Int J Biol Sci. 2015; 11 (10): 1150-1159.
Onlaynda nashr etilgan 2015 avgust 1. doi: 10.7150 / ijbs.12044
PMCID: PMC4551751
Jin Yang Kim,1 Jong-Li Li,1,✉ Doyun Kim,1,2 Soung-Min Kim,1 JaeHyung Koo,2 va Jeong Von Jahng1,✉
mavhum
Bu ishda ergenlik davrida yuqori darajada taomlar bilan oziqlanadigan oziq-ovqatlarning ayolning kalamushlarida erta turmush tarzi bilan og'rigan bemorlarning ruhiy-emotsional va neyrokritik buzilishlariga ta'siri ko'rib chiqildi. Ayollar Sprague-Dawley puplari tug'ilishning dastlabki ikki xaftasida (MS) har kuni 3 sutkada to'g'ondan ajralib turipti (NH). MS urg'ochilarining yarmi, shuningdek, shokoladli pishiriqlardan bepul foydalanish imkoniyatiga ega bo'ldi ad libitum Postnatal kunidan boshlab 28 chow. Kattalar yoshi kattalar davrida xatti-harakatlarga ta'sir qilishgan. Miya hududlarida o'tkir stress, plazma kortikosteronli javob, DFOSB va miya orqali olingan neyrotrofik omil (BDNF) darajalariga tahlil qilindi. Tajriba davrida total kaloriya iste'moli va tana vaznining o'sishi eksperimental guruhlar orasida farq qilmadi. O'smirlar va yoshlar davrida cookie-fayllar orqali kirish tajribasi MS tajribasi bilan anksiyete / depressiyaga o'xshash xatti-harakatlarni yaxshilandi. DFOSB ekspressioni kamaydi, ammo BDNF milodiy urg'ochilaridagi yadro gulxanlarida artdi va DFOSB ekspressioni normallashdi va kukuni olishdan keyin BDNF yanada oshdi. Kuchli stressga qarshi kortikosteronning ta'sirini milodiy tajribasi puchga chiqargan va uni cookie-fayllar bilan ta'minlab bo'lmaydi. Natijalar shuni ko'rsatmoqdaki, o'smirlik davrida kukilarning kirishlari milodiy urg'ochilarining psixo-emosional buzilishlarini yaxshilaydi va yadro gulxanlarida DFOS va / yoki BDNF ifodasi uning asosiy neyron mexanizmlarida rol o'ynashi mumkin.
Kirish
Aynan dietali manipulyatsiya jinslar orasida bir-biridan farqli javoblarga ega bo'lishi mumkin bo'lgan dalillar to'plami bor. Molekulyar darajada, xuddi shu parhezga duchor bo'lgan erkak va urg'ochi kalamushlar orasida hipokampal transkriptomning jinsiy jihatdan dimorfik javoblari mavjudligi ko'rsatildi 1. Metabolik / neyroendokrin darajasida ayol sichqonchani uzoq muddatli yuqori yog 'dietasiga turli hipotalamik nöropeptid ta'sir ko'rsatadi 2 yuqori lipid oqimini bartaraf etish uchun erkaklarnikiga nisbatan yuqori imkoniyatlar 3. Qisqa muddatli yuqori yog 'bilan oziqlangan kattalardagi ayollar gipokampusda glyukokortikoid retseptorlari mRNA darajasini pasaytiradi va ularning hipotalamus-pituiter-adrenal (HPA) o'qi erkaklardan keyingi stressga javob beradi 4, 5. Qiziqarli darajada, kattalar kalamushining yog'li ratsionga qisqa muddatli ta'sir etishi tashvishlarni kamaytiradi va erkaklardagi tadqiqotlarni ko'paytiradi, bu esa ayollarda teskari ta'sir ko'rsatadi 6. Homiladorlik endokrin plastisitni kuchayishi va stress ta'sirida o'zgarishlar bilan ajralib turadigan muhim rivojlanish davri hisoblanadi 7. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, post-sutdan yuqori yog 'dietasi stressli va metabolik vositachilarni jinsiy jihatdan dimatli bir tarzda ta'sir qilish orqali bazal HPA eksa faoliyati va o'tkir stressga qarshi endokrin javoblarni o'zgartirishi mumkinligini ko'rsatdi 8, 9. Ilgari o'smirlik davrida juda mazali taomlarni uzoq vaqt davomida iste'mol qilish, erkak ratlarda tashvish va ruhiy tushkunlik kabi xatti-harakatlarni kuchaytirayotganini,s 10. Erkaklarda va ayolning kalamushlarida, xuddi shunday maternal ajratish protokoli (MS) protokoliga ta'siri ostida, erkaklarda ko'proq foydali ta'sir ko'rsatadigan, yog '(32% yog' miqdori) yuqori bo'lgan kafeterya dietasining uzoq muddat iste'mol qilinishi 11. Ayollarimizdagi MS sichqonchalarida kuzatilayotgan qiziqish va neyroendokrin musbatliklar 12 erkak eritrotsitlaridagi kalamushlardan farq qiladi 13, 14.
