ระเบียบข้อบังคับเกี่ยวกับการแยกตัวของ DeltaFosB, FosB และ cFos ระหว่างการดูแลตนเองและการถอนโคเคน (2010)

J Neurochem ต้นฉบับผู้เขียน; พร้อมใช้งานใน PMC Oct 1, 2011
เผยแพร่ในแบบฟอร์มการแก้ไขขั้นสุดท้ายเป็น:

เผยแพร่ออนไลน์ Aug 3, 2010 ดอย:  10.1111 / j.1471-4159.2010.06907.x

ฉบับแก้ไขล่าสุดของผู้เผยแพร่บทความนี้มีอยู่ที่ J Neurochem
ดูบทความอื่น ๆ ใน PMC ที่ กล่าวถึง บทความที่ตีพิมพ์

นามธรรม

การได้รับยาเรื้อรังก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในโปรไฟล์การแสดงออกของยีนที่เชื่อว่าเป็นส่วนหนึ่งของการพัฒนายา การศึกษาครั้งนี้ตรวจสอบกฎระเบียบของ Fos- ครอบครัวของปัจจัยการถอดรหัสโดยเฉพาะ cFos, FosB และΔFosBในภูมิภาคย่อยในการแยกตัวระหว่างและหลังการบริหารโคเคนทางหลอดเลือดดำเรื้อรังในการบริหารตนเองและหนูเทียมแอก เราพบว่า cFos, FosB และΔFosBแสดงรูปแบบการแสดงออกที่แตกต่างกันในระดับภูมิภาคและชั่วขณะโดยมีการสะสมโปรตีนΔFosBในเปลือกนิวเคลียส accumbens (NAc) และแกนมากขึ้นหลังจากการบริหารโคเคนเรื้อรังในขณะที่ΔFosBเพิ่มขึ้นใน caudate-putamen คล้ายกับการบริหารแบบเฉียบพลันหรือเรื้อรัง ในทางตรงกันข้ามความอดทนที่พัฒนาขึ้นเพื่อ mRNA ที่เกิดจากโคเคนสำหรับΔFosBในทุกภูมิภาคย่อย 3 striatal ด้วยการบริหารเรื้อรัง ความอดทนยังพัฒนาไปสู่การแสดงออกของ FosB โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเชลล์ NAc และ CPu ที่น่าสนใจคือความอดทนต่อการเหนี่ยวนำ cFos ของโคเคนนั้นขึ้นอยู่กับการควบคุมปริมาณการบริโภคโคเคนในช่องท้อง แต่ไม่ได้อยู่ในแถบพื้นที่หน้าท้องด้านหลังในขณะที่กฎระเบียบของ FosB และΔFosBนั้นคล้ายคลึงกันในโคเคน ดังนั้นการปรับระบบประสาทส่วนกลางของ osFosB ใน CPu อาจเกิดขึ้นเร็วกว่าที่คิดไว้ก่อนหน้านี้ด้วยการเริ่มใช้โคเคนทางหลอดเลือดดำและร่วมกับการสะสม ofFosB ใน NAc ที่เพิ่มขึ้นอาจส่งผลให้พฤติกรรมการแสวงหาโคเคนเพิ่มขึ้น

คำสำคัญ: โคเคน, การบริหารตนเอง, การถอน, striatum, Fos

บทนำ

การสัมผัสกับยาเสพติดซ้ำ ๆ ทำให้เกิดการปรับระบบประสาทในเส้นทางการให้รางวัลสมองซึ่งเชื่อว่ารองรับทั้งการพัฒนาของการใช้ยาเสพติดซึ่งต้องกระทำและการคงอยู่ของความอยากและการกลับเป็นซ้ำของพฤติกรรมการแสวงหายาเสพติด neuroadaptations เหล่านี้จำนวนมากเป็นผลมาจากการเหนี่ยวนำของปัจจัยการถอดรหัสและการควบคุมการแสดงออกของยีนที่ตามมาซึ่งอาจมีผลกระทบยาวนานที่อาจเกิดขึ้นกับโครงสร้างและการทำงานของเซลล์ประสาท (เหวย เอตอัล 2006) ปัจจัยการถอดความของครอบครัว Fos เป็นที่สนใจเป็นพิเศษเนื่องจากสมาชิกของครอบครัวนี้แสดงรูปแบบการเหนี่ยวนำที่แตกต่างกันในภูมิภาคที่เกิดจากการสัมผัสโคเคนทั้งแบบเฉียบพลันและแบบเรื้อรัง เมื่อโคเคนได้รับการจัดการอย่างจริงจังในรูปแบบที่ไม่โต้ตอบ (เช่นโดยการฉีดทางช่องท้อง (IP)) มันจะเพิ่ม cFos และ FosB mRNA และโปรตีนทั้งในหลัง (caudate-putamen, CPu) และ ventral (นิวเคลียส accumbens, NAc) striatum (Graybiel เอตอัล 1990; หนุ่ม เอตอัล 1991; หวัง เอตอัล 1992), ในขณะที่ความอดทนต่อการตอบสนองนี้เกิดขึ้นกับการบริหารแฝงเรื้อรัง (หวัง เอตอัล 1992, 1994; Alibhai เอตอัล 2007). ในทางตรงกันข้ามระดับการเกิดของΔFosB (35-37 kDa) ซึ่งเป็นตัวแปรที่ต่อกันแบบตัดทอนอย่างมีเสถียรภาพของ fosB ยีนจะเพิ่มขึ้นหลังจากการสัมผัสโคเคนแบบเรื้อรัง แต่ไม่รุนแรง (หวัง เอตอัล 1994; ไนย์ เอตอัล 1995; เฉิน เอตอัล 1995, 1997) ไอโซฟอร์มที่เสถียรΔFosBเหล่านี้สามารถ heterodimerize กับโปรตีนในตระกูล Jun ที่ต่างกันกว่า cFos หรือ FosB (เฉิน เอตอัล 1995) และยังสามารถสร้าง homodimers ใช้งานได้ด้วยตัวเอง (Jorissen เอตอัล 1997) แนะนำว่าการก่อตัวของอนุพันธ์โปรตีนคอมเพล็กซ์ -1 (AP-1) คอมเพล็กซ์หลังจากโคเคนเรื้อรังอาจเปลี่ยนการแสดงออกของยีนที่ไซต์ AP-1 ในลักษณะที่แตกต่างจากการแสดงออกของยีนที่เกิดจากการสัมผัสโคเคนเฉียบพลัน (หวังว่า 1998; Kelz และ Nestler, 2000) การเปลี่ยนแปลงที่แตกต่างในโปรไฟล์การแสดงออกของยีนก็เกิดขึ้นเช่นกันว่าการยกระดับ osFosB เป็นระยะสั้นหรือยาวนานและการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้อาจนำไปสู่การแสดงออกที่แตกต่างกันของพฤติกรรมการใช้โคเคน (McClung และ Nestler, 2003) การสัมผัสเรื้อรังกับยาอื่น ๆ รวมถึงยาบ้า, มอร์ฟีน, Δ9-THC, นิโคติน, เอทานอลและ phencyclidine ยังนำไปสู่การสะสมของ isoforms stableFosB ที่มีเสถียรภาพในภูมิภาค striatal (McClung เอตอัล 2004; Perrotti เอตอัล 2008) นอกจากนี้การค้นพบเมื่อเร็ว ๆ นี้ชี้ให้เห็นถึงการมีปฏิสัมพันธ์เชิงลบระหว่างการสะสมΔFosBและแอมเฟตามีนที่เกิดจาก cFos ซึ่งอาจอธิบายถึงความอดทนต่อการเหนี่ยวนำ cFos ที่พบหลังจากการสัมผัสกับสารกระตุ้นเรื้อรังRenthal เอตอัล 2008). การค้นพบนี้นำไปสู่สมมติฐานที่ว่าไอโซฟอร์มที่เสถียร stable โฟสบีอาจทำหน้าที่เป็น“ การสลับโมเลกุล” และอำนวยความสะดวกในการเปลี่ยนจากการใช้ยาเริ่มต้นไปสู่สภาวะทางชีววิทยาที่ติดมากขึ้น (Nestler เอตอัล 2001; Nestler, 2008).

