Опіоїдна система в медіальній префронтальній корі опосередковує перекус-подібне прийом їжі (2013)

Addict Biol. 2013 Jan 24. doi: 10.1111 / adb.12033.

Блазіо А, Steardo L, Сабіно V, Cottone P.

Source

Лабораторія ім Звикання Розлади, кафедри фармакології та психіатрії, Медицинська школа університету Бостона, Бостон, Массачусетс, США.

абстрактний

Розлад харчування є запором наркоманія-подібне розлад, що характеризується надмірним харчування споживання протягом дискретних періодів часу.

Це дослідження було націлене на розуміння ролі опіоїдної системи в медіальній префронтальній корі (mPFC) в консервативному та мотиваційному аспектах переїдання. З цією метою ми підготували щурів-самців, щоб отримати або солодку, дуже приємну їжу дієту (смачні щури), або дієту для чау-чау (щури Chow) протягом години / день.

Тоді ми еоцінювали ефекти антагоніста опіоїдних рецепторів, налтрексону, що даються або системно, або конкретно на ділянку ядра ядра (NAcc) або mPFC на фіксованому співвідношенні 1 (FR1) та графіку прогресивного співвідношення арматури для харчування.

Нарешті, ми оцінили експресію генів проопіомеланокортина (POMC), про-динорфіну (PDyn) і про-енкефаліну (PEnk), що кодують пептиди опіоїдів в NAcc і mPFC в обох групах.

Пасажні щури швидко збільшували своє споживання в чотири рази. Налтрексон при системному введенні в NAcc знижував FR1 у відповідь на харчування та мотивація їсти в прогресивному співвідношенні як у чау, так і у смакових щурів; навпаки, при введенні в mPFC ефекти були надзвичайно селективними для щурів, які їдять їжу. Крім того, ми виявили вдвічі збільшення POMC та зменшення експресії гена PDyn на P50% в mPFC паблантних щурів порівняно з контрольними щурами; однак змін у NAcc не спостерігалось.

Наші дані говорять про те, що нейроадаптації опіоїдної системи в mPFC відбуваються після переривчастого доступу до сильно приємних харчування, яка може бути відповідальною за розвиток їжі, що нагадує запої.

Вступ

Розлад харчового розладу характеризується надмірним і неконтрольованим споживанням їжі дуже смачних продуктів протягом короткого періоду часу (; ; ). Суб'єкти, які переживають запої, описують це як втрату контролю під час надмірного споживання їжі, що призводить до незручної повноти та інтенсивного почуття огиди та збентеження (). Розлад їжі при запої часто зустрічається при супутній захворюваності на кілька захворювань, таких як ожиріння, діабет, серцево-судинні захворювання, а також інші психіатричні розлади (; ).

Докладаються значні зусилля, намагаючись виділити фактори, що сприяють розвитку запою (; ). Широко прийнята гіпотеза про етіологію запою є основою на якісному чергуванні смаку їжі. Дійсно, обмеження на "безпечні" страви з низьким смаком, як правило, обумовлене культурними нормами щодо худності та здоров'я, може викликати тягу до більш апетитних смачних продуктів та сприяє переїданню. Таким чином, систематичне чергування смакових властивостей призводить до самозберігаючогося порочного кола споживання схеми запою / обмеження (; ), порушуючи питання про те, чи можна вважати розладом їжі розлад наркоманії ("подібним") (; ; ; ).

Наразі не існує ефективних фармакотерапій проти розладів їжі, хоча запропоновано різні експериментальні цілі (; ). Опіоїдна система вважалася однією з головних мішень для лікування порушень харчового харчування, починаючи з 1970, завдяки раннім спостереженням, що антагоністи опіоїдів, такі як налтрексон і налоксон, змогли зменшити споживання їжі (). Пізніші дані показали, що опіоїдна система брала участь у двонаправленій модуляції поведінки при годуванні, враховуючи здатність морфіну підвищувати апетит щурів, позбавлених їжі та не позбавлених їжі (). З цих початкових спостережень помітна роль опіоїдної системи в опосередкуванні смаку їжі була роз'яснена, і широкі докази свідчать про те, що ядро ​​acumbens (NAcc) є ключовим регіоном, що опосередковує ці ефекти (). Останні дослідження свідчать про те, що опіоїдна модуляція гедонічного споживання їжі в NAcc є частиною більш складної мережі, яка включає декілька структур мозку, включаючи предфронто-кортикальні області ().

Навіть незважаючи на те, що широкий напрямок досліджень підкреслює основну роль опіоїдної системи в модуляції смаку та гедонічного годування, конкретна область мозку, в якій опіоїдна система опосередковує їжу, схожу на запої, досі невідома.

Тому метою цього дослідження було встановити, чи здатний антагоніст опіоїдів налтрексон, який вводиться системно, здатний придушити споживання та мотивацію отримувати дуже смачну їжу в моделі їжі, подібної до укусу щурів. З цією метою ми використовували нещодавно розроблену модель операнта, де щури самостійно вводили дуже смачну дієту при обмеженому доступі (1 год / день), імітуючи споживачі та мотиваційні особливості, які спостерігаються при розладі харчових розладів (). Потім ми продовжили визначення того, яка область мозку відповідала за системні ефекти налтрексону в придушенні споживання та мотивації до отримання цукрової, дуже смачної дієти. З цією метою ми микроинфузировали сайт специфічно антагоніста опіоїдів в оболонку NAcc та mPFC. Нарешті, ми оцінили експресію генів preOpioMelanoCortin (POMC), Pro-Dynorphin (PDyn) та Pro-Enkephalin (PEnk), кодуючи пептиди опіоїдів у NAcc та mPFC після історії вживання харчових напоїв.

Матеріал і методи

Тематика

Чоловічі щури Wistar (n= 70), дні 41 – 47 по прибуттю (Чарльз-Рівер, Вілмінгтон, Массачусетс) розміщувались у стандартних пластикових клітках, накритих дротом, у циклі зворотного світла 12: 12 h (світиться в 10: 00 год), в вологість (60%) і контрольований температурою (22 ° C) віварій. Після прибуття щури отримали доступ до чаулу на основі кукурудзи (Harlan Teklad LM-485 дієта 7012 (65% (ккал) вуглевод, 13% жиру, 21% білка, 341 cal / 100 g); Harlan, Indianapolis, IN) та води ad libitum в будь-який час. Процедури дотримуються Національні інститути охорони здоров’я Посібник з догляду та використання лабораторних тварин (NIH номер публікації 85-23, переглянутий 1996) і Принципи догляду за лабораторними тваринами (http://www.nap.edu/readingroom/bookslabrats) та були затверджені Інституційним комітетом з догляду та використання тварин Бостонського університету (IACUC). Експериментальні процедури не передбачали обмеження / позбавлення їжі або води, якщо інше не встановлено.

