ความคิดเห็น: การศึกษาพบว่าการดื่มเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ด้วยตนเองทำให้มีการสะสมของเดลตาฟอสบีในปริมาณมาก การฝังเข็มไฟฟ้าโดยเฉพาะสามารถยับยั้งการดื่มแอลกอฮอล์ได้อย่างมาก ซึ่งสอดคล้องกับการลดลงของเดลตาฟอสบี การบล็อกเดลตาฟอสบีในผู้ป่วยติดยา จะช่วยบล็อกผลกระทบหลักจากการได้รับยา กลไกการออกฤทธิ์บ่งชี้ว่าการฝังเข็มไฟฟ้าจะยับยั้งโดปามีน จึงยับยั้งการสะสมของเดลตาฟอสบี
แหล่ง
ภาควิชาวิสัญญีวิทยา เภสัชวิทยา และสรีรวิทยา มหาวิทยาลัยแพทยศาสตร์และทันตแพทยศาสตร์แห่งนิวเจอร์ซีย์ คณะแพทยศาสตร์นิวเจอร์ซีย์ นวร์ก รัฐนิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา
นามธรรม
จำเป็นต้องมีการบำบัดแบบใหม่สำหรับ แอลกอฮอล์ การละเมิดเป็นปัญหาสาธารณสุขที่สำคัญในสหรัฐอเมริกาและทั่วโลก มีเพียงสามยาที่ได้รับการอนุมัติจาก FDA สำหรับการรักษา แอลกอฮอล์ การใช้ยาในทางที่ผิด (แนลเทรโซน อะแคมโพรเสต และดิซัลฟูรัม) โดยเฉลี่ยแล้ว ยาเหล่านี้ให้ผลสำเร็จเพียงเล็กน้อยในการลดอาการในระยะยาว แอลกอฮอล์ การบริโภค. Electroacupuncture ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถบรรเทาการติดยาเสพติดต่างๆ ได้ รวมถึง แอลกอฮอล์. แม้ว่างานวิจัยก่อนหน้านี้จะแสดงให้เห็นว่า Electroacupuncture ลดลง แอลกอฮอล์ การบริโภคกลไกพื้นฐานยังไม่ได้รับการอธิบายอย่างสมบูรณ์ ΔFosB และ FosB เป็นสมาชิกของปัจจัยการถอดรหัสตระกูล Fos ที่มีส่วนเกี่ยวข้องกับความยืดหยุ่นของระบบประสาทในการติดยา; ความเชื่อมโยงระหว่าง Electroacupunctureการรักษาของ แอลกอฮอล์ ยังไม่มีการพิสูจน์ว่าหนูทดลองกลุ่มฟอสมีพฤติกรรมผิดปกติ ในการศึกษานี้ เราฝึกหนูให้ดื่มเอธานอลในปริมาณมากโดยใช้วิธีการดื่มแบบสองขวดสลับกัน เมื่อหนูทดลองได้เอธานอลพื้นฐานที่เสถียร การบริโภค, Electroacupuncture (100 Hz หรือ 2 Hz วันละ 30 นาที) ได้รับการบริหารที่ Zusanli (ST36) เป็นเวลา 6 วันติดต่อกัน ระดับของ FosB/ ΔFosB in ตอบแทน-ที่เกี่ยวข้อง สมอง ภูมิภาค ได้รับการประเมินโดยการตรวจภูมิคุ้มกันเนื้อเยื่อ พบว่าการบริโภคและความต้องการเอธานอลในหนูที่มีความถี่ต่ำกว่า 100 เฮิรตซ์ แต่ไม่ใช่ 2 เฮิรตซ์ Electroacupuncture กองทหารได้รับการลดจำนวนลงอย่างรวดเร็ว การลดลง ได้ถูกคงไว้เป็นเวลาอย่างน้อย 72 ชั่วโมงหลังจากการสิ้นสุด Electroacupuncture การรักษา ในทางกลับกัน 100 Hz Electroacupuncture ไม่เปลี่ยนแปลงปริมาณการบริโภคและความต้องการซูโครสซึ่งเป็นสารให้รางวัลตามธรรมชาติ นอกจากนี้ยังมี FosB/ ΔFosB ระดับ ในคอร์เทกซ์ด้านหน้า ภูมิภาคสไตรเอตัมและภูมิภาคหลังของพื้นที่เทกเมนทัลด้านท้องเพิ่มขึ้นตาม มากเกินไป เอทานอล การบริโภคแต่ลดลงหลังจาก 100 Hz เป็นเวลา XNUMX วัน Electroacupunctureดังนั้นการศึกษานี้จึงแสดงให้เห็นว่าความถี่ 100 เฮิรตซ์ XNUMX วัน Electroacupuncture การบำบัดลดเอธานอลได้อย่างมีประสิทธิภาพ การบริโภค และความชอบในหนูที่ดื่มน้ำเป็นประจำ มากเกินไป ปริมาณเอธานอล ผลกระทบนี้ Electroacupuncture อาจได้รับการไกล่เกลี่ยโดยการควบคุมลงของ FosB/ ΔFosB in ตอบแทน-ที่เกี่ยวข้อง
บทนำ
การใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิดเป็นปัญหาสาธารณสุขที่สำคัญในสหรัฐอเมริกาและทั่วโลก จนถึงปัจจุบัน มียาที่ได้รับการรับรองจาก FDA สำหรับการรักษาอาการใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิดเพียงสามชนิดเท่านั้น (แนลเทรโซน อะแคมโพรเสต และไดซัลฟูรัม) โดยเฉลี่ยแล้ว ยาเหล่านี้ให้ผลสำเร็จเพียงเล็กน้อยในการลดการบริโภคแอลกอฮอล์ในระยะยาว [1], [2], [3]ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการบำบัดแบบใหม่ การฝังเข็มซึ่งประกอบด้วยการกระตุ้นจุดบางจุดบนร่างกายโดยใช้เข็ม ถูกนำมาใช้ในจีนมานานนับพันปี แม้ว่าจะยังไม่ชัดเจนนักว่าสัญญาณการฝังเข็มจากจุดฝังเข็ม เช่น จุด Zusanli (ST36) ส่งต่อไปยังระบบประสาทส่วนกลางได้อย่างไร แต่ได้มีการระบุลักษณะว่าแรงกระตุ้นที่เกิดจากการฝังเข็มส่วนใหญ่ส่งผ่านเส้นใย Aβ และ AΔ [4]การฝังเข็มกระตุ้นเส้นใยประสาทไมอีลินขนาดเล็กในกล้ามเนื้อ ซึ่งส่งแรงกระตุ้นไปยังไขสันหลัง จากนั้นกระตุ้นศูนย์รวม 3 แห่ง (ไขสันหลัง สมองส่วนกลาง และต่อมใต้สมอง-ไฮโปทาลามัส) และกระตุ้นการหลั่งของสารเอนดอร์ฟิน 3 ชนิด (เอนเคฟาลิน เบตาเอนดอร์ฟิน และไดนอร์ฟิน) และโมโนเอมีนชนิดอื่นๆ กระตุ้นให้เกิดผลทางสรีรวิทยาที่ล้ำลึกและกลไกการรักษาตนเอง [5]ดังนั้นการฝังเข็มจึงได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางว่าเป็นวิธีการรักษาที่มีประสิทธิผลสำหรับอาการป่วยบางอย่าง เช่น อาการคลื่นไส้ ปวด [6] และยาเสพติด [7]เมื่อเปรียบเทียบกับการแทรกแซงทางเภสัชวิทยาที่มีอยู่ในปัจจุบัน ข้อได้เปรียบที่ชัดเจนของการบำบัดด้วยการฝังเข็มก็คือ มีศักยภาพในการช่วยให้ผู้ติดยาอยู่ห่างจากยาโดยไม่มีผลข้างเคียงร้ายแรง การศึกษาทางคลินิกและก่อนทางคลินิกก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการฝังเข็มหรือการฝังเข็มร่วมกับการกระตุ้นด้วยไฟฟ้า (การฝังเข็มไฟฟ้า) เป็นการรักษาที่มีประสิทธิภาพสำหรับอาการถอนพิษสุราและการใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิด [8], [9], . เมื่อไม่นานนี้ เราได้แสดงให้เห็นว่า EA ของ 2 Hz ลดการบริโภคแอลกอฮอล์โดยสมัครใจในหนู [14]อย่างไรก็ตาม คำถามมากมายเกี่ยวกับกลไกพื้นฐานของการฝังเข็มโดยทั่วไป และการดื่มสุรามากเกินไปโดยเฉพาะยังไม่ได้รับการตอบอย่างดี
