Surunkali spirtli ichimliklarni o'zlashtirishi DF'ning yuqori darajasini oshiradi: gibrid sichqonlarni aniq ichish naqshlari bilan taqqoslash (2012)

BMC Neurosci. 2012 Oct 29;13:130. doi: 10.1186/1471-2202-13-130.
 

manba

Wagoner alkogolizm markazi va berilganlik Tadqiqot, Nevrologiya instituti, Texas shtati, Austin, TX, 78712, AQSh. [elektron pochta bilan himoyalangan]

mavhum

Xulosa:

Maqsadi:

Spirtli ichimliklarni iste'mol qilishni qisqartirish yoki tartibga kelmaslik spirtli ichimliklarni iste'mol qilish buzilishining o'ziga xos belgisi hisoblanadi. Spirtli ichimliklarni iste'mol qilishning buzilishi haqidagi bilimlarimizni yanada yaxshilay olamiz. Alohida spirtli ichimliklarni o'z-o'zini boshqarish xatti-harakatlari sichqonning ikkita F1 gibrid shtamini taqqoslashda ilgari kuzatilgan: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) alkogolning yuqori konsentratsiyasi va tajribasizlikdan keyin spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligini ko'rsatish C57BL / 6J x FVB / NJ (BxF) doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'radi. Ushbu fenotiplar qiziqarli, chunki bu gibridlar etanolni iste'mol qilishda genetik qo'shimchalarning (BxN) va yuqori darajadagi (BxF) paydo bo'lishini tajribaga qaramlik bilan ko'rsatadi.

Ayniqsa, BxF spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligini namoyish etadi va BxN yuqori etanol konsentrasiyalari bilan tajriba orttirganidan keyin spirtli ichimliklarni afzal ko'radi; Biroq, kam o'rganish kontsentratsiyasi bilan tajriba har ikkala duragay uchun doimiy spirtli holatni hosil qiladi.

Ushbu tadqiqotda, bu fenotiplerin, indüklenebilen transkripsiyon faktörünün, DFSB'nin, mukofot, nafrat va stress bilan bog'liq miya hududlarida turli xil ishlab chiqarilgan varsayımını sinov qildik.

Natijalar:

Nöronal plastinkada o'zgarish (DFB darajalari bilan o'lchanadigan) tajribaga qaram edi, shuningdek, miya va genotipga xos bo'lgan, bu esa neyronal devorlarni o'rganish uchun etanol iste'molining motivatsion jihatlariga asoslangan..

Spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan BxN sichqonlari Edinger-Westphal yadrosida DFOSB darajasini past darajadagi spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan sichqonlarga qaraganda kamroq va sichqoncha bilan solishtirganda markaziy medial amigdalada DFB darajasini oshirdi.

Barkamol spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan BxN sichqonlari ventral tegmental sohada yuqori DFB darajalariga ega, Edinger-Westphal yadrosi va amigdala (markaziy va lateral bo'linmalar).

Bundan tashqari, ichida Edinser-Westfaliya yadrosi va ventral tegmental hududlarida BxN sichqonlari DFB darajalari etanolni afzal ko'rish va qabul qilish bilan ijobiy bog'liq. Bundan tashqari, ierarxik kümelenme tahlillari, umumiy past DFB darajalariga ega bo'lgan ko'plab etanol-naif sichqonlarning klasterda ekanligi, shuningdek, umumiy darajadagi yuqori darajadagi DFB darajalariga ega spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan ko'plab sichqonlarning birgalikda bo'lishini aniqladi.

Natija:

Ikkita spirtli fenotipni taqqoslash va taqqoslash orqali ushbu tadqiqotda mukofot va stress bilan bog'liq davriyliklar (Edinger-Westphal yadrosi, ventral tegmental hududi, amigdal), spirtli ichimliklar afzalligi sifatida namoyon bo'ladigan sezilarli plastisiyadan o'tishi ko'rsatilgan.

fon

Spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish va alkogolizm bilan bog'liq bo'lgan sezuvchanlik omillari, ekologik va genetik xususiyatlar mavjud. Spirtli ichimliklar ko'p miqdorda alkogol ichimligi bilan og'rigan bemorlarning ko'pchiligi ichkilikbozlikning dastlabki belgilari bo'lib, spirtli ichimliklarga nisbatan past darajadagi alkogolizmning rivojlanishidagi katta zaiflik omilidir [1,2]. Spirtli ichimliklarni moderatsiyasiga hissa qo'shadigan neyrobiologik omillarni aniqlash spirtli ichimliklarni iste'mol qilish va zo'ravonlik tushunchalarini yaxshilashga yordam beradi va spirtli ichimliklarni ishlatish kasalliklari bilan og'rigan bemorlarga davolashni yaxshilash uchun samarali strategiya hisoblanadi. Kemiruvchilarni kasalliklarga taqlid qilish uchun ushbu kasallikni tushunish va davolashni yaxshilashda kuchli vosita bo'ldi. Spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish va alkogolizmni o'rganish uchun bir nechta kemiruvchi modellar mavjud, ammo alkogolizmning to'liq modeli yo'q. Sichqoncha shunga o'xshash muhit sharoitida etanol eritmalarini og'zaki ravishda o'z-o'zidan boshqaradigan darajada uning genetik asosiga bog'liq [3].

Yaqinda biz ikkita shishali imtiyozli testlarda (ayollarda 57-6 g / kg / kun iste'mol qilganda) odatdagidan yuqori darajada spirtli ichimliklarni o'z-o'zini boshqaradigan C57BL / 6JXFVB / NJ (BxF) va FVB / NJxC6BL / 1J (FVBxB20) F35 gibrid sichqonchalarini topdik va 7-25 erkaklar g / kg / kun, kontsentratsiya va paradigma qarab)4]. Ushbu yangi genetik model, mavjud bo'lgan inbred shtammlari bilan solishtirganda katta afzalliklarga ega, jumladan, yuqori darajali fenotip va yuqori qon spirtli ichimliklar ichish dalillari [4]. Bundan tashqari, BxF sichqonlari tomonidan taqdim etilgan yuqori etanol iste'moli, ikkita qo'shimcha o'rganish ichimlik paradigmalarida (rejalangan suyuqlik kirish paytida qorong'u va o'rganish ichish ichish) ko'rinadi [4]. Keyin sichqonning ikkita F1 gibrid shtamini taqqoslaganda spirtli ichimliklarni o'z-o'zini boshqarish bilan bog'liq turli xulqlarni kuzatdik: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) alkogolning yuqori kontsentratsiyasiga ega bo'lgan tajriba va abstinentlik vaqtlari va BxF spirtli ichimliklar afzalligini ko'rsatganidan keyin spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligini ko'rsatdi [5]. Xulq-atvor sinovlari akkumulyatoridan foydalanib, biz BxN ning BxF sichqonlariga nisbatan sezgir va sedativlarga nisbatan sezgir ekanligini namoyish qildik, ammo buning samarasi bo'lmay, etanol [6].

Spirtli ichimliklarni iste'mol qilishning yangi uslubi va genetik modeli bo'yicha asosiy tadqiqotlar va ichishdagi tajribani keltirib chiqaradigan o'zgarishlarni spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish va alkogolizm haqida bilimimiz yanada oshiradi. Spirtli ichimliklarni iste'mol qilish afzalligi fenotipi qiziqarli, chunki BxN sichqonlari dastlab etanol eritmalari uchun yuqori darajadagi afzalliklarni ko'rsatadi. Spirtli ichimliklarni iste'mol qilish darajasini yuqori o'rganish konsentrasiyalari va to'xtatib qo'yish tajribasidan keyin mushohada qilishning sababi noma'lum bo'lsa-da, BxN sichqonlarini spirtli ichimliklarni iste'molchilarga o'xshatish mumkin, chunki ular hali ham etanol eritmalarni iste'mol qiladilar, ammo ehtimol past darajadagi tajribaga ega.