Наркотики

Налтрексон, (5α) -17- (циклопропілметил) -4,5-епокси-3,14-дигідроморфінан-6-one гідрохлорид був придбаний у Abcam (Cambridge, MA). Нальтрексон був щойно розчинений у ізотонічному відфільтрованому фізіологічному розчині (0.9%) у день випробування. Налтрексон вводили підшкірно (0, 0.03, 0.1 і 0.3 мг / кг, 1 мл / кг) 30 хвилин за час сеансу та конкретно в оболонці NAcc та mPFC (0, 5 та 25 ug / бік, двосторонній) безпосередньо перед сесія. Дози та терміни попереднього лікування базувалися на літературі (; ; ).

Процедура їжі, яка нагадує запої

Суб'єктів навчали самостійно вводити їжу та воду в окремі дослідні камери, що описуються детально в (; ). Детальнішу інформацію див Додаткові матеріали та методи.

Навчання

Оперантову модель їжі, що нагадує запої, виконували, як описано раніше (). Щури (n= 70) годували стандартною дієтою Харлана Теклада у своїй домашній клітці. Після періоду аклімації їжу замінили на основі дієти на основі AIN-76A, надалі її називають "Chow A / I" (дієта 5TUM, сформульована як екструдовані гранули 4 – 5 g, вуглевод 65.5% (ккал), жир 10.4% , 24.1% білка, 330 cal / 100 g; TestDiet, Richmond, IN). Щурів пройшли навчання для отримання оперативного самоуправління їжею (45-мг точних харчових гранул (Chow A / I)) та води (100 мкл) у встановленому співвідношенні графіку зміцнення 1 (). Диспенсер доставив прецизійний гранул 45 мг, який ідентичний домашній клітці ~ Екструдований раціон 5g, щоб переконатися, що Чау Споживання їжі щурами визначалося лише гомеостатичними потребами (; ). Щоденні сеанси проводилися до настання темного циклу і тривали 1 год.

Тестування

Після стабільних базових показників на сесіях самоуправління 1 h було розпочато процедуру тестування. Щури, відповідні за масою тіла, щоденним прийомом їжі, ефективністю корму, а також водою та їжею, що реагують на самовведення, були призначені абоЧау"Контрольну групу, яка в коробках для операторів отримала ті ж гранули 45 мг, що пропонуються на етапі тренування, або"Смачний"Група, яка натомість отримала дієтичну повноцінну дієту на основі AIN-50A, основана на шоколаді, з високим вмістом сахарози (76% ккал), порівнянна за макроелементами та щільністю енергії з раціоном чау (формула з ароматом шоколаду 5TUL: 66.7% [ккал ] вуглевод, 12.7% жиру, 20.6% білка, метаболізуюча енергія 344 cal / 100g; сформульована як харчові гранули з точністю 45 mg; TestDiet, Richmond, IN). Ця дієта з ароматом шоколаду вкрай віддається перевазі всім щурам (, ). Сесії проводилися щодня.

Прогресивний графік співвідношення підкріплення для їжі

Після стабілізації споживання в ході процедури, пов'язаної з їжею, щури (n= 53) були навчені прогресивному співвідношенню для харчових підсилювачів (45-мг гранульованих точних гранул для Чау груповий і 45 мг мг шоколаду, високоточний сахароза для гранул для Смачний група). Графік прогресивного співвідношення підкріплення для їжі виконували, як описано раніше (; ; ). Детальнішу інформацію див Додаткові матеріали та методи. Наприкінці кожного сеансу випробовуваних поверталися до своєї домашньої клітки, де Чау А / Я завжди був у розпорядженні ad libitum; сесії проводилися щодня.

Внутрішньочерепні операції та процедура мікроінфузії

Внутрішньочерепні операції

Після стабілізації прийому в сеансі операції щурам імплантували внутрішньочерепні канюлі. Стереотаксичні операції проводили, як описано раніше (; ; ). Детальнішу інформацію див Додаткові матеріали та методи. Координати канюлі, використовувані для оболонки NAcc та mPFC, були A / P +1.06 мм, M / L ± 0.75 мм, D / V -6.0 мм та A / P +3.2 мм, M / L ± 0.65 мм, D / V -3.5 мм відповідно. Інтерауральну планку встановили на плоскому черепі (спинний / черевний: брегма = лямбда); координати базувалися на атласі Паксінос і Ватсон (). Манекен з нержавіючої сталі (Plastics One, Inc., Roanoke, VA, США) підтримував прохідність. Після операції щурам було дозволено видужати після хірургічної процедури за 1 тиждень до початку експериментальної процедури.

Процедура мікроінфузії

Для мікроінфузії налтрексону манекенний штифт був видалений з направляючої канюлі та замінений інжектором з нержавіючої сталі, що виступає 1.0 мм для оболонки NAcc і 1.5 мм для mPFC за межі кінчика направляючої канюлі; інжектор був підключений через трубку PE 20 до мікросирінга Гамільтона, що управляється мікроінфузійним насосом (Kd Scientifics / Biological Instruments, Holliston, MA, США). Мікроінфузії доставляли об'єм 0.5 мкл протягом 2 хв; форсунки залишилися на місці додаткової хвилини, щоб мінімізувати зворотний потік. Лікування проводилося в повному обсязі латинських квадратних зразків, коли 1 – 3 проводили пробні дні без лікування, коли споживання їжі поверталося до базового рівня. Щурам присвоювали 3 дні прихильності до щоденних шахрайських ін'єкцій до початку лікування препаратами. Розміщення канюлі (Рис. 4) було підтверджено після завершення всіх випробувань мікроінфузією Ink Ink (0.5 мкл за 2 хв.). Зрізи 40 мкм збирали за допомогою кріостату, а місця розташування перевіряли під мікроскопом. З щурів 68, які використовувались для досліджень мікроінфузії, 3 були виключені з процедурних причин, які включали втрату або оклюзію канюлей або неможливість збереження стабільної продуктивності. У 14 решти щурів 65 положення канюлі було поза цільовим сайтом.