การศึกษาวิจัยการเปลี่ยนแปลงในระยะยาวของโครงสร้างและการทำงานของสมองที่เกิดขึ้นพร้อมกับการสัมผัสยาเสพติดเป็นเวลานาน แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงในการควบคุมยีนมีส่วนสำคัญต่อลักษณะการเสพติด [15]. ฉันโดยเฉพาะอย่างยิ่ง ปัจจัยการถอดรหัส 2 ตัว ได้แก่ ΔFosB และ CREB (โปรตีนจับองค์ประกอบที่ตอบสนองต่อ cAMP) มีส่วนเกี่ยวข้องกับความยืดหยุ่นของระบบประสาทที่เกี่ยวข้องกับการติดยา [15]ปัจจัยการถอดรหัส Δ FosB ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ยีน FosB ในช่วงต้นที่ถูกตัดปลาย C ที่เสถียรผิดปกติ จะสะสมในวงจรการเสพติดหลังจากใช้ยาเสพติดส่วนใหญ่ รวมถึงโคเคน มอร์ฟีน Δ9-เตตระไฮโดรแคนนาบินอลและเอธานอล [16]. เมื่อแสดงออกแล้ว จะค่อนข้างเสถียรและสามารถคงอยู่ในสมองได้นานหลายสัปดาห์หลังจากได้รับยาครั้งสุดท้าย โดยควบคุมยีนจำนวนมากที่เกี่ยวข้องกับโครงสร้างเดนไดรต์สไปน์ การทำงานของซินแนปส์ และความยืดหยุ่น เช่น ไซคลินดีเพนเดนต์ไคเนส 5 และไดนอร์ฟิน [17], [18]ΔFosB ทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการปรับสภาพซินแนปส์ซึ่งส่งผลต่อการแสดงออกทางพฤติกรรมต่างๆ ในการตอบสนองต่อการได้รับยาการศึกษาครั้งก่อนจากห้องปฏิบัติการของเราและห้องปฏิบัติการอื่นๆ แสดงให้เห็นว่าการได้รับแอลกอฮอล์เป็นเวลานานทำให้เกิดการสะสมของ ΔFosB ในบริเวณย่อยของสไตรเอตัมและคอร์เทกซ์ส่วนหน้า (PFC) [16], [19]ซึ่งเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นระบบโอปิออยด์ภายในร่างกาย [19]จากหลักฐานที่มีอยู่บ่งชี้ว่า EA ช่วยบรรเทาการบริโภคแอลกอฮอล์และการติดมอร์ฟีนโดยโต้ตอบกับตัวรับโอปิออยด์ [12], [20], [21]และการฝังเข็มช่วยลดอาการกำเริบของโคเคนที่เกิดจากความเครียดโดยการยับยั้งการแสดงออกของ Fos และการทำงานของ CREB ในบริเวณย่อยของสไตรเอตัม [22]เราตั้งสมมติฐานว่าการยับยั้ง EA จากการบริโภคแอลกอฮอล์อาจเกิดจากปัจจัยการถอดรหัส เช่น โปรตีน FosB/ΔFosB ในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัล เพื่อทดสอบความเป็นไปได้นี้ เราจึงให้ EA หลายครั้งที่จุดฝังเข็มสองข้าง ST36 ในหนูที่ดื่มเอธานอลในปริมาณมากเป็นประจำภายใต้ขั้นตอนการดื่มแบบเลือกดื่มสองขวด (IE) ที่ได้รับการปรับเปลี่ยนเป็นระยะ การแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลหลายแห่งได้รับการประเมินโดยใช้ภูมิคุ้มกันเนื้อเยื่อ ซึ่งมีความไวสูงกว่าการบล็อตแบบเวสเทิร์น และให้รายละเอียดทางกายวิภาคที่มากขึ้น [23].
วิธีการ
การทดลองทั้งหมดดำเนินการตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง และได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของสถาบันมหาวิทยาลัยแพทยศาสตร์และทันตแพทยศาสตร์แห่งนิวเจอร์ซี นวร์ก รัฐนิวเจอร์ซี
สัตว์และที่อยู่อาศัย
หนู Sprague-Dawley (SD) ตัวเต็มวัย (น้ำหนัก 250–350 กรัม เมื่อเริ่มการทดลอง ที่ Taconic Farm, NY) ถูกเลี้ยงแยกกันในกรงที่มีการระบายอากาศ ในห้องที่ควบคุมอุณหภูมิ (20–22°C) และอยู่ในรอบแสง/ความมืด 12 ชั่วโมง (ปิดไฟตอน 6 น.) มีอาหารและน้ำให้กินตามต้องการ
ขั้นตอนการดื่มเครื่องดื่มแอลกอฮอล์
สัตว์ได้รับการปรับให้เข้ากับสภาพแวดล้อมในกรงที่บ้านเป็นครั้งแรกเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ และได้รับการฝึกให้ดื่มเอธานอลโดยสมัครใจภายใต้ขั้นตอนการดื่มแบบเลือกได้สองขวดเป็นระยะๆ ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [14], [19], [24], [25], [26]โดยสรุป สัตว์ได้รับเอธานอล 24% (v/v) ในน้ำ 20 ขวดและน้ำ 6 ขวดพร้อมกันเป็นเวลา 00 ชั่วโมง เริ่มตั้งแต่เวลา 24 น. ของวันจันทร์ หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง ขวดเอธานอลจะถูกแทนที่ด้วยขวดน้ำขวดที่สองซึ่งจะใช้ได้ตลอด 5 ชั่วโมงถัดไป รูปแบบนี้เกิดขึ้นซ้ำในวันพุธและวันศุกร์ ในวันอื่นๆ ของสัปดาห์ หนูสามารถเข้าถึงน้ำได้ไม่จำกัด 20 ขวด ในวันที่หนูเข้าถึงเอธานอลได้ หนูจะสลับขวดเอธานอลเพื่อควบคุมความชอบด้านต่างๆ ในการศึกษานี้ เราปรับเปลี่ยนขั้นตอนโดยเติมซูโครส XNUMX% ลงในสารละลายเอธานอล XNUMX% ในสามเซสชันเอธานอลแรก การปรับเปลี่ยนนี้ทำให้หนูได้รับเอธานอลเร็วขึ้นอย่างรวดเร็วและชัดเจน (มะเดื่อ. 1) ปริมาณเอธานอลหรือน้ำที่บริโภคจะถูกกำหนดโดยการชั่งน้ำหนักขวดก่อนเข้าถึงและหลังจากเข้าถึง 24 ชั่วโมง น้ำหนักของหนูแต่ละตัวจะถูกวัดทุกวันตั้งแต่วันจันทร์ถึงวันศุกร์เพื่อติดตามสุขภาพและคำนวณปริมาณเอธานอลที่บริโภคเป็นกรัมต่อน้ำหนักตัว XNUMX กิโลกรัม การบริโภคเอธานอลจะถูกกำหนดโดยการคำนวณปริมาณแอลกอฮอล์ที่บริโภคเป็นกรัมต่อน้ำหนักตัว XNUMX กิโลกรัม อัตราส่วนการบริโภคเอธานอลที่ต้องการคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้: อัตราส่วนการบริโภคที่ต้องการ (%) 
= ปริมาณเอธานอลที่บริโภค (มล./24 ชม.)/ปริมาณของเหลวที่บริโภคทั้งหมด (มล./24 ชม. ของเอธานอล + น้ำ มล./24 ชม.) หนูทดลองได้รับเอธานอล 20% เป็นระยะๆ โดยใช้ขวดสองใบเป็นเวลา 4 สัปดาห์ (12 ครั้ง) ใช้ขวดน้ำในกรงที่ไม่มีหนูทดลองเพื่อประเมินการรั่วไหลอันเนื่องมาจากการจัดการทดลองระหว่างช่วงการทดสอบ ปริมาณของเหลวที่รั่วไหลจะน้อยกว่า 1.0 มล. เสมอ (น้อยกว่า 2.5% ของปริมาณของเหลวที่บริโภคทั้งหมด)
รูป 1
ความเข้มข้นของเอธานอลในเลือด (BEC)
ใน 13th การดื่มเอธานอล เก็บตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดบริเวณหางข้างของหนู (น=11) หลังจากผ่านไป 30 นาที ให้เข้าถึงเอธานอล 20% และน้ำ ตัวอย่างจะถูกปั่นที่อุณหภูมิ 4°C เป็นเวลา 15 นาทีที่ 8000 รอบต่อนาที และวิเคราะห์พลาสมา 10 µl จากตัวอย่างเลือดแต่ละตัวอย่างโดยใช้วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกเอนไซม์นิโคตินาไมด์อะดีนีนไดนิวคลีโอไทด์-แอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนส (NAD-ADH) [27].