Barkamol spirtli ichimliklarni afzal ko'rish modeli ham qiziqarli, chunki BxF sichqonlari avvalgi tajribaga qaramasdan juda yuqori darajada o'rganish iste'mol qiladilar. Spirtli ichimliklarni iste'mol qilish va iste'mol qilishning afzalligi spirtli ichimliklarni yo'qotish ta'siriga bog'liq bo'lishi mumkin, bu hayvonlar hayvonlarni majburiy iste'mol qilish davridan keyin spirtli ichimliklarni iste'mol qilish darajasini sezilarli darajada ko'paytirganga [7]. Spirtli ichimliklarni mahrum qilish ta'siri spirtli ichimliklar ichish xatti-harakatlarini o'rganish uchun foydali bo'ladi. Spirtli ichimliklarni yo'qotish ta'sirini uyg'otish uchun ma'lum bo'lgan eksperimental jadval bu erda ishlatilgan jadvaldan ancha farq qilsa-da, spirtli ichimliklarni yo'qotish ta'sirida uzluksiz va kamaytirilgan spirtli holatni taqqoslash bu erda muhokama qilingan turli qiziqishli fenotiplarni alkogol tadqiqotida kemirgen modellardagi muhim hodisa bilan bog'liq. Spirtli ichimliklarni iste'mol qilish imtiyozi spirtli ichimliklarni yo'qotish ta'siriga zid bo'ladi va spirtli ichimliklar iste'mol qilish spirtli ichimliklarni mahrum qilish ta'sirining yo'qligi sifatida tavsiflanishi mumkin. BxF va BxN kabi turli xil genetik hayvon modellarini ishlatish spirtli ichimliklarni iste'mol qilishning buzilishi genetikasi va atrof-muhit o'rtasidagi murakkab o'zaro ta'sirlardan kelib chiqqani uchun maydonni rivojlantirishga katta hissa qo'shadi. Ushbu duragaylar uchun differentsial zudlik bilan erta genin ifodasini aniqlash etanolning foydali va salbiy xususiyatlari uchun muhim bo'lgan miya elektron tizimini tushunish imkonini beradi.

Neyronal plastisit va / yoki aktivlikning molekulyar markerlaridan foydalangan holda, etanol va boshqa dori vositalari bilan ishlaydigan neyrokimyaklar o'ziga xos kemiruvchi modellarda o'rganilgan [8-15]. O'z-o'zidan tatbiq etilgan va eksperentrga kiritilgan etanol miya metabolik xaritalarini ekvivalentiga olib kelmaydi, bu maxsus sxema etanolning mustahkamlovchi ta'siridan kelib chiqadi [8,9].

Spirtli ichimliklarni tekshirishda keng qamrovli tadqiq qilinadigan asosiy tarkibiy qismlardan biri bu doimiy va kamaytirilgan spirtli ichimliklarni tanlash xatti-harakatlarini o'rganish va ushbu xatti-harakatlarda ishtirok etgan neyronal aylanishlarning identifikatsiyasi hisoblanadi. Ushbu eksperimentning maqsadi uzluksiz va past darajada spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan miya mintaqalarini aniqlash edi. Surunkali spirtli ichimliklarni iste'mol qilish (boshqa suiiste'mol dori-darmonlar bilan) DFOSB darajasida miya mintaqaviy farqlariga sabab bo'lganligi sababli, biz ushbu qiziqishlarga ega fenotiplarning ma'lum bo'lgan miya hududlarida transmissiya faktorining (FosB) differentsial ishlab chiqarilishi bilan ifodalanganligini tasavvur qildik mukofot, nafrat va stress bilan shug'ullanish [10].

DFF darajasida mintaqaviy farqlarni keltirib chiqaradigan surunkali ogohlantirishlarni spirtli ichimliklarni, alkogol, amfetamin, nikotin, morfin va antipsikotiklarni), surunkali stressni (taqiqlash stressi, kutilmagan oyoq zarbasi, elektrokonsivulseptiv soqchilik) va kompulsiv g'ildirakni boshqarishni o'z ichiga oladi [11]. Miyadagi uzoq muddatli moslashuvlarning potentsial mediatori sifatida surunkali o'rganish bilan davolashda FosBning (FosB yoki DFB) dominant varianti identifikatsiyalash muhim ahamiyatga ega.

Surunkali stimuldan keyin FosB va DFOSB o'lchagan bir necha tadqiqotlar mavjud, ular uchun DFOSning dominant izoformi (quyida tasvirlanganlar kabi) tasdiqlanmaganligi aniqlandi. Biroq, FosB emas, balki DFOSB surunkali ogohlantirgandan keyin dominant izoform ekanligini kuchli dalillar mavjud [10-12]. Ryabinin va Vang (1998) tomonidan olib borilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, DBA / 2J sichqonlarini afzal ko'rgan to'rt kun davomida takrorlangan o'rganish in'ektsiyalari quyidagi miya mintaqalarida FosB ifodasini mustahkam ravishda oshirdi: old kortikal amigdaloid yadrosi, lateral septum ventrale, markaziy amigdala , lateral amigdala, lateral gipotalamus, nukleus akumbens qobig'i, stria terminalining yotqizilgan yadrosi va talamusning paraventrikulyar yadrosi [13]. Ularning natijalari etanolga javob beruvchi neyroxiritni aniqlaydi. FosB ifodasi cheklangan kirish sharoitida etanolning o'z-o'zini boshqarishini sotib olish va saqlash paytida C57BL / 6J sichqonlarini afzal qilgan yuqori spirtli ichimliklarda ham o'lchandi. Self-administratsiyasini sotib olishda FosB darajasida o'zgarishlar yuz bermadi [14]. Biroq, ikki hafta mobaynida ethanolning o'z-o'zini boshqarishiga cheklovlar kiritilgandan so'ng, amigdala va Edinger-Westphal yadrosining markaziy medial yadrosida FosB darajalari [15]. Umuman olganda, hisobotlarda etanol o'z-o'zini boshqarish bilan shug'ullanadigan yangi hududlarni aniqlab beradi, shuningdek, mezokortikolimbik yo'l va rolini kuchaytiruvchi amigdala [16]. Shu bilan birga, DFB darajasidagi o'zgarishlarda etanolning qo'llanilish marshrutiga, dozaga va davolanish muddatiga yoki vaqt jadvaliga asoslangan [13-15].

Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan sichqonchaning suyaklari doimiy va kamaytirilgan spirtli ichimliklarni afzal ko'rishni va ushbu spirtli javoblarga javob beradigan asosiy mexanizmlarni solishtirish uchun qiziqarli modellarni taqdim etadi. Bu ishda, spirtli ichimliklarni iste'mol qilish afzalliklarini ko'rsatadigan sichqonlarning mukofot va stress bilan bog'liq davrlarda (Edinger-Westphal yadrosi, ventral tegmental hududi, amigdala, yadro akumbensi va singulat korteksini) o'z ichiga oladi.

natijalar

BxF va BxN sichqonlarida spirtli ichimliklar konsentrasiyalari va o'z-o'zini boshqarish muddatlarining ta'sirini baholash

