Sinirbilim Dergisi, 15 Mart 2001, 21(6): 2123-2130;
+ Yazar Üyeleri
Özet
Çekirdek accumbensindeki dopamin iletimi ilaçlar, stres veya motive olmuş davranışlarla aktive edilebilir ve bu uyaranlara tekrar tekrar maruz kalmak bu dopamin tepkisini hassaslaştırabilir. Bu çalışmanın amacı, kadın cinsel davranışının çekirdeği aktive eden nöronları aktive edip etmediğini ve geçmiş cinsel deneyimin, çekirdekteki nöronal tepkileri amfetamine karşı çapraz duyarlı hale getirip getirmediğini belirlemekti. İmmünositokimyasal etiketleme kullanılarak, çekirdek katlarının farklı alt bölgelerinde (rostral, orta ve kaudal seviyelerde kabuk-çekirdek) c-Fos ekspresyonu, değişen miktarlarda cinsel deneyime sahip dişi hamsterlerde incelenmiştir. 6 hafta boyunca cinsel deneyim verilen veya cinsel olarak saf olmayan kadın hamsterler, yetişkin erkek hamsterlara maruz bırakılarak cinsel davranış açısından test edildi. Önceki cinsel deneyim, rostral ve kaudal seviyelerde c-Fos etiketlemesini arttırdı, ancak çekirdek akumbenlerin orta seviyelerinde değil. Cinsel davranış testi, çekirdeğin kabuğunun değil çekirdeğin etiketlenmesini arttırmıştır. Kadın cinsel davranışının mesolimbik dopamin yolundaki nöronları hassaslaştırabileceğini doğrulamak için, cinsel açıdan deneyimli ve cinsel açıdan naif kadınların bir amfetamin enjeksiyonuna lokomotor tepkileri karşılaştırıldı. Amfetamin, tüm kadınlarda genel lokomotor aktivitesini arttırdı. Bununla birlikte, cinsel olarak deneyimli hayvanlar, amfetamine, cinsel olarak naif hayvanlardan daha erken yanıt verdi. Bu veriler kadın cinsel davranışının çekirdekteki nöronları aktive edebileceğini ve cinsel deneyimin amfetamine verilen nöronal tepkileri çapraz duyarlılaştırabileceğini göstermektedir. Ek olarak, bu sonuçlar çekirdeğin kabuğunun çekirdeği ile kablonun çekirdeği arasında ve anteroposterior ekseni boyunca fonksiyonel farklılıklar için ek kanıtlar sağlar.
- kadın cinsel davranış
- çekirdek accumbens
- kabuk
- çekirdek
- c-Fos
- sensitizasyon
- çapraz hassaslaştırma
- amfetamin
Orta beyin ventral tegmental alanından kaynaklanan ve çekirdek akumbenler de dahil olmak üzere çeşitli ön beyin çekirdeklerine yansıyan Dopamin nöronları, mesolimbic dopamin sisteminin bir parçasıdır. İştah açıcı davranışların düzenlenmesi için bu dopamin sisteminin önemli olduğu öne sürülmüştür (Mitchell ve Gratton, 1994; Salamone, 1994, 1996; Ikemoto ve Panksepp, 1999) yanı sıra, kötüye kullanılan uyuşturucuların kendi kendine yönetimi (Pierre ve Vezina, 1998;Koob, 1999; Lorrain ve diğerleri, 1999; McKinzie ve arkadaşları, 1999; Peoples ve arkadaşları, 1999; Bradberry ve arkadaşları, 2000). Çeşitli suiistimal ilaçların sistemik olarak verilmesi (örneğin, kokain, amfetamin ve eroin) dopamin yolaklarını harekete geçirir (Pontieri ve arkadaşları, 1995; Nisell ve arkadaşları, 1997; Pierce ve Kalivas, 1997a; Tanda ve diğerleri, 1997; Tanda ve Di Chiara, 1998; Barrot ve diğerleri, 1999; Cadoni ve Di Chiara, 1999ve bu farmakolojik ajanlara tekrar tekrar maruz kalmak, bu dopamine duyarlı nöronları hassaslaştırabilir (Robinson ve diğerleri, 1988; Kalivas ve diğerleri, 1992; Kalivas ve Duffy, 1993; Pierce ve Kalivas, 1995; Kuczenski ve diğerleri, 1997; Nisell ve arkadaşları, 1997; Birrell ve Balfour, 1998; Heidbreder ve Feldon, 1998; Cadoni ve Di Chiara, 1999; Cadoni ve diğerleri, 2000). Araştırma, çekirdeğin accumbens'in aynı zamanda çiftleşme ile ilgili bazı özelliklere de yanıt verdiğine dair kanıt sağlamıştır. Çekirdekteki ekstraselüler dopamin seviyeleri dişi sıçanlarda cinsel etkileşimler sırasında artış gösterir (Mermelstein ve Becker, 1995; Pfaus ve diğerleri, 1995) ve hamsterlar (Meisel ve arkadaşları, 1993; Kohlert ve diğerleri, 1997; Kohlert ve Meisel, 1999). Tekrarlanan ilaç uygulamasına benzer şekilde, çoklu cinsel davranış testleri de nükleustaki artışları arttırmakta, cinsel deneyimin dopamin yolundaki nöronları hassaslaştırabileceğini düşündürmektedir.Kohlert ve Meisel, 1999).
Çekirdek akümülatörleri, en bilinenleri kabuk ve çekirdek olan anatomik olarak farklı birçok alt bölgeden oluşur. Bu iki alt bölgenin farklı fonksiyonları düzenlediğini düşündüren kabuk ve göbek sapmasının anatomik bağlantıları.Crawley ve diğerleri, 1985a,b; Heimer ve arkadaşları, 1991; Zahm ve Brog, 1992; Brog ve arkadaşları, 1993;Kalivas ve Duffy, 1995; Maldonado-Irizarry ve diğerleri, 1995; Pierce ve Kalivas, 1995; Pontieri ve arkadaşları, 1995; Broening ve arkadaşları, 1997; Heimer ve arkadaşları, 1997; Kelley ve arkadaşları, 1997; Stratford ve Kelley, 1997; Heidbreder ve Feldon, 1998; Lanca ve diğerleri, 1998; Bassareo ve Di Chiara, 1999; Di Chiara ve diğerleri, 1999b; Groenewegen ve diğerleri, 1999; Kelley, 1999; McKinzie ve arkadaşları, 1999; Zahm, 1999; Kahverengi ve Molliver, 2000). Çekirdek akümülatörleri heterojen bir çekirdek olduğu için, kadın cinsel davranışına verilen tepkilerin çekirdeğin belirli alt bölgelerine lokalize olup olmadığı veya çekirdeğin tamamı boyunca yayıldığı açık değildir. Önceden bu soruyu cevaplamak için kullanılan teknikler (örneğin, mikrodiyaliz), accumbens'in işlevsel heterojenliğini keşfetmek için mekansal olarak hassas değildir. Buna karşılık, c-Fos proteini için immünositokimyasal işlem, çekirdek akumbenlerinin alt bölgeleri arasındaki ayrık hücresel aktivasyonu incelemek için bir yöntem sağlar. Bu nedenle, bu deneyin ilk amacı, kadın cinsel davranışından sonra hücresel aktivasyonun, çekirdeklerin accumbens'in belirli alt bölgelerine lokalize olup olmadığını tespit etmektir.
