ความคิดเห็น: แม้ว่าความเครียดทั้งสอง, ยาเสพติดในทางที่ผิดและผลตอบแทนตามธรรมชาติบางอย่างจะกระตุ้นการสะสมของ DeltaFosB แต่ความเครียดจะกระตุ้นให้เซลล์ดาวน์สตรีมที่แตกต่างกันและตัวรับและยีนที่แตกต่างกันในภายหลัง กล่าวอีกนัยหนึ่งการเสพติดและการต่อต้านความเครียดนั้นขึ้นอยู่กับกลไกที่แตกต่างกันโดยพื้นฐาน
J Neurosci 2010 ตุลาคม 27; 30 (43): 14585-92
Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ
แหล่ง
Fishberg ภาควิชาประสาทวิทยาโรงเรียนแพทย์ Mount Sinai, นิวยอร์ก, นิวยอร์ก 10029, สหรัฐอเมริกา
นามธรรม
กลไกระดับโมเลกุลที่เกี่ยวกับการปรับตัวของเซลล์ประสาทที่เกิดจากความเครียดและการใช้ยาทำให้เกิดความเข้าใจที่ไม่สมบูรณ์ หนึ่งโมเลกุลที่เกี่ยวข้องในการปรับตัวนี้คือΔFosBซึ่งเป็นปัจจัยการถอดรหัสที่สะสมอยู่ในนิวเคลียสของหนูหนู (NAc) ซึ่งเป็นภูมิภาคที่ให้รางวัลแก่สมองสำคัญในการตอบสนองต่อความเครียดเรื้อรังหรือการสัมผัสกับยาเสพติดซ้ำ Tกลไกการถอดรหัสต้นน้ำควบคุมการเหนี่ยวนำΔFosBโดยสิ่งเร้าด้านสิ่งแวดล้อมเหล่านี้ยังคงเข้าใจยาก ที่นี่เราระบุปัจจัยการถอดความกิจกรรมขึ้นอยู่กับปัจจัยการตอบสนองในซีรั่ม (SRF) เป็นสื่อกลางต้นน้ำใหม่ของความเครียด - แต่ไม่ใช่โคเคน- เหนี่ยวนำให้เกิดΔFosB SRF ถูกลดระดับลงใน NAc ทั้งในผู้ป่วยที่เป็นโรคซึมเศร้าและในหนูที่สัมผัสกับความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคม การลดลงของ SRF นี้ไม่ได้เกิดขึ้นในสัตว์ที่มีความยืดหยุ่น จากการใช้การกลายพันธุ์ที่ไม่สามารถเหนี่ยวนำได้เราแสดงให้เห็นว่าการเหนี่ยวนำโดยอาศัยความเครียดของΔFosBซึ่งเกิดขึ้นส่วนใหญ่ในหนูที่มีความยืดหยุ่นขึ้นอยู่กับการแสดงออกของ SRF ในพื้นที่สมองนี้. นอกจากนี้การลบทางพันธุกรรมโดยเฉพาะ NAc ของ SRF ยังส่งเสริมฟีโนไทป์ที่มีลักษณะเหมือน prodepressant- และความวิตกกังวลเช่นเดียวกับความวิตกกังวลและทำให้สัตว์มีความไวต่อผลกระทบที่เป็นอันตรายจากความเครียดเรื้อรัง ในทางตรงกันข้ามเราแสดงให้เห็นว่า SRF ไม่ได้มีบทบาทในการสะสมΔFosBใน NAc เพื่อตอบสนองต่อการสัมผัสโคเคนเรื้อรัง นอกจากนี้การทำให้ล้มเหลวโดยเฉพาะ NAc ของ SRF ไม่มีผลต่อพฤติกรรมที่เกิดจากโคเคนซึ่งบ่งชี้ว่าความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังและการสัมผัสโคเคนซ้ำ ๆ นั้นควบคุมการสะสมΔFosBและความไวต่อพฤติกรรมผ่านกลไกอิสระ
บทนำ
นิวเคลียส accumbens (NAc) ซึ่งเป็นภูมิภาคสำคัญสำหรับการให้รางวัลแก่สมองเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการบูรณาการข้อมูลการรับรู้และการรับรู้ที่ขับเคลื่อนพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับแรงจูงใจในการตอบสนองต่อสิ่งเร้าทางสิ่งแวดล้อม (Nestler and Carlezon, 2006; Sesack and Grace, 2010) NAc ยังมีส่วนเกี่ยวข้องกับความผิดปกติทางพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการติดยาและภาวะซึมเศร้า ดังนั้นการกำหนดเป้าหมายของ NAc ด้วยการกระตุ้นสมองส่วนลึกได้แสดงให้เห็นว่าเพื่อบรรเทาอาการซึมเศร้า - และพฤติกรรมคล้ายการเสพติดในมนุษย์และหนู (Schlaepfer et al., 2008; Vassoler et al., 2008; Heinze et al., 2009; Kuhn et อัล, 2009)
การสัมผัสซ้ำกับยาเสพติดของการละเมิดหรือความเครียดทำให้เกิดรูปแบบการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีนใน NAc, อาจเป็นพื้นฐานของการติดและภาวะซึมเศร้าเรื้อรัง (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Maze et al., 2010; Vialou et al ., 2010) สิ่งที่น่าสนใจคือปัจจัยการถอดความΔFosBซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ประกบของยีน fosB สะสมใน NAc เพื่อตอบสนองต่อการใช้ยาหรือการสัมผัสกับความเครียดซ้ำ ๆ (Nestler, 2008; Perrotti et al., 2008; Vialou et al., 2010) ΔFosBได้รับการเสนอให้เป็นสวิตช์ระดับโมเลกุลที่เป็นแนวทางในการเปลี่ยนจากการใช้ยาเพื่อการพักผ่อนไปสู่สถานะที่ติดเรื้อรัง (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Renthal et al., 2009) เนื่องจากการสะสมใน NAc การให้รางวัลการตอบสนองต่อยาเสพติดหลายประเภท อีกไม่นานบทบาทของการเหนี่ยวนำΔFosBใน NAc ตามความเครียดความพ่ายแพ้ทางสังคม (Nikulina et al., 2008; Vialou et al., 2010) ได้รับการอธิบาย: ΔFosBส่งเสริมการเผชิญความเครียดที่กระตุ้นและเพิ่มความยืดหยุ่น. แม้ว่าการเหนี่ยวนำΔFosBจะเกิดขึ้นในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับการกระตุ้น แต่กลไกที่รับผิดชอบในการสะสมของยาและความเครียดที่เกิดจาก NAFosB ใน NAc ยังคงไม่ทราบ
ปัจจัยการตอบสนองของซีรั่ม (SRF) เป็นปัจจัยการถอดความที่จำเป็นสำหรับการกระตุ้นการถอดเสียงที่ขึ้นกับกิจกรรมของยีนในระยะเริ่มต้นหลาย ๆ ตัว ได้แก่ c-fos, fosb, Egr1 และ Arc (Knöll and Nordheim, 2009) การศึกษาล่าสุดได้แสดงให้เห็นถึงผลกระทบของ SRF ต่อคุณสมบัติทางสัณฐานวิทยาและเซลล์ประสาทของเซลล์ประสาทรวมถึงการควบคุมการทำงานของเซลล์ประสาทและการสร้างวงจรในสมองของผู้ใหญ่ (Knöllและ Nordheim, 2009) การค้นพบนี้กระตุ้นให้เราตรวจสอบว่า SRF ได้รับการควบคุมการทำงานโดยการสัมผัสกับยาเสพติดหรือความเครียดอย่างเรื้อรังตลอดจนผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นจากกฎระเบียบดังกล่าวต่อการเหนี่ยวนำ onFosB ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้
ในที่นี้เราจะอธิบายถึงกลไกใหม่ที่การลดลงของ SRF ใน NAc ส่งเสริมฟีโนไทป์ที่ก่อให้เกิดการหลั่งและความวิตกกังวลซึ่งในที่สุดก็เพิ่มความเสี่ยงของสัตว์ต่อผลกระทบที่เป็นอันตรายของความเครียดเรื้อรัง. ผลกระทบเหล่านี้เป็นสื่อกลางบางส่วนโดยการสูญเสียการเหนี่ยวนำΔFosBใน NAc ของสัตว์ที่เครียด การลดลงของการแสดงออกของ SRF และ decreasesFosB ในเนื้อเยื่อ NAc หลังการคลอดที่ได้รับจากผู้ป่วยโรคซึมเศร้าสนับสนุนความเกี่ยวข้องของการค้นพบของเรากับภาวะซึมเศร้าของมนุษย์ สิ่งที่น่าสนใจคือกลไกการควบคุมการสะสมΔFosBนี้ดูเหมือนจะเป็นความเครียดโดยเฉพาะ: การได้รับโคเคนแบบเรื้อรังไม่มีผลต่อการแสดงออกของ SRF การลบ SRF จาก NAc ไม่มีผลกระทบต่อการสะสมΔFosBหลังการสัมผัสโคเคนเรื้อรังและการลบ SRF ดังกล่าวไม่มีผลต่อโคเคน - พฤติกรรมที่เกิดขึ้น ความสัมพันธ์ระหว่าง SRF และΔFosBในบริบทของความเครียดอาจแสดงถึงกลไก homeostatic ที่สำคัญที่ควบคุมความไวของแต่ละบุคคลต่อความเครียดเรื้อรัง
วัสดุและวิธีการ
สัตว์
ใช้หนูตัวผู้ C57BL / 6J อายุแปดสัปดาห์ (Jackson Laboratory) ในการทดลองเชิงพฤติกรรมและชีวเคมีทั้งหมด สัตว์ทุกตัวเคยอยู่ในสถานที่เลี้ยงสัตว์อย่างน้อย 1 สัปดาห์ก่อนที่จะทำการทดลองและได้รับการดูแลที่ 23 – 25 ° C บน 12 h รอบแสง / มืด (ไฟจาก 7: 00: 7 PM) ด้วย libitum การเข้าถึงอาหารและน้ำ การทดลองได้ดำเนินการตามแนวทางของสมาคมประสาทวิทยาและคณะกรรมการดูแลและใช้สัตว์ประจำสถาบันที่โรงเรียนแพทย์ Mount Sinai
สำหรับการทดลองโคเคน [Western blotting และปริมาณ chromatin immunoprecipitation (ChIP)] ใช้ 8- ถึง 10- ตัวผู้ C57BL / 6J ตัวผู้อายุหนึ่งสัปดาห์ สัตว์ได้รับการฉีดยาโคเคนหรือโคเคน (20 mg / kg cocaine-HCl; Sigma) เจ็ดครั้งต่อวัน หนูถูกใช้ 24 ชั่วโมงหลังจากการรักษาขั้นสุดท้าย สำหรับการทดลองเชิงพฤติกรรมหนูได้รับการปลูกถ่ายหลังเดี่ยวและได้รับ 10 mg / kg (locomotor sensitization) หรือ 7.5 mg / kg (การตั้งค่าตามที่กำหนด) โคเคน -HCl intraperitoneally ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง
