การควบคุม Glucocorticoids ของการแสดงออกของ FosB / ΔFosBที่เกิดจากการได้รับสาร opiate เรื้อรังในระบบความเครียดของสมอง (2012)

PLoS One 2012;7(11):e50264. doi: 10.1371/journal.pone.0050264. Epub 2012 21 พฤศจิกายน

การ์เซีย-เปเรซ ดี, Laorden ML, มิลานิส เอ็มวี, Núñez C.

แหล่ง

กลุ่มเภสัชวิทยาเซลล์และโมเลกุล ภาควิชาเภสัชวิทยา คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัย มูร์เซีย ประเทศสเปน

นามธรรม

การใช้ยาในทางที่ผิดเป็นเวลานานจะเปลี่ยนแปลงระบบการตอบสนองต่อความเครียดอย่างมาก การได้รับมอร์ฟีนซ้ำๆ จะทำให้มีการสะสมของแฟกเตอร์การถอดรหัส ΔFosB โดยเฉพาะในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลและความเครียด ผลกระทบต่อเนื่องของ ΔFosB ต่อยีนเป้าหมายอาจมีบทบาทสำคัญในความยืดหยุ่นที่เกิดจากการใช้ยาในทางที่ผิด หลักฐานล่าสุดชี้ให้เห็นว่าฮอร์โมนที่เกี่ยวข้องกับความเครียด (เช่น กลูโคคอร์ติคอยด์ GC) อาจทำให้เกิดการปรับตัวในระบบความเครียดของสมอง ซึ่งอาจส่งผลต่อการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของยีนและปัจจัยการถอดรหัส การศึกษานี้ตรวจสอบบทบาทของ GC ในการควบคุม FosB/ΔFosB ในระบบความเครียดของสมองทั้งไฮโปทาลามัสและนอกไฮโปทาลามัสระหว่างการติดมอร์ฟีน เพื่อจุดประสงค์นั้น การแสดงออกของ FosB/ΔFosB ถูกวัดในหนูทดลองควบคุม (ที่ได้รับการผ่าตัดหลอก) และหนูที่ถูกตัดต่อมหมวกไต (ADX) ที่ต้องพึ่งยาฝิ่นหลังจากการรักษาด้วยมอร์ฟีนเป็นเวลา 2 วัน ในหนูที่ได้รับการผ่าตัดหลอก FosB/ΔFosB ถูกเหนี่ยวนำหลังจากการให้มอร์ฟีนเป็นเวลานานในบริเวณความเครียดของสมองทั้งหมดที่ตรวจสอบ ได้แก่ นิวเคลียสแอคคัมเบนส์ (เปลือก) (NAc), นิวเคลียสเตียงของสไตรอาเทอร์มินาลิส (BNST), อะมิกดาลากลาง (CeA), นิวเคลียสพาราเวนทริคิวลาร์ของไฮโปทาลามัส (PVN) และกลุ่มเซลล์นอร์เอพิเนฟรินของนิวเคลียสของทางเดินเดี่ยว (NTS-A(2)) การผ่าตัดต่อมหมวกไตช่วยลดการผลิต FosB/ΔFosB ที่เพิ่มขึ้นซึ่งสังเกตได้จากการได้รับมอร์ฟีนเรื้อรังใน NAc, CeA และ NTS นอกจากนี้ ADX ยังลดการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในนิวรอน CRH ที่เป็นบวกของ BNST, PVN และ CeA ผลลัพธ์ที่คล้ายกันนี้พบในนิวรอน NTS-A(XNUMX) TH ที่เป็นบวก และนิวรอน NAc pro-dynorphin ที่เป็นบวก ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการปรับตัวของระบบประสาท (ประมาณจากการสะสมของ FosB/ΔFosB) ต่อยาฝิ่นในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับความเครียดได้รับการควบคุมโดย GC ซึ่งสนับสนุนหลักฐานของความเชื่อมโยงระหว่างฮอร์โมนความเครียดของสมองและการติดยา

บทนำ

ยาฝิ่น เช่น มอร์ฟีน เป็นยาแก้ปวดที่มีประสิทธิภาพที่ใช้รักษาอาการปวดเฉียบพลันและเรื้อรังหลายรูปแบบ อย่างไรก็ตาม ผลข้างเคียงร้ายแรง เช่น การดื้อยาและการถอนยา ล้วนส่งผลให้เกิดการติดยาฝิ่นและจำกัดการใช้ยา นอกจากนี้ การใช้ฝิ่น (เฮโรอีน มอร์ฟีน) ในทางที่ผิดเพิ่มขึ้นในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา หลักฐานที่เพิ่มมากขึ้นบ่งชี้ว่ากลไกต่างๆ ของการควบคุมยีน (รวมถึงผลกระทบต่อจีโนมิกส์ ระดับโมเลกุล ระดับเซลล์ และระดับวงจร) มีส่วนเกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นในสมองจากการใช้ยาเสพติด ซึ่งบ่งชี้ถึงกลยุทธ์การบำบัดที่อาจเป็นไปได้สำหรับการบำบัดการติดยา [1]-[4].

คำถามสำคัญในสาขาการใช้ยาเสพติดในทางที่ผิดคือการระบุโปรตีนที่ทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการเปลี่ยนผ่านจากผลเฉียบพลันไปสู่ผลระยะยาวของยาเหล่านั้น สิ่งที่น่าสนใจเป็นพิเศษในการศึกษาด้านการติดยาคือปัจจัยการถอดรหัสตระกูล Fos ตระกูลนี้ประกอบด้วย c-Fos, Fra-1 และ Fra-2, FosB และ ΔFosB ซึ่งเป็นตัวแปรสไปซ์ที่ถูกตัดทอนของ FosB ที่มีความยาวเต็ม [5]ต่างจากสมาชิกอื่นๆ ในตระกูล Fos ΔFosB ถูกเหนี่ยวนำในสมองเพียงเล็กน้อยหลังจากการใช้ยาอย่างเฉียบพลัน แต่เนื่องจากครึ่งชีวิตที่ยาวนานผิดปกติ จึงคงอยู่เป็นเวลาหลายสัปดาห์หรือหลายเดือนหลังจากหยุดใช้ยา เป็นผลให้ ระดับ ΔFosB ค่อยๆ สะสมขึ้นเมื่อได้รับยาซ้ำๆ [6], [7]ซึ่งชี้ให้เห็นว่า ΔFosB อาจแสดงถึงกลไกที่ทำให้สารเสพติดก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในรูปแบบการแสดงออกของยีนอย่างถาวรแม้จะหยุดใช้ยาไปแล้ว [8].

มีรายงานว่าการสัมผัสกับโคเคน แอมเฟตามีน แคนนาบินอยด์ หรือมอร์ฟีนซ้ำๆ ส่งผลให้ระดับ ΔFosB ในบริเวณสมองที่เกี่ยวข้องกับผลการเสริมแรงเชิงบวกของยา เช่น นิวเคลียสแอคคัมเบนส์ (NAc) คอร์เทกซ์ด้านหน้า และสไตรเอตัมหลังเพิ่มขึ้น มีการเสนอว่าการเพิ่มขึ้นนี้เป็นการปรับตัวของระบบประสาทที่ส่งผลให้ไวต่อยามากขึ้น และเสี่ยงต่อการพัฒนาพฤติกรรมเฉพาะตัวของการติดยา [9]-[13]. เราได้แสดงให้เห็นเมื่อเร็ว ๆ นี้ว่าการเพิ่มระดับ FosB/ΔFosB หลังจากการใช้มอร์ฟีนเรื้อรังไม่เพียงแต่จำกัดเฉพาะระบบตอบแทนเท่านั้น แต่ยังเกิดขึ้นในระบบความเครียดของสมองด้วย (ซึ่งเกี่ยวข้องกับผลการเสริมแรงเชิงลบของยา) ทั้งยังอยู่ในนิวเคลียสของโซลิทารีเทรน-เอด้วย₂ กลุ่มเซลล์นอร์เอพิเนฟริน (NTS-A₂ระบบนอร์เอพิเนฟรินหลักที่ควบคุมวงจรประสาทความเครียด [14]สอดคล้องกับการค้นพบเหล่านี้ ความเครียดเรื้อรังหลายรูปแบบยังกระตุ้นให้เกิด ΔFosB ใน NAc และบริเวณสมองอื่นๆ อีกด้วย [15], [16].

การติดยาเป็นความผิดปกติที่ซับซ้อนเนื่องจากมีหลายปัจจัยที่ส่งผลต่อการพัฒนาและการรักษาความผิดปกติทางระบบประสาทนี้ ปัจจัยหนึ่งคือความเครียดซึ่งมีส่วนเกี่ยวข้องกับลักษณะเฉพาะบางประการของการติดยา [17]-[21]ทั้งแกนไฮโปทาลามัส-ต่อมใต้สมอง-ต่อมหมวกไต (HPA ซึ่งเป็นเส้นทางความเครียดของต่อมไร้ท่อหลัก) และระบบความเครียดนอกไฮโปทาลามัส (ซึ่งประกอบด้วยอะมิกดาลาที่ขยายออกและ NTS-A)₂) มีอาการผิดปกติจากการใช้ยาเป็นเวลานานซึ่งอาจทำให้เกิดการติดยาได้ [14], [22]. นอกจากนี้ การตอบสนองของแกน HPA ยังคล้ายคลึงกันทั้งหลังจากการกระตุ้นที่ก่อให้เกิดความเครียดและการได้รับสารเสพติดเฉียบพลัน [23], [24], โดยมีฮอร์โมนคอร์ติโคโทรปินรีลีซิง (CRH) ฮอร์โมนอะดรีโนคอร์ติโคโทรปิน (ACTH) และฮอร์โมนกลูโคคอร์ติคอยด์ (GC) สูง. Tการตอบสนองของเขาอำนวยความสะดวกในการปรับตัวต่อการเปลี่ยนแปลงของสิ่งแวดล้อมที่รุนแรง แต่ยังอาจนำไปสู่ความผิดปกติทางพฤติกรรมในระหว่างภาวะเครียดเรื้อรัง เช่น การติดยาและภาวะซึมเศร้า [25]การศึกษายังไม่ได้ตรวจสอบความสัมพันธ์ระหว่าง GC และการเหนี่ยวนำ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากการพึ่งพามอร์ฟีนในระบบประสาทสมองที่เครียด ดังนั้นเราจึงประเมินอิทธิพลของ GC ต่อการแสดงออกของ FosB/ΔFosB หลังจากการให้มอร์ฟีนอย่างต่อเนื่องในบริเวณที่เกี่ยวข้องกับความเครียดของสมอง เพื่อตอบคำถามนี้ ก่อนอื่นเราจะตรวจสอบผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตทั้งสองข้าง (ADX) ต่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ FosB/ΔFosB (IR) ในนิวเคลียสหลักของระบบประสาทในหนูที่พึ่งมอร์ฟีน

