DFOSB eksperksepsiyasining yadrodagi accumbenslarda (2011) opioid va kannabinoid retseptorlari orqali signalizatsiya ta'siri,

Neyrofarmakologiya. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley, ShU.

manba

Farmakologiya va Toksikologiya kafedrasi va Narkotiklarni va spirtli ichimliklarni o'rganish instituti, Virjiniya Hamdo'stlik Universiteti Tibbiyot maktabi, Richmond, VA 23298, AQSh.

mavhum

DFOSB ning barqaror transkriptsion faktori DFOSB ning ko'plab surunkali ta'siriga duchor bo'ladigan nukleus akumbenslarda (NAc) paydo bo'ladi va striatumda DFB ning transgenik ifodasi morfin va kozainning foydali xususiyatlarini oshiradie. Biroq, bu kuzatishlar uchun mexanik asos to'liq emas. Biz DFOSB ning induksion ifodasi bilan bitransgen sichqon modelini ishlatdik dopamin DF (1) retseptorlari / dinorfin o'z ichiga olgan striatal neyronlar NAcdagi opioid va kannabinoid retseptorlari signalizatsiyaidagi DFOSB ifodasini aniqlaydi. Natijalar DFO ekspluatatsiyasini ifodalovchi sichqonlarning NAc-da opioid vositachiligida G-proteinin faolligi va adenilil siklaz inhibisyonunun kuchayganligini ko'rsatdi. Xuddi shunday, kappen opioidning adenilil siklaz inhibisyonu ham DFF eksprese qilgan sichqonchani. Aksincha, kannabinoid retseptorlari orqali yuborilgan signalizatsiya FF va Sichqoncha sichqonlarini ortiqcha bosim bilan farq qilmadi. These topilmalar opioid va kannabinoid retseptorlari signalizatsiyasi DFOSB ifodasi bilan differentsial ravishda modulyatsiya qilinganligini va NAFdagi rivojlangan mu va kappa opioid retseptorlari signalizatsiyasi orqali DFosB ifodasini ta'sirini keltirib chiqarishi mumkinligini ko'rsatadi.

Kalit so'zlar: G-oqsili, adenilil siklaz, striatum
O'tish:

1. kirish

Opioid retseptorlari va kannabinoidlar CB1 retseptorlari (CB1R) morfin, geroin va retsept bo'yicha opioidlar va marixuanani (A) o'z ichiga olgan ikkita keng tarqalgan dori sinfi uchun neyrobiologik maqsadlar.9-tetrahidrokannabinol (THC)). Opioid va kannabinoidlarning o'tkir ta'siri G-protein bilan birlashtirilgan retseptorlari tomonidan vositachilik qiladi, ular asosan Gi / u proteinlar va adenilil siklazı inhibisyonu kabi pastga qarab efektör javoblarni ishlab chiqaradi (Childers, 1991, Childers va boshq., 1992, Howlett va boshq., 2002). Dvigatel, xotira va psixologik effektlar9-KM CB tomonidan ishlab chiqariladi1R (Huestis va boshq., 2001, Zimmer va boshq., 1999), miyada keng tarqalgan bo'lib, bazal ganglion, hipokampus va serebellum (Herkenham va boshq., 1991). Klinikaga taalluqli va ekspluatatsiyalangan opioid preparatlarining analjezik va mukofotlash ta'siri asosan muopioid retseptorlari (MOR) (Matthes va boshq., 1996), limbik tizimda va brainstemda boyitilganMansour va boshq., 1994). Ventral tegmental hududdan (VTA) yadroli akumbenslarga (NAc) dopaminerjik proektsiyadan iborat mezolimbik tizimi opioidlar va kannabinoidlarning foydali samaradorligini oshirishda muhim rol o'ynaydi (Bozarth va hikmatli, 1984, Vaccarino va boshq., 1985, Zangen va boshq., 2006), shuningdek boshqa suiiste'mollik dori-Koob va Volkow, 2010). Bundan tashqari, endogen opioid va kannabinoid tizimlari bir nechta psixoaktiv dorilarning samaradorligi bilan shug'ullanadi (Maldonado va boshq., 2006, Trigo va boshq., 2010). Shunday qilib, opioid va CB bilan bog'liq mexanizmlarni tushuntirish muhimdir1R-signalizatsiyasi NAc da tartibga solinadi.