มีการสร้างหนู Srffl / fl ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Ramanan et al., 2005) การทำให้ล้มเหลวโดยเฉพาะของ NAf ของ Srf นั้นทำได้ผ่านการฉีด stereotaxic และการแสดงออกของไวรัส re recombinase (Cre) ที่เกิดจากการผสมกับโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) โดยใช้เวกเตอร์ของ adeno-virus (AAV) ใช้ Cre ที่ไม่ลบตัวเอง AAV-GFP ถูกฉีดแทนที่ AAV-Cre-GFP ในหนู Srffl / fl เป็นตัวควบคุม สังเขปหนูถูกดมยาสลบโดยใช้ส่วนผสมของคีตามีน (10 mg / kg) และไซลาซีน (10 mg / kg) โดยมีค่า stereotaxic ต่อไปนี้ที่ใช้สำหรับการส่งไวรัส: + 1.6 (ด้านหน้า / หลัง), + 1.5 (ด้านข้าง), 4.4 (หลัง / หน้าท้อง) ที่มุม 10 °จากเส้นแบ่ง (เทียบกับ bregma) ไวรัสบริสุทธิ์ที่ได้รับการส่งมอบ 0.5 μlทั้งสองข้างเป็นระยะเวลา 5 นาที (0.1 μl / นาที) ตามด้วย 5 นาทีที่เหลือ หนูได้รับการทดสอบ 2 สัปดาห์หลังการผ่าตัดเมื่อมีการแสดงออกของไวรัสมากที่สุดและบริเวณที่ฉีดไวรัสได้รับการยืนยันสำหรับสัตว์ทุกตัวโดยใช้วิธีการทางเนื้อเยื่อวิทยามาตรฐาน ประสิทธิภาพของการแสดงออกของ Cre Creal-mediated viral ได้รับการตรวจสอบโดย immunohistochemistry และ reverse-transcriptase PCR สำหรับ Srf ดำเนินการกับการเจาะ NAc แบบ microdissected จากสัตว์ที่ได้รับ AAV-Cre-GFP และ AAV-GFP ใน NAc ไวรัส AAV-GFP และ AAV-Cre-GFP ถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Maze et al., 2010)
ขั้นตอนพฤติกรรม
ความเครียดพ่ายแพ้ทางสังคม
หนู C57BL / 6J ต้องเผชิญกับความเครียดจากการพ่ายแพ้ต่อสังคมเป็นเวลาติดต่อกันเป็นวันที่ 10 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010) สั้น ๆ เมาส์แต่ละตัวถูกสัมผัสกับหนูพันธุ์พ่อพันธุ์แม่พันธุ์ CD1 ที่ไม่คุ้นเคยและก้าวร้าวเพื่อ 5 นาทีต่อวัน หลังจากการโต้ตอบโดยตรงกับผู้รุกราน CD1 สัตว์จะถูกวางไว้ในกรงที่อยู่ติดกันในกรงเดียวกันสำหรับ 24 ชั่วโมงถัดไปด้วยการสัมผัสทางประสาทสัมผัส แต่ไม่ใช่การสัมผัสทางกายภาพ สัตว์ควบคุมอยู่ในกรงที่เท่ากัน แต่มีสมาชิกของสายพันธุ์เดียวกัน การทดสอบปฏิสัมพันธ์ทางสังคมได้ดำเนินการ 24 ชั่วโมงหลังจากวันแห่งความพ่ายแพ้
การหลีกเลี่ยงทางสังคมต่อเมาส์ CD1 ชายที่ไม่คุ้นเคยได้รับการประเมินตามโปรโตคอลที่เผยแพร่ (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010) เมาส์ทดลองถูกนำไปใช้ครั้งแรกในทุ่งโล่งที่มีกรงลวดตาข่ายว่างเปล่าเป็นเวลา 2.5 นาที ในช่วงที่สองมีการนำหนูตัวผู้ CD1 ที่ไม่คุ้นเคยเข้าไปในกรงแบบมีสาย วัดเวลาที่ใช้ในโซนปฏิสัมพันธ์ (ทางเดินกว้าง 8 ซม. รอบกรง) การแยกหนูที่แพ้ออกเป็นประชากรย่อยที่อ่อนแอและยืดหยุ่นได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010) เนื่องจากหนูควบคุมส่วนใหญ่ใช้เวลาในการโต้ตอบกับเป้าหมายทางสังคมมากกว่าการใช้กล่องหุ้มเป้าหมายที่ว่างเปล่าจึงมีการตั้งค่าอัตราส่วนการโต้ตอบ 100 (เวลาที่ใช้ในโซนปฏิสัมพันธ์ต่อหน้าเมื่อเทียบกับการไม่มีเป้าหมายทางสังคม) เป็นจุดตัด หนูที่มีคะแนนน้อยกว่า 100 ถูกระบุว่าอ่อนแอและหนูที่มีคะแนน≥100ถูกระบุว่ามีความยืดหยุ่น การวิเคราะห์เชิงพฤติกรรมชีวเคมีและอิเล็กโตรฟิสิโอโลยีที่กว้างขวางสนับสนุนความถูกต้องของประชากรย่อยที่อ่อนแอและยืดหยุ่นได้ที่แตกต่างกัน (Krishnan et al., 2007; Wilkinson et al., 2009; Vialou et al., 2010)
เพื่อตรวจสอบช่องโหว่ของหนู Srffl / fl เพื่อความเครียดการพ่ายแพ้ทางสังคม, หนู, ฉีดทั้งสองข้างด้วย AAV-GFP หรือ AAV-Cre-GFP, ได้รับการพ่ายแพ้ consecutives สามในวันเดียวกันและทดสอบการปฏิสัมพันธ์ทางสังคมในภายหลัง 24 ชั่วโมง ขั้นตอนการพ่ายแพ้ submaximal นี้ได้รับการตรวจสอบก่อนหน้านี้เพื่อเปิดเผยฟีโนไทป์ของการชักนำให้เกิด prosusceptibility หลังจากการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม
เรียนรู้การทำอะไรไม่ถูก
หนู Srffl / fl การแสดงผลมากเกินไปทั้ง AAV-GFP หรือ AAV-Cre-GFP นั้นต้องได้รับการช่วยเหลือด้วยวิธีการเรียนรู้ที่ทำอะไรไม่ถูกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Berton et al., 2007) ในเวลาสั้น ๆ หนูได้สัมผัสกับการกระแทกที่เท้าเป็นระยะ ๆ ซึ่งหลีกเลี่ยงไม่ได้สำหรับ 1 h ในช่วง 2 consecutives วัน (0.45 mA, ระยะเวลา 5) ในวันทดสอบหนูจะได้รับการแนะนำให้เข้าสู่กล่องสำหรับการทดลองหลบหนีอย่างต่อเนื่องของ 15 ในระหว่างการทดลองแต่ละครั้งจะมีการกระแทกอย่างต่อเนื่องและหนูได้รับโอกาสที่จะหลบหนีโดยการเข้าไปในห้องข้างๆ หลังจากการหลบหนีสำเร็จประตูจะถูกปิดโดยอัตโนมัติและบันทึกเวลาในการหลบหนี เมื่อหนูไม่ได้หลบหนีภายใน 25 s การทดลองก็จะสิ้นสุดลงและถูกบันทึกว่าเป็นความล้มเหลว การศึกษาก่อนหน้าแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของไวรัสใน NAc และภูมิภาคอื่น ๆ ไม่มีผลกระทบต่อพฤติกรรมการหลบหนีพื้นฐานในกรณีที่ไม่มีความเครียด (Newton et al., 2002; Berton et al., 2007)
การทำให้แพ้จากหัวรถจักร
สองสัปดาห์หลังจากการฉีดยา AAV-GFP หรือ AAV-Cre-GFP หนู Srffl / fl จะได้รับความไวต่อการกระตุ้นภายใน หนูเคยอยู่ที่ลานหัวรถจักรเป็นเวลา 30 นาทีต่อวันเป็นเวลา 4 วัน หลังจากความเคยชินสัตว์ได้รับการฉีดโคเคน -HCl 10 มก. / กก. และใส่ลงในกล่องขมิ้น กิจกรรมของหัวรถจักรของสัตว์ได้รับการบันทึกโดยใช้ระบบ photobeam (San Diego Instruments) เนื่องจากลำแสงของผู้ป่วยจะแตกเป็นเวลา 30 นาทีต่อวัน Locomotor sensitization ถูกบันทึกไว้ในช่วง 6 d
การตั้งค่าสถานที่ที่มีเงื่อนไข
ขั้นตอนการปรับสภาพสถานที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Maze et al., 2010) โดยมีการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ ในเวลาสั้น ๆ 18 วันหลังจากการฉีดยาภายใน NAc ของ AAV-GFP หรือ AAV-Cre-GFP ในหนู Srffl / fl สัตว์ต่างๆถูกวางไว้ในห้องปรับอากาศซึ่งประกอบด้วยสภาพแวดล้อมที่แตกต่างกันสามบริบท หนูที่แสดงความชอบอย่างมีนัยสำคัญสำหรับห้องปรับอากาศทั้งสองห้องถูกแยกออกจากการศึกษา (<10% ของสัตว์ทั้งหมด) กลุ่มการปรับสภาพได้รับการปรับสมดุลเพิ่มเติมเพื่อปรับให้เหมาะกับอคติในห้องที่ยังคงมีอยู่ ในวันต่อมาสัตว์ได้รับการฉีดน้ำเกลือและกักขังไว้ในห้องหนึ่งในช่วงบ่ายเป็นเวลา 30 นาทีจากนั้นฉีดโคเคน (7.5 มก. / กก., ไอพี) และกักขังไว้ในห้องอื่น 30 นาทีในวันรุ่งขึ้นเท่ากับจำนวนทั้งหมด การฝึกความสัมพันธ์สองรอบต่อการรักษา (การจับคู่น้ำเกลือสองครั้งและโคเคนสองครั้ง) ในวันที่ทำการทดสอบหนูถูกวางกลับเข้าไปในเครื่องมือโดยไม่ได้รับการรักษาเป็นเวลา 20 นาทีและทดสอบเพื่อประเมินความพึงพอใจด้านข้าง การตอบสนองของ Locomotor ต่อโคเคนได้รับการประเมินผ่านการแบ่งลำแสงในห้องที่จับคู่โคเคนเพื่อให้แน่ใจว่ามีประสิทธิผลของการรักษาด้วยยา สำหรับทุกกลุ่มการเคลื่อนไหวพื้นฐานในการตอบสนองต่อน้ำเกลือได้รับการประเมินเพื่อให้แน่ใจว่าการเคลื่อนไหวไม่ได้รับผลกระทบจากการรักษาด้วยไวรัส
การทดสอบพฤติกรรมอื่น ๆ