กิจกรรมของระบบความเครียดของสมองถูกควบคุมโดยสารสื่อประสาท/สารปรับระบบประสาทหลายชนิด CRH เป็นเปปไทด์ประสาทหลักที่ควบคุมกิจกรรมของระบบความเครียด และมีการตั้งสมมติฐานว่ามีส่วนสนับสนุนทั้งต่อความเสี่ยงที่มีอยู่ก่อนในการใช้ยาจนเสพติด และความเสี่ยงต่อการกลับมาใช้ยาซ้ำในภายหลัง [26]. ฉันนอกจากนี้ งานจำนวนมากยังสนับสนุนความสำคัญของ NTS-A₂ การกระตุ้นระบบประสาทส่วนกลางในกรณีที่ติดยา และบทบาทสำคัญของนอร์เอพิเนฟริน (NA) ในฐานะสารสื่อประสาทที่ควบคุมวงจรประสาทนี้ [27]ในที่สุด หลักฐานที่สำคัญแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของไดนอร์ฟินจะถูกกระตุ้นในสไตรเอตัมและอะมิกดาลาในระหว่างการให้ยาเฉียบพลันและเรื้อรัง [28]จากข้อเท็จจริงเหล่านี้ วัตถุประสงค์ของการศึกษาต่อไปนี้คือการระบุบทบาทของ GC ในการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในกลุ่มประชากรเฉพาะของระบบความเครียดของสมองระหว่างการติดมอร์ฟีน

ไปที่:

ผลสอบ

ผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตต่อการเพิ่มน้ำหนักตัวและความเข้มข้นของ ACTH ในพลาสมาและคอร์ติโคสเตียรอยด์ในหนูที่ต้องใช้มอร์ฟีน

ก่อนทำการทดสอบการตรวจจับภูมิคุ้มกัน เราได้ประเมินประสิทธิผลของการรักษาแบบเรื้อรังด้วยมอร์ฟีน เพื่อจุดประสงค์นี้ เราจึงบันทึกน้ำหนักของสัตว์ในวันที่ฝังเม็ดยาและในวันที่ฆ่า (วันที่ 10) การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางเผยให้เห็นผลกระทบหลักที่สำคัญต่อการเพิ่มน้ำหนักตัวสำหรับการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,47)=13.24, p=0.0007) การรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,47)=281.05, p<0.0001] และปฏิสัมพันธ์ระหว่าง ADX และการรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,47)=4.13, p=0.0479]. ตามผลการวิจัยครั้งก่อน [29], [30], โพสต์เฉพาะกิจ การวิเคราะห์บ่งชี้ว่าทั้งกลุ่มหลอกและกลุ่ม ADX ที่พึ่งพามอร์ฟีนนั้นแสดงให้เห็นอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.001) น้ำหนักเพิ่มขึ้นน้อยลง (−13.75±5.0 กรัม, n=12; 3.84±2.45 ก., น=13 ตามลำดับ) มากกว่าที่สังเกตได้ในสัตว์ทดลองหลอกและ ADX ที่ได้รับเม็ดยาหลอก (44.58±1.7 กรัม, n=12; 49.57±2.4 ก., น=12 ตามลำดับ ซึ่งเป็นผลมาจากการกินอาหารลดลงที่สังเกตได้ในสัตว์เหล่านี้ [29].

เพื่อตรวจสอบประสิทธิผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไต ได้มีการวัดความเข้มข้นของฮอร์โมนในพลาสมา การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทาง (Two-way ANOVA) ที่ตรวจสอบผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตและมอร์ฟีนต่อความเข้มข้นของ ACTH และคอร์ติโคสเตอโรนในพลาสมา แสดงให้เห็นผลหลักที่สำคัญของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [ACTH: F(1,18)=68.12, p<0.0001; คอร์ติโคสเตียรอยด์: F(1,45)=10.42, p=0.0023) ตามที่คาดไว้ นิวแมน โพสต์เฉพาะกิจ การทดสอบแสดงให้เห็น (รูปที่ S1) ที่อยู่ในยาหลอก (n=6)- และมอร์ฟีน (n=4) ความเข้มข้นของ ACTH ในพลาสมาของหนู-ADX สูงขึ้น (p<0.001) เมื่อเปรียบเทียบกับสัตว์ที่ได้รับการผ่าตัดหลอกสำหรับการรักษาสองแบบที่ประเมิน (ยาหลอก, n=6; และมอร์ฟีน=6) ไม่มีการสังเกตการเปลี่ยนแปลงในความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตอรอยด์ในพลาสมาระหว่าง ADX กับยาหลอก (n=14) และ ADX-มอร์ฟีน (n=13) หนูที่ได้รับการรักษา ความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตียรอยด์ในหนูที่ได้รับ ADX-มอร์ฟีนมีนัยสำคัญ (p<0.01) ต่ำกว่าที่พบในแชมมอร์ฟีน (n=10) หนูที่ได้รับการรักษา ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในกลุ่มที่ได้รับมอร์ฟีนเมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับยาหลอก (n=12)

การผ่าตัดต่อมหมวกไตช่วยลดระดับ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากการติดมอร์ฟีนในระบบย่อยของสมองที่มีความเครียดได้แตกต่างกัน

ในสัตว์ทดลองควบคุม (หนูที่ปลูกถ่ายยาหลอก) พบว่าการแสดงออกของ FosB/ΔFosB-IR ในระดับต่ำในทุกพื้นที่ของระบบสมองที่เกี่ยวข้องกับความเครียด การรักษาด้วยมอร์ฟีนเรื้อรังส่งผลให้ FosB/ΔFosB ปรากฏขึ้นในทุกพื้นที่ของสมองที่ตรวจสอบ ใน NAc(shell) การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทาง (two-way ANOVA) แสดงผลหลักที่สำคัญของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,16)=6.44, p=0.0220] และการรักษาด้วยมอร์ฟีนเรื้อรัง [F(1,16)=19.98, p=0.0004] การทดสอบหลังการทดลองของ Newman-Keuls แสดงให้เห็นว่า (รูปที่ 2A–E) ในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนพบว่าการแสดงออกของ FosB/ΔFosB เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ในหนู ADX ที่ต้องพึ่งมอร์ฟีนพบว่าการแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05) ใน NAc การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับ BNST แสดงผลหลักที่สำคัญของการรักษาด้วยมอร์ฟีนเรื้อรัง [F(1,16)=48.92, p<0.0001] การวิเคราะห์ภายหลังพบว่ามีการเพิ่มขึ้น (p<0.001) ใน FosB/ΔFosB ในสัตว์ที่พึ่งมอร์ฟีนทั้งแบบหลอกและ ADX ซึ่งบ่งชี้ว่าการควบคุม FosB/ΔFosB เกี่ยวข้องกับการได้รับมอร์ฟีนเรื้อรังโดยไม่คำนึงถึงความเข้มข้นของ GC (รูปที่ 2F–J) การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับ FosB/ΔFosB ใน CeA แสดงให้เห็นผลที่สำคัญของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,15)=20.51, p=0.0004] และการเตรียมมอร์ฟีนล่วงหน้า [F(1,15)=27.52, p<0.0001] โพสต์นี้ การทดสอบแสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ในระดับ FosB/ΔFosB ในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนแบบหลอกเมื่อเทียบกับหนูที่ได้รับยาหลอกแบบหลอก ซึ่งลดลง (p<0.01) ในกลุ่มที่ต้องใช้มอร์ฟีน ADX (รูปที่ 2K–O) นอกจากนี้ หนูที่ได้รับเม็ดยาหลอก ADX ยังแสดงระดับ FosB/ΔFosB ที่ต่ำกว่า (p<0.01) เมื่อเทียบกับกลุ่มหนูที่ได้รับยาหลอก

การผ่าตัดต่อมหมวกไตควบคุมการแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ในระบบความเครียดของสมองแตกต่างกัน

การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทาง (Two-way ANOVA) เพื่อตรวจสอบผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตและมอร์ฟีนต่อการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ใน PVN (parvocellular subdivision) เผยให้เห็นผลที่สำคัญของการรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,16)=16.31, p<0.0001] โพสต์นี้ การวิเคราะห์แสดงให้เห็นนัยสำคัญ (รูปที่ 3A–E) เพิ่มขึ้น (พ<0.05) ใน FosB/ΔFosB-IR ใน PVN จากหนูที่ได้รับการรักษาด้วยมอร์ฟีนทั้งแบบหลอกและ ADX ใน NTS-A₂ กลุ่มเซลล์ catecholaminergic, การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทาง ANOVA เผยให้เห็นผลหลักของการรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,11)=76.33, p<0.0001] โพสต์นี้ การวิเคราะห์แสดงให้เห็นนัยสำคัญ (รูปที่ 3F–J) การเพิ่มขึ้นของ FosB/ΔFosB-IR ในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนแบบหลอกเมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับยาหลอกแบบหลอก (p<0.001) ซึ่งถูกทำให้ลดความรุนแรงลง (p<0.05) ในกลุ่มที่ขึ้นกับมอร์ฟีน ADX

ผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตต่อการแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ใน PVN และ NTS-A₂ จากหนูที่พึ่งมอร์ฟีน

การได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานานทำให้การแสดงออกของ FosB/ΔFosB เข้าสู่เซลล์ประสาท CRH ใน PVN, BNST และ CeA อิทธิพลของกลูโคคอร์ติคอยด์

การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับเซลล์ประสาทที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB/CRH ใน BNST แสดงผลหลักของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,20)=64.43, p<0.0001] และปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญระหว่างการผ่าตัดต่อมหมวกไตและการรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,20)=6.80, p=0.0169] ใน PVN การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทาง (two-way ANOVA) เผยให้เห็นผลหลักที่สำคัญของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,19)=11.35, p=0.0032] การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับเซลล์ประสาทที่มี FosB/ΔFosB-positive/CRH-positive ใน CeA แสดงให้เห็นผลหลักที่สำคัญของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,20)=106.85, p<0.0001], การรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,20)=7.33, p=0.0136] และปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญระหว่างการผ่าตัดต่อมหมวกไตและการเตรียมยาล่วงหน้า [F(1,20)=7.07, p=0.0151] ตัวเลข 4, , 5,5, ,66 แสดงภาพตัวแทนของส่วน BNST, PVN และ CeA จากหนูทดลองหลอกหรือหนูควบคุม ADX และหนูที่พึ่งมอร์ฟีน โพสต์นี้ การวิเคราะห์เผยให้เห็นว่าพบว่าเซลล์ประสาทที่เป็นบวกของ FosB/ΔFosB จำนวนมากแสดงออกร่วมกันใน CRH ใน BNST (p<0.01; รูปที่ 4E), พีวีเอ็น (พี<0.05; รูปที่ 6E) และ CeA (p<0.01; รูปที่ 6E) ในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนเทียบกับกลุ่มที่ได้รับยาหลอก นอกจากนี้ จำนวนเซลล์ประสาทที่มี FosB/ΔFosB เป็นบวกซึ่งแสดงออกร่วมกันของ CRH ในหนูที่ได้รับเม็ดยาหลอก ADX และในหนูที่ต้องได้รับมอร์ฟีนนั้นต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญในนิวเคลียสทั้งสามเมื่อเปรียบเทียบกับการรักษาที่เกี่ยวข้องในสัตว์ที่ได้รับยาหลอก ดังที่แสดงใน ตัวเลข 4, , 5,5, ,66 (BNST: พี<0.01 เทียบกับยาหลอกและยาหลอก; p<0.001 เทียบกับยาหลอกและมอร์ฟีน PVN: p<0.05 เทียบกับยาหลอกและยาหลอก; p<0.001 เทียบกับยาหลอกและมอร์ฟีน CeA: p<0.001 เมื่อเทียบกับยาหลอกและเมื่อเทียบกับยาหลอกและมอร์ฟีน)

การผ่าตัดต่อมหมวกไตทำให้การแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท BNST CRH ที่เป็นบวกลดลง

การผ่าตัดต่อมหมวกไตทำให้การแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท PVN CRH ที่เป็นบวกลดลง

การผ่าตัดต่อมหมวกไตขัดขวางการแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท CeA CRH ที่เป็นบวก

ในระดับ BNST การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับจำนวนเซลล์ประสาทที่เป็นบวกต่อ CRH แสดงให้เห็นว่ามีผลกระทบหลักของ ADX [F(1,20)=103.92, p<0.0001] เช่นเดียวกับมอร์ฟีนเรื้อรัง [F(1,20)=4.35, p<0.05] ดังแสดงใน 1 ตารางนิวแมน-คูลส์ โพสต์เฉพาะกิจ การทดสอบเผยให้เห็นว่าหนูที่ได้รับยาหลอกและมอร์ฟีนเม็ด ADX มีเซลล์ประสาท CRH ต่ำกว่า (p<0.001) เมื่อเทียบกับหนูที่ได้รับยาหลอกหรือกลุ่มที่ต้องใช้มอร์ฟีน ที่ PVN การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทาง (two-way ANOVA) แสดงผลอย่างมีนัยสำคัญของการผ่าตัดต่อมหมวกไต [F(1,19)=11.35, p=0.0032] การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับเซลล์ประสาท CRH ทั้งหมดที่ระดับ CeA เผยให้เห็นผลที่สำคัญของ ADX [F(1,20)=240.09, p<0.0001] และปฏิสัมพันธ์หลักระหว่าง ADX และมอร์ฟีนเรื้อรัง [F(1,20)=4.49, p=0.0467] 1 ตาราง แสดงให้เห็นว่ามีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ประสาท CRH ที่บริเวณ CeA จากหนูที่ได้รับยาหลอกหรือมอร์ฟีน ADX 1 ตาราง ยังแสดงให้เห็นด้วยว่าการได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานานทำให้จำนวนนิวรอนที่เป็น CRH บวกเพิ่มขึ้น (p<0.05) ที่ระดับ BNST และ CeA

1 ตาราง

ตาราง 1. ผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตต่อจำนวนเซลล์ประสาทที่เป็น CRH ในเชิงบวกใน BNST, PVN และ CeA, เซลล์ประสาทที่เป็น pro-DYN ในเชิงบวกใน NAc และเซลล์ประสาทที่เป็น TH ในเชิงบวกใน NTS ในสัตว์ที่ได้รับยาหลอกหรือเม็ดมอร์ฟีน

ผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตต่อ FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท DYN-positive ใน NAc(Shell)

เราไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในจำนวนเซลล์ที่เป็นบวกต่อ DYN ที่แสดง FosB/ΔFosB ร่วมกันใน NAc(เปลือก) หลังจากได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานาน (มะเดื่อ. 7) เมื่อเทียบกับกลุ่มยาหลอก การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับนิวรอนที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB/pro-DYN ใน NAc(shell) แสดงผลหลักของ ADX [F(1,19)=10.11, p=0.0049] ตามที่แสดงไว้ใน รูปที่ 7Cจำนวนเซลล์ประสาทที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB ที่แสดง pro-DYN ร่วมกันในหนูที่ติดมอร์ฟีน ADX นั้นมีความสำคัญ (p<0.05) ต่ำกว่าเมื่อเทียบกับการรักษาที่สอดคล้องกันในสัตว์ทดลอง ดังที่แสดงใน 1 ตารางADX ไม่ชักนำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในเซลล์ pro-DYN ทั้งหมดจาก NAc(เปลือก)

ผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไตต่อการแสดงออกของโปรตีน FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาทที่เป็น NAc(shell) pro-DYN ในเชิงบวก และในเซลล์ประสาทที่เป็น NTS TH ในเชิงบวกจากหนูที่พึ่งมอร์ฟีน

การผ่าตัดต่อมหมวกไตยับยั้งการพึ่งพามอร์ฟีนที่ทำให้เกิด FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท TH-Positive ใน NTS-A₂ กลุ่มเซลล์นอร์เอพิเนฟริน

การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสองทางสำหรับนิวรอนที่เป็น FosB/ΔFosB-positive/TH-positive ใน NTS-A₂ แสดงผลหลักของ ADX [F(1,15)=64.86, p<0.0001], การรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,15)=29.62, p<0.0001] และปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญระหว่างการผ่าตัดต่อมหมวกไตและการรักษาด้วยมอร์ฟีน [F(1,15)=19.24, p=[0.0005] นิวแมน-เคิลส์ โพสต์เฉพาะกิจ การทดสอบบ่งชี้ว่าพบว่าเซลล์ประสาทที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB จำนวนมากแสดงออกร่วมกันของ TH ใน NTS (p<0.001; รูปที่ 7F) ในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนแบบหลอก นอกจากนี้ จำนวนเซลล์ประสาทที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB ที่แสดง TH ร่วมกันในหนูที่ต้องใช้มอร์ฟีน ADX ก็ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.001) เมื่อเปรียบเทียบกับการรักษาที่สอดคล้องกันในสัตว์หลอก ดังที่แสดงใน รูปที่ 7F. ในทางกลับกัน ดังที่แสดงไว้ใน 1 ตารางADX ไม่ชักนำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในเซลล์ประสาท TH-positive ทั้งหมดใน NTS

ไปที่:

การสนทนา

ผลลัพธ์ปัจจุบันบ่งชี้เป็นครั้งแรกว่าการส่งสัญญาณ GC ในสมองปรับเปลี่ยนการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากการให้มอร์ฟีนเรื้อรังในระบบความเครียดของสมองในลักษณะเฉพาะบริเวณ

หลักฐานที่บรรจบกันบ่งชี้ว่าความเครียดเพิ่มความเสี่ยงต่อพฤติกรรมเสพติด [18]สิ่งกระตุ้นที่ก่อให้เกิดความเครียดอย่างต่อเนื่องจะเปลี่ยนแปลงการสังเคราะห์ การแสดงออก และการส่งสัญญาณในเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับความเครียด (เช่น CRH, GC, NA เป็นต้น) นอกจากนี้ ยาเสพติดยังส่งผลต่อเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับความเครียด ซึ่งส่งผลให้การแสดงออกของยีนเปลี่ยนแปลงไป โดยมีผลต่อการส่งสัญญาณต่อโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับรางวัลและความเครียด [31]ความเครียดและการใช้ยาในทางที่ผิดสามารถกระตุ้นรูปแบบการทำงานของเซลล์ประสาทที่ทับซ้อนกันในระบบประสาทส่วนกลาง ส่งผลให้การแสดงออกของยีนถูกกระตุ้นทันที

มีการอธิบายอย่างกว้างขวางว่าสารเสพติดและสิ่งกระตุ้นที่ก่อให้เกิดความเครียดเรื้อรังจะเพิ่มการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัส ΔFosB ในนิวเคลียสหลักที่เกี่ยวข้องกับผลการเสริมแรงเชิงบวก [12], [13], [32], [33]และมีการเสนอว่าผลกระทบที่คงอยู่ของ ΔFosB ต่อยีนเป้าหมายอาจมีบทบาทสำคัญในการพัฒนาการปรับตัวที่แสดงลักษณะเฉพาะของการติดยา [9], [34]อย่างไรก็ตาม เป็นที่ทราบกันน้อยมากเกี่ยวกับการแสดงออกของ ΔFosB ในระบบความเครียดของสมองหลังจากการได้รับยาเสพติดเป็นเวลานานหรือกลไกระดับโมเลกุลในการสะสมของ ΔFosB ที่เกิดจากมอร์ฟีนในบริเวณที่เกี่ยวข้องกับความเครียด

ในการศึกษาปัจจุบัน เราได้ตรวจสอบการมีส่วนร่วมของ GC ในการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากมอร์ฟีนในระบบความเครียดของฮอร์โมน (แกน HPA) ซึ่งควบคุมโดย CRH ใน PVN เช่นเดียวกับในระบบความเครียดนอกไฮโปทาลามัส (ซึ่งรวมถึงอะมิกดะลาที่ขยายออก) [35]) ซึ่งถูกควบคุมโดย CRH และระบบอื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องกับความเครียด (รวมทั้ง NA และไดนอร์ฟิน [19]).

