Nörobilim jurnali, 15 mart 2001, 21(6): 2123-2130;
+ Mualliflar bilan bog'lanish
mavhum
Nukleus akumbensidagi dopaminning uzatilishi dori vositalari, stress yoki harakatsiz harakatlar bilan faollashishi mumkin va bu ogohlantirishlarga takroran ta'sir qilish bu dopaminning ta'sirini sezgirlashi mumkin. Ushbu tadqiqotning maqsadi ayol jinsiy xulq-atvorining nervlarning akumbens neyronlarini faollashtirishi va o'tmishdagi jinsiy tajribaning amfetamin uchun yadrodagi akumbenlarda neyronal javoblarni o'zaro ta'sirlash-qilmasligini aniqlashdir. Immunokytokimyoviy etiketkalarni qo'llash orqali yadro akumbenslarining turli pastki mintaqalarida (rostral, o'rta va kaudal darajadagi qobiq va boshqalar) yadroli jinsiy tajribani o'zida mujassam etgan ayollar hamsteri bo'yicha tekshirildi. 6 haftalik jinsiy tajriba yoki jinsiy ozchilikka asoslangan ayol hamsterlar kattalar erkak hamsterlar ta'sirida jinsiy xatti-harakatlari uchun sinovdan o'tgan. Oldingi jinsiy tajriba rostral va kaudal darajalarda c-Fos etiketkasini kuchaytirdi, ammo yadro mushaklarining o'rta darajasida emas. Jinsiy xatti-harakatlarni sinab ko'rish yadroda ishlaydigan akumbenslarning yadroida emas, balki yadro etiketkasini oshirdi. Ayol jinsiy xatti-harakati mezolimbik dopamin yo'lidagi neyronlarni sezgirlashi uchun jinsiy yo'l bilan tajribali va jinsiy axloqsiz ayollarning amfetaminni inyeksiyasiga nisbatan lokomotor ta'sirlari solishtirilgan. Amfetamin barcha ayollarda umumiy lokomotor faollikni oshirdi. Ammo jinsiy hayotga jalb qilingan hayvonlarga amfetaminga tezda javob berishdi. Ushbu ma'lumotlar ayol jinsiy xatti-harakati yadro akumbensidagi neyronlarni faollashtirishi va jinsiy tajriba amfetaminning neyronal javoblarini o'zaro sezgirlashi mumkinligini ko'rsatadi. Bunga qo'shimcha ravishda, bu natijalar yadro akselerasining qobig'i va yadrolari va uning oldingi oqi atrofida funktsional farqlarga qo'shimcha dalillar keltirib chiqaradi.
- ayol jinsiy axloq
- yadroli akumbenslar
- chig'anoq
- asosiy
- c-Fos
- sezuvchanlik
- o'zaro faoliyat sezgirlik
- amfetamin
O'rtacha miya ventral tegmental hududidan kelib chiqqan va turli forebrin yadrosiga, jumladan, yadroviy akumbenslarga dopamin neyronlari mezolimbik dopamin tizimining bir qismidir. Ushbu dopamin tizimining tuyadi xatti-harakatini tartibga solish uchun muhim bo'lganligi (Mitchell va Gratton, 1994; Salamone, 1994, 1996; Ikemoto va Pansepp, 1999), shuningdek, giyohvandlik moddalarini o'z-o'zini boshqarishPer va Vezina, 1998;Koob, 1999; Lorrain va boshq., 1999; McKinzie va boshq., 1999; Peoples va boshq., 1999; Bradberry va boshq., 2000). Turli xil dori-darmonlarni (masalan, kokain, amfetamin va geroin) tizimli usulda qo'llash dopamin yo'llarini faollashtiradi (Pontieri va boshq., 1995; Nisell va boshq., 1997; Pirs va Kalivas, 1997a; Tanda va boshq., 1997; Tanda va Di Xiara, 1998; Barrot va boshq., 1999; Cadoni va Di Xiara, 1999) va ushbu dori vositalariga takroriy ta'sir qilish ushbu dopaminga sezgir bo'lgan neyronlarniRobinson va boshq., 1988; Kalivas va boshq., 1992; Kalivas va Duffy, 1993; Pirs va Kalivas, 1995; Kuczenski va boshq., 1997; Nisell va boshq., 1997; Birrell va Balfour, 1998; Heidbreder va Feldon, 1998; Cadoni va Di Xiara, 1999; Cadoni va boshq., 2000). Tadqiqot natijalariga ko'ra, nukleus akumbenslar juftlash bilan bog'liq bo'lgan ba'zi xususiyatlarga javob berishadi. Sichqoncha jinsida jinsiy ta'sir o'tkazish vaqtida hujayra ichidagi dopamin darajalari yadroli akumbenslarda oshadi (Mermelstein va Becker, 1995; Pfaus va boshq., 1995) va hamsters (Meisel va boshq., 1993; Kohlert va boshq., 1997; Kohlert va Meisel, 1999). Dori-darmonlarni takroriy qo'llanishga o'xshash ko'plab jinsiy xatti-harakatlar, shuningdek, jinsiy tajribani dopamin yo'lidagi neyronlarni sezgirlashi mumkinligini ko'rsatib, yadroviy akumbens dopamin darajasini oshiradiKohlert va Meisel, 1999).