малюнок 4 

Малювання шматочків мозку корональних щурів. Точки представляють місця ін’єкції в (A) Оболонки NAcc і (B) mPFC, включений в аналіз даних.

Кількісна ПЛР у режимі реального часу

Одна когорта Чау та Смачний щури (n= 15) використовували для кількісної оцінки мРНК POMC, PDyn та PEnk. Тварин жертвували 24 год після останнього щоденного сеансу їжі. Пуансони медіальної префронтальної кори включають як прелімбічну, так і інфралімбічну області. Пуансони ядер акумуляторів включають як оболонку, так і серцевину. Процедури проводили, як описано раніше (). Детальніше див Додаткові матеріали та методи.

Статистичний аналіз

Вплив налтрексону на споживання їжі, споживання води та точки пробою аналізували за допомогою двостороннього змішаного проекту ANOVA, з історією дієти як фактором між суб'єктами та лікуванням як суб'єктним фактором з подальшими повторними заходами однобічного ANOVA. Вплив історії дієти на рівень мРНК було проаналізовано за допомогою непарних студентів t-тести. Змінні, які не виконали тест на нормальність, були проаналізовані як класифіковані (). Використовувані статистичні пакети були Instat 3.0 (GraphPad, San Diego, CA) та Systat 11.0 (SPSS, Chicago, IL).

результати

Вплив системного введення антагоніста опіоїду налтрексон на їжу, подібну операційному запою

Системне введення залежно від дози налтрексону зменшує FR1 у відповідь на їжу в обох Чау та Смачний групи (Малюнок 1A; Лікування: F(3,54) = 25.00, p<0.001; Дієта в анамнезі X лікування: F(3,54) = 0.64, ns) Односторонні ANOVA підтвердили ефект від лікування наркотиками в обох Чау (Лікування: F(3,27) = 7.62, p<0.0008) та Смачний щури (Лікування: F(3,27) = 16.78 p<0.0001). Post hoc аналіз показав, що, хоча доза 0.03 мг / кг була неефективною, як дози 0.1, так і 0.3 мг / кг значно зменшували самовведення їжі в двох групах порівняно зі станом транспортного засобу. Більше того, на споживання води впливало лікуванняТаблиця 1; Лікування: F(3,54) = 8.46, p<0.0001; Дієта в анамнезі X лікування: F(3,54) = 0.76, ns). Одностороння АНОВА підтвердила ефект лікування препаратами в обох Чау (Лікування: F(3,27) = 4.97, p<0.007) та Смачний (Лікування: F(3,27) = 3.76, p<0.022) щури. Post hoc аналіз виявив значне зменшення споживання води після введення доз 0.1 та 0.3 мг / кг у Чау щури та доза 0.3 мг / кг у Смачний щури, порівняно зі станом транспортного засобу.

малюнок 1 

Вплив системного лікування налтрексоном (0, 0.03, 0.1, 0.3 мг / кг, підшкірно) на (A) самоуправління їжею (n= 20) і (B) точка розриву на графіку прогресивного співвідношення арматури (n= 19) у самців щурів Wistar. Панелі представляють M± SEM. ...
Таблиця 1 

Вплив налтрексону на прийом води

Вплив системного введення антагоніста опіоїду налтрексон на графік прогресивного співвідношення посилення для їжі

Налтрексон, що вводиться системно, залежно від дози знижує точку перелому в обох Чау та Смачний щури (Малюнок 1B; Лікування: F(3,51) = 41.31, p<0.0001; Дієта в анамнезі X лікування: F(3,51) = 1.96, ns). Після значного основного ефекту від лікування (Чау груповий; Лікування: F(3,27) = 5.99, p<0.003; Смачний груповий; Лікування: F(3,24) = 6.87, p<0.002), post hoc аналіз показав, що доза 0.3 мг / кг суттєво зменшила точку зупинку в обох групах.

Вплив мікроінфузії налтрексону в оболонку NAcc на прийом їжі, що нагадує оперант

Мікроінфузія налтрексону в дозу NAcc залежно від зменшення реакції на їжу в обох Чау та Смачний група (Малюнок 2A; Лікування: F(2,32) = 10.76, p<0.0001; Дієта в анамнезі X лікування: F(2,32) = 4.36, p<0.02). Односторонні ANOVA виявили ефект лікування наркотиками в обох Чау (Лікування: F(2,18) = 5.72, p<0.01) та Смачний щури (Лікування: F(2,18) = 5.344, p<0.02) відповідно. Крім того, аналіз post hoc виявив значне зменшення прийому їжі після лікування найвищою дозою (25 мкг) в обох Чау та Смачний групи. Споживання води не впливало на лікування препаратами (Таблиця 1; Лікування: F(2,32) = 2.48, ns; Лікування історії дієти X: F(2,32) = 0.65, ns).

малюнок 2 

Вплив мікроінфузії з налтрексоном (0, 5, 25 мкг / сторона) в оболонці NAcc на (A) самоуправління їжею (n= 18) і (B) точка розриву на графіку прогресивного співвідношення арматури (n= 17) у самців щурів Wistar. Панель представляє M± SEM. Символи ...

Вплив мікроінфузії налтрексону в оболонку NAcc на графік прогресивного співвідношення зміцнення їжі

Коли налтрексон був спеціально мікроінфузований у NAcc, значне загальне зменшення точки пробою в обох Чау та Смачний група спостерігалася (Малюнок 2B; Лікування: F(2,30) = 16.72, p<0.0001; Дієта в анамнезі X лікування: F(2,30) = 5.22, p<0.01). Цей результат підтверджено одноразовим виконанням ANOVA індивідуально для кожної з двох груп (Чау груповий; Лікування: F(2,16) = 6.11, p<0.01; Смачний груповий; Лікування: F(2,14) = 10.62, p<0.001). Post-hoc аналіз виявив значне зменшення точки границі в обох групах при мікроінфузії доз 5 і 25 мкг. Зменшення точки розриву було порівнянно за величиною між Чау та Смачний щури (50.8% і 53.2%, порівняно з умовами транспортного засобу відповідно).