Bizning avvalgi ishimizda yuqori darajada mazali taomlar, o'rta darajadagi yog 'dietasi (~ 21% yog'), 6, 15, o'smirlik va yoshlik davrida erkak erta mushaklarda ba'zi xavotirga bog'liq simptomlar va HPA eksa disfunktsiyasini yaxshilandi 14. Tadqiqotlar, stress aks o'qi modulatsiyasining ijobiy hissiy xatti-harakatlarida yuqori darajada mazali ovqatlanish bilan bog'liqligini ilgari surdi. Anavi; stressni sezgirligini kamaytirish uchun yog 'ichida yuqori darajada afzallik beriladi 16; mamnuniyat, lazzatlanish va xohish kabi yoqimli his-tuyg'ularga ega bo'lganlar 17 va mazali taomlarni iste'mol qilish psixologik va immunologik zo'riqishlardan so'ng ko'rkam javoblarni kamaytirdi 18, Stress gormonlari darajasini ushlab turish 19 va kalamushlarda yuqori plyus labirinti testida xavotirga o'xshash xatti-harakatlar 20. Shu bilan birga, ushbu tadqiqotda o'simliklar va yoshlardagi mo''tadil yog'li xun (21% yog ') nafaqat milodiy urg'ochilarining HPA eksa disfunktsiyasini yaxshilamadi, garchi bu nafaqat tashvish, balki depressiyaga o'xshash xatti-harakatlarning yaxshilandi.
Bizning milodiy urg'ochilarimizdagi yuqori darajada mazali ovqatlanishning psixo-emotsional ta'sirini asoslovchi neyron mexanizmlarni tadqiq qilish uchun yadro haydovchilarida (NAc) miya orqali hosil qilingan neyrotrofik omil (BDNF) va DFB darajasini tekshirdik. Mezolimbik dopaminerjik yo'lni tashkil etuvchi bazal oldindan tuzilgan NAc, mukofot, motivatsiya va mustahkamlashda rol o'ynaydi. 21. Asosiy depressiya buzilishining asosiy belgisi bo'lgan anhedoni rivojlanishi, NAc ning muhim rol o'ynaydigan mukofotlar yo'lining disfunktsiyasiga bog'liq. 22, 23. NAc neuronlari xatti-harakatlarning stress paradigmiga javob berishga o'tishadi 24, 25va anksiyete bozukluklarına ta'sir qolgan 26, 27. Mesolimbik dopaminergik faollik va NAc neyronlarining stress bilan indikatsiyalangan faollashuvi, bizning erkak mushaklarimizda tashvish va depressiyaga o'xshash xulq-atvor ko'rsatgan 13, 28. BDNFning mezolimbik dopamin tizimini modulyatsiya qilish orqali hedonik oziqlantirishga jalb qilish tavsiya qilindi 29, 30va mazali ovqatlanish ta'sirida BDNF va DFB darajalari va NAc ning dopamin retseptorlari D1 ulanishi ortdi 16, 31, 32.
Materiallar va usullari
Hayvonlar
Sprague-Dawley kalamushlari sotib olindi (Samtako Bio, Osan, Koreya) va haroratni doimiy nazorat qilish (22 ± 1 ℃), namlik (55%) va 12 / 12 soatiga ega patogensiz to'siqni maydonga ega engil / quyuq aylanish jarayoni (07: 00 AMda yonib turadi). Standart laboratoriya taomlari (Purina Rodent Chow, Purina Co., Seul, Koreya) va membranali filtrlangan tozalangan suv mavjud edi ad libitum. Xayvonlar hayvonlarni eksperimental qo'llanmasi (2000), Tibbiy fanlar akademiyasi tomonidan tahrir qilingan va laboratoriya hayvonlarini saqlash va ulardan foydalanish bo'yicha NIH ko'rsatmalariga muvofiq, 1996-ni qayta ko'rib chiqdi. Barcha hayvonlar tajribalari Seul Milliy Universitetida laboratoriya hayvonlarini saqlash va ulardan foydalanish bo'yicha qo'mita tomonidan tasdiqlangan.
Eksperimental protokol
Nullipar urg'ochilari va tasdiqlangan naslchilik erkaklar hayvonot bog'ining laboratoriyasida nasl berish uchun ishlatilgan, va chaqaloqlar nazoratdan o'tkazilgandek, ular istenmaydigan ekologik ogohlantirishni uterusda hayot. Postnatal kun (PND) 1] ni tasdiqlashdan keyingi o'n ikki soat davomida, biz yuqorida aytib o'tganimizdek, chaqaloqlar manipulyatsiya qilingan 13, 14, 33 - 35. Har bir axlatni onadan ajratish (MS) guruhi yoki ishlov berilmagan (NH) guruhi uchun ajratilgan. MS kuchuklari o'zlarining to'g'onidan va uy qafasidan chiqarilib, soat 9:00 dan 12:00 gacha bo'lgan vaqt ichida yog'och chinnigullar bilan to'ldirilgan yangi qafasga (Aspen soqol, Animal JS Bedding, Cheongyang, Korea) joylashtirildi va keyin o'z uylariga qaytib kelishdi. qafas va to'g'on. Ajralish davrida kuchuklarni iliq qilish uchun qo'shimcha davolash taklif qilinmadi. MS har kuni PND 1 dan 14 gacha amalga oshirildi, so'ngra kuchuklar PND 22 da sutdan ajratilguncha o'zlarining to'g'onlari bilan bezovtalanmagan holda qoldilar. NH guruhi sutdan ajratilguncha bezovtalanmadi, haftada ikki marta o'tkaziladigan qafasni muntazam tozalashdan tashqari. Sutdan ajratish kunida har bir NH yoki MS axlatidan tasodifiy ravishda 2 ta NH va 4 ta MS kuchukcha tanlab olindi va har bir katakka 2 ta NH yoki 2 ta MS kuchukcha joylashtirildi. Birgalikda joylashgan ikkita ayol MS kuchukchalari, shuningdek, juda mazali taomlarga (Oreo cookiesi, Kraft Foods Global, Inc., East Hanover, NJ, AQSh) bepul kirish huquqiga ega bo'ldilar. ad libitum PND 28 (MS + HPF guruhi) dan chow, va har bir litterda (MS guruhi) va NH pups (NH guruhi) ichida qolgan 2 ayol MS pups faqat standart chow oldi. Oddiy chow va Oreo cookie ning ozuqa tarkibidagi formulalari jadvalda keltirilgan Table1.1. Kundalik oziq-ovqat iste'mol qilish va kilogramm ortishi PND 29dan qayd etildi. 