Bu dopamin yolaklarının ilginç bir özelliği çapraz duyarlılıktır. Başka bir deyişle, daha önce bir ilaca duyarlı hale getirilmiş dopamin nöronları, ilk kez verilen başka bir ilaca karşı duyarlılaştırılmış tepkiler gösterecektir (Cunningham ve Kelley, 1992; Pierce ve Kalivas, 1997a; Birrell ve Balfour, 1998; Taylor ve Horger, 1999). İlaçlar arasında çapraz duyarlılığa ek olarak, çeşitli çalışmalar farmakolojik ajanlara tekrarlanan maruz kalmalar ve doğal motive edilmiş davranışlar arasında çapraz duyarlılık olduğunu bildirmiştir (Mitchell ve Stewart, 1990a,b; Tidey ve Miczek, 1997; Fiorino ve Phillips, 1999). Bu nedenle, cinsel açıdan deneyimli ve cinsel açıdan naif hayvanların, amfetamin gibi dopamin yolaklarını (yani çapraz hassaslaştırma) aktive ettiği bilinen yeni bir uyarana farklı tepki gösterip göstermediğini inceledik. Kadın cinsel davranışı dopamin yolaklarını hassaslaştırıyorsa, cinsel olarak deneyimli kadınların tek bir amfetamin enjeksiyonuna artırılmış davranışsal bir tepki göstermesi gerekir.
MALZEMELER VE YÖNTEMLER
Genel yöntemler
Hayvanlar. Erkek ve dişi Suriyeli hamsterlar Charles River Laboratories'den (Kingston, NY) ∼60 d yaşında teslim edildi. Dişiler ayrı ayrı bekletildi ve erkek uyaran hayvanlar, plastik kafeslerde üç ya da dörtlü gruplara (50.8 x 40.6 x 20.3 cm) yerleştirildi. Hayvan koloni odası, 22: 1 ve 30: 11 PM (30 / 14 saat ışık / karanlık döngüsü) arasındaki ışıklar kapalıyken sabit bir sıcaklıkta (10 ° C) tutulmuştur. Yiyecek ve su mevcuttu ad libitum.
Bu deneyde kullanılan prosedürler Ulusal Sağlık Enstitüleri ile uyumludur. Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı İçin Rehber ve Purdue Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır.
Cinsel tecrübe Dişiler laboratuvara ulaştıktan yaklaşık 1 hafta sonra, sodyum pentobarbital (Nembutal) anestezisi (8.5 gram vücut ağırlığı, ip başına 100 mg) altında bilateral olarak ovariektomize edildiler. Ovariektomi sonrası dişiler başlangıçta iki gruba ayrıldı. Bir grup kadın, bir uyarıcı erkekle birlikte 6 hafta cinsel deneyim aldı; ikinci grup cinsel olarak saf kaldı. Bütün dişiler, 6 hafta periyodu için haftada bir kez hormonal olarak prime edilmiştir. Cinsel deneyimlerden önce hem 48 hem de 24 saatte dişilere, deri altına, 10 ml pamuk yağı içinde 0.1 ug estradiol benzoat enjekte edildi. Deney testi gününde dişilere 500 ml pamuk tohumu yağı içinde 0.1 Xg progesteron verildi (deri altı enjeksiyon). Cinsel tecrübe almayan kadınlara hormon rejimi enjekte edildi ve koloni odasında kendi kafeslerinde kaldılar. Progesteron uygulamasından sonraki 4 – 5 saatinde, deneysel dişinin ev kafesine diğer cinsel davranış çalışmalarında kullanım yoluyla cinsel deneyim alan yetişkin bir erkek hamster yerleştirildi. Erkekleri içeren kafeslerin sırası her hafta, 6 cinsel deneyim haftasında XNUMX bireysel bir dişinin ve dişinin bir kereden fazla eşleştirilme olasılığını en aza indirgemek için döndürüldü.
İmmünositokimya. Aşırı dozda sodyum pentobarbital ile öldürülen dişi hamsterlar intrakardiyal olarak 25 m ile perfüze edildim PBS çözeltisi, pH 7.5, 2 dakika (akış hızı, 25 ml / dakika), ardından 4 dakika boyunca PBS içinde% 20 paraformaldehit. Beyinler paraformaldehit içinde 2 saat için sabitlendi ve gece boyunca 10 ° C'de 4% sukroz PBS içinde saklandı.
Seri çekirdekli 40 frozenm dondurulmuş bölümleri tüm çekirdek akumbenlerinden alınmıştır. PBS'de üç 10 dakikalık durulamadan sonra, bölümler ya birincil antikorda c-Fos'e (1% 6000% P Triton X-0.3; Santa Cruz Biyoteknoloji, Santa Cruz, CA); veya birincil antikorda calbindin-D'ye inkübe edildi) (100 kDa) (28:% 1 Triton X-6000 olan PBS içinde 0.3; Chemicon International, Temecula, CA) 4 ° C'de 48 ° C'de. Hem c-Fos hem de calbindin-D kesitleri daha sonra, oda sıcaklığında 45 dakika boyunca oda sıcaklığında biyotinlenmiş anti-tavşan IgG sekonder antikorunda (PBS içerisinde 1: 200; Elite Vectastain ABC kiti; Vector Laboratories, Burlingame, CA) kuluçkalandı; bir avidin-biotin yaban turpu peroksidaz kompleksi (PBS içerisinde 1: 50; Elite Vectastain ABC kiti) ile oda sıcaklığında 45 dk için inkübasyon, her bir inkübasyondan önce PBS içinde üç 10 dk durulama yapılır. PBS'de iki durulama ve bir 10 dakika sonra 0.1'te durulama m Tris tamponu, pH 7.6, c-Fos ve calbindin-D kesitleri, sırasıyla 5 ve 10 dakika boyunca,% 0.08% hidrojen peroksit ve% 0.003 içeren Tris tamponu içerisinde% 0.015 diaminobenzidin (DAB) (Aldrich, Milwaukee, WI) içinde inkübe edildi. nikel klorür. Tüm bölümler tekrar Tris tamponu ve deiyonize su içinde durulandı ve daha sonra krom kaplı lamlar üzerine monte edildi. Slaytlar kurutulmuş, kurutulmuş, temizlenmiş ve Permount (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) kullanılarak örtülmüştür.