เมื่อไม่นานนี้ เราได้สาธิตให้เห็นว่าการให้มอร์ฟีนเรื้อรังเป็นเวลา 7 วันจะเพิ่มการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในอะมิกดาลาที่ขยายออก PVN และ NTS-A₂ [14]ผลลัพธ์ปัจจุบันที่สอดคล้องกับข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าการให้มอร์ฟีนเป็นเวลานานทำให้ FosB/ΔFosB ใน CeA, BNST และ NAc(shell) รวมถึงใน PVN และ NTS-A เพิ่มขึ้น₂อะมิกดาลาที่ขยายใหญ่ขึ้นมีความเกี่ยวข้องกับรางวัลจากยา ในความเป็นจริง ยาเสพติดหลักทั้งหมดกระตุ้นการถ่ายทอดโดพามีนจาก VTA ไปยัง NAc(เปลือก) และ CeA การกระตุ้นนี้และผลการเสริมแรงเชิงบวกที่ตามมาของสารเสพติดได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเกี่ยวข้องกับการกระทำของ GC บน GR ที่ตั้งอยู่ใน VTA [28]ผลลัพธ์ของเราสนับสนุนสมมติฐานนี้โดยแสดงให้เห็นว่า FosB/ΔFosB-IR ใน NAc(shell) และ CeA ถูกทำให้ลดทอนลงในสัตว์ ADX ซึ่งอาจบ่งบอกถึงการสนทนาข้ามสายระหว่างปัจจัยการถอดรหัส AP-1 และ GR ในระหว่างการพึ่งพามอร์ฟีน [36]ผลลัพธ์ปัจจุบันแตกต่างจากผลที่สังเกตได้ของ ADX ต่อการแสดงออกของ FosB ใน NAc และ CeA โดยมอร์ฟีนเรื้อรังจะเพิ่มการแสดงออกของ Fos/ΔFosB ใน PVN และ BNST ในลักษณะอิสระจาก GC

สารสื่อประสาทหลายชนิดของระบบความเครียดของสมอง เช่น CRH, NA และ DYN มีความเกี่ยวข้องกับสถานะที่ไม่พึงประสงค์ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของกระบวนการเสพติด [35], [37]-[39]ผลการศึกษาปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าการได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานานส่งผลให้การแสดงออกของ Fos/ΔFosB เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญภายในเซลล์ประสาทที่มี CRH ใน BNST, CeA และ PVN ปัจจัยการถอดรหัสตระกูล Fos สามารถทำงานที่ตำแหน่งองค์ประกอบการตอบสนองของ AMP แบบวงจร (CRE) [40]. หลักฐานจำนวนมากบ่งชี้ว่า ΔFosB สามารถทำหน้าที่เป็นตัวกดการถอดรหัสหรือตัวกระตุ้นได้ [40], [41]. Gแม้ว่ายีน CRH จะมีโมทีฟ CRE ในลำดับโปรโมเตอร์ แต่ก็อาจเสนอได้ว่าการสะสม FosB/ΔFosB ในเซลล์ประสาท CRH สามารถทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการเปลี่ยนแปลงระดับ CRH ที่เกิดจากมอร์ฟีนได้ ตามที่รายงานไว้สำหรับผลของโคเคน [42]โดยเฉพาะอย่างยิ่งใน CeA และ BNST ซึ่งเป็นครั้งแรกที่เราได้รายงานการเพิ่มขึ้นของจำนวนเซลล์ประสาท CRH ที่เป็นบวกระหว่างการติดมอร์ฟีน เพื่อสนับสนุนสมมติฐานนี้ มีการอธิบายการเพิ่มขึ้นของระดับ mRNA ของ CRH ใน CeA หลังจากการใช้มอร์ฟีนเป็นเวลานาน [43]อย่างไรก็ตาม จำนวนเซลล์ประสาท CRH ที่เป็นบวกไม่เปลี่ยนแปลงใน PVN หลังจากการรักษาด้วยมอร์ฟีนเรื้อรัง ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับการค้นพบก่อนหน้านี้ที่แสดงให้เห็นว่าการได้รับมอร์ฟีนเรื้อรังไม่ทำให้ hnRNA ของ PVN CRH เปลี่ยนแปลงไป [44]เนื่องจากการแสดงออกของ PVN CRH ถูกควบคุมลงโดย GC [45]และให้เห็นว่างานปัจจุบันและงานอื่นๆ [29], [44] แสดงให้เห็นว่าการได้รับยาฝิ่นเรื้อรังไม่ได้เปลี่ยนแปลงการหลั่งคอร์ติโคสเตอรอยด์ ดังนั้นจึงดูเหมือนว่าการให้มอร์ฟีนเรื้อรังจะไม่ทำให้จำนวนเซลล์ CRH เปลี่ยนแปลง

การให้คอร์ติโคสเตอรอยด์ทางหลอดเลือดส่วนปลายจะเพิ่มการแสดงออกของ mRNA ของ CRH ใน CeA และ BNST [46], [47]นอกจากนี้ ADX ยังลดการแสดงออกของ CRH ใน CeA อีกด้วย [48], [49]ดังนั้น เราจึงได้สังเกตว่าการเพิ่มขึ้นของจำนวนเซลล์ประสาท CRH ใน BNST และ CeA ระหว่างการพึ่งพามอร์ฟีนถูกยกเลิกหลังการผ่าตัดต่อมหมวกไต เมื่อพิจารณาว่าการเพิ่มขึ้นของ Fos/ΔFosB ภายในเซลล์ประสาท CRH ระหว่างการพึ่งพามอร์ฟีนถูกลดทอนลงในสัตว์ ADX อาจแนะนำบทบาทของ Fos/ΔFosB ในการควบคุมการแสดงออกของ CRH โดย GC ในอะมิกดาลาที่ขยายออกไป ในทางกลับกัน เป็นที่ทราบกันดีว่า GC ควบคุมการแสดงออกของยีน CRH ใน PVN ในทางลบ [45]ตามข้อตกลง ข้อมูลปัจจุบันแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่าการผ่าตัดต่อมหมวกไตทำให้การเพิ่มขึ้นของ Fos/ΔFosB-IR ในเซลล์ประสาทที่มี CRH ในระหว่างการพึ่งพามอร์ฟีนในนิวเคลียสนี้ลดลง

จากการศึกษานี้ ข้อมูลทางภูมิคุ้มกันเคมีเผยให้เห็นว่าการรักษาด้วยมอร์ฟีนเรื้อรังช่วยเพิ่มการย้อมสีของ Fos/ΔFosB ใน NTS-A ได้อย่างมีนัยสำคัญ₂ซึ่งลดลงหลังจาก ADX เมื่อเราตรวจสอบประชากรเซลล์ประสาทเฉพาะที่แสดง FosB/ΔFosB เราพบว่า Fos/ΔFosB-IR เพิ่มขึ้นอย่างมากภายในเซลล์ประสาทที่เป็นบวกต่อ TH (เอนไซม์ที่จำกัดอัตราในการสังเคราะห์คาเทโคลามีน) NA ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีบทบาทหลักในการติดยา [50]ในงานก่อนหน้านี้ การได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานานทำให้ระดับ TH ใน NTS-A เพิ่มขึ้น₂ [14], [29]เป็นที่ทราบกันว่ายีน TH มีไซต์ AP-1 ในโปรโมเตอร์ [51]ผลลัพธ์ของเราอาจแนะนำว่า FosB/ΔFosB มีส่วนเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของระดับ TH ที่เกิดจากฝิ่นใน NTS-A₂กลุ่มเซลล์นอร์เอพิเนฟรินในก้านสมองแสดงตัวรับ GC (GR) ในระดับสูง พบว่า GC มีบทบาทในการส่งสัญญาณประสาทแบบนอร์เอพิเนฟริน [29], [30], [52]ดังนั้น การบริหารยาต้าน GR จึงส่งผลต่อกิจกรรมของ NA หลายประการ รวมถึงการทำงานของ TH และกิจกรรมของเซลล์ประสาท [30]ผลลัพธ์ปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าหลังจาก ADX จะมีเซลล์ TH-positive ที่แสดง FosB/ΔFosB ใน NTS-A ลดลง₂. โดยคำนึงถึงว่าการผ่าตัดต่อมหมวกไตจะปิดกั้นการเพิ่มขึ้นของระดับโปรตีน TH ใน NTS-A₂ ในระหว่างการติดมอร์ฟีน [29]และไซต์ GRE/AP-1 ได้รับการอธิบายไว้ในโปรโมเตอร์ยีน TH [53]ข้อมูลของเราอาจชี้ให้เห็นว่า ΔFosB เป็นตัวกลางในการส่งผลต่อ GC ต่อกิจกรรมของนอร์เอพิเนฟรินใน NTS-A₂ ในระหว่างการติดยาฝิ่น

DYN ถูกตั้งสมมติฐานว่าเป็นยีนเป้าหมายที่เป็นไปได้ของ ΔFosB [54], [55]ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าการได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานานไม่ได้ทำให้การแสดงออกของ FosB/ΔFosB เปลี่ยนแปลงไปอย่างมีนัยสำคัญภายในเซลล์ประสาทที่แสดงออก pro-DYN ใน NAc(shell)) เกี่ยวกับการควบคุมการแสดงออกของ DYN ของ ΔFosB, Zachariou et al [33] รายงานการลดลงเล็กน้อยแต่มีนัยสำคัญของระดับ mRNA ของ DYN ใน NAc จากการแสดงออกของ ΔFosB มากเกินไปในหนู ดังนั้นจึงสันนิษฐานว่าปัจจัยการถอดรหัสนี้ยับยั้งการแสดงออกของ DYN จากข้อมูลของเรา ไม่สามารถสรุปได้ว่ามอร์ฟีนเรื้อรังปรับเปลี่ยนการแสดงออกของ DYN ผ่านกิจกรรมของ FosB/ΔFosB เนื่องจากเราได้ผลลัพธ์ที่ระดับโปรตีน

มีการตั้งสมมติฐานว่าระบบ DYN/kappa opioid ดูเหมือนจะกระตุ้นให้เกิดภาวะคล้ายกับอาการซึมเศร้าซึ่งมีองค์ประกอบของความรู้สึกรังเกียจ การตอบสนองที่ไม่พึงประสงค์นี้อาจเกี่ยวข้องกับปฏิสัมพันธ์แบบตอบแทนกับ NAc, DA และระบบ CRH นอกไฮโปทาลามัส [35]อย่างไรก็ตาม เป็นที่ทราบกันน้อยมากเกี่ยวกับการควบคุมการแสดงออกของ DYN โดย GC ที่เป็นไปได้ใน NAc มีการเสนอว่า ΔFosB ใน NAc ซึ่งบางส่วนผ่านการยับยั้งการแสดงออกของ DYN ช่วยเพิ่มความไวต่อผลตอบแทนของมอร์ฟีนและโคเคน และนำไปสู่ความยืดหยุ่นต่อความเครียด [9], [33]ข้อมูลของเราสนับสนุนบทบาทของ GC ในการควบคุมผลการเสริมแรงเชิงบวกของมอร์ฟีนที่ควบคุมโดยระบบ DA ของเมโสคอร์ติโคลิมบิก เนื่องจากจำนวนนิวรอนที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB/pro-DYN ลดลงใน NAc จากหนู ADX ผลกระทบเหล่านี้อาจควบคุมโดยตรงจาก GR ซึ่งมีอยู่ตลอดเส้นทางการให้รางวัลของเมโสคอร์ติโคลิมบิก หรือโดยอ้อมผ่านการฉายภาพ CRH ที่เกิดจาก CeA และ/หรือ BNST ไปยัง VTA และ NAc ซึ่งจะถูกทำให้ทำงานน้อยลงระหว่างการพึ่งพามอร์ฟีนในหนู ADX