Вплив мікроінфузії налтрексону в mPFC на прийом їжі, що нагадує оперант

Нальтрексоновий сайт, специфічно мікроінфузований у mPFC, що впливає на продукти харчування, що реагують різними Чау та Смачний щури, як виявила значна взаємодія (Малюнок 3A; Лікування: F(2,30) = 4.77, p<0.02; Дієта в анамнезі X лікування: F(2,30) = 5.08, p<0.01). Дійсно, хоча налтрексон не впливав на реакцію на вживання Чау щури (Лікування: F(2,12) = 0.68, ns), це в залежності від дози зменшує запої в їжу Смачний щури (Лікування: F(2,18) = 9.25, p<0.002), при аналізі post hoc, що демонструє значне зменшення після дози 25 мкг, порівняно зі станом транспортного засобу. Отже, налтрексон, мікроінфузований у mPFC, вибірково впливав на випивку, як Смачний щури, не впливаючи на годування у контрольних щурів. Крім того, налтрексон не впливав на споживання води (Таблиця 1; Лікування: F(2,30) = 1.89, ns; Лікування історії дієти X: F(2,30) = 0.69, ns).

малюнок 3 

Вплив мікроінфузії з налтрексоном (0, 5, 25 мкг / сторона) в mPFC на (A) управління їжею (n= 17) і (B) точка розриву на графіку прогресивного співвідношення арматури (n= 17) у самців щурів Wistar. Панель представляє M± SEM. Символи позначають: ...

Вплив мікроінфузії налтрексону в mPFC за графіком прогресивного співвідношення посилення для їжі

Двостороння ANOVA виконувалась на точці розриву с Чау та Смачний щури після мікроінфузії налтрексону в mPFC виявили основний ефект від лікування препаратом (Малюнок 3B; Лікування: F(2,30) = 9.057, p<0.001; Дієта в анамнезі Х Лікування: F (2,30) = 1.84, ns). Однак, хоча однобічний аналіз ANOVA виявив ефект від лікування наркотиками в Чау група (Лікування: F(2,18) = 4.43, p<0.027), після пост-hoc аналізу ні доза 5 мкг, ні доза 25 мкг суттєво не відрізнялися від стану носія. Швидше за все, суттєвий ефект лікування, зазначений ANOVA, був зумовлений тенденцією до збільшення точки розриву після дози 5 мкг у порівнянні зі станом транспортного засобу. З іншого боку, в Смачний Група може спостерігати значний головний ефект від лікування наркотиками (Лікування: F(2,12) = 5.31, p<0.02), а найвища доза, введена мікрофлорою в mPFC, значно зменшила точку розриву порівняно зі станом транспортного засобу.

Кількісна ПЛР у режимі реального часу

Кількісна ПЛР у реальному часі показала, що 24 год після останнього сеансу самостійного введення їжі не має значних відмінностей у експресії POMC, PDyn та PEnk між Чау та Смачний щури спостерігалися в NAcc (Цифри 5A, 5B і 5C). Однак рівень мРНК POMC був значно вищим у ПФК Смачний щури, порівняно з Чау щури (збільшення на 117.9%; Малюнок 5D). Крім того, рівні експресії PDyn в ПФУ Смачний щури були значно нижчими порівняно з Чау щури (зниження 49.3%; Малюнок 5E). Не спостерігалося різниці між двома групами в рівнях мРНК PEnk у PFC (Малюнок 5F).

малюнок 5 

Експресія мРНК POMC, PDyn та PEnk в NAcc (A, B та C) і в mPFC (D, E та F) самців щурів Вістар. Мозги були зібрані 24 год після останнього щоденного сеансу їжі. Дані представляють M± SEM, виражений у відсотках від Чау група; ...

Обговорення

У цьому дослідженні ми показуємо, що антагоніст опіоїду налтрексон, який системно вводиться, неспецифічно зменшив споживання та мотивацію до отримання їжі, а також зменшив споживання води у обох щурів, які самостійно вводять звичайну дієту для чау, та щурів, що кусають їжу дуже смачна дієта. Що важливо, хоча ефекти як на чау, так і на смачне вживання їжі зберігалися, коли налтрексон був мікроінфузований в оболонку NAcc, антагоніст опіоїдів вибірково зменшив споживання та мотивацію отримувати дуже приємну їжу, але не регулярну чау, коли мікроінфузували в mPFC. Крім того, підтверджуючи селективність поведінкових ефектів, що спостерігаються після мікроінфузії налтрексону в mPFC, експресія мРНК POMC та PDyn була нерегульована в mPFC, але не в NAcc, у щурів, які їли їжу, порівняно з контрольними щурами. Ніякого ефекту не спостерігалося при експресії гена PEnk в будь-якій області.

Таким чином, системно вводили налтрексон, отже, дозозалежне зменшення споживання їжі обох Смачний та Чау щури. Системне лікування наркотиками також знизило мотивацію до роботи, щоб отримати як чау, так і приємну дієту за графіком прогресивного співвідношення підкріплення, затвердженої парадигми поведінки, що використовується для оцінки мотиваційної сили на придбання підсилювачів (; ). Після підшкірного введення налтрексону з найвищою дозою величина максимальних ефектів у зменшенні реагування FR1 та межі розриву графіку прогресивного співвідношення були подібними у двох групах (FR1: 58.2% та 54.0%; прогресивне співвідношення: 40.5 % і 43.3%, порівняно з умовами транспортного засобу в Росії Чау та Смачний щури відповідно). Отже, вплив системного налтрексону на прийом їжі, ймовірно, передбачає придушення як гомеостатичного, так і гедонічного поведінки при годівлі (). Цікаво, що наслідки підшкірного введення налтрексону не були вибірковими для їжі, оскільки лікування препаратами також зменшило споживання води як у контрольних, так і у випиваних щурів. В цілому ці початкові спостереження передбачають загальний супресивний вплив на поведінку, що приймається, після системного введення з опіоїдним антагоністом ().