24 soatlik oziq-ovqat mahsulotlarini baholash uchun oldindan belgilangan miqdordagi chow va pechene ta'minlandi, va keyingi kuni, chap miqdorda chow va pechene o'lchandi va oldingi kundagi qiymatdan chiqarildi. Dökülmeyi o'z ichiga oladi. Kaloriya iste'moli choy va pechene moddalarining ozuqa tarkibidagi formulalariga muvofiq hisoblandi. Har bir qafada qovurg'alar tomonidan iste'mol qilingan oziq-ovqatning umumiy miqdori har bir qafada qovurg'alar soniga bo'linib, har bir hisoblash qiymati n = 1 deb hisoblanadi. Suv barcha tajriba guruhlariga erkin berildi va oziq-ovqat sharoitlari barcha tajriba davrida davom etdi. Eksperimental protokolning sxematik diagrammasi shaklda keltirilgan Figure 11.
Ambulator faollik
NH, MS va MS + HPF urg'ochilari (har bir guruhda 8 har xil litrdan n = 4, 24 turli litrdan jami 8 chaqalar) PND 54da ambulatoriya tekshiruviga ta'siri tutildi. Har bir sinovda sichqon faoliyati xonasining markaziga (uzunligi 43.2 sm, kengligi 42.2 sm va balandligi 30.5 sm, MED Associates, VT, AQSH) joylashtirilgan, ikki gorizontal tekislik bilan jihozlangan shaffof akril xonasi 16 infraqizil fotoselli detektor juftlari joylashtirilgan x, y o'lchamlari, intervalgacha bo'lgan 2.5 sig'imi va uning ambulatorlik faoliyati 30 min uchun kompyuterlashtirilgan tizim tomonidan kuzatildi. Sinov xonasining engil holati kunduzi yorug'lik ostida hayvon xonalari bilan bir xil zichlikda saqlandi. Ambulatorlik harakati har bir ketma-ket 5 min sessiya davomida gorizontal sensordan shoshilinch uzilishlarning umumiy soni sifatida o'lchandi. Har bir yurakning yallig'lanish tekshiruvi paytida defekatsiya harakati, najasli bolaning vazni aniqlandi. Terichilik faoliyati tahlil qilindi; ya'ni oldingi va bosh kiyimlarini rostral parvarish qilish va tananing, oyoqlarning va quyruq / genital parvarishning kuylak parvarishi sifatida qabul qilinishi 36. Faoliyat xonasi har qanday foydalanishdan keyin 70% o'rganish bilan tozalanib, oldin tekshirilgan ratning har qanday xushbo'y hidini yo'qotdi.
Elevated Plus Maze
Ambulatoriy faollik sinovidan (PND 56) ikki kun o'tgach, kalamushlar baland plyus labirintasida, ikkita qarama-qarshi ochiq qo'lli (uzunligi 50 sm va kengligida 10 sm) ortiqcha shaklda akril labirinti va ikki qarama-qarshi yopiq (50 sm x 10 sm) kenglikda cho'zilgan (uzunligi 31 sm, kengligi 10 sm va balandligi 10 sm). Barcha apparatlar zamindan 50 sm balandlikda ko'tarildi. Sinov jarayonida ilgari ta'rif etilganidek, ta'qib qilindi 37. Har bir sichqon labirintaning o'rtasiga ochiq qo'llardan biriga qaragan va undan keyin labirintning ochiq yoki yopiq qo'llarini 5 min uchun o'rganishga ruxsat berilgan. Turli qurol-aslahalar uchun vaqt ajratilgan. To'rtta jarlikning har bir qo'liga kirish liniyasi ichida bo'lishi kerak edi, bu ma'lum bir qo'lda sarf qilingan vaqtning boshlanishini ko'rsatdi va so'ngra barcha to'rtta oyoqlari yana chiziqdan tashqarida bo'lsa, oxirgi vaqt qayd etildi. Labirint, ilgari sinovdan o'tkazilgan ratning ta'sirini oldini olish uchun har bir testdan so'ng 70% o'rganish bilan tozalanadi.
Majburiy suzish testi
Oliy plyus labirinti testidan (PND 59) uch kun o'tib, kalamushlar avvalgi tavsiflangan usul bo'yicha majburiy suzish sinoviga 38. Har bir kalamushga 54 minut davomida 24 sm chuqurlikda (40-23 ℃) suv solingan shisha tsilindrda (balandligi 25 sm va diametri 5 sm) suzishga ruxsat berildi va sinov mashg'ulotlari videokamera tomonidan yozib olindi. silindrning yon tomoni. Sichqonchaning suvda harakatsizligi sekundomer yordamida videokameralardan olingan. Harakatsizlik deganda, kalamushlar faqat suv sathidan boshlarini ko'tarish uchun zarur bo'lgan harakatlarni qilishadi, deb baholanadigan holat tushuniladi.