โดยสรุป การศึกษานี้ให้หลักฐานว่า GC มีส่วนเกี่ยวข้องอย่างยิ่งต่อการสะสม FosB/ΔFosB ในระบบความเครียดของสมองหลังจากได้รับมอร์ฟีนเป็นเวลานาน ซึ่งอาจส่งผลให้รูปแบบการแสดงออกของยีนในบริเวณที่เกี่ยวข้องกับความเครียดเปลี่ยนแปลงไปอย่างถาวร ผลการศึกษานี้ยังบ่งชี้ว่า FosB/ΔFosB อาจมีส่วนสนับสนุนการเปลี่ยนแปลงความยืดหยุ่นของระบบความเครียดของสมองที่ขึ้นอยู่กับ GC ในระหว่างที่ติดยาฝิ่น จำเป็นต้องศึกษาเพิ่มเติมเพื่อระบุถึงกลไกภายในเซลล์ที่ยาฝิ่นเรื้อรังกระตุ้น FosB/ΔFosB ในบริเวณที่เกี่ยวข้องกับความเครียดที่เลือก รวมถึงกลไกที่รับผิดชอบในการยับยั้งการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ที่เกิดจากมอร์ฟีนโดย GC

ไปที่:

วิธีการ

วัสดุ

คอร์ติโคสเตียรอยด์และคอเลสเตอรอลซื้อจากบริษัท Sigma Chemical (เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา) เม็ดคอร์ติโคสเตียรอยด์ผลิตโดยดร. มาร์ตัน วาจนา (แผนกบริหารเภสัชกรรม มหาวิทยาลัยเภสัชกรรม มหาวิทยาลัยเซมเมลไวส์ บูดาเปสต์ ฮังการี) เม็ดฐานมอร์ฟีน (Alcaliber Laboratories เมืองมาดริด ประเทศสเปน) หรือแล็กโทส (กลุ่มควบคุม) เตรียมในแผนกเภสัชกรรมและเทคโนโลยีเภสัชกรรม (คณะเภสัชศาสตร์ เมืองกรานาดา ประเทศสเปน) เพนโทบาร์บิทัลซื้อจากบริษัท Hospira (เมืองโฮฟด์ดอร์ป ประเทศเนเธอร์แลนด์) เคตามีนคลอร์ไฮเดรตและไซลาซีนซื้อจากบริษัท Labs. Merial (เมืองลียง ประเทศฝรั่งเศส) และบริษัท Labs. Calier (เมืองบาร์เซโลนา ประเทศสเปน) ตามลำดับ

สัตว์

หนู Sprague-Dawley ตัวผู้ (น้ำหนัก 220–240 กรัมเมื่อเริ่มการทดลอง; Harlan, Barcelona, Spain) ถูกเลี้ยงเป็นคู่ในกรง (ยาว 45 ซม. กว้าง 24 ซม. สูง 20 ซม.) เมื่อมาถึงในห้องที่มีอุณหภูมิควบคุม (22±2°C) และความชื้น (50±10%) พร้อมให้เข้าถึงน้ำและอาหารได้อย่างอิสระ (อาหารสำหรับหนูมาตรฐาน Harlan Teklad; Harlan Interfauna Ibérica, Barcelona, Spain) สัตว์ถูกปรับให้เข้ากับวงจรแสง-มืดมาตรฐาน 12 ชั่วโมง (เปิดไฟ: 08:00 น. – 20:00 น.) เป็นเวลา 7 วันก่อนเริ่มการทดลอง ขั้นตอนการผ่าตัดและการทดลองทั้งหมดดำเนินการตามคำสั่งของสภายุโรปแห่งชุมชนเมื่อวันที่ 24 พฤศจิกายน 1986 (86/609/EEC) และได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการวิจัยสัตว์ในพื้นที่ (REGA ES300305440012) การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมทางชีวภาพของมหาวิทยาลัยมูร์เซีย (RD 1201/2005) และ Ministerio de Ciencia y Tecnología (SAF/FEDER 2009-07178) ประเทศสเปน

Adrenalectomy

หนูถูกผ่าตัดเอาต่อมหมวกไตทั้งสองข้างออกและฝังเม็ดคอร์ติโคสเตอรอยด์เพื่อให้แน่ใจว่ามีระดับ GC ต่ำแต่คงที่ [29]หนูถูกผ่าตัดเอาต่อมหมวกไตทั้งสองข้างออก (ADX) โดยใช้วิธีวางยาสลบทางด้านหลังภายใต้ยาสลบเคตามีนคลอร์ไฮเดรต 90 มก./กก. และไซลาซิน (IP) 8 มก./กก. และฝังเม็ดคอร์ติโคสเตอโรนแบบออกฤทธิ์ช้าใต้ผิวหนัง (SC) ในระหว่างการผ่าตัด องค์ประกอบของเม็ดสเตียรอยด์ (คอร์ติโคสเตอโรน 25 มก. บวกคอเลสเตอรอล 75 มก.) ถูกเลือกเพื่อให้มีความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตอโรนที่คงที่ซึ่งสอดคล้องกับจุดต่ำสุดของวันในแต่ละวันนานถึง 20 วันหลังการฝัง [56]หนู ADX ที่ได้รับคอร์ติโคสเตียรอยด์ทดแทน (ADX บวกคอร์ติโคสเตียรอยด์) จะไม่เพิ่มระดับคอร์ติโคสเตียรอยด์ในพลาสมาที่เกิดจากความท้าทาย [56]หลังการผ่าตัด หนูที่ได้รับ ADX ร่วมกับคอร์ติโคสเตียรอยด์มีทางเลือกอิสระในการดื่มน้ำเกลือไอโซโทนิก (0.9% NaCl) เพื่อทดแทนโซเดียมที่ลดลงอันเป็นผลจากการสูญเสียอัลโดสเตอโรนจากการผ่าตัดต่อมหมวกไต หนูในกลุ่มควบคุมจะได้รับการผ่าตัดแบบเดียวกัน (หลอก) โดยไม่ตัดต่อมหมวกไต หนูที่ได้รับ ADX ร่วมกับคอร์ติโคสเตียรอยด์และหนูที่ได้รับ ADX ร่วมกับคอร์ติโคสเตียรอยด์ได้รับอนุญาตให้ฟื้นตัวจากการผ่าตัดเป็นเวลา 5 วันก่อนการผ่าตัดที่ต้องพึ่งมอร์ฟีน การผ่าตัดต่อมหมวกไตทั้งสองข้างประสบความสำเร็จได้รับการยืนยันจากความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตียรอยด์และ ACTH ในพลาสมา และจากการตรวจหลังการชันสูตรพลิกศพของสัตว์ที่ได้รับ ADX

การบำบัดด้วยยาและขั้นตอนการทดลอง

ห้าวันหลังจากการผ่าตัด หนูถูกฝังเม็ดมอร์ฟีน 75 มก. สองเม็ดใน SC ภายใต้การดมยาสลบด้วยอีเธอร์แบบอ่อน หนูทดลองควบคุมได้รับเม็ดยาหลอกที่มีแล็กโทส วิธีนี้ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าทำให้ความเข้มข้นของมอร์ฟีนในพลาสมาคงที่ โดยเริ่มตั้งแต่ไม่กี่ชั่วโมงหลังจากฝังเม็ดยา และอาการถอนยาอย่างสมบูรณ์หลังจากฉีดสารต้านโอปิออยด์แบบเฉียบพลัน [57]การพึ่งมอร์ฟีนเกิดขึ้นได้ 24 ชั่วโมงหลังจากฝังเม็ดยาและคงอยู่เท่าเดิมเป็นเวลา 15 วัน [58]สิบวันหลังจากการฝังมอร์ฟีนหรือเม็ดยาหลอก หนูถูกฆ่า สภาวะทดลองสี่ประการที่ตรวจสอบกิจกรรมของแกน HPA (ความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตียรอยด์ในพลาสมาและ ACTH) การแสดงออกของ FosB/ΔFosB การแสดงออกของ CRH การแสดงออกของ DYN การแสดงออกของ TH และการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในนิวรอน CRH, DYN และ TH บวก ได้แก่ (i) หลอก-ยาหลอก (ii) มอร์ฟีนหลอก (iii) ADX-ยาหลอก (iv) มอร์ฟีน ADX การเพิ่มน้ำหนักของหนูถูกตรวจสอบระหว่างการรักษาเพื่อให้แน่ใจว่ามอร์ฟีนถูกปลดปล่อยออกจากเม็ดยาอย่างถูกต้อง เนื่องจากทราบกันดีว่าการรักษาด้วยมอร์ฟีนในระยะยาวทำให้การเพิ่มขึ้นของน้ำหนักตัวลดลงอันเนื่องมาจากการบริโภคแคลอรีที่ลดลง [29].

การไหลเวียนเลือดและการตัดชิ้นเนื้อสมอง

หนูถูกวางยาสลบอย่างเข้มข้นด้วยเพนโทบาร์บิทัลเกินขนาด (100 มก./กก. ฉีดเข้าช่องท้อง) และฉีดน้ำเกลือผ่านหัวใจตามด้วยสารตรึงสมองที่มีพาราฟอร์มาลดีไฮด์ (พาราฟอร์มาลดีไฮด์ 4% ในบัฟเฟอร์โบเรต 0.1 M ค่า pH 9.5) หลังจากนำสมองที่ได้รับการฉีดน้ำออกแล้ว หนูจะถูกตรึงด้วยสารตรึงสมองชนิดเดียวกันเป็นเวลา 3 ชั่วโมง และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C ใน PBS ที่มีซูโครส 10% จนกว่าจะตัดส่วนหน้าของสมอง (ความหนา 30 ไมโครเมตร) ออกทางด้านหน้าและด้านหลังโดยใช้ไมโครโทมแช่แข็ง (Leica, Nussloch, เยอรมนี) แอตลาสของ Paxinos และ Watson (2007) [59] ถูกนำมาใช้เพื่อระบุบริเวณสมองที่แตกต่างกันของหนู: NAc(shell), BNST, PVN, CeA และ NTS-A₂ (รูป 1) ส่วนต่างๆ ได้รับการป้องกันการแข็งตัวและเก็บไว้ที่ -20°C จนกว่าจะใช้งาน

ภาพวาดแผนผังของส่วนหน้าตัดโคโรนัลซึ่งระบุพื้นที่สมอง (สี่เหลี่ยมผืนผ้า) ที่มีการนับนิวเคลียสบวก FosB/ΔFosB ใน NAc(เปลือก) BNST CeA PVN และ NTS [59].