У цьому дослідженні ми хотіли визначити, чи опосередковували опіоїдні рецептори в оболонці NAcc споживачі та мотиваційні аспекти їжі, що нагадує запої. Дійсно, опіоїдна система в цій області пропонується брати участь у модуляції корисних властивостей їжі (). Тут ми показуємо, що налтрексон, мікроінфузований в оболонку NAcc, зменшив не тільки запої, які їли дуже смачну дієту, але й прийом регулярного чау. Аналогічний результат був отриманий, коли ми протестували вплив мікроінфузії налтрексону в оболонку NAcc на точку розриву графіку прогресивного співвідношення підсилення до їжі. Дійсно, лікування наркотиками без розбору знижувало мотивацію отримувати їжу як при запої, так і у контрольних щурів. Ці висновки дозволяють припустити, що опіоїдні рецептори в оболонці NAcc здійснюють загальну модуляцію поведінки при годівлі та підсилюють ефективність їжі, незалежно від типу або від стимулюючої значущості раціону. На підтвердження цієї гіпотези Келлі та його колеги показали, що блокада мк-опіоїдних рецепторів в межах NAcc зменшує споживання як стандартної дієти чау, так і розчину сахарози (). На противагу тому, що ми спостерігали після системного введення налтрексону, мікроінфузія лікарської оболонки NAcc не впливала на споживання води, що дозволяє припустити, що опіоїдні рецептори в цій області мозку спеціально беруть участь у модуляції поведінки годування, а не загалом у поведінці, що приймається, або що необхідні більш високі дози для придушення споживання води.

Ми також досліджували, чи є опіоїдна система в mPFC важлива при посередництві споживання їжі дуже смачної їжі. У нашому дослідженні мікроінфузія антагоніста опіоїдів mPFC вибірково та залежно від дози зменшила споживання та мотивацію до отримання дуже приємної дієти у щурів, які їдять їжу, не впливаючи на прийом регулярних чау в контрольних щурів. Ні в одній групі, ні на споживання води, не впливали наркотики, що свідчить про те, що ефекти вибіркові для поведінки з годуванням. Фронтокортикальні ділянки мозку були причетні до модуляції поведінки годування (). Нещодавній звіт також показав, що мк-опіоїдні рецептори в mPFC відіграють важливу роль у русі переїдання ().

Важливо обговорити альтернативну інтерпретацію, що вплив налтрексону може бути наслідком його швидкої дифузії по мозку та периферії, на відміну від інших четвертинних похідних опіатних антагоністів (; ), які мають низьку швидкість дифузії (). Всупереч цій інтерпретації є докази того, що в цьому дослідженні налтрексон мікроінфузувався у дві різні ділянки мозку (NAcc та PFC) у Чау щури мали різний вплив. Крім того, аналіз часового курсу відповіді на їжу виявив, що налтрексон, що вводиться в mPFC, зменшував реакцію їжі на Смачний щури через лише 6 хв після мікроінфузії (M± SEM: 84.3 ± 7.5 проти 75.3 ± 6.6, транспортний засіб проти 25 мкг / бік відповідно, p<0.05). Через короткий проміжок часу альтернативна інтерпретація того, що спостережуваний ефект може бути результатом як загальної центральної нервової системи, так і периферичної блокади опіоїдних рецепторів, є малоймовірною. Крім того, на підтвердження достовірності даних, отриманих у цьому дослідженні, література широко повідомляє про ефекти налтрексону, мікроінфузованого в конкретних областях мозку (). Тим не менш, гіпотеза про те, що вплив налтрексону також може залежати від незначної дифузії в ділянках мозку, що перебувають поблизу оболонки Nacc або PFC, не може бути виключена.

Альтернативна інтерпретація відсутності впливу на прийом їжі після мікроінфузії налтрексону в префронтальну кору Чау щури полягає в тому, що спостережуваний ефект може бути наслідком супутньої блокади мю та каппа опіоїдних рецепторів. Хоча було показано, що обидві системи чинять протилежні модуляторні ефекти в багатьох процесах, включаючи винагороду, вони показали, що вони модулюють гомеостатичне годування (як, наприклад, прийом їжі в Чау тварин цього дослідження) аналогічним чином. Як активація опіоїдних рецепторів mu, так і каппа збільшується споживання їжі, тоді як їх блокада виявляє аноректичні ефекти (; ) Отже, наші висновки говорять про різну роль у модуляції харчової поведінки, яку здійснює опіоїдна система в NAcc та mPFC; в той час, як опіоїдні рецептори NAcc, схоже, беруть участь у загальній модуляції годування, незалежно від типу вживаної їжі (), опіоїдна система mPFC набирається лише після анамнезу обмеженого доступу до цукристої, смачної дієти, коли щури втрачають гальмівний контроль над їжею. Ця гіпотеза відповідає вищій пізнавальній функції та комплексному контролю за оцінкою винагороди, що здійснюється mPFC.

Гіпотеза про більш узагальнену, неспецифічну роль харчових опіоїдних рецепторів NAcc в посередництві поведінки при годівлі, та селективний набір mPFC підтримувався аналізом експресії генів POMC, PDyn та PEnk. У порівнянні з NAcc не спостерігалося суттєвої різниці в експресії трьох генів при порівнянні випивних та контрольних щурів. І навпаки, в mPFC щури, які їдять їжу, виявили більш ніж удвічі підвищення рівня мРНК POMC, що супроводжувалося зниженням на ~ 50% рівня мРНК PDyn, порівняно з контрольними щурами-чаулами.

Показано, що гени POMC та PDyn експресуються в обох цих областях мозку (; ; ). (Однак, дані свідчать про те, що опіоїдні пептиди, що виділяються в mPFC, можуть також походити з тіл клітин, що виступають з різних областей мозку (тобто з вентральної тегментальної області ()), що підвищує можливість того, що ефекти, виявлені в цьому дослідженні після мікроінфузії налтрексону в mPFC, можуть бути не пов'язані з варіацією експресії POMC та Pdyn у цій самій області мозку. POMC є попередником ендорфінів, які переважно зв'язують μ (але також δ) опіоїдні рецептори (), тоді як PDyn є попередником динорфінів, які переважно зв'язують к-опіоїдні рецептори (). Широкі дані свідчать про протилежну роль мк- та κ-опіоїдних рецепторів у модуляції різних процесів у мозку, включаючи аналгезію, толерантність, процеси пам'яті та винагороду (; ). Зокрема, у відповідності з цією гіпотезою, мк-опіоїдні рецептори широко підтверджують, що опосередковують корисні властивості зловживання їжею та деякими лікарськими засобами (); з іншого боку, було показано, що κ-опіоїдні рецептори опосередковують їхній відбійний та дисфоричний ефект, і вони були запропоновані як частина системи "відшкодування" (). Більш важливо, що в контексті цього дослідження показано, що фармакологічна активація або мк-, або к-опіоїдних рецепторів у префронтальній корі чинить протилежні корисні ефекти: мікроінфузії селективного агоніста мк-опіоїдних рецепторів викликають перевагу, тоді як мікроінфузії агоніста κ-опіоїдного рецептора викликають відраза місця ().