หนู Srffl / fl ถูกทดสอบในการทดสอบในทุ่งโล่งแสง / มืดและการบังคับว่ายน้ำโดยใช้โปรโตคอลที่เผยแพร่ (Vialou et al., 2010) กิจกรรมของหนูในเขตโล่งถูกบันทึกเป็นเวลา 5 ขั้นต่ำโดยใช้ระบบติดตามวิดีโอ (Ethovision) ภายใต้สภาพแสงสีแดง สำหรับการทดสอบแสง / ความมืดหนูได้รับอนุญาตให้สำรวจกล่องสองห้องอย่างอิสระซึ่งประกอบด้วยเวทีส่องสว่างขนาดใหญ่หนึ่งช่องที่เชื่อมต่อกับเวทีปิดขนาดเล็ก หนูถูกทดสอบเป็นระยะเวลา 5 ขั้นต่ำเพื่อประเมินจำนวนเวลาที่ใช้ในตู้ทั้งสอง ในการทดสอบแบบเปิดและแสง / มืดเวลาที่ใช้ในศูนย์และเวทีแสงตามลำดับถูกประเมินเป็นดัชนีผกผันของการตอบสนองที่เกี่ยวข้องกับความวิตกกังวล การทดสอบบังคับว่ายน้ำ 1 d ดำเนินการเป็นระยะเวลา 5 ขั้นต่ำ เวลาที่เพิ่มขึ้นของความไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ในระหว่างการทดสอบว่ายน้ำแบบบังคับนั้นถูกตีความว่าเป็นพฤติกรรมที่เหมือนผู้ถูกกดขี่ การทดสอบบังคับว่ายน้ำของ 1 d ได้ถูกนำมาใช้อย่างกว้างขวางในหนูและได้รับการรับรองว่าเป็นการวัดความถูกต้องเชิงทำนายในการรักษาด้วยยากล่อมประสาทนั้นช่วยลดเวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนไหวได้
immunohistochemistry
หนู Srffl / fl ได้รับการดมยาสลบและกระจายอยู่ในช่องท้องด้วย 4% paraformaldehyde / PBS สมองถูกกำจัดและแช่แข็งใน 30% sucrose / PBS ส่วนโคโรนา (30 μm) ถูกตัดบน microtome แช่แข็งและประมวลผลสำหรับการวิเคราะห์อิมมูโน การตรวจสอบความถูกต้องของ Srffl / fl knock-out ได้ดำเนินการโดยใช้ polyclonal antibody ที่ควบคุม SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology) การแสดงออกของ Cre ได้รับการยืนยันผ่านการแสดงออกของ GFP (ไก่ polyclonal, 1 / 8000, Aves Labs) ในสมองที่ชำแหละเนื่องจาก Cre ถูกหลอมรวมกับ GFP สำหรับปริมาณของการเหนี่ยวนำΔFosBหลังจากความเครียดการพ่ายแพ้ทางสังคมในหนู Srffl / fl knock-out, outFosB ถูกตรวจพบโดยใช้แอนติบอดี polyclonal กระต่ายยกขึ้นกับพื้นที่ N-terminal ของโปรตีน (1 / 1000; Santa Cruz เทคโนโลยีชีวภาพ) ภาพถูกถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์ confocal (กำลังขยาย 20 ×; Zeiss) จำนวนเซลล์ภูมิคุ้มกัน GFP - นับเป็นลบและบวกสำหรับ immunFosB immunoreactivity เป็นปริมาณในภาพหลายภาพสำหรับสัตว์แต่ละตัวด้วยค่าเฉลี่ยคำนวณต่อมาสำหรับสัตว์แต่ละตัว สัตว์แต่ละตัวได้รับการพิจารณาเป็นรายบุคคลสำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ
เนื้อเยื่อหลังตายของมนุษย์
เนื้อเยื่อสมองหลังคลอดของมนุษย์ได้มาจาก Dallas Brain Collection ซึ่งรวบรวมเนื้อเยื่อจากสำนักงานผู้ตรวจการแพทย์ของดัลลัสและโครงการปลูกถ่ายเนื้อเยื่อของมหาวิทยาลัยเท็กซัส (UT) ทางตะวันตกเฉียงใต้หลังจากได้รับความยินยอมจากญาติคนต่อไป วิเคราะห์เนื้อเยื่อจากทั้งชายและหญิงที่ตรงตามอายุช่วงเวลาหลังคลอดจำนวนความสมบูรณ์ของอาร์เอ็นเอ (RIN) และ pH ปัจจัยทางพันธุกรรมที่เฉพาะเจาะจง ได้แก่ โคม่าภาวะขาดออกซิเจนไพเร็กเซียอาการชักการขาดน้ำภาวะน้ำตาลในเลือดต่ำความล้มเหลวของอวัยวะหลายส่วนและการกินสารพิษต่อระบบประสาทในช่วงเวลาที่เสียชีวิตมีผลต่อความสมบูรณ์ของ RNA ในเนื้อเยื่อสมองหลังคลอด (Tomita et al., 2004) เราใช้สเกลปัจจัยอโกนัล (AFS) เพื่อกำหนดลักษณะตัวอย่างเนื้อเยื่อในแต่ละเงื่อนไขทั้งแปดนี้ การขาดปัจจัยทางอโกนาลได้รับการกำหนดคะแนนเป็น 0 และการมีอยู่ได้รับคะแนนเป็น 1 เพื่อให้คะแนน AFS รวมระหว่าง 0 ถึง 8 เนื้อเยื่อที่มีคะแนน agonal 0 หรือ 1 แสดงถึงตัวอย่างที่มีคุณภาพดี ข้อมูลประชากรของกรณีแสดงไว้ในตารางที่ 1 คุณภาพของเนื้อเยื่อที่โดดเด่นได้รับการยืนยันโดยค่า RIN ที่สูง เคสต้องผ่านการผ่ามาตรฐานก่อนที่จะแช่แข็งในไอโซเพนเทน −40 ° C และเก็บที่ −80 ° C; การผ่า NAc เพิ่มเติมจะดำเนินการในเนื้อเยื่อแช่แข็ง คณะกรรมการตรวจสอบสถาบัน UT Southwestern ได้ตรวจสอบและอนุมัติการรวบรวมเนื้อเยื่อนี้เพื่อใช้ในการวิจัย มีการสัมภาษณ์ผู้ให้ข้อมูลโดยตรงสำหรับผู้ป่วยโรคซึมเศร้าแต่ละรายในภายหลังซึ่งมีการบันทึกข้อมูลเกี่ยวกับความเจ็บป่วยของผู้ป่วย การวินิจฉัยที่เป็นเอกฉันท์ของโรคซึมเศร้าที่สำคัญทำโดยใช้เกณฑ์ DSM-IV โดยจิตแพทย์วิจัยสองคน ไม่มีกรณีใดที่รวมอยู่ในการศึกษานี้มีหน้าจอพิษวิทยาในเลือดที่เป็นบวกสำหรับยาเสพติดแอลกอฮอล์หรือยาที่ต้องสั่งโดยแพทย์นอกเหนือจากยาซึมเศร้า แม้จะมีการรักษาด้วยยากล่อมประสาท แต่ทุกคนก็รู้สึกหดหู่ทางคลินิกในขณะที่เสียชีวิต ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกจ่ายแบบตาบอดเพื่อการวิเคราะห์
1 ตาราง
ข้อมูลทางประชากรศาสตร์สำหรับการศึกษาหลังการตายของมนุษย์
ซับแบบตะวันตก
ตัวอย่างของมนุษย์และหนูถูกประมวลผลตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Maze et al., 2010) เนื้อเยื่อแช่แข็งถูกส่งเสียงในบัฟเฟอร์ lysis 5 mM HEPES ที่มี 1% SDS ที่มีโปรตีเอส (Roche) และสารยับยั้ง phosphatase (ซิกมา) ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดโดย Dc protein assay (Bio-Rad) ตัวอย่างโปรตีนที่เท่ากันนั้นมีค่าเท่ากับ SDS-PAGE และ Western blotting ตรวจสอบว่ามีการใช้ Western blots โดยใช้ antibody ต่อ SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology) หรือ GAPDH (1 / 1500; Abcam) จากนั้นทำการสแกนและหาปริมาณด้วยระบบ Odyssey (Licor)
การแยก RNA และ PCR เชิงปริมาณ
การแยก RNA, PCR เชิงปริมาณ (qPCR) และการวิเคราะห์ข้อมูลได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Maze et al., 2010; Vialou et al., 2010) สั้น ๆ RNA ถูกแยกได้ด้วย TriZol reagent (Invitrogen) และถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วย RNAeasy micro kit จาก Qiagen ตัวอย่าง RNA ทั้งหมดถูกกำหนดให้มีค่า 260 / 280 และ 260 / 230 ≥1.8 การถอดรหัสแบบย้อนกลับดำเนินการโดยใช้ iScript (Bio-Rad) qPCR ที่ใช้ SYBR สีเขียว (Quanta) ถูกดำเนินการด้วย Applied Biosystems ระบบ PC 7900HT RT พร้อมพารามิเตอร์รอบต่อไปนี้: 2 นาทีที่ 95 ° C; รอบ 40 ของ 95 ° C สำหรับ 15 s, 59 ° C สำหรับ 30 s, 72 ° C สำหรับ 33 s; และให้ความร้อนอย่างช้าๆกับ 95 ° C เพื่อสร้างเส้นโค้งการแยกส่วนเพื่อยืนยันผลิตภัณฑ์ PCR เดี่ยว วิเคราะห์ข้อมูลโดยการเปรียบเทียบค่า C (t) ของสภาพการรักษา (การควบคุม vs ความไวต่อการสัมผัสหรือความยืดหยุ่นของหนูหรือการควบคุมของมนุษย์กับผู้ป่วยซึมเศร้า) กับวิธีΔΔC (t) (Tsankova et al., 2006) primFosB qPCR primers: foward, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT และย้อนกลับ, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG
ชิป
ChIP ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Maze et al., 2010) สำหรับการเจาะ NAc แบบทวิภาคีที่รวมกลุ่มจากการควบคุม, ไวต่อแสงและหนูที่ยืดหยุ่น (สี่ 14 - เกจ / เม้าส์) 1 h หลังจากประสบความพ่ายแพ้ครั้งสุดท้าย สัตว์ที่ผ่านการบำบัด 24 ชั่วโมงหลังจากการรักษาขั้นสุดท้าย เนื้อเยื่อถูกเชื่อมโยงข้ามในฟอร์มัลดีไฮด์ 1% การตรึงภายหลังถูกขัดจังหวะผ่านการประยุกต์ใช้ glycine และเนื้อเยื่อถูกล้างและเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าการใช้งาน โครมาตินที่ถูกเฉือนถูกบ่มในชั่วข้ามคืนด้วยแอนติบอดีต่อต้าน SRF (เทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ) ก่อนหน้านี้ถูกผูกไว้กับลูกปัดแม่เหล็ก (Dynabeads M-280; Invitrogen) หลังจากการข้ามการเชื่อมโยงย้อนกลับและการทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์การเชื่อมโยงของ SRF กับโปรโมเตอร์ fosb ถูกกำหนดโดย qPCR โดยใช้ไพรเมอร์ซึ่งประกอบไปด้วยพื้นที่ของโปรโมเตอร์ fosb ที่มีไซต์ที่มีการเชื่อมโยงองค์ประกอบการตอบสนองสองรายการ pulldowns ของ SRF ได้รับการตกแต่งอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมแบบไม่มีแอนติบอดี ไพรเมอร์โปรโมเตอร์ของเมาส์ fosb: ไปข้างหน้า, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG และย้อนกลับ, ACCTCCCAAACTCTCCCTCTC