Sıçanlar istalmagan stress ta'sirini kamaytirish uchun har bir testdan oldin kamida 2 soatda test xonasiga joylashtirildi va barcha xulq-atvor baholash 9: 00 AM va 12: 00 PM o'rtasidagi davriy o'zgarishlarning oldini olish uchun kunduzi o'tkazildi. Xulq-atvorda kalamushlarni davolashni ko'rgan kuzatuvchi bilan amalga oshirildi.
Plazma kortikosteron assay
Xulq-atvor seanslari tugaganidan bir hafta o'tgach, kalamushlar 2 soat davomida cheklov qutisiga joylashtirildi, unda kalamushlar to'rt oyoq-qo'llarini harakatga keltira olishdi, lekin tana yo'nalishini o'zgartirmasliklari mumkin edi. Quyruq qoni cheklash davrida 0, 30, 60 va 120 minutlarda to'plandi va 2,000 minut davomida 20 rpmda santrifüj qilindi. Plazma namunalari suyuq azotda muzlatilgan va tahlil uchun ishlatilguncha - 80 ° C da saqlangan. Kortikosteronning plazmadagi darajasi radioimmunoassay yordamida aniqlandi 125I-etiketli "Coat-A-Count" to'plami (Siemens, CA, AQSh). Tajribaning sezuvchanligi 5.7ng / ml edi. O'zgarishning ichki tahlil koeffitsienti 4-12.2% edi.
Western blot tahlil qilish
Xulq-atvor testlaridan sodda bo'lgan kalamushlar (har bir guruhdagi 6 xil axlatdan n = 3; 18 ta turli xil axlatdan jami 6 ta kuchukcha) PND 62-da miya mintaqalarida DFOSB va BDNF darajalarining g'arbiy blot tahlillari uchun qurbon qilingan. Qurbonlik paytida retroperitoneal yog 'yostiqlari yig'ilib, boshlari kesilganidan so'ng darhol miyalari olib tashlandi. Yadro akumbenslari (NAc) va gipokampuslarning to'qimalar namunalari tezda muzda parchalanib, suyuq azotda muzlatilgan va ishlatilguncha - 80 ° C da saqlangan. NAc to'qima diseksiyasi avvalgi tadqiqotlarimizda qo'llanilgan usul bo'yicha mayda pichoq yordamida amalga oshirildi 28, 39; Biroq, yaqin-atrofdagi ventro-medial striatumning mavjud bo'lishiga yo'l qo'ymaslik mumkin emas. To'qimalar bitta deterjanli lizis tamponida (50 mM Tris, pH 8.0, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, proteaz va fosfataz inhibitori kokteyli 0.5%) homogenizatsiya qilindi va 13,000 da 20 g uchun 4 g dan santrifüj qilindioC. Yangi naychalarga o'tkazilgan supernatantlar oqsil miqdori bo'yicha tahlil qilindi (Biorad DC, Biorad, Inc., Herkul, CA), lizis tamponida 80 mkg / 20 mL konsentratsiyasida ajratilgan va 80 da saqlangan. ° S, aks holda o'sha kuni ishlatiladi. Namunalar yuklash tamponi bilan aralashtirildi (100 mM Tris, pH 6.8; 200 mM ditiotreytol; 4% SDS; 20% glitserol; 0.2% bromofenol ko'k) 1: 1 seyreltmede, 5 daqiqa davomida qaynatildi, tezda muz ustida sovutildi va keyin 12% SDS-poliakrilamid Tris-glitsin gellarida elektroforlangan. Nitroseluloza membranalariga (Hybond-C, Amersham, Buck, Buyuk Britaniya) o'tkazilgan oqsillar 5X Tris-tamponli sho'r-Tween (1 mM C) tarkibida 10% yog'siz quruq sut bilan ishlangan.4H11Yo'q3; 0.145 M NaCI; 0.2% SDS; 0.1% Tween 20) kecha davomida 4 da0C. Membranalar poliklonal quyonlarga qarshi DFosB (1: 1000 seyreltme; Santa Cruz Biotexnologiya, Dallas, TX, AQSh) yoki anti-BDNF (1: 500 dilüsyon; Millipore, Temecula, Kaliforniya, AQSh) bilan reaksiyaga kirishdi va bog'langan antikorlar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga binoan (Lumi-light west blotting substrat; Roche, Indianapolis, IN, USA) kemiluminesans bilan aniqlandi va raqamli tasvirni tahlil qilish tizimi (LAS-1000, Fuji filmi, Tokio, Yaponiya) yordamida aniqlandi. Har bir namunaning raqamlangan qiymatlari yuklanishni boshqarish b-aktin normallashtirildi, so'ngra barcha qiymatlar NH guruhining o'rtacha qiymatiga nisbatan qiymatlarga aylantirildi.