Narkotik moddalarni suiiste'mol qilish sohasidagi asosiy masala psixoaktiv preparatlarning o'tkir va uzoq muddatli ta'siriga o'tish vositalarini aniqlashga qaratilgan. AP-1 transkriptsion faktori DFB, ayniqsa, qiziqarli, chunki u barqaror kesilgan biriktiruvchi variant mahsulotidir. fosb giyohvandlik yoki tabiiy foyda keltiradigan dorilargaMcClung va boshq., 2004, Nestler, 2008, Nestler va boshq., 1999). DFOSB ning morfinga takroran ta'sir qilishidan so'ng, miyada mushak ichida paydo bo'lganini aniqladik9-THC, kokain yoki etanol, har bir dori DFF ekspresyonunun yagona mintaqaviy namunasini ishlab chiqaradiPerrotti va boshq., 2008). Dori vositalaridagi izchil topilmalar DFOSB ning striatumda yuqori darajada paydo bo'lishiga olib keldi, bu erda barcha to'rt dori NAc yadrosida DFOSB ni va D9- NAC qobig'ida va kaudat-pitamenda ekspiratsiyani sezilarli darajada inkor qilgan.

Farmakologik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, dopamin D.1 retseptorlari (D1R) antagonisti SCH 23390 intervalgacha kokain yoki morfin ilovasidan so'ng NAc va kaudat-pitaminda DFosB indüksiyasini blokladi va D1R-ifodalangan neyronlar (Muller va Unterwald, 2005, Nye va boshq., 1995). DFOSB induksiyasini dori vositalari bilan bog'liq bo'lgan ta'sirga ta'siri NSc va dorsal striatumning maxsus neyronal populyatsiyalarida DFOSBni ifodalovchi bittsenjen sichqonlari yordamida tekshirildi (Chen va boshqalar, 1998). Dynorphin / D ning DFOSB-ni ifodalovchi sichqon1NAc va dorsal striatum (xNUMXA liniyasi) da R musbat neyronlari suiiste'mollarga duch kelgan reaktsiyalarni namoyon etadi, ayniqsa giyoh yoki morfinning foydali ta'siriga nisbatan sezuvchanlikColby va boshq., 2003, Kelz va boshq., 1999, Zachariou va boshq., 2006). Ushbu o'zgarishlar MOR yoki turli G-protein subunitsiyalari darajasidagi o'zgarishlarsiz sodir bo'ldi. Shu bilan birga, DFF eksprese qilgan sichqonchani NAc'de dinorfin mRNA darajalarigaZachariou va boshq., 2006), DFOSBning bitta maqsadi - endogen opioid peptitni kodlovchi gen. DFOSB induktsiyasi, NAc'de retseptorlari signalizatsiyasini tartibga solish orqali xatti-harakatlarning o'zgarishiga olib kelishi mumkin, ammo bu imkoniyat tekshirilmagan. Shuning uchun, hozirgi izlanishlar dynorphin / D ning DFosB ning haddan oshiqligini aniqlash uchun bitransgen sichqoncha modelidan foydalangan1R striatal neyronlarni o'z ichiga olgan R-MOR orqali mediatsiya qilingan G-protein samaradorligini va NAcdagi MOR- va KOR-vositachiligida adenilil siklaz inhibishini o'zgartiradi. DFF ning ta'siri1R-vositachiligida G-protein faoliyati ham baholandi, chunki D9-THC administratsiyasi NAc-da DFOSB ni yaratadi (Perrotti va boshq., 2008) va endokannabinoid tizimi, miya mukofotlari davrlariniGardner, 2005, Maldonado va boshq., 2006), ammo endosanabinoid tizimida DFB ning ta'siri tekshirilmagan.

O'tish:

2. Materiallar va uslublar

2.1. Reaktivlar

[35S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [a-32R] ATP (800 Ci / mmol) va [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol), PerkinElmer'dan (Shelton, CT) sotib olingan. ATP, GTP, GSYİH, cAMP, bovin sarum albumin, kreatin fosfokinaz, papaverin, imidazol va WIN-55212-2, Sigma Aldrich (Sent-Luis, MO) dan sotib olingan. GTPyS Roche Diagnostic Corporation (Chikago, IL) dan sotib olingan. DAMGO Narkotik moddalarni suiiste'mol qilish milliy institutining (Rockville, MD) Narkotiklarga qarshi kurash dasturi tomonidan taqdim etildi. Econo-1 sintilasyon suyuqligi Fisher Scientific (Norcross, GA) dan olingan. Ekolit sintilasyon suyuqligi ICN dan olingan (Kostaning Meshax, KA). Boshqa barcha kimyoviy moddalar Sigma Aldrich yoki Fisher Scientific'dan olingan.