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ANOVA ทางเดียวถูกนำมาใช้เพื่อเปรียบเทียบวิธีการระหว่างหนูควบคุมหนูที่อ่อนแอและยืดหยุ่นได้ในการวิเคราะห์ทางชีวเคมีและพฤติกรรม ความแปรปรวนสองทางถูกใช้เพื่อเปรียบเทียบการเหนี่ยวนำΔFosBโดยความพ่ายแพ้ทางสังคมในหนูที่น็อคเอาต์ในพื้นที่ Srf รวมทั้งเปรียบเทียบผลของ Srf น็อคเอาต์ในการเรียนรู้ที่ทำอะไรไม่ถูกและโพรโทคอลการกระตุ้นความไวของขมิ้นอ้อย การทดสอบ t ของนักเรียนใช้เพื่อเปรียบเทียบวิธีการในผลของ Srf knock-out ต่อการเหนี่ยวนำΔFosBและระหว่างกลุ่มต่างๆในเนื้อเยื่อหลังการคลอดของมนุษย์และการวิเคราะห์ ChIP ของเมาส์ ความแตกต่างระหว่างเงื่อนไขการทดลองถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อ p ≤ 0.05
ผลสอบ
การแสดงออกของ SRF และΔFosBในภาวะซึมเศร้าของมนุษย์และหนูที่แพ้ทางสังคม
ในการสำรวจบทบาทที่เป็นไปได้สำหรับ SRF ในการพัฒนาพฤติกรรมที่คล้ายกับโรคซึมเศร้าเราได้ประเมินการแสดงออกของโปรตีน SRF ใน NAc ของผู้ป่วยที่เป็นมนุษย์หลังคลอด อาสาสมัครที่มีภาวะซึมเศร้าแสดงระดับ SRF ใน NAc ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการควบคุมตามอายุ (t (19) = 1.9; p <0.05) (รูปที่ 1A) จากบทบาทของ SRF ในการควบคุมการแสดงออกของยีนในระยะเริ่มต้นที่ขึ้นอยู่กับกิจกรรม (Ramanan et al., 2005) เราจึงตั้งสมมติฐานว่า SRF อาจเกี่ยวข้องกับการควบคุมการแสดงออกของΔFosBในบริเวณสมองนี้ เพื่อสนับสนุนสมมติฐานนี้เราสังเกตว่าระดับ mfosb mRNA ลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน NAc ของมนุษย์ที่ซึมเศร้า (t (16) = 1.8; p <0.05) (รูปที่ 1B) สิ่งนี้สอดคล้องกับการค้นพบล่าสุดของระดับโปรตีนΔFosBที่ลดลงภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้เช่นกัน (Vialou et al., 2010)
รูป 1
การบีบอัดที่เกิดจากความเครียดเรื้อรังของ SRF มีความสัมพันธ์กับการถอดความΔFosBใน NAc ที่ลดลง A, B, ผู้ป่วยโรคซึมเศร้าหลังคลอดแสดงระดับโปรตีน SRF ลดลง (n = 10 / กลุ่ม; A) และการแสดงออกของΔfosb mRNA ใน NAc (n = 8 / กลุ่ม; B) C, หนูที่ได้รับความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรัง (10 d) ถูกจัดกลุ่มเป็นประชากรย่อยที่อ่อนแอและยืดหยุ่นได้ D ความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังช่วยลดระดับโปรตีน SRF ใน NAc ของหนูที่อ่อนแอ แต่ไม่สามารถต้านทานได้เมื่อเทียบกับการควบคุม 24 ชั่วโมงหลังการทดสอบปฏิสัมพันธ์ทางสังคมที่แสดงใน C. E ระดับ RfosB mRNA ใน NAc จะไม่เปลี่ยนแปลงในหนูที่อ่อนแอ แต่มีนัยสำคัญ ถูกควบคุมในสัตว์ที่มีความยืดหยุ่น (n = 7–15 / กลุ่ม) F, SRF แสดงว่าโปรตีนมีผลผูกพันกับตัวส่งเสริมยีน fosb เพิ่มขึ้นหลังจากความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังเฉพาะในหนูที่มีความยืดหยุ่นและไม่ไวต่อหนู (n = 5 / กลุ่ม) ข้อมูลที่แสดงจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM (แสดงเป็นแถบข้อผิดพลาด) Con., การควบคุม; Dep., หดหู่; ส., อ่อนไหว; Res., ยืดหยุ่น * p <0.05 เทียบกับการควบคุม; *** p <0.001 เทียบกับการควบคุม; #p <0.05 เทียบกับอ่อนแอ; ## p <0.01 เทียบกับอ่อนแอ; ### p <0.001 เทียบกับอ่อนแอ
เพื่อขยายผลการค้นพบนี้เราใช้โปรโตคอลความเครียดในการเอาชนะสังคมเรื้อรังในหนู เห็นได้ชัดว่ามีกลุ่มหนูที่พ่ายแพ้ 2007 กลุ่มซึ่งอ่อนไหวและยืดหยุ่นได้ (Krishnan et al., 2,23) จากการวัดการหลีกเลี่ยงทางสังคมซึ่งสัตว์ที่อ่อนแอมีปฏิสัมพันธ์ทางสังคมลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับทั้งสัตว์ควบคุมและสัตว์ที่มีความยืดหยุ่น (F (157.2, 0.001) = 0.001; p <0.05; t ทดสอบด้วยการแก้ไข Bonferroni, อ่อนแอเทียบกับการควบคุม, p <0.01; ความยืดหยุ่นเทียบกับการควบคุม, p <1; ความยืดหยุ่นและความอ่อนไหว, p <2,32) (รูปที่ 4.7C) สองวันหลังจากการพ่ายแพ้ครั้งสุดท้ายหนูควบคุมที่อ่อนแอยืดหยุ่นและไม่พ่ายแพ้ได้รับการวิเคราะห์สำหรับการแสดงออกของ SRF ใน NAc เช่นเดียวกับการค้นพบในภาวะซึมเศร้าของมนุษย์ระดับโปรตีน SRF ลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน NAc ของหนูที่อ่อนแอเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมในขณะที่ระดับ SRF ไม่ได้รับผลกระทบใน NAc ของหนูที่มีความยืดหยุ่น (F (0.05) = 0.05; p <0.05; t ทดสอบด้วย a การแก้ไข Bonferroni, อ่อนแอเทียบกับการควบคุม, p <1; ยืดหยุ่นและอ่อนแอ, p <XNUMX) (รูปที่ XNUMXD)
จากนั้นเราตรวจสอบการแสดงออกของΔfosb mRNA ใน NAc ของสัตว์ทั้งสามกลุ่มนี้และพบว่าการแสดงออกของΔfosbเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในสัตว์ที่มีความยืดหยุ่นเท่านั้นโดยมีแนวโน้ม แต่ไม่พบการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่อ่อนแอ (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (รูปที่ 1E) เพื่อตรวจสอบปฏิสัมพันธ์ที่เป็นไปได้ระหว่างระดับ SRF และการถอดความΔfosbเพิ่มเติมเราใช้ ChIP เพื่อตรวจสอบว่า SRF ที่มีผลผูกพันกับตัวส่งเสริมยีน fosb ได้รับการเปลี่ยนแปลงหรือไม่หลังจากความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังในหนูที่อ่อนแอและยืดหยุ่นได้ สัตว์ที่มีความยืดหยุ่นแสดงการจับ SRF ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญกับตัวส่งเสริม fosb ใน NAc เมื่อเทียบกับการควบคุม (t (8) = 2.1; p <0.05) รวมทั้งเมื่อเทียบกับหนูที่อ่อนแอ (t (8) = 2.0; p <0.05) ไม่พบความแตกต่างระหว่างการควบคุมและหนูที่อ่อนแอซึ่งอาจสะท้อนถึงการขาดการเหนี่ยวนำ SRF ในหนูที่อ่อนแอ (รูปที่ 1F)
เพื่อยืนยันบทบาทของ SRF ในการควบคุมΔFosBหลังจากความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังหนู Srffl / fl ถูกใช้เพื่อตรวจสอบผลของการลบ SRF แบบเลือกจาก NAc ต่อการเหนี่ยวนำความเครียดของΔFosB หนู Srffl / fl ถูกฉีดเข้าไปใน NAc แบบ stereotaxically ด้วยเวกเตอร์ AAV ที่แสดง GFP หรือ Cre-GFP การเคาะออกเฉพาะของ NAc ของ SRF ที่เกิดจาก AAV-Cre-GFP ได้รับการยืนยันว่าไม่มีภูมิคุ้มกันวิทยา (รูปที่ 2A) อันที่จริงไม่มีการทับซ้อนกันระหว่างการย้อมสี SRF และการแสดงออกของ Cre ซึ่งแสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพของการน็อคเอาท์ ในการเจาะ NAc แบบ microdissected เราตรวจพบว่าระดับโปรตีน SRF ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ 50% (t (11) = 4.3; p <0.001) ขนาดน่าจะสะท้อนให้เห็นถึงข้อเท็จจริงที่ว่าเศษเสี้ยวของเนื้อเยื่อใน microdissections ดังกล่าวไม่ได้ติดเชื้อทางปาก
รูป 2
SRF เป็นสื่อกลางในการชักนำΔFosBโดยความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรัง A การฉีด AAV-Cre-GFP ลงใน NAc ของหนู Srffl / fl ส่งผลให้โปรตีน SRF หลุดออกไปในเซลล์ประสาท Cre-expressing การฉีด AAV-GFP ไม่มีผลที่สามารถมองเห็นได้ B การเลือกออกจาก SRF จาก NAc จะบล็อกการเหนี่ยวนำของΔFosBใน NAc อย่างสมบูรณ์หลังจากความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรัง (n = 4 / กลุ่ม) ข้อมูลที่แสดงจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM (แสดงเป็นแถบข้อผิดพลาด) * p <0.05 เทียบกับการควบคุม AAV-GFP; ** p <0.01 เทียบกับความพ่ายแพ้ AAV-GFP