ในขณะที่การศึกษาก่อนหน้านี้ส่วนใหญ่ใช้การรักษาโคเคนแบบพาสซีฟซ้ำ ๆ เพื่อศึกษาการแสดงออกของโปรตีนในตระกูล Fos และมีตัวอย่างค่อนข้างน้อยของระเบียบนี้เมื่อโคเคนมีการจัดการทางหลอดเลือดดำด้วยตนเอง (IV) เป็นเวลาหลายชั่วโมง การศึกษาหนึ่งพบว่า cFos mRNA เพิ่มขึ้นใน CPu หลังจากเซสชั่น 30-min หนึ่งนาทีของการบริหารตนเองของโคเคนในหนู (Kuzmin และ Johansson, 1999) ในขณะที่ไม่พบการเปลี่ยนแปลงใน CPu ของหนูหลังจากย่อยทั้งสองแบบเรื้อรัง วัน 3) หรือเรื้อรัง (6-12 สัปดาห์) โคเคนการดูแลตนเอง (Daunais) เอตอัล 1993, 1995) หลังจากช่วงเวลาของการถอนตัวเพิ่มขึ้นโคเคนเป็นสื่อกลางในโปรตีน cFos ใน NAc จะลดลงในหนูที่มีปริมาณโคเคนเพิ่มขึ้นก่อนหน้า (Ben-Shahar เอตอัล 2004) ในขณะที่ระดับ cFos ที่เพิ่มขึ้นนั้นสามารถพบได้ทั่วทั้งสไตรตัมหลังจากได้รับยาโคเคนที่เกี่ยวข้อง (Neisewander เอตอัล 2000; Kufahl เอตอัล 2009) ในทางตรงกันข้ามกับ cFos ระดับโปรตีนที่เพิ่มขึ้นของΔFosBได้รับการแสดงตลอดทั้ง striatum หลังจากการบริหารตนเองของโคเคนเรื้อรังและการสะสมนี้สามารถคงอยู่อย่างน้อยวัน 1 สู่การถอนตัว (Pich เอตอัล 1997; Perotti เอตอัล 2008) อย่างไรก็ตามไม่มีรายงานใดที่เปรียบเทียบการเปลี่ยนแปลงในการตอบสนองของโปรตีนในครอบครัว Fos หลายชนิดกับการบริหารโคเคนทางหลอดเลือดดำเช่นการรับสัมผัสเฉียบพลันหรือเรื้อรัง เมื่อพิจารณาถึงปฏิสัมพันธ์ระหว่างΔFosBและ cFos ความสามารถในการสร้างอนุพันธ์ AP-1 ที่ซับซ้อนเพื่อสร้างผลกระทบที่แตกต่างในการแสดงออกของยีนและผลกระทบที่เป็นไปได้ของความแตกต่างเหล่านี้ต่อพฤติกรรมที่ใช้โคเคนเป็นสิ่งสำคัญเช่นกัน การแสดงออกของ cFos, FosB และΔFosBที่เกิดขึ้นหลังจากการบริหารที่ไม่เกิดขึ้นก็จะพบเมื่อโคเคนเป็นผู้บริหารจัดการด้วยความสมัครใจด้วยตนเองและเพื่อกำหนดระยะเวลาที่การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้จะคงอยู่หลังจากการบริหารโคเคนสิ้นสุดลง ดังนั้นในการศึกษาปัจจุบันเราเปรียบเทียบผลของการบริหารโคเคน IV แบบเรื้อรังต่อการแสดงออกของΔFosB, FosB และ cFos ในภูมิภาคย่อยระหว่างการคลอดและการถอนโคเคน เราเปรียบเทียบกฎระเบียบที่พบกับการดูแลตนเองด้วยความตั้งใจกับกฎระเบียบในสัตว์ที่ได้รับปริมาณที่เท่ากันและรูปแบบชั่วคราวของโคเคนผ่านการฉีดเข้าเทียมแบบไม่แปรสภาพหลังจากการสัมผัสอย่างเฉียบพลันหรือเรื้อรัง ระบุว่า FosB และΔFosBเป็นสายพันธุ์ประกบกัน fosB เรายังเปรียบเทียบการควบคุม mRNAs สำหรับ FosB และΔFosBกับการควบคุมในระดับโปรตีน

ขั้นตอนการทดลอง

วิชาและศัลยกรรม

Sprague-Dawley ตัวผู้ตัวเต็มวัยในขั้นต้นจะมีน้ำหนักประมาณ 250-300 g ซึ่งอยู่ในสภาพแวดล้อมที่ควบคุมอุณหภูมิและความชื้นบนวงจรมืดของแสง 12 h (ไฟที่ 7: 00 AM) สัตว์เลี้ยงด้วยอาหารและน้ำ โฆษณาฟรี ตลอดเวลายกเว้นพวกเขาได้รับการบำรุงรักษาที่ 85% ของน้ำหนักการให้อาหารฟรีในระหว่างการฝึกกดก้านสำหรับเม็ดซูโครส (45 mg, BioServ) การฝึกอบรมแบบ Lever-press ดำเนินการในห้องระบายอากาศผ่าตัด (Med Associates, Georgia, VT) จนกระทั่งได้พบกับเกณฑ์การได้รับ (เม็ด 100 ต่อเซสชั่นสำหรับการประชุมติดต่อกัน 3) ภายใต้ตารางการเสริมแรง 1 (FR1) เลี้ยงสัตว์แล้ว โฆษณาฟรี อย่างน้อย 24 ชั่วโมงก่อนการผ่าตัด สำหรับการผ่าตัดหนูจะได้รับ atropine (0.04 mg / kg ใต้ผิวหนัง) เพื่อช่วยหายใจและใส่สายสวนแบบเรื้อรังที่อาศัยอยู่ในเส้นเลือดคอขวาภายใต้โซเดียม pentobarbital (50 mg / kg, IP) ตามขั้นตอนที่เผยแพร่ก่อนหน้า (เอ็ดเวิร์ด เอตอัล 2007a) หลังการผ่าตัดหนูจะได้รับการฉีดเพนิซิลิน (200,000 IU / กก., เข้ากล้าม) เพื่อป้องกันการติดเชื้อและสายสวนถูกล้างออกทุกวันด้วย 0.2 ml heparinized (20 IU / ml) น้ำเกลือที่มี gentamycin ซัลเฟต (0.33 mg / ml) ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดได้ดำเนินการตามสถาบันสุขภาพแห่งชาติ คำแนะนำสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองและได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบันยูทาห์ตะวันตกเฉียงใต้ (IACUC)

เครื่องมือและขั้นตอนการบริหารตนเอง

หลังจากการกู้คืน 1 wk จากการผ่าตัดสัตว์ถูกแบ่งออกเป็นหลายกลุ่มทดลอง / เวลาถอน (รูปที่ 1A) และกลับไปที่ห้องทดสอบการผ่าตัดในแต่ละวันตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (เอ็ดเวิร์ด เอตอัล 2007b) หนูในกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษานั้นได้รับการดูแลแบบเดี่ยวและจัดการทุกวันในกรงที่บ้านของพวกเขาโดยไม่ต้องสัมผัสกับสภาพแวดล้อมการดูแลตนเอง หนูในกลุ่มควบคุมตนเองของโคเคน (CSA) ได้รับอนุญาตให้จัดการโคเคนด้วยตนเองโดยสมัครใจ (0.5 mg / kg / 50 μl infusion) ภายใต้ตารางการเสริมแรง 1 (FR1) รายวันดำเนินการ 4 วัน / wk รวมเป็น 6 วัน การกดคานแบบแอคทีฟแต่ละครั้งจะทำให้เกิดการฉีดโคเคนของ 18 ซึ่งเกี่ยวข้องกับการส่องสว่างของแสงคิวข้างบนคันโยกแบบแอคทีฟ ไฟบ้านดับลงในระหว่างการฉีดโคเคนและมีช่วงเวลาหยุดพักเพิ่มเติมของ 2.5 หลังจากการแช่ซึ่งไฟบ้านยังคงดับอยู่ คานตอบสนองในระหว่างการแช่และช่วงหมดเวลาถูกบันทึก แต่ไม่มีผลใด ๆ มีคันโยกที่ไม่ทำงานเพิ่มเติมอยู่ในห้อง แต่การตอบสนองกับคันโยกนี้ก็ไม่เกิดขึ้น หนูในกลุ่มแอกเรื้อรังได้รับการจับคู่กับหนูที่ดูแลตัวเองอย่างแข็งขันและได้รับการฉีดโคเคนแบบพาสซีฟในปริมาณและรูปแบบชั่วคราวเหมือนกับหุ้นส่วนที่ดูแลตัวเอง หนูในกลุ่มแอกแอก (AY) ถูกจับคู่กับหนูในกลุ่ม CSA เรื้อรังด้วย แต่ได้รับน้ำเกลือแบบพาสซีฟแทนที่จะเป็นโคเคนจนกระทั่งวันสุดท้ายของการบริหารตนเองเมื่อพวกเขาได้รับการฉีดโคเคนแบบพาสซีฟครั้งแรก เวลา. ในที่สุดกลุ่ม Saline SA ได้รับอนุญาตให้จัดการน้ำเกลือด้วยตนเองตลอดเพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงที่อาจเกิดขึ้นเกี่ยวกับการผ่าตัดการทดสอบหรือขั้นตอนการทดลองอื่น ๆ เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา การเปรียบเทียบระหว่างกลุ่ม AY และ CY ถูกนำมาใช้เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงในการตอบสนองของ cFos, FosB หรือΔFosBด้วยการสัมผัสโคเคนเฉียบพลันและเรื้อรังในขณะที่ CSA และกลุ่ม CY ถูกเปรียบเทียบเพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ cFos, FosB หรือΔFosB เกี่ยวข้องโดยตรงกับผลตอบแทนทางเภสัชวิทยาของโคเคน เนื้อเยื่อจากทุกกลุ่มการศึกษาจะถูกเก็บรวบรวมทันทีหลังจากช่วงทดสอบ 12.5 h สุดท้ายเพื่อเปรียบเทียบการควบคุมโคเคนที่เกิดขึ้นของ cFos, FosB และΔFosBและการคงอยู่ของการเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากโคเคนถูกกำหนดสำหรับกลุ่มศึกษาที่มีเนื้อเยื่อที่รวบรวม 4 h หรือ 24 สัปดาห์หลังจากการทดสอบขั้นสุดท้าย ใช้วิธี Western blot เชิงปริมาณและ RT-PCR ในการแยกส่วนย่อยของ striatal เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาที่อาจเกิดขึ้นเกี่ยวกับ antibody cross-reactivity และปรับปรุงความไวในการตรวจจับการเปลี่ยนแปลง

รูป 1  

(A) Timeline แสดงให้เห็นถึงการควบคุมและถอนโคเคน (WD) เส้นทึบแสดงถึงการให้ยาโคเคนทางหลอดเลือดดำ (0.5 mg / kg / infusion) ในโคเคนเรื้อรังที่จัดการด้วยตนเอง (CSA) และสัตว์เทียมแอก (CY) ทั้งหมด ...