ซูโครสการบริหารตนเอง
เพื่อตรวจสอบว่าการลดการดื่มที่เกิดจาก EA เป็นผลจากการเลือกดื่มแอลกอฮอล์หรือไม่ กลุ่มที่แยกจากกัน (n)=8) หนูทดลองได้รับการฝึกให้ดื่มสารละลายซูโครส 5% ภายใต้ขั้นตอนการดื่มแบบสองขวดสลับกัน ซึ่งคล้ายกับการดื่มแอลกอฮอล์ โดยเลือกซูโครส 5% ตามการศึกษาครั้งก่อนของเรา [25], [26] และการศึกษาหนูทดลองล่าสุดเกี่ยวกับผลของสารต้านตัวรับโอปิออยด์ SoRI-9409 ต่อการดื่มแอลกอฮอล์ [28]เมื่อหนู SD ถึงระดับพื้นฐานที่คงที่หลังจากดื่มซูโครสและน้ำเป็นเวลา 12 ครั้ง จะดำเนินการทดลอง EA 100 Hz หรือขั้นตอนหลอกตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง
การรักษาด้วย EA
เพื่อทดสอบผลของ EA ต่อการบริโภคเอธานอลในหนูที่บริโภคเอธานอลในปริมาณสูงเป็นเวลานาน จึงมีการให้ EA ความถี่ 100 Hz ที่จุด ST36 ทั้งสองข้าง ซึ่งอยู่ใกล้กับข้อเข่าของขาหลัง ห่างจากปุ่มกระดูกแข้งด้านหน้าไปทางด้านข้าง 2 มม. โดยให้ EA วันละ 30 นาที ก่อนให้เอธานอล 30 นาที เป็นเวลา 6 วันติดต่อกัน (วันพุธถึงวันจันทร์ เป็นเวลา XNUMX ครั้งติดต่อกัน)
หนูทุกตัวได้รับการจัดการล่วงหน้าเป็นเวลา 2 นาทีต่อวันเป็นเวลา 3 วันติดต่อกันก่อนการรักษาด้วย EA เพื่อลดความเครียดและอำนวยความสะดวกในการจัดการ ในวันทดสอบ หนูทั้งในกลุ่ม EA และกลุ่มหลอกได้รับการจับอย่างเบา ๆ ภายใต้การวางยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน โดยต้องจับหนูไว้บนราวพร้อมผ้าขนหนูปิดตาตามที่อธิบายไว้ในรายงานล่าสุดของเรา [14]ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ หนูจะสงบและสามารถดึงขาและหางออกมาได้อย่างอิสระ เข็มสเตนเลสสตีลสองอันที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 0.35 มม. และยาว 13 มม. ถูกแทงเข้าไปประมาณ 2-3 มม. ใน ST36 ของขาทั้งสองข้าง (สำหรับกลุ่ม EA) หลังจากที่สัตว์ตื่นจากยาสลบแล้ว จะให้ EA (หรือยาหลอก) เป็นเวลา 10 นาที กระแสไฟฟ้าคงที่พร้อมการกระตุ้นคลื่นสี่เหลี่ยมที่ผลิตโดยเครื่องกำเนิดพัลส์ที่ตั้งโปรแกรมไว้ (Han Actens WQ 1002F, Aeron Optoelectronic Technology Corp., ปักกิ่ง, จีน) ถูกให้ผ่านเข็มสองอันสำหรับกลุ่ม EA ความถี่ของ EA คือ 100 เฮิรตซ์ และปรับความเข้มเพื่อกระตุ้นให้กล้ามเนื้อสั่นเล็กน้อย (ประมาณ 0.2-0.3 มิลลิแอมป์) สำหรับกลุ่มหลอก เข็มถูกแทงเข้าไปในจุดที่ไม่ใช่จุดฝังเข็มของหาง (หางห่างจากส่วนปลายของหาง 1/5) [13], [29]) และไม่มีการกระตุ้นใดๆ ในปัจจุบัน จากนั้นจึงบันทึกการบริโภคเอธานอล (หรือซูโครส) และน้ำที่ดื่มเข้าไป 24 ชั่วโมงหลังจากเริ่มดื่ม ในระหว่าง 6 วันของการรักษา หนูทดลองดื่มเอธานอล 1 ครั้ง (วันที่ 3 วันพุธ วันที่ 6 วันศุกร์ และวันที่ 2 วันจันทร์) การบริโภคเอธานอลในระหว่างช่วงการดื่มทันทีก่อนการให้เอธานอลและหลังการให้เอธานอลครั้งสุดท้ายจะถูกบันทึกเป็นระดับการดื่มพื้นฐานหรือระดับการดื่มพื้นฐานหลังการรักษาตามลำดับ ผลของการดื่มเอธานอลความถี่ต่ำ (2 เฮิรตซ์) หลายครั้งต่อการบริโภคเอธานอลในหนูทดลองที่บริโภคเอธานอลในปริมาณสูงเป็นประจำนั้นถูกตรวจสอบในหนูทดลองกลุ่มหนึ่งแยกกัน โดยให้เอธานอล 36 เฮิรตซ์ที่ ST30 ทั้งสองข้าง (XNUMX นาทีต่อวัน) เป็นเวลา XNUMX วันติดต่อกัน บันทึกการบริโภคเอธานอลและน้ำตามการทดลองข้างต้น
immunohistochemistry
รายงานล่าสุดระบุว่าการบริโภคเอธานอลเป็นเวลานานจะกระตุ้นให้เกิดการสะสมของ FosB/ΔFosB ในลักษณะเฉพาะภูมิภาคย่อย [19]เพื่อตรวจสอบว่าการลดการบริโภคเอธานอลที่เกิดจาก EA เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ FosB/ΔFosB หรือไม่ เราได้วิเคราะห์การตอบสนองภูมิคุ้มกัน (IR) ของ FosB/ΔFosB ในบริเวณที่เกี่ยวข้องกับรางวัลของระบบโดปามีนเมโสคอร์ติโคลิมบิก หนูกลุ่มหนึ่ง (n=12) ได้รับการฝึกให้ดื่มเอธานอลเป็นครั้งแรกโดยใช้รูปแบบการดื่มแบบสองขวดที่ปรับเปลี่ยนตามช่วงการเข้าถึงตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เมื่อหนูกินเอธานอลในปริมาณมากโดยสมัครใจ พวกมันจะถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มย่อย: หนึ่ง (n=6) ได้รับ 100 Hz EA ที่ ST36 ทวิภาคี การรักษาหลอกอื่น ๆ ที่หาง (n=6) เป็นเวลา 6 วันติดต่อกัน ในระหว่าง 6 วันของการรักษา หนูทดลองได้รับเอธานอล 1 ครั้ง (วันที่ 3 วันพุธ วันที่ 6 วันศุกร์ และวันที่ XNUMX วันจันทร์) หนูทดลองในกลุ่มควบคุม (กลุ่มควบคุมเอธานอลบริสุทธิ์ n=5) ได้รับอนุญาตให้เข้าถึงน้ำและอาหารได้โดยไม่จำกัด ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในน้ำหนักตัวระหว่างหนูที่ไม่เคยกินเอธานอลและหนูที่ดื่มเอธานอลเมื่อสิ้นสุดการทดลอง
หนูที่ดื่มเอธานอลที่ได้รับการรักษาด้วย EA หรือยาหลอกจะถูกฆ่าทันทีหลังจากเซสชั่นสุดท้ายของการให้เอธานอลเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หนูที่ไม่เคยได้รับเอธานอลจะถูกฆ่าในเวลาเดียวกันด้วย หนูถูกให้ยาเกินขนาดด้วยเคตามีน/ไซลาซีน (80 มก./10 มก./กก. ฉีดเข้าช่องท้อง) และฉีดน้ำเกลือเย็นเข้าทางหัวใจตามด้วยพาราฟอร์มาลดีไฮด์ 4% ในบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต 0.1 M (pH 7.4) นำสมองออก ตรึงไว้ (2 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 4°C) ในสารละลายตรึงเดียวกัน และแช่แข็ง (ค้างคืนที่อุณหภูมิ 4°C ซูโครส 20% ในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 M pH 7.4) ส่วนตัดโคโรนัล 30 ไมโครเมตรแบบต่อเนื่องของสมองส่วนหน้าถูกตัดบนไมโครโทมแช่แข็ง (Microm HM550, Walldorf และ German) และส่วนตัดสมอง 1 ใน 4 ชุดได้รับการประมวลผลสำหรับการตรวจจับโปรตีน FosB/ΔFosB แบบอิมมูโนฮิสโตเคมี ส่วนตัดได้รับการฟักในแอนติบอดีชุดต่อไปนี้: แอนติบอดี pan-FosB (1![[อัตราส่วน]](http://www.ncbi.nlm.nih.gov/corehtml/pmc/pmcents/x2236.gif)
