบทบาทที่แตกต่างกันในพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการเสพติด (5- อย่างไรก็ตาม กลไกระดับโมเลกุลที่เป็นรากฐานของความแตกต่างเหล่านี้ยังคงเป็นที่เข้าใจได้ไม่ดีนัก ในช่วงสองทศวรรษที่ผ่านมา หลักฐานที่เพิ่มขึ้นได้เชื่อมโยงการเหนี่ยวนำของ ΔFosB ซึ่งเป็นปัจจัยการถอดรหัสของครอบครัว Fos ใน NAc กับการเปลี่ยนแปลงในวงจรการให้รางวัลของสมองที่เกี่ยวข้องกับพฤติกรรมที่คล้ายการเสพติดและซึมเศร้า (3- ΔFosB ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่มีเสถียรภาพเป็นพิเศษของ FosB ยีน (6) เฮเทอโรไดเมอไรซ์กับโปรตีนตระกูล Jun เพื่อสร้างสารเชิงซ้อนของแอคติเวเตอร์โปรตีน-1 (AP-1) ที่จับกับตำแหน่ง AP-1 ภายในโปรโมเตอร์ยีนเพื่อควบคุมการถอดรหัส แม้ว่าโปรตีนในตระกูล Fos จำนวนมากจะถูกกระตุ้นชั่วคราวจากการสัมผัสกับยาแบบเฉียบพลัน แต่การให้ยาในทางที่ผิดอย่างเรื้อรังทำให้เกิดการสะสมของ ΔFosB ใน NAc ในระยะยาว (6). สอดคล้องกับความสำคัญเชิงหน้าที่ของการสะสมนี้ การแสดงออกมากเกินไปในระยะยาวของ ΔFosB โดยคัดเลือกใน D1 MSNs ของ NAc และ striatum ด้านหลังของหนู bitransgenic ที่เหนี่ยวนำไม่ได้ทำให้เกิดการตอบสนองของหัวรถจักรต่อโคเคนเพิ่มขึ้น (7) เพิ่มความพึงพอใจในสถานที่ที่มีเงื่อนไขสำหรับทั้งโคเคนและมอร์ฟีน (7, 8), และการจัดการโคเคนด้วยตนเองที่ดีขึ้น (9).
อย่างไรก็ตาม การปรับระบบประสาทที่บกพร่องซึ่งเป็นรากฐานของฟีโนไทป์ของการเสพติดอาจเริ่มต้นทันทีเมื่อได้รับยาในทางที่ผิดหรือสิ่งเร้าอื่น ๆ เช่น ความเครียด เพื่อสนับสนุนสมมติฐานนี้ แม้การได้รับความเครียดก่อนเวลาสั้นๆ ก็ทำให้มีแนวโน้มที่จะเสพยามากขึ้น (การแพ้ข้ามสาย) (10-12) และในทางกลับกัน (13- นอกจากนี้ แม้ว่าจะมีการศึกษาผลกระทบของความเครียดและโคเคนต่อคุณสมบัติซินแนปติกของเซลล์ประสาทเหล่านี้ (1-3, 14-16) ขาดหลักฐานโดยตรงสำหรับผลกระทบของ ΔFosB ต่อคุณสมบัติซินแนปติกของ MSN
การควบคุม FosB ของฟังก์ชัน synaptic นั้นเป็นที่สนใจเป็นพิเศษเพราะ ΔFosB การแสดงออกมากเกินไปจะเปลี่ยนแปลงสัณฐานวิทยาของกระดูกสันหลัง dendritic ของ NAc (17, 18) และงานล่าสุดบ่งชี้ว่าหน่วยงานกำกับดูแลการถอดรหัสอื่นๆ สามารถมีอิทธิพลต่อสรีรวิทยาของ NAc MSN (19) และโครงสร้างซินแนปติก (20).