Nucleus accumbens ko'plab anatomik jihatdan farqli subkordiyalardan iborat bo'lib, ularning eng tanasi qobiq va yadrodir. Qobiq va yadroning anatomik birikuvlari bu ikki subregionning turli funktsiyalarniCrawley va boshq., 1985a,b; Heimer va boshq., 1991; Zaxm va Brog, 1992; Brog va uning hamkorlari, 1993;Kalivas va Duffy, 1995; Maldonado-Irizarry va boshq., 1995; Pirs va Kalivas, 1995; Pontieri va boshq., 1995; Broening va boshq., 1997; Heimer va boshq., 1997; Kelley va boshq., 1997; Stratford va Kelley, 1997; Heidbreder va Feldon, 1998; Lanca va boshq., 1998; Bassareo va Di Xiara, 1999; Di Chiara va boshq., 1999b; Groenewegen va boshq., 1999; Kelley, 1999; McKinzie va boshq., 1999; Zaxm, 1999; Jigarrang va Molliver, 2000). Nukleus akumbenslari heterojen yadro bo'lgani sababli, ayol jinsiy xatti-harakatlarning yadro aksumbenslarining o'ziga xos quyi hududlariga joylashtirilgani yoki butun yadro bo'ylab yoyilganligi aniqlanmagan. Yuqorida keltirilgan savolga javob berish uchun ishlatiladigan usullar (masalan, mikrodializ) akumbenslarning funktsional heterojenligini o'rganish uchun etarli darajada spatiallanmagan. Bunga javoban, c-Fos proteini uchun immunitsitokimyoviy ishlov berish yadro akselerasining pastki qismlari o'rtasida alohida hujayra faolligini tekshirish uchun bir usulni taklif etadi. Shunday qilib, ushbu tajribaning birinchi maqsadi ayol jinsiy xatti-harakatlaridan so'ng uyali aktivizatsiya yadro aksumbenslarining muayyan kichik zonalariga nisbatan mahalliylashtirilishini aniqlashdan iborat edi.
Ushbu dopamin yo'llarining qiziqarli xususiyati o'zaro xurujdir. Boshqacha qilib aytganda, avvaliga bitta dori bilan sezgir bo'lgan dopamin neyronlari birinchi marta berilgan boshqa dori-darmonlarga sezgir ta'sir ko'rsatadi (Cunningham va Kelley, 1992; Pirs va Kalivas, 1997a; Birrell va Balfour, 1998; Teylor va Xorger, 1999). Dori-darmonlar orasida o'zaro sezgirlikdan tashqari, bir necha tadkikotlar takroriy ta'sirlar bilan farmakologik vositalar bilan tabiiy motivatsiya qiluvchi xatti-Mitchell va Styuart, 1990a,b; Tidey va Miczek, 1997; Fiorino va Phillips, 1999). Shuning uchun biz jinsiy tajribali va jinsiy beozor hayvonlarning amfetamin singari dopamin yo'llarini (ya'ni, o'zaro faoliyat sezuvchanlik) faollashtirish uchun ma'lum bo'lgan yangi ogohlantirishga javob berishini tekshirdik. Agar ayol jinsiy xatti-harakati dopamin yo'llarini sezgir qiladigan bo'lsa, jinsiy jihatdan tajribali ayollarda amfetaminni bir marta yuborish uchun kengaytirilgan xatti-harakatlar ko'rsatilishi kerak.
MATERIALLAR VA USLUBLAR
Bosh usullar
Hayvonlar. Erkak va urg'ochi Suriya xomilalari Charlz daryosi laboratoriyalaridan (Kingston, NY) yoshi ~ 60 d yoshida olib kelingan. Ayollarning alohida-alohida joylashtirilganligi, erkaklarning ogohlantiruvchi hayvonlari esa uch yoki to'rtta guruhda plastik hujayralarda joylashtirilgan (50.8 × 40.6 × 20.3 sm). Hayvon koloniyasi xonasi 22: 1 va 30: 11 PM (30 / 14 soatlik yorug'lik / quyuq aylanish) orasidagi chiroqlar bilan doimiy haroratda (10 ° C) saqlanib qoldi. Oziq-ovqat va suv mavjud edi ad libitum.
Ushbu tajribada qo'llaniladigan tartiblar Milliy Sog'liqni saqlash institutlariga muvofiq keltirilgan Laboratoriya hayvonlarini saqlash va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanma va Purdue Hayvon Xizmat va Foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.
Jinsiy tajriba. Ayollarga laboratoriyaga kelganidan taxminan 1 hafta o'tgach ular natriy pentobarbital (Nembutal) anesteziyasi (8.5 gamma tana og'irligi, ip uchun 100 mg) bilan ikki tomonlama ovariektomizatsiya qilindi. Ovaryektomiyadan so'ng, urg'ochi ayollar dastlab ikki guruhga bo'lingan. Xotin-qizlar guruhi 6 haftasida jinsiy tajribani uyg'otuvchi erkak bilan oldi; ikkinchi guruh jinsiy aloqa bilan bog'liq bo'lib qoldi. 6 haftalik davrida barcha urg'ochi ayollarga haftada bir marta gormonal haydalgan. Jinsiy tajribadan oldin 48 va 24 soatlarida urg'ochi ayollarga 10 ml paxta moyi ichida 0.1 mg estradiol benzoat bilan teri ostiga AOK qilindi. Tajribali sinov kuni 500 ml urg'ochi yog '(teri osti inyeksiyasi) da urg'ochilarga 0.1 mkg progesteronni qabul qildi. Jinsiy tajribaga ega bo'lmagan ayollar gormonal rejim bilan AOK qilingan va koloniyalar xonasida o'z uylarida saqlangan. Progesteron administratsiyasidan so'ng 4-5 soatida eksperimental ayolning uy qafasida boshqa jinsiy xatti-harakatlarni qo'llash orqali jinsiy tajribani olgan kattalar erkak hamster joylashtirildi. 6 hafta jinsiy tajribasi davomida erkaklar va ayollarning bir necha marta juftlashganligi ehtimolini kamaytirish uchun erkaklarni o'z ichiga olgan hujayralarning tartibi har hafta o'zgarib turardi.
Immunitetokimyo. Natriy pentobarbitalning haddan tashqari dozasi bilan o'ldirilgan ayollar hamsteri 25 mm PBS eritmasi, pH 7.5, 2 min uchun (oqim tezligi, 25 ml / min), so'ngra 4 daqiqada 20% paraformaldehid bilan PBS ichida 2 min. Braunlar paraformaldehidda 10 soatdan keyin o'rnatildi va 4% sukroz PBS ichida kecha davomida XNUMX ° C darajasida saqlandi.