การสะสมเนื้อเยื่อ

หนูถูกสังเวยด้วยการฉายรังสีไมโครเวฟมุ่งไปที่บริเวณส่วนหัว (5 kW, 1.5 s, Murimachi Kikai, โตเกียว, ญี่ปุ่น) สมองถูกผ่าและเยือกเย็นอย่างรวดเร็วและการเจาะเนื้อเยื่อทวิภาคี (14 เกจ) ของเปลือกนิวเคลียส (NAc), แกน NAc, และแกน Caudate-putamen (CPu) ได้มาจากชิ้นส่วนโคโรนา 1.5 มม. ตามพิกัดที่ได้จาก Paxinos and Watson (1998)แสดงในรูป รูปที่ 1B) ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดย sonication ใน lysis buffer ที่มี protease และ phosphatase inhibitors จากนั้นโฮโมจีเนทจะถูกต้มเพื่อ 5 นาทีวางบนน้ำแข็งจากนั้นจึงทำการตรวจสอบโดย Lowry เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีน จากนั้นโฮโมจีเนตจะถูกแบ่งส่วนในตัวอย่าง 20 μgและเก็บไว้ที่ -80 ° C จนกระทั่งใช้งาน

Western Blots

ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกโหลดลงบนเจลโพลีอะคริลาไมด์ 12% เพื่อแยกโดยอิเล็กโตรโฟรีซิสในสารละลายทริส / กลีซีน / โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตบัฟเฟอร์เกลือ (TGS; Bio-Rad, Hercules, CA) หลังจากการแยกสารตัวอย่างถูกถ่ายโอนด้วยอิเลคโตรโฟเรซิส (250 mA สำหรับ 18 h) ไปยังเยื่อหุ้มพอลิไวนิลฟลูออไรด์ (PVDF; Amersham, Piscataway, NJ) และต่อมาบล็อกใน 3% Trat / Tween - เรย์เฮอร์คิวลิสแคลิฟอร์เนีย) ค้างคืนที่ 1 ° C เมมเบรนถูกนำไปบ่มใน 4: การเจือจาง 1 ของแอนติบอดี้เฟรดหลัก (กรุณาจัดทำโดยดร. Michael Iadarola สถาบันสุขภาพแห่งชาติ, Bethesda, MD) ในสารละลาย 1000% TTBS ข้ามคืนที่ 3 ° C. เมมเบรน ใน 1 × TTBS (4 ครั้ง, 1 ขั้นต่ำแต่ละครั้ง), และบ่มใน 4 × TTBS ที่มี 15: การเจือจาง 1 ของแอนติบอดีรองกระต่ายกับแอนติบอดีต่อมะรุม peroxidase (Bio-Rad, Hercules, CA) อุณหภูมิ. เมมเบรนถูกล้างอีกครั้งแล้วพัฒนาโดยใช้ Pierce Super Signal West Dura (Thermo Fisher Scientific Inc. , Rockford, IL) การตรวจหาสารเคมีที่เป็นสื่อกลางใน Hyperfilm (ECL plus; Amersham) การแปลแถบโปรตีน cFos, FosB และΔFosBมีการแสดงไว้ รูป 1C. เราเลือกที่จะตรวจสอบเฉพาะรูปแบบที่แสดงออกอย่างเสถียรของΔFosB (เช่น 35-37 kDa) ในการศึกษานี้เนื่องจากเป็นรูปแบบเหล่านี้ที่คิดว่าจะสะสมด้วยการใช้ยาเรื้อรังและสร้างระบบประสาทที่ติดยาเสพติด (Nestler เอตอัล 2001) Scion Image (Frederick, MD) ใช้เพื่อกำหนด immunoreactivity แบบสัมบูรณ์ให้กับวงดนตรีและสแกนเนอร์ถูกใช้เพื่อถ่ายภาพดิจิทัลของภาพยนตร์ หลังจากการตรวจจับเยื่อหุ้มเซลล์จะถูกถอดออกและตรวจสอบอีกครั้งสำหรับ tub-tubulin (1: 200000, การส่งสัญญาณของเซลล์, เดนเวอร์, แมสซาชูเซต) ระดับ tub-tubulin ถูกใช้เป็นตัวควบคุมการโหลดเพื่อทำให้ปกติระดับของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ Fos

RT-PCR

Quantitative RT-PCR (qRT-PCR) ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของ FosB และΔFosB mRNA ทันทีและ 24 ชั่วโมงหลังจากการบริหารโคเคน สัตว์ถูกกำจัดโดยการตัดหัวอย่างรวดเร็วและแกน NAc, เปลือก NAc และ CPu ถูกแยกตามที่อธิบายไว้ (ทำจากแป้งที่ยังไม่ได้ร่อน เอตอัล 2007; Bachtell เอตอัล 2008). ตัวอย่างแต่ละตัวอย่างถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันทันทีใน RNA-STAT-60 (IsoTex Diagnostics Inc, Friendswood, TX) และแช่แข็งบนน้ำแข็งแห้งจนกว่า mRNA จะถูกสกัดตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในเวลาสั้น ๆ มีการเติมคลอโรฟอร์มลงในแต่ละตัวอย่างและชั้นน้ำจะถูกแยกออกหลังจากการหมุนเหวี่ยง mRNA ทั้งหมดถูกตกตะกอนด้วยไอโซโพรพานอลต่อหน้าอะคริลาไมด์เชิงเส้น (Ambion, Austin, TX) ตัวอย่างถูกปั่นเหวี่ยงและเม็ด mRNA ที่สกัดได้ถูกล้างด้วยเอทานอล 70% และนำกลับมาใช้ใหม่ในน้ำ DEPC mRNA ทั้งหมดได้รับการบำบัด DNAase (Ambion, Foster City, CA) และแปลงสัญญาณย้อนกลับไปยัง cDNA ด้วย hexamers แบบสุ่มโดยใช้ Superscript III (Invitrogen, Carlsbad, CA) ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้ขยาย FosB, ΔFosBและ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) คือ 5′-GTGAGAGATTTGCCAGGGTC-3 ′และ 5′-AGAGAGAAGCCGTCAGGTTG-3′, 5′-AGGTTCAG′GGAGTCGACT ′และ 3′-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-5′ และ 3′-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-5 ′ตามลำดับ เกณฑ์วัฏจักร (cT) คำนวณจากปฏิกิริยาสามเท่าโดยใช้อนุพันธ์อันดับสองของเส้นโค้งการขยาย ค่า FosB และΔFosB cT ถูกทำให้เป็นค่ามาตรฐานของ GAPDH cT (ΔcT) เนื่องจาก GAPDH ไม่ได้ถูกควบคุมโดยโคเคน การเปลี่ยนแปลงการพับคำนวณโดยใช้วิธีΔΔcTตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (คู่มือ Applied Biosystems)

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ระดับของโปรตีนแต่ละตัวแสดงเป็น% การเปลี่ยนแปลงจากการควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษาสำหรับแต่ละบริเวณของสมองและจุดเวลาและกลุ่มการศึกษาได้รับการเปรียบเทียบโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) โดยมีระดับนัยสำคัญที่กำหนดไว้ที่ p <0.05 ผลกระทบโดยรวมตามมาด้วยการเปรียบเทียบหลังการทดลองโดยใช้การทดสอบ LSD ของ Fishers ความสัมพันธ์ระหว่างการบริโภคโคเคนและการเปลี่ยนแปลงของระดับโปรตีนได้รับการประเมินโดยใช้การถดถอยเชิงเส้น

ผลสอบ

สัตว์ในกลุ่ม CSA ที่ได้รับอนุญาตให้จัดการโคเคนด้วยตนเองโดยสมัครใจมีรูปแบบที่มั่นคงของการจัดการโคเคนด้วยตนเองในสัปดาห์ที่สามของ SA (วัน 13-18) ในช่วงสัปดาห์สุดท้ายของ SA ปริมาณโคเคนเฉลี่ยต่อวันในหนู CSA และพันธมิตร CY ของพวกเขาคือ 46.9 (± 1.8) mg / kg / วัน (ช่วง: 37-60 mg / kg / วัน) ในวันทดสอบสุดท้าย CSA หนูในการถอน 0 h (WD) กลุ่มที่ได้รับการจัดการด้วยตนเอง 44.5 (± 2.5) mg / kg โคเคน (ช่วง 25.5-57.5 mg / kg) และได้รับปริมาณโคเคนเท่ากัน และพันธมิตรของ AY

กฎระเบียบที่แตกต่างกันของโปรตีน osFosB ในภูมิภาคย่อยสลายหลังจากโคเคนเฉียบพลันหรือเรื้อรัง