2.2. Sichqoncha

NSE-tTA (LINE A) × TetOp-DFOSB (chiziqli 11) dan olingan erkak bitransgen sichqonlari Kelz va boshq. (Kelz va boshq., 1999). Transgen ekspresyonunu bostirish uchun, Bitransjenik sichqonchani doksisiklin (ichimlik suvi ichidagi 100 ig / kg) ustiga tushirildi va ko'tarildi. 8 haftasidagi doksitsiklin transgen ekspresatsiyasini ta'minlash uchun sichqonlarning yarmi uchun suvdan chiqarildi, qolgan sichqon esa transgenni bostirish uchun doksisiklinada saqlanib turdi. Brainlar 8 xafta keyin yig'ildi, DFBning transkripsiyadan ta'sirlari maksimal (McClung va Nestler, 2003). C-Junning dominant salbiy antagonisti D-Jun dagi eksprenitsiyada ikkinchi transgenik sichqonchani chizig'i ishlatilgan.1R / dynorphin va D.2Striatum, hipokampus va parietal korteksin R / enkephalin xujayralari (Peakman va boshq., 2003). C-Jun va shunga bog'liq bo'lgan Jun oilaviy oqsillari Fos oilaviy proteynlar bilan dimerlashadi va transkripsiyani tartibga solish uchun maqsadli genlar AP-1 saytiga bog'laydi. Biroq, c-Jun (D-Jun) ning N-terminusining kesilishi murakkab transkripsiyada faol bo'lmagan va faol AP-1 komplekslarining DNK-ga ulanishiga to'sqinlik qila oladi. Ney-tTA (A liniyasi) × TetOp-FLAG-D-Jun (E liniyasi) dan olingan erkak bitransgen sichqonlari Peakman va boshq. (Peakman va boshq., 2003). Transgen ekspresyonunu bostirish uchun, Bitransjenik sichqonchani doksisiklin (ichimlik suvi ichidagi 100 ig / kg) ustiga tushirildi va ko'tarildi. Xamirturushlar 3 xaftalikda genotiplanadi va guruhlarga bo'linadi, yarim doksisiklin tarkibidagi suvda va muntazam ichimlik suvi yarmida FLAG-D-Jun ifodasini keltirib chiqaradi. Brainlar 6 hafta o'tgach, FLAG-Dc-Junning maksimal darajada o'lchanadigan vaqti (Peakman va boshq., 2003). Hayvonlarning barcha protseduralari laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish uchun Milliy Sog'liqni saqlash qo'llanma institutiga muvofiq o'tkazildi.

2.3. Membran tayyorlash

Brayinalar tahlil kunigacha -80 ° C da saqlangan. Tajribadan oldin, har bir miya eritib yuborildi va NAc muz ustida diseke qilindi. Har bir namunadir 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl ichida homogenlashdi2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membrana tampon) va 20 ° C da shisha homogenizatordan 4 zarb bilan. Homojenat, 48,000 × darajasida santrifüjlendi g 4-daqiqada 10-daqiqada, membrana tamponida qayta ishlangan, yana 48,000-da santrifüj qilingan g 4 ° C da 10 min uchun va 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (tahlil bufferi). Protein darajalari Bradford usulida (Bradford, 1976) boviniy sarum albomini (BSA) standart sifatida ishlatish.