เพื่อตรวจสอบผลกระทบ synaptic ระยะสั้นของการแสดงออก ΔFosB ใน NAc MSNs ทางตรงและทางอ้อม เราใช้หนูดัดแปลงพันธุกรรมจากแบคทีเรียประดิษฐ์โครโมโซม (BAC) ที่เลือกติดป้ายกำกับ D1 MSNs และเวกเตอร์ของไวรัสที่เลือกกำหนดเป้าหมายประชากรย่อย MSN เหล่านี้ การบันทึกแบบกำหนดเป้าหมายจาก MSN เปิดเผยประเภทเซลล์ที่โดดเด่นและผลกระทบเฉพาะภูมิภาคของ
FosB แสดงออกมากเกินไปต่อคุณสมบัติของไซแนปส์ที่ถูกกระตุ้นบน NAc MSN การแสดงออกของ
FosB ใน NAc ยังปรับเปลี่ยนสัณฐานวิทยาของกระดูกสันหลัง dendritic และพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการติดยาเสพติดในลักษณะเฉพาะของเซลล์ ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงหลักฐานเพิ่มเติมว่ากฎระเบียบของ
ระดับ FosB จากการใช้ยาในทางที่ผิดทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงเฉพาะประเภทเซลล์ใน NAc ซึ่งมีส่วนสำคัญในการปรับวงจรที่ซับซ้อนซึ่งเป็นพื้นฐานของพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการติดยาเสพติด
ผลสอบ
FosB ไม่ส่งผลต่อฟังก์ชัน Presynaptic ใน NAc MSN
เพื่อตรวจสอบผลกระทบของซินแนปติก
FosB แสดงออกมากเกินไปใน NAc MSN เราฉีดไวรัสเริม (HSV) แบบ Stereotaxically
FosB หลอมรวมกับ EGFP ลงใน NAc ของหนูพันธุ์ BAC เพศผู้อายุ 8 ถึง 10 สัปดาห์ ซึ่งการแสดงออกของ tdTomato ถูกขับเคลื่อนโดยโปรโมเตอร์ตัวรับโดปามีน D1 (21- สามถึง 4 วันต่อมา เราทำการบันทึกแพตช์แคลมป์ทั้งเซลล์จาก NAc เชลล์และ MSN หลัก โดยมีหรือไม่มี tdTomato กำหนด D1 MSN และ D2 MSN ตามลำดับ (4) และนิพจน์ EGFP ซึ่งกำหนดเซลล์ในที่นั้น
FosB ถูกแสดงออกมา แม้ว่าจะไม่สามารถกำหนดเป้าหมายแกน NAc และเชลล์ด้วยไวรัสในหนูได้ แต่สิ่งสำคัญคือต้องแยกแยะบริเวณสมองเหล่านี้เนื่องจากความแตกต่างที่ทราบในการควบคุมพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลและการเสพติด (2, 3- การตรวจสรีรวิทยาไฟฟ้าแบบมาตรฐานสองชุดพบว่า
การแสดงออกที่มากเกินไปของ FosB ไม่สามารถตรวจพบได้ว่าส่งผลต่อการทำงานของ presynaptic ในประชากรย่อย NAc MSN ใด ๆ ที่ตรวจสอบ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง อัตราส่วนคู่-พัลส์ (PPR) ของกระแสโพสต์ซินแนปติกแบบกระตุ้น (EPSC) ที่ช่วงเวลาระหว่างการกระตุ้นที่แตกต่างกันห้าช่วง ซึ่งเป็นการวัดมาตรฐานของความน่าจะเป็นในการปลดปล่อยเครื่องส่งสัญญาณ ไม่ได้รับผลกระทบจาก
FosB แสดงออกมากเกินไปใน NAc เชลล์หรือคอร์ (รูปที่ S1- นอกจากนี้ ความถี่เฉลี่ยของ EPSC ขนาดเล็ก (mEPSCs) ซึ่งสัมพันธ์กับฟังก์ชันพรีไซแนปติกด้วย ไม่ได้รับผลกระทบจาก
FosB แสดงออกมากเกินไปใน D1 และ D2 MSN ทั้งใน NAc เชลล์และคอร์ (รูปที่ S1).
ผลของการ
FosB เกี่ยวกับคุณสมบัติ Postynaptic แบบกระตุ้นใน NAc D1 MSN
เพื่อตรวจสอบผลกระทบในระยะสั้น
FosB แสดงออกมากเกินไปเกี่ยวกับคุณสมบัติโพสซินแนปติกของไซแนปส์ที่ถูกกระตุ้นใน NAc เชลล์และ MSN หลัก เราวัดอัตราส่วนของตัวรับ AMPA (AMPAR) - ต่อตัวรับ NMDA (NMDAR) - EPSC ที่เป็นสื่อกลาง (22- ในภูมิภาคย่อยทั้งเชลล์และคอร์ อัตราส่วน AMPAR/NMDAR มีขนาดเล็กลงอย่างมีนัยสำคัญใน D1 MSN ที่แสดงออกมากเกินไป
FosB สัมพันธ์กับ D1 MSN ที่ไม่ติดเชื้อที่อยู่ใกล้เคียง (มะเดื่อ. 1 A และ B- การลดลงของอัตราส่วน AMPAR/NMDAR นี้เกิดจากการลดลงของการส่งผ่าน synaptic ที่ใช้สื่อกลาง AMPAR เนื่องจากแอมพลิจูดเฉลี่ยของ mEPSC ที่ใช้สื่อกลาง AMPAR ก็ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเช่นกัน