กฎระเบียบที่แตกต่างของโปรตีน osFosB ถูกพบใน subregions striatal ทันทีหลังจาก 4 h ของการบริหารโคเคนทางหลอดเลือดดำ (0 h WD) ในเปลือก NAc มีเพียงโคเคนเรื้อรังเท่านั้นที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม CSA และ CY (45-61%) เมื่อเทียบกับการควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 2A, F4,60 = 4.22, p = 0.005) ในแกน NAc พบการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน osFosB (41%) หลังจากได้รับสารเฉียบพลันในกลุ่ม AY (รูปที่ 2B, F4,60 = 17.04, p <0.001) และพบว่าเพิ่มมากขึ้น (89-95%) หลังโคเคนเรื้อรัง ในทางตรงกันข้ามกับการสะสมของΔFosBใน NAc ที่มากขึ้นด้วยการให้โคเคนแบบเรื้อรัง CPu พบว่าΔFosBเพิ่มขึ้น (86-102%) ในกลุ่มโคเคนทั้งเฉียบพลันและเรื้อรัง (รูปที่ 2C, F4,78 = 19.09, p <0.001) ไม่มีความแตกต่างในการเพิ่มขึ้นของΔFosBระหว่างกลุ่ม CSA และ CY ในภูมิภาคย่อยใด ๆ ที่แสดงให้เห็นว่ากฎระเบียบเกี่ยวข้องกับการสัมผัสโคเคนโดยไม่คำนึงถึงการบริโภคโคเคนในเชิงรุก กฎข้อบังคับของΔFosBยังคงมีอยู่เป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมงหลังจากโคเคนเรื้อรังในเปลือก NAc (F2,32 = 5.19, p = 0.02) แกน NAc (F4,60 = 4.53, p = 0.02) และ CPu (F2,34 = 12.13, p <0.001) แต่กลับสู่ระดับพื้นฐานหลังจาก 3 สัปดาห์ พบการเพิ่มขึ้นที่คล้ายคลึงกันของ SimilarFosB เมื่อเปรียบเทียบกลุ่มโคเคนกับกลุ่ม Saline SA ยกเว้นการเพิ่มขึ้นเล็กน้อยในเปลือก NAc ของสัตว์ AY มีความสำคัญเมื่อเทียบกับ Saline SA แต่ไม่ใช่กับการควบคุมที่ไม่ผ่านการบำบัด อย่างไรก็ตามไม่มีข้อบังคับที่สำคัญของΔFosBในสัตว์ที่ให้น้ำเกลือด้วยตนเองตลอดการฝึกเมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมที่ไม่ได้รับการบำบัดซึ่งบ่งชี้ว่าการควบคุมΔFosBเป็นผลมาจากโคเคนไม่ใช่ผลจากขั้นตอนการผ่าตัดหรือการทดสอบ

รูป 2  

กฎระเบียบของΔFosBทันทีหลังจากการบริหารโคเคนและที่ 24 h และ 3 สัปดาห์ WD ระดับของΔFosB (35-37 kDa) จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±การเปลี่ยนแปลงร้อยละ SEM จากการควบคุมการกลับบ้านที่ไม่ได้รับการรักษา (การควบคุม) เนื้อเยื่อจากน้ำเกลือ ...

ความทนทานต่อการควบคุมโปรตีน FosB หลังจากโคเคนเรื้อรัง

ในทางตรงกันข้ามกับกฎระเบียบของΔFosBการสัมผัสเพียงครั้งเดียวกับ 4 h ของการบริหารโคเคน IV ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของโปรตีน FosB ใน 3 striatal subregions ทั้งหมด แต่ความอดทนอย่างมากในการตอบสนองนี้พัฒนาขึ้นหลังจากการบริหารโคเคนเรื้อรัง ในเปลือก NAc, FosB เพิ่มขึ้น (260%) ทันทีหลังจาก 4 h ของการบริหารโคเคนเฉียบพลันในสัตว์ AY แต่การเพิ่มขึ้นเหล่านี้ลดลง (เป็น 142-146%) หลังจากการบริหารเรื้อรังในกลุ่ม CY และ CSA (รูปที่ 3A, F4,77 = 23.16, p <0.001) พบการเพิ่มขึ้นของ FosB (295%) ที่คล้ายคลึงกันใน CPu ของสัตว์ AY ที่ลดลงเช่นกัน (ถึง 135-159%) หลังการให้โคเคนเรื้อรังในกลุ่ม CY และ CSA (รูปที่ 3C, F4,69 = 13.362, p <0.001) ในแกนกลาง NAc การให้โคเคนแบบเฉียบพลันทำให้ FosB เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (164%) ในสัตว์ AY เมื่อเทียบกับบริเวณสมองอื่น ๆ อย่างไรก็ตามการเพิ่มขึ้นเหล่านี้ยังคงมากกว่าที่เกิดขึ้นหลังจากการให้ยาเรื้อรัง (109-112-%) ในกลุ่ม CY และ CSA (รูปที่ 3B, F4,57 = 20.23, p <0.001) ตามที่พบในΔFosBกฎระเบียบของ FosB หลังจากโคเคนเรื้อรังไม่ได้รับการปรับเปลี่ยนโดยการควบคุมปริมาณโคเคนโดยปริมาตร อย่างไรก็ตามในทางตรงกันข้ามกับΔFosBการเพิ่มขึ้นของโปรตีน FosB ล้มเหลวที่จะคงอยู่ทั้งในเปลือก NAc และแกนหลังจาก 24 ชั่วโมงแม้ว่าการเพิ่มที่เหลือ (38-52%) จะยังคงอยู่ใน CPu (F2,32 = 3.590, p <0.05) ระดับ FosB ไม่ได้รับผลกระทบจากขั้นตอนการผ่าตัดหรือการทดสอบในสัตว์ที่ให้น้ำเกลือด้วยตนเอง

รูป 3  

ระเบียบของ FosB ทันทีหลังจากการบริหารโคเคนและที่ 24 h และ 3 สัปดาห์ WD ระดับโปรตีนของ FosB (46-50 kDa) แสดงว่าเป็นค่าเฉลี่ย± SEM เปอร์เซ็นต์การเปลี่ยนแปลงจากการควบคุมการฆ่าสัตว์ที่ไม่ได้รับการรักษา (ดู รูป 2 ตำนานสำหรับตัวย่อ) ...

การลดการเหนี่ยวนำทั้งΔFosBและ FosB mRNA หลังจากโคเคนเรื้อรัง

การสัมผัสกับ 4 h ของการบริหารโคเคนทางหลอดเลือดดำอย่างเฉียบพลันทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นคล้ายกัน (11-16 fold) ในΔFosB mRNA ใน NAc shell (F3,19 = 15.82, p <0.001), แกน NAc (F3,19 = 13.275, p <0.001 และ CPu (F3,11 = 5.78, p = 0.03) เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุม Saline SA (0 h WD, รูปที่ 4A) อย่างไรก็ตามการตอบสนองนี้ถูกระงับอย่างมากในกลุ่ม CY และ CSA หลังจากการบริหารโคเคนเรื้อรังใน NAc เชลล์ (3-4 fold), NAc core (4 fold) และ CPu (3 fold) แม้ว่าการบริหารโคเคน IV แบบเฉียบพลันจะสร้างโปรตีน FosB เพิ่มขึ้นมากกว่าเมื่อเทียบกับΔFosB แต่การบริหารโคเคนเฉียบพลันทำให้ mRNA เพิ่มขึ้นค่อนข้างต่ำใน mRNA สำหรับ FosB (4-9 fold) ใน 11-16 ทุกส่วนย่อยรูปที่ 4B) การตอบสนองนี้ถูกยกเลิกจริงหลังจากโคเคนเรื้อรังในเปลือก NAc (F3,19 = 26.22, p <0.001) และ CPu (F3,11 = 4.24, p <0.05) แม้ว่าจะเพิ่มขึ้นเล็กน้อย แต่มีนัยสำคัญ (2 เท่า) ยังคงอยู่ในกลุ่ม CY และ CSA ในแกน NAc (F3,19 = 11.10, p <0.001) การเพิ่มขึ้นที่เกิดจากโคเคนทั้งในΔFosBและ FosB ในสัตว์ AY ไม่ได้ถูกเก็บไว้หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง WD เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม Saline SA เดียวกันนี้ การวิเคราะห์เพิ่มเติมเกี่ยวกับอัตราส่วนของ FosB ต่อΔFosB mRNA ที่จุดเวลา 0 ชั่วโมงของ WD แสดงให้เห็นว่าการให้โคเคนลดปริมาณสัมพัทธ์ของ FosB ลงอย่างเห็นได้ชัดเป็นΔFosB mRNA ในเปลือก NAc (F3,19 = 4.79, p = 0.02) แกน NAc (F3,19 = 4.49, p = 0.02) และ CPu (F3,11 = 5.59, p = 0.03) เนื่องจากการสะสมของไอโซฟอร์มΔFosBที่มากขึ้นและไม่คำนึงถึงความทนทานต่อการตอบสนองที่เกิดจากโคเคนใน mRNAs ทั้งสองหลังจากการบริหารเรื้อรังรูปที่ 4C) ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในอัตราส่วนเหล่านี้ไม่ว่าโคเคนจะได้รับการจัดการด้วยตนเองหรือได้รับอย่างอดทนโดยการแช่แบบแอกและอัตราส่วนสัมพัทธ์ของ FosB: ΔFosBได้กลับสู่ภาวะปกติในพื้นที่สมองทั้งสามโดยจุดเวลา 24h WD (ไม่แสดงข้อมูล)

รูป 4  

กฎระเบียบของ mRNA สำหรับ FosB และΔFosBทันทีหลังจากการบริหารโคเคนและที่ 24 h WD RT-PCR เชิงปริมาณของการถอดเสียงสำหรับΔFosB (A), FosB (B) และอัตราส่วน FosB / ΔFosB transcripts (C) แสดงเป็นค่าเฉลี่ย± ...