ต่อไปเราได้ทำการทดสอบภูมิคุ้มกันเชิงปริมาณสำหรับΔFosBใน NAc ของหนู Srffl / fl ที่ถูกฉีดเข้าไปภายใน NAc ด้วย AAV-Cre-GFP หรือ AAV-GFP หลังจากความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังการแสดงออกของ osFosB เกิดขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน NAc ของสัตว์ที่ฉีด AAV-GFP (ปฏิสัมพันธ์ของไวรัส×การรักษา F (1,12) = 6.4; t การทดสอบด้วยการแก้ไข Bonferroni การควบคุมเทียบกับความพ่ายแพ้ p <0.05; AAV-Cre เทียบกับ AAV-GFP, p <0.01) อย่างไรก็ตามการเหนี่ยวนำนี้ไม่พบในหนู Srffl / fl ที่ได้รับ AAV-Cre-GFP (รูปที่ 2B) ซึ่งแสดงให้เห็นว่าการเหนี่ยวนำΔFosBใน NAc โดยความเครียดเรื้อรังต้องใช้ SRF
SRF ทำให้ล้มลงใน NAc ส่งเสริมฟีโนไทป์เหมือน prodepression- และ proanathy
เนื่องจากก่อนหน้านี้การชักนำΔFosBโดยความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังได้แสดงให้เห็นว่าเป็นสื่อกลางในการยืดหยุ่น (Vialou et al., 2010) เราจึงตั้งสมมติฐานว่าการลดลงของกฎระเบียบของ SRF และการสูญเสียจากการเหนี่ยวนำΔFosBในสัตว์ที่อ่อนแออาจแสดงถึงการปรับตัวเชิงลบซึ่งส่งผลในที่สุด สัตว์เสี่ยงต่อผลกระทบที่เป็นอันตรายจากความเครียด เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้เราได้กระตุ้นให้เกิดการลบยีน Srf เฉพาะของ NAc ในหนู Srffl / fl ที่เป็นผู้ใหญ่ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและหนูที่ได้รับและการควบคุมของพวกมันได้รับการทดสอบด้วยกระบวนทัศน์เชิงพฤติกรรมเพื่อประเมินภาวะซึมเศร้าพื้นฐานและความวิตกกังวล - ชอบพฤติกรรม การลบ NAc ในพื้นที่ของ SRF ช่วยให้เกิดผลกระทบที่คล้ายกับการลดลงของภาวะซึมเศร้าตามที่วัดได้จากการทดสอบบังคับว่ายน้ำ (t (30) = 2.5; p <0.05) เช่นเดียวกับผลกระทบที่เกิดจากความวิตกกังวลที่วัดได้ในสนามเปิด (t (38) = 1.9; p <0.05) และการทดสอบแสง / มืด (t (8) = 1.9; p <0.05) ดังนั้นหนู Srffl / fl ที่ได้รับ AAV-Cre-GFP ใน NAc จึงแสดงเวลาแฝงที่ลดลงในการไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ในการทดสอบบังคับว่ายน้ำใช้เวลาน้อยลงในใจกลางทุ่งโล่งและใช้เวลาน้อยลงในช่องแสงของกล่องแสง / มืด เปรียบเทียบกับสัตว์ที่ฉีด AAV-GFP (รูปที่ 3A – C) อย่างไรก็ตามการลบ SRF ภายใน NAc ไม่ได้เปลี่ยนระดับพื้นฐานของการเคลื่อนที่โดยชี้ให้เห็นว่าผลกระทบทางพฤติกรรมที่สังเกตได้ในสัตว์ที่น็อคเอาท์ SRF ไม่ได้เกิดจากความผิดปกติของการเคลื่อนไหวของหัวรถจักรทั่วไป (รูปที่ 3D) ข้อมูลเหล่านี้น่าสนใจเมื่อพิจารณาจากรายงานก่อนหน้านี้ที่ชี้ให้เห็นว่าแม้ว่าΔFosBใน NAc จะควบคุมพฤติกรรมคล้ายโรคซึมเศร้า แต่ก็ดูเหมือนจะไม่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองที่เกี่ยวข้องกับความวิตกกังวล (Vialou et al., 2010) การค้นพบในปัจจุบันของเราที่ว่าการสูญเสีย SRF ทำให้เกิดการตอบสนองต่อความวิตกกังวลชี้ให้เห็นว่าการทำเช่นนั้นผ่านเป้าหมายอื่นที่ไม่ใช่ΔFosB
รูป 3
SRF knock-out จาก NAc ส่งเสริมฟีโนไทป์ที่คล้าย prodepression และ proanxiety A-C, Selective knock-out ของ SRF จาก NAc ทำได้โดยการฉีด AAV-Cre-GFP ลงใน NAc ของหนู Srffl / fl ลดเวลาแฝงในการไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ในการทดสอบบังคับว่ายน้ำ (n = 14–18 / กลุ่ม; A) และลดเวลาที่ใช้ในศูนย์และเวลาที่ใช้ในช่องแสงในการทดสอบช่องเปิด (B) และแสง / มืด (C) ตามลำดับ (n = 5–15 / กลุ่ม) D, ไม่พบความแตกต่างในกิจกรรมของขมิ้นอ้อยในพื้นที่เปิดโล่งของหนูที่ได้รับการฉีด AAV-GFP หรือ AAV-Cre-GFP ภายใน E, F, เพิ่มความอ่อนไหวต่อการเรียนรู้อะไรไม่ได้ (n = 7–8 / group; E) และความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคม (n = 5–6 / group; F) ตามที่วัดได้ตามลำดับโดยเวลาแฝงในการหลบหนีและเวลาปฏิสัมพันธ์ทางสังคม . ข้อมูลที่แสดงจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM (แสดงเป็นแถบข้อผิดพลาด) * p <0.05 เทียบกับ GFP หรือเทียบกับเป้าหมายที่ไม่มี ** p <0.01 เทียบกับ GFP; *** p <0.001 เทียบกับ GFP
ต่อไปเราจะศึกษาว่าการลบ SRF ใน NAc ยังเพิ่มความเสี่ยงของสัตว์ต่อผลกระทบที่เป็นอันตรายจากความเครียดซ้ำ ๆ หรือไม่ หนู Srffl / fl ที่ฉีด AAV-Cre-GFP หรือ AAV-GFP ลงใน NAc ได้รับการตรวจในแบบจำลองภาวะซึมเศร้าสองแบบเรียนรู้การหมดหนทางและความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรัง ในการเรียนรู้ที่ทำอะไรไม่ถูกสัตว์ Srffl / fl ที่ได้รับ AAV-Cre-GFP แสดงเวลาแฝงที่เพิ่มขึ้นเพื่อหลีกเลี่ยงการกระแทกของเท้าหลังจากสัมผัสกับความเครียดจากการกระแทกที่เท้าอย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ก่อนหน้านี้ (การรักษา×ปฏิสัมพันธ์ระหว่างการทดลอง, F (14,180) = 10.2; t ทดสอบด้วยการแก้ไข Bonferroni, p <0.001; AAV-Cre เทียบกับ AAV-GFP, p <0.01) แสดงถึงความไวที่เพิ่มขึ้นต่อการขาดดุลพฤติกรรมที่เกิดจากความเครียด (รูปที่ 3E) ในทำนองเดียวกันการลบ SRF ในท้องถิ่นจาก NAc ยังเพิ่มความเกลียดชังทางสังคม (t (10) = 1.8; p <0.05) เมื่อเทียบกับสัตว์ควบคุมที่ฉีด AAV-GFP หลังจากความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรัง (รูปที่ 3F) ซึ่งเป็นผลกระทบที่คล้ายกับการปราบปราม
ขาดการมีส่วนร่วมของ SRF ในการชักนำΔFosBและการตอบสนองพฤติกรรมต่อโคเคน
เนื่องจากΔFosBถูกกระตุ้นใน NAc เพื่อตอบสนองต่อยาเสพติดที่ใช้ในทางที่ผิดเช่นโคเคนจึงเป็นที่สนใจที่จะตรวจสอบบทบาทที่เป็นไปได้ของ SRF ในการออกฤทธิ์ของโคเคน ซึ่งแตกต่างจากความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังการได้รับโคเคนซ้ำ ๆ ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการแสดงออกของโปรตีน SRF ใน NAc (t (14) = 0.8; p> 0.05) (รูปที่ 4A) และไม่มีผลต่อ SRF ที่จับกับตัวส่งเสริมยีน fosB ในบริเวณสมองนี้ (t (4) = 0.7; p> 0.05) (รูปที่ 4B) สิ่งนี้ชี้ให้เห็นว่าตรงกันข้ามกับความเครียดการชักนำΔFosBหลังจากโคเคนเรื้อรังไม่ได้รับการไกล่เกลี่ยผ่าน SRF เราทดสอบสิ่งนี้โดยตรงโดยตรวจสอบว่าการสะสมΔFosBหลังจากโคเคนเรื้อรังมีการเปลี่ยนแปลงในสัตว์ Srffl / fl ที่ได้รับ AAV-Cre-GFP เทียบกับ AAV-GFP เป็น NAc หรือไม่ เราพบว่าการลบ SRF ไม่มีผลต่อการสะสมΔFosBที่เกิดจากโคเคนในบริเวณสมองนี้ (รูปที่ 4C)
รูป 4
การสูญเสีย SRF ไม่มีผลต่อการเหนี่ยวนำโคเคนของΔFosBหรือพฤติกรรมควบคุมโคเคน A, B, การสัมผัสโคเคนซ้ำ ๆ (7 d, 20 mg / kg cocaine-HCl) ไม่มีผลต่อการแสดงออกของโปรตีน SRF ใน NAc (A) หรือใน SRF ผูกกับโปรโมเตอร์ยีน fosB ในพื้นที่สมองนี้ (B) 24 ชั่วโมงหลังจาก การได้รับยา (n = 5 / กลุ่ม) การสะสม C, ΔFosBตรวจวัดอิมมูโนไซโตเคมิคอลหลังจากการสัมผัสโคเคนเรื้อรังไม่ได้รับผลกระทบจากการลดลงของ SRF ที่จำเพาะต่อ NAc D, E, การลบท้องถิ่นของ SRF จาก NAc ยังไม่มีผลกระทบต่อกิจกรรมของหัวรถจักรหลังจากการฉีดน้ำเกลือ (d 1) ต่อกิจกรรมการเคลื่อนไหวของโคเคนที่เกิดจากโคเคนและการแพ้ (n = 8 – 1; D) หรือ ตามการตั้งค่าสถานที่ปรับอากาศโคเคน (n = 7 / กลุ่ม; E) ข้อมูลที่แสดงจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM (แสดงเป็นแถบข้อผิดพลาด)