Serial koronal 40 mikrosxemalarning muzlatilgan qismi barcha yadroviy moslamalar orqali olingan. PBSda uchta 10 minli yuvinishdan so'ng bo'limlar C-Fosga (1: 6000: 0.3% Triton X-100, Santa Cruz biotexnologiyasi, Santa Cruz, KA) 28 yoki asosiy antikorda kalbindin-D (1 kDa) (6000: 0.3% Triton X-100 bilan PBS ichida XNUMX; Chemicon International, Temecula, CA) 4 ° S da 48 soat uchun. Keyin ikkala c-Fos va calbindin-D qismlari biotinli qilingan quyonlarga qarshi IgG ikkinchi darajali antikorda (45: 1 in PBS, Elite Vectastain ABC to'plami, Vektor Laboratoriyalari, Burlingame, CA) keyin xona haroratida 200 minut uchun inkübe qilindi. xona haroratida 1 min uchun avidin-biotinli horseradish peroksidaza kompleksi (50: PBS ichida 45: 10, elit Vectastain ABC to'plami) bilan inkubatsiyani, har bir inkubatsiyadan oldingi PBSda uchta 10 min durulayla. PBS-da ikki marta chikish va 0.1 da bir XNUMX daqiqa yuvinishdan keyin m Tris bufer, pH 7.6, c-Fos va calbindin-D tasniflari 5% vodorod periks o'z ichiga olgan Tris tamponida 10% diaminobenzidin (DAB) (Aldrich, Milwaukee, WI) ichida 0.08 va 0.003 min uchun inkubatsiya qilindi va 0.015% nikel xlorid. Barcha bo'limlar Tris tamponida va deionlashtirilgan suvda qayta yuvilib, keyinchalik xrom-alum bilan qoplangan slaydlarga o'rnatildi. Slaydlar quritilgan, quritilgan, tozalangan va Permount (Fisher Scientific, Pitsburg, Pensilvaniya) dan foydalangan holda qoplangan.
Mikroskopik tahlil. Nalbon to'qimasi kalbindin-D uchun bo'yalgan, u yadro mushaklarining qobig'i va yadrosini aniqlaydi (Jongen-Relo va boshq., 1994a; Johnson va Wood, 1999), dorsal yadro akumbenslarning rostral, o'rta va kaudal darajasida bir qismini aniqlash uchun ishlatilgan. Kalbindin uchun bo'yalgan rostral, o'rta va kaudal darajadagi yadroli akumbenslarning bo'limlari 1 A-C. Sichqoncha bilan solishtirganda, Suriya xamzasida kalbindin-D immunoreaktivligida yadro va qobiq o'rtasida kamroq farqlar mavjudligi xabar qilingan, ammo bu peptid uchun bo'yash hali ham yadro gilamchalarini (subduktsiya)Johnson va Wood, 1999). 0.1 mm namunaviy hududni qamrab olgan qutilar2 (0.2 × 0.5 mm) har bir bo'lim uchun dorsal qobig'i va yadro aksumbensining yadrosi ustidan joylashtirilgan. Har bir bo'lakning tasviri shaffof plyonka ustiga chiqarildi va tasvirlar keyinchalik har bir hayvon uchun mos keladigan c-Fos uchastkalariga o'rnatildi, bu qutida barcha hayvonlar uchun bir xil joyga joylashtirilgan. Shakl 1, D va E, 6 hafta jinsiy tajribani olgan va jinsiy xatti-harakatlari uchun sinovdan o'tgan hayvonlardan bir kaudal qismini ko'rsatadi. Ushbu quti shaklidagi kaudal nukleus akumbensining ichki qismiga joylashtirildi 1 Dva shaklidagi kaudal akumbenslarning qobig'ida1 E. Xuddi shu o'lchamlarga ega bo'lgan quti xuddi shu to'qima qismida medial singulat korteksida va medial va lateral dorsal kaudat yadrosining ustiga yadro akumbenslari uchun namuna olingan har uch darajadagi joylashtirildi. Juftlikning c-Fosga ta'sirida rostral-kaudal farqlar bo'lishi mumkin deb taxmin qilganimiz sababli, tanlanishimizning anatomik aniqligini oshirish uchun har bir sathda faqat bitta bo'lim tahlil qilindi. Tanlangan har bir hududdagi c-Fos-immunoreaktiv hujayralar soni kompyuterlashtirilgan tasvirni tahlil qilish tizimiga ulangan videokamera yordamida hisoblandi (BioQuant MegM; R & M Biometrics, Nashville, TN).
Sinov 1
Dastlabki eksperiment jinsiy tajribalarning ta'sirini va yadroviy akumbenlarda, dorsal kaudat yadrosi va singulat korteksida c-Fos induksiyasini sinovdan o'tkazdi. Tajribaning maqsadi ikki barobar edi. Birinchi maqsad, avvalgi jinsiy tajriba va / yoki xulq-atvor sinovlari oqibatida miya mintaqalaridagi har qanday hujayrada faollashuvlar mavjudligini aniqlash edi. Agar c-Fos ifodasi o'zgargan bo'lsa, tahlillar uchta miya hududida ma'lum subregionsga o'zgarishi mumkinmi, aniqlandimi?