FosB แสดงออกมากเกินไป (มะเดื่อ. 1 C และ D- เนื่องจากขาด GluA2 AMPAR ที่แก้ไขภายในจึงถูกรวมเข้ากับ NAc MSN ไซแนปส์หลังจากการถอนตัวจากการบริหารตนเองของยาในทางที่ผิดและโปรโตคอลความเครียดเรื้อรัง (14, 15, 23) ต่อไปเราจะตรวจสอบแรงดันกระแส (IV) ความสัมพันธ์ของ AMPAR EPSC ที่แยกได้ทางเภสัชวิทยาเพื่อตรวจสอบว่า
การแสดงออกมากเกินไปของ FosB ส่งผลต่อปริมาณสัมพันธ์ของ AMPARs แบบซินแนปติก อัมปาร์ EPSC IV เส้นโค้งที่บันทึกจากทั้งส่วนควบคุมและ
D1 MSN ที่แสดง FosB ในเปลือก NAc และแกนเป็นเส้นตรงและแสดงการแก้ไขด้านในน้อยที่สุด (มะเดื่อ. 1 E และ F) ดังนั้น,
การแสดงออกมากเกินไปของ FosB ไม่ได้ส่งผลให้มีการรวม AMPAR ที่ขาด GluA2 เข้ากับ NAc D1 MSN synapses สุดท้ายนี้ เพื่อตรวจสอบว่าปริมาณสารสัมพันธ์ของ NMDAR ได้รับผลกระทบหรือไม่
การแสดงออกมากเกินไปของ FosB เราวัดหลักสูตรเวลาการสลายตัวของ NMDAR EPSC ซึ่งยืดเยื้อโดยการมีอยู่ของหน่วยย่อย GluN2B
การแสดงออกของ FosB ทำให้เวลาเพิ่มขึ้นครึ่งหนึ่งอย่างมีนัยสำคัญใน D1 MSN ในเชลล์ NAc (มะเดื่อ. 1 G1 และ G2) และมีแนวโน้มที่คล้ายกันในแกน NAc (มะเดื่อ. 1 H1 และ H2- ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าคล้ายกับการแสดงออกของ CREB ที่มีฤทธิ์เป็นส่วนประกอบใน NAc (24),
การแสดงออกที่มากเกินไปของ FosB ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นของสัดส่วนของ NMDAR ที่ประกอบด้วย GluN2B ที่ NAc D1 MSN synapses
ผลของการ
FosB เกี่ยวกับคุณสมบัติ Postynaptic แบบกระตุ้นใน NAc D2 MSN
ตรงกันข้ามกับ D1 NAc MSN
FosB การแสดงออกมากเกินไปใน D2 MSN กระตุ้นให้เกิดอัตราส่วน AMPAR/NMDAR เพิ่มขึ้นในเชลล์ NAc (มะเดื่อ. 2A) แต่น่าประหลาดใจที่ไม่มีผลกระทบที่ตรวจพบได้ในแกน NAc (มะเดื่อ. 2B- นอกจากนี้ ไม่มีการตรวจวิเคราะห์ซินแนปติกอื่นๆ ที่เปิดเผยผลของ
FosB แสดงออกมากเกินไปใน NAc D2 MSN แอมพลิจูด mEPSC ที่ใช้สื่อกลาง AMPAR (มะเดื่อ. 2 C และ D), แอมพาร์ EPSC IV เส้นโค้งและดัชนีการแก้ไข (มะเดื่อ. 2 E และ F) เช่นเดียวกับหลักสูตรเวลาสลายตัวของ NMDAR EPSC ล้วนไม่ได้รับผลกระทบจาก
FosB แสดงออกมากเกินไปใน NAc D2 MSN การค้นพบนี้แสดงให้เห็นว่า
การแสดงออกมากเกินไปของ FosB จะปรับเปลี่ยนคุณสมบัติของไซแนปส์แบบกระตุ้นบน NAc D2 MSN ในระดับที่น้อยกว่ามากเมื่อเทียบกับไซแนปส์แบบกระตุ้นบน NAc D1 MSN
ผลของการ
FosB บน Silent Synapses ใน NAc D1 และ D2 MSN
ไซแนปส์แบบเงียบแบบโพสต์ซินแนปติกคือไซแนปส์ที่มีระดับ AMPAR ที่ตรวจไม่พบ แต่ NMDAR ที่ตรวจพบได้ง่าย (25-27- เป็นสารตั้งต้นที่เหมาะสำหรับการเพิ่มศักยภาพในระยะยาว (LTP) (28) และสามารถเกิดขึ้นได้โดยการแสดงออกของ CREB ที่มีฤทธิ์เป็นส่วนประกอบในเซลล์ปิรามิด CA1 ของฮิปโปแคมปัส (28) และ NAc MSN (24- เนื่องจากผลกระทบซินแนปติกหลายประการที่สังเกตได้จาก
การแสดงออกที่มากเกินไปของ FosB อาจอธิบายได้โดยการเปลี่ยนแปลงสัดส่วนของไซแนปส์แบบเงียบบน NAc MSNs เราทำการวิเคราะห์ CV ของ AMPAR EPSCs ที่สัมพันธ์กับ NMDAR EPSCs ในการบันทึกจากเซลล์เดียว อัตราส่วน 1/CV2 ของ NMDAR EPSC เป็น 1/CV2 ของ AMPAR EPSC มีความสัมพันธ์โดยตรงกับสัดส่วนของไซแนปส์แบบเงียบ (28, 29).