เพื่อติดตามผลการค้นพบที่น่าประหลาดใจนี้เราได้ตรวจสอบว่า SRF ที่คัดสรรมาจาก NAc เปลี่ยนแปลงพฤติกรรมตอบสนองต่อโคเคนหรือไม่ สอดคล้องกับการขาดกฎระเบียบของ SRF ในการเหนี่ยวนำΔFosBโดยโคเคนการทำให้ SRF เฉพาะ NAc ไม่มีผลต่อการทำงานของขมิ้นอ้อยที่เกิดจากโคเคนเฉียบพลันหรือขมิ้นอ้อยที่เห็นหลังจากการสัมผัสโคเคนซ้ำ ๆ (การรักษา×การโต้ตอบเวลา, F (4,80) = 0.3; p> 0.05) (รูปที่ 4D) ในทำนองเดียวกันการน็อคเอาต์เฉพาะของ NAc ของ SRF ไม่มีผลต่อการตั้งค่าสถานที่ที่มีโคเคน (t (14) = 0.1; p> 0.05) (รูปที่ 4E) ซึ่งเป็นการวัดผลรางวัลโคเคนทางอ้อม
การสนทนา
การศึกษาครั้งนี้ระบุว่า SRF เป็นผู้ไกล่เกลี่ยที่แปลกใหม่ของΔFosBใน NAc หลังจากความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรังและมีความหมายว่า SRF ในการพัฒนาพฤติกรรมที่ซึมเศร้าและวิตกกังวล เราให้หลักฐานโดยตรงว่าความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมลดระดับ SRF ใน NAc ที่อ่อนไหว แต่ไม่ยืดหยุ่นสัตว์และการลดการควบคุมนี้ช่วยป้องกันการเหนี่ยวนำของΔFosBในพื้นที่สมองนี้ซึ่งเราได้แสดงให้เห็นแล้วว่าจำเป็นต่อการรับมือกับความเครียดเรื้อรัง เช่นความยืดหยุ่น (Vialou et al., 2010) การลดลงของการแสดงออกของ SRF ที่คล้ายกันนั้นพบใน NAc ของมนุษย์ที่เป็นโรคซึมเศร้าโดยที่ΔFosB mRNA และการแสดงออกของโปรตีนก็ลดลงเช่นกัน. ในทางตรงกันข้ามระดับΔFosBไม่ได้ลดลงใน NAc ของหนูที่อ่อนแอแม้จะมีการลดระดับ SRF ซึ่งเกี่ยวข้องกับกลไกการถอดรหัสอื่น ๆ ซึ่งยังไม่ทราบในการควบคุมการแสดงออกΔFosB บทบาทเชิงสาเหตุของ SRF ในการไกล่เกลี่ยการเหนี่ยวนำΔFosBใน NAc หลังจากความเครียดเรื้อรังถูกสร้างขึ้นโดยใช้การลบพันธุกรรมที่เหนี่ยวนำไม่ได้ของ SRF จากบริเวณสมองนี้ การวิเคราะห์พฤติกรรมของหนูด้วยการใช้ SRF แบบน็อคเอาต์แบบเฉพาะเจาะจงนี้ทำให้ SRF มีบทบาทสำคัญในการพัฒนาทั้งแบบพื้นฐานและแบบความเครียดที่เกิดจากความเครียดและพฤติกรรมวิตกกังวล ในทางตรงกันข้ามการลบ SRF ไม่มีผลต่อการเหนี่ยวนำΔFosBในการตอบสนองต่อการบริหารโคเคนเรื้อรังหรือผลกระทบด้านพฤติกรรมของโคเคน การค้นพบเหล่านี้สนับสนุนบทบาทเฉพาะการกระตุ้นใหม่สำหรับ SRF ในการควบคุมการเหนี่ยวนำΔFosBและการตอบสนองเชิงพฤติกรรมต่อการรบกวนสิ่งแวดล้อมที่แตกต่างกัน
การถอดความ SRF-mediated ก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นถึงการตอบสนองต่อกิจกรรม synaptic ส่วนใหญ่เกิดจากการไหลเข้าของแคลเซียมที่เพิ่มขึ้นเช่นเดียวกับกิจกรรม neurotrophic ที่เพิ่มขึ้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของปัจจัย neurotrophic ที่มาจากสมอง (BDNF) (Bading et al, 1993) เซี่ยและอัล, 1996; จอห์นสันและอัล, 1997; ช้างและอัล, 2004; Kalita และอัล, 2006; Knöllและ Nordheim, 2009) สิ่งนี้ทำให้เกิดคำถามที่น่าสนใจว่าทำไม SRF จึงลดลงใน NAc ที่อ่อนไหว แต่ไม่ยืดหยุ่นหนูหลังจากความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคมเรื้อรัง กฎระเบียบที่แตกต่างนี้ไม่น่าจะเป็นสื่อกลางโดยการส่งสัญญาณ dopamine หรือ BDNF เนื่องจากหนูที่ไวต่อการแสดงผลเพิ่มระดับโปรตีน BDNF และเพิ่มการส่งสัญญาณ BDNF แบบดาวน์สตรีมใน NAc เช่นเดียวกับการเพิ่มการยิงระเบิดของเซลล์ประสาทส่วนหน้าท้อง ventral tegmental (VTA) สัตว์ที่มีความยืดหยุ่นแสดงระดับปกติของการส่งสัญญาณ BDNF และอัตราการยิง VTA (Krishnan et al., 2007) ความเป็นไปได้ทางเลือกคือการแสดงออกของ SRF ถูกระงับใน NAc เพื่อตอบสนองต่อการเปลี่ยนแปลงของกลูตามาเทอจิคในส่วนของสมองซึ่งเราได้แสดงให้เห็นว่ามีการควบคุมที่แตกต่างกันในหนูที่ไวต่อความรู้สึกและ Vialou et al., 2010) จำเป็นต้องมีงานเพิ่มเติมเพื่อศึกษากลไกนี้และกลไกอื่น ๆ ที่เป็นไปได้โดยตรง
การศึกษาล่าสุดโดยใช้จีโนมและวิธีการอื่น ๆ ชี้ให้เห็นว่า N5 – 10% ของยีนเป้าหมาย SRF ในเซลล์ประสาทเป็นยีนเริ่มต้นในทันที (Philippar et al., 2004; Ramanan et al., 2005; Etkin et al., 2006; Knöllและ Nordheim, 2009) สิ่งนี้สอดคล้องกับข้อมูลของเราที่แสดงให้เห็นถึงบทบาทที่สำคัญสำหรับ SRF ในการชักนำของΔFosBซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่ถูกตัดทอนของยีนต้นที่ fosb ในทันทีโดยความเครียดเรื้อรัง น่าสนใจยีนเป้าหมาย SRF จำนวนมากที่ระบุในการศึกษาต่าง ๆ เหล่านี้ยังแสดงถึงเป้าหมายที่เป็นที่รู้จักของΔFosBใน NAc (Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2008, 2009, Maze et al., 2010) ในบรรดายีนที่ควบคุมโดยทั่วไปเหล่านี้มีหลายอย่างที่ทราบกันดีว่าสามารถควบคุมโครงร่างเซลล์ประสาท (neuronal cytoskeleton) (เช่น Cdk5, Arc และ Actb) สิ่งนี้สอดคล้องกับรายงานที่ว่า SRF มีอิทธิพลต่อการเปลี่ยนแปลงของแอคตินและการเคลื่อนที่ของเซลล์ประสาทในเซลล์ประสาทหลายชนิด (Alberti และคณะ, 2005; Ramanan และคณะ, 2005; Knöll et al., 2006) ในขณะที่ΔFosB ส่งผลกระทบต่อ dendritic กระดูกสันหลังของเซลล์ประสาท NAc (Maze et al., 2010) จุดประสงค์การใช้งานทั่วไปดังกล่าวอาจสะท้อนให้เห็นถึงผลกระทบที่เกิดร่วมกันของ SRF รวมกับการเหนี่ยวนำของΔFosBซึ่งทำหน้าที่เป็นชุดของยีนเป้าหมายทั่วไปเพื่อมีอิทธิพลต่อสัณฐานวิทยาของเซลล์ประสาทและในที่สุดพฤติกรรมที่ซับซ้อน
SRF ยังได้รับการแสดงให้เห็นถึงการเล่นบทบาทสำคัญในการควบคุมพลาสติกซินแนปและการแสดงออกของยีนและพฤติกรรมของเซลล์ประสาทที่ขึ้นกับกิจกรรม ยกตัวอย่างเช่นการสูญเสีย SRF ขึ้นอยู่กับการเหนี่ยวนำของยีนต้นในทันทีเพื่อตอบสนองต่อการสำรวจสภาพแวดล้อมโดยสมัครใจหรือการกระตุ้นเซลล์ประสาทโดยการเหนี่ยวนำด้วยกระแสไฟฟ้ามีความสัมพันธ์กับความสามารถในการสร้าง synaptic synaptic ระยะยาวในฮิบโปคัมปัส , 2005; Etkin และคณะ, 2006) นอกจากนี้ SRF พร่องในฮิปโปแคมปัสได้แสดงให้เห็นถึงการขาดดุลในระยะยาวภาวะซึมเศร้า synaptic, การแสดงออกของยีนต้นทันทีที่เกิดจากบริบทนวนิยายและทำให้เกิดความเคยชินบกพร่องในระหว่างการสำรวจสภาพแวดล้อมนวนิยาย (Etkin et al., 2006) ข้อมูลเหล่านี้สร้างความสำคัญของ SRF ในความสามารถของสัตว์ในการปรับตัวให้เหมาะสมกับการรบกวนของสิ่งแวดล้อมดังเช่นในกรณีข้างต้นของการเรียนรู้ที่จะคุ้นเคยกับสภาพแวดล้อมใหม่หรือในกรณีของการปรับตัวให้เข้ากับสิ่งเร้าที่ทำให้เครียดเชิงลบเพื่อป้องกันการประกาศใช้ความเครียด - ลดการขาดดุลทางพฤติกรรมเช่นเดียวกับการศึกษาในปัจจุบันของเรา. ดังนั้นเราจึงสังเกตว่าสัตว์ที่แสดงอาการขาดดุลในการแสดงออกของ SRF ไม่ว่าจะเป็นการตอบสนองต่อความเครียดจากความพ่ายแพ้ทางสังคมในบุคคลที่อ่อนแอหรือผ่านการล้มลงของ SRF โดยตรงการแสดงพฤติกรรมที่คล้ายกับโรคซึมเศร้าและความวิตกกังวล เนื่องจากมนุษย์ที่ซึมเศร้ายังมีระดับ SRF ที่ลดลงใน NAc จึงเป็นไปได้ว่า SRF มีบทบาทพื้นฐานในการควบคุมความสามารถของแต่ละบุคคลในการปรับตัวเข้ากับสิ่งเร้าทางสิ่งแวดล้อมเชิงลบในเชิงบวกโดยส่วนหนึ่งผ่านการควบคุมการแสดงออกของΔFosBใน NAc
กลไกที่แตกต่าง: ติดยาเสพติดเทียบกับความต้านทานความเครียด