Ayol Suriyalik hamsterlar 6 haftalik jinsiy tajribaga ega bo'lishdi yoki jinsiy aloqa bilan shug'ullanishdi. 6 haftalik tajriba davomida, ayolning lordozi qabul qilgan jami miqdori (har qanday 10 min sinov sessiyasi uchun orqada joylashgan dorsofleksiya bilan birga harakatchanlik) o'lchandi. Erkak jinsiy xatti-harakatlarning hech bir chorasi qayd etilmagan. 7 haftaligi davomida estradiol benzoat va progesteron in'ektsiyalarining bir xil seriyasi berilgan. Bu safar jinsiy tajribali va sodda ayollarning yarmi jinsiy xatti-harakatlari uchun o'zlarining katakchasida kattalar erkakni joylashtirish orqali sinab ko'rildi. Qolgan ayollar o'zlarining uy qafalarida qolishdi. 60-90 daqiqada erkaklar ta'siridan so'ng, urg'ochi intrakardial perfüze qilindi va m-Fos ifodasi uchun ularning miyalari qayta ishlandi. Jinsiy xatti-harakatlari uchun sinovdan o'tmagan urg'ochi ayol progesteronni qabul qilishdan keyin 4 soatdan keyin perfüze qilindi.
Ma'lumotlarni tahlil qilish. O'tgan jinsiy tajribadan qat'i nazar, hujayra hisoblashlari 7 xaftasida jinsiy aloqa uchun sinovdan o'tmagan urg'ochi ayollar o'rtasida farq bo'lmadi (Jadvalga qarang).1 misol uchun), eksperimental ayollar natijada tahlil qilish uchun uchta davolash guruhiga bo'lindi. Birinchi guruh 6 hafta jinsiy tajribani olgan ayollarni o'z ichiga olgan va jinsiy axloqsizlikka (tajriba / sinov, n = 6). Ikkinchi guruh avvalgi tajribaga ega bo'lmagan, ammo jinsiy xatti-harakatlar uchun sinovdan o'tkazilgan (tajriba / sinov,n = 8). Yakuniy guruh barcha jinsiy axloqsizlik tajribasidan qat'i nazar, jinsiy xulq-atvorda tekshirilmagan barcha ayol hamsterlarni o'z ichiga olgan (test, n = 13). Jinsiy xatti-testlarni olib bormaydigan ikkala guruh tahlillarda statistik quvvatni oshirish uchun birlashtirildi. Dorsal yadroidagi akumbens, dorsal kaudat yadrosi va singulat korteksidan olingan c-Fos-vitrayli hujayralar soni uch guruhga taqqoslandi.
Hujayra hisoblagichlari multifaktorli ANOVA yordamida tahlil qilindi. Oddiy asosiy effekt ANOVA va post hoc Newman-Keuls testlari mos ravishda amalga oshirildi. Xulq-atvorli ma'lumotlar (lordoz vaqtlari) ikkita quyruq yordamida tahlil qilindi t sinov.
Sinov 2
Ikkinchi tajriba, yangi ogohlantiruvchi, amfetaminning jinsiy tajribali va jinsiy axloqsiz ayol hamsterlarida xulq-atvorga qarshi ta'sirlanishini taqqoslash qobiliyatini taqqosladi. C-Fos ifodasi yadrodagi akumbens, dorsal kaudat yadrosi va singulat korteksida hujayrali faoliyat modelining 1da olingan natijalarga o'xshashligini aniqlash uchun qayta tahlil qilindi.
Ayol Suriyalik hamstersga 6 haftalik jinsiy tajriba berildi yoki jinsiy aloqa bilan shug'ullanmadi. 7 haftasida barcha urg'ochi ayollar progesteronni qabul qilishdan keyingi yangi muhitga (masalan, tanish bo'lmagan xonada 10 gallonli shisha akvarium) ko'chirildi. 4 min uchun 10 galon oynali akvaryumga urilgan ayollar, shu vaqtdan so'ng jinsiy hayotga jalb qilingan va jinsiy axloqsiz ayollarning yarmid(1 ml xNUMX% NaCl ichida 1 kg tana vazniga 1.0 mg, doktor Devid Nikols, Purdue universiteti sovg'asi). Qolgan ayollar 0.9% NaCl (0.9 kg tana vazniga 1 mg) bilan AOK qilingan. Keyinchalik ayollar 1 gallon akvariumga yana qo'shimcha 10 daqiqa uchun joylashtirildi. 60 minli sessiyalar ayollarning umumiy harakatlanishini tahlil qilish uchun videotasmaga o'tkazildi. Umumiy faoliyat testidan so'ng 70 daqiqada urg'ochilar intrakardial perfüze qilindi va m-Fos ifodasi uchun ularning miyalari qayta ishlandi.
Videoteyp tahlil qilish. 7 haftalik davomida lokomotor faoliyatni sinab ko'rish uchun 70 min sessiya videotasmaga kiritildi. 10 gallonli shisha akvariumlar video ekranda uchta teng joyga bo'lindi va ayollarning lokomotor faolligi mintaqaviy xochlar soni bo'yicha qayd etildi.
Ma'lumotlarni tahlil qilish. O'tmishdagi jinsiy hikoyalar sho'rlangan eritilgan ayol hamstersning harakatlanishiga ta'sir qilmadi; shuning uchun eksperimental ayollar tahlil qilish uchun uchta davolash guruhiga bo'lindi. Birinchi guruh 6 hafta jinsiy tajribani olgan ayollarni amfetamin (tajriba / amfetamin, n = 8). Ikkinchi guruh amfetamin nazorati ostida bo'lgan ayollardan tashkil topgan, ammo jinsiy tajribaga ega bo'lmagan (tajriba / amfetamin,n = 8). Oxirgi guruh, avvalgi jinsiy tajribadan qat'iy nazar (sho'rlangan, n = 15). Ayollarning o'rtacha lokomotor faolligi 70 min sinov davomida (10 min davrda) ikki faktorli ANOVA yordamida uchta davolash guruhlari o'rtasida taqqoslandi. Oddiy asosiy effekt ANOVA va post hoc Newman-Keuls testlari mos ravishda amalga oshirildi.
C-Fos uchun bo'yalgan hujayralar soni o'tmishdagi jinsiy tajribaga qaramasdan sho'rlangan erituvchilar orasida farq qilmadi. Shuning uchun, dorsal yadrodan akumbens, dorsal kaudat yadrosi va singulat korteksidan olingan c-Fos-vitrayli hujayralar soni birinchi tajribada bo'lgani kabi bir xil uchta davolash guruhlari o'rtasida taqqoslangan. Hujayra hisoblagichlari multifaktorli ANOVA yordamida tahlil qilindi. Oddiy asosiy effekt ANOVA va post hoc Newman-Keuls testlari mos ravishda amalga oshirildi.