การแสดงออกที่มากเกินไปของ FosB ทำให้อัตราส่วนนี้เพิ่มขึ้นอย่างมากใน D1 MSN ใน NAc เชลล์และคอร์ (มะเดื่อ. 3 A และ B- ในทางตรงกันข้าม ไม่พบการเปลี่ยนแปลงในอัตราส่วนนี้
FosB ที่แสดง NAc core D2 MSNs ในขณะที่การลดลงเกิดขึ้นใน NAc เชลล์ D2 MSN ที่แสดงออกมากเกินไป
ฟอสบี (มะเดื่อ. 3C- ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับสมมติฐานที่ว่า
การแสดงออกมากเกินไปของ FosB ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นของสัดส่วนของไซแนปส์แบบเงียบบน NAc เชลล์และคอร์ D1 MSN และความไม่เงียบของไซแนปส์บน NAc เชลล์ D2 MSN
ผลของการ
FosB บน NAc MSN Dendritic Spines
ผลลัพธ์ที่ชัดเจนของการบริหารโคเคนใน NAc MSN คือการชักนำให้เกิดกระดูกสันหลังเดนไดรต์ (30, 31) การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างที่อาจเลือกได้สำหรับ D1 MSN (32) และขึ้นอยู่กับ ΔFosB (17, 18- ข้อสังเกตเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการควบคุมการสร้างกระดูกสันหลังโดย ΔFosB อาจเฉพาะเจาะจงกับ D1 MSN เนื่องจากเส้นเมาส์ที่มีอยู่ซึ่งแสดงโปรตีนฟลูออเรสเซนต์ที่มีความจำเพาะต่อชนิดของเซลล์นั้นไม่เพียงพอสำหรับการระบุกระดูกสันหลังของเดนไดรต์ในเซลล์เฉพาะ เพื่อกล่าวถึงหัวข้อนี้ เราจึงใช้เวกเตอร์ HSV ที่ไม่ซ้ำกันซึ่งแสดงออกถึง mCherry ในลักษณะที่ขึ้นกับ Cre recombinase (รูปที่ S2; วิธีการ SI) ในการรวมกันกับเส้นของหนูเมาส์แปลงพันธุ์ที่แสดง Cre อย่างจำเพาะใน MSN ของ D1 หรือ D2 (5- การแปลงเปลือก NAc ของหนูเหล่านี้ด้วย HSV-mCherry ที่ขึ้นกับ Cre และ HSV-GFP-ΔFosB (หรือ HSV-GFP เป็นตัวควบคุม) เผยให้เห็นว่า ΔFosB เพิ่มความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง dendritic ใน D1 MSN แต่ไม่ใช่ D2 MSNs (มะเดื่อ. 4- การเพิ่มขึ้นนี้มีสาเหตุหลักมาจากการเหนี่ยวนำให้เกิดกระดูกสันหลังที่แข็งและอาจบาง ซึ่งถือว่า "ยังไม่บรรลุนิติภาวะ" (33- ในทางตรงกันข้าม การแสดงออกมากเกินไปของ ΔFosB ไม่ส่งผลต่อความหนาแน่นของกระดูกสันหลังเดนไดรต์ที่มีรูปร่างเหมือนเห็ดที่โตเต็มที่ การเพิ่มขึ้นของ ΔFosB ที่เกิดขึ้นในกระดูกสันหลัง dendritic ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะใน NAc D1 MSNs มีความสัมพันธ์ที่ดีกับข้อเสนอที่ว่าการแสดงออก ΔFosB ส่งผลให้เกิดการเพิ่มขึ้นของไซแนปส์แบบเงียบ (27).