Turli etanol konsentrasiyalari va / yoki utilizatsiya davrlari keyingi o'rganish iste'molini o'zgartirganligini namoyish qilish uchun etanol iste'molini o'lchash uchun to'rtta dasturni (guruhlarni) ishlab chiqdik. (Rasm 1a, b).1a, b). Har gibrid uchun to'rtta tajriba guruhi mavjud edi: Yuqori konsentratsiyalar, Abstinans davrlari bilan yuqori konsentratsiyalar, past konsentratsiyalar va zich konsentrasiyalar. Etanol afzalligi uchun to'liq ma'lumotlar (shakl (Rasm 2)2) va iste'mol (rasm (Rasm 3)3) ma'lumotlar (barcha guruhlar va genotiplar uchun) mos yozuvlar uchun taqdim etilgan. Uzoq muddatli va kamaytirilgan spirtli ichimliklarni afzal ko'rishning xarakatli fenotiplarini aniqlash va ifodalash uchun 9% o'rganish afzalligi va iste'mol ma'lumotlari quyidagicha ifodalangan: Figures44 va va5.5. Ushbu xulq-atvorli fenotiplar yuqori konsentratsiyalar guruhlarida 9% etanol afzalligi va iste'molini birinchi, ikkinchi, uchinchi va to'rtinchi taqdimotlar va quyi konsentratsiya guruhlari uchun tegishli tajriba kunlaridan solishtirishga asoslangan. 9% ning etanol afzalligi va iste'moli uchun ikki tomonlama ANOVA (genotip x marta) amalga oshirildi. Yuqori konsentratsiyalar guruhi uchun etanol afzalligi (shakl (Shakl 4a)4a) va iste'mol (rasm (Shakl 5a)5a) BxF uchun BxN dan kattaroq edi va BxF alkogolning afzalligi va iste'molini namoyish etdi, BxN esa alkogolning afzalligi va iste'molini kamaytirdi (ETANOL TARZI - o'zaro ta'sir F (3,54) = 4.83, P <0. 01, genotip F (1,54, 24.10) = 0.001, P <3,54, vaqt F (9.92) = 0.0001, P <1,54; ETANOL ISHLASH - o'zaro ta'sir N ​​/ S, genotip F (50.73) = 0.0001, P <3,54, vaqt F (11.68, 0.0001) = XNUMX, P <XNUMX). Iste'moldan mahrum bo'lgan yuqori konsentratsiyalar guruhi uchun etanol afzalligi (rasm) (Shakl 4b)4b) va iste'mol (shakl (Shakl 5b)5b) BxF uchun BxN dan kattaroq edi va BxF alkogolning afzalligi va iste'molini namoyish etdi, BxN esa alkogolning afzalligi va iste'molini kamaytirdi (ETHANOL PERFERENCE - shovqin F (3,132) = 15.89, P <0.0001, genotip F (1,132) = 250.43, P <0.0001, vaqt F (3,132) = 27.48, P <0.0001; ETANOL ISHLAB CHIQISH - o'zaro ta'sir F (3,132) = 11.35, P <0.0001, genotip F (1,132) = 510.88, P <0.0001, vaqt F (3,132) = 22.42, P <0.0001). Kam konsentratsiyalar guruhi uchun etanol afzalligi (rasm) (Rasm 4c)4v) iste'mol qilish (rasm (Rasm 5c)5c) BxF uchun BxN dan kattaroq edi va ikkala duragaylar alkogolning afzalligi va iste'molini namoyish etdilar (ETHANOL PREFERENCE - shovqin N / S, genotip F (1,54) = 12.2, P <0.01, vaqt N / S; ETANOL ISHLAB CHIQISH - shovqin N / S, genotip F (1,54) = 74.83, P <0.0001, vaqt N / S). Iste'mol qilish darajasi past bo'lgan konsentratsiyali guruh uchun etanolni afzal ko'rish (rasm) (Rasm 4d)4d) va iste'mol (shakl (Rasm 5d)5d) BxF uchun BxN dan kattaroq edi va ikkala duragaylar spirtli ichimliklarni iste'mol qilish va iste'mol qilishda o'rtacha pasayishlarni namoyish etdilar (ETHANOL PERFERENCE - shovqin N / S, genotip F (1,132) = 166.58, P <0.0001, vaqt N / S; ETANOL ISHLAB CHIQISH - shovqin F (3,132) = 3.61, P <0.05, genotip F (1,132) = 480.64, P <0.0001, vaqt F (3,132) = 7.87, P <0.0001). Xulosa qilib aytganda, yuqori konsentratsiyali guruhlarda (tiyilmasdan), BxF doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'rdi, BxN alkogolning pasayishini va past konsentratsiyali guruhlarda (to'xtamasdan), BxF va B6xN ikkalasi ham doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'rishdi. Qiziqish fenotiplari to'xtashsiz guruhlarda eng yaxshi tarzda qo'lga kiritilganligi sababli, ular tadqiqotning qolgan qismida.

Shakl 1  

Ketma-ket etanol iste'mol qilish uchun eksperimental jadval. a. Past konsentratsiyalar va yuqori konsentratsiyalar guruhlari uchun eksperimental jadval. b. Abstinentsiya davri va yuqori konsentratsiyali past konsentratsiyalar uchun eksperimental jadval ...
Shakl 2  

Etanolning afzalligi genotip va o'rganish konsentratsiyasiga bog'liq. a. Yuqori konsentratsiyalar guruhlarida etanol afzalligi (o'rganish iste'moli / umumiy suyuqlik iste'moli) BxF uchun BxN dan yuqori va taklif etanol konsentratsiyasi bilan farq qiladi. b ...
Shakl 3  

Etanol iste'moli genotip va etanol kontsentratsiyasiga bog'liq. a. Yuqori konsentratsiyalar guruhlarida etanol iste'moli (g / kg / kun sof o'rganish) BxF uchun BxN ga nisbatan katta va u taklif etilgan o'rganish konsentratsiyasi bilan farq qiladi. b. Yuqori konsentrasiyalarda ...
Shakl 4  

Spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan holda xulq-atvorli fenotiplarni saqlab turish va kamaytirish. 9% etanolning birinchi, ikkinchi, uchinchi va to'rtinchi taqdimotdan solishtirilishi uzluksiz yoki kamaytirilgan spirtli ichimlik afzalliklarining qiziqishning fenotiplarini belgilab beradi. a. ...
Shakl 5  

Spirtli ichimliklar iste'mol qilish uslublarini saqlab turish va kamaytirish. 9% etanol iste'molining birinchi, ikkinchi, uchinchi va to'rtinchi taqdimotdan solishtirilishi spirtli ichimliklarni iste'mol qilishning barqaror yoki kamaytirilgan xarakatli fenotiplarini belgilab beradi. ...

DFB darajalari

DFOSB miqdori va tahlillari doimiy va past darajada spirtli ichimliklarni tanlashda surunkali faollashtirilgan neyrokimyoviyni aniqlash uchun ishlatilgan. Har bir devqomat uchun uchta tajriba guruhi mavjud edi: Yuqori konsentratsiyalar, Past konsentratsiyalar va Suv (Nazorat). DFOSB ma'lumotlari DFOSB musbat neyronlari [(DFOSB pozitiv neyronlarning # soni) / (Nissl musbat neyronlarning + DFOSB musbat neyronlarining # soni) [] (Table1).1). Ilgari ishda o'rganish tajribasi shuni ko'rsatdiki, neyrogen hosil bo'lishi [17]. Shuning uchun, bu ishda nöronal sonlarni araştırdık va bu ishda miqdori aniqlangan miya hududlari uchun genotip yoki guruhga ko'ra, mazmunli farq saptanmadı. Quyidagi uchta tahlil: DNFX ma'lumotlaridan uch xil ANOVA (genotip x guruh x miya hududi), 1) har bir genotip uchun ikki tomonlama ANOVA (miya hududi x guruhi) va 2) korrelyatsion matritslar ishlab chiqildi tarmoqlar.

1 stol  

Fosb ijobiy neyronlar foizi

Uch tomonlama ANOVA (genotip x guruh x miya mintaqasi) takroriy choralari genotip x miya mintaqasining o'zaro ta'sirini aniqladi [F (15,375) = 2.01, P <.05], guruh x miya mintaqasining o'zaro ta'siri [F (15.375) = 1.99, P <0.01] va miya mintaqasining asosiy ta'siri [F (15,375) = 43.36, P <.000]. Har bir genotip uchun ikki tomonlama ANOVA (miya mintaqasi x guruhi) bo'yicha takroriy o'lchovlar BxF va BxN [BxF-F (2,374) = 11.79, P <.0001, asosiy ta'siri guruh va miya mintaqasining asosiy ta'siri borligini ko'rsatdi. guruh; F (15,374) = 25.64, P <.0001, miya mintaqasining asosiy ta'siri; BxN - F (2,360) = 43.38, P <.0001, guruhning asosiy ta'siri; F (15,360) = 23.73, P <.0001, genotipning asosiy ta'siri]. Post-hoc tahlil BxN uchun oltita muhim guruh farqlarini aniqladi (rasm) (Shakl 6a-c).6ac). DFFB darajalari past konsentratsiyalar guruhida La, CeC / CeL, EW va VTAdagi suv guruhiga qaraganda yuqori edi. DFFB darajasi yuqori konsentratsiyalar guruhida CeMPVdagi suv guruhiga qaraganda yuqori edi. EFda yuqori konsentratsiyalar guruhiga qaraganda DFOSB past konsentratsiyalar guruhida yuqori bo'ldi. Barcha miya mintaqalari uchun aniqlangan FFB ma'lumotlar, jadvalda keltirilgan Table1.1. Pearsonning r-korrelyatsion tahlili ma'lum bir miya mintaqasida DFOSB musbat neyronlarining% etanol iste'moli yoki afzalligi bilan bog'liqligini aniqlash uchun ishlatilgan. Etanol iste'moli va afzalligi BxN sichqonlarining EW va VTA tarkibidagi% DFosB bilan sezilarli darajada ijobiy korrelyatsiya ko'rsatdi (ETANOL ISHLAB CHIQISH - EW r = 0.85; VTA r = 0.85; ETANOLNING TARZI - EW r = 0.83, VTA r = 0.88; p <0.05 Barcha uchun).

Shakl 6  

Spirtli ichimliklarni iste'mol qilishni to'xtatib qo'yish va kamaytirish Amigdala, EW va VTA ichida DFOSB ni keltirib chiqaradi. Amigdala hududida joylashgan FFSB pozitiv neyronlaria.), EW (b.) va VTA (c) .. d. Va e. DFF / Nissl binoni rasmlari ...