ค่าเผื่อที่เกี่ยวข้องกับการเสริมแรงให้กับโคฟอรัสที่เกิดจากโคเคนใน NAc

ในทางตรงกันข้ามกับกฎระเบียบของผลิตภัณฑ์ยีน FosB ที่เป็นตัวแทนของการตอบสนองทางเภสัชวิทยาต่อโคเคนโดยไม่คำนึงถึงการบริหารเชิงรับหรือเชิงปฏิบัติกฎระเบียบของ cFos ในอนุภูมิภาค NAc ได้รับอิทธิพลอย่างมากจากบริบทของการบริหารตนเองโคเคนเมื่อเทียบกับสัตว์ที่ได้รับโคเคน การสัมผัสโคเคนเพิ่มระดับโปรตีน cFos (109-126%) ทั้งในเปลือก NAc และแกนด้วยการบริหารแบบเฉียบพลันหรือเรื้อรังทั้งในกลุ่ม AY และ CY (รูปที่ 5A-B) อย่างไรก็ตามเมื่อมีการฉีดโคเคนในรูปแบบการตอบสนองโดยบังเอิญในสัตว์ที่เลี้ยงด้วยตนเองการตอบสนองนี้จะลดลง (เหลือ 55%) ใน NAc shell (F4,60 = 9.14, p <0.001) และล้มเหลวในการเพิ่ม cFos ในแกน NAc อย่างมีนัยสำคัญ (F4,57 = 5.92, p <0.001) ใน CPu ความอดทนต่อ cFos ที่เกิดจากโคเคนซึ่งพัฒนาขึ้นด้วยการให้โคเคนแบบพาสซีฟหรือแบบระเหยแบบเรื้อรัง (รูปที่ 5C) และการเหนี่ยวนำ cFos ในสัตว์ AY (164%) ลดลง (เป็น 45-57%) ในทั้ง CY และ CSA กลุ่ม (F4,67 = 13.29, p <0.001) คล้ายกับการพัฒนาความทนทานต่อการเหนี่ยวนำของโปรตีน FosB ในอนุภูมิภาคทั้ง 3 striatal ดังนั้นความอดทนที่เกี่ยวข้องกับการเสริมแรงต่อ cFos ที่เกิดจากโคเคนจึงเกิดขึ้นโดยเฉพาะในบริเวณ mesolimbic ของ striatum ในทั้ง 3 ภูมิภาค striatal ไม่พบการเพิ่มขึ้นของ cFos ในสัตว์ที่ให้น้ำเกลือด้วยตนเองและไม่สามารถคงอยู่ได้หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง WD

รูป 5  

กฎระเบียบของ cFos ทันทีหลังจากการบริหารโคเคนและที่ 24 h WD ระดับโปรตีนของ cFos (52-58 kDa) ในหนูควบคุม (ควบคุม, Saline SA), ในหนูที่ได้รับโคเคนแอกแอกทีแบบแอกทีฟ (AY) หรือเรื้อรัง (CY) และในหนูที่ได้รับ ...

ความสัมพันธ์ระหว่างการบริโภคโคเคน cFos และΔFosBในภูมิภาคย่อย striatum

เนื่องจากปริมาณโคเคนในการจัดการตนเองแตกต่างกันไปในสัตว์แต่ละตัวและคู่นอนที่มีโคเคนพวกเราจึงเปรียบเทียบปริมาณโคเคนที่บริโภคกับการเหนี่ยวนำของ cFos, FosB และ osFosB ระดับโปรตีนโดยการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นหลายแบบ (ดู ตารางเสริม 1 สำหรับผลลัพธ์ของความสัมพันธ์ที่อาจเกิดขึ้นทั้งหมด) มีความสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญระหว่างปริมาณโคเคนและระดับ cFos ในหนูที่ได้รับการบริหารโคเคนเฉียบพลันโดย infusions แฝงและความสัมพันธ์เหล่านี้แตกต่างกันใน subregions หลังและท้อง ventral ในแกน NAc การเหนี่ยวนำของ cFos ทันทีหลังจาก 4 h ของการบริหารโคเคนเฉียบพลัน IV มีความสัมพันธ์อย่างมากและมีความสัมพันธ์เชิงลบกับปริมาณโคเคนในขณะที่ความสัมพันธ์ที่คล้ายกัน แต่ไม่มีนัยสำคัญพบได้ในเปลือก NAc (มะเดื่อ. 6) ในทางตรงกันข้ามการเหนี่ยวนำของ cFos มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับปริมาณโคเคนใน CPu ไม่มีความสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญระหว่างปริมาณโคเคน (ทั้งที่ทำงานหรือไม่โต้ตอบ) และระดับโปรตีนของ FosB หรือΔFosBในทุกภูมิภาคย่อย อย่างไรก็ตามมีความสัมพันธ์เชิงบวกที่แข็งแกร่งระหว่างระดับของ cFos และΔFosBใน NAc shell 24 h หลังจากโคเคน แต่เฉพาะในสัตว์ที่ได้รับโคเคนผ่านการจัดการด้วยตนเองตามความต้องการ (มะเดื่อ. 7) และแม้จะมีความจริงที่ว่าระดับ cFos โดยรวมไม่ได้เปลี่ยนแปลงที่ 24 h WD แนวโน้มที่คล้ายกัน (p <0.07) สำหรับความสัมพันธ์เชิงบวกระหว่างระดับโปรตีน cFos และΔFosBพบทันทีหลังจากการให้โคเคน 4 ชั่วโมงในแกน NAc และใน CPu ของสัตว์ที่ได้รับโคเคนเป็นครั้งแรก (กลุ่ม AY)

รูป 6  

ความสัมพันธ์เฉพาะภูมิภาคระหว่างการบริโภคโคเคนและภูมิคุ้มกันของ cFos หลังจากโคเคนเฉียบพลัน (AY) เปอร์เซ็นต์การเพิ่มขึ้นของ cFos immunoreactivity มีความสัมพันธ์เชิงลบกับปริมาณโคเคนในช่วงสุดท้ายของแกน NAc (A) และมีความสัมพันธ์เชิงบวก ...
รูป 7  

ความสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญระหว่าง cFos และ osFosB ใน NAc shell ในสัตว์ที่เลี้ยงด้วยตนเอง เปอร์เซ็นต์การเพิ่มขึ้นของ cFos immunoreactivity มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับΔFosB immunoreactivity หลังจาก 24 h WD ในการจัดการโคเคนด้วยตนเอง ...

การสนทนา

ในการศึกษาปัจจุบันเราตรวจสอบผลกระทบของการได้รับโคเคนทางหลอดเลือดดำเฉียบพลันและเรื้อรังหรือการบริหารตนเองแบบเรื้อรังต่อการควบคุมระดับΔFosB, FosB และ cFos ในเปลือก NAc แกน NAc และอนุภูมิภาค CPu striatal การศึกษาก่อนหน้านี้พบอย่างต่อเนื่องว่าΔFosBเพิ่มขึ้นหลังจากได้รับสัมผัสซ้ำ ๆ และไม่ใช่หลังจากการบริหารโคเคนเฉียบพลันโดยใช้การฉีดโคเคน IP แบบพาสซีฟ (หวัง เอตอัล 1994, ไนย์ เอตอัล 1995; เฉิน เอตอัล 1995). ในทำนองเดียวกันเราพบว่าการได้รับโคเคน IV แบบเรื้อรังเพิ่มขึ้นΔFosBในทุกภูมิภาคย่อยที่ตรวจพบโดยไม่คำนึงว่ามันจะได้รับการบริหารในรูปแบบตามลำดับหรือแฝง อย่างไรก็ตามความแตกต่างที่สำคัญจากการศึกษาก่อนหน้านี้คือการบริหารโคเคนแบบเฉียบพลันเพิ่มระดับΔFosBโปรตีนในทั้งแกน NAc และ CPu และความสำคัญเข้าหาในเปลือก NAc (p <0.1) คำอธิบายที่เป็นไปได้อย่างหนึ่งสำหรับความแตกต่างนี้อาจเป็นปริมาณและ / หรือระยะเวลาของการได้รับโคเคนเนื่องจากหนูในกลุ่ม AY ได้รับการฉีดโคเคนหลายครั้งในช่วง 4 ชั่วโมงเดียวส่งผลให้ปริมาณโคเคนทั้งหมดอยู่ระหว่าง 25.5 ถึง 57.5 มก. สัตว์แต่ละตัวซึ่งเกินปริมาณ 10-20 มก. / กก. มักใช้กับการฉีด IP ยาเม็ดเดียว (หวัง เอตอัล 1994; Lee เอตอัล 2006) นอกจากนี้โคเคนยังดำเนินการผ่านเส้นทาง IV โดยตรงของการบริหารซึ่งสร้างระดับสูงสุดของโคเคนและโดปามีนในสมองซึ่งคงอยู่ตลอดเซสชั่นในขณะที่ผลกระทบเหล่านี้มักจะจางหายไปภายในหนึ่งชั่วโมงหลังจากฉีด IPBradberry, 2002) ดังนั้นความสามารถของΔFosBในการสะสมหลังจากสัมผัสโคเคนแบบเฉียบพลันเพียงครั้งเดียวจึงขึ้นอยู่กับความแข็งแกร่งและระยะเวลาของการกระตุ้นโคเคนที่ใช้ในการศึกษานี้ ไม่ว่าในกรณีใดการค้นพบที่ΔFosBสามารถสะสมหลังจากสัมผัสโคเคนเพียงครั้งเดียวบ่งชี้ว่าΔFosBสามารถออกฤทธิ์ได้เร็วกว่าที่คิดไว้ก่อนหน้านี้ซึ่งอาจเป็นผลมาจากการดื่มสุราด้วยตนเอง