ผลของการคัดเลือก
การแสดงออกของ FosB ใน NAc MSN เกี่ยวกับพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการเสพติด
เพื่อตรวจสอบว่าชนิดเซลล์มีผลกระทบเฉพาะในระยะสั้นหรือไม่
FosB การแสดงออกมากเกินไปในคุณสมบัติ synaptic มีความสัมพันธ์กับชนิดของเซลล์ - ผลกระทบเฉพาะต่อพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการเสพติด เราใช้หนู D1-Cre และ D2-Cre ร่วมกับเวกเตอร์ HSV ที่ไม่ซ้ำกันซึ่งมี codon หยุดที่ล้อมรอบด้วยไซต์ loxP (LS1) เพื่อป้องกัน การแสดงออกของยีนเป้าหมายในเซลล์ใดๆ ที่ไม่แสดง Cre (รูปที่ S3- หนูตัวเต็มวัย D1- และ D2-Cre ถูกฉีดทั้งสองข้างใน NAc ด้วย HSV-GFP-LS1-
FosB หรือ HSV-GFP (กลุ่มควบคุม) และพฤติกรรมได้รับการประเมินในช่วง 5 วันหลังการผ่าตัดเมื่อการแสดงออกของยีนมีค่าสูงสุด การแสดงออกมากเกินไปของ
FosB โดยเฉพาะใน D1 NAc MSN ทำให้เกิดอาการแพ้ของหัวรถจักรต่อโคเคนเพิ่มขึ้นทั้งในปริมาณต่ำ (3.75 มก./กก.) และสูง (7.5 มก./กก.) เช่นเดียวกับการตอบสนองของหัวรถจักรเริ่มต้นที่เพิ่มขึ้นต่อปริมาณโคเคนที่ลดลง (มะเดื่อ. 5 A และ C) ในทางตรงกันข้าม,
การแสดงออก FosB มากเกินไปใน D2 NAc MSN ไม่มีผลต่อการตอบสนองของหัวรถจักรของสัตว์ต่อโคเคน (มะเดื่อ. 5 B และ D- ผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกันนี้ได้รับเมื่อประเมินการตั้งค่าสถานที่ที่มีโคเคน (CPP) หนู D1- หรือ D2-Cre ที่ถูกฉีดด้วย HSV-GFP แสดงการพึ่งพาโคเคน CPP ในขนาดยาโดยทั่วไป โดยไม่มีการตั้งค่าที่มีนัยสำคัญที่สังเกตได้ในขนาดยาที่ต่ำกว่า (มะเดื่อ. 5 E และ F). การแสดงออกของ
FosB ใน D1 MSN เพิ่มโคเคน CPP อย่างมากด้วยการตอบสนองสูงสุดที่สังเกตได้ที่ปริมาณโคเคนที่ต่ำกว่า (มะเดื่อ. 5E) ในขณะที่
การแสดงออกของ FosB ใน D2 NAc MSN ไม่ส่งผลต่อการให้โคเคน (มะเดื่อ. 5F). ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า
FosB แสดงออกมากเกินไปใน D1 MSN แต่ไม่ใช่ใน D2 MSN ใน NAc ช่วยเพิ่มการตอบสนองทางพฤติกรรมต่อโคเคน
การสนทนา
งานก่อนหน้านี้ได้ชี้ให้เห็นถึงความเชื่อมโยงที่แข็งแกร่งระหว่างการเปลี่ยนแปลงในวงจรรางวัลของสมองเนื่องจากการเหนี่ยวนำให้เกิดยาของΔFosB และพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการติดยาเสพติด (6- เนื่องจาก ΔFosB มีความเสถียรผิดปกติและถูกชักนำอย่างรุนแรงจากการสัมผัสกับยาเรื้อรัง จึงพบผลกระทบในผู้ติดยาเช่นกัน (18) การศึกษาส่วนใหญ่มุ่งเน้นไปที่การปรับตัวของระบบประสาทและพฤติกรรมที่เกิดจากการแสดงออกของ ΔFosB ในระยะยาว โดยทั่วไปจะใช้เวลา 2–8 สัปดาห์ (3, 6, 7).