Mikroskobik analiz Nöral doku, çekirdeğin kabuğunu ve çekirdeğini tanımlayan kalbindin-D için boyandı (Jongen-Relo ve diğerleri, 1994a; Johnson ve Wood, 1999dorsal çekirdeğin accumbensinin rostral, orta ve kaudal seviyelerinde her birinin bir bölümünü tanımlamak için kullanılır. Calbindin için boyanmış rostral, orta ve kaudal seviyelerde çekirdekten toplanan çekirdekten kesitler Şekil 2'de gösterilmektedir. 1 AC. Suriye hamsterında calbindin-D immünoreaktivitesindeki çekirdek ve kabuk arasında sıçan ile karşılaştırıldığında daha az belirgin farklılıklar olduğu bildirilmiştir, ancak bu peptid için boyanmanın hala çekirdeklerin accumbens alt bölgelerini sınırlayabildiği bildirilmiştir (Johnson ve Wood, 1999). 0.1 mm örnekleme bölgesini kapsayan bir kutu2 (0.2 × 0.5 mm) her bölüm için dorsal kabuk ve çekirdeğin çekirdeğinin çekirdeği üzerine yerleştirildi. Her bölümün bir görüntüsü saydamlık filmine basıldı ve görüntüler, her hayvan için kutunun aynı pozisyonda yerleştirildiğinden emin olarak her hayvan için karşılık gelen c-Fos bölümlerinin üzerine bindirildi. şekil 1, D ve E, haftada 6 cinsel deneyim almış ve cinsel davranış açısından test edilmiş bir hayvandan bir kaudal kesiti göstermektedir. Kutu, Şekil 2'deki kaudal çekirdeğin çekirdeğine yerleştirilmiştir. 1 Dve kaudalun kabuğunda Şekil 3'teki accumbens1 E. Aynı boyutlarda bir kutu medial singulat kortekste aynı doku kesitine ve nükleus akümbens için örneklenen üç seviyenin her birinde medial ve lateral dorsal kaudat nükleus üzerine yerleştirildi. Çiftleşmenin c-Fos üzerindeki etkilerinde rostral-kaudal varyasyonlar olabileceğini varsaydığımız için, örneklememizin anatomik kesinliğini artırmak için seviye başına yalnızca bir bölüm analiz edildi. Seçilen her alandaki c-Fos-immünoreaktif hücrelerin sayısı, bilgisayarlı bir görüntü analiz sistemine (BioQuant MegM; R & M Biometrics, Nashville, TN) bağlı bir video kamera yardımıyla sayıldı.
Nucleus, calbindin-D ve c-Fos için boyanmış doku bölümlerini accumbens. AC kürsü bölümleri (A), orta (B) ve kaudal (C) Çekirdekleri accumbens lekeli (orta hat solcalbindin için, kabuk ve çekirdek alt bölgeler arasındaki bölünmeyi gösterir (yıldız). Rostral ve orta bölümler arasında 320 μm ve orta ve kaudal bölümler arasında 240 μm vardır. Alt görüntüleri (D, Ekaudal çekirdekten c-Fos boyama örnekleridir (D) ve kabuk (EÇekirdeğin accumbens) (orta hat krallar gibi yaşamayacinsel davranış testinden sonra öldürülen cinsel tecrübeli bir kadının). dikdörtgen örnekleme alanını gösterir (0.2 × 0.5 mm).
Deneme 1
İlk deney, cinsel deneyim ve testlerin çekirdekteki accumbens, dorsal kaudat çekirdeği ve cingulate korteks içindeki c-Fos indüksiyonu üzerindeki etkilerini araştırdı. Deneyin amacı iki yönlüdür. İlk amaç, önceki cinsel deneyim ve / veya davranışsal testler nedeniyle herhangi bir beyin bölgesinde hücresel aktivasyonda farklılıklar olup olmadığını belirlemekti. Eğer c-Fos ifadesi değiştirildiyse, değişikliklerin analiz edilen üç beyin alanındaki belirli alt bölgelere lokalize edilip edilemeyeceği belirlendi.
Suriyeli dişi hamsterlar haftada 6 cinsel deneyim aldı veya cinsel olarak saf kaldı. 6 haftalık deneyimler boyunca, her bir 10 dk test seansı için, dişi lordozun (sırtın dorsofleksiyonu eşliğinde hareketsizlik) kabul ettiği kümülatif süre ölçülmüştür. Hiçbir erkek cinsel davranış ölçütü kaydedilmedi. 7 haftasında aynı seri estradiol benzoat ve progesteron enjeksiyonları yapıldı. Bu kez, cinsel olarak deneyimli ve naif kadınların yarısı, yetişkin bir erkeği kendi kafesine yerleştirerek cinsel davranış açısından test edildi. Kalan kadınlar ev kafeslerinde kaldılar. 60 – 90'te, erkeğe maruz kalmadan dakikalar sonra, dişiler intrakardiyal olarak perfüze edildi ve beyinleri c-Fos ifadesi için işlendi. Cinsel davranış için test edilmeyen dişiler progesteron uygulamasından sonra 4 saat perfüze edildi.