ที่น่าสนใจคือปริมาณของการสะสมΔFosBนั้นแตกต่างกันระหว่างบริเวณหลังและส่วนหน้าท้องส่วนล่างในช่วงที่มีการบริหารโคเคนเรื้อรัง ในแกน NAc ปริมาณของΔFosBที่พบทันทีหลังจากวันสุดท้ายของการบริหารเรื้อรัง (0 h WD) มากกว่าสองเท่าของปริมาณที่พบหลังจากการบริหารแบบเฉียบพลันและการเพิ่มขึ้นของΔFosBในเปลือก NAc มีความสำคัญเฉพาะหลังจากการบริหารเรื้อรัง ไม่ว่าโคเคนจะได้รับการจัดการด้วยตนเองหรือได้รับจากการแช่แอกแบบพาสซีฟ เพิ่มขึ้นด้วยการบริหารโคเคนเรื้อรังอาจสะท้อนให้เห็นการสะสมของโปรตีนΔFosBที่มีความเสถียรสูงเนื่องจากมันคงอยู่อย่างน้อย 24 ชั่วโมงหลังจากการสัมผัสครั้งสุดท้าย ในทางตรงกันข้ามการเพิ่มขึ้นจำนวนมากของΔFosBใน CPu ล้มเหลวในการแตกต่างจากการได้รับเฉียบพลันหรือเรื้อรังอาจสะท้อนเพดานที่เกิดจากการสัมผัสเฉียบพลันในพื้นที่สมองนี้ อย่างไรก็ตามแม้จะอยู่ใน CPu การสะสมของโปรตีน osFosB น่าจะเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องในระดับΔFosBหลังจากการสัมผัสเรื้อรังเนื่องจากความอดทนอย่างมากพัฒนาขึ้นเพื่อ mRNA โคเคนที่เกิดขึ้นสำหรับΔFosBในทุกพื้นที่สมอง 3 ที่มีการบริหารเรื้อรัง

การใช้โคเคนแบบเฉียบพลันยังช่วยเพิ่มระดับโปรตีน FosB ที่มีความยาวเต็มที่โดยมีการเพิ่มขึ้นของเปลือก CPu และ NAc มากกว่าแกน NAc อย่างไรก็ตาม mRNA สำหรับ FosB ถูกเหนี่ยวนำโดยเปลือก NAc เกือบ 10 เท่าและน้อยกว่า 5 เท่าในแกน CPu และ NAc ความทนทานที่สำคัญที่พัฒนาขึ้นเพื่อความสามารถของโคเคนในการกระตุ้นทั้ง mRNA และโปรตีนสำหรับ FosB ด้วยการบริหารแบบเรื้อรังแม้ว่าการเหนี่ยวนำโปรตีน FosB จะยังคงอยู่และอาจแข่งขันกับΔFosBสำหรับคู่ค้าที่มีผลผูกพัน AP-1 ได้ อัตราส่วนสัมพัทธ์ของ FosB / ΔFosB mRNA ก็ลดลงด้วยการให้โคเคนเฉียบพลันเนื่องจากการเหนี่ยวนำΔFosBค่อนข้างมากขึ้นซึ่งสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้โดยใช้แอมเฟตามีนAlibhai เอตอัล 2007) ในทางตรงกันข้ามกับการค้นพบก่อนหน้านี้กับการรักษายาบ้าซ้ำการลดสัดส่วนสัมพัทธ์ของ FosB / ΔFosB mRNA โดยโคเคนเฉียบพลันยังคงอยู่หลังจากการบริหารเรื้อรังสะท้อนการเหนี่ยวนำที่เหลือของ residFosB ที่ค่อนข้างสูงกว่า FosB

ความจริงที่ว่าระดับΔFosBเพิ่มขึ้นหลังจากแม้แต่โคเคนเฉียบพลันที่ใช้รูปแบบและระยะเวลาในการบริหารทั่วไปของการใช้ยาทางหลอดเลือดดำของมนุษย์มีความหมายที่สำคัญสำหรับกระบวนการติดยาเสพติด ดังนั้นΔFosBสามารถนำไปสู่กิจกรรมการผูก AP-1 กับการใช้โคเคนเริ่มต้นหากปริมาณที่เพียงพอได้รับการจัดการด้วยตนเอง อย่างไรก็ตามΔFosBจะแข่งขันกับทั้ง FosB และ cFos สำหรับกิจกรรม AP-1 ที่นำไปสู่การแสดงออกของยีนปลายน้ำและระบบประสาทที่แตกต่างจากการบริหารเรื้อรังเมื่อΔFosBสูงขึ้นด้วย cFos และ FosB ที่ลดลงอย่างมาก ดังนั้นΔFosBอาจมีผลกระทบมากขึ้นหลังจากการบริหารโคเคนเรื้อรังเนื่องจากทั้งการสะสมใน ventral striatum และการแข่งขันลดลงสำหรับพันธมิตร AP-1 ที่มีผลผูกพันทั้งในส่วนหลังและ ventral striatum เนื่องจากการแสดงออกที่เฉพาะเจาะจงของ striatal ของΔFosBเพิ่มแรงจูงใจสำหรับโคเคน (คอล เอตอัล 2003) การสะสมอย่างรวดเร็วของΔFosBเมื่อมีการสัมผัสโคเคนเริ่มแรกอาจทำให้การใช้โคเคนยาวนานขึ้นในช่วงแรกของกระบวนการติดยาเสพติด ยิ่งไปกว่านั้นการแสดงออกของΔFosBที่โดดเด่นและแพร่หลายเช่นนี้ตลอดทั้ง striatum ด้วยการสัมผัสอย่างเฉียบพลันจะเปลี่ยนแปลงกิจกรรมที่มีผลผูกพัน AP-1 ในลักษณะที่สามารถช่วยในการสร้างนิสัยซึ่งต้องกระทำผ่านการหมั้นในช่วงต้นของวงจรหลังคลอดเบลินและเอเวอเรตต์ 2008).

เมื่อพิจารณาถึงความเสถียรของไอโซฟอร์มΔFosBระดับΔFosBยังคงเพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดในชั่วโมง 24 หลังจากช่วงการบริหารโคเคนครั้งล่าสุดสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้าโดยใช้การบริหารโคเคนทางหลอดเลือดดำเรื้อรัง (Pich เอตอัล 1997; Perotti เอตอัล 2008) การศึกษาอื่น ๆ ที่ใช้การบริหารจัดการผู้ทดลองโคเคนของการฉีดโคเคน IP พบว่าการสะสมΔFosBสามารถคงอยู่ต่อไปสำหรับการถอน 1-2 สัปดาห์ (หวัง เอตอัล 1994; Brenhouse และ Stellar, 2006; Lee เอตอัล 2006) แม้ว่าเราจะไม่พบหลักฐานสำหรับการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ 3 สัปดาห์หลังจากหยุดให้โคเคน การศึกษาเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการสะสมของΔFosBอาจยังคงมีอยู่เป็นระยะเวลาการถอนที่ค่อนข้างสั้น (<3 สัปดาห์) และมีส่วนโดยตรงต่อการใช้โคเคนอย่างต่อเนื่อง แต่อาจไม่ส่งผลโดยตรงให้มีแนวโน้มที่จะกำเริบมากขึ้นในการถอนเป็นเวลานาน อย่างไรก็ตามมีการตรวจพบภูมิคุ้มกันΔFosBในเซลล์ประสาท striatal ที่มีตัวรับ D1 หลังจากถอนตัวจากโคเคนซ้ำในหนู 30 วัน (Lee เอตอัล 2006) การสุ่มตัวอย่างเฉพาะเซลล์ดังกล่าวอาจมีความไวต่อการสะสมΔFosBที่เหลือมากกว่าการวิเคราะห์เนื้อเยื่อทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันหรือบางทีการเปลี่ยนแปลงของΔFosBเพียง แต่คงอยู่ในหนูนานกว่าหนู นอกจากนี้ยังเป็นไปได้ที่ BFosB จะก่อให้เกิดน้ำตกของเหตุการณ์การถอดความที่นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่ยาวนานเช่นการสร้างกระดูกสันหลัง dendritic ในเซลล์ประสาทที่ประกอบด้วย D1 (Lee เอตอัล 2006; เขาวงกต เอตอัล 2010) ในเรื่องนี้เป้าหมายΔFosBจำนวนมากรวมถึง Cdk5 และNFκBเพิ่มขึ้นหลังจากโคเคนเรื้อรังและปัจจัยเหล่านี้อาจแก้ไขวงจรนิวเคลียส accumbens ผ่านการเปลี่ยนแปลงในโครงสร้างของเซลล์ประสาทและ / หรือการทำงาน (อ่างทอง เอตอัล 2001; Benavides และ Bibb, 2004; Nestler, 2008) ดังนั้นจึงเป็นไปได้ที่การสะสมΔFosBอย่างต่อเนื่องในระหว่างการถอนนั้นไม่จำเป็นสำหรับผลกระทบในระยะยาวต่อพฤติกรรมการใช้ยาหรือการมองอนาคตในอนาคต แต่สามารถเป็นตัวแทนของ "สวิตช์ระดับโมเลกุล" ที่กระตุ้นกระบวนการเซลล์หลายเซลล์ สถานะทางชีววิทยาที่ติด (Nestler เอตอัล 2001).