2000, #sc-48; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, California) ค้างคืน ที่อุณหภูมิ 4°C ไบโอตินิเลตแอนตี้กระต่าย IgG (2 ชั่วโมง 1200) (Vector Laboratories, Burlingame, CA) จากนั้นนำส่วนต่างๆ มาฟักในสารละลายคอมเพล็กซ์อะวิดิน-ไบโอติน-ฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดส (45 นาที) (Vector Elite Kit, Vector Labs, Burlingame, California) แสดงให้เห็นกิจกรรมของฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดสด้วยนิกเกิล-ไดอะมิโนเบนซิดีน (Vector Laboratories, Burlingame, CA) นำส่วนต่างๆ จากแต่ละกลุ่มการทดลองมาประมวลผลพร้อมกัน การละเว้นแอนติซีรัมหลักในส่วนย่อยส่งผลให้สูญเสียการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน นำส่วนต่างๆ มาติดบนสไลด์โครเมียม-อัลลัม อบแห้ง และปิดฝา
การหาปริมาณการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ FosB/ΔFosB
การเปลี่ยนแปลงในการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ FosB/ΔFosB ถูกวัดในส่วนต่างๆ ของคอร์เทกซ์ด้านหน้า (PrL, IL และคอร์เทกซ์ออร์บิโตฟรอนทัล (OFC)), NAc (แกนกลางและเปลือก) และสไตรเอตัมด้านข้างหลัง (DLS) และสไตรเอตัมด้านหลังตรงกลาง (DMS) บริเวณสมองเหล่านี้ได้รับการระบุโดยอิงตาม Atlas of Paxinos และ Watson [30]การวัดเชิงปริมาณดำเนินการโดยใช้ระบบวิเคราะห์ภาพด้วยความช่วยเหลือ ซึ่งประกอบด้วยกล้องจุลทรรศน์สนามสว่าง Nikon Eclipse 80i (Micron Optics, Cedar Knoll, NJ) เชื่อมต่อกับกล้องดิจิทัลสี Nikon DS-Ri1 (Micron Optics, Cedar Knoll, NJ) และคอมพิวเตอร์ที่มีซอฟต์แวร์ NIS-Elements BR 3.0 (Micron Optics, Cedar Knoll, NJ) ภาพที่ได้นั้นกำลังขยาย 20 เท่า และคำนวณโดยเฉลี่ยจากซีกขวาและซีกซ้ายของแต่ละบุคคล การนับนิวเคลียสที่มีป้ายกำกับแบบสองมิติจากแต่ละภาพ [200×ภาพ (0.1 มม.2 พื้นที่) ของนิวเคลียสที่มีปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันคล้าย FosB/ΔFosB ภายในบริเวณสมองที่สนใจ] ได้รับการกำหนดโดยไม่ทราบเงื่อนไขการรักษาจากส่วนแยกสามส่วนต่อสัตว์โดยใช้ซอฟต์แวร์ NIS-Elements BR 3.0
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SEM (ข้อผิดพลาดมาตรฐานของค่าเฉลี่ย) ข้อมูลพฤติกรรมวิเคราะห์ด้วย ANOVA วัดซ้ำสองทาง (RM ANOVA) โดยใช้ปัจจัยหลักของการรักษา (EA หรือหลอก) และจำนวนวัน [พื้นฐาน (0 วัน) วันที่ 1, 3, 5 และหลังพื้นฐาน (7 วัน)] Tukey โพสต์เฉพาะกิจ การวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้การวิเคราะห์คอนทราสต์เมื่อมีการโต้ตอบระหว่างวัน × การรักษา p<0.05 ผลการตรวจทางอิมมูโนฮิสโตเคมีวิเคราะห์ด้วย ANOVA แบบทางเดียว ตามด้วยการทดสอบ Tukey
ผลสอบ
การเข้าถึงเอธานอล 20% (IE) เป็นระยะๆ พร้อมเติมซูโครสในสามช่วงการดื่มครั้งแรกทำให้หนู SD ตัวผู้บริโภคเอธานอลมากเกินไปและต้องการเอธานอลมากขึ้น
ก่อนหน้านี้ เราได้แสดงให้เห็นว่าขั้นตอน IE ทำให้หนู SD ส่วนใหญ่ดื่มเอธานอลในระดับปานกลาง [14]ในการศึกษาครั้งนี้ เราได้เติมซูโครส 5% ในสามเซสชันการดื่มครั้งแรก ซึ่งทำให้ปริมาณเอธานอลที่หนู SD บริโภคเพิ่มขึ้นอย่างมาก ซึ่งยังคงอยู่นานกว่า 3 สัปดาห์หลังจากหยุดกินซูโครส (รูปที่ 1A). ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ที่ 4th เพื่อ 12th ในช่วงการดื่ม หนู SD บริโภค 8.2±0.1 g/kg/24 ชม. ซึ่งมากกว่า 4.1±0.1 g/kg/24 ชม. อย่างมีนัยสำคัญ โดยหนูทดลองที่ดื่มตามขั้นตอนเดียวกันแต่ไม่ได้เหนี่ยวนำด้วยซูโครส การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทางของ RM เผยให้เห็นผลหลักที่สำคัญสำหรับการรักษา (F1, 337=269.63, p<0.001), วัน (F11, 337=2.09, p<0.05) และการรักษา × ปฏิสัมพันธ์ระหว่างวัน (F11, 337=6.51, p โพสต์-hoc การวิเคราะห์ปริมาณเอธานอลเฉลี่ยที่หนูกินในเวลา 4th เพื่อ 12th เซสชันการดื่มแสดงให้เห็นความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มที่มีและไม่มีการเหนี่ยวนำด้วยซูโครส
ความต้องการเอธานอลในหนูที่ได้รับการเหนี่ยวนำด้วยซูโครสก็มีมากกว่าในหนูที่ไม่ได้รับการเหนี่ยวนำด้วยซูโครสเช่นกันรูปที่ 1B). ในช่วงวันที่ 4th เพื่อ 12th เซสชัน ค่าเฉลี่ยความชอบสำหรับเอธานอลคือ 36.4±0.4% และ 22.0±0.8% ตามลำดับ สำหรับหนูที่มีและไม่มีการเหนี่ยวนำด้วยซูโครส การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทางของ RM เผยให้เห็นผลหลักที่สำคัญสำหรับการรักษา (F1, 337=125.73, p<0.001) และปฏิสัมพันธ์ระหว่างการรักษา × เวลา (F11, 337=5.08, p<0.001) โดยมีแนวโน้มเวลาสูง (F11, 337=1.79, p=0.05) โพสต์-hoc การวิเคราะห์ความต้องการเอทานอลที่ 4th เพื่อ 12th เซสชันการดื่มมีสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับซูโครสมากกว่าหนูที่ไม่ได้รับซูโครส (ทั้งหมด p<0.001, รูปที่ 1B).