อย่างไรก็ตาม การได้รับยาในทางที่ผิดครั้งแรกจะกระตุ้นให้เกิด ΔFosB mRNA และโปรตีน (3, 6, 34) แต่ยังไม่มีการสำรวจผลกระทบของการเหนี่ยวนำนี้ต่อคุณสมบัติซินแนปติกของ NAc MSN และการตอบสนองเชิงพฤติกรรมที่ตามมาต่อการบริหารยา ชมก่อนที่เราจะนำเสนอหลักฐานว่าการแสดงออกในระยะสั้นของ
FosB สร้างเอฟเฟกต์ซินแนปติกและพฤติกรรมที่แตกต่างกันอย่างมากเมื่อแสดงใน NAc D1 เทียบกับ D2 MSN. ฉันn D1 MSNs ทั้งใน NAc core และเชลล์ การแสดงออกมากเกินไปของ ΔFosB ทำให้การส่งผ่าน synaptic ที่ใช้สื่อกลาง AMPAR ลดลงโดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่ตรวจพบได้ในปริมาณสัมพันธ์ของ AMPARs แบบซินแนปติก EPSC ที่ใช้สื่อกลาง NMDAR นั้นถูกยืดเยื้อในเซลล์ประสาทเปลือก NAc (โดยมีแนวโน้มคล้ายกันในเซลล์ประสาทหลัก) ซึ่งบ่งชี้ว่าสัดส่วนของ NMDARs synaptic ที่ประกอบด้วย GluN2B เพิ่มขึ้น. การเปลี่ยนแปลงคุณสมบัติไซแนปส์แบบกระตุ้นเหล่านี้สามารถอธิบายได้บางส่วนโดย
การแสดงออกมากเกินไปของ FosB ทำให้สัดส่วนของไซแนปส์เงียบแบบโพสซินแนปติกเพิ่มขึ้น สอดคล้องกับสมมติฐานนี้ คือ อัตราส่วน 1/CV2 ของ NMDAR EPSC เป็น 1/CV2 ของ AMPAR EPSC เพิ่มขึ้น
FosB เช่นเดียวกับความหนาแน่นของกระดูกสันหลังที่ยังไม่โตเต็มที่ ในทางตรงกันข้าม,
การแสดงออกที่มากเกินไปของ FosB ใน D2 NAc MSN ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นสัมพัทธ์ในการส่งผ่าน synaptic ที่ใช้สื่อกลาง AMPAR ในเชลล์ NAc แต่ไม่ใช่แกนกลาง เอ 1/ซีวี2 การวิเคราะห์ชี้ให้เห็นว่าสิ่งนี้อาจเนื่องมาจากการลดสัดส่วนของไซแนปส์แบบเงียบ แม้ว่าเราจะไม่สามารถแยกแยะได้ว่าการส่งสัญญาณซินแนปติกที่ใช้สื่อกลาง NMDAR ลดลงอย่างสัมพันธ์กัน
เพื่อตรวจสอบว่าการปรับซินแนปติกเฉพาะเซลล์ประเภทเหล่านี้ใน NAc เนื่องจากการแสดงออกมากเกินไปในระยะสั้น ΔFosB มีความสัมพันธ์กับการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมใด ๆ หรือไม่ เราได้พัฒนาวิธีการเฉพาะเพื่อจำกัดการแสดงออก ΔFosB ให้เป็น D1 หรือ D2 NAc MSN โดยใช้ที่สอดคล้องกัน ครีไดร์ไลน์. งานก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกมากเกินไปในระยะยาว (> 6 สัปดาห์) ของΔFosBในวิถีทางตรงของ D1 แต่ไม่ใช่ MSN ของวิถีทางอ้อมของ D2 ทั้งใน NAc และ dorsal striatum ทำให้เกิดความไวต่อโคเคนของหัวรถจักรเพิ่มขึ้น เช่นเดียวกับโคเคน CPP ที่เพิ่มขึ้นที่ต่ำ แต่ ไม่สูงกว่าปริมาณยา (7- ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่าเพียง 2–4 d ของการแสดงออกมากเกินไปของΔFosBใน D1 แต่ไม่ใช่ D2 MSNs ใน NAc คัดเลือกการตอบสนองของหัวรถจักรที่เพิ่มขึ้นต่อปริมาณโคเคนต่ำและเพิ่มความไวของการตอบสนองของหัวรถจักรต่อปริมาณที่สูงขึ้น สในทำนองเดียวกันการแสดงออกที่มากเกินไปในระยะสั้นของΔFosBใน D1 NAc MSNs ทำให้โคเคน CPP เพิ่มขึ้นเป็นปริมาณโคเคนที่ลดลง ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่าการเพิ่มระดับของ ΔFosB ใน D1 NAc MSN ต่อ se ช่วยเพิ่มความไวของสัตว์ต่อผลกระทบของการกระตุ้นหัวรถจักรและการให้รางวัลของโคเคนได้เร็วกว่าที่คาดไว้มาก ผลลัพธ์เหล่านี้ยังชี้ให้เห็นว่าการเหนี่ยวนำของ ΔFosB ที่เกิดจากการสัมผัสกับยาครั้งแรกอาจนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงที่ตามมาซึ่งเกิดขึ้นในการตอบสนองต่อการบริหารซ้ำ