Важливим моментом обговорення є те, чи зміни експресії мРНК, що спостерігаються в цьому дослідженні, залежать від різниці в кумулятивному споживанні калорій або вазі тіла між Чау та Смачний щури. Незважаючи на те, що споживання їжі та маса тіла не були зафіксовані у когорті тварин, які використовувались для кількісної ПЛР у реальному часі, ми раніше продемонстрували, що застосована тут процедура, пов'язана із запоєм, не впливає на кумулятивний прийом їжі та на масу тіла. Дійсно, що щури, які їдять їжу, виявляють надмірне споживання під час доступу 1h до дуже смачної дієти, але компенсують протягом решти годин 23 дня, відмовившись від звичайної дієти чау (). Таким чином, ця аберрантна схема споживання не призводить до різної сукупності споживання калорій або маси тіла між поїданнями та контрольними щурами ().

Хоча було запропоновано подібність між схемою переїдання / обмеження при розладі їжі та випадком сп'яніння / відмови від зловживання наркотиками (), чи може тваринна модель, використана в цьому дослідженні, також бути корисною для дослідження негативної симптоматики, пов’язаної з відходом від дуже смачної їжі, невідомо. Підвищена експресія POMC (система «винагородження») та зменшення експресії Pdyn («система« антинаградна »), що спостерігається тут після виходу 24h з приємної дієти, свідчать про те, що тварини, ймовірно, не відчувають негативного емоційного стану. Однак для вирішення цього важливого аспекту дієтичного велосипедного циклу знадобляться подальші дослідження, що оцінюють емоційність та потенційне залучення стресових систем (наприклад, фактор, що вивільняє кортикотропін). Отже, диференційовані зміни в експресії генів POMC та Pdyn, що спостерігаються в mPFC, дійсно можуть бути інтерпретовані як загальне потенціювання корисних властивостей смачної їжі, що може бути наслідком або спонукати їжу запою у цих суб'єктів.

Загалом результати цього дослідження підтверджують гіпотезу про те, що опіоїдна система в передфронто-кортикальних областях мозку бере участь у контролі поведінки при годівлі та розширює її до специфічного контексту дезадаптаційного надмірного споживання дуже приємної їжі, що спостерігається у їдких запоїв. (). Фронтокортикальні області мозку відіграють головну роль в оцінці винагород та прийнятті рішень (); велика література демонструє, що суб'єкти, які страждають залежністю та розладом їжі, виявляють дисфункції в mPFC, які пов'язані зі зміненою оцінкою винагороди (). Таким чином, наші поведінкові, фармакологічні та молекулярні спостереження підтримують гіпотезу, що опіоїдна система є ключовим посередником гедонічного годування () та припускають, що нейроадаптації опіоїдної системи в mPFC можуть бути відповідальними за гіпероцінку високопокушених продуктів, що призводять до втрати контролю над прийомом їжі.

 

Додатковий матеріал

Матеріал подачі

Подяки

Ми вдячні Стівену Сен-Сіру, Адіті Р. Нараян, Вамзее Нееруконді, Ноа Келлі, Джин Вон-Парку, Анупу Равіллі та Шиширу Йети за технічну допомогу, а також Тамарі Зеріч за редакційну допомогу. Ця публікація стала можливою завдяки грантовим номерам DA023680, DA030425, MH091945, MH093650A1 та AA016731 ​​від Національного інституту зловживання наркотиками (NIDA), Національного інституту психічного здоров’я (NIMH) та Національного інституту зловживання алкоголем та алкоголізмом (NIAAA) , Професором кар’єрного розвитку Пітера Пола (ПК) та Програмою бакалаврських дослідницьких можливостей Бостонського університету (UROP). За його зміст відповідають виключно автори та не обов’язково відображає офіційні погляди Національних інститутів охорони здоров’я.

Виноски

Вклад авторів

AB, PC та VS відповідали за концепцію та дизайн дослідження. AB, PC та VS проводили поведінкові та молекулярні експерименти. AB та PC проводили аналіз даних. PC, VS та LS допомогли в інтерпретації результатів. AB та PC склали рукопис. PC, VS та LS забезпечили критичний перегляд рукопису для важливого інтелектуального змісту. Усі автори критично переглянули вміст та затвердили остаточну версію для публікації.

 