FosB/ΔFosB อิมมูโนฮิสโตเคมี

ส่วนต่างๆ ได้รับการประมวลผลสำหรับภูมิคุ้มกันเนื้อเยื่อตามที่อธิบายโดย Núñez et al [29]. โดยสรุป หลังจากบล็อกด้วย H 0.3%₂O₂ และส่วนเนื้อเยื่อแพะปกติ 2% (ซิกมา, สหรัฐอเมริกา) ถูกบ่มในแอนตี้ซีรั่ม anti-FosB / ΔFosB หลัก (โพลีโคลนอลกระต่าย, #sc-48, เทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ, ซานตาครูซ, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา; 1 [อัตราส่วน] 1000) แอนติบอดีหลักที่ใช้ในการศึกษานี้ไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่าง FosB และ ΔFosB ซึ่งเป็นสไปซ์แบบเสถียรได้ การสัมผัสกับสิ่งกระตุ้นที่ทำให้เกิด FosB ซ้ำๆ ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถลดความไวต่อ FosB ที่เกิดขึ้นเฉียบพลันได้ [15], [40], [60]. ดังนั้น ความแตกต่างระหว่างการย้อม FosB/ΔFosB ในหนูที่ได้รับมอร์ฟีนล่วงหน้าและไม่ได้รับการรักษาล่วงหน้าสามารถตีความได้ว่าสะท้อนถึงความแตกต่างในการสะสมของ ΔFosB เป็นหลัก แอนติเจนถูกมองเห็นได้ด้วยโปรโตคอลอะวิดิน-ไบโอติน-อิมมูโนเปอร์ออกซิเดสแบบธรรมดา (Vectastain ABC Elite Kit; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) ปฏิกิริยา 3,3'-ไดอะมิโนเบนซิดีนเตตระไฮโดรคลอไรด์ (DAB; Sigma, USA) ถูกทำให้เข้มข้นขึ้นด้วยนิกเกิล-แอมโมเนียมซัลเฟต ส่วนต่างๆ ถูกติดบนสไลด์เคลือบโครเมียม-อะลัมเจลาติน ทำให้แห้งและปิดแผ่นปิด

การติดฉลากคู่ของภูมิคุ้มกันเนื้อเยื่อของนิวเคลียสที่มีปฏิกิริยาต่อภูมิคุ้มกัน FosB/ΔFosB และเซลล์ประสาท CRH, TH และ DYN ที่เป็นบวก

สำหรับการติดฉลากคู่ FosB/ΔFosB-TH ส่วนเนื้อเยื่อจากหนูแต่ละตัวในแต่ละกลุ่มการรักษาได้รับการประมวลผลสำหรับการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ FosB/ΔFosB โดยใช้การเพิ่มความเข้มข้นของนิกเกิล DAB จากนั้นจึงเปิดเผย TH โดยใช้โครโมเจน DAB เท่านั้น การย้อมภูมิคุ้มกัน FosB/ΔFosB ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ หลังจากการย้อม FosB/ΔFosB ส่วนเนื้อเยื่อจะถูกล้างใน PBS รักษาด้วยเซรั่มแพะปกติ 2% จากนั้นฟักค้างคืนด้วยแอนติบอดีโพลีโคลนัลกระต่ายต่อ TH (AB152, Chemicon, สหรัฐอเมริกา; 1 [อัตราส่วน] 6000) ที่อุณหภูมิห้อง ทำตามขั้นตอนภูมิคุ้มกันเนื้อเยื่อแบบเดียวกับที่อธิบายไว้ข้างต้น พัฒนาคอมเพล็กซ์แอนติบอดี TH-เปอร์ออกซิเดสใน DAB ส่วนต่างๆ ถูกติดบนสไลด์เคลือบเจลาตินโครเมียม-อะลัมและปิดแผ่นปิด

สำหรับการติดฉลากคู่ FosB/ΔFosB-CRH และ FosB/ΔFosB-pro-DYN กระบวนการจะเหมือนกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับ FosB/ΔFosB-TH สำหรับการตรวจจับเซลล์ประสาทที่แสดง DYN ใน NAc ขั้นตอนการดึงแอนติเจนจะถูกใช้โดยการฟักส่วนสมองในบัฟเฟอร์ซิเตรต (กรดซิตริก 10 มิลลิโมลาร์, ทวีน 0.05 20%, pH 6.0) ที่อุณหภูมิ 60°C เป็นเวลา 20 นาทีก่อนขั้นตอนการบล็อก แอนติซีรั่มกระต่ายต่อต้าน CRH ขั้นต้นได้รับความอนุเคราะห์จาก Wylie W. Vale (The Salk Institute, La Jolla, CA, USA) และใช้ที่ 1 [อัตราส่วน] เจือจาง 500 เป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่ 4°C แอนติบอดีปฐมภูมิ pro-DYN ซื้อจาก Neuromics (# GP10110, Neuromics, Edina, MN, USA) และเจือจาง 12000 (72 ชม., 4°C)

การวิเคราะห์ภาพ

ภาพถูกถ่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ไลก้า (DM 4000B; ไลก้า) ที่เชื่อมต่อกับกล้องวิดีโอ (DFC290, ไลก้า) นิวเคลียสเซลล์ที่เป็นบวกของ FosB/ΔFosB จะถูกนับโดยใช้ระบบวิเคราะห์ภาพด้วยความช่วยเหลือของคอมพิวเตอร์ (QWIN, ไลก้า) ขอบเขตของ NTS-A₂, BNST, CeA, NAc(shell) และการแบ่งเซลล์แบบพาร์โวเซลลูลาร์ของ PVN ได้รับการร่างโครงร่างไว้ และบันทึกจำนวนโปรไฟล์เชิงบวก จำนวนโปรไฟล์นิวเคลียส FosB/ΔFosB ภายในขอบเขตของกลุ่มเซลล์ที่สนใจได้รับการนับแบบทวิภาคีในสี่ถึงห้าส่วนจากหนูแต่ละตัว และคำนวณค่าเฉลี่ยเพื่อให้ได้ค่าเดียวสำหรับหนูแต่ละตัว เพื่อหลีกเลี่ยงอคติของผู้สังเกต ส่วนทั้งหมดได้รับการวัดปริมาณโดยนักวิจัยที่ปิดบังข้อมูล จำนวนรวมสำหรับบริเวณสมองที่แตกต่างกันจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SEM

การวัดปริมาณเซลล์ที่เป็นบวกของ TH, CRH และ DYN และโปรไฟล์การย้อมคู่ของ FosB/ΔFosB

ตรวจพบนิวเคลียสบวกสำหรับการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ FosB/ΔFosB โดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงธรรมดาแบบเดียวกับที่อธิบายไว้ข้างต้น และนับด้วยกำลังขยาย 40 เท่า เซลล์ CRH, TH หรือ DYN ที่เป็นบวกต่อ FosB/ΔFosB ถูกระบุว่าเป็นเซลล์ที่มีตะกอนในไซโทซอลสีน้ำตาลสำหรับการย้อมที่เป็นบวกต่อ CRH, TH และ DYN และการย้อมนิวเคลียสสีน้ำเงิน/เข้มสำหรับ FosB/ΔFosB สนามสี่เหลี่ยม (195 µm) ถูกซ้อนทับบนภาพที่ถ่ายเพื่อใช้เป็นพื้นที่อ้างอิง จำนวนนิวรอนที่ติดฉลากคู่ที่สังเกตได้ทั้งสองข้างถูกนับในสี่ถึงห้าส่วนจากสัตว์แต่ละตัวใน PVN, BNST และ CeA สำหรับนิวรอน CRH, NTS สำหรับนิวรอน TH และ NAc สำหรับนิวรอน DYN เซลล์ CRH, TH และ DYN ที่เป็นบวกและไม่มีนิวเคลียสที่มองเห็นได้ (เซลล์ CRH, TH หรือ DYN ที่เป็นลบต่อ FosB/ΔFosB) ยังถูกนำมาวิเคราะห์ด้วย

radioimmunoassay

เลือดถูกเก็บรวบรวมไว้ในหลอดที่ทำความเย็นด้วยน้ำแข็งซึ่งมี EDTA 5% จากนั้นจึงนำไปปั่นเหวี่ยง (500 g; 4°C; 15 นาที) พลาสมาถูกแยก แบ่งเป็น 80 ส่วน และเก็บไว้ที่ -XNUMX°C จนกว่าจะวิเคราะห์คอร์ติโคสเตอรอยด์หรือ ACTH ความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตอรอยด์และ ACTH ในพลาสมาถูกวัดปริมาณโดยใช้แอนติบอดีคอร์ติโคสเตอรอยด์และ ACTH เฉพาะสำหรับหนู ([¹²⁵ฉัน]-CORT และ [¹²⁵I]-ACTH RIA; MP Biomedicals, Orangeburg, NY, USA) ความไวของการทดสอบคือ 7.7 ng/mL สำหรับคอร์ติโคสเตอรอยด์และ 5.7 pg/mL สำหรับ ACTH

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย ± SEM และวิเคราะห์โดยใช้แพ็คเกจสถิติ GraphPad Prism (ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) ข้อมูลวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทาง (ANOVA) โดยใช้การรักษา (ยาหลอก มอร์ฟีน) และการผ่าตัด (หลอก ADX) เป็นตัวแปรอิสระ ทฤษฎีของ Newman–Keuls โพสต์เฉพาะกิจ การทดสอบนี้ใช้สำหรับการเปรียบเทียบกลุ่มบุคคล ความแตกต่างที่ ap<0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญ

ไปที่:

ข้อมูลสนับสนุน

รูป S1

ผลของการผ่าตัดต่อมหมวกไต (ADX) ต่อความเข้มข้นของ ACTH ในพลาสมา (A) และคอร์ติโคสเตอรอยด์ (B) ในกลุ่มควบคุมและในสัตว์ที่ได้รับมอร์ฟีน การผ่าตัด ADX เพิ่มระดับ ACTH ทั้งในหนูที่ได้รับยาหลอกและมอร์ฟีน ในขณะที่ความเข้มข้นของคอร์ติโคสเตอโรนในพลาสมาลดลงในหนูที่ได้รับมอร์ฟีน ข้อมูลแสดงค่าเฉลี่ย ± SEM ของระดับ ACTH ในพลาสมาและคอร์ติโคสเตอโรนในหนูที่ได้รับยาหลอกหรือมอร์ฟีนล่วงหน้าเป็นเวลา 10 วัน ***p<0.001 เทียบกับยาหลอก ⁺⁺p<0.01, ^{+ + +}p<0.001 เทียบกับมอร์ฟีนแบบแชม

(TIF)

คลิกที่นี่สำหรับไฟล์ข้อมูลเพิ่มเติม^{(734K, tif)}

ไปที่:

กิตติกรรมประกาศ

เราขอขอบคุณ Dr. Márton Vajna และ Anna Földes จากมหาวิทยาลัย Semmelweis (บูดาเปสต์ ประเทศฮังการี) สำหรับการเตรียมเม็ดคอร์ติโคสเตอโรน