DFOSB ifodasi, genotip, miya hududi va o'rganish iste'moli o'rtasidagi murakkab munosabatlar prinsipial komponent tahlillari va ierarxik kümelenme yordamida o'rganildi. Asosiy komponentlarni tahlil qilish ma'lumotlari bo'yicha o'zgaruvchanlikning ko'pligi (~ 80%) 5 komponentlari bilan ifodalanganligini aniqladi. Keyinchalik kuzatilmagan ierarxik kümelenme (shaxslar va miya hududlari tomonidan kümelenmiş) birinchi asosiy komponent yordamida (Rasm 7).7). Shaxsiy kümelenme genotipten qat'i nazar, etanol iste'moli asosida guruhlangan, kuchli, lekin mukammal emas edi. Ko'pgina etanolli naushnik sichqonchalar birgalikda to'planib, kamroq umumiy DFSB ni namoyish qildilar va o'rtacha sutdan ko'p va sichqonlarning ko'pchiligi birgalikda to'plangan spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan va o'rtacha qiymatdan ko'ra ko'proq FFB ko'rsatdi. Bu ikkita guruh juda farq qilardi. Uchta kümeler, DFOSB qadriyatlarini va o'rganish ichimlik fenotiplerinden katta, kamroq va o'rtacha aralashmasini ifodalaydi.

Shakl 7  

DFB darajalari faqat etanol iste'moli bilan boshqarilmaydi. Ierarxik kümelenme amalga oshirildi va birma-bir DFB darajalari va tegishli 9% o'rganish iste'moli natijasida olingan issiqlik xaritasi ko'rsatildi. Yashil = FF kamroq ...

muhokama

Sichqonlarning ikkita F1 gibrid shtamini taqqoslaganda o'ziga xos spirtli ichimliklarni o'zini o'zi boshqarish xatti-harakatlari kuzatildi: BxN alkogolning yuqori kontsentratsiyasiga ega bo'lgan tajribadan so'ng va spirtli ichimliklar iste'mol qilish muddatini qisqartiradi, BxF esa spirtli ichimliklarni iste'mol qilish holatini ko'rsatadi. BxF modellari barqaror, yuqori iste'mol (doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'rish) va BxN modellari o'rta ichimlik (spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligi). Nöronal plastisit (yoki DFF darajalari bilan o'lchanadigan faoliyat) etanol tajribasiga qarab turli xil bo'lib, bu o'ziga xos neyronal devordagi barqaror va kamaytiriladigan spirtli ichimlik afzalliklarida asosiy rolni qo'llab-quvvatlaydi.

C57BL / 6 yuqori spirtli ichimliklarni iste'mol qilish uchun etanolning afzalligi va iste'moli dastlabki o'rganish konsentratsiyasi, to'xtash muddati va pastki chidamliligi bilan bog'liq (C57BL / 6Cr or C57BL / 6J) [7,18]. BxF sichqonchasida ko'rilgan o'rganish afzalligi va iste'moli sinov qilingan to'rt xil jadvalda doimiy ravishda (va BxN ga qaraganda ancha barqaror) ekanligini aniqladik. BxN-da o'rtacha darajada yuqori o'rganish afzalligi va iste'moli faqat surunkali ichimlikning bir jadvali bilan davom ettirildi (past bo'lmagan konsentratsiyalar), imtiyoz va iste'molda pasayish sinovlari boshqa barcha surunkali ichish rejalari bilan kuzatildi. BxN spirtli ichimliklar imtiyozi yangi hayvon modelini taklif qiladi, bu tajribada (ko'p miqdordagi etanol konsentrasiyalari tajribasi va / yoki bir necha qisqa muddatga qoldirilgan tajriba so'ng takroriy taqdimoti) oldindan yuqori darajada afzal qilingan o'rganish konsentratsiyasiga javobini sezilarli darajada pasaytiradi.

O'z-o'zini boshqarish va tajriba-konstruktor etanol turli miya metabolik xaritalarini ishlab chiqaradi, bu maxsus sxema etanolning mustahkamlovchi ta'sirini [8,9]. Biz doimiy va kamaytirilgan spirtli ichimliklarni tanlash xatti-harakati fenotiplari mukofot, nafrat va stressda ishtirok etuvchi ma'lum bo'lgan miya hududlarida indüktiv transkriptsiya faktori, DFSBning differentsial ishlab chiqarilishi bilan ifodalangan farazni sinab ko'rdik. DFOSB - noyob uzoq muddatli barqarorlikka ega bo'lgan transkriptsion faktordir va c-Fos kabi stimulga sezgirlik qilmaydi, balki surunkali davolash paytida to'planadi. DFB ning ortishi nöronal faollikni oshiradi va uzoq muddatli neyronal plastisitni aks ettiradi. Biz miyada hududlarda DFB ijobiy neyronlarning foizini genotipga (BxF va BxN) va guruhga (Suvni boshqarish, past konsentratsiyalar va yuqori konsentratsiyalar) bog'liqligini aniqladik.

Fyoki BxN, post-hoc tahlillari ixtiyoriy o'rganish iste'moli EW yadrosida, VTA va amigdalada DFBning o'sishiga olib keldi: miya hududlarida etanol, mukofot va stress reaktsiyalariga aloqador deb ko'rilgan neyronal plastisitni oshirganini ko'rsatdi. Yuqori konsentratsiyalar guruhidagi BxN sichqonlari (spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligi) EHda neyronal plastisitivani kamaytirdilar, bu neyronlar spirtli ichimliklarni iste'mol qilishga tajribaga qaramli plastisitivlik bilan javob berishini ko'rsatdi. Past konsentratsiyalar guruhida (doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligi) EWdagi neyronal plastinka yuqori konsentratsiyalar va suvni nazorat qilish guruhlaridan ko'ra ko'proq. Turli etanol ichimlik paradigmalaridan va genetik sichqonchani modellaridan foydalangan holda, BxN sichqonlarining EWdagi topilmalarimiz oldingi etanol iste'moli tadqiqotlari bilan mos keladi [14,15]. Preganglionik bo'lmagan EW yaqinda periokulyomotor urokortin (Ucn) o'z ichiga olgan neyronlarni o'z ichiga olgan [19]. Ucn1 - CRF1 va CRF2 retseptorlari bilan bog'laydigan kortikotropinni chiqaruvchi omil (CRF) -giz peptidi. Ilgari genetik, farmakologik va lezyon yondashuvlaridan foydalangan holda, Ucn1 spirtli ichimliklarni iste'mol qilishni tartibga solishda ishtirok etgan [19-22]. TEW va LSi-da Ucn1ning yuqori bazal darajalari bilan bog'liq bo'lgan kemiruvchilarda yuqori spirtli ichimliklarni iste'mol qilish uchun ma'lum genetik moyillik. [23]. Shunday qilib, BxF sichqonlarini afzal ko'rgan va iste'mol qilgan yuqori spirtli ichimliklar uchun EWda kuzatilgan post-hususiy ahamiyatga ega bo'lmagan narsa kutilmagan edi. Ehtimol, bu BxF suv guruhidagi BFH suv guruhi bilan solishtirganda, bir oz yuqori foiz DFF darajasiga bog'liq. Haqiqatan ham, doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan barcha sichqonlarga (BxF Oliy konsentratsiya guruhi, BxF past konsantrasyonlar guruhi va BxN past konsantrasyonlar guruhi) uchun DFF darajasi juda o'xshardi.

BxN uchun, Past konsentratsiyalar guruhida o'rganish iste'moli VTA'dagi (yuqori konsentratsiyalar va suvni nazorat qilish guruhlaridan ko'ra) neyronal plastisitni oshirdi. Etanol afzalligi va iste'moli past konsentratsiyalar guruhi uchun ham katta bo'ldi. VKA-da kuzatilganimizdan so'ng, BXF sichqonlarini afzal ko'rgan va iste'mol qiluvchi yuqori spirtli ichimliklarni iste'mol qilishning kutilmaganligi va suvning nazorat guruhidagi DFB darajasining biroz yuqoriroq darajasiga bog'liq bo'lishi mumkin. BxF suv guruhida BFF suv guruhida birmuncha DFF darajalari birmuncha yuqoriga ko'tarildi, bunda DFF darajasi DFOSB darajalari spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan barcha sichqonlarga (BxF yuqori konsentratsiyalar guruhi, BxF past konsentratsiyalar guruhi va BxN kam kontsentratsiyalar guruhi) . VTA dopamin tizimi etanolning mustahkamlovchi ta'sirini avtomatlashtirishda katta rol o'ynaydi va etanol va mukofot bilan bog'liq xatti-harakatlar uchun muhim bo'lgan ko'plab o'zaro bog'lanishlarda ishtirok etadi [24-26]. Bundan tashqari, VGA amigdala va EW yadrosiga loyihalar. Sichqoncha VTA ga to'g'ridan-to'g'ri etanolni o'z-o'zini boshqarish uchun ko'rsatildi [27]. Bundan tashqari, etanol ta'sir qilish VTA da dopaminerjik neyronlarning otishni o'rganish tezligini oshiradi [28,29]. Kuchli otishni o'rganish tezligi BXNda surunkali ko'ngilli o'rganish so'ng kuzatilgan VTA'dagi DFBQ indüksiyasiga bog'liq bo'lishi mumkin.