2.4. Agonist-ogohlantirilgan [35S] GTPyS ulanadi

Membranalar 10-daqiqada 30-daqiqada sinov tamponida adenosin deaminaz (3 mU / ml) bilan inkubatsiya qilindi. Keyin 5% (w / v) BSA, 10 nM [2-30 mg protein] o'z ichiga olgan tahlil tamponida 0.1 ° C da 0.1 soat uchun inkübe qilindi [35S] GTPyS, 30mM GSYoH va adenozin deaminaz (3 mU / ml) to'g'ri DAMGO yoki WIN55,212-2 kontsentratsiyasiga ega. Nonspesifik bog'lanish 20 μM GTPyS bilan o'lchanadi. Kuluçka jarayoni, GF / B shisha elyafı Filteringiz orqali filtrasyon yo'li bilan to'xtatildi, keyin 3 xNUMX ml buzlu 3 mM Tris-HCl, pH 50 bilan yuvindi. Econo-7.4 sintilasyon suyuqligidagi filtrlarning kechqurun ekstraktsiyasidan keyin suyuq sintillasyon spektrofotometri bilan bog'liq radioaktivlik aniqlandi.

2.5. Adenilli siklaz tekshiruvi

Membranalar (5-25-mg protein) yuqorida ta'rif etilganidek, adenozin deaminaz bilan preinkinatsiyalangan, keyin 15 ° C da 30'M forskolin mavjudligi yoki yo'qligida, DAMGO, U1H yoki WIN50,488-55,212 yoki TAMAM bo'lmasdan, tahlil tamponida 2 μM ATP, [a-321.5% (w / v) BSA, 0.2 mikrometal AMP, 0.1 mM GTP, 50 mm papaverin, 50 mM fosfokreatin, 0.2 birligi / ml kreatin fosfokinaz va adenozin deaminaz (5 mU), 20 mC DTT / ml) yakuniy hajmida 3 mi. Bunday sharoitlarda umumiy [a-32R] cAMP yig'indisi odatda qo'shilgan jami miqdorning 1% dan kamroq [a-32R] ATP har bir namunada. Reaksiya 3 daqiqa davomida qaynab, va [32R] Ikkita kolon (Dowex va alumina) usuli yordamida Salomonli AMP usuliSalomon, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) ichki standart sifatida kolonna kromatografisinden oldin har bir kolba qo'shilgan. Radioaktivlik suyuq sintillashma spektrofotometri bilan aniqlandi (45% uchun samaradorlik 3H) 4.5 ml eluatdan so'ng 14.5 ml ekolit sintilasyon suyuqligi ichida eritildi.

2.6. Ma'lumotlarni tahlil qilish

Aks belgilanmagan bo'lsa, ma'lumotlar har biri uch marta bajarilgan 4-8 alohida tajribalar o'rtacha qiymatlari deb nomlanadi. Net-ogohlantirilgan [35S] GTP'S ulanishi agonist-ogohlantiruvchi ulanishdan kam bazal birikma deb hisoblanadi. Net forskolin-stimulyatsiyalangan adenillin siklaza faolligi forsolin bilan ogohlantiruvchi faoliyat - bazal faollik (pmol / mg / min) deb ta'riflanadi. Forskolin bilan ogohlantirilgan adenilil siklaza faolligining foizini inhibe qilish (agonist bo'lmasa, agonist / net forskolin-stimulyatsiya qilingan faoliyat mavjud bo'lganda agonist-net forskolin-stimulyatsiya qilingan faoliyat yo'qligi uchun aniq forsolin-stimulyatorli faoliyat) xNUMX deb aniqlanadi. Barcha egri-moslashtirish va statistik tahlillar Prizma 100c (GraphPad Software, Inc., San-Diego, KA) yordamida amalga oshirildi. Yig'ish-ta'sirli egri chiziqli chiziqli regressiya bilan tahlil qilinib, ECni olish uchun tahlil qilindi50 va Emax qiymatlar. Konsentratsiyali ta'sir ma'lumotlarining statistik ahamiyati asosiy omillar sifatida agonist doza va gen indüksiyonu (ochiq yoki yopiq) yordamida ikki tomonlama varyans tahlil qilish (ANOVA) bilan aniqlandi. Eriga mos qiymatlarni statistik ko'rsatkichlari (Emax yoki EC50) Uelchning tuzatishi yoki ma'lumotlarning kvadrat ildizi o'zgarishi yordamida tengsiz farqlarni (F-testi bilan aniqlangan) tuzatish uchun zarur bo'lgan er-xotin talabalarning t-testi juft bo'lmagan holda aniqlandi.50 qiymatlar.