เราได้วัดค่า BEC ของหนูในกลุ่มที่ดื่มซูโครสเพื่อกระตุ้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในเซสชันการดื่มครั้งที่ 13 ทันทีหลังจากช่วงเวลา 30 นาทีของการเข้าถึงเอธานอล ค่า BEC อยู่ในช่วง 26.8 ถึง 136.0 มก.% โดยมีค่าเฉลี่ย 60.5±10.4 มก.% มีความสัมพันธ์เชิงบวกอย่างมีนัยสำคัญระหว่างค่า BEC และเอธานอลที่บริโภคเป็นกรัม/กก. (r2=0.75 น.=11, p<0.001; ข้อมูลไม่ได้แสดงไว้)
การบำบัดด้วย EA ความถี่สูง (100 เฮิรตซ์) แต่ไม่ใช่ความถี่ต่ำ (2 เฮิรตซ์) หลายครั้ง จะช่วยลดการบริโภคเอธานอลที่มากเกินไปและความต้องการเอธานอล แต่ไม่ใช่ซูโครส
การศึกษาในหนูเมื่อเร็วๆ นี้พบว่าการใช้ EA ความถี่สูง (100 เฮิรตซ์) หลายเซสชันมีประสิทธิภาพมากกว่าการใช้ EA ความถี่สูง (100 เฮิรตซ์) ครั้งเดียวในการบรรเทาอาการถอนมอร์ฟีน นอกจากนี้ ผลข้างเคียงจากการใช้ EA หลายเซสชันยังคงอยู่เป็นเวลาอย่างน้อย 7 วัน [31]เราพยายามค้นหาว่าการบำบัดด้วย EA 100 Hz หลายครั้งสามารถเปลี่ยนการบริโภคเอธานอลในหนูที่ดื่มเอธานอลในปริมาณมากเกินไปเป็นประจำได้หรือไม่ เราใช้การบำบัดด้วย EA 100 Hz หลายครั้งที่ ST36 หรือแบบหลอกกับหนูเมื่อหนูมีระดับการบริโภคเอธานอลพื้นฐานที่คงที่ (ดู มะเดื่อ. 1) ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 2Aการรักษาด้วยคลื่นความถี่ 6 เฮิรตซ์ติดต่อกัน 100 วัน วันละ 30 นาที แต่การรักษาแบบหลอกไม่ได้ลดการบริโภคเอธานอลอย่างมีนัยสำคัญตลอดระยะเวลา 24 ชั่วโมง การวิเคราะห์ทางสถิติ RM แบบสองทางเผยให้เห็นผลหลักที่สำคัญของการรักษา (F1, 51=18.59, p<0.001), วัน (F4,51=9.81, p<0.001) และปฏิสัมพันธ์ระหว่างการรักษา × วัน (F4,51=5.31, p=0.001) โพสต์นี้ การวิเคราะห์เผยให้เห็นว่าการบริโภคเอธานอลในช่วง 24 ชั่วโมงในวันที่ 3 และ 6 ลดลงอย่างชัดเจนในกลุ่มการรักษา EA เมื่อเทียบกับกลุ่มการรักษาหลอก (ทั้งหมด p<0.001, รูปที่ 2A) ที่น่าทึ่งคือ เมื่อสิ้นสุดการบำบัดด้วย EA ในวันที่ 6 การลดลงจะคงอยู่ที่ช่วงการดื่ม 48-72 ชั่วโมงหลังจากการให้ EA ครั้งสุดท้าย (p<0.01, อีเอ เมื่อเทียบกับ แชม, รูปที่ 2A) การรักษาแบบหลอกไม่มีผลหลักโดยรวมต่อการบริโภคเอธานอลในทุกวันทดสอบเมื่อเปรียบเทียบกับระดับการดื่มเบื้องต้น
รูป 2
แม้ว่าอัตราส่วนการชอบเอธานอลในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงที่ตรวจสอบจะไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มต่างๆ ในช่วงพื้นฐานที่ปราศจาก EA แต่สัดส่วนนี้ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการให้ EA 100 Hz หลายครั้ง การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางสถิติแบบสองทางของ RM เผยให้เห็นผลหลักที่สำคัญของการรักษา (F1,51=11.22, p=0.004) วัน (F4,51=5.49, p<0.001 และเงื่อนไขการโต้ตอบ (F1,51=5.66, p โพสต์นี้ การวิเคราะห์เผยให้เห็นว่าการเลือกใช้เอธานอลในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงในวันที่ 3 และ 6 ในกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย EA 100 Hz หลายเซสชันนั้นต่ำกว่ากลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วยวิธีหลอก (ทั้งหมด p<0.001, รูปที่ 2B) นอกจากนี้ อัตราส่วนการลดลงของความต้องการที่เกิดจาก EA ยังคงดำเนินต่อไปในช่วงการดื่ม 48–72 ชั่วโมง เมื่อหยุดการให้ EA (p<0.05, อีเอ เมื่อเทียบกับ แชม, รูปที่ 2B) ไม่มีผลหลักโดยรวมของการรักษาแบบหลอกต่อความต้องการเอธานอลในวันทดสอบเมื่อเทียบกับความต้องการเอธานอลในช่วงเริ่มต้น (รูปที่ 2B) ที่น่าสนใจคือ การบำบัดด้วย EA 6 Hz ติดต่อกัน 100 วันยังส่งผลอย่างมีนัยสำคัญต่อการบริโภคน้ำ (ผลหลักของการบำบัด [F1,51=5.21, p<0.05] และวัน [F4,51=2.97, p<0.05] โดยไม่มีผลต่อปฏิสัมพันธ์ระหว่างการรักษา × เวลา [F4,51=1.23, p=0.31]) (รูปที่ 2C) ปริมาณการบริโภคน้ำในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงในวันที่ 5 และ 7 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับการรักษาด้วย EA เมื่อเทียบกับหนูทดลองหลอก (p<0.05) ในทุกวันที่ทำการทดสอบ ปริมาณของเหลวที่บริโภคทั้งหมดไม่ได้รับผลกระทบจาก EA 6 Hz ติดต่อกัน 100 วัน เมื่อเปรียบเทียบกับการรักษาหลอก (รูปที่ 2D).
ก่อนหน้านี้ เราได้แสดงให้เห็นว่า EA ความถี่ต่ำแต่ไม่สูงเพียงตัวเดียวช่วยลดการบริโภคเอธานอลในระดับปานกลาง [14]เพื่อตรวจสอบว่าผลของ EA หลายเซสชันขึ้นอยู่กับความถี่หรือไม่ จึงให้ EA ความถี่ต่ำ (2 เฮิรตซ์) หลายเซสชันที่ ST36 กับหนูที่กินเอธานอลในปริมาณมากเป็นประจำภายใต้ขั้นตอน IE ที่มีการเหนี่ยวนำด้วยซูโครสตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ดังที่แสดงใน รูปที่ 3Aภายใต้เงื่อนไขการทดลองเหล่านี้ เซสชั่น 2 Hz EA หลายเซสชั่นไม่เปลี่ยนแปลงการบริโภคเอธานอลตลอดช่วงเวลาการเข้าถึง 24 ชั่วโมงในทุกวันทดสอบ (รูปที่ 3A) การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทาง RM สำหรับการบริโภคเอธานอลล้มเหลวในการเปิดเผยผลกระทบหลักของการบำบัด (F1, 37=1.43, p>0.05), วัน (F3,37=1.15, p>0.05) และปฏิสัมพันธ์ระหว่างการรักษา × เวลา (F3,37=0.25, p>0.05) ดังนั้น เซสชัน 2 Hz EA หลายเซสชันจึงไม่เปลี่ยนอัตราส่วนการชอบเอธานอลในจุดเวลา 24 ชั่วโมงในทุกวันทดสอบ [ไม่มีผลหลักของการรักษา (F1, 37=0.003, p=0.95) วัน (F3,37=0.54, p=0.65) หรือการรักษา × ปฏิสัมพันธ์ระหว่างเวลา (F3,37=0.30, p=ฮิต) รูปที่ 3B]; หรือปริมาณน้ำที่บริโภคและของเหลวทั้งหมด (ข้อมูลไม่ได้แสดง)
รูป 3
เพื่อตรวจสอบว่าการลดลงของการบริโภคเอธานอลที่เกิดจากการดื่ม EA 100 Hz หลายครั้งนั้นเฉพาะเจาะจงกับเอธานอลหรือไม่ เราได้วัดการบริโภคสารซูโครสที่ต้องการโดยใช้การเข้าถึงซูโครส 5% เป็นระยะๆ ในขั้นตอนการดื่มแบบเลือกขวดสองขวด ดังที่แสดงใน มะเดื่อ. 4ปริมาณการบริโภคซูโครสและความต้องการซูโครสในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงไม่ได้เปลี่ยนแปลงไปจากเซสชัน 100 Hz EA หลายเซสชันที่ ST36 การวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทาง RM สำหรับการบริโภคซูโครสไม่สามารถเปิดเผยผลหลักของการรักษาได้ (F1, 18=0.23, p=0.65) วัน (F3,18=1.39, p=0.27) หรือการรักษา × ปฏิสัมพันธ์ระหว่างเวลา (F3,18=0.19, p=0.90) นอกจากนี้ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง EA และ EA ในด้านการบริโภคน้ำหรือของเหลวทั้งหมด (ไม่มีการแสดงข้อมูล)
รูป 4
การใช้ EA 100 Hz หลายเซสชันช่วยลดการสะสมของ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากการบริโภคเอธานอลมากเกินไปในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลโดยเฉพาะ
ผลที่ตามมาs ที่กล่าวมาข้างต้นแสดงให้เห็นว่าการใช้ EA 6 Hz ติดต่อกัน 100 วันสามารถลดปริมาณการบริโภคและความต้องการเอธานอลในหนูที่ดื่มเอธานอลในปริมาณมากเกินไปเป็นเวลานานได้ การศึกษามากมายเสนอว่าการกระตุ้น ΔFosB อย่างต่อเนื่องอาจเป็นเส้นทางทั่วไปของความผิดปกติจากการเสพติด [32]ก่อนหน้านี้ เราได้รายงานว่าการบริโภคเอธานอลเป็นเวลานานทำให้เกิดการสะสมของ ΔFosB เฉพาะที่บริเวณคอร์เทกซ์ด้านหน้าและบริเวณสไตรเอตัม [19]ความผิดปกติของบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลเหล่านี้มีความเกี่ยวข้องกับความอยากเอธานอลและการบกพร่องของกระบวนการเรียนรู้ใหม่ในผู้ที่ไม่ดื่มเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ [33]ดังนั้น เราจึงประเมิน FosB/ΔFosB IR ในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลของระบบโดพามีนเมโสคอร์ติโคลิมบิกต่อไปนี้ (มะเดื่อ. 5).