посилання

  • Акрітас МГ. Метод перетворення рангів у деяких двофакторних конструкціях. Журнал Американської статистичної асоціації. 1990; 85 (409): 73 – 78.
  • Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Докази цукрової залежності: поведінкові та нейрохімічні ефекти переривчастого, надмірного споживання цукру. Neurosci Biobehav Rev. 2008; 32 (1): 20 – 39. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Bals-Kubik R, Ableitner A, Herz A, Shippenberg TS. Нейроанатомічні сайти, що опосередковують мотиваційні ефекти опіоїдів, відображені у парадигмі переваги умовного місця у щурів. J Pharmacol Exp Ther. 1993; 264 (1): 489 – 495. [PubMed]
  • Blasio A, Narayan AR, Kaminski BJ, Steardo L, Sabino V, Cotton P. Модифікована коригувальна задача затримки для оцінки імпульсивного вибору між ізокалоричними підсилювачами у не позбавлених самців щурів: ефекти 5-HT (2) A / C та 5 Агоністи рецепторів -HT (1) A. Психофармакологія (Berl) 2012; 219 (2): 377 – 386. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Боднар RJ, Glass MJ, Ragnauth A, Cooper ML. Загальні антагоністи опіоїдних мю та каппа в ядрі змінюють прийом їжі в умовах депривації, глюкопрівіку та приємних умов. Мозок Рез. 1995; 700 (1 – 2): 205 – 212. [PubMed]
  • Боднар Р.Д., Ламонте N, Ізраїль Y, Кандов Й., Акерман Т.Ф., Хаймова Е. Взаємні опіоїдно-опіоїдні взаємодії між вентральною тегментарною зоною та областями ядра приєднуються при годуванні щурів, спричинених агоністом. Пептиди. 2005; 26 (4): 621 – 629. [PubMed]
  • Boeka AG, Локкен KL. Залучення префронтальної системи до прийому їжі. Їжте розлад ваги. 2011; 16 (2): e121 – e126. [PubMed]
  • Carlezon WA, Jr, Devine DP, Wise RA. Звичкоутворюючі дії номіфензину в ядрах ярусів. Психофармакологія (Berl) 1995; 122 (2): 194 – 197. [PubMed]
  • Кларк Л, Бечара А, Дамасіо Н, Ейткен МР, Сахакян Б. Дж., Роббінс TW. Диференціальний вплив осередкових та вентромедіальних префронтальних уражень кори на прийняття ризикованих рішень. Мозок. 2008; 131 (Pt 5): 1311 – 1322. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Cooper SJ, Jackson A, Kirkham TC. Ендорфіни та прийом їжі: агоністи опіоїдних рецепторів каппа та гіперфагія Фармакол Біохім Бехав. 1985; 23 (5): 889 – 901. [PubMed]
  • Corwin RL. Випивка щурів: модель переривчастої надмірної поведінки? Апетит. 2006; 46 (1): 11 – 15. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Корвін Р.Л., Григсон П.С. Огляд симпозіуму – Харчова залежність: факт чи вигадка? J Nutr. 2009; 139 (3): 617–619. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Бавовна P, Sabino V, Nagy TR, Coscina DV, Zorrilla EP. Мікроструктура годівлі, спричиненої дієтою, сприйнятливою до ожиріння проти резистентних щурів: центральний вплив урокортину 2. J Фізіол. 2007; 583 (Pt 2): 487 – 504. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Бавовна P, Sabino V, Roberto M, Bajo M, Pockros L, Frihauf JB, Fekete EM, Steardo L, Rice KC, Grigoriadis DE, Conti B, Koob GF, Zorrilla EP. Набір системи CRF опосередковує темну сторону нав'язливого прийому їжі. Proc Natl Acad Sci США A. 2009; 106 (47): 20016 – 20020. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Бавовна P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Переривчастий доступ до бажаної їжі знижує посилення ефективності чау у щурів. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2008a; 295 (4): R1066 – R1076. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Бавовна P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Опіоїдно-залежний передбачувальний негативний контраст та їжа, що нагадує запої, у щурів з обмеженим доступом до вподобаної їжі. Нейропсихофармакологія. 2008b; 33 (3): 524 – 535. [PubMed]
  • Бавовна P, Wang X, Park JW, Valenza M, Blasio A, Kwak J, Iyer MR, Steardo L, Rice KC, Hayashi T, Sabino V. Антагонізм рецепторів Sigma-1 блокує компульсивно-подібне харчування. Нейропсихофармакологія. 2012 [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Day R, Lazure C, Basak A, Boudreault A, Limperis P, Dong W, Lindberg I. Переробка продинорфіну пропротеїновою конвертазою 2. Розщеплення одиничних основних залишків та посилена обробка за наявності активності карбоксипептидази. J Biol Chem. 1998; 273 (2): 829 – 836. [PubMed]
  • Епштейн DH, Shaham Y. Щур-їжа щурів та питання харчової залежності. Nat Neurosci. 2010; 13 (5): 529 – 531. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Френк Н, Роджерс GH. Пригнічує вплив налоксону на споживання їжі та води щурів. Behav Neural Biol. 1979; 26 (1): 23 – 40. [PubMed]
  • Гарзон М, Пікель В.М. Ультраструктурна локалізація імунореактивності Leu5-енкефаліну в мезокортикальних нейронах та їх вхідних терміналах у тегментальній зоні вентралі щурів. Синапс. 2004; 52 (1): 38 – 52. [PubMed]
  • Gosnell BA, Levine AS, Morley JE. Стимуляція прийому їжі селективними агоністами mu, kappa та дельта-опіоїдних рецепторів. Наук про життя 1986; 38 (12): 1081 – 1088. [PubMed]
  • Хаган М.М., Мосс DE. Стійкість схвалення їжі після обмеження в анамнезі з переривчастими переглядами смачної їжі щурів: наслідки для нервової буліми. Int J Їжте розбрат. 1997; 22 (4): 411 – 420. [PubMed]
  • Хольцман С.Г. Поведінкові ефекти роздільного та комбінованого введення налоксону та d-амфетаміну. J Pharmacol Exp Ther. 1974; 189 (1): 51 – 60. [PubMed]
  • Iemolo A, Valenza M, Tozier L, Knapp CM, Kornetsky C, Steardo L, Sabino V, Cottone P. Виведення з хронічного, періодичного доступу до дуже смачної їжі викликає депресивну поведінку у нав'язливих їжі щурів. Бехав Фармакол. 2012; 23 (5 – 6): 593 – 602. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Джаварас К.Н., Папа Х.Г., Лалонда Дж. К., Робертс Дж. Л., Нілліні Й.І., Лаїрд Н.М., Булік К.М., Ворона СЖ, МакЕлрой СЛ, Уолш БТ, Цуанг М.Т., Розенталь НР, Хадсон Дж. Спільне виникнення розладу в їжі з психічними та медичними розладами. J Clin Psychiatry. 2008; 69 (2): 266 – 273. [PubMed]