Spirtli ichimliklarga qaramlik salbiy hissiy vaziyatlarga olib keladigan uzoq muddatli neyrokontaktalarni keltirib chiqaradi; salbiy mustahkamlashda muhim mexanizm amigdala ichidagi kortikotropinni chiqaruvchi omil (CRF) [30]. CeAdagi neyronlarning farmakologik manipulyatsiyasi GABA, CRF, opioid, serotonin, dynorphin va norepinefrin retseptorlarini maqsad qilib olgan [25,31-34]. GABA antagonistlari, shuningdek CRF antagonistlari etanol iste'molini kamaytiradi [32,33,35]. CeA ning leykozlari ixtiyoriy etanol iste'molining uzluksiz kirishini kamaytiradi [36]. Bizning topilmalarimiz alkogol ichimliklar ichish tartibini tartibga solishda CeA uchun muhim rol o'ynaydi. GABAerjik neyronlar markaziy amigdalada o'zlarining peptid tarkibiga bog'liq holda paydo bo'ladigan heterojen bir populyatsiyada hosil bo'ladi. Ushbu GABAergik neuronlar CeA ning chiqindilarni faolligini birlashtiradi. [Wee va Koob (2010]), S.Everal tadqiqotlar dinorfin va kappa opiyoid retseptorlari uchun etanol intakga [37]. Yaqinda Walker va boshq. K-opioid retseptorlari antagonisti yoki norbinaltorfimin, kengaytirilgan amigdala ichida qaram hayvonlarda etanolni o'z-o'zini boshqarishini qisqartirishini [38]. Kappa opioid retseptorlari signalizatsiyasi stressni, mukofotni va nafratni kesib o'tishda tadqiqotlarning asosiy qiziqishi bo'lib qoladi. Stressni keltirib chiqargan etanolning o'z-o'zini boshqarishi kappa opioid retseptorlari signalizatsiyasi vositasida [39]. Markaziy sefa naychasini latero-capsular (CeB / SES) va medial posterior ventralga bo'linishi mumkin. CeB / CE ning GABAerjik neyronlari VTA dan dopaminerjik innervasyonlarni oladi; ilgari aytib o'tilganidek, ushbu nöronlar aktiv etanolni qo'llashdan so'ng faollashadi va spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligini ko'rsatadigan DFS sichqonlarini ko'paytiradi. Bundan tashqari, qarang Mc [Kelin (2002]) CeA va spirtli ichimliklarni ta'siri haqida mukammal tadqiq qilish uchun [40]. Bizning ishda uzluksiz spirtli ichimliklar afzalligi (Low Concentrations guruhi) bilan BxN sichqonlari CeC / CeLda ko'paygan neyronal plastisitani namoyon etdi va spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan (La Concentrations guruhi) va La va BxN sichqonlari CeMPVdagi neyronal plastisitni oshirdi. Ushbu natijalar amigdaladagi GABAerjik neyronlarda o'ziga xos o'rganish tajribasining plastisitni o'z ichiga olganligini ko'rsatadi. Ushbu ma'lumotlar bilan, VTA va EW da joylashgan neyronal plastinkada mos keladigan o'zgarishlar bilan birga, biz ushbu sputnikni spirtli imtiyozli sharoitda sezilarli darajada plastika qilishni taklif qilamiz.

Avvalgi tadqiqotlar C57BL / 6J sichqonlarining ikkita shishani ichish orqali yuqori qon spirtini olishini ko'rsatdi, ammo qon spirtining miqdori barqaror emas va ko'pincha ichish Dole va Gentry (1984) tomonidan belgilangan farmakologik motivlarga javob bermaydi [41,42]. Odatda, bir C57BL / 6J sichqoncha kutilganidan kam iste'mol qilingan spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan BxN sichqonchani [1]. Shu bois, qon spirtli ichimliklarni namunalarini olmagan bo'lsak-da, spirtli ichimliklarni iste'mol qilish afzalligini ko'rsatadigan BxN sichqonlarining farmakologik jihatdan tegishli qon spirtining darajasiga erishganligi ehtimoldan yiroq emas, bu yuqori qon spirtini kontsentratsiyasi bu miya hududlarida plastinka hosil qilish uchun zarur emasligini ko'rsatmoqda. BxF miya hududlari uchun post-hoc natijalar (bir nechta taqqoslashlar uchun tuzatilgan), surunkali o'rganish iste'molidan so'ng har qanday hudud uchun DFF ijobiy neyronlarning% Ushbu turli xil dasturlari bilan.

Argumentlar o'rtasidagi potentsial munosabatlarni tasavvur qilish uchun ierarxik kümelenme amalga oshirildi. Olingan tahlilning issiqlik xaritasi genofonddan qat'i nazar, DFSB darajalari va etanol iste'moli o'rtasidagi umumiy moyillikni ko'rsatadi. Yuqori darajadagi DFB darajalari yuqori ichish bilan bog'liq va past dozada DFF darajalari nazorat hayvonlari bilan bog'liq bo'lgan; biroq, bu munosabatlarning kuchi faqat DFB darajalariga asoslangan holda ichish fenotiplarini aniq tasavvur qilish uchun etarli emas edi.

Xulosa

Spirtli spirtli ichimliklarni o'z-o'zini boshqarish xatti-harakatlarini sichqonning ikkita F1 gibrid shtammi bilan kuzatishdi: BxN spirtli ichimliklar iste'molini yuqori darajadagi spirtli ichimliklar bilan taqqoslaganda, BxF spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligini ko'rsatdi. BxF modellari barqaror, yuqori iste'mol (doimiy spirtli ichimliklarni afzal ko'rish) va BxN modellari o'rta ichimlik (spirtli ichimliklarni afzal ko'rganligi). Nöronal plastinkada o'zgarish (DFB darajalari bilan o'lchanadigan) tajribaga qaram bo'lgan, shuningdek, miya hududi va genotipga xos bo'lib, neyronal tizimni yanada aniqlab, etanol iste'molining motivatsion aspektlari bilan asoslanadi. Ushbu natijalar gibrid sichqonlardagi bitta ota-onaning o'zgarishi spirtli ichimliklarni iste'mol qilish modelidagi o'zgarishlarga va DFOSB ifodasi nishabidagi o'zgarishlarga olib keladi va bu turli xil gibrid sichqonlarga turli miya tarmoqlarini jalb qilishni ko'rsatmoqda.

usullari

etika

Ushbu tadqiqot Milliy Sog'liqni saqlash institutlarining laboratoriya hayvonlarini saqlash va ulardan foydalanish qo'llanmasida berilgan tavsiyalarga qat'iy muvofiq ravishda olib borildi. Protokol Ostin Texas universiteti (AUP 2010-00028) Institutional hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish bo'yicha qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Barcha jarrohlik natriy pentobarbital anesteziya ostida o'tkazildi va azob-uqubatlarni kamaytirish uchun barcha choralar ko'rildi.

Hayvonlar

Tadqiqotlar C1BL / 57J dan olingan interkros qiz F6 gibrid sichqonlari yoki FVB / NJ yoki NZB / B1NJ sichqonlari (BxF F1 va BxN F1, maternal jinslar x paternal suyak) yordamida o'tkazildi. C57BL / 6J, FVB / NJ va NZB / B1NJ pitomniklari The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) dan sotib olingan va 7-8 haftada bitilgan. Jinsiy genotiplarning har birining izoseksual guruhiga bo'linib ketgan (BxF F1, BxN F1). Biz ilgari to'plangan ma'lumotlar bilan taqqoslashni osonlashtiradigan faqat ayol sichqonchani sinab ko'rdik [1,5,6]. Sichqoncha standart kafeslarda oziq-ovqat va suv bilan ta'minlangan ad libitum. Koloniyalar xonasi va test xonasi 12 siqilishda edi: 12 h qorong'i davr (07: 00 da yonadi).