Statistik tahlil
Ma'lumotlar bir yoki ikki tomonlama [kortikosteron ma'lumotlari; (2 darajalari) X vaqtlari (4 darajalari)] varyans tahlillari (ANOVA) va guruhlar o'rtasida tayyorlangan taqqoslashlar post hoc StatView dasturidan foydalangan holda, kerak bo'lganda Fisherning PLSD-testi (Abakus, Berkli, Kaliforniya, AQSh). Tana vazni va oziq-ovqat iste'mol qilish ma'lumotlari ANOVA takroriy choralari bilan tahlil qilindi, so'ngra Bonferroni tuzatish P qiymatni sozlash. Muhim ahamiyatga ega P <0.05 va barcha qiymatlar ± SEM vositalari sifatida taqdim etildi
natijalar
Ovqatlanish va tana vaznini oshirish
MS urg'ochisi PND 39gacha bo'lgan yoshdagi ayollarga nisbatan engilroq edi va bundan keyin vazn farqlari kuzatilmadi (shakl (Rasm 2A) .2A). Statistik jihatdan muhim farqlar (P<0.05) NND va MS urg'ochilari o'rtasida PND 32 - 39 davrida kuzatilgan, PND 36 va 37 bundan mustasno. Ovqatni mazali iste'mol qilish MS tajribasi bilan vazn farqini kamaytirdi va NH va MS + HPF o'rtasidagi statistik ahamiyat PND 36 dan keyin yo'qoldi. ANOVA tomonidan tana vaznining ko'payishi vaqt o'tishi bilan MS va MS + HPF o'rtasida farq qilishi aniqlandi [F(1,780) = 2.146; P= 0.0008], lekin NH va MS o'rtasida emas. Milodiy urg'ochi ayollarning kundalik chov iste'mol qilish yoshga taalluqli NH-urg'ochidan farq qilmadi (Rasm (Rasm 2B) .2B) Cookie-larga kirish MS ayollarining kunlik chov iste'molini bostirdi, ammo kunlik kaloriya miqdori statistik ahamiyatga ega bo'lmagan holda cookie-fayllardan foydalanish hisobiga oshdi. ANOVA takroriy choralari bilan kaloriya iste'mol qilishni tahlil qilish onaning ajralishi va oziq-ovqat holatining ta'sirini aniqlamadi. Butun eksperiment davrida (PND 28 - 62) umumiy kaloriya miqdori eksperimental guruhlar o'rtasida farq qilmadi (rasm) (Rasm 2C) .2C). MS + HPF urug'lari tomonidan iste'mol qilinadigan umumiy kaloriyalarning 40% xakida kukilar (3259.921 ± 211.657 kkaldan chow, 2184.641 ± 186.077 kkk cookie fayllaridan) kelib chiqdi. PND 62 bo'yicha milodiy urg'ochilarning retroperitoneal yog 'pedi yoshga mos keladigan NH-urg'ochidan farq qilmadi va statistik ahamiyatga ega bo'lmagan holda cookie-fayllar bilan ko'paytirilishi kerak edi (P= 0.0833, MS va boshqalar. MS + HPF) (shakl (Rasm 22D).
Xulq-atvorda baholash
NH, MS va MS + HPF ayollarining ambulatoriya faoliyati PND 54 da kompyuterlashtirilgan faoliyat xonasida o'lchandi. MS ayollarining birinchi (0 - 15 min) va keyingi mashg'ulotlar (15 - 30 min) davomida ambulatoriya soni sezilarli darajada kamaydi. NH ayollari bilan; ammo, sezilarli pasayish (PNH ga nisbatan <0.05) faqat MS + HPF guruhidagi keyingi sessiya davomida kuzatilgan (rasm) (Rasm 3A) .3A). Birinchi 15 minlik seans davomida o'tkazilgan umumiy masofa MS (PNH bilan taqqoslaganda MS + HPF da emas, balki <0.05) (Rasm 3B) .3B). Ambulatorlik harakati testida parvarish qilish harakati va defekatsiya faoliyati qayd etildi (rasm (Rasm 3C3C & D). MS tajribasi rostral parvarishni sezilarli darajada oshirdi (P<0.05, NH va MS) cookie-fayllaridan foydalanish imkoniyati uni kamaytirdi (P<0.05, MS va MS + HPF) (rasm) (Rasm 3C) .3C). MS urg'ochilarining defekatsiya faoliyati statistik jihatdan ahamiyatsiz NH ga nisbatan ko'paytirildi, va kukilardan foydalanish bu sezilarli darajada kamaydi (P<0.05, MS va MS + HPF) (rasm) (Rasm 33D).