O'tish:

3. Natijalar

3.1. Opoid va kanabiboid retseptorlari bilan bog'liq G-proteinin aktivatsiyasiga DFosB ifodasi ta'siri

MOR- yoki CB-ni aniqlash uchun1R-vositachiligida G-proteini faollashuvi NAc ning DFosB ning indüktiv transgenli ifodasi bilan agonist-stimulyatsiya qilingan [35S] GTPyS ulanishi DFosB transgenini (DFosB o'chirilgan) ekspresifikatsiya qiladigan yoki ekspresifikatsiyalanmagan (bitmas) sichqonlarning bu hududidan tayyorlangan ajratilgan membranalarda tekshirildi. MOR-selective enkephalin analog DAMGO MORni ishga tushirish uchun ishlatilgan va kannabinoid aminoalkilindol WIN55,212-2 CBni faollashtirish uchun ishlatilgan1R. Ushbu ligandlar, bundan oldin, Binafsharang va CB'de to'liq agonist sifatida ko'rsatildi1R, navbati bilan (Breivogel va boshq., 1998, Selley va boshq., 1997). KOR vositasida G-proteinin faoliyatini tekshirish mumkin emas edi, chunki signal kemiruvchi miyada juda kamChilders va boshq., 1998). Natijada NAF-da DFO va DFOSB-dan Sichqoncha ustida DFS va GX-proteinlar faolligini kontsentratsiyaga qaramli stimulyatsiya ko'rsatdiShakl 1). DAMGO tomonidan ogohlantirilgan faoliyat uchun (Shakl 1A), konsentratsiyali ta'sir ma'lumotlarining ikki tomonlama ANOVA-si DFosB holatining (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) va DAMGO kontsentratsiyasining (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) muhim asosiy ta'sirlarini aniqladi. muhim ta'sir o'tkazish (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Konsentratsiya-ta'sir egri chiziqli bo'lmagan regressiya tahlili sezilarli darajada katta DAMGO E ni aniqladimax Sichqoncha ustida DFF ning qiymati (E.max = 73 ± 5.2% stimulyatsiya)max = 56 ± 4.1% stimulyatsiya; p <0.05, sichqonlardagi DFOSB dan Student t-testi bilan farq qiladi). DAMGO EC50 qiymatlari DFOSB va DFOSB sichqonlari o'rtasida farqlanmagan (302 ± 72 nM 212 ± 56 nMga teng, p = 0.346).

Shakl 1 

DFOSB ifodasini agonist bilan ogohlantiruvchi ta'siriga [35S] GTTsS ulanadi. DFOSB ekspression (DFOSB ochiq) yoki nazorat qilish (DFOSB off) sichqonlaridan membranalar turli konsentratsiyalardan foydalangan holda metodlarda ta'riflanganidek tahlil qilindi ...

MOR agonisti DAMGO bilan olingan natijalardan farqli o'laroq, G-protein faollashuvida DFOSB holatiga bog'liq bo'lmagan farqlar kanabinoid agonisti WIN55,212-2 (Shakl 1B). WIN55,212-2 kontsentratsiyali effektli ma'lumotlarning ikki tomonlama ANOVA-si WIN55,212-2 kontsentratsiyasining asosiy ta'sirini aniqladi (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), lekin DFosB holati emas (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1) va o'zaro ta'sir bo'lmagan (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Xuddi shunday, DFOSB holatining WIN55,212-2 E ga ta'siri bo'lmaganmax qiymatlari (103 ± 6% 108 ± 8% mos ravishda Sichqoncha orqali DFOSBda stimulyatsiya, p = 0.813, Student t-testi) yoki EC50 qiymatlari (103 ± 20 nM XFXB ning 170 ± 23 nMga mos ravishda sichqonchani yoqish va o'chirish uchun, p = 0.123).