Natijalar
Sinov 1
Jinsiy xatti-harakatlar
7 haftaligida jinsiy xarakterdagi test davomida lordoz vaqtlari tajriba / test va tajriba / test guruhlari o'rtasida taqqoslanmagan. 10 min sinovda o'rtacha lordoz davomiyligi tajriba / sinov guruhi uchun 341 ± 53 soniya va tajriba / sinov guruhi uchun 478 ± 20 soniya bo'ldi. Hech tajriba / sinov guruhidagi urg'ochilar tajribali / sinov guruhidagi ayollarga qaraganda ancha uzoq vaqt davomida lordozni qabul qilishgan (t 6 = 5.131; p = 0.05). Bundan tashqari, jinsiy tajriba lordozaga ta'sir qilmadi. Tahlillar tajriba / test guruhida ayollar uchun haftada 1 (399 ± 44 soniya) va hafta 7 (341 ± 53 soniya) o'rtacha davomiyligi o'rtasida sezilarli farq yo'qligini ko'rsatdi.
c-Fos ifodasi yadrodagi akumbenslarda
Davolanish davrida rostral-kaudal darajadagi marta-yadroli davolanishning uch tomonlama ANOVA davolashning asosiy ta'sirini aniq ko'rsatmadi va davolanish darajasi, akumbens darajasi va qobiq yadrosi o'rtasida uch tomonlama shovqin yo'q edi (6-rasm). 2); ammo ikkita muhim ikki tomonlama o'zaro ta'sirlar (davolovchi vaqtlari qobiq yadrosi va rostral-kaudal darajadagi davolash vaqti) aniqlandi.
Davolanish vaqtlarini qobiq-yadroli shovqinlarni tekshirish davolash guruhlarining asosiy yadrolarini faqat yadro akselerasining yadrosida aniqladi (6-rasm). 3). Ikkala juftlikdagi taqqoslashlar shuni ko'rsatdiki, ushbu ayollar 7 (tajriba / sinov va tajriba / test) haftasida jinsiy xulq-atvor uchun sinovdan o'tgan, yadro gulxanlarining yadroidagi C-Fos-vitrining hujayralari sinovdan o'tgan ayollarga qaraganda sezilarli darajada ko'proq edi (yo'q sinov) (Newman-Keuls, p <0.01). Akumbens yadrosi qobig'ida sinovlarning ta'siri kuzatilmadi. Bundan tashqari, akumbenslarning qobig'ida yoki yadrosida c-Fosni ifodalovchi hujayralar soniga jinsiy tajribaning aniq ta'siri yo'q edi.
Roral-kaudal darajadagi shovqinlarni tekshirish muddati, davolovchi guruhlarning rostral va kaudal darajadagi asosiy ta'sirini aniqladi, ammo yadro mushaklarining o'rta darajasida emas edi (6-rasm). 4). Newman-Keuls post hoc testlar 6 haftasidagi jinsiy tajribani olgan va jinsiy xatti-harakatlar (tajriba / test) uchun test qilingan ayollarning rostral nucleus accumbens-da sinovdan o'tgan, lekin avvalgi jinsiy tajribani olmagan ayollardan ko'proq bo'lgan c-Fos-musbat hujayralarga ega ekanligini ko'rsatdi (tajriba / sinov yo'q; p <0.05) va jinsiy xatti-harakatlar uchun sinovdan o'tmagan ayollar (test yo'q;p <0.01). The post hoc testlari kaudal yadrosi akumbenslari uchun o'xshash natijalarni ko'rsatdi. Tajriba / test guruhidagi urg'ochi ayollarda tajribali / tajribali guruhda ayollarga qaraganda kaudal nukleus akumbensida c-Fos ifodalangan hujayralar ko'p edi (p <0.05) va test guruhi yo'q (p <0.01). Shuning uchun, 7-hafta davomida jinsiy xatti-harakatlarni sinab ko'rish, faqat 6 haftalik tajribani olgan ayollar uchun rostral va kaudal yadrodagi akumbenslarda c-Fos bilan bo'yalgan hujayralar sonini ko'paytirdi.
kaudat yadrosida va singulat korteksida c-Fos ifodasi
Dorsal kaudat yadrosidan hujayra hisoblagichlari uch tomonlama ANOVA yordamida ham tahlil qilindi. Tahlillar faqat medial va lateral kaudat yadrosida davolash va c-Fos ifodasi o'rtasidagi ta'sirni aniqladi (F (2,24) = 3.514;p <0.046). Shu bilan birga, bir tomonlama ANOVA tomonidan medial va lateral kaudat yadrosini alohida tahlil qilish tajriba / test, tajriba / test va sinov guruhlari o'rtasida c-Fos bilan bo'yalgan hujayralar sonida farq yo'qligini ko'rsatdi (Jadval2). Bundan tashqari, c-Fosni ifodalovchi hujayralar sonining jinsiy tajribasi yoki xulq-atvorining asosiy ta'siri yoki singulat korteksida (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) hech qanday ta'sir ko'rsatilmagan.