Anksiyete kabi xatti-harakatlarini yanada yaxshiroq baholash uchun, kalamushlar ambulatorlik faolligi testidan (PND 2) 56 kun o'tgach yuqori plyus labirinti testiga tobe etildi. Milodiy urg'ochi ayollarda ochiq qo'llar uchun sarf qilingan vaqtP NH bilan taqqoslaganda MS + HPF da emas, balki <0.05) (Rasm 4A) .4A). Eksperimental guruhlar orasida ochiq qo'l kiritish foizi farq qilmadi (shakl (Rasm 4B) .4B). Depressiyaga o'xshash xatti-harakatlarni baholash uchun kalamushlar yuqori plyus labirint sinovlaridan (PND 3) 59 kundan so'ng majburiy suzish testiga tobe etildi. 5 minta majburiy suzish mashg'uloti davomida immobilitivlik davomiyligi milodiy urg'ochilarida sezilarli darajada oshdi (P NH bilan taqqoslaganda <0.05) va MS + HPF ayollarining harakatsizligi darajasi NHdan farq qilmadi (rasm) (Rasm 44C)
Plazma kortikosteron darajasi
Suzishni boshlashdan bir hafta o'tgach, kalamushlar siqilish stresini oldi va quyruq qonlari 0, 30, 60 va 120 daqiqada 2 soatlik cheklov vaqtida yig'ildi va plazma kortikosteron assotsiatsiyasi uchun ishlatildi (shakl (Rasm 5) .5). Bazal kortikosteron darajalari (0 vaqt nuqtasi) guruhlar orasida farq qilmadi; ammo MS ning urg'ochilarida kortikosteron darajasining stress bilan bog'liqligi oshishi stressning boshlanishidan keyin 30 va 60 min vaqt nuqtalarida NHga nisbatan ancha past edi (P<0.05, NH va MS har bir vaqt nuqtasida). MS + HPF ning plazmadagi kortikosteron darajasi stress boshlanganidan keyin 30 daqiqada NHdan farq qilmadi, lekin 60 minutlik nuqtada NH dan past bo'ldi (P <0.05; 394.29 ± 38.35 ng / ml NH ga nisbatan 247.48 ± 24.57 ng / ml ga MS + HPF). Stress bilan bog'liq kortikosteron miqdorini 2 tomonlama ANOVA bilan tahlil qilish onaning ajralishining asosiy ta'sirini aniqladi [F(1,56) = 8.814, P= 0.0045] va vaqt [F(3,56) = 9.335, P<0.0001] va oziq-ovqat holatining ta'siri yo'q. Onalarning ajralishi va vaqt o'rtasidagi vaqt yoki oziq-ovqat holati bilan vaqt o'rtasidagi muhim o'zaro ta'sirlar topilmadi.
DF va BDNF g'arbiy bloklari
NAcdagi DFOSB va BDNF darajalari g'arbiy blot tahlillari bilan baholandi (shakl (Rasm 6) .6). DFSB sezilarli darajada kamaydi, ammo BDNF MS ayollarida NAcP NH bilan solishtirganda <0.05) (rasm) (Rasm 6A6A va B). MS urg'ochilarining NAc-dagi osFosB darajasi cookie-fayllar yordamida normalizatsiya qilindi; ya'ni NH va MS + HPF o'rtasida farq yo'q va BDNF darajasi yanada oshdi (P <0.05, MS va MS + HPF). MS ayollarining hipokampusidagi BDNF darajasi NH ga nisbatan sezilarli darajada pasaygan (P <0.05) va u cookie fayllari yordamida tiklanmadi (rasm) (Rasm 66C)
muhokama
Xushbo'y oziq-ovqat mahsulotlari bilan ta'minlanishi MS urg'ochilarining psixo-emotsional harakatlarini yaxshilandi
Ushbu ishda, anksiyete va depresyonu, masalan, ambulatuar kirish, rostral parvarishlash va aktivizatsiya sinovlari davomida defekasyon faoliyati kabi xatti-skorları; yuqori plyus labirinti testi paytida ochiq qo'llarni saqlash; majburiy suzish testida harakatchanlik milodiy urg'ochilarida o'smirlik va yoshlik davrida Oreo kukilariga erkin kirish imkoniga ega bo'lgan. Milodiy urg'ochilarida o'tkir stressga qarshi kortikosteronli javob MS erkaklarda bildirilgan 14. Bluntlangan kortikosteron ta'sir MS tajribasi natijasidir; ya'ni, qayta tiklanadigan stressni boshdan kechirish tajribasi, chunki HPA ekssentlarining aktiv stress holatlariga javoblari surunkali qayta ishlangan stress 40, 41. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, yog 'ichida yuqori darajada afzal qilingan dietaga ta'sir qilish bazal HPA eksa faoliyati va o'tkir stressga endokrin javoblarni o'zgartirishi mumkin 9, Stress javoblarni takomillashtirish 17, 19 va anksiyete kabi xatti-harakatlarini kamaytiradi 18, 20. Bundan tashqari, o'smirlik va yoshlik davrida Oreo kukilari (~ 21% yog 'tarkibi, mo''tadil yog'li oziq-ovqat) erkin foydalanish, erkak eritrotsitlar kalamushlarida blunted HPA eksa funktsiyasini normallashtirdi va anksiyete-shunga o'xshash xulq-odatlarni normallashtirdi 14. Ya'ni, o'smirlik cookie-ga kirish, milodiy tajribasi, erta hayotda takroran stresslar va xatti-harakat muammolarini yaxshilash orqali blunted HPA eksa funksiyasini yaxshilashi mumkin. Shu bilan birga, bu ishda o'smirlik va yoshlik davrida kukilarning kirish imkoni yo'q, ayol XS kalamushlarida o'tkir stressga javob beruvchi HPA eksa faoliyati yaxshilandi. Erkaklar MS sichqonlarida ergenlik kukilarining anksiyolitik va / yoki antidepressiv samaradorligi HPA eksa funktsiyasi bilan bog'liq bo'lmasligi mumkin. Erkak va ayol faralari ko'p sonli neyroendokrin va xulq-atvor parametrlari bilan farq qiladi va stressga qarshi zaiflik jinsga bog'liq 42, 43. Avvalgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, 7 kunlik o'rtacha yog'li parhez protokoli o'tkir stressdan keyin erkak-selektiv abartılı kortikosteron salınmasına olib keladi 6.