Ikki shisha tanlash etanol imtiyozli test

Ayol BxF va BxN sichqonchalarida ixtiyoriy o'rganish o'zini o'zi boshqarish modellarini aniqlash uchun ikkita shishani tanlash usuli qo'llanildi [1,6]. F1 gibrid ayol sichqonlari (yoshi 63 kun) alohida hujayradan standart bir hujayradan joylashtirilgan va bir hafta davomida o'rganish eritmasi qo'shilmasdan oldin suv bilan qoplangan kiprik quvurlari bilan shishalarga o'ralgan. Habitiyadan so'ng sichqon ikkita bir xil shishaga ega edi: biri suv, ikkinchisi esa o'rganish eritmasi. Joylashuv pozitsiyalarini nazorat qilish uchun quvur joylari har kuni o'zgartirildi. Potensial tarqalish va bug'lanishni hisobga olish uchun har kuni sichqonsiz nazorat qafasidagi quvurlardan tushirilgan o'rtacha og'irlik har bir kishining shaxsiy ichish qiymatidan chiqarildi. Sichqonlarga har bir 4 kun davomida sinov davomida tortildi. Barcha suyuqlik iste'moli tajriba davomida har kuni o'lchandi. Har sichqon uchun iste'mol qilinadigan o'rganish miqdori va o'rganish afzalligi aniqlandi va bu qiymatlar har bir o'rganish konsentratsiyasi uchun o'rtacha hisob qilindi. BxF va BxN sichqonlarida spirtli ichimliklar konsentratsiyalari va uzilish davrlarining o'z-o'zini boshqarishiga ta'siri yuqori konsentratsiyalarga ega bo'lgan eksperimental guruhni (3-35% etanol eritmalariga kirishni kengaytirib, so'ngra 3, 9, va 18% etanolning yakuniy taqdimoti bilan yakunlangan 27% etanol) va boshqa konsentratsiyalarga ega bo'lgan boshqa guruh (9-3% o'rganish uchun kengaytirish, eksperimentning qolgan qismi esa 9% ga o'rganish bilan amalga oshiriladi). Ushbu guruhlarning har birida bir hafta davom etadigan va uch hafta davom etadigan har qanday noxushlik davrini boshdan kechirgan yoki uchratmagan kichik guruh mavjud edi. Nazorat sichqonlari tajriba sichqonlari bilan bir vaqtning o'zida xuddi shunday sharoitlarni boshdan kechirgan, biroq faqat bitta shisha suv taklif qilingan.

Umuman olganda, har bir gibrid uchun 5 guruh mavjud: suv (n = 14-16), yuqori konsentratsiyalar (n = 10), abstinentsiya davrlari bilan yuqori konsentratsiyalar (n = 20), past konsentratsiyalar (n = 10) va past konsentratsiyalar Abstinence davrlari bilan (n = 20). Shaklga qarang Figure 11 Ikki shisha tanlovining guruhli jadvallari.

DFOSB immunohistokimyosi va miqdori

DFOSB immunohistokimyosi (IHC) 16 kun davomida suv (Nazorat) yoki suv va spirtli ichimliklarga doimiy kirish imkoniyatiga ega bo'lgan sichqonlardan 72 miya hududida o'lchandi [Yuqori konsentratsiyalar va past konsentratsiyalar]. Yuqori konsentratsiyaning etanolni afzal ko'rishi va iste'mol qilishiga ta'siri abstinens ta'siridan ancha katta edi; shuning uchun abstinatsiya davrlarini boshdan kechirgan guruhlar DFOSB IHC o'lchovlariga kiritilmagan. Bundan tashqari, eksperiment etanolni surunkali iste'mol qilish ta'sirini o'rganish uchun etanol konsentratsiyasining o'zgargan tsikllari bilan xatti-harakatlarning fenotiplari barqarorligini ko'rsatish uchun doimiy yoki kamaytirilgan spirtli ichimliklarni afzal ko'rganidan tashqari amalga oshirildi. Tajribaning 73-kunida alkogolni olib tashlaganidan to'rt-sakkiz soat o'tgach, sichqonlar chuqur behushlik qilishdi (175 mg / kg natriy pentobarbital) va 20 ml 0.01 M fosfat tamponli sho'r suv (PBS) bilan intrakardial tarzda emdirildi, so'ngra 100 ml 4% PBSdagi paraformaldehid. Miyalar olib tashlandi, 4% paraformaldegidda 4 ° C haroratda tiklandi, 3% agaroza ichiga joylashtirildi, (50 um, koronal) vibratomga bo'linib, kriyoprotektor (30% saxaroza, 30% etilen glikol va 0.1% polivinil) ichiga joylashtirildi. kecha davomida 4 ° C da va -20 ° C da IHC uchun qayta ishlangunga qadar saqlanadi. Eritilgan qismlar PBS bilan yuvilib, 0.3% H2O2 bilan ishlangan va o'ziga xos bo'lmagan yorliqlarni minimallashtirish uchun bir soat davomida 3% normal echki sarumida inkübe qilingan. Keyin to'qima bo'limlari bir kechada 4 ° C da 3% normal echki sarumida va piyodalarga qarshi FosBda inkubatsiya qilindi (SC-48, 1: 5000 dilüsyon, Santa Cruz Biotexnologiya, Santa Cruz, CA). Bo'limlar yuvilib, biotinli echki quyonlarga qarshi Ig (1: 200 dilüsyon, Vector Laboratories, Burlingame, CA) ichida inkübe qilingan, yuvilgan va avidin-biotin kompleksida inkubatsiya qilingan (1: 200 dilüsyon, Elite kit-Vector Laboratories). . Peroksidaza faolligi 0.05% diaminobenzidin (0.015% H ni o'z ichiga olgan) bilan reaktsiya orqali ingl2O2). To'qimachilik bo'limlari Nisslga qarshi ishlatilgan (metilen sarg'ish / II-II dan foydalanilgan). Slaydlar ko'rni sanash uchun kodlangan. DFOSB-IR neyronlari 50X (yog ') magnitolasida optik fraktsion usuli va StereoInvestigator kompyuter dasturi yordamida hisoblangan. Namuna olish parametrlari haqida ma'lumot: ro'yxatga olish doirasi (50um x 50um x 10um) barcha hududlar uchun bir xil bo'lgan; Biroq, 100 dan kamroq o'zgarish koeffitsientiga erishish uchun umumiy ikki tomonlama hujayra hisoblagichlari 300-0.1ga teng bo'lishini ta'minlash uchun har bir miya mintaqasi uchun grid hajmi aniqlandi. Ma'lumotlar har bir mintaqa uchun FosB musbat yadrolarining (DFB ijobiy yadro soni / neyronlar soni) foizlari hisoblab chiqildi.

Ushbu tadqiqotda ishlatilgan FosB antikoru (SC-48, Santa Cruz Biotexnologiya, Santa Cruz, CA) FosBning ichki hududiga qarshi ko'tarildi va FosB va DFB ni tanib berdi. Ushbu antikor ikkala FosB va DFB ni ham tan olsada, bu ishda aniqlangan immunopitekturiya nöronlari DFOSB ijobiy neyronlar deb ataladi, chunki spirtli ichimliklar, jumladan, spirtli ichimliklarni iste'mol qilish, ayniqsa, NFS emas, FOSB ni neyronlarda indikatsiya qilishlari ko'rsatilgan. Perrotti va boshq. ([2008(FosB va DFOSB (SC-48) ni taniydigan va DFB uchun tanlangan (savdo sifatida mavjud bo'lmagan) ikkita antikorni qo'llash orqali DFosB indüksiyasini o'lchadi (DFOSB indüksiyasini (spirtli ichimliklar, shu jumladan, surunkali dori vositalarini qo'llashga javoban) va barcha dorilar uchun FosB antikorini (SC-48) qo'llash orqali kuzatilgan immunoreaktivlik DFosB bilan bog'liq, chunki ular to'liq uzunlikdagi FosB uchun tanlangan antitordni ishlatib, immunoreaktiv neuronlarni aniqlay olmaydilar [10]. Bundan tashqari, DFSB miya mintaqasida va hujayra tipidagi o'ziga xos tarzda paydo bo'lishi ma'lum, turli xil surunkali muolajalar va ushbu mavzu bo'yicha mukammal baholashlar mavjud [11,43,44].

Neyroanatomik tuzilmalar qisqartmasi va joylashuvi

Il - infralimbik korteks (+1.70 mm); Cg1 - singulat korteks 1 (+1.1 mm); Cg2 - singulat korteks 1 (+1.10 mm); NAcc yadrosi - akumbens yadrosi (+1.10 mm); NAcc qobig'i - akumbens yadrosi (+1.10 mm); LSi - lateral septum oralig'i (+1.10 mm); La - lateral amigdala (-1.22 mm); Bla - bazolateral amigdala (-1.22 mm); CeC / CeL - markaziy kapsül va markaziy lateral amigdala (-1.22 mm); CeMPV - amigdala markaziy yadrosining medial posterioventral qismi (-1.22 mm); PAG - periakuaduktal kulrang (-3.64 mm); EW - Edinger-Vestfal yadrosi (-3.64 mm); VTA - ventral tegmental maydon (-3.64 mm); DR - dorsal rafa (- 4.60 mm); PBN - parabrachial yadro (-5.2 mm); NTS - yadro traktus solitarius (-6.96 mm). Stereotaksik koordinatlardagi sichqoncha miyasi[45] har bir miya mintaqasi miqdorini aniqlash uchun bir-uch qismga muvofiq ravishda sub'ektiv ravishda sinash uchun ishlatilgan.