Veri analizi. Hücre sayımları, önceki cinsel deneyime bakılmaksızın 7 haftasında cinsel davranış için test edilmemiş bu kadınlar arasında farklılık göstermediğinden (bkz. Tablo1 örneğin), deneysel kadınlar sonuçta analiz için üç tedavi grubuna ayrıldı. İlk grup, 6 hafta boyunca cinsel deneyim alan ve cinsel davranış açısından test edilen kadınları içeriyordu (deneyim / test, n = 6). İkinci grup, daha önce deneyim almayan ancak cinsel davranış açısından test edilen kadınlardan oluşuyordu (deneyim / test yok,n = 8). Son grup, önceki herhangi bir cinsel deneyime bakılmaksızın, cinsel davranış için test edilmemiş tüm hamsterleri içermiştir (test yok, n = 13). Cinsel davranış testi almayan iki grup, analizlerdeki istatistiksel gücü artırmak için birleştirildi. Dorsal çekirdek accumbens, dorsal kaudat çekirdek ve cingulate korteks kaynaklı c-Fos lekeli hücrelerin sayısı üç grup arasında karşılaştırıldı.
Çekirdekteki ortalama ± SEM sayıdaki c-Fos-immünoreaktif hücrelerin karşılaştırılması, test tedavisi olmayan gruplar arasında kabuk ve çekirdeği accumbens eder
Hücre sayıları, çok faktörlü ANOVA'lar kullanılarak analiz edildi. Basit ana etki ANOVA'ları ve Post hoc Uygun yerlerde Newman – Keuls testleri yapıldı. Davranış verileri (lordoz süreleri) iki kuyruklu kullanılarak analiz edildi t testi.
Deneme 2
İkinci deney, yeni bir uyaran, amfetamin, cinsel açıdan deneyimli ve cinsel açıdan naif dişi hamsterlerde davranışsal duyarlılık üretme kabiliyetini karşılaştırdı. Çekirdekteki c-Fos ekspresyonu, hücresel aktivite modelinin Deney 1'te elde edilen sonuçlara benzer olup olmadığını belirlemek için tekrar analiz edildi, hücresel aktivite modelinin benzer olup olmadığını belirlemek için tekrar analiz edildi.
Suriyeli dişi hamsterlara 6 hafta boyunca cinsel deneyim verildi veya cinsel açıdan saf kaldı. 7 haftasında, bütün dişiler, progesteron uygulamasından sonra, yeni bir ortama (yani, alışılmadık bir odada bir 10 galon cam akvaryumu) 4 saatine taşındı. Dişiler, 10 dakika boyunca 10 galon cam akvaryumuna yerleştirildi, bundan sonra cinsel olarak deneyimli ve cinsel açıdan naif kadınların yarısı uygulandı.d-pfetamin sülfat (1 ml% 1 Na2 içinde 1.0 kg vücut ağırlığı başına 0.9 mg; Dr. David Nichols, Purdue Üniversitesi'nden bir hediye). Kalan kadınlara% 0.9 NaCl (1 kg vücut ağırlığı başına 1 mg) enjekte edildi. Dişiler daha sonra ilave bir 10 dakika boyunca 60 galon akvaryumuna geri yerleştirildi. 70 dakika seansları, kadınların genel lokomotor aktivitesinin analizi için videoya kaydedildi. Genel aktivite testinden sonraki 30 dakika içinde dişiler intrakardiyal olarak perfüze edildi ve beyinleri c-Fos ifadesi için işlendi.
Video kaset analizi. 7 haftasında, lokomotor aktivitesini test eden 70 dk oturumları videoya kaydedildi. 10 galon cam akvaryumları video ekranında üç eşit alana bölündü ve dişilerin lokomotor aktivitesi alan haçlarının sayısı açısından kaydedildi.
Veri analizi. Geçmişte cinsel geçmiş, salin enjekte edilmiş dişi hamsterlerin lokomotor aktivitesini etkilememiştir; bu nedenle deneysel dişiler analiz için üç tedavi grubuna ayrıldı. İlk grup, haftada 6 cinsel deneyim alan ve amfetamin (deneyim / amfetamin, n = 8). İkinci grup, amfetamin uygulanan ancak cinsel deneyim almayan kadınlardan oluşuyordu (deneyim / amfetamin yok,n = 8). Son grup, önceki herhangi bir cinsel deneyime bakılmaksızın, salin enjekte edilen dişi hamsterlerin hepsini içermiştir. n = 15). Dişilerin ortalama lokomotor aktivitesi, iki faktör ANOVA'sı kullanılarak 70 test dakikaları (10 dakika periyotları) boyunca üç tedavi grubu arasında karşılaştırıldı. Basit ana etki ANOVA'ları ve Post hoc Uygun yerlerde Newman – Keuls testleri yapıldı.
C-Fos için boyanan hücrelerin sayısı, geçmiş cinsel deneyime bakılmaksızın, salin enjekte edilen dişiler arasında farklılık göstermedi. Bu nedenle, dorsal çekirdek accumbens, dorsal kaudat çekirdek ve cingulate korteksten c-Fos ile boyanmış hücrelerin sayısı, ilk deneyde olduğu gibi aynı üç tedavi grubu arasında karşılaştırıldı. Hücre sayıları, çok faktörlü ANOVA'lar kullanılarak analiz edildi. Basit ana etki ANOVA'ları ve Post hoc Uygun yerlerde Newman – Keuls testleri yapıldı.
SONUÇLAR
Deneme 1
Cinsel davranış önlemleri
7 haftasında cinsel davranış testi sırasında lordoz süreleri deneyim / test ile deneyim / test olmayan gruplar arasında karşılaştırıldı. 10 dk testi sırasındaki ortalama lordoz süresi tecrübe / test grubu için 341 ± 53 sn ve deneyim / test grubu olmayanlar için 478 ± 20 sn idi. Deneyim / test grubundaki kadın olmayanlar, deneyim / test grubundaki kadınlardan anlamlı olarak daha uzun bir süre için lordoz kabul etmişlerdir (t 6 = 5.131; p = 0.05). Ayrıca, cinsel deneyim lordoz süresini etkilemedi. Analiz, deneyim / test grubundaki kadınlarda hafta 1 (399 ± 44 sn) ile hafta 7 (341 ± 53 sn) için ortalama süreler arasında anlamlı bir fark göstermedi.
Çekirdekte c-Fos ifadesi accumbens
Üç-yönlü ANOVA tedavi süreleri rostral-kaudal seviye çarpı kez kabuk-çekirdekli, tedavinin önemli bir ana etkisi bulunmamakta ve tedavi, akumbens seviyesi ve kabuk-çekirdeğin üç yollu etkileşimi olmamıştır (Şek. 2); Bununla birlikte, iki önemli iki yönlü etkileşim (tedavi süreleri kabuk çekirdeği ve tedavi süreleri rostral kaudal seviyeler) tespit edildi.