Ayol sichqonlarining NAc-da ovqatlanadigan oziq-ovqat va neyronal funktsiyasi
Ushbu izlanish, DFOSB ekspresyonunun kamayganligini va milodiy tajribasi bilan ayol sıçanlarda NAC'de BDNF'nin ortdi ekanligini ko'rsatdi. NAc ichida psixologik yoki metabolik stress VFosB ifodasini oshiradi xabar beriladi 44-46. Tadqiqotlar, DFOSB transkripsiyasi faktori NAc neuronlaridagi BDNF ifodasi bilan bog'liqligini ilgari surdi 32, 47-49. Birgalikda olingan NAFdagi FF va BDNFning kamayganligi erta hayotda MS stressining uzoq muddatli natijasi bo'lishi mumkin, ehtimol NAc neyronal funktsiyasini modulyatsiya qilish mumkin. NAc neyronal funktsiyasini xatti-harakatlarning stress paradigmasi bilan modulyatsiya qilinishi tavsiya etilgan 24, 25 uning disfunktsiyasi depressiya va anksiyete kasalliklariga taalluqlidir 22, 23, 26, 27. Darhaqiqat, NAcdagi BDNF signalizatsiyasining kuchayishi stress tushkunligiga chalingan modellarida xabar berilgan 50-52va stresda DFOSBni ifodalovchi sichqonlarda stressni keltirib chiqaradigan depressiv effektlar blunts qilindi 53. Shunday qilib, ayollarda MS sichqonlarining ruhiy tushkunlik va / yoki xavotirga o'xshash xulq-atvorlari DFOSBning kamayishi va NACda BDNFning oshishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin.
Ushbu ishda ergenlik davrida cookie kirish, ayol milodiy sıçanlarında DFOSB va BDNF iboralar ortdi. Ushbu natija avvalgi ma'ruza bilan uyg'unlashadi, shuning uchun mazali ovqatlanish ta'sir qilish NAcdagi DFSB darajasini oshiradi 31, va yuqori yog 'dietasi DFOSBning ortiqcha ifodalangan sichqonlarining NAcdagi BDNF darajasini oshirdi 32. Striatumda DFOSB ifodasini oshirganligini ko'rsatadigan oldingi hisobotni stressni keltirib chiqaradigan depressiv ta'sirlarga chidamlilik 53, shuning uchun xulosa qilish mumkinki, milodiy urg'ochi ayollarning cookie-fayllar bilan ta'minlanganligi bo'yicha NAFdagi DFSB ortdi; ya'ni bazal darajasiga moslashgan bo'lsa, o'smirlik cookie-fayllaridagi antidepressant va / yoki anksiyolitik samaradorlikka hissa qo'shishi mumkin. Shu bilan birga, cookie kirishga ega bo'lgan milodiy urg'ochi ayollarda BDNF darajasining ortishi uning antidepressant va anksiyolitik ta'siriga taaluqli ekanligi aniq emas, chunki NAcdagi BDNF signalizatsiyasi ko'pincha depressiv modellarda 50-52, ammo kamdan-kam hollarda antidepressant modellarda. Keyinchalik tadqiqotlar olib boriladi.
MS va HPF ning hipokampal BDNF darajalariga ta'siri
Hipokampustaki BDNF darajasining pasayganligi, bu ishda ishlatiladigan shu kabi MS protokolüne ta'sir qolgan erkak va ayol sıçanlarda ham xabar beriladi 54, 55. Shu bilan birga, ushbu tadqiqotda bizning ayollar mitsa farelerinin hipokampüsünde NH nazorat qilish bilan BDNF darajasi kamayadi. Hipokampal nevrogenez, anksiyete va tushkunlik alomatlariga bog'liq 56, 57va hipokampus, HPA eksa faoliyati qayta besleme regülasyonuna ishtirok etish uchun yaxshi ma'lum. HPA faoliyatida bizning HP ayollarda blunted ekanligini eslatib turadigan bo'lsak, hipokampustaki BDNF darajasining kamayishi ehtimol, mushkullik va / yoki ruhiy tushkunlik buzilishlarida MS tajribasi bilan bog'liq bo'lishi mumkin, ehtimol blunted HPA eksa faoliyati bilan bog'liq. Milodiy milodagi ayollarda hipokampal BDNF darajasi bilan HPA eksen faoliyati o'rtasidagi munosabatlar, bu ishga kirish cookie kirish, har ikkalasini ham yaxshilanmagani bilan qo'llab-quvvatlandi. Ilgari ishda yuqori yog'li dietani uzoq vaqt iste'mol qilish (32% yog ') ushbu tadqiqotda ishlatilgan o'xshash MS protokoli ta'sir qolgan erkak eritrotsitlar hipokampusundaki BDNF ifodasini oshirib yubordi 58. O'smir davridagi (~ 21% yog ') erkaklar sutining hipokampal BDNF darajasida cookie uchun kirish effekti hozirgi vaqtda tergov ostida.