Statistik tartiblar

Ma'lumotlar aks ettirilmasa, o'rtacha ± SEM sifatida bildiriladi. Ma'lumotlar odatda tarqatildi. Statistikasi 6 (StatSoft, Tulsa, OK, AQSh) va GraphPad Prism versiyasi 4.00 (GraphPad Software, San-Diego, KA, AQSh) yordamida amalga oshirildi. Etanol iste'moli uchun ikki tomonlama ANOVA va takroriy chora-tadbirlar guruhlar orasidagi farqlarni baholash uchun mo'ljallangan. Guruhlar (yuqori konsentratsiyalar, past konsentratsiyalar va suv), miya hududi va genotip uchun o'zaro ta'sirlar va asosiy effektlarni baholash uchun DFS ma'lumotlaridan ikki va uch tomonlama ANOVA o'tkazildi. Bonferronining bir nechta taqqoslashlar uchun tuzatish va Bonferronining post-hoc muvofiqligi amalga oshirildi. Ayniqsa, biz stres va mukofot tizimini sichqonlarda FosB ni oshirgan bo'lardi. Har bir gibrid xoch uchun Pearson r rsatiti DFSB darajalari va etanol tajribali sichqonlarda o'rganish afzalligi va iste'moli o'rtasida sezilarli korrelyatsiyalar mavjudligini aniqlash uchun ishlatilgan.

Ierarxik kümelenme ma'lumotlarni qanday qilib birgalikda ko'rib chiqishni va ma'lumotlar guruhini qanday birgalikda baholashini aniqlash maqsadida amalga oshirildi. Imputaged median values ​​missing ma'lumotlar% 15% dan oshmagan DFFB ma'lumotlar yo'q. Ierarxik kümeleme tahlil qilish, to'liq qabul qilingan yoki to'la-to'kis taqqoslash uchun to'liq o'chirishni talab qiladi. Ierarxik klasterlash Ward metodini qo'llash orqali amalga oshirildi va natijada olingan klasterlar asosiy komponent tahlilining birinchi asosiy komponenti (JMP®, Version 8, SAS Institute Inc., Cary, NC) tomonidan buyurtma qilindi. Suv va etanol guruhlari uchun har bir miya mintaqasi uchun DFS ma'lumotlar z-skorga aylandi va klasterlar sonini aniqlash uchun asosiy komponentlar tahlil qilindi. Keyinchalik ma'lumotlar miya hududlari va shaxslar tomonidan nazorat qilinadigan ierarxik kümeleme tahlillari yordamida kümelenmiştir.

Qiziqarli manfaatlar

Mualliflar, ularning raqobatbardosh manfaatlarga ega emasligini e'lon qiladilar.

Mualliflar hissasi

Tadqiqotning ARO, YAB, RAH, TAJ loyihalari ishlab chiqilgan. ARO ma'lumotlar sotib oldi. ARO, IP, RDM ma'lumotlarni tahlil qildi. ARO, RDM, IP, TAJ, YAB va RAH qo'lyozma loyihasini ishlab chiqishda va qayta ko'rib chiqishda ishtirok etdilar. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmalarni o'qidilar va tasdiqladilar.

Rahmatlar

Drsga rahmat aytamiz. Jody Mayfield va Colleen McClung hamda texnik yordam uchun Marni Martines, Jennifer Stokes, Mishel Foshat, Jose Cienfuegos, Jamie Seymour va Darshan Pandya yordam berish uchun. Tadqiqot Alkogolizm konsortsiumi Grant AA13520 va "AA06399-S" va "AA16424" spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish va spirtli ichimliklarni iste'mol qilish bo'yicha milliy institutining "Integratsion neuroscience" tashabbusi bilan qo'llab-quvvatlandi.