Çekirdeğin kabuğundaki ve çekirdeğindeki c-Fos ifadesi, tedavi gruplarının her biri için rostral, orta ve kaudal seviyelerde toplanır. Cinsel tecrübe ve davranışın c-Fos hücrelerinin ortalama ± SEM sayısı üzerindeki etkilerini incelemek için üç yollu ANOVA (tedavi süreleri rostral-kaudal seviye çarpı kez-çekirdek) kullanılmıştır. Tedavinin önemli bir ana etkisi yoktur ve tedavi, akumbens düzeyi ve kabuk çekirdeği arasında üç yönlü etkileşim bulunmamıştır.
Tedavi sürelerinin kabuk-çekirdek etkileşiminin araştırılması, tedavi gruplarının sadece çekirdeğin akumbensinin çekirdeğindeki önemli ana etkilerini ortaya çıkardı (Şek. 3). Çift olarak yapılan çoklu karşılaştırmalar, bu kadınların 7 haftasında cinsel davranış açısından test edildiğini (deneyimler / testler ve deneyimler / testler yok) çekirdeğin çekirdeğinde, test edilmemiş dişilerden anlamlı derecede daha fazla c-Fos lekeli hücreye sahip olduğunu gösterdi (hayır testi) (Newman – Keuls, p <0.01). Ödül çekirdeğinin kabuğunda testin hiçbir etkisi gözlenmedi. Dahası, cinsel deneyimin, akumbenlerin kabuğunda veya çekirdeğinde c-Fos ifade eden hücrelerin sayısı üzerinde açık bir etkisi yoktu.
Kabuktaki ve çekirdeğin çekirdeğindeki c-Fos ekspresyonu, rostral-kaudal seviyenin üzerinde çöktü. Üç yollu ANOVA, muamele ile kabuğun içindeki çekirdekteki ortalama ± SEM c-Fos hücresi sayısı ve çekirdeğin akumbensinin çekirdeği (tedavi süreleri - kabuk çekirdeği;F (2,24) = 4.243; p<0.026). Bu etkileşimi inceleyen tek yönlü bir ANOVA, tedavi gruplarının önemli ana etkilerini yalnızca ödül merkezi çekirdeğinde buldu (F (2,24) = 7.341; p<0.003) ve akümbens kabuğunda (F (2,24) = 1.271; p> 0.1). Farklı harfler gruplar arasında anlamlı farklılıklar olduğunu gösterir.
Tedavi sürelerinin rostral-kaudal seviye etkileşiminin araştırılması, hem rostral hem de kaudal seviyelerde tedavi gruplarının önemli ana etkilerini bulmuş ancak çekirdek akumbensin orta seviyesinde bulunmamıştır (Şek. 4). Newman-Keuls Post hoc Yapılan testler, 6 hafta boyunca cinsel tecrübe almış ve cinsel davranış açısından test edilmiş (deneyim / test) kadınların, rostral çekirdek akumbelerinde test edilen fakat daha önce cinsel deneyim almayan kadınlardan daha fazla c-Fos-pozitif hücreye sahip olduğunu göstermiştir. (deneyim / test yok; p <0.05) ve cinsel davranış açısından test edilmeyen kadınlar (test yok;p <0.01). Post hoc testler kaudal çekirdek akumbens için benzer sonuçlar ortaya koydu. Deneyim / test grubundaki dişiler, kaudal çekirdek akumbensindeki c-Fos eksprese eden, deneysel / testsiz gruptaki kadınlardan daha fazla sayıda hücreye sahipti (p <0.05) ve test grubu yok (p <0.01). Bu nedenle, 7. haftada cinsel davranış testi, yalnızca 6 haftalık deneyime sahip kadınlar için rostral ve kaudal nükleus akümbensinde c-Fos boyanmış hücrelerin sayısını artırdı.
Çekirdek ve kabuk boyunca çökmüş çekirdek çekirdeğinin rostral-kaudal boyutundan c-Fos ifadesi. Üç yollu bir ANOVA, tedavi grupları ile ortalama ± SEM sayısı arasındaki iki yönlü etkileşimin, çekirdeğin rostral-kaudal seviyeleri boyunca c-Fos hücrelerini gösterdiğini belirtmesine rağmen, sadece önem kazanmıştır (F (4,48) = 2.365; p <0.066), işlemin c-Fos boyaması üzerindeki etkisi için her bir akümbens nükleus seviyesini ayrı ayrı inceledik. Tek yönlü bir ANOVA, tedavi gruplarının hem rostral düzeyde (F (2,48) = 5.230; p<0.009) ve kaudal seviye (F (2,48) = 7.455; p <0.002) ancak orta düzeyde değil (F (2,48) = 1.744; p> 0.1) ödül merkezi. Farklı harflergruplar arasında anlamlı farklılıklar olduğunu gösterir.
Kaudat çekirdekte c-Fos ekspresyonu ve korteks salgılamak
Dorsal kaudat çekirdeğin hücre sayıları da üç yönlü bir ANOVA kullanılarak analiz edildi. Analiz, medial ve lateral kaudat çekirdekte yalnızca tedavi ile c-Fos ekspresyonu arasındaki etkileşimi ortaya koydu (F (2,24) = 3.514;p <0.046). Bununla birlikte, medial ve lateral kaudat çekirdeğin tek yönlü ANOVA ile ayrı analizi, deneyim / test, deneyim / test ve test grupları arasında c-Fos boyalı hücre sayısında hiçbir fark olmadığını gösterdi2). Ayrıca, cingulate korteksinde cinsel deneyim veya davranışların c-Fos ifade eden hücrelerin sayısı veya herhangi bir etkileşim üzerinde ana etkisi bulunmamıştır (veriler gösterilmemiştir).