การค้นพบที่น่าประหลาดใจของการศึกษาครั้งนี้คือแม้ว่า SRF จำเป็นสำหรับการสะสมΔFosBใน NAc เพื่อตอบสนองต่อความเครียดเรื้อรัง แต่ก็ไม่จำเป็นสำหรับการเหนี่ยวนำΔFosBภายในบริเวณสมองเดียวกันในการตอบสนองโคเคนเรื้อรัง ในทำนองเดียวกัน SRF ไม่จำเป็นสำหรับการตอบสนองพฤติกรรมปกติของยาเสพติด ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าแม้ว่าข้อเท็จจริงที่ว่าΔFosBนั้นเกิดขึ้นใน NAc เพื่อตอบสนองต่อสิ่งเร้าหลายประเภท (Nestler et al., 1999; Nestler, 2008) ดูเหมือนจะมีวิถีโมเลกุลที่แตกต่างกันซึ่งนำไปสู่การเหนี่ยวนำΔFosB คำอธิบายหนึ่งที่เป็นไปได้สำหรับการค้นพบนี้คือชนิดของเซลล์ที่แตกต่างกันบางส่วนที่แสดงการสะสมของΔFosBในการตอบสนองต่อความเครียดเมื่อเทียบกับโคเคน ความเครียดเรื้อรังทำให้เกิดΔFosBประมาณเท่า ๆ กันภายในสองหลักย่อยของเซลล์ประสาทไขสันหลังกลาง NAc ที่แสดง D1 ส่วนใหญ่เมื่อเทียบกับผู้รับ Dopamine D2 ในขณะที่โคเคนเรื้อรังก่อให้เกิด DXFosB ส่วนใหญ่ภายในเซลล์ประสาท D1 + . ดังนั้นจึงเป็นไปได้ที่วิถีชีวิตที่พึ่งพา SRF อาจมีความสำคัญสำหรับ inductionFosB induction ในเซลล์ประสาท D1999 +. อย่างไรก็ตามสิ่งนี้จะไม่อธิบายการสูญเสียทั้งหมดของการเหนี่ยวนำ osFosB ในหนูที่ถูกกระแทก SRF หลังจากความเครียดเรื้อรังเนื่องจากการเหนี่ยวนำเกิดขึ้นในเซลล์ประสาททั้งสองชนิด อีกทางเลือกหนึ่งอธิบายว่าความเครียดเรื้อรังและโคเคนเรื้อรังเกิดขึ้นจากการส่งสัญญาณภายในเซลล์ที่แตกต่างกันโดยอาศัยรูปแบบการกระทำที่แตกต่างกันในเซลล์ประสาท NAc โดยมีความเครียดเรื้อรังอาจทำงานผ่านการส่งผ่านกลูตาแมตเทอิกเปลี่ยนไปตามที่ระบุไว้ก่อนหน้า การรับสัญญาณ (Nestler, 1) ความเป็นไปได้อีกอย่างก็คือการเหนี่ยวนำ BFosB โดยความเครียดเรื้อรังกับโคเคนเรื้อรังนั้นขึ้นอยู่กับกลไกการถอดรหัสที่แตกต่างกันซึ่งถูกควบคุมโดยอินพุตที่แตกต่างจากประสาทที่เป็นอันตรายซึ่งทำให้เกิด NAc จำเป็นต้องมีการทำงานเพิ่มเติมเพื่อสำรวจความเป็นไปได้เหล่านี้และทางเลือกอื่น
การค้นพบของเราระบุกลไกการถอดรหัสใหม่ที่กระตุ้นให้เกิดการ responsesFosB ใน NAc เพื่อเป็นสื่อกลางในการตอบสนองต่อการกระตุ้นการทรงตัวต่อสิ่งเร้าที่เครียด การศึกษาครั้งนี้ยังให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่ที่สำคัญในบทบาทที่เล่นโดย SRF ในระดับของ NAc ในการควบคุมพฤติกรรมซึมเศร้าและวิตกกังวล. การได้รับความเข้าใจที่ดีขึ้นเกี่ยวกับบทบาทการถอดเสียงของ SRF ในการควบคุมพฤติกรรมดังกล่าวจะช่วยในการระบุเป้าหมายของยีนใหม่ที่เกี่ยวข้องกับความยืดหยุ่นต่อความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับความเครียดและอาจเอื้อต่อการพัฒนาวิธีการรักษาด้วยยากล่อมประสาทที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นในอนาคต
งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนจากสถาบันสุขภาพจิตแห่งชาติและสถาบันยาเสพติดแห่งชาติและเป็นพันธมิตรการวิจัยกับแอสตร้าเซเนกา เราขอขอบคุณ David D. Ginty สำหรับการจัดหาหนู Srffl / fl
ควรติดต่อจดหมายไปยัง Eric J. Nestler, แผนกประสาทวิทยา Fishberg, โรงเรียนแพทย์ Mount Sinai, One Gustave L. Levy Place, กล่อง 1065, นิวยอร์ก, นิวยอร์ก 10029-6574 [ป้องกันอีเมล]
ลิขสิทธิ์© 2010 ผู้เขียน 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
อ้างอิง
1 ↵
1 Alberti S
2 Krause SM
3 Kretz O
4 Philippar U
5 Lemberger T
6 Casanova E
7 Wiebel FF
8 Schwarz H,
9 Frotscher M
10 Schütz G
11 Nordheim A
(2005) การย้ายถิ่นของเส้นประสาทในกระแสการย้ายถิ่น murine rostral ต้องใช้ปัจจัยการตอบสนองในซีรั่ม Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 102: 6148 – 6153
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
2 ↵
1 Bading H
2 Ginty DD
3 กรีนเบิร์กเมน
(1993) ระเบียบการแสดงออกของยีนในเซลล์ประสาท hippocampal โดยวิถีการส่งสัญญาณแคลเซียมที่แตกต่างกัน วิทยาศาสตร์ 260: 181 – 186
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
3 ↵
1 เบอร์ตันโอ
2 McClung CA,
3 Dileone RJ
4 กฤษณะวี
5 เรนฮาล
6 รุสโซ SJ
7 เกรแฮม D
8 Tsankova NM
9 โบลาโนสแคลิฟอร์เนีย
10 ริออสเอ็ม
11 Monteggia LM
12 DW ตนเอง
13 Nestler EJ
(2006b) บทบาทสำคัญของ BDNF ในเส้นทางโดปามีน mesolimbic ในความเครียดจากการพ่ายแพ้ทางสังคม วิทยาศาสตร์ 311: 864 – 868
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
4 ↵
1 เบอร์ตันโอ
2 Covington HE 3rd.,
3 Ebner K
4 Tsankova NM
5 คาร์ล TL
6 Ulery P
7 Bhonsle A
8 Barrot M
9 กฤษณะวี
10 จีเอ็ม Singewald
11 Singewald N
12 Birnbaum S,
13 นีฟ RL
14 Nestler EJ
(2007) การเหนี่ยวนำของΔFosBในสีเทา periaqueductal สีเทาโดยความเครียดส่งเสริมการตอบสนองการเผชิญปัญหาที่ใช้งาน เซลล์ประสาท 55: 289 – 300
CrossRefMedline
5 ↵
1 ช้าง SH
2 ปัญหาที่ตอบยาก S,
3 เซียวซี
(2004) บทบาทใหม่สำหรับปัจจัยตอบสนองของเซรั่มในการอยู่รอดของเซลล์ประสาท J Neurosci 24: 2277 – 2285
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
6 ↵
1 Etkin A
2 Alarcón JM,
3 Weisberg SP
4 Touzani K
5 Huang YY
6 Nordheim A,
7 Kandel ER
(2006) บทบาทในการเรียนรู้สำหรับ SRF: การลบใน forebrain ผู้ใหญ่ขัดขวาง จำกัด และการก่อตัวของหน่วยความจำทันทีของบริบทใหม่ เซลล์ประสาท 50: 127 – 143
CrossRefMedline
7 ↵
1 Heinze HJ
2 Heldmann M
3 Voges J
4 Hinrichs H
5 Marco-Pallares J
6 Hopf JM
7 Müller UJ
8 Galazky I
9 พายุ V
10 Bogerts B
11 Münte TF
(2009) การตอบสนองต่อการกระตุ้นอาการแพ้ในการติดเหล้าอย่างรุนแรงโดยใช้การกระตุ้นสมองส่วนลึกของนิวเคลียสแอคคิวเบน: ด้านคลินิกและวิทยาศาสตร์พื้นฐาน Front Hum Neurosci 3: 22
เมด
8 ↵
1 จอห์นสัน CM
2 Hill CS
3 Chawla S
4 Treisman R,
5 H bading
(1997) แคลเซียมควบคุมการแสดงออกของยีนผ่านทางเดินที่แตกต่างกันสามทางที่สามารถทำงานได้อย่างอิสระจากไคเนสของโปรตีน Ras / mitogen-Activated (ERKs) J Neurosci 17: 6189 – 6202
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
9 ↵
1 Kalita K
2 Kharebava G,
3 เจิ้งเจเจ
4 Hetman M
(2006) บทบาทของโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเฉียบพลัน megakaryoblastic-1 ในการกระตุ้น ERK1 / 2 ขึ้นอยู่กับการถอดความจากปัจจัยการตอบสนองในซีรั่มที่ขับเคลื่อนด้วย BDNF หรือกิจกรรม synaptic ที่เพิ่มขึ้น J Neurosci 26: 10020 – 10032
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
10 ↵
1 Kelz MB
2 เฉินเจ
3 Carlezon WA Jr.
4 Whisler K
5 กิลเดน L
6 Beckmann AM
7 สเตฟเฟนซี
8 จางวายเจ
9 Marotti L
10 DW ตนเอง
11 Tkatch T,
12 Baranauskas G,
13 Surmeier DJ
14 นีฟ RL
15 Duman RS
16 Picciotto MR
17 Nestler EJ
(1999) การแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสΔFosBในสมองควบคุมความไวต่อโคเคน ธรรมชาติ 401: 272 – 276
CrossRefMedline
11 ↵
1 Knöll B
2 Nordheim A
(2009) ความสามารถในการทำงานของปัจจัยการถอดความในระบบประสาท: กระบวนทัศน์ SRF เทรนด์ Neurosci 32: 432 – 442
CrossRefMedline
12 ↵
1 Knöll B
2 Kretz O
3 Fiedler C
4 Alberti S
5 Schütz G
6 Frotscher M
7 Nordheim A
(2006) ปัจจัยตอบสนองของเซรั่มควบคุมการประกอบวงจรประสาทในฮิบโป Nat Neurosci 9: 195 – 204
CrossRefMedline
13 ↵
1 กฤษณะวี
2 ฮัน MH
3 เกรแฮม DL
4 เบอร์ตันโอ
5 เรนฮาล
6 รุสโซ SJ
7 Laplant Q
8 เกรแฮม A
9 Lutter M
10 Lagace DC,
11 Ghose S
12 ทำเนียบ R
13 Tannous P
14 กรีนตา
15 นีฟ RL
16 Chakravarty S
17 Kumar A
18 Eisch AJ
19 DW ตนเอง
20 ลีเอฟเอส
21 et al.