Chiziqlar shakli va bizning avvalgi tadqiqotlarimiz miyada mushaklarning WIN55,212-2 konsentratsiyali efir chizig'ini ko'rsatganligiBreivogel va boshq., 1999, Breivogel va boshq., 1998), shuningdek, WIN55,212-2 egri ikki tomonlama model yordamida tahlil qilindi. O'rtacha ma'lumotlarning tahlili ikki tomonlama modeldan (R.2 = 0.933 va 0.914, kvadratchalar jami = 3644 va 5463 ning DFosB-da sichqonchani yoqish va o'chirish navbati) bir martalik modelga nisbatan (R2 = 0.891 va 0.879, kvadratchalar yig'indisi = 6561 va 6628 ning DFosB da navbati bilan sichqonchani yoqish va o'chirish). Shu bilan birga, DFOSB bilan sichqonchani sichqoncha bilan E o'rtasida hech qanday farq yo'q edimax yoki EC50 yuqori yoki past potensial saytlarning qiymatlari (Qo'shimcha Jadval 1), biroq pastki EC ga qarshi kurash bor edi50 DFF bilan birga sichqonlardagi yuqori potensial maydonda (EC50baland = 28.0 ± 10.6 nM) DFF bilan yopilgan (EC50baland = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Bundan tashqari, DFF ning holatini bazal [35NA] membranalarida (253 ± 14ga nisbatan DNFX ning 226 ± 14 fmol / mg, sichqonchani o'chirish va o'chirish uchun p = 0.188) GTP3S bilan bog'lanishini aniqlang. Ushbu ma'lumotlar Sichqoncha NAc da DFosB ning indüktiv transgenik ekspresyonunun CB orqali vositachilik qiladigan G-proteini aktivatsiyasini CBga sezilarli ta'sir ko'rsatmasdan oshirganligini ko'rsatadi1R-vositachiligi yoki bazal G-oqsil faoliyati.

3.2. DFOSB ning adenilil siklazning opioid va kanabinoid retseptorlari orqali vositachiligiga ta'siri

DOR va CB tomonidan quyi oqim effektivligini modulyatsiya qilishda DFB ning uyg'un transgenik ekspozitsiyasi ta'sirini baholash.1R, 1 mkM forskolin-stimulyatsiya qilingan adenilil siklaza faolligini inhibe qilish NAc membranalarida tekshirildi. MOR- va CB-dan tashqari1Adenilil siklaza faolligining R-vositali inhibatsiyasi, KOR samarasi ta'siri ham KOR-tanlangan to'liq agonist U50,488 (Zhu va boshqalar, 1997), chunki oldingi natijalar dynorphin mRNA'nın Bitransjenik modelda DFB'nin maqsadi bo'lganligini ko'rsatdi (Zachariou va boshq., 2006). Natijalar DAMGO, U50,488 va WIN55,212-2 har ikkala ikkala DFSB va DFOSB da sichqonlarda adenilil tsiklaza faolligining kontsentratsiyaga qaram bo'lgan inhibisyonuShakl 2). DAMGO konsentratsiyali ta'sir ma'lumotlarining ikki tomonlama ANOVA (Shakl 2A) DFosB holatining (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) va DAMGO kontsentratsiyasining (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) muhim asosiy ta'sirini aniqladi, ammo sezilarli ta'sir o'tkazmadi (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). DAMGO kontsentratsiyasi-egri chiziqli bo'lmagan regressiya tahlili DAMGO EC ning ancha pastligini aniqladi50 sichqonlardagi DFOSB (101 ± 11 nM) ga teng bo'lgan DFOSB sichqonlariga nisbatan (510 ± 182 nM, p <0.05 talabaning t-testi bilan). Biroq, DAMGO E-da sezilarli farq yo'q edimax qiymatlari (20.9 ± 1.26% 19.8 ± 1.27%, DFOSBda sichqonchani yopish va yopish, p = 0.534).

Shakl 2 

NAFdagi adenilil siklaza faolligini inhibe qilishda DFosB ifodasi ta'siri. DFOSB ekspression (DFOSB ochiq) yoki nazorat qilish (DFosB off) sichqonlaridan membranalar 1 μM borligida metodlarda ta'riflanganidek tahlil qilindi ...

KOR orqali vosita qilingan adenilil siklaz inhibisyonu, shuningdek, DFosB ning induksion transgenik ekspressioni funktsiyasi sifatida farqlanadi (Shakl 2B). U50,488 kontsentratsiyali effektli ma'lumotlarning ikki tomonlama ANOVA'si DFosB holatining (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) va U50,488 kontsentratsiyasining (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) muhim ta'sirini ko'rsatdi. , sezilarli ta'sir o'tkazishsiz (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Konsentratsiyali effektlarning chiziqli bo'lmagan regressiya tahlili katta U50,488 E ni aniqladimax sichqonlarda DFOSB qiymati (18.3 ± 1.14% inhibisyon), DFOSB o'chirilgan sichqonlarga nisbatan (12.5 ± 2.03% inhibisyon; p <0.05 talabaning t-testi bilan DFOSB dan farq qiladi), U50,488 EC da sezilarli farq yo'q.50 qiymatlari (310 ± 172 nM XFXB ning 225 ± 48 nMga mos ravishda sichqonchani yoqish va o'chirish uchun, p = 0.324).