Oreo Cookie-da yog '/ shakar tarkibining xulq-atvor ta'siri
Ushbu tadqiqotda Oreo cookie-lariga bepul kirish ayollarning boshlang'ich hayotidagi stressli tajriba bilan bog'liq bo'lgan psixo-emotsional muammolarni kuchaytirdi. Oreo kukilari shokolad kukilaridir, bu faqat yog'da emas, balki shakarda ham yuqori Table1.1. Inson tadqiqotida shokolad iste'mol qilish ichimlik suvi bilan solishtirganda salbiy kayfiyatni kamaytirdi, bunda nojo'ya va ijobiy kayfiyatlarda hech qanday ta'sir ko'rsatilmagan 59. Va shokoladning kayfiyatni yaxshilovchi ta'siri shokoladning chanqoqligiga (sutli shokolad va oddiy shokoladga) bog'liq bo'lib, shirin taomlarni iste'mol qilish tajribasi bilan salbiy salbiy holatni oshiradi. Sukroz iste'moli surunkali mo''tadil stressli depressiv hayvonlarda ko'payishi va ruhiy tushkunlik ruhiy tushkunligi bo'lgan bemorlarda sog'ib olinadigan sutli shokolad istagi kuchayganligi xabar qilindi. 60. Sekroz va / yoki cho'chqaning erkin tanlovi choyga qo'shimcha ravishda stress stavkalari bilan keskin stressni o'zgartirish 61. Bundan tashqari, qisqa muddatli yog'li parhezga (20% Misir yog'i, Oreo kuki bilan bir xil yog'li tarkib) ta'sir qilish neyroendokrin va jinsiy jihatdan dimorfik tarzda xatti-harakatlarning o'zgarishini keltirdi 4-6. Birgalikda olingan ma'lumotlarga ko'ra, Oreo kukilari shakar va yog 'tarkibi milodiy urg'ochilarida neyrokologik va xulq-atvorni yaxshilashga yordam berishi mumkin. Ushbu tadqiqotda Oreo identifikatsiya qilish vositasida bir xil miqdordagi yog 'yoki shakar yetkazib berishda MS o'smalari shunga o'xshash yaxshilanishlarni keltirib chiqarmaydimi, tekshirish uchun qo'shimcha tadqiqotlar o'tkazilishi kafolatlanadi.
Nihoyat, MS tadqiqotida kukilarga kirish yo'li bilan retroperitoneal yog' depotini oshirish kerak edi. Stress aksi funktsiyasi uchun modulyatsiya effektiga qo'shimcha ravishda, oziq-ovqatning mazali taomiligi sekin aylanadigan leptin va insulin darajasini sezilarli darajada oshirib, 15, 61. Ikkala leptin va insulin ham mezo-limbik mukofot tizimida tartibga solish funktsiyasini qo'llash taklifi berilgan va ayniqsa, ventral tegmental sohada insulin dopamin tashuvchilarining oshishi 62, 63. Yuqorida ta'rif etilganidek, mezo-limbik mukofot tizimi stress-eksa funktsiyasi bilan bog'liq psixo-emotsional kasalliklarda katta ahamiyatga ega. 22-27. Shunday qilib, me'da-limbik mukofot tizimida ortib borayotgan leptin va / yoki insulin miqdori ortib borayotgan yog' deposi bilan bog'liq holda modifikatsiya qilish, ovqatlantiruvchi oziq-ovqat mahsulotlariga kirishning kayfiyat darajasini oshirishda muhim ahamiyatga ega. Darhaqiqat, yuqori yog'li dietani uzoq vaqt davomida iste'mol qilish (32% yog 'miqdori) bu ishda foydalanilgan o'xshash MS protokoli ostida bo'lgan ayollarning kalamushlarida sezilarli darajada oshgan yog'li depot bilan bezovtalanuvchi xatti-harakatlar va plazma leptin va insulin darajasini oshirdi 11. Shunga qaramasdan, biz milodiy urg'ochilarda cookie-fayllar bilan ta'minlangan (~ 21% yog 'miqdori bilan moylangan yog' xili) kuzatilgan xatti-harakatlarning yaxshilanganligi yog'li depot bilan bog'liqmi yoki yo'qmi, hali aniq emas, chunki kvant bog'lamida retroperitoneal yog' depotining statistik ishlamay qolmadi va bundan tashqari, ushbu tadqiqotda aylanma leptin ham, insulin ham o'lchanmagan.
Xulosa, HPA eksenidagi buzilishlar, NAc neuronlari va hipokampus yosh ayollarning MS ning kalamushlarning birinchi ikki haftasidagi onalikni boshdan kechirish tajribasi bilan bog'liq psixo-emotsional muammolarga taalluqli ko'rinadi. Yuqori qonga ega oziq-ovqat mahsulotlari, moyli yog 'dietasi, o'smirlik davrida va yoshlardagi erkin kirish erkinligi, milodiy urg'ochilarda badanning og'irlik darajasiga ta'sir qilmasdan tashvish va ruhiy tushkunlik kabi xatti-harakatlarga olib keldi va NAc neuronlaridagi funktsional modulyatsiya uning asosiy neyron mexanizmlarida rol o'ynashi mumkin.
rahmat
Mualliflar, statistik tahlil va doktor Jey Lee tajriba texnikasi bilan yordam berish uchun doktor. SB Yoo ga rahmat. Ushbu tadqiqot Milliy tadqiqotlar jamg'armasi (2013R1A1A3A04-006580) va Janubiy Koreya hukumati (Ilm, IKT va kelajak rejalashtirish vazirligi) tomonidan moliyalashtiriladigan Seul Milliy Universitetida (2014050477) Oromaksillofaciyal disfunktsiyani tadqiq qilish markazi orqali taqdim etildi.
Manbalar