Sinov 2
Lokomotorlar faoliyati
70 min sinov davomida ayollarning tajriba / amfetamin, tajriba / amfetamin va sho'r-ichimliklarni davolash guruhlarida o'rtacha faolligini taqqoslaydigan ikki tomonlama ANOVA (davolash vaqti sinovi davri) davolash guruhi va sinov davri o'rtasidagi ta'sirni aniqladi. Ushbu ta'sirni o'rganish uchun individual davolash guruhlari bir tomonlama ANOVA bilan alohida tekshirildi. Tahlillar amfetamin bilan tajriba qilingan (tajriba / amfetamin va tajriba / amfetamin) bo'lgan ayollarning ikkita guruhi uchun 70 min sinov davomida o'rtacha umumiy faoliyatdagi sezilarli o'zgarishlarni ko'rsatdi. Shu bilan birga, sho'rlangan ayollarning umumiy faoliyati 70 daqiqada sezilarli darajada o'zgarmagan (Fig.5). Newman-Keuls post hocundan keyin 10 min sinov muddatlarini qanday farq qilganini aniqlash uchun testlar qo'llanildi. Ikki tomonlama ko'plab taqqoslashlar amfetamin bilan jinsiy tajribaga ega bo'lgan ayollarning umumiy faolligi INNJNNNNNNNNNNNNNNN minimaldan oshganligini ko'rsatdip <0.05). Bundan tashqari, in'ektsiyalardan oldin 10 minut bilan taqqoslaganda, tajriba / amfetaminni davolash guruhidagi ayollar 20 daqiqada ancha faol bo'lib qolishdi (p <0.05) va 30 min (pUkoldan keyin <0.05). Aksincha, amfetaminning jinsiy jihatdan sodda ayollarga ta'siri in'ektsiyadan 20 minut o'tgach aniq ko'rinmadi. Ayni paytda, bu urg'ochi ukol qilishdan oldin 10 minut bilan solishtirganda ancha faolroq edi (p <0.05). Bundan tashqari, amfetamin berilgan jinsiy sodda ayollarning faolligi 30 minut davomida sezilarli darajada oshdi (p <0.05) va 40 min (pUkoldan keyin <0.01).
c-Fos ifodasi
Jinsiy tajriba va amfetaminning yadro akkumbenlari ichida c-Fos ifodasini ta'siri o'rganish uchun uch tomonlama ANOVA (davolash davrlari rostral-kaudal darajali marta qobiq yadrosi) ishlatilgan. Davolanishning asosiy jihatlari, davolanish darajasi, akumbenslar darajasi va qobiq yadrosining uch tomonlama o'zaro ta'siri yo'q. Bundan tashqari, tahlil, davolovchi guruhlar va v-Fos ifodasi orasidagi akumbenslar orasidagi yoki davolash guruhlari orasidagi yadro akumbenslarning rostral, o'rta va kaudal darajalarida etiketkalash (C-Fos) ma'lumotlar ko'rsatilmagan).
Dorsal kaudat yadrosidan hujayra hisoblagichlari uch tomonlama ANOVA yordamida ham tahlil qilindi. Dastlabki tahlillar oldingi jinsiy tajribani yoki amfetaminning c-Fos-musbat hujayralari soniga nisbatan sezilarli ta'sir ko'rsatmadi. Bundan tashqari, oldingi jinsiy tajriba yoki amfetaminning c-Fos ifodalangan hujayralar soniga ta'siri ikki tomonlama ANOVA (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) yordamida singulat korteksida topilgan.
Munozara
Ushbu tergovning maqsadi ikki baravar ko'p edi. Biz, avvalo, jinsiy tajribalarning hujayraning turli subregionslarida hujayrali faoliyatga ta'sirini o'rganib chiqdik. Ikkinchi masala, avvalgi jinsiy tajriba, mezolimbik dopamin yo'lini sezgirlashi mumkinmi, jinsiy tajribali va naif hayvonlarning amfetaminni inyeksiyasiga solishtirish orqali tekshirildi. Bizning topilmalarimiz nafaqat jinsiy jinsiy munosabatning yadro akumbensidagi neyronlarni faollashtirishi, balki jinsiy tajribani ham amfetamin uchun neyronlarning javoblarini sezgirlashi mumkinligini ko'rsatmoqda.
C-Fos ifodasini jinsiy xatti-harakatlarning yadrodagi akumbensning qobig'i va yadroidagi ta'siri
Jinsiy xatti-harakatlarda yadrodagi C-Fos ifodasini oshirgan, ammo avvalgi tadqiqotlarni qo'llab-quvvatlaydigan yadroviy akumbenslarning qobig'i emas, balki ayol kemiruvchilarda yadro gulxanlarida neyronlarni faollashtirishi mumkinligini ko'rsatgan (Meisel va boshq., 1993; Joppa va boshq., 1995; Mermelstein va Becker, 1995; Pfaus va boshq., 1995; Kohlert va boshq., 1997; Kohlert va Meisel, 1999). Nukleus akumbenslarning funktsional dichotomiyasiga taalluqli adabiyotlar dopamin transplantasida differensial o'zgarishlarning farmakologik va fiziologik ogohlantirishlarga javoban yadro mushaklarining ichki qismidagi yadrosi va yadrosidagi ko'p sonli hisobotlardan iborat. Bir qator dori-darmonlarni qo'llash administratsiyasi yadroviy akumbens qobig'idagi hujayra dopamin darajasida selektiv o'sishiga olib keladi (Pontieri va boshq., 1995; Nisell va boshq., 1997; Pirs va Kalivas, 1997a; Tanda va boshq., 1997; Tanda va Di Xiara, 1998; Barrot va boshq., 1999; Cadoni va Di Xiara, 1999). Xuddi shunday, juda yoqimli ovqatlar (Tanda va Di Xiara, 1998; Di Chiara va boshqalar, 1999a; Kelley, 1999), engil stress (masalan, oyoq zarbasi) (Kalivas va Duffy, 1995; Tidey va Miczek, 1997; Bruijnzeel va boshq., 1999; Wu va boshqalar, 1999) va atrof-muhit yangiliklari (Rebec va boshq., 1997;Rebek, 1998) Shuningdek, dopamin transmissiyasini yadro akselerasining qobig'ida selektiv ravishda ko'paytirishni ta'minlaydi.