Medial ve lateral dorsal kaudat çekirdeklerde ortalama ± SEM c-Fos immünoreaktif hücrelerin sayısı
Deneme 2
Lokomotor etkinliği
70 test min dakika boyunca kadınların deneyimlerinin / amfetamin içerisindeki ortalama aktivitelerini, deneyim / amfetamin ve salin tedavi gruplarının ortalamalarını karşılaştıran iki yönlü bir ANOVA (tedavi süresi test periyodu), tedavi grubu ile test süresi arasında bir etkileşim ortaya koydu. Bu etkileşimi incelemek için, bireysel tedavi grupları tek yönlü ANOVA'lar ile ayrı ayrı incelenmiştir. Analizler, amfetamin (deneyim / amfetamin ve hiçbir deneyim / amfetamin yok) enjekte edilen iki kadın grubu için 70 test dakika boyunca ortalama genel aktivitede önemli değişiklikler olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, salin alan kadınların genel aktivitesi, 70 dakika içinde önemli ölçüde değişmedi (Şek.5). Newman-Keuls Post hocDaha sonra hangi 10 dk test sürelerinin farklı olduğunu belirlemek için testler kullanıldı. İkili çoklu karşılaştırmalar, amfetamin verilen cinsel açıdan deneyimli kadınların genel aktivitesinin, enjeksiyonlardan sonra 10 dakikayı önemli ölçüde arttırdığını ortaya koydu (p <0.05). Ayrıca, enjeksiyonlardan önceki 10 dakika ile karşılaştırıldığında, deneyim / amfetamin tedavi grubundaki kadınlar önemli ölçüde daha aktif 20 dakika kaldı (p <0.05) ve 30 dk (p<0.05) enjeksiyonlardan sonra. Buna karşılık, cinsel açıdan saf kadınlarda amfetaminin etkileri, enjeksiyonlardan 20 dakika sonrasına kadar belirgin değildi. Bu zaman noktasında, bu dişiler enjeksiyonlardan önceki 10 dakika ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha aktifti (p <0.05). Ek olarak, amfetamin verilen cinsel açıdan saf dişilerin aktivitesi 30 dakika boyunca önemli ölçüde arttı (p <0.05) ve 40 dk (p<0.01) enjeksiyonlardan sonra.
Amfetaminin cinsel açıdan deneyimli ve cinsel açıdan saf dişi hamsterlerin genel aktivitesi üzerine etkileri. İki yönlü bir ANOVA (tedavi süreleri test süresi), tedavi grubu ile test süresi arasında bir etkileşim olduğunu ortaya koydu (F (12,150) = 2.288;p <0.011) ortalama ± SEM aktivite sayımları için. Bireysel tedavi gruplarını inceleyen tek yönlü bir ANOVA, deneyim / amfetamindeki kadınlar için genel aktivitede önemli değişiklikler gösterdi (F (6,150) = 3.0468; p <0.008) ve deneyim yok / amfetamin (F (6,150) = 3.893;p <0.001) tedavi grupları. Salin enjekte edilen dişilerin aktivitesi değişmedi (F (6,150) = 1.619;p <0.1). Hoc sonrası testler, cinsel olarak deneyimli kadınların, amfetamine daha hızlı tepki verdiğini ve enjeksiyondan sonraki ilk 10 dakika içindeki aktivitede bir artış olduğunu gösterdi. Cinsel olarak naif dişiler, enjeksiyondan 20 dakikaya kadar amfetamine cevap vermedi. *p Test öncesi döneme göre <0.05.
c-Fos ifadesi
Cinsel tecrübe ve amfetaminin çekirdek akumbensinde c-Fos ekspresyonu üzerindeki etkilerini incelemek için üç yollu ANOVA (tedavi süreleri rostral-kaudal seviye çarpı kez-çekirdek) kullanılmıştır. Tedavinin önemli bir ana etkisi yoktur ve tedavi, akumbens düzeyi ve kabuk çekirdeği arasında üç yönlü etkileşim bulunmamıştır. Dahası, analiz, tedavi grupları ile accumbens'in kabuğundaki ve çekirdeğindeki c-Fos ekspresyonu arasında veya tedavi grupları ile çekirdeklerin accstens'in rostral, orta ve kaudal seviyelerinde c-Fos etiketlemesi arasında herhangi bir etkileşim olmadığını ortaya koymamıştır ( veri gösterilemiyor).
Dorsal kaudat çekirdeğin hücre sayıları da üç yönlü bir ANOVA kullanılarak analiz edildi. İlk analiz önceki cinsel deneyimin veya amfetaminin c-Fos-pozitif hücrelerin sayısı üzerinde önemli bir etkisi olmadığını ortaya koydu. Ek olarak, önceki cinsel deneyimin veya amfetaminin c-Fos eksprese eden hücrelerin sayısı üzerinde iki yönlü bir ANOVA (sekilde gösterilmemiştir) kullanılarak sipri korteksinde herhangi bir etkisi bulunamamıştır.
TARTIŞMA
Bu araştırmanın amacı iki yönlü idi. İlk olarak, çekirdek deneyimlerin farklı alt bölgelerinde cinsel deneyimin hücresel aktivite üzerindeki etkilerini inceledik. Daha önceki cinsel tecrübenin mesolimbik dopamin yolunu hassaslaştırabildiği ikinci konu, cinsel açıdan deneyimli ve saf hayvanların davranış tepkilerini bir amfetamin enjeksiyonu ile karşılaştırarak araştırıldı. Bulgularımız yalnızca kadın cinsel davranışının çekirdekte bulunan nöronları aktive edebileceğini değil, aynı zamanda cinsel deneyimin amfetamine verilen nöronal tepkileri çapraz duyarlılaştırabileceğini de göstermektedir.
Kabuktaki c-Fos ifadesi ve çekirdeğin çekirdeğinin özünde cinsel davranış etkileri
Cinsel davranış testi çekirdekteki c-Fos ekspresyonunu arttırdı, ancak çekirdeğin kabuğunun kabuğunu değil, tek bir cinsel karşılaşmanın çekirdekte bulunan nöronları dişi kemirgenlerde aksonları aktive edebileceğini gösteren önceki araştırmaları destekledi (Meisel ve arkadaşları, 1993; Joppa ve arkadaşları, 1995; Mermelstein ve Becker, 1995; Pfaus ve diğerleri, 1995; Kohlert ve diğerleri, 1997; Kohlert ve Meisel, 1999). Çekirdek accumbensinin fonksiyonel ikilemini ele alan literatür, farmakolojik ve fizyolojik uyaranlara cevap olarak çekirdeğin kabuğunun çekirdeği ve çekirdeğinin çekirdeği içindeki dopamin iletimindeki çok sayıda farklı değişiklik raporundan oluşur. Çeşitli suistimal ilaçlarının verilmesi, çekirdek kabuğundaki hücre dışı dopamin seviyelerinde seçici artışlara yol açmaktadır (Pontieri ve arkadaşları, 1995; Nisell ve arkadaşları, 1997; Pierce ve Kalivas, 1997a; Tanda ve diğerleri, 1997; Tanda ve Di Chiara, 1998; Barrot ve diğerleri, 1999; Cadoni ve Di Chiara, 1999). Benzer şekilde, çok lezzetli yiyecekler (Tanda ve Di Chiara, 1998; Di Chiara ve diğerleri, 1999a; Kelley, 1999), hafif stres (örneğin ayak şoku) (Kalivas ve Duffy, 1995; Tidey ve Miczek, 1997; Bruijnzeel ve diğerleri, 1999; Wu ve diğerleri, 1999) ve çevresel yenilik (Rebec ve arkadaşları, 1997;Rebec, 1998ayrıca çekirdeğin kabuğunun içindeki dopamin iletimini seçici olarak arttırır.