  • Kelley AE, Bless EP, Swanson CJ. Дослідження впливу антагоністів опіатів, що потрапляють у ядро ​​ядер, на годування та пиття сахарози у щурів. J Pharmacol Exp Ther. 1996; 278 (3): 1499 – 1507. [PubMed]
  • Koob GF, Le Moal M. Наркоманія, порушення регулювання винагороди та алостаз. Нейропсихофармакологія. 2001; 24 (2): 97 – 129. [PubMed]
  • Laessle RG, Tuschl RJ, Kotthaus BC, Pirke KM. Поведінкові та біологічні кореляти дієтичної обмеженості в нормальному житті. Апетит. 1989; 12 (2): 83 – 94. [PubMed]
  • Le Merrer J, Becker JA, Befort K, Kieffer BL. Переробка опіоїдної системи в мозку. Physiol Rev. 2009; 89 (4): 1379 – 1412. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Leriche M, Cote-Velez A, Mendez M. Наявність мРНК пропіомеланокортину в медіальній префронтальній корі щурів, ядрах яєць та вентральній тегментальній зоні: дослідження за допомогою RT-PCR та методів гібридизації in situ. Нейропептиди. 2007; 41 (6): 421 – 431. [PubMed]
  • MacDonald AF, Billington CJ, Levine AS. Вплив антагоніста опіоїдного налтрексону на годування, спричинене DAMGO, у вентральній тегментарній області та у ділянці оболонки ядра у щура. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003; 285 (5): R999 – R1004. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Akil H, Watson SJ. Експресія мРНК опіоїдних рецепторів у ЦНС щура: анатомічні та функціональні наслідки. Тенденції Neurosci. 1995; 18 (1): 22 – 29. [PubMed]
  • Mena JD, Sadeghian K, Baldo BA. Індукція гіперфагії та споживання вуглеводів шляхом стимуляції му-опіоїдних рецепторів у описаних ділянках лобової кори. J Neurosci. 2011; 31 (9): 3249 – 3260. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Моран Т.Г., Вестертерп-Платентенга М. Потенційна роль та дефіцит у лобних ділянках кори головного мозку, пов'язаних з виконавчим контролем прийому їжі. Int J Obes (Лондон) 2012; 36 (5): 625 – 626. [PubMed]
  • Nathan PJ, Bullmore ET. Від гедоніки смаку до мотиваційного приводу: центральні му-опіоїдні рецептори та поведінка, що їсть. Int J Neuropsychopharmacol. 2009; 12 (7): 995 – 1008. [PubMed]
  • Пан ЗЗ. mu-протилежні дії каппа-опіоїдного рецептора. Тенденції Pharmacol Sci. 1998; 19 (3): 94 – 98. [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. Мозок щурів у стереотаксичних координатах. Другий ред. Орландо: Академічна преса; 1986.
  • Polivy J, Герман CP. Дієта та запої. Причинний аналіз. Am Psychol. 1985; 40 (2): 193 – 201. [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Blasio A, Iyer MR, Steardo L, Rice KC, Conti B, Koob GF, Zorrilla EP. Активація сигма-рецепторів спонукає пити напої у сардинських алкоголістів, що віддають перевагу алкоголю. Нейропсихофармакологія. 2011; 36 (6): 1207 – 1218. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Sabino V, Cotton P, Steardo L, Schmidhammer H, Zorrilla EP. 14-Метоксиметопон, сильнодіючий мугоопіоїдний агоніст, двофазно впливає на споживання етанолу у сардинських алкоголь-переважних щурів. Психофармакологія (Berl) 2007; 192 (4): 537 – 546. [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Zhao Y, Iyer MR, Steardo L, Jr, Steardo L, Rice KC, Conti B, Koob GF, Zorrilla EP. Антагоніст сигма-рецепторів BD-1063 зменшує споживання етанолу та посилення в тваринних моделях надмірного пиття. Нейропсихофармакологія. 2009; 34 (6): 1482 – 1493. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Загрозливий DJ, McCarthy PS. Диференціальний вплив морфіну на прийом їжі та води в їжу, позбавлену їжі та вільно годуючих щурів. Психофармакологія (Berl) 1980; 72 (1): 103 – 106. [PubMed]
  • Schroeder RL, Weinger MB, Vakassian L, Koob GF. Метилалоксоній дифундує з мозку щурів повільніше, ніж налоксон після прямої внутрішньомозкової ін'єкції. Neurosci Lett. 1991; 121 (1 – 2): 173 – 177. [PubMed]
  • Stein RI, Kenardy J, Wiseman CV, Dounchis JZ, Arnow BA, Wilfley DE. Що зумовлює запої при розладі переїдання ?: Проспективне дослідження попередників та наслідків. Int J Eat Disord. 2007; 40 (3): 195–203. [PubMed]
  • Taqi MM, Bazov I, Watanabe H, Nyberg F, Yakovleva T, Bakalkin G. Промотор продинорфіну SNP, пов'язаний із алкогольною залежністю, утворює неканонічний сайт зв'язування AP-1, який може впливати на експресію генів у мозку людини. Мозок Рез. 2011; 1385: 18 – 25. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Блокада ядерних рецепторів опіату послаблює внутрішньовенну винагороду героїну у щура. Психофармакологія (Berl) 1985; 86 (1 – 2): 37 – 42. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Pettit HO, Bloom FE, Koob GF. Вплив внутрішньомозкового шлуночкового введення хлориду метил-налоксонію на самовведення героїну щурам. Фармакол Біохім Бехав. 1985; 23 (3): 495 – 498. [PubMed]
  • Wilfley D, Berkowitz R, Goebel-Fabbri A, Hirst K, Ievers-Landis C, Lipman TH, Marcus M, Ng D, Pham T, Saletsky R, Schanuel J, Van Buren D. Binge з їжею, настроєм та якістю життя у молоді з діабетом типу 2: основні дані сьогоднішнього дослідження. Догляд за діабетом. 2011; 34 (4): 858 – 860. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Williams KL, Бродбрідж CL. Потенціал налтрексону для зниження самонадання етанолу щурам більший для підшкірної та внутрішньочеревної ін'єкції. Алкоголь. 2009; 43 (2): 119 – 126. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  • Вуллі Дж. Д., Лі БС, Кім Б, Поля HL. Протилежний вплив внутрішньоядерних прихильників мю та агоністів опіоїдних каппа на сенсорне специфічне насичення. Неврознавство. 2007; 146 (4): 1445 – 1452. [PubMed]
  • Чжан М, Келі А.Е. Посилене споживання жирів з високим вмістом жиру після стимуляції стриатической му-опіоїди: картографування мікроін'єкції та вираження fos. Неврологія. 2000 (99): 2 – 267. [PubMed]
  • Ziolkowska B, Stefanski R, Mierzejewski P, Zapart G, Kostowski W, Przewlocki R. Навмисний випадок не сприяє впливу самоконтролю кокаїну на експресію гена продинорфіну та проенкефаліну в передньому мозку щурів. Мозок Рез. 2006; 1069 (1): 1 – 9. [PubMed]