Tเขานำเสนอการศึกษาพบว่าการสะสมโคเคนแบบΔFosBไม่ได้รับอิทธิพลจากการควบคุมปริมาณการบริโภคโคเคนในสัตว์ที่บริหารด้วยตนเองอย่างสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้โดยใช้วิธีการทางอิมมูโน (Perotti เอตอัล 2008; Pich เอตอัล 1997) สิ่งนี้บ่งชี้ว่าการเพิ่มขึ้นของโคเคนในΔFosBและ FosB น่าจะเกี่ยวข้องกับการตอบสนองทางเภสัชวิทยาต่อโคเคนหรือเหตุการณ์ปลายน้ำอื่น ๆ ของการส่งสัญญาณ monoaminergic receptor ตรงกันข้ามกับΔFosB เราพบว่าการพัฒนาความทนทานต่อ cFos ที่เกิดจากโคเคนนั้นได้รับอิทธิพลอย่างมากจากการควบคุมปริมาณการบริโภคโคเคนใน NAc แต่ไม่ได้อยู่ใน CPu ดังนั้นความอดทนต่อ cFos ที่เกิดจากโคเคนใน NAc ล้มเหลวที่จะเกิดขึ้นในสัตว์ที่ได้รับโคเคนแบบพาสซีฟโดยการแช่เยือกแข็งแบบเรื้อรังเมื่อเปรียบเทียบกับการแช่เยือกแข็งแบบเฉียบพลัน. การค้นพบเหล่านี้แตกต่างอย่างเห็นได้ชัดจากรายงานจำนวนมากที่มีความทนทานต่อ cFos ที่กระตุ้นให้เกิดอาการทางจิตใน NA เมื่อยาได้รับการฉีด IP แบบพาสซีฟหวัง เอตอัล 1994; ไนย์ เอตอัล 1995; เฉิน เอตอัล 1995, 1997; Alibhai เอตอัล 2007) เนื่องจากความอดทนต่อ cFos ในการดูแลตนเองของโคเคนในสัตว์มีการศึกษาหลายครั้งที่มีการฉีด IP ซ้ำหลายครั้งการขาดความอดทนกับการฉีดยาทางหลอดเลือดดำแบบเรื้อรังอาจเกี่ยวข้องกับความเครียดที่เกี่ยวข้องกับการฉีดโคเคนแบบแอกเทียมที่ไม่สามารถคาดเดาได้Goeders 1997) การสูญเสียความอดทนในหน้าท้องมากกว่าหลัง striatum จะสอดคล้องกับผลการคัดเลือกวงจรลิมบิกที่เกี่ยวข้องในการสร้างแรงบันดาลใจและการตอบสนองทางอารมณ์ นอกจากนี้ในขณะที่ความอดทนต่อการเหนี่ยวนำของ cFos เกิดขึ้นในโคเคนที่จัดการด้วยตนเองของสัตว์ แต่ก็ยังมีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ F50% ในโปรตีน cFos ใน NAc เชลล์ทันทีหลังจากการจัดการด้วยตนเองครั้งสุดท้ายและแนวโน้ม (p <0.1) สำหรับการเพิ่ม cFos ก็เกิดขึ้นในแกน เหตุผลของความคลาดเคลื่อนนี้อาจสะท้อนถึงความแตกต่างระหว่างการฉีด IP และการฉีด IV หลายครั้งในช่วง 4 ชั่วโมงตามที่กล่าวไว้ข้างต้น การเหนี่ยวนำที่ตกค้างของ cFos ใน NAc หลังจากการบริหารตัวเองด้วยโคเคนแบบเรื้อรังเป็นการค้นพบใหม่ที่บังคับให้มีการพิจารณาใหม่เกี่ยวกับบทบาทในกระบวนการติดยาโดยคอมเพล็กซ์ AP-1 ที่มี cFos, ΔFosBและ FosB ทั้งหมดจะอยู่ร่วมกันในระดับหนึ่งหลังจากการสัมผัสเรื้อรัง .

เมื่อไม่นานมานี้มีหลักฐานว่า cFos ถูกควบคุมโดยตรงโดยการสะสมΔFosBใน dorsal striatum (Renthal เอตอัล 2008) เป็นที่น่าสนใจที่ cFos ที่เกิดจากโคเคนใน CPu นั้นขนานกับการเพิ่มขึ้นของΔFosBเมื่อสัมผัสกับโคเคนเฉียบพลัน ความเป็นไปได้อย่างหนึ่งคือการสะสมของΔFosBกับการบริหารแบบเฉียบพลันเกิดขึ้นช้าเกินไปในเซสชัน 4 ชั่วโมงที่จะส่งผลกระทบต่อการเหนี่ยวนำ cFos ในขณะที่การปรากฏตัวของ 24 ชั่วโมงหลังจากโคเคนในสัตว์ที่ได้รับการรักษาเรื้อรัง แนวคิดนี้สอดคล้องกับแนวโน้ม (p = 0.067) สำหรับความสัมพันธ์เชิงบวกระดับปานกลางระหว่าง cFos และΔFosBระดับใน CPu ด้วยการบริหารโคเคนเฉียบพลัน (0 h WD) ความคิดนี้ยังสอดคล้องกับความสัมพันธ์เชิงบวกที่แข็งแกร่งระหว่างการชักนำ cFos และการบริโภคโคเคนใน CPu ของสัตว์ที่มีแอกเทียม การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าคล้ายกับΔFosBการตอบสนองของ cFos อาจสะท้อนถึงปริมาณโคเคนที่ได้รับ อย่างไรก็ตามใน NAc การสะสมของΔFosBที่มากขึ้นด้วยการบริหารโคเคนแบบแอกเรื้อรังไม่สามารถอธิบายได้ว่าขาดความอดทนในการตอบสนองของ cFos ในสัตว์เหล่านี้ ยิ่งไปกว่านั้นแม้ว่าความอดทนต่อการเหนี่ยวนำ cFos นั้นเห็นได้ชัดในสัตว์ที่เลี้ยงด้วยตนเอง แต่ความสัมพันธ์เชิงบวกที่แข็งแกร่งระหว่างระดับ cFos ที่เหลือและระดับΔFosBในเปลือก NAc หลังจากการถอน 24 h ไม่สนับสนุนปฏิสัมพันธ์เชิงลบระหว่าง cFos และΔFosBใน ventral striatum ข้อแตกต่างจากข้อมูล CPu ก็คือ cFos ในแกน NAc นั้นมีความสัมพันธ์เชิงลบมากกว่าเชิงบวกกับการบริโภคโคเคนทันทีหลังจากการบริหารโคเคนเฉียบพลัน

โดยรวมผลการศึกษาจากการศึกษาครั้งนี้ชี้ให้เห็นว่า cFos, FosB และΔFosBได้รับรูปแบบการแสดงออกในระดับภูมิภาคที่แตกต่างกันหลังจากการบริหารโคเคนทางหลอดเลือดดำเฉียบพลันและเรื้อรัง รูปแบบการแสดงออกเหล่านี้ขึ้นอยู่กับทั้งระยะเวลาและปริมาณของการเปิดรับยาและความอดทนต่อ cFos ที่เกิดจากโคเคนนั้นขึ้นอยู่กับการจัดการด้วยตนเองของโคเคน volitional ผลการศึกษายังแสดงให้เห็นว่าΔFosBสามารถสะสมกับการบริหารโคเคนทั้งแบบเฉียบพลันและเรื้อรังโดยการฉีดเข้าเส้นเลือดดำสนับสนุนความคิดที่ว่าการสะสมΔFosBอาจมีความสำคัญในกระบวนการเริ่มต้นที่ส่งเสริมพฤติกรรมการแสวงหาโคเคนที่เพิ่มขึ้นและนำไปสู่ ในท้ายที่สุดมันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องเข้าใจว่า canFosB สามารถมีอิทธิพลทางอ้อมต่อความอยากยาเสพติดในการถอนโดยใช้อิทธิพลระยะสั้นต่อการแสดงออกของยีนในระหว่างการใช้โคเคนและการถอนตัวเร็ว ความพยายามในการระบุเป้าหมายดาวน์สตรีมต่าง ๆ และผลกระทบที่มีต่อสัณฐานวิทยาของเซลล์ประสาทและ / หรือการทำงานในท้ายที่สุดจะทำให้ชัดเจนบทบาทของ roleFosB และแอนติเจนที่เกี่ยวข้องกับ Fos อื่น ๆ ในการแสดงออกของพฤติกรรมเสพติด

วัสดุเสริม

ตารางเสริม S1

ตารางเสริม 1. ผลสหสัมพันธ์โดยรวมสำหรับการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น แผงด้านซ้ายสามแผงมีความสัมพันธ์ระหว่างปริมาณโคเคนและระดับของ cFos (แผงด้านบน), FosB (แผงกลาง) หรือΔFosB (แผงด้านล่าง) แผงด้านขวาสามแผงประกอบด้วยความสัมพันธ์ระหว่าง cFos และΔFosB (แผงด้านบน), cFos และ FosB (แผงกลาง) และ FosB และΔFosB (แผงด้านล่าง) บริเวณสมองสัมพัทธ์และจุดเวลา WD จะแสดงสำหรับการวิเคราะห์แต่ละรายการพร้อมกับค่า r- และ p ที่เกี่ยวข้อง * หน้า <0.05, T0.1> p> 0.05

กิตติกรรมประกาศ

ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์เกี่ยวกับงานนี้ งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย NIH ให้การสนับสนุน DA 10460 และ DA 08227 และโดยศาสตราจารย์ Wesley Gilliland ในการวิจัยด้านชีวการแพทย์

ตัวย่อที่ใช้

  • ซีพียู
  • caudate-putamen
  • NAC
  • นิวเคลียส accumbens
  • AY
  • แอกเฉียบพลัน
  • CY
  • แอกเรื้อรัง
  • CSA
  • โคเคนการบริหารตนเอง
  • WD
  • ถอนเงิน
  • IV
  • ฉีดยาเข้าเส้นเลือดดำ
  • IP
  • เยื่อบุช่องท้อง