Manbalar

  • Garcia-Andrade C, Fon sh.b., Ehlers CL. Mishel hindulari ichidagi spirtli ichimliklarga qarshi mitti va javob. Am J Psixiatriya. 1997;154: 983-988. [PubMed]
  • Schuckit MA, Smit Tl, Kalmijn J. Alkogollarga spirtli ichimliklarni ishlatish buzilishining xavf omili sifatida javob beradigan kichik guruhlar bo'yicha topilgan natijalar: kollejda ayollar va lotinlar populyatsiyasi. Spirtli ichimliklar klinikasi 2004;10: 1499-1508. [PubMed]
  • Belknap JK, Crabbe JK, yosh ar. 15 ning sichqonchaning shtammlari ichidagi etanolni ixtiyoriy iste'mol qilish. Psixofarmakologiya. 1993;112: 503-510. doi: 10.1007 / BF02244901. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Blednov YA, Metten P, Finn DA, Rhodes JS, Bergeson SE, Xarris RA, Crabbe JK. Gibrid C57BL / 6J x FVB / NJ sichqonlari C57BL / 6J sichqonlariga qaraganda ko'proq spirtli ichimliklarni ichadilar. Spirtli ichimliklar klinikasi 2005;29:1949–1958. doi: 10.1097/01.alc.0000187605.91468.17. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Blednov YA, Ozburn AR, Walker D, Ahmad S, Belknap JK. va boshq. Yuqori spirtli ichimliklarni iste'mol qilishning genetik modeli sifatida gibrid sichqon. Behov Genet. 2010;40:93–110. doi: 10.1007/s10519-009-9298-4. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • O'zburn AR, Xarris RA, Blednov Ya. C57BL / 6JxFVB / NJ va C57BL / 6JxNZB / B1NJ F1 gibrid sichqonlari orasidagi yurish-turish farqlari: etanolni iste'mol qilishni nazorat qilish bilan bog'liq. Behov Genet. 2010;40:551–563. doi: 10.1007/s10519-010-9357-x. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Melendez RI, Middaugh LD, Kalivas PW. C57BL / 6Jda spirtli ichimliklarni mahrum qilish va kuchaytiradigan ta'sirini ishlab chiqish. Spirtli ichimliklar klinikasi 2006;30:2017–2025. doi: 10.1111/j.1530-0277.2006.00248.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Porrino LJ, Whitlow CT, Samson HH. Sichqonchalarda mahalliy miya glyukoza ishlatish stavkalari bo'yicha etanol va etanol / sukrozning o'z-o'zini boshqarishining ta'siri. Brain Res. 1998;791(1-2): 18-26. [PubMed]
  • Uilyams-Xemby L, Porrino LJ. Etarlicha kam va o'rta dozalarda kaltsiylarda serebral metabolik o'zgarishlarning turli shakllari paydo bo'ladi. Spirtli ichimliklar klinikasi 1994;18(4):982–988. doi: 10.1111/j.1530-0277.1994.tb00070.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal V, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. DeltaFosBning turli xil nayranglari miyadagi suiiste'mollik bilan bog'liq. Sinaps. 2008;62(5):358–369. doi: 10.1002/syn.20500. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: miyada uzoq muddatli moslashish uchun molekulyar kalit. Brain Res Mol Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Perrotti LI, Bolaños CA, Choi KH, Russo SJ, Edvards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB psixostimulyatorli davolanishdan keyin ventral tegmental sohasidagi posterior quyruqdagi GABAergik hujayra populyatsiyasida to'planadi. Eur J Neurosci. 2005;21:2817–2824. doi: 10.1111/j.1460-9568.2005.04110.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Ryabinin AE, Vang YM. Spirtli ichimliklarni qayta ishlatish boshqacha tarzda DBA / 2J sichqonlarida c-Fos va FosB protein immunoreaktivligiga ta'sir qiladi. Spirtli ichimliklar klinikasi 1998;22:1646–1654. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03962.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Ryabinin AE, Bachtell RK, Freeman P, Risinger FO. Spirtli ichimliklarni o'z-o'zini idora qilishda sichqonchaning miyasida ITF ifodasi. Brain Res. 2001;890:192–195. doi: 10.1016/S0006-8993(00)03251-0. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Bachtell RK, Vang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE. Alkogol ichimligi miya mintaqasini ishlab chiqaradi - indüklenebilen transkripsiyon faktörlerinin ekspresyonunda selektif o'zgarishlar. Brain Res. 1999;847(2):157–165. doi: 10.1016/S0006-8993(99)02019-3. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Kalivas PW. Qaysi dori bilan bog'liq nöroplastik o'zgarishlar muhimligini qanday aniqlaymiz? Nat Neurosci. 2005;8:1440–1441. doi: 10.1038/nn1105-1440. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Crews FT, Nixon K. Alkogolizmda neyrokenereyatsiya va regeneratsiya mexanizmlari. Spirtli ichimliklar. 2009;44: 115-127. doi: 10.1093 / alcalc / agn079. [O'zaro faoliyat]
  • Xisti RT, Wolstenholme J, Shelton KL, Miles MF. C57BL / 6 sichqonlarining pastki qismlarida o'rganish-deprivatsiya ta'sirining tavsifi. Spirtli ichimliklar. 2006;40: 119-126. doi: 10.1016 / j.alcohol.2006.12.003. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Sichqoncha miyasida Urokortin 1 taqsimoti chidamli. Neuroscience. 2005;132: 729-740. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2004.12.047. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Ryabinin AE. C57BL / 6J sichqonchasidagi Edinger-Westphal yadrosi zarralari etanol bilan bog'liq hipotermiya va o'rganish iste'molini buzadi. Eur J Neurosci. 2004;20:1613–1623. doi: 10.1111/j.1460-9568.2004.03594.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Ryabinin AE, Yoneyama N, Tanchuk MA, Mark GP, Finn DA. Sichqoncha lateral septumga Urocortin 1 mikroinjeksiyonu spirtli ichimliklarni iste'mol qilishni va uni ifoda etishni tartibga soladi. Neuroscience. 2008;151: 780-790. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2007.11.014. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Turek VF, Tsivkovskaia NO, Hyytia R, Harding S, Lek AD, Ryabinin AE. Spirtli ichimliklardagi farqlar uchun tanlangan juft juftli juftlardagi Urocortin 1 iborasi. Psixofarmakologiya. 2005;181:511–517. doi: 10.1007/s00213-005-0011-x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Ryabinin AE, Weitemier AZ. Uokortin 1 neyroximdi: etanol-sezgirligi va spirtli ichimliklarni iste'mol qilish ehtimoli. Brain Res Rev. 2006;52: 368-380. doi: 10.1016 / j.brainresrev.2006.04.007. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Samson HH, Tolliver GA, Haraguchi M, Hodge CW. Spirtli ichimliklarni o'z-o'zini boshqarish: meolimbik dopaminning ahamiyati. Ann NY Acad Sci. 1992;654:242–253. doi: 10.1111/j.1749-6632.1992.tb25971.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • McBride WJ, Li TK. Hayvonlarning alkogolizm modellari: kemiruvchilarda yuqori spirtli ichimliklar harakati nevrologiyasi. Crit Rev Neurobiol. 1998;12:339–369. doi: 10.1615/CritRevNeurobiol.v12.i4.40. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Koob GF, Roberts AJ, Schulteis G, Parsons LH, Heyser CJ, Hyytiä P, Merlo-Pich E, Weiss F. Neurocircuitry, etanol mukofot va qo'shadi. Spirtli ichimliklar klinikasi 1998;22:3–9. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03611.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Rodd ZA, Melendez RI, Bell RL, Kuch KA, Zhang Y, Murphy JM, McBride WJ. Erkak Wistar kalamushlarining ventral tegmental sohasidagi etanolning ichki o'z-o'zini boshqarish: dopamin neyronlarning ishtirok etishining dalili. J Neurosci. 2004;24:1050–1057. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1319-03.2004. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Gessa GL, Muntoni F, Kollu M, Vargiu L, Mereu G. Past dozada etanol ventral tegmental sohada dopaminerjik neyronlarni faollashtiradi. Brain Res. 1985;348:201–203. doi: 10.1016/0006-8993(85)90381-6. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Brodie MS, Shefner SA, Dunwiddie TV. Etanol in vivorida ventral tegmental hududning dopamin neuronlarining otishni o'rganish tezligini oshiradi. Brain Res. 1990;508:65–69. doi: 10.1016/0006-8993(90)91118-Z. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Heilig M, Koob GF. Spirtli ichimliklarga qaramlikda kortikotropini chiqaradigan omil uchun muhim rol. Trends Neurosci. 2007;30(8):399–406. doi: 10.1016/j.tins.2007.06.006. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Dyr W, Kostovskiy V. Amigdala 5-HT3 retseptorlari antagonistlarining kalamushlarda spirtli ichimliklarni ichishga qarshi ta'siriga aloqador ekanligi haqidagi dalillar. Spirtli ichimliklar. 1995;12:387–391. doi: 10.1016/0741-8329(95)00023-K. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Gilpin NW, Richardson HN, Koob GF. CRF1-retseptorlari va opioid-retseptorlari antagonistlarining spirtli ichimliklarni afzal ko'rgan (R) kalamushlari bilan spirtli ichimliklarni iste'mol qilishdagi bog'liqlik darajasiga ta'siri. Spirtli ichimliklar klinikasi 2008;32:1535–1542. doi: 10.1111/j.1530-0277.2008.00745.x. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Hyytiä P, Koob GF. GABAA retseptorlari antagonizmi uzaygan amigdalada kalamushlarda etanolni o'z-o'zini boshqarishini kamaytiradi. Eur J Pharmacol. 1995;283:151–159. doi: 10.1016/0014-2999(95)00314-B. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Roberto M, Madamba SG, Mur SD, Tallent MK, Siggins GR. Etanol sichqonchani markaziy amigdala neyronlarning oldingi va postsinaptik qismlarida GABAerjik uzatishni oshiradi. Proc Natl Acad Sci. 2003;100: 2053-2058. doi: 10.1073 / pnas.0437926100. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Roberts AJ, Cole M, Koob GF. Intra-amigdala muscimol sutga qaram bo'lgan etanolning o'z-o'zini boshqarishini kamaytiradi. Spirtli ichimliklar klinikasi 1996;20:1289–1298. doi: 10.1111/j.1530-0277.1996.tb01125.x. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Möller C, Wiklund L, Sommer V, Thorsell A, Heilig M. O'rtacha, ammo bazolateral amigdala lezyonlardan so'ng, kalamushlarda eksperimental anksiyete va ko'ngilli o'rganish iste'moli kamaydi. Brain Res. 1997;760:94–101. doi: 10.1016/S0006-8993(97)00308-9. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Vee S, Koob GF. Dynorphin-kappa opioid tizimining suiiste'mol dori-darmonlarining kuchaytiruvchi ta'sirida roli. Psixofarmakologiya (Berl) 2010;210:121–135. doi: 10.1007/s00213-010-1825-8. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Walker BM, Valdez GR, McLaughlin JP, Bakalkin G. Spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish va unga qaramlik bilan davolash uchun dynorphin / kappa opioid retseptorlari tizimlari. Spirtli ichimliklar. 2012;46: 359-370. doi: 10.1016 / j.alcohol.2011.10.006. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Sperling RE, Gomes SM, Sypek EI, Carey AN, McLaughlin JP. Etanol bilan ta'minlangan joy afzalligi va o'z-o'zini boshqarishning kuchlanishini kuchaytiruvchi endogen keppa-opioid vositachiligi. Psixofarmakologiya (Berl) 2010;210:199–209. doi: 10.1007/s00213-010-1844-5. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • McBride WJ. Amigdala markaziy yadrosi va spirtli ichimliklar va alkogol ichimliklar xatti-harakatlarining kemiruvchilarda ta'siri. Farmakol Biochem Behav. 2002;71:509–515. doi: 10.1016/S0091-3057(01)00680-3. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Dole VP, Gentry RT. Sichqonlarda alkogolizmning analogiyasiga: Modelda o'lchov omillari. Proc Natl Acad Sci. 1984;81: 3543-3546. doi: 10.1073 / pnas.81.11.3543. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Dole VP, Gentry RT. Sichqonlarga ichkilikka o'xshashlikning o'xshashligi: Farmakologik asoslangan ichimlikni tanqid qilish mezonlari. Proc Natl Acad Sci. 1985;82: 3469-3471. doi: 10.1073 / pnas.82.10.3469. [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Nestler EJ. Narkomaniyaning molekulyar neyrobiologiyasi. Am J Addict. 2001;10: 201-217. doi: 10.1080 / 105504901750532094. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: uzoq muddatli neyral va xulq-atvorli plastisitning molekulyar vositachisi. Brain Res. 1999;835:10–17. doi: 10.1016/S0006-8993(98)01191-3. [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Franklin KJ, Paxinos G Stereotaksik koordinatlarda sichqonchaning miyasi. 2. San-Diego, CA: Akademik; 2001.