รูป 5
บริเวณลายสไตรเอตัล
การแสดงออกของ FosB/ΔFosB ได้รับการควบคุมอย่างแตกต่างกันภายในบริเวณสไตรเอตัมตามผลของการบำบัดด้วยเอธานอลและ EA ตามรายงานล่าสุดของเรา [19], FosB/ΔFosB IR เพิ่มขึ้นอย่างแข็งแกร่งภายในแกนกลางของนิวเคลียสแอคคัมเบนส์ (NAc-Core) และสไตรเอตัมด้านข้างหลัง (DLS) (มะเดื่อ. 6) แต่ไม่อยู่ในเปลือกหลัง (NAc-Shell) และสไตรเอทัมหลังส่วนกลาง (DMS) ในสัตว์ที่บริโภคเอธานอลในปริมาณมากอย่างต่อเนื่องด้วยการรักษาแบบหลอก เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่เคยได้รับเอธานอลมาก่อน เซสชัน EA 100 Hz หลายเซสชันลดค่า IR ของ FosB/ΔFosB ภายใน DLS และ NAc-Core ที่เกิดจากการบริโภคเอธานอลมากเกินไปในระยะยาวอย่างมีนัยสำคัญ (มะเดื่อ. 6) ข้อสังเกตเหล่านี้ได้รับการสนับสนุนโดย ANOVA ทางเดียวซึ่งเผยให้เห็นผลหลักที่สำคัญของการบำบัดใน NAc-Core (F2, 33=6.27, p=0.005) และ DLS (F2, 33=28.54, p<0.001) แต่ไม่ใช่ใน NAc-shell (F2, 33=1.36, p>0.05) และ DMS (F2,33=2.47, p> 0.05)
รูป 6
เยื่อหุ้มสมองส่วนหน้า
เมื่อไม่นานนี้ เราได้รายงานว่าการได้รับเอธานอลเป็นเวลานานทำให้ FosB/ΔFosB IR ในคอร์เทกซ์ออร์บิโตฟรอนทัล (OFC) เพิ่มขึ้นอย่างมาก แต่ไม่ทำให้คอร์เทกซ์พรีฟรอนทัลส่วนกลางเพิ่มขึ้น [19]อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาปัจจุบัน พบว่า FosB/ΔFosB IR เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญทั้งในบริเวณ prelimbic ของคอร์เทกซ์ prefrontal (PrL) และ OFC ในสัตว์ที่บริโภคเอธานอลในปริมาณมากเป็นประจำด้วยการรักษาแบบหลอก (มะเดื่อ. 7, p<0.001 หลอกลวง เมื่อเทียบกับ ไม่พบความแตกต่างทางสถิติในจำนวนนิวเคลียสที่เป็นบวกของ FosB/ΔFosB ระหว่างกลุ่มหลอกและกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับเอธานอลในบริเวณอินฟราลิมบิกของคอร์เทกซ์พรีฟรอนทัล (IL) เซสชัน 100 Hz EA หลายเซสชันทำให้ FosB/ΔFosB IR ใน PrL, OFC และ IL ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (ทั้งหมด pกลุ่ม EA <0.01 เมื่อเทียบกับ แชม) ดังนั้น การวิเคราะห์ทางสถิติแบบทางเดียว (one-way ANOVA) จึงให้ผลหลักที่สำคัญของการรักษาใน IL (F2, 33=7.06, p=0.003) ค่าเฉลี่ย (F2, 33=18.61, p<0.001) และ OFC (F2, 33=13.23, p
รูป 7
บริเวณเทกเมนทัลด้านท้อง (VTA)
เชื่อกันว่า VTA เป็นส่วนสำคัญของสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัล การศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่าการให้ยาจิตเวชกระตุ้นอย่างต่อเนื่องจะกระตุ้นให้เกิดการสะสมของ ΔFosB โดยเฉพาะในส่วนท้ายของ VTA [23], [34]. ตามที่แสดงใน มะเดื่อ. 8, FosB/ΔFosB IR ในบริเวณหลังของ VTA (Bregma − 5.20 มม. ถึง Bregma −6.8 มม.) เพิ่มขึ้นอย่างมากในหนูที่บริโภคเอธานอลในปริมาณมากเป็นประจำเมื่อเทียบกับหนูในกลุ่มที่ไม่เคยได้รับเอธานอลเลย (p<0.001) และลดลงอย่างมากหลังจากผ่าน EA หลายครั้ง (p<0.001 กลุ่ม EA เมื่อเทียบกับ แชม) แต่ไม่ใช่หลังจากการรักษาแบบแชม การรักษามีผลหลักโดยรวมต่อ FosB/ΔFosB IR ใน VTA ส่วนหลัง (F2,33=12.04, p<0.001, มะเดื่อ. 8).