งานก่อนหน้านี้ในหนูแสดงให้เห็นว่าการถอนระยะสั้น (1–2 วัน) จากการบริหารโคเคนที่ไม่เกิดขึ้นเรื้อรัง (5 วัน) ทำให้เกิดการสร้างไซแนปส์แบบเงียบใน NAc MSN (35- การดัดแปลงซินแนปติกที่เกิดจากโคเคนนี้ถูกปิดกั้นโดยการแสดงออกของ CREB รูปแบบเชิงลบที่โดดเด่น และถูกเลียนแบบโดยการแสดงออกของ CREB ที่มีฤทธิ์เป็นส่วนประกอบ (24) ซึ่งกระตุ้นให้เกิดไซแนปส์แบบเงียบในฮิบโปแคมปัสด้วย (28- นอกจากนี้ ไซแนปส์แบบเงียบใน NAc ยังมี NMDAR ที่ประกอบด้วย GluN2B ในสัดส่วนที่มากกว่า ซึ่งการปิดล้อมซึ่งป้องกันการเหนี่ยวนำโคเคนของไซแนปส์แบบเงียบ เช่นเดียวกับภาวะภูมิไวเกินของหัวรถจักรที่เกิดจากโคเคน (24, 35- ผลทางซินแนปติกของการแสดงออกมากเกินไปของ ΔFosB ในระยะสั้นแสดงให้เห็นที่นี่ รวมกับข้อเท็จจริงที่ว่าการบริหารโคเคนกระตุ้นให้เกิด ΔFosB อย่างรุนแรงในหนู (7) แนะนำว่าการบริหารโคเคนยังสร้างไซแนปส์แบบเงียบใน NAc MSN ในหนู แม้ว่าจะมีลักษณะเฉพาะประเภทเซลล์ก็ตาม การเหนี่ยวนำปัจจัยการถอดรหัสทั้งสองมีความจำเป็นสำหรับการเปลี่ยนแปลงซินแนปติกที่เกิดจากยาหรือไม่นั้นจะต้องมีการศึกษาเพิ่มเติม ตเขาสังเกตว่า CREB และ
FosB ทั้งคู่สามารถกระตุ้นให้เกิดไซแนปส์แบบเงียบใน NAc MSN นั้นน่าสนใจเนื่องจากมีหลักฐานมากมายที่แสดงว่าพวกมันเป็นสื่อกลางฟีโนไทป์ของพฤติกรรมที่ตรงกันข้าม: ในขณะที่ระยะยาว
FosB ส่งเสริมการให้รางวัลโคเคน CREB ให้ผลตรงกันข้าม (3, 6- อย่างไรก็ตามระยะสั้น
FosB การแสดงออกมากเกินไปในหนูไบทรานส์เจนิกที่เหนี่ยวนำไม่ได้ทำให้ผลกระทบทางพฤติกรรมของโคเคนลดลง (36) ผลลัพธ์ที่อาจสะท้อนถึงระดับที่ต่ำกว่าของ
FosB เกิดขึ้นที่จุดเวลานี้หรือผลที่ตามมาโดยตรงของระยะเวลาการแสดงออกที่สั้นกว่า การค้นพบที่นำเสนอในที่นี้ชี้ให้เห็นถึงความเป็นไปได้ในอดีตเนื่องจากช่วงเวลาสั้น ๆ ของการแสดงออกที่มากเกินไปโดยอาศัย HSV ในระดับสูง
FosB ใน D1 NAc MSN เช่นเดียวกับการแสดงออกในระยะยาว ได้ปรับปรุงผลกระทบทางพฤติกรรมของโคเคน เห็นได้ชัดว่าจำเป็นต้องมีการทำงานเพิ่มเติมเพื่อทำความเข้าใจผลกระทบที่ขัดแย้งกันของการเหนี่ยวนำ CREB เทียบกับ
FosB ใน NAc คำอธิบายหนึ่งอาจเป็นความจำเพาะของประเภทเซลล์ของการกระทำเนื่องจากการชักนำโคเคน
FosB เป็นแบบเลือกสำหรับ D1 MSN ในขณะที่การเหนี่ยวนำ CREB เกิดขึ้นอย่างเท่าเทียมกันใน D1 และ D2 MSNs เช่นเดียวกับใน GABAergic interneurons บางตัว (3- นอกจากนี้ยังจำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องระบุยีนเป้าหมายจำนวนมากซึ่งปัจจัยการถอดรหัสเหล่านี้กระตุ้นให้เกิดผลกระทบทางไฟฟ้าสรีรวิทยาและพฤติกรรม