Bulgularımız, kabuğun ve çekirdeğin, cinsel davranışa duyarlı olduğunu fakat kabuğun değil çekirdeğini bulmamıza rağmen, işlevsel olarak farklı olduğu hipotezi ile tutarlıdır. Bununla birlikte, çekirdeğin kabuğunda c-Fos immünoreaktivitesinde değişiklikler olması mümkündür, ancak bu değişiklikler tespit edilememiştir. Kabuk, medial, ventral ve lateral bir kabuk halinde farklı alt bölgeler halinde düzenlenmiştir, medial kabuğun ventral ve dorsal bölgeleri muhtemelen iki ayrı bölgedir (Groenewegen ve diğerleri, 1999). Bu kabuğun alt bölgelerinin yanı sıra çekirdeğin medial ve lateral bölümleri kortikal ve subkortikal alanlardan farklı girdi kombinasyonları alır (Groenewegen ve diğerleri, 1999). Ayrıca, bu alt bölgeler içinde yer alan, fonksiyonel olarak farklı anatomik bölümler halinde düzenlenmiş nöronların topluluklarıdır (Groenewegen ve diğerleri, 1999). Bu çalışmada cinsel davranışların c-Fos ekspresyonu üzerindeki etkileri sadece dorsomedial kabukta incelendiğinden, c-Fos-pozitif hücrelerin sayısının gerçekten farklı bir kabuk alt bölgesinde değişmesi mümkündür.
Pek çok çekirdeğin accumbens fonksiyonunun kabuk bölgesine lokalize olduğuna dair gözlemlere rağmen, çekirdeğin içindeki farklı sinir devrelerinin, farklı davranışların takviye edici özelliklerine aracılık ettiğini varsaymak mantıklıdır. Carelli ve diğ. (2000)Yakın zamanda, çekirdeğin aksonları sıçanlardaki nöronların, iki doğal takviyeye (örneğin, yiyecek ve su) cevap veren işlem sırasında benzer nöronal aktivite sergilediklerini ancak kokaine karşı doğal bir takviyeye cevap verirken farklı ateşleme şekilleri olduğunu bildirmişlerdir. Çekirdekteki ayrı sinir devrelerinin kokain ödülü karşısında gıda ve su takviyesi hakkında bilgi işlemede bulundukları sonucuna varmışlardır (Carelli ve arkadaşları, 2000).
C-Fos ekspresyonu üzerindeki çekirdek deneyiminin rostral-kaudal ekseni üzerinden cinsel deneyim etkileri
Subnükleer organizasyonu rostral kaudal çekirdeğin accumbens'i ile inceleyen literatür küçüktür; ancak, belirgin fonksiyonel ve anatomik farklılıklar gözlenmiştir. Bulgularımız, accumbens'in rostral-kaudal ekseni boyunca nörokimyasal ve motor tepkilerin farklı düzenlendiğini bildiren çalışmalarla tutarlıdır. Kolesistokinin (CCK), rostral ve kaudal çekirdek accumbensinde dopamine bağlı etkileri farklı şekilde modüle eder (Crawley ve diğerleri, 1985a,b), dopamin ile kolloize edilmiş CCK nöronları tarafından tehdit edilen bir bölge olan, kaudal accumbens'e aşılan zaman, dopamine bağlı hiperlocomotion'ı kuvvetlendiren ()Crawley ve diğerleri, 1985a,b; Lanca ve diğerleri, 1998). Bununla birlikte, CCK, ayrı CCK ve dopamin projeksiyonları alan bir bölge olan rostral çekirdeğin aktüelleri içine alındığında davranışsal olarak etkin değildir.Crawley ve diğerleri, 1985a,b; Lanca ve diğerleri, 1998). Ayrıca, amfetaminin rostral kabuğa, kaudal kabuğa veya çekirdeğe doğrudan infüzyonunun, davranışsal aktiviteyi ve hücre dışı dopamin ve serotonin seviyelerini farklı şekilde etkilediği bildirilmiştir (Heidbreder ve Feldon, 1998). Opioid peptidlerin, madde P, dopamin D1 reseptörlerinin düzenlenmesi (Voorn ve Doktor, 1992; Jongen-Relo ve diğerleri, 1994b; Voorn ve diğerleri, 1994) ve asetilkolin salınımı (Jongen-Relo ve diğerleri, 1995) dopamin ve dopamin reseptörü agonistleri ile aynı zamanda, accumbens'in rostral ve kaudal kısımları arasında da farklılıklar gösterir, rostral accumbenler dopaminlerin tükenmesi ve uygulanmasına daha duyarlıdır. Her ne kadar rostral ve kaudal çekirdek accumbens arasındaki bu fonksiyonel farklılıklar bildirilmiş olsa da, bu işlevsel farklılıkların neden var olduğu hala tam olarak anlaşılmamıştır.