ไปที่:

คำแถลงเงิน

งานนี้ได้รับการสนับสนุนจากทุนสนับสนุนดังต่อไปนี้: Ministerio de Ciencia e Imnovación (SAF/FEDER 2009-07178 และ SAF/FEDER 2010-17907), สเปน; Red de Trastornos Adictivos (RD06/0001/1006 และ RD06/0001/1001), สเปน; Fundación Séneca, Agencia Regional de Ciencia และ Tecnología Región de Murcia (15405/PI10), สเปน DG-P ได้รับการสนับสนุนจากการคบหาจาก Ministerio de Ciencia e Innovación (AP2009-2379) ผู้ให้ทุนไม่มีบทบาทในการออกแบบการศึกษา การรวบรวมและวิเคราะห์ข้อมูล การตัดสินใจตีพิมพ์ หรือการจัดทำต้นฉบับ

ไปที่:

อ้างอิง

1. วอลโคว์ เอ็นดี สโกลนิก พี (2012) ยาใหม่สำหรับความผิดปกติจากการใช้สารเสพติด: ความท้าทายและโอกาส. Neuropsychopharmacology 37:-290 292 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

2. โรบินสัน เอเจ เนสท์เลอร์ อีเจ (2011) กลไกการติดยาเสพติดและการถอดรหัส. Nat Rev Neurosci 12:-623 637 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

3. ฮัทชิสัน ER, Okun E, Mattson MP (2009) ศักยภาพการรักษาของไมโครอาร์เอ็นเอในการเกิดความเสียหาย ความเสื่อม และการซ่อมแซมระบบประสาท. Med ประสาทและกล้ามเนื้อ 11:-153 161 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

4. ลี MD, ฟาน เดอร์ ฟาร์ต AD (2011) ไมโครอาร์เอ็นเอในการเสพติด: ตัวกลางในการปรับตัว? จิตเวชศาสต 16:-1159 1168 [PubMed]

5. มัมแบร์ก ดี, ลูซิเบลโล เอฟซี, ชูเออร์มันน์ เอ็ม, มุลเลอร์ อาร์ (1991) ทางเลือกการประกบของ transcripts fosB ส่งผลให้เกิดการเข้ารหัส mRNAs ที่แสดงออกในลักษณะที่แตกต่างกัน. ยีน Dev 5:-1212 1223 [PubMed]

6. เฉิน เจ, เคลซ์ MB, โฮป บีที, นากาเบปปุ วาย, เนสท์เลอร์ อีเจ (1997) แอนติเจนที่เกี่ยวข้องกับ Fos เรื้อรัง: ΔFosB ที่เสถียรซึ่งเหนี่ยวนำในสมองโดยการรักษาเรื้อรัง. Neurosci J 17:-4933 4941 [PubMed]

7. Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel AM (1996) การเปลี่ยนแปลงระดับเครือข่ายในการแสดงออกของโปรตีน Fos-Jun ที่เหนี่ยวนำได้ในสไตรเอตัมระหว่างการบำบัดและการถอนโคเคนเรื้อรัง. เซลล์ประสาท 17:-147 156 [PubMed]

8. เจ้า เจ เนสท์เลอร์ อีเจ (2004) ชีววิทยาประสาทระดับโมเลกุลของการติดยาเสพติด. ทบทวนการแพทย์ประจำปี 55:-113 132

9. มูชแชมป์ เจดับบลิว, เนเมธ ซีแอล, โรบิสัน เอเจ, เนสท์เลอร์ อีเจ, คาร์เลซอน เจ (2012) ΔFosB ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของโคเคนในขณะที่ลดประสิทธิภาพของสารกระตุ้นตัวรับ Kappa-Opioid U50488 ที่ทำให้เกิดอาการซึมเศร้า. ทางชีวภาพจิตเวชศาสตร์ 71:-44 50 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

10. Gago B, Suárez-Boomgaard D, Fuxe K, Brené S, Reina-Sánchez MD, และคณะ (2011) ผลของการรักษาด้วยมอร์ฟีนแบบเฉียบพลันและต่อเนื่องต่อการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสในบริเวณย่อยของคอเดตพูทาเมนของหนู การปรับเปลี่ยนอย่างชัดเจนโดยการกระตุ้นตัวรับ D4. สมอง Res 1407:-47 61 [PubMed]

11. Kaplan GB, Leite-Morris KA, แฟน WY, AJ รุ่นเยาว์, Guy MD (2011) การไวต่อสารโอปิออยด์กระตุ้นให้เกิดการแสดงออกของ FosB/ΔFosB ในบริเวณคอร์เทกซ์ด้านหน้า สไตรเอทัล และอะมิกดาลา. PLoS ONE 6: e23574 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

12. นาย เนสต์เลอร์ อีเจ (1996) การเหนี่ยวนำแอนติเจนที่เกี่ยวข้องกับ fos เรื้อรังในสมองหนูโดยการให้มอร์ฟีนเรื้อรัง. Mol Pharmacol 49:-636 645 [PubMed]

13. McClung CA, เนสท์เลอร์ อีเจ, ซาคาริโอ วี (2005) การควบคุมการแสดงออกของยีนโดยมอร์ฟีนเรื้อรังและการถอนมอร์ฟีนในโลคัสเซรูเลียสและบริเวณเทกเมนทัลด้านท้อง. Neurosci J 25:-6005 6015 [PubMed]

14. นูเญซ ซี, มาร์ติน เอฟ, โฟลเดส เอ, ลาออร์เดน เอ็มแอล, โควาคส์ เคเจ และคณะ (2010) การเหนี่ยวนำ FosB / ΔFosBในโครงสร้างที่เกี่ยวข้องกับระบบความเครียดของสมองในระหว่างการพึ่งพาและการถอนมอร์ฟีน. วารสารประสาทวิทยา 114:-475 487 [PubMed]

15. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L และคณะ (2004) การเหนี่ยวนำของ ΔFosB ในโครงสร้างสมองที่เกี่ยวข้องกับรางวัลหลังจากความเครียดเรื้อรัง. Neurosci J 24:-10594 10602 [PubMed]

16. Vialou V, Robison AJ, LaPlant QC, โควิงตัน HE, Dietz DM, และคณะ (2010) ΔFosBในวงจรรางวัลสมองไกล่เกลี่ยความยืดหยุ่นต่อความเครียดและการตอบสนองต่อยากล่อมประสาท. Nat Neurosci 13:-745 752 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

17. แอมบร็อกกี้ เอฟซี, ทูริโอลต์ เอ็ม, มิเลต์ เอ, เดโรช-กาโมเนต์ วี, พาร์เนาโด เอส และอื่นๆ (2009) ความเครียดและการติดยา: ตัวรับกลูโคคอร์ติคอยด์ในเซลล์ประสาทรับความรู้สึกโดปามิโนส่งเสริมการแสวงหาโคเคน. Nat Neurosci 12:-247 249 [PubMed]

18. ซินฮา อาร์ (2008) ความเครียดเรื้อรัง การใช้ยา และความเสี่ยงต่อการติดยา. Ann NY Acad Sci 1141:-105 130 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

19. คูบ จีเอฟ วอลโคว เอ็นดี (2010) วงจรประสาทการติดยาเสพติด. Neuropsychopharmacology 35:-217 238 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

20. คูบ จี, ครีก เอ็มเจ (2007) ความเครียด ความผิดปกติของเส้นทางการตอบสนองต่อยา และการเปลี่ยนผ่านสู่การติดยา. ฉันคือจิตเวชศาสตร์ 164:-1149 1159 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

21. คูบ จีเอฟ เลอ โมล เอ็ม (2008) กลไกทางระบบประสาทสำหรับกระบวนการสร้างแรงบันดาลใจของคู่ต่อสู้ในการเสพติด. Phil Trans R Soc B 363:-3113 3123 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

22. คู๊บ จีเอฟ (2006) ชีววิทยาของการติด: มุมมองที่เกี่ยวข้องกับการวินิจฉัย neuroadaptational. ติดยาเสพติด 101:-23 30 [PubMed]

23. คาร์ราสโก จีเอ, ฟาน เดอ คาร์ แอลดี (2003) เภสัชวิทยาต่อมไร้ท่อประสาทของความเครียด. วารสารเภสัชวิทยายุโรป 463:-235 272 [PubMed]

24. ปิอัซซ่า พีวี เลอ โมล เอ็ม (1997) Glucocorticoids เป็นสารตั้งต้นทางชีวภาพของผลกระทบทางสรีรวิทยาและพยาธิสรีรวิทยา. รีวิวงานวิจัยสมอง 25:-359 372 [PubMed]

25. เคล็ก เจเอ็น, เบลนดี้ เจเอ (2008) ทำให้สิ่งที่แย่ยิ่งแย่ลง: ผลกระทบเชิงลบของความเครียดต่อการติดยาเสพติด. J Clin ลงทุน 118:-454 461 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

26. กู๊ดแมน เอ (2008) ประสาทชีววิทยาของการติดยาเสพติด การทบทวนแบบบูรณาการ. Biochem Pharmacol 75:-266 322 [PubMed]

27. ดันน์ เอเจ สเวียร์จิเอล เอเอช (2008) บทบาทของคอร์ติโคโทรปินรีลีซิงแฟคเตอร์และนอร์เอพิเนฟรินในการตอบสนองที่เกี่ยวข้องกับความเครียด และความสัมพันธ์ระหว่างทั้งสองระบบ. วารสารเภสัชวิทยายุโรป 583:-186 193 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

28. คูบ จีเอฟ เลอ โมล เอ็ม (2008) ติดยาเสพติดและระบบสมอง antireward. แอนน์ เรฟ ฟิสิโอล 59:-29 53

29. นูเญซ ซี, โฟลเดส เอ, เปเรซ-ฟลอเรส ดี, การ์เซีย-บอร์รอน เจซี, ลาออร์เดน เอ็มแอล, และคณะ (2009) ระดับกลูโคคอร์ติคอยด์ที่สูงขึ้นเป็นสาเหตุของการเหนี่ยวนำการแสดงออกของ mRNA ของไทโรซีนไฮดรอกซิเลส (TH) การฟอสโฟรีเลชัน และกิจกรรมเอนไซม์ในนิวเคลียสของบริเวณโดดเดี่ยว (NTS-A2) ในระหว่างการถอนมอร์ฟีน. การศึกษาเกี่ยวกับต่อมไร้ท่อ 150:-3118 3127 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