Bizning topilmalarimiz, qobiq va yadrolarning jinsiy xulq-atvorga javob berish uchun, yadro emas, balki yadroni topsak ham, funktsional jihatdan farq qiladigan faraz bilan mos keladi. Biroq, yadro gabaritlari qobig'ida C-Fos immunoreaktivligida o'zgarishlar bo'lishi mumkin, ammo bu o'zgarishlar aniqlanmadi. Qobiq murakkab tarzda turli pastki mintaqalarga, medial, ventral va lateral qobiqlarga ajralib turadi, bunda medial qobiqning ventral va dorsal joylari, ehtimol, yana ikkita alohida mintaqa (Groenewegen va boshq., 1999). Qobiqning bu quyi qismlari, shuningdek yadroning medial va lateral qismlari kortikal va subkortikal sohalardan olingan turli xil birikmalarni oladi (Groenewegen va boshq., 1999). Bundan tashqari, ushbu kichik hududlarda joylashgan neyronlarning alohida anatomik qismlari (masalan,Groenewegen va boshq., 1999). Ushbu ishda jinsiy xatti-harakatlarning c-Fos ifodasiga ta'siri faqat dorsomedial qobiqda o'rganilganligi sababli, c-Fos-musbat hujayralarining soni aslida boshqa qobiq osti hududida o'zgargan bo'lishi mumkin.
Juda ko'p yadroli akumbens vazifalari qobiq mintaqasiga lokalize qilinganligiga qaramasdan, yadrodagi akumbenslardagi turli neyronli davrlarning turli harakatlarning mustahkamlovchi xususiyatlariga vositachilik qilishini taxmin qilish oqilona. Carelli va boshq. (2000)yaqin vaqt ichida natriy akumbensi neyronlarning neyronlarning tabiiy nukleinlarga o'xshash natriy faolligini namoyish etayotganini xabar qildi. Bu ikki tabiiy nazorat qiluvchi (ya'ni, oziq-ovqat va suv) operatsiyani bajarish vaqtida, ammo tabiiy kuvaytga qarshi javob berishda turli xil otishni o'rganish usullari. Nukleus akumbensidagi alohida neyronli davrlarning oziq-ovqat va suvni takomillashtirish va kokain mukofotiga oid ma'lumotlarini aniqlaydiCarelli va boshq., 2000).
C-Fos ifloslanishining jinsiy tajribasi yadro aksumbenslarining rostral-kaudal eksa orqali ta'siri
Subkuterniya tashkilotini rostral-kaudal nukleus akumbensi orqali o'rganadigan adabiyot kichikdir; Biroq, aniq funktsional va anatomik farqlar kuzatildi. Bizning topilmalarimiz akkumbinlarning rostral-kaudal oqi bo'ylab neyrokimyoviy va vosita javoblarini differentsial tartibga solib qo'ygan ishlar bilan mos keladi. Kolesistokinin (CCK) rostral va kaudal yadroidagi akumbenslarda dopaminning ta'siriniCrawley va boshq., 1985a,b), kaudal akumbenslarga dopamin ta'siriga uchragan hiperrolokomozani kuchaytiradi, dopamin bilan kolokallangan CCK neyronlari tomonidan innervatsiya qilingan hudud (Crawley va boshq., 1985a,b; Lanca va boshq., 1998). Shu bilan birga, CCK rostral nucleus accumbens, alohida CCK va dopamin projeksiyonlarını olgan mintaqadaCrawley va boshq., 1985a,b; Lanca va boshq., 1998). Amfetaminning rostral qobig'i, kaudal qobig'i yoki yadrosiga bevosita infüzyoni xatti-harakatlarga va hujayra tashqari dopamin va serotonin darajasiga ta'sir ko'rsatishiHeidbreder va Feldon, 1998). Opioid peptidlar, modda R, dopamin D1 retseptorlari (Voorn va Docter, 1992; Jongen-Relo va boshq., 1994b; Voorn va boshq., 1994) va asetilkolinning chiqarilishi (Jongen-Relo va boshq., 1995) dopamin va dopamin retseptorlari agonistlari tomonidan rostral va koval qismlari o'rtasida farqlar mavjud bo'lib, rostral akumbenslar dopaminning kamayishi va qo'llanilishiga nisbatan sezgirdir. Roral va kaudal nucleus accumbens o'rtasidagi ushbu funktsional farqlar bildirilgan bo'lsa-da, nima uchun bu funktsional farqlar mavjudligi hali to'liq tushunilmagan.
Amfetamin bilan indikator lokomotor faoliyatga jinsiy tajriba
Bu erda qayd etilgan natijalar va ilgari qilingan bir ishda, avvalgi jinsiy tajriba jinsiy xatti-harakatlarni sinab ko'rish uchun neyronlarning javoblarini sezgir bo'lishini ko'rsatib, dopamin salınımındaki sensitize o'sishKohlert va Meisel, 1999) va yadroviy akumbensdagi uyali faoliyat (bu ish). Shunga qaramay, avvalgi ishda tajribali ayollarning ham jinsiy xulq-atvor va atrof-muhitga oid ko'rsatmalarga javob berishi mumkin, chunki jinsiy tajriba va testlar bir xonada o'tkazildi. Maqsadli harakatlar bilan shartli bog'liq bo'lgan ekologik izlar rag'batlantiruvchi xususiyatlarga ega bo'lishlari va yadro gulxanlarida dopamin darajasini oshirishlari mumkin (Reid va boshq., 1996, 1998; Watson va Little, 1999). Ikkinchidan, ikkinchi darajali tashvish shuki, erkak jinsiy xatti-harakatlari qayd etilmaganligi sababli jinsiy xatti-harakatlar uchun sinov qilingan ayollarning ikkita guruhi vaginokervik stimullashning o'xshash miqdori olinganmi ma'lum emas. Vaginokervikal stimulatsiyani juftlash paytida dopaminning ajralib chiqishi uchun zarur bo'lganligi haqida xabar berilgan (Kohlert va boshq., 1997). Ehtimol, jinsiy jihatdan tajribali ayollar ko'proq vaginoservikal stimullashni oldi (bu ishda o'lchanmagan), shuning uchun c-Fos indüksiyasini oshiradi. Shuning uchun ayol jinsiy xulq-atvorni mezolimbik dopamin yo'lini sezdiradigan tarzda tekshirish uchun jinsiy tajribali va sodda ayollarning amfetaminning in'ektsiyasiga xilof tarzda javob berishini, dopamin yo'llari orqali o'z ta'sirini vositachilik qilish uchun ma'lum bo'lgan yana bir ogohlantirishni tekshirdik. Bundan tashqari, kuzatilgan sensitize qilingan javoblar atrof-muhitning jinsiy munosabatda bo'lishiga bog'liq emas, balki takrorlangan jinsiy xatti-harakatlar sababli bo'lishini ta'minlash uchun hamstersning amfetaminga bo'lgan qiziqishlariga javoblari yangi muhitda sinovdan o'tkazildi.