Amfetamin kaynaklı lokomotor aktivite üzerindeki cinsel deneyim etkileri
Burada ve daha önceki bir çalışmada bildirilen sonuçlar, önceki cinsel deneyimin, cinsel davranış testine nöronal tepkileri duyarlı hale getirdiğini ve bu durumun dopamin salınımında hassaslaşmış artışları gösterdiğini göstermektedirKohlert ve Meisel, 1999) ve çekirdekteki hücresel aktivite accumbens (bu çalışma). Bununla birlikte, bir endişe konusu, önceki çalışmada deneyimli kadınların hem cinsel davranış testi hem de çevresel ipuçlarına cevap vermiş olmaları olabilir çünkü cinsel deneyim ve test aynı odada yapılmıştır. Motive edici davranışlarla koşullu olarak ilişkilendirilen çevresel ipuçları, teşvik edici özellikler kazanabilir ve çekirdek katmanlardaki dopamin seviyelerini daha da artırabilir (Reid ve diğerleri, 1996, 1998; Watson ve Küçük, 1999). İkinci bir endişe, erkek cinsel davranış ölçütlerinin kaydedilmemesi nedeniyle, cinsel davranış için test edilen iki grup dişinin karşılaştırılabilir miktarda vajinoservikal stimülasyon alıp almadığı bilinmemektedir. Çiftleşme sırasında çekirdeğin akumbensindeki dopamin salınımı için vajinoservikal stimülasyonun gerekli olduğu bildirilmiştir (Kohlert ve diğerleri, 1997). Belki de cinsel olarak deneyimli kadınlara daha fazla vajinoservikal stimülasyon uygulandı (bu çalışmada ölçülmedi), böylece c-Fos indüksiyonu arttı. Bu nedenle, kadın cinsel davranışının mesolimbik dopamin yolunu hassaslaştırdığını doğrulamak için, cinsel açıdan deneyimli ve naif kadınların, dopamin yolakları yoluyla etkilerine aracılık ettiği bilinen bir amfetamin enjeksiyonuna farklı tepki gösterip göstermediğini araştırdık. Ayrıca, gözlemlenen duyarlılaştırılmış tepkilerin tekrarlanan cinsel davranıştan kaynaklandığından ve çevrenin cinsel davranışa koşullu birleşmesinden dolayı olmadığından emin olmak için hamsterlerin amfetamine karşı davranışsal tepkileri yeni bir ortamda test edilmiştir.
Amfetamin, tüm dişi hamsterlerde genel aktiviteyi arttırdı. Bununla birlikte, cinsel açıdan deneyimli kadınlar, cinsel olarak saf kadınlardan daha erken amfetamine cevap vermiştir. Bu sonuçlar, tekrarlanan cinsel davranışların mesolimbik dopamin yolundaki nöronları hassaslaştırabileceği hipotezini doğrular ve yoldaki değişikliklerin, hem doğal motive olmuş davranışa hem de psikomotor uyarıcıya (çapraz duyarlılık) duyarlılaştırılmış davranışsal tepkiler ürettiğini öne sürmektedir.
Bu bulgular, ilaçlara ve cinsel davranışa cevap veren arabulucu sinirsel mekanizmaların olduğu hipotezi ile tutarlıdır (Robinson ve Berridge, 1993; Pierce ve Kalivas, 1997b). Son zamanlarda yapılan birkaç çalışma, tekrarlanan ilaca maruz kalma ile doğal motive olmuş davranışlar arasında çapraz duyarlılık gözlemlediğini göstermiştir. Sosyal yenilgi stresi, sıçanlarda kokain kendi kendine yönetimi için kazanım süresini azaltır (Tidey ve Miczek, 1997). Tekrarlanan morfin enjeksiyonları ile eşleştirilmiş bir ortam, erkek sıçanlarda cinsel davranışı kolaylaştırabilir (Mitchell ve Stewart, 1990a,b). Amfetamin ön-muamelesi ayrıca cinsel olarak saf olmayan erkek sıçanlarda cinsel davranışı kolaylaştırır ve çekirdek akumbensde arttırılmış dopamin salınımı ile koreledir (Fiorino ve Phillips, 1999).
c-Fos ekspresyonu, amfetamin tedavisinden sonra çekirdeğin accumbens'inde analiz edildi. Amfetaminin çekirdeğin aktüellerinde c-Fos ekspresyonunu ve cinsel açıdan deneyimli kadınlarda daha fazla artacağı varsayılmıştır. Bununla birlikte, çekirdeğin accumbens alt bölgelerinde amfetaminin c-Fos ifade eden hücre sayısı üzerinde bir etkisi bulunamamıştır. Tablodan apaçık ortada3 2 deneyindeki kontrol hayvanlarının (salin dişileri), 1 deneyindeki kontrol hayvanlarına kıyasla daha fazla c-Fos-pozitif hücreye sahip olduklarını (deney dişi yok). Badiani ve diğ. (1998) yeniliklerin arttığını bildirdi c-fos Çekirdekteki mRNA içeriği accumbens ve yeniliğin bu etkisic-fos Bazı beyin bölgelerinde içerik o kadar güçlüydü ki, yeni bir ortamda amfetamin verilmesi ilave bir artımlı tepki vermedi. Bu nedenle, çalışmamızda test odasının yeni ortamına taşınan stresi c-Fos proteininin aktif sentezini, dolayısıyla amfetamin ve cinsel deneyim tarafından indüklenen c-Fos ekspresyonundaki değişiklikleri maskelemek gibi görünüyor.
Çekirdeğindeki ortalama ± SEM bazal c-Fos-immünoreaktif hücrelerin sayısı, 1 ve 2 deneylerinde kontrol hayvanları için kabuk ve çekirdek biriktirir
Potansiyel önem
Bu deneyler gittikçe artan sayıda çalışma listesine katılıyor (Mitchell ve Stewart, 1990b; Fiorino ve Phillips, 1999; Miczek ve diğerleri, 1999Bir hayvanın deneyimlerinin, mesolimbic dopamin yolunun hem bir hayvanın doğal repertuarının bir parçası olan davranışlarına hem de insanların kötüye kullandığı bilinen bazı ilaçlara karşı duyarlılığını duyarlılaştırabileceğini belirtmek.Bilge ve Bozarth, 1987). Uyuşturucu bağımlılığı konusundaki araştırmalarda önemli bir konu, uyuşturucuların etkilerine karşı bireysel kırılganlıktır (Newcomb, 1992; Robinson ve Berridge, 1993) ve toplu olarak bu araştırma, insanlarda bağımlılığın gelişmesi hakkında fikir verebilir.
Dipnotlar
- Alınan Haziran 8, 2000.
- Düzeltme alındı Aralık 12, 2000.
- Kabul edilen Aralık 20, 2000.
Bu araştırma Ulusal Bilim Vakfı Hibe IBN-9723876 tarafından desteklenmiştir. Davranış testleri ve c-Fos işlemlerinde uzman yardımlarından dolayı Melissa Zila, Shannon McCanna, Marchelle Baker, Michael Huntington ve Deborah Shelley'e teşekkür ederiz.
Yazışmalar, 47907-1364 IN Purdue Üniversitesi, West Lafayette, Psikoloji Bilimleri Bölümü, Dr. Robert L. Meisel'e yönelik olmalıdır. E-posta: [e-posta korumalı].
- Telif Hakkı © 2001 Sinirbilim Derneği
;