J Neurochem 2014 ม.ค. ; 128 (1): 173-85 doi: 10.1111 / jnc.12381 Epub 2013 ส.ค. 21
Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, มาร์ชองนิวเจอร์ซีย์, S Fanous, เฮา X, Shaham Y, หวังว่า BT.
นามธรรม
ยาบ้าและยาอื่น ๆ จะกระตุ้นการทำงานของเซลล์ประสาททุกส่วนในสมอง ก่อนหน้านี้เราได้พัฒนาวิธีการเรียงลำดับเซลล์แบบใช้แสงฟลูออเรสเซนต์ (FACS) เพื่อจำแนกลักษณะการเปลี่ยนแปลงของโมเลกุลที่เกิดจากการคัดเลือกในเซลล์ประสาทที่ถูกกระตุ้นซึ่งแสดงออกถึงกิจกรรมของระบบประสาท Fos อย่างไรก็ตามวิธีนี้ต้องใช้การรวมตัวอย่างจากหนูจำนวนมาก ตอนนี้เราอธิบายวิธีการที่ใช้ FACS ที่ดัดแปลงเพื่อกำหนดลักษณะการเปลี่ยนแปลงของโมเลกุลในเซลล์ประสาทสตริดอลหลัง Fos-expressing จากหนูตัวเดียวโดยใช้กลยุทธ์การขยายสัญญาณก่อนหน้าแบบมัลติเพล็กซ์
Fos และ NeuN (เครื่องหมายเซลล์ประสาท) ระบุว่า 5-6% ของเซลล์ประสาท striatum หลัง 90-5 ถูกเปิดใช้งาน 0.5 นาทีหลังจากการฉีด methamphetamine เฉียบพลัน (XNUMX mg / kg, ip) ในขณะที่น้อยกว่า XNUMX% ของเซลล์ประสาท
เราใช้ FACS เพื่อแยกเซลล์ประสาทที่ติดฉลาก NeuN ออกเป็นเซลล์ประสาท Fos-positive และ Fos-negative และประเมินการแสดงออกของ mRNA โดยใช้ RT-qPCR จากเซลล์ประสาท Fos-positive เพียงห้าเซลล์ แอมเฟตตามินทำให้ 3-20-fold เพิ่มขึ้นในช่วงต้นของยีนอาร์คโฮเมอร์ - 2, c-fos, fosB และ isoforms (ΔfosBและ isoform นวนิยาย novelfosB-2) ในเซลล์ประสาท Fos-positive แต่ไม่ใช่ Fos-positive การเหนี่ยวนำ mRNA ของยีนต้นโดยทันทีคือ 10 ลดลงหรือขาดหายไปเมื่อประเมินในตัวอย่างที่ไม่เรียงลำดับจาก homogenates dorsal striatum หลังเดี่ยว วิธีการแก้ไขของเราทำให้สามารถศึกษาการเปลี่ยนแปลงโมเลกุลที่เป็นเอกลักษณ์ในเซลล์ประสาทที่ถูกกระตุ้นโดยยาหรือตัวชี้นำที่เกี่ยวข้องกับยาในรูปแบบการติดที่ซับซ้อน
ยาบ้าและยาอื่น ๆ จะกระตุ้นการทำงานของเซลล์ประสาททุกส่วนในสมอง เรามารายงานวิธีการที่ได้รับการปรับปรุงเพื่อแสดงลักษณะการเปลี่ยนแปลงของโมเลกุลที่เกิดจากการคัดเลือกในเซลล์ประสาทที่ถูกกระตุ้นซึ่งแสดงเครื่องหมายของระบบประสาท Fos เราใช้ FACS พร้อมกับการขยายสัญญาณล่วงหน้า PCR เป้าหมายเพื่อประเมินการแสดงออกของยีนที่เกิดจาก methamphetamine แบบเฉียบพลันจากเพียงไม่กี่เท่าที่ 5 แสดงการแสดงออกของเซลล์ประสาท FosS จาก striatum หนูหลังเดี่ยว แอมเฟตตามินทำให้ 3-20-fold เพิ่มขึ้นของยีนเริ่มต้นทันที (IEGs) ใน Fos-positive แต่ไม่ Fos-negative เซลล์ประสาท PCR เป้าหมายแบบขยายก่อนกำหนดทำให้สามารถศึกษาการเปลี่ยนแปลงโมเลกุลที่เป็นเอกลักษณ์ในเซลล์ประสาทที่ถูกกระตุ้นโดยยาหรือตัวชี้นำที่เกี่ยวข้องกับยาในรูปแบบการติดที่ซับซ้อน
เผยแพร่ 2013 บทความนี้เป็นงานของรัฐบาลสหรัฐอเมริกาและเป็นสาธารณสมบัติในสหรัฐอเมริกา
;