30. Navarro-Zaragoza J, Hidalgo JM, Laorden ML, Milanés MV (2012) ตัวรับกลูโคคอร์ติคอยด์มีส่วนร่วมในการกระตุ้นกิจกรรมนอร์เอพิเนฟรินของหนูที่เกิดจากการถอนยาฝิ่นและในสัญญาณทางกายของการถอนมอร์ฟีน Br J Pharmacol DOI: 10.1111/j.1476–5381.2012.01918.x -

31. เรนธัล ดับเบิลยู, เนสท์เลอร์ อีเจ (2008) กลไก Epigenetic ในการติดยา. แนวโน้มการแพทย์ระดับโมเลกุล 14:-341 350 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

32. Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ และคณะ (2011) ผลของ expressFosB overexpression ต่อสัญญาณ opioid และ cannabinoid ที่รับสัญญาณในนิวเคลียส accumbens. Neuropharmacology 61:-1470 1476 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

33. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP และคณะ (2006) บทบาทสำคัญของ ΔFosB ในนิวเคลียสแอคคัมเบนส์ในการออกฤทธิ์ของมอร์ฟีน. Nat Neurosci 9:-205 211 [PubMed]

34. ไฮแมน เอสอี มาเลนก้า อาร์ซี (2001) การเสพติดและสมอง: ระบบประสาทชีววิทยาของการบังคับและความคงอยู่ของมัน. Nat Rev Neurosci 2:-695 703 [PubMed]

35. คู๊บ จีเอฟ (2008) บทบาทของระบบความเครียดของสมองในการติดยาเสพติด. เซลล์ประสาท 59:-11 34 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

36. Deroche-Gamonet V, Sillaber I, Aouizerate B, Izawa R, Jaber M, และคณะ (2003) ตัวรับกลูโคคอร์ติคอยด์เป็นเป้าหมายที่มีศักยภาพในการลดการใช้โคเคนในทางที่ผิด. Neurosci J 23:-4785 4790 [PubMed]

37. เนสท์เลอร์ อีเจ (2001) พื้นฐานระดับโมเลกุลของการติดอยู่กับพลาสติกในระยะยาว. Nat Rev Neurosci 2:-119 128 [PubMed]

38. Laorden ML, Ferenczi S, Pintér-Kübler B, González-Martín LL, Lasheras MC และคณะ (2012) เซลล์ประสาท Orexin-A ในไฮโปทาลามัสมีส่วนเกี่ยวข้องกับการตอบสนองของระบบความเครียดของสมองต่อการถอนมอร์ฟีน. PLoS ONE 7: e36871 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

39. Navarro-Zaragoza J, Núñez C, Ruiz-Medina J, Laorden ML, Valverde O, และคณะ (2011) CRF(2) ทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการเพิ่มกิจกรรมของนอร์เอพิเนฟรินในนิวเคลียสพาราเวนทริคิวลาร์ของไฮโปทาลามัสและภาวะถอนมอร์ฟีนในหนูที่เป็นลบ. Br J Pharmacol 162:-851 862 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

40. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O และคณะ (2004) DFosB: สวิตช์ระดับโมเลกุลสำหรับการปรับตัวในระยะยาวในสมอง. การวิจัยเกี่ยวกับโมเลกุลของสมอง 132:-146 154 [PubMed]

41. เนสท์เลอร์ อีเจ (2008) กลไกการถอดรหัสของการติดยา: บทบาทของ DFosB. Phil Trans R Soc B 363:-3245 3255 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

42. Crespo JA, Manzanares J, Oliva JM, Corchero J, Garcia-Lecumberri C และคณะ (2003) การดับการใช้โคเคนด้วยตนเองทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของยีนคอร์ติโคโทรปินรีลีสแฟกเตอร์ในนิวเคลียสพาราเวนทริคิวลาร์ของไฮโปทาลามัส. การวิจัยเกี่ยวกับโมเลกุลของสมอง 117:-160 167 [PubMed]

43. พ.ต. M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B (2003) อิทธิพลของมอร์ฟีนและโคเคนต่อการสังเคราะห์ CRF ในนิวเคลียสกลางของอะมิกดาลาของหนู. neuropeptides 37:-105 110 [PubMed]

44. นูเญซ ซี, โฟลเดส เอ, ลาออร์เดน เอ็มแอล, มิลาเนส เอ็มวี, โควัคส์ เคเจ (2007) การกระตุ้นการแสดงออกของยีน neuropeptide ในไฮโปทาลามัสที่เกี่ยวข้องกับความเครียดในระหว่างการถอนมอร์ฟีน. J Neurochem 101:-1060 1071 [PubMed]

45. สวานสัน LW, ซิมมอนส์ DM (1989) ฮอร์โมนสเตียรอยด์ที่แตกต่างกันและอิทธิพลของระบบประสาทต่อระดับ mRNA ของเปปไทด์ในเซลล์ CRH ของนิวเคลียสพาราเวนทริคิวลาร์: การศึกษาทางฮิสโตเคมีไดเซชันในหนู. J Comp Neurol 285:-413 435 [PubMed]

46. มากิโนะ เอส, โกลด์ PW, ชูลคิน เจ (1994) ผลของคอร์ติโคสเตอรอยด์ต่อ CRH mRNA และเนื้อหาในนิวเคลียสเบดของสไตรอาเทอร์มินาลิส เปรียบเทียบกับผลกระทบในนิวเคลียสกลางของอะมิกดาลาและนิวเคลียสพาราเวนทริคิวลาร์ของไฮโปทาลามัส. สมอง Res 657:-141 149 [PubMed]

47. มากิโนะ เอส, โกลด์ PW, ชูลคิน เจ (1994) ผลของคอร์ติโคสเตอรอยด์ต่อ mRNA ของฮอร์โมนรีลีซิงคอร์ติโคโทรปินในนิวเคลียสกลางของอะมิกดาลาและบริเวณพาร์โวเซลลูลาร์ของนิวเคลียสพาราเวนทริคิวลาร์ของไฮโปทาลามัส. สมอง Res 640:-105 112 [PubMed]

48. วิเอา วี, โซเรียโน แอล, ดัลแมน เอ็มเอฟ (2001) แอนโดรเจนเปลี่ยนแปลงฮอร์โมนคอร์ติโคโทรปินรีลีซิงและอาร์จินีนวาโซเพรสซิน mRNA ภายในบริเวณสมองส่วนหน้าซึ่งทราบกันว่าควบคุมกิจกรรมในแกนไฮโปทาลามัส-ต่อมใต้สมอง-ต่อมหมวกไต. วารสารประสาทวิทยา 13:-442 452 [PubMed]

49. พัลโควิตส์ เอ็ม, ยัง WS, โควาคส์ เค, โทธ แซด, มาคาร่า จีบี (1998) การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของยีนฮอร์โมนรีลีซิงคอร์ติโคโทรปินในนิวรอนอะมิกดาลอยด์ส่วนกลางหลังจากมีรอยโรคที่พาราเวนทริคิวลาร์ในระยะยาวและการผ่าตัดต่อมหมวกไต. Neuroscience 85:-135 147 [PubMed]

50. สมิธ อาร์เจ แอสตัน-โจนส์ จี (2008) การส่งผ่าน Noradrenergic ใน amygdala ที่ขยายออกไป: บทบาทในการเพิ่มการแสวงหายาเสพติดและการกำเริบของโรคในระหว่างการเลิกยายืดเยื้อ. ฟังก์ชั่นโครงสร้างของสมอง 213:-43 61 [PubMed]

51. ซับบัน เอล, ฮีร์มากาลูร์ บี, นันโควา บี, เคเวตนันสกี้ อาร์ (1995) ชีววิทยาโมเลกุลของการเหนี่ยวนำเอนไซม์สังเคราะห์คาเทโคลามีนที่เกิดจากความเครียด. Ann NY Acad Sci 771:-327 338 [PubMed]

52. Roozendaal B, Okuda S, de Quervain DJF, McGaugh JL (2006) กลูโคคอร์ติคอยด์โต้ตอบกับการกระตุ้นนอร์เอพิเนฟรินที่เกิดจากอารมณ์โดยมีอิทธิพลต่อการทำงานของความจำที่แตกต่างกัน. Neuroscience 138:-901 910 [PubMed]

53. รานี ซีเอสเอส, เอลันโก เอ็น, หวัง เอสเอส, โคบายาชิ เค, สตรอง อาร์ (2009) การระบุลำดับโปรตีนแอคติเวเตอร์-1 คล้ายองค์ประกอบการตอบสนองกลูโคคอร์ติคอยด์ในยีนไทโรซีนไฮดรอกซิเลสของหนู. Mol Pharmacol 75:-589 598 [บทความฟรี PMC] [PubMed]

54. ฮิวจ์ พี. ดรากูโนว์ เอ็ม. (1995) การเหนี่ยวนำยีนทันที-ในระยะเริ่มต้นและการควบคุมการแสดงออกของยีนที่ควบคุมโดยสารสื่อประสาทภายในระบบประสาท. Pharmacol Rev 47:-133 178 [PubMed]

55. โคแวคส์ จีแอล เทเลกดี จี (1988) เปปไทด์ประสาทไฮโปทาลามัส-นิวโรไฮโปไฟซีลและการติดยาในเชิงทดลอง. Brain Res Bull 20:-893 895 [PubMed]

56. โควาคส์ เคเจ, โฟลเดส เอ, ซอว์เชนโก้ พีอี (2000) การตอบรับเชิงลบของกลูโคคอร์ติคอยด์กำหนดเป้าหมายการถอดรหัสวาโซเพรสซินอย่างเฉพาะเจาะจงในเซลล์ประสาทที่หลั่งสารในเซลล์เดียว. Neurosci J 20:-3843 3852 [PubMed]

57. เฟรนัวส์ เอฟ, คาดอร์ เอ็ม, ไคล์ เอส, สตินัส แอล, เลอ มอยน์ ซี (2002) ความสัมพันธ์ทางประสาทขององค์ประกอบแรงจูงใจและทางร่างกายของการถอนมอร์ฟีนที่เกิดจากการได้รับนาลอกโซน. Eur J Neurosci 16:-1377 1389 [PubMed]

58. โกลด์ LH, Stinus L, Inturrisi CE, Koob GF (1994) การทนต่อยา การพึ่งพา และการงดใช้ยาเป็นเวลานานหลังจากการฝังเม็ดมอร์ฟีนใต้ผิวหนังในหนู. Eur J Pharmacol 253:-45 51 [PubMed]

59. Paxinos G. และ Watson C (2007) สมองหนูในพิกัดสเตอริโอแท็กซิก อัมสเตอร์ดัม: Academic Press

60. Perrotti LI, ผู้ประกอบ RR, Robison B, Renthal W, เขาวงกต I และคณะ (2008) รูปแบบที่แตกต่างกันของการเหนี่ยวนำ FosB ในสมองจากยาเสพติด. ไซแนปส์ 62:-358 369 [บทความฟรี PMC] [PubMed]