MOR va KOR bilan kuzatilgan ta'sirlardan farqli o'laroq, kanabinoid agonisti WIN55212-2 (adenilil siklazning inhibisyoni bo'yicha indüktiv transgenli DFBB ekspresyonining sezilarli ta'siri yo'q ediShakl 2C). WIN55,212-2 kontsentratsiyali effektli ma'lumotlarning ikki tomonlama ANOVA dori konsentratsiyasining sezilarli ta'sirini ko'rsatdi (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), lekin DFosB holatida emas (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) na sezilarli o'zaro ta'sir mavjud edi (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Bundan tashqari, hech qanday agonist bo'lmagan taqdirda, DFOSB holatining bazal yoki forskolin bilan stimulyatsiya qilingan adenilil siklaza faolligiga ta'siri bo'lmagan. Bazal adenilil siklaza faolligi sichqonlardagi DFosB ichida 491 ± 35 pmol / mg / min ni tashkil etdi, DFosB o'chirilgan sichqonlarda 546 ± 44 (Studentning t-testi bilan p = 0.346). Xuddi shu tarzda, adenil siklaza faolligi 1 µM forskolin ishtirokida sichqonlardagi DFosB da 2244 ± 163 pmol / mg / min ni tashkil etdi va sichqonlarning ΔFosB tarkibidagi 2372 ± 138 pmol / mg / min (p = 0.555).

3.3. Adjinil siklazning opioid va kanabinoid retseptorlari vositasida inhibisyoniga Djjunning ta'siri

DFOSB ning indikativ transgenik ekspressioni MOR va KOR dan NAc ichidagi adenilil siklazga inhibitoryal signal transdüksiyasini kuchaytirganligi sababli, DFOSB vositachiligida transkripsiyaning dominant salbiy inhibitori opioid retseptorlari signalizatsiyasini qarama-qarshi tarzda modulyatsiyalashi mumkinligini aniqlash qiziqish uyg'otdi. Ushbu savolga javob berish uchun, DAMGO va U50,488 tomonidan forkolin bilan ogohlantiruvchi adenilil siklaza faolligini inhibe qilish DcJunni shartli ifodalovchi tugatilgan sichqonlardan NAc dan tayyorlangan membranalarda tekshirildi. Natijalar DjJun ifodasi, MOR yoki KOR tomonidan adenilil siklaz aktivitesinin inhibisyonu ustida muhim ta'sir ko'rsatmadi (Shakl 3). DAMGO kontsentratsiyasi-egri chiziqlarining ikki tomonlama ANOVA-si DAMGO kontsentratsiyasining asosiy ta'sirini ko'rsatdi (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), lekin ΔcJun holatida emas (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) va sezilarli o'zaro ta'sir bo'lmagan (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Xuddi shunday, E da sezilarli farq yo'q edimax yoki EC50 djJun bilan (Smax = 23.6 ± 2.6%; EC50 = 304 ± 43 nM) yoki DjJun o'chirilgan (E.max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Shunga o'xshash natijalar U50,488 bilan kuzatilgan, masalan, konsentratsiyali ta'sir egri chiziqlarining ikki tomonlama ANOVA kontsentratsiyasining sezilarli ta'sirini ko'rsatdi (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), lekin ΔcJun holati emas (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) va sezilarli o'zaro ta'sir bo'lmagan (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Xuddi shunday, E da sezilarli farqlar bo'lmaganmax yoki EC50 djJun bilan (Smax = 14.8 ± 2.9%; EC50 = 211 ± 81 nM) yoki yopiq (E.max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Shakl 3 

DcJun ifodasi NAc da adenilil siklaza faolligini inhibe qilish ta'siri. DjJun-ekspress (DjJun-on) yoki nazorat qilish (DjJun-off) sichqonlaridan membranlar DAMGO (A), U50,488H (B) yoki WIN55,212-2 