อ้างอิง

  • Alibhai IN, Green TA, Potashkin JA, Nestler EJ ระเบียบของ fosB และ ΔfosB การแสดงออกของ mRNA: การศึกษาในสัตว์ทดลองและในหลอดทดลอง ความต้านทานของสมอง 2007; 1143: 22 33- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Ang E, Chen J, Zagouras P, Magna H, Holland J, Schaeffer E, Nestler EJ การเหนี่ยวนำของปัจจัยนิวเคลียร์ -B ในนิวเคลียส accumbens โดยการบริหารโคเคนเรื้อรัง J Neurochem 2001; 79: 221 224- [PubMed]
  • Bachtell RK, Choi KH, Simmons DL, Falcon E, Monteggia LM, Neve LN, DW ตัวเอง บทบาทของการแสดงออก GluR1 ในนิวเคลียส accumbens เซลล์ประสาทในอาการแพ้โคเคนและพฤติกรรมการแสวงหาโคเคน Eur J Neurosci 2008; 27: 2229 2240- [PubMed]
  • Belin D, Everitt BJ พฤติกรรมการค้นหาโคเคนขึ้นอยู่กับการเชื่อมต่อแบบต่อเนื่องที่ต้องพึ่งพาโดปามีนซึ่งเชื่อมโยงช่องท้องกับส่วนหลัง เซลล์ประสาท 2008; 57: 432 441- [PubMed]
  • Benavides DR, Bibb JA บทบาทของ Cdk5 ในการใช้ยาและพลาสติก Ann NY Acad Sci สหรัฐอเมริกา 2004; 1025: 335 344- [PubMed]
  • Ben-Shahar O, Ahmed SH, Koob GF, Ettenberg A. การเปลี่ยนจากการใช้ยาเสพติดเป็นยาควบคุมมีความสัมพันธ์กับการสูญเสียความรู้สึกไว ความต้านทานของสมอง 2004; 995: 46 54- [PubMed]
  • Bradberry CW พลวัตของโดปามีนนอกเซลล์ในการกระทำโคเคนเฉียบพลันและเรื้อรัง ประสาทวิทยา 2002; 8: 315 322- [PubMed]
  • Brenhouse HC, Stellar JR c-Fos และΔFosBมีการเปลี่ยนแปลงที่แตกต่างกันใน subregions ที่แตกต่างกันของเปลือกนิวเคลียส accumbens ในหนูโคเคนที่ไวต่อความรู้สึก Behav Neurosci 2006; 137: 773 780- [PubMed]
  • Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ ระเบียบของโปรตีน likeFosB และ FosB ที่เหมือนกันโดยการรักษาด้วยไฟฟ้าและโคเคน Mol Pharmacol 1995; 48: 880 889- [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ แอนติเจนที่เกี่ยวข้องกับ Fos เรื้อรัง: สายพันธุ์ที่เสถียรของΔFosBที่เกิดขึ้นในสมองโดยการรักษาเรื้อรัง J Neurosci 1997; 17: 4933 4941- [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, DW ตัวเอง การแสดงออกของเซลล์มากเกินไปเฉพาะของ atalFosB ช่วยเพิ่มแรงจูงใจสำหรับโคเคน J Neurosci 2003; 23: 2488 2493- [PubMed]
  • Edwards S, Whisler KN, Fuller DC, Orsulak PJ, DW ตนเอง การเปลี่ยนแปลงที่เกี่ยวข้องกับการเสพติดใน D1 และ D2 โดปามีนรับพฤติกรรมตอบสนองต่อโคเคนเรื้อรังด้วยตนเอง Neuropsychopharm 2007a; 32: 354 366- [PubMed]
  • Edwards S, Graham DL, Bachtell RK, DW ตนเอง ความอดทนเฉพาะภูมิภาคในการควบคุมโปรตีนที่ขึ้นกับโคเคนซึ่งควบคุมโดยโคเคน Eur J Neurosci 2007b; 25: 2201 2213- [PubMed]
  • Goeders NE บทบาท neuroendocrine ในการเสริมโคเคน Psychoneuroendocrinol 1997; 22: 237 259- [PubMed]
  • Graybiel AM, Moratalla R, Robertson HA แอมเฟตามีนและโคเคนทำให้เกิดการกระตุ้นการทำงานของยีน c-fos เฉพาะในช่องเก็บของ striosome-matrix และส่วนแบ่ง limbic ของ striatum Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 1990; 87: 6912 6916- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • เกรแฮม DL, Edwards S, Bachtell RK, DiLeone RJ, Rios M, DW ตนเอง กิจกรรม BDNF แบบไดนามิกในนิวเคลียส accumbens ด้วยการใช้โคเคนเพิ่มการบริหารตนเองและการกำเริบของโรค Nat Neurosci 2007; 10: 1029 1037- [PubMed]
  • Hope B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ ระเบียบว่าด้วยการแสดงออกของยีนในระยะเริ่มแรกและ AP-1 มีผลผูกพันในนิวเคลียสหนูโดยการโคเคนเรื้อรัง Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 1992; 89: 5764 5768- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Hope BT, Nye HE, Kelz MB, DW ตัวเอง, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ การเหนี่ยวนำของคอมเพล็กซ์ AP-1 ที่ยาวนานประกอบด้วยโปรตีน Fos-like ที่เปลี่ยนแปลงในสมองโดยโคเคนเรื้อรังและการรักษาอื่น ๆ เซลล์ประสาท 1994; 13: 1235 1244- [PubMed]
  • หวังว่า BT โคเคนและ AP-1 ตัวประกอบการถอดรหัสที่ซับซ้อน Ann NY Acad Sci 1998; 844: 1 6- [PubMed]
  • Jorissen HJMM, Ulery PG, Henry L, Gourneni S, Nestler EJ, Rudenko G. การทำให้มีขนาดเล็กลงและคุณสมบัติที่เชื่อมโยงกับดีเอ็นเอของปัจจัยการถอดรหัสΔFosB ชีวเคมี. 2007; 46: 8360 8372- [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, et al. การแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสΔFosBในสมองควบคุมความไวต่อโคเคน ธรรมชาติ. 1999; 401: 272 276- [PubMed]
  • Kufahl PR, Zavala AR, Singh A, Thiel KJ, Dickey ED, Joyce JN, Neisewander JL การแสดงออกของ c-Fos ที่เกี่ยวข้องกับการคืนสถานะพฤติกรรมการค้นหาโคเคนโดยการชี้นำที่มีเงื่อนไข ไซแนปส์ 2009; 63: 823 835- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Lee K, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. การก่อตัวของ dendritic กระดูกสันหลังโคเคนที่เกิดจากโคเคนใน D1 และ D2 ตัวรับโดปามีนที่มีโดพามีนขนาดกลางในนิวเคลียส accumbens Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 2006; 103: 3399 3404- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • เขาวงกตฉัน, Covington HE, III, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, ช่าง M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren YH, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakovsky A, Schaefer A, Nestler EJ บทบาทที่สำคัญของฮิสโตนเมทิลtransferase G9a ในพลาสติกที่เกิดจากโคเคน วิทยาศาสตร์. 2010; 327: 213 216- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ ΔFosB: สวิตช์ระดับโมเลกุลสำหรับการปรับตัวในระยะยาวในสมอง Mol Brain Res 2004; 132: 146 154- [PubMed]
  • Neisewander JL, Baker DA, Fuchs RA, Tran-Nguyen LTL, Palmer A, Marshall JF การแสดงออกของโปรตีนฟอสและพฤติกรรมการแสวงหาโคเคนในหนูหลังจากสัมผัสกับสภาพแวดล้อมในการจัดการโคเคนด้วยตนเอง J Neurosci 2000; 20: 798 805- [PubMed]
  • Nestler EJ, Barrot M, DW เอง ΔFosB: สวิตช์โมเลกุลที่ยั่งยืนสำหรับการติด Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 2001; 98: 11042 11046- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Nestler EJ กลไกการติดยาเสพติด: บทบาทของΔFosB Phil Trans R Soc B. 2008; 363: 3245 – 3255 [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ การศึกษาทางเภสัชวิทยาของกฎระเบียบของการเหนี่ยวนำแอนติเจนที่เกี่ยวข้องกับ FOS เรื้อรังโดยโคเคนใน striatum และนิวเคลียส accumbens J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275: 1671 1680- [PubMed]
  • Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ การเหนี่ยวนำของΔFosBในโครงสร้างสมองที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลหลังจากความเครียดเรื้อรัง J Neurosci 2004; 24: 10594 10602- [PubMed]
  • Perrotti LI, ผู้ประกอบ RR, Robison B, และคณะ รูปแบบที่แตกต่างของการเหนี่ยวนำΔFosBในสมองโดยยาเสพติด ไซแนปส์ 2008; 62: 358 369- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson GC สมองหนูในพิกัด stereotaxic 4th นิวยอร์ก: นักวิชาการสื่อมวลชน; 1998
  • Pich EM, Pagliusi SR, Tessari M, Talabot-Ayer D, Van Huijsduijnen RH, Chiamulera C. สารตั้งต้นทางประสาททั่วไปสำหรับคุณสมบัติการเสพติดของนิโคตินและโคเคน วิทยาศาสตร์. 1997; 275: 83 86- [PubMed]
  • Renthal W, Carle TL, Maze I, et al. ΔFosBไกล่เกลี่ย desensitization epigenetic ของ C-เหลวไหล ยีนหลังจากการสัมผัสยาบ้าเรื้อรัง J Neurosci 2008; 28: 7344 7349- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Wallace DL, Vialou V, Rios L, และคณะ อิทธิพลของ DeltaFosB ในนิวเคลียสมีผลต่อพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลตามธรรมชาติ 2008; 28: 10272 10277- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Young ST, Porrino LJ, Iadarola MJ โคเคนทำให้เกิดโปรตีนโปรตีน c-Fos-immunoreactive striatal ผ่าน dopaminergic D1 ผู้รับ Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 1991; 88: 1291 1295- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu M. c-Fos อำนวยความสะดวกในการได้มาและการสูญเสียของการเปลี่ยนแปลงแบบถาวรที่เกิดจากโคเคน J Neurosci 2006; 26: 13287 13296- [PubMed]