NAc เป็นบริเวณสมองที่ซับซ้อน ซึ่งประกอบด้วยเซลล์หลายชนิดผสมกัน โดยมีบทบาทที่แตกต่างกันในวงจรและพฤติกรรมที่สัมพันธ์กันหลายวงจร (1, 3- ที่นี่ เราเน้นไปที่ MSN โดยเฉพาะ เนื่องจากเป็นเซลล์ประสาทฉายภาพของ NAc ผลลัพธ์การทำงานของพวกมันจึงเชื่อมโยงโดยตรงกับพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการเสพติด (5, 37, 38) และการเปลี่ยนแปลงในการกระตุ้น NAc MSN ทำให้เกิดความผิดปกติทางพฤติกรรมที่คล้ายกับการเสพติด (39- โปรตีนหลายชนิดที่ควบคุมโดยการใช้ยาในทางที่ผิดนั้นเชื่อมโยงกับการเปลี่ยนแปลงทางสรีรวิทยาของ NAc MSN (4, 19, 40, 41- ในขณะที่การศึกษาก่อนหน้านี้บางส่วนได้ตรวจสอบความแตกต่างทางซินแนปติกระหว่าง MSN ของวิถีทางตรงและทางอ้อม (2, 4) และคนอื่นๆ มุ่งเน้นไปที่ความแตกต่างระหว่างเปลือก NAc และภูมิภาคย่อยหลัก (16) ไม่ได้ให้ภาพรวมที่สมบูรณ์ว่าโปรตีนที่กำหนดส่งผลต่อสรีรวิทยาของชนิดย่อย MSN ทั้งสองในภูมิภาคย่อยของ NAc ทั้งสองอย่างไร ตอนนี้เราแสดงนิพจน์ระยะสั้นของ
FosB มีผลกระทบเฉพาะประเภทเซลล์และเฉพาะภูมิภาคต่อคุณสมบัติไซแนปติกกระตุ้นของ NAc MSN และการจัดการระดับโมเลกุลนี้โดยเฉพาะใน D1 NAc MSN ช่วยเพิ่มการตอบสนองทางพฤติกรรมต่อโคเคน เนื่องจากเซลล์ทั้งสองประเภทในทั้งสองภูมิภาคย่อยมีโปรตีนและเส้นทางการส่งสัญญาณร่วมกัน แต่มีผลกระทบต่อพฤติกรรมที่แตกต่างกัน ผลลัพธ์เหล่านี้จึงเป็นก้าวเริ่มต้นในการให้ความเข้าใจที่ครอบคลุมเกี่ยวกับการปรับตัวของโมเลกุลและวงจรใน NAc ที่เกิดจากการใช้ยาในทางที่ผิด งานในอนาคตจะต้องกำหนดว่าการเปลี่ยนแปลงซินแนปติกเหล่านี้เกิดขึ้นเป็นพิเศษที่อินพุตเฉพาะใน NAc หรือไม่ ไม่ว่าจะมีความสัมพันธ์เชิงสาเหตุโดยตรงระหว่างสิ่งเหล่านี้หรือไม่
การเปลี่ยนแปลงซินแนปติกและพฤติกรรมที่เกิดจาก FosB และไม่ว่าจะให้ยาในทางที่ผิดหรือความเครียด ซึ่งทั้งสองอย่างนี้ทำให้เกิด
FosB ทำให้เกิดการดัดแปลง synaptic และพฤติกรรมที่คล้ายกัน
วิธีการ
สำหรับคำอธิบายโดยละเอียดของวิธีการ โปรดดู วิธีการ SI.
โครโมโซมประดิษฐ์จากแบคทีเรีย Heterozygous (BAC) หนูตัวเต็มวัย (8–12 สัปดาห์) ถูกนำมาใช้ในการทดลองทั้งหมดและตั้งอยู่รวมกันเป็นกลุ่มละสองถึงห้าตัวต่อกรงในวงจรแสง / มืด 12/12-h พร้อมอาหารและน้ำ ตลอดเวลา. การศึกษาสรีรวิทยาไฟฟ้าใช้หนู D1-tdTomato ย้อนกลับไปยัง C57/Bl6 (21- สำหรับการทดลองเชิงพฤติกรรมและการวิเคราะห์กระดูกสันหลังของเดนไดรต์ มีการใช้หนู D1- และ D2-Cre ที่แบ่งออกเป็นกลุ่มที่จับคู่อายุ (5, 42- การทดลองทั้งหมดดำเนินการตามนโยบายที่กำหนดโดยคณะกรรมการการดูแลและใช้สัตว์ประจำสถาบัน (IACUC) ที่มหาวิทยาลัยสแตนฟอร์ดและคณะแพทยศาสตร์ Mount Sinai
กิตติกรรมประกาศ
เราขอขอบคุณสมาชิกของห้องปฏิบัติการ Malenka และ Nestler สำหรับความคิดเห็นที่เป็นประโยชน์ตลอดระยะเวลาของโครงการนี้ งานนี้ได้รับการสนับสนุนจากสถาบันแห่งชาติเพื่อการใช้ยาเสพติดในทางที่ผิด 1K99DA031699 (สำหรับ BAG) และ P01 DA008227 (สำหรับ EJN และ RCM) และสถาบันสุขภาพจิตแห่งชาติ R01 MH51399 (สำหรับ EJN)
เชิงอรรถ
ผู้เขียนรายงานว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์
บทความนี้มีข้อมูลสนับสนุนออนไลน์ที่ www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1221742110/-/DCSupplemental.
อ้างอิง
FosB และ CaMKII ในเปลือกนิวเคลียสแอคคัมเบนส์ เจ นิวโรสซี. 2013 ในสื่อ
ฟอสบี. แนท เนโรไซ. 2003;11:1208–1215. -PubMed]