Amfetamin barcha ayol hamsterlarda umumiy faoliyatni oshirdi. Biroq, jinsiy hayotga ega bo'lgan ayollar amfetaminga tezda jinsiy o'spirin ayollarga nisbatan javob berishdi. Ushbu natijalar takrorlangan jinsiy xatti-harakatlar mezolimbik dopamin yo'lidagi neyronlarni sezgirlashi mumkinligi haqidagi gipotezani tasdiqlaydi va yo'lning o'zgarishi tabiiy harakatlarning ta'siriga va psixomotor stimulyatorga (o'zaro sezgirlik) ta'sirchan xulq-atvorli javoblar berishini ko'rsatib beradi.
Ushbu topilmalar giyohvandlik va jinsiy xatti-harakatlarga javob beruvchi umumiy neyron mexanizmlar mavjudligi haqidagi gipotezasiga mos keladi (Robinzon va Berrij, 1993; Pirs va Kalivas, 1997b). So'nggi paytlarda o'tkazilgan bir necha tadkikotlar giyohvand moddalar ta'sirini qayta tiklash va tabiiy motivatsiyalashgan xatti-harakatlar o'rtasidagi o'zaro bog'liqlikni sezdi. Ijtimoiy mag'lubiyat stressi kalamushlarda kokainning o'z-o'zini boshqarishiga erishish vaqtini pasaytiradi (Tidey va Miczek, 1997). Takroriy morfin inyeksiya bilan bog'langan muhit erkak sichqonlarda jinsiy xatti-harakatni engillashtiradi (Mitchell va Styuart, 1990a,b). Amfetamin oldingi davolash, shuningdek, jinsiy o'spirin erkaklar kalamushlarida jinsiy xulq-atvorni engillashtiradi va yadro gilamlarda kuchaygan dopamin relefi bilan bog'liq (Fiorino va Phillips, 1999).
Amfetaminni davolashdan so'ng c-Fos ifodasi yadro gulxanlarida tahlil qilindi. Amfetaminning yadrodagi akumbenslarda c-Fos ifodasini va jinsiy jihatdan tajribali ayollarda ko'proq bo'lishini faraz qilingandi. Ammo, amfetaminning c-Fos ifodalangan hujayralar soniga ta'siri hech qanday yadrodagi akumbensning pastki qismida topilgan. Jadvaldan ko'rinib turibdi3 2 (sho'r females) eksperimentidagi nazorat hayvonlari 1 (tajriba urg'ochi) tajriba hayvonlarida nazorat hayvonlari bilan solishtirganda ko'proq miqdorda c-Fos-musbat hujayralarga ega bo'lishgan. Badiani va boshq. (1998) yangiliklarning ko'paygani xabar qilindi c-fos mRNA tarkibi va bu yangilikning ta'siric-fos mazmuni bir necha miya hududlarida juda kuchli edi, albatta, yangi muhitda amfetaminni boshqarish qo'shimcha qo'shimcha javob bermadi. Shunday qilib, bizning ishimizda test xonasining yangi muhitiga ko'chirish stressi c-Fos oqsilining sintezini faollashtirdi va shunday qilib amfetamin va jinsiy tajribani keltirib chiqaradigan c-Fos ifodalarini o'zgartirdi.
Potentsial ahamiyatga ega
Ushbu tajribalar o'sib borayotgan tadqiqotlar ro'yxatiga (Mitchell va Styuart, 1990b; Fiorino va Phillips, 1999; Miczek va boshq., 1999), hayvonlarning tajribalari mezolimbik dopamin yo'lining ta'sirini, shuningdek, hayvonning tabiiy repertuarining tarkibiy qismi bo'lgan xatti-harakatlarga va odamlarning nomunosibligi ma'lum bo'lgan ba'zi dorilarga sezgirligini ko'rsatishi mumkinWise va Bozarth, 1987). Giyohvand moddalarni suiiste'mol qilish bo'yicha tadqiqotlardagi asosiy masala dorilarningNewcomb, 1992; Robinzon va Berrij, 1993), va shu bilan birgalikda bu tadqiqot odamlarda giyohvandlik rivojini o'rganish imkonini beradi.
Izohlar
- Qabul qildi Iyun 8, 2000.
- Tahrir olindi Dekabr: 12, 2000.
- Qabul qilingan Dekabr: 20, 2000.
Ushbu tadqiqot Milliy Ilmiy Fond Grant IBN-9723876 tomonidan qo'llab-quvvatlandi. Melissa Zila, Shannon MakKanna, Marchel Bey Beyker, Maykl Xantingon va Deborah Shelli o'zlarining qiziqishlariga oid testlar va c-Fosni qayta ishlashga yordam berishgani uchun minnatdormiz.
Xamkorlik 47907-1364 da, Robert L. Meisel, Psixologiya fanlari bo'limi, Purdue universiteti, West Lafayette, deb nomlanishi kerak. E-mail: [elektron pochta bilan himoyalangan].
- Mualliflik huquqi © 2001 Nevrologiya jamiyati