รูป 8
การสนทนา
เราได้รายงานที่นี่ว่าการรักษาด้วย EA 100 Hz เป็นเวลา 30 วัน (วันละ 36 นาที) ที่จุดฝังเข็มสองข้าง ST24 ช่วยลดการบริโภคเอธานอลในปริมาณมากและความต้องการเอธานอลในช่วงเวลา 72 ชั่วโมงได้อย่างเลือกสรร การลดลงนี้คงอยู่เป็นเวลาอย่างน้อย XNUMX ชั่วโมงหลังจากสิ้นสุดการรักษาด้วย EA นอกจากนี้ การรักษาด้วย EA นี้ยังช่วยลดการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากการได้รับเอธานอลเป็นเวลานานในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลอีกด้วย
รายงานล่าสุดระบุว่า EA ความถี่ต่ำ (20 Hz) แต่ไม่สูง (2 Hz) เพียง 100 นาทีที่ ST36 ช่วยลดปริมาณเอธานอลที่บริโภคในระดับปานกลางในหนู SD [14]มีหลักฐานล่าสุดที่แสดงให้เห็นว่าการทำ EA ความถี่สูงหลายครั้งมีประสิทธิภาพมากกว่าการทำ EA ความถี่สูงครั้งเดียวในการบรรเทาอาการถอนมอร์ฟีน [31]ในการศึกษานี้ เราได้ศึกษาว่า 100 Hz EA มีประสิทธิภาพในการลดการบริโภคเอธานอลมากเกินไปในหนูทดลองภายใต้ขั้นตอนการดื่ม IE ที่ได้รับการปรับเปลี่ยนหรือไม่ ซึ่งหนูทดลองทั้งหมดบริโภคเอธานอลในปริมาณสูง (8.2±0.1 กรัม/กก.) โดยมีอัตราส่วนการชอบเอธานอลสูง (36.4±0.4%) แม้ว่าเราจะไม่ได้ติดตามอาการถอนแอลกอฮอล์ในการศึกษานี้ แต่ก่อนหน้านี้เราได้รายงานไปแล้วว่าหนูทดลองภายใต้โปรแกรมการดื่มที่คล้ายคลึงกันนั้นแสดงอาการถอนแอลกอฮอล์เล็กน้อย [14], [25]ค่า BEC ของหนูในงานวิจัยปัจจุบันคือ 60.5±10.4 มก.% ซึ่งสูงกว่าหนู SD เกือบสองเท่า [14] และคล้ายคลึงกับหนูลองอีแวนส์ [25] ซึ่งแสดงอาการถอนยา ดังนั้น จึงมีความเป็นไปได้สูงที่หนูภายใต้สภาวะการทดลองปัจจุบันอาจเกิดอาการติดเอธานอลและมีอาการถอนยา ที่น่าทึ่งคือ การให้เอธานอล 100 เฮิรตซ์ติดต่อกัน 24 วัน ลดปริมาณเอธานอลที่บริโภคได้เกือบครึ่งหนึ่งในช่วงเวลา 72 ชั่วโมงที่เข้าถึงยา ที่น่าสนใจคือ การให้เอธานอล 100 เฮิรตซ์นี้ยังช่วยเพิ่มปริมาณน้ำที่บริโภคได้อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่าสัตว์เหล่านี้กำลังเปลี่ยนไปดื่มเอธานอล ที่สำคัญ การลดปริมาณเอธานอลที่บริโภคได้นั้นยังคงอยู่เป็นเวลา >7 ชั่วโมงหลังจากสิ้นสุดการบำบัดด้วยเอธานอล ในทางกลับกัน การให้เอธานอล 100 เฮิรตซ์หลายครั้งไม่ได้เปลี่ยนปริมาณการบริโภคและความชอบต่อซูโครส ซึ่งเป็นสารให้รางวัลตามธรรมชาติ ผลการศึกษาปัจจุบันของเราสอดคล้องกับการศึกษาล่าสุดที่แสดงให้เห็นว่าการให้เอธานอล 7 เฮิรตซ์หลายครั้งสามารถระงับอาการถอนมอร์ฟีนได้ ซึ่งอาการดังกล่าวจะคงอยู่เป็นเวลาอย่างน้อย XNUMX วันในช่วงที่ไม่มีการบำบัด ผลกระทบระยะยาวของ EA นี้อาจเกิดจากไดนอร์ฟินที่เพิ่มขึ้น เนื่องจากการใช้ EA ที่ความถี่ XNUMX Hz หลายเซสชันมีประสิทธิภาพมากในการเร่งการสังเคราะห์ไดนอร์ฟิน ซึ่งสะท้อนให้เห็นจากการควบคุมระดับ mRNA ของพรีโพรไดนอร์ฟินอย่างรวดเร็ว ซึ่งคงอยู่ในสมองเป็นเวลาอย่างน้อย XNUMX วัน [31].
หลักฐานก่อนหน้านี้บ่งชี้ว่าไดนอร์ฟินที่ปล่อยออกมาในระบบประสาทส่วนกลางโดยโต้ตอบกับตัวรับ κ-opioid (KOR) มีบทบาทสำคัญในการระงับอาการถอนมอร์ฟีนที่เกิดจาก EA ที่ความถี่ 100 Hz [20], [35], [36]ยิ่งไปกว่านั้น พบว่าการใช้ EA 100 Hz หลายเซสชันมีประสิทธิภาพมากกว่าการใช้ EA ครั้งเดียวในการบล็อกการควบคุมระดับลงของ mRNA ของพรีพรอไดนอร์ฟินที่เกิดจากการได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานาน [31]ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าระบบไดนอร์ฟิน-κ โอปิออยด์อาจมีบทบาทสำคัญในการกระตุ้นให้เสพยาอย่างต่อเนื่อง [37]การแสดงออกของไดนอร์ฟินและ KOR ต่ำกว่าในสัตว์ฟันแทะที่บริโภคเอธานอลในระดับสูงเมื่อเทียบกับสัตว์ฟันแทะที่ดื่มในปริมาณต่ำ [38], [39], [40]นอกจากนี้ การให้ KOR agonist U50,488H ในระบบในหนูช่วยลดการบริโภคเอธานอลได้อย่างมีนัยสำคัญ [41]ในขณะที่การให้ยาต้าน KOR จะเพิ่มการบริโภคเอธานอล [42]ที่สำคัญ ความหลากหลายในไดนอร์ฟินและ KOR มีความเกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่อโรคพิษสุราเรื้อรังที่เพิ่มขึ้นในมนุษย์ [43]เมื่อนำข้อมูลทั้งหมดมารวมกัน จะเห็นได้ว่าไดนอร์ฟินมีบทบาทในการปรับเปลี่ยนการดื่มเอธานอล โดยระบบไดนอร์ฟิน/KOR ทำหน้าที่ลดการดื่มเอธานอล เนื่องจาก EA ที่ความถี่ 100 Hz สามารถอำนวยความสะดวกในการปล่อยไดนอร์ฟินโดยเฉพาะ [44]เราตั้งสมมติฐานว่าไดนอร์ฟินมีส่วนช่วยในการลดการบริโภคเอธานอลอย่างน้อยบางส่วนที่เกิดจาก 100 Hz EA ตามที่สังเกตในการศึกษาปัจจุบัน อย่างไรก็ตาม กลไกเบื้องหลังการลดการบริโภคเอธานอลที่เกิดจากไดนอร์ฟินยังไม่ชัดเจนนัก การลดลงของการบริโภคเอธานอลที่เกิดจากการเพิ่มขึ้นของไดนอร์ฟินยังสังเกตได้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ด้วย [45], [46]ผู้เขียนเหล่านี้ตีความข้อมูลของตนเพื่อบ่งชี้ว่าไดนอร์ฟินอาจให้ผลตอบรับหลังการรับประทานเพื่อควบคุมการบริโภคเอธานอลในครั้งต่อไป
ยีนพรีไดนอร์ฟินเป็นหนึ่งในเป้าหมายการถอดรหัสของ ΔFosB [18], [32]การแสดงออกมากเกินไปของ ΔFosB ใน NAc และสไตรเอตัมหลังทำให้กิจกรรมการเคลื่อนไหวและการตอบสนองต่อมอร์ฟีนเพิ่มขึ้นบางส่วนผ่านการยับยั้งการแสดงออกของไดนอร์ฟิน [18]เนื่องจากคลื่นความถี่ 100 Hz EA เร่งการปลดปล่อยไดนอร์ฟินในไขสันหลัง และฟื้นฟูการแสดงออกของยีนโพรไดนอร์ฟินในสมองในสัตว์ที่ต้องใช้มอร์ฟีน [31], [36]เราเสนอว่า 100 Hz EA อาจเปลี่ยนแปลงการทำงานของ ΔFosB ในสมองได้
Tการศึกษาของเขาแสดงให้เห็นว่าปัจจัยการถอดรหัส ΔFosB ในคอร์เทกซ์ด้านหน้า ภูมิภาคสไตรเอตัม และ VTA ส่วนหลังอาจมีบทบาทสำคัญในการลดการบริโภคเอธานอลที่มากเกินไปที่เกิดจาก EA 100 Hz. เน้นย้ำว่าการลดการบริโภคเอธานอลที่เกิดจาก EA อาจเกี่ยวข้องกับเส้นทางที่หลากหลายซึ่งส่งผลต่อการดื่มเอธานอล รวมถึงวงจรประสาทรับรู้ แรงจูงใจ และการเคลื่อนไหว แกน NAc อาจมีส่วนสนับสนุนพฤติกรรมการแสวงหายาที่ได้รับการสนับสนุนจากสิ่งกระตุ้นที่มีเงื่อนไข [47]ในทำนองเดียวกัน สไตรเอตัมหลังอาจส่งผลต่อการเสพยาแบบบังคับหรือแบบเป็นนิสัย [48]ส่วนด้านข้าง (DLS) และส่วนตรงกลาง (DMS) ของสไตรเอตัมหลังมีอินพุตและเอาต์พุตทางกายวิภาคที่แตกต่างกัน และด้วยเหตุนี้จึงมีหน้าที่ที่แตกต่างกัน [49]ตัวอย่างเช่น ปัจจัยบำรุงประสาทที่ได้รับจากสมองใน DLS แต่ไม่มีใน DMS จะควบคุมการบริโภคเอธานอลโดยสมัครใจ [50]จากผลการวิจัยพบว่าการดื่มเอธานอลด้วยตนเองเป็นเวลานานจะกระตุ้นให้เกิดการสะสมของ ΔFosB อย่างชัดเจนในแกน NAc และ DLS แต่ไม่เกิดขึ้นในเปลือก NAc และ DMS ที่สำคัญ เราได้แสดงให้เห็นเพิ่มเติมว่าการใช้ EA 100 Hz หลายครั้งสามารถลดการสะสมของ FosB/ΔFosB IR ในแกน NAc และ DLS ที่เกิดจากการบริโภคเอธานอลมากเกินไปได้อย่างมีนัยสำคัญ และการลดทอนนี้มีความสำคัญมากกว่าใน DLS มากกว่าในแกน NAc
TPFC มีหน้าที่รับผิดชอบการทำงานของฝ่ายบริหาร การตัดสินใจ และการดำเนินการตามการดำเนินการที่กำหนดเป้าหมาย ภูมิภาคย่อยของ PFC ได้แก่ PrL ที่ควบคุมการเริ่มตอบสนองและ IL ที่ควบคุมการยับยั้งการตอบสนอง ทั้งสองภูมิภาคนี้ควบคุมการกระทำและผลลัพธ์ PrL และ IL อาจทำหน้าที่เป็นกลไกเปิด-ปิดในทั้งการตอบสนองต่อยาและความกลัวที่มีเงื่อนไข นอกจากนี้ ภูมิภาคย่อยของ OFC ยังเป็นภูมิภาคสมองหลักที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมพฤติกรรมที่มุ่งเป้าหมายและความหุนหันพลันแล่น [51]การสะสมของ ΔFosB ใน PFC เชื่อว่ามีส่วนเกี่ยวข้องโดยตรงในการรักษาการติดยาโดยทำให้เกิดความทนทานต่อผลกระทบที่รบกวนการรับรู้ของยาผ่านการกระทำใน PFC [52].