(2007) การดัดแปลงระดับโมเลกุลช่วยให้เกิดความอ่อนแอและต้านทานต่อความพ่ายแพ้ทางสังคมในภูมิภาคที่ให้รางวัลกับสมอง เซลล์ 131: 391 – 404
CrossRefMedline
14 ↵
1 คุห์นเจ
2 Bauer R
3 Pohl S
4 Lenartz D
5 Huff W
6 คิม EH
7 Klosterkoetter J
8 Sturm V
(2009) การสังเกตการณ์การหยุดสูบบุหรี่โดยไม่พูดถึงหลังจากการกระตุ้นสมองส่วนลึกของนิวเคลียส accumbens Eur Addict Res 15: 196 – 201
CrossRefMedline
15 ↵
1 Kumar A
2 ชอย KH
3 เรนฮาล
4 Tsankova NM
5 เธโอบาลด์ DE
6 Truong HT
7 รุสโซ SJ
8 Laplant Q
9 ซาซากิ TS
10 วิสต์เลอร์ KN
11 นีฟ RL
12 DW ตนเอง
13 Nestler EJ
(2005) การปรับปรุงโครมาตินเป็นกลไกสำคัญที่เกี่ยวข้องกับความเป็นพลาสติกที่เกิดจากโคเคนใน striatum เซลล์ประสาท 48: 303 – 314
CrossRefMedline
16 ↵
1 เขาวงกตฉัน
2 Covington HE 3rd.,
3 Dietz DM,
4 LaPlant Q,
5 เรนฮาล
6 รุสโซ SJ
7 ช่าง M
8 Mouzon E
9 นีฟ RL
10 Haggarty SJ
11 เรนวาย
12 Sampath SC
13 Hurd YL
14 Greengard P
15 Tarakhovsky A
16 Schaefer A,
17 Nestler EJ
(2010) บทบาทที่สำคัญของฮิสโตนเมธิลทรานสเฟอเรส G9a ในพลาสติกที่เกิดจากโคเคน วิทยาศาสตร์ 327: 213 – 216
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
17 ↵
1 McClung CA,
2 Ulery PG
3 Perrotti LI
4 Zachariou V,
5 เบอร์ตันโอ
6 Nestler EJ
(2004) DeltaFosB: สวิตช์ระดับโมเลกุลสำหรับการปรับตัวในระยะยาวในสมอง Brain Res Mol Brain Res 132: 146 – 154
เมด
18 ↵
1 Nestler EJ
(2008) กลไกการถอดรหัสของการเสพติด: บทบาทของ deltaFosB Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 363: 3245 – 3255
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
19 ↵
1 Nestler EJ
2 Carlezon WA Jr.
(2006) วงจรรางวัลโดปามีน mesolimbic ในภาวะซึมเศร้า จิตเวชศาสตร์ชีวภาพ 59: 1151 – 1159
CrossRefMedline
20 ↵
1 Nestler EJ
2 Kelz MB
3 เฉินเจ
(1999) ΔFosB: ผู้ไกล่เกลี่ยระดับโมเลกุลของพลาสติกและระบบประสาทในระยะยาว ความต้านทานของสมอง 835: 10 – 17
CrossRefMedline
21 ↵
1 นิวตัน SS
2 Thome J
3 วอลเลซ TL
4 ชิรายามะวาย
5 ชเลซิงเจอร์ L
6 ซาไกเอ็น
7 เฉินเจ
8 นีฟอาร์
9 Nestler EJ
10 Duman RS
(2002) การยับยั้งโปรตีนที่จับกับองค์ประกอบการตอบสนองของค่ายหรือ dynorphin ในนิวเคลียส accumbens ทำให้เกิดฤทธิ์คล้ายยากล่อมประสาท J Neurosci 22: 10883 – 10890
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
22 ↵
1 Nikulina EM
2 Arrillaga-Romany I,
3 Miczek KA,
4 Hammer RP Jr.
(2008) การเปลี่ยนแปลงที่ยาวนานในโครงสร้าง mesocorticolimbic หลังจากความเครียดการพ่ายแพ้ทางสังคมซ้ำ ๆ ในหนู: ช่วงเวลาของตัวรับ mu-opioid mRNA และ immunosactivity FosB / DeltaFosB Eur J Neurosci 27: 2272 – 2284
CrossRefMedline
23 ↵
1 Perrotti LI
2 Hadeishi Y
3 Ulery PG
4 Barrot M
5 Monteggia L
6 Duman RS
7 Nestler EJ
(2004) การชักนำของΔFosBในโครงสร้างสมองที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลหลังจากความเครียดเรื้อรัง J Neurosci 24: 10594 – 10602
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
24 ↵
1 Perrotti LI
2 ผู้ประกอบ RR
3 Robison B
4 เรนฮาล
5 เขาวงกตฉัน
6 Yazdani S,
7 Elmore RG,
8 Knapp DJ
9 Selley DE
10 มาร์ติน BR
11 Sim-Selley L,
12 Bachtell RK
13 DW ตนเอง
14 Nestler EJ
(2008) รูปแบบที่แตกต่างของการเหนี่ยวนำ DeltaFosB ในสมองโดยยาเสพติด ไซแนปส์ 62: 358 – 369
CrossRefMedline
25 ↵
1 Philippar U
2 Schratt G
3 Dieterich C,
4 Müller JM
5 Galgóczy P
6 Engel FB,
7 Keating MT
8 Gertler F
9 Schüle R
10 Vingron M
11 Nordheim A
(2004) ยีนเป้าหมาย SRF Fhl2 เป็นปฏิปักษ์กับการเปิดใช้งานที่ขึ้นกับ RhoA / MAL ของ SRF Mol Cell 16: 867 – 880
CrossRefMedline
26 ↵
1 Ramanan N
2 Shen Y
3 Sarsfield S,
4 Lemberger T
5 Schütz G
6 Linden DJ
7 Ginty DD
(2005) SRF ไกล่เกลี่ยการแสดงออกของยีนที่เกิดจากกิจกรรมและปั้นพลาสติกแบบซินแนป Nat Neurosci 8: 759 – 767
CrossRefMedline
27 ↵
1 เรนฮาล
2 คาร์ล TL
3 เขาวงกตฉัน
4 Covington HE 3rd.,
5 Truong HT
6 Alibhai I
7 Kumar A
8 Montgomery RL,
9 Olson EN
10 Nestler EJ
(2008) Delta FosB ไกล่เกลี่ย desensitization epigenetic ของยีน c-fos หลังจากการสัมผัสยาบ้าเรื้อรัง J Neurosci 28: 7344 – 7349
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
28 ↵
1 เรนฮาล
2 Kumar A
3 เซียวจี
4 Wilkinson M
5 Covington HE 3rd.,
6 เขาวงกตฉัน
7 Sikder D
8 Robison AJ
9 LaPlant Q,
10 Dietz DM,
11 รุสโซ SJ
12 Vialou V
13 Chakravarty S
14 Kodadek TJ
15 กอง A
16 Kabbaj M
17 Nestler EJ
(2009) การวิเคราะห์โครมาตินของโครมาตินโดยโคเจนในวงกว้างเผยให้เห็นบทบาทของเซirtuins เซลล์ประสาท 62: 335 – 348
CrossRefMedline
29 ↵
1 Schlaepfer TE,
2 โคเฮน MX
3 Frick C
4 Kosel M
5 Brodesser D
6 Axmacher N,
7 โจ AY
8 เครฟต์ M
9 Lenartz D
10 Sturm V
(2008) การกระตุ้นสมองส่วนลึกเพื่อให้รางวัลแก่วงจรช่วยบรรเทาโรคโลหิตจางในภาวะซึมเศร้าที่สำคัญ Neuropsychopharmacology 33: 368 – 377
CrossRefMedline
30 ↵
1 Sesack SR
2 เกรซ AA
(2010) เครือข่ายของรางวัลคอร์ติโก้ - เบสแรก: microcircuitry Neuropsychopharmacology 35: 27 – 47
CrossRefMedline
31 ↵
1 โทมิตะเอช
2 Vawter MP,
3 วอลช์ DM
4 อีแวนส์ SJ
5 PV Choudary
6 หลี่เจ
7 Overman KM
8 Atz ME
9 Myers RM
10 Jones EG
11 วัตสัน SJ
12 Akil H
13 Bunney WE Jr.
(2004) ผลของปัจจัย agonal และ postmortem ต่อการแสดงออกของยีน: การควบคุมคุณภาพในการวิเคราะห์ microarray หรือสมองมนุษย์หลังการตาย จิตเวช Biol 55: 346 – 352
CrossRefMedline
32 ↵
1 Tsankova NM
2 เบอร์ตันโอ
3 เรนฮาล
4 Kumar A
5 นีฟ RL
6 Nestler EJ
(2006) การควบคุมโครมาติน hippocampal อย่างยั่งยืนในรูปแบบเมาส์ของภาวะซึมเศร้าและการกระทำของยากล่อมประสาท Nat Neurosci 9: 519 – 525
CrossRefMedline
33 ↵
1 Vassoler FM,
2 Schmidt HD
3 เจอราร์ดฉัน
4 ชื่อเสียง KR
5 Ciraulo DA
6 Kornetsky C
7 Knapp CM
8 เพียร์ซ RC
(2008) การกระตุ้นสมองส่วนลึกของนิวเคลียส accumbens shell ช่วยลดการคืนสถานะของโคเคนที่เกิดจากการใช้ยาในหนู J Neurosci 28: 8735 – 8739
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
34 ↵
1 Vialou V
2 Robison AJ
3 Laplant QC
4 Covington HE 3rd.,
5 Dietz DM,
6 Ohnishi YN
7 Mouzon E
8 Rush AJ 3rd,
9 วัตต์ EL
10 วอลเลซ DL
11 Iñiguez SD,
12 Ohnishi YH
13 สทิ MA
14 วอร์เรน BL
15 กฤษณะวี
16 Bolaños CA
17 นีฟ RL
18 Ghose S
19 เบอร์ตันโอ
20 Tamminga CA,
21 Nestler EJ
(2010) ΔFosBในวงจรรางวัลสมองไกล่เกลี่ยความยืดหยุ่นต่อความเครียดและการตอบสนองต่อยากล่อมประสาท Nat Neurosci 13: 745 – 752
CrossRefMedline
35 ↵
1 Wilkinson MB
2 เซียวจี
3 Kumar A
4 LaPlant Q,
5 เรนฮาล
6 Sikder D
7 Kodadek TJ
8 Nestler EJ
(2009) การรักษาด้วย Imipramine และความยืดหยุ่นแสดงให้เห็นถึงการควบคุมโครมาตินที่คล้ายคลึงกันในภูมิภาคที่ให้รางวัลแก่สมอง J Neurosci 29: 7820 – 7832
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
36 ↵
1 เซียวซี
2 Dudek H
3 Miranti CK
4 กรีนเบิร์กเมน
(1996) การไหลเข้าของแคลเซียมผ่านตัวรับ NMDA ทำให้เกิดการถอดรหัสยีนในระยะแรกโดยกลไก MAP kinase / ERK-dependent กลไก J Neurosci 16: 5425 – 5436
บทคัดย่อ / ข้อความแบบเต็มฟรี
;