ในระหว่างการถอนยา การแสดงออกของ ΔFosB มากเกินไปจะเพิ่มความหุนหันพลันแล่น ซึ่งส่งเสริมการใช้ยาด้วยตนเองมากขึ้น [53], [54]. Iที่สำคัญ การแสดงออกเกินของยีนหรือไวรัสของ ΔJunD ซึ่งเป็นยีนกลายพันธุ์ที่เด่นของ JunD ที่ต่อต้าน ΔFosB และกิจกรรมการถอดรหัสอื่นๆ ที่ถูกควบคุมโดย AP1 ใน OFC จะบล็อกผลกระทบสำคัญเหล่านี้จากการได้รับยา [53]การศึกษาปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าการบริโภคเอธานอลมากเกินไปทำให้มี ΔFosB ในระดับสูงใน PrL และ OFC ซึ่งถูกบล็อกโดยเซสชัน 100 Hz EA หลายเซสชัน นอกจากนี้ แม้ว่า FosB/ΔFosB IR ใน IL จะไม่เปลี่ยนแปลงจากการบริโภคเอธานอลที่มากเกินไป แต่ก็ลดลงด้วยเซสชัน 100 Hz EA หลายเซสชัน
VTA ซึ่งเป็นแหล่งกำเนิดของระบบโดพามีนของเมโสลิมบิก มีความสำคัญต่อพฤติกรรมที่เกิดจากแรงจูงใจของการใช้ยาเสพติดในทางที่ผิด รวมทั้งเอธานอล ก่อนหน้านี้ Perrotti และเพื่อนร่วมงานได้ให้หลักฐานว่าหลังจากได้รับสารกระตุ้นจิตหลายชนิด เช่น โคเคนและแอมเฟตามีนอย่างเฉียบพลันหรือเรื้อรัง การแสดงออกของ FosB/ΔFosB ใน VTA ส่วนหลัง/ส่วนหางจะเพิ่มขึ้น ที่สำคัญ การแสดงออกดังกล่าวปรากฏอยู่ในเซลล์ประสาท GABAergic โดยไม่สามารถตรวจพบการแสดงออกในเซลล์ประสาท DA ได้ [23], [55]จากผลการค้นพบของ Perrotti เราพบว่าหลังจากได้รับเอธานอลเป็นเวลานาน การแสดงออกของ FosB/ΔFosB ใน VTA ส่วนหลัง/ส่วนหางจะเพิ่มขึ้น แม้ว่าเราจะไม่ได้ระบุประเภทของเซลล์ที่แสดงออก FosB/ΔFosB ในการศึกษานี้ แต่จากผลการค้นพบของ Perrotti ที่อธิบายไว้ข้างต้น เราสันนิษฐานว่า FosB/ΔFosB อาจแสดงออกในนิวรอน GABAergic แม้ว่ากลไกการเหนี่ยวนำ ΔFosB เฉพาะในกลุ่มย่อยของนิวรอน GABA ของ VTA ส่วนหลังยังคงไม่ชัดเจน เนื่องจากการให้สารยับยั้งการดูดซึมโดพามีนซ้ำๆ ทำให้เกิด FosB/ΔFosB ใน VTA [23]มีการเสนอว่าระบบโดพามีนทำหน้าที่ควบคุมการเหนี่ยวนำ ΔFosB ที่น่าสนใจคือ EA ที่ความถี่ 100 Hz เป็นเวลา XNUMX วันทำให้ FosB/ΔFosB IR ใน VTA ส่วนหลัง/ส่วนหางลดลงอย่างมีนัยสำคัญ เนื่องจากการเปิดใช้งาน KOR ใน VTA สามารถทำให้เซลล์ประสาท DA เกิดโพลาไรซ์มากเกินไปและระงับการปล่อยโดปามีนโดยการกระทำโดยตรงที่บริเวณการปล่อย [56]เราเสนอว่าการกระตุ้น KOR เซสชัน 100 Hz EA หลายเซสชันอาจช่วยระงับการปล่อยโดปามีน ซึ่งนำไปสู่การยับยั้งการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท VTA GABA [23]แม้ว่าผลที่ตามมาจากการยับยั้งเซลล์ประสาท GABA ยังต้องมีการศึกษาเพิ่มเติม นอกจากนี้ การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้ยังได้แสดงให้เห็นว่า KOR มีการแสดงออกทางหน้าที่บนเซลล์ประสาท DA ที่ฉายภาพ PFC และอะมิกดาลา แต่ไม่ใช่บน NAc ใน VTA [57], [58]ดังนั้น การยับยั้งการดื่มแอลกอฮอล์ที่เกิดจาก 100 Hz EA หลายเซสชันอาจเกิดจากการยับยั้งแบบเลือกสรรของวงจร VTA-PFC หรือ VTA-amygdala DA หรือทั้งคู่ผ่านการกระตุ้น KOR แบบเลือกสรรใน VTA
โดยสรุป การศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่าการบำบัดด้วย EA หลายครั้งที่ความถี่สูง (100 เฮิรตซ์) ที่จุดฝังเข็ม ST36 มีประสิทธิภาพในการลด (1) การบริโภคและความต้องการเอธานอลในหนูที่บริโภคเอธานอลในปริมาณมากเป็นประจำ และ (2) การบำบัดด้วย FosB/ΔFosB IR ในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัล เมื่อพิจารณาว่า ΔFosB และ FosB เป็นสมาชิกที่สำคัญของตระกูลปัจจัยการถอดรหัส Fos ซึ่งเกี่ยวข้องกับความยืดหยุ่นของระบบประสาทในการติดยา ดูเหมือนว่า ΔFosB และ FosB ในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลเป็นปัจจัยสำคัญในการทำงานของ EA ในการลดการบริโภคแอลกอฮอล์มากเกินไป
เชิงอรรถ
การแข่งขันความสนใจ: ผู้เขียนได้ประกาศว่าไม่มีความสนใจในการแข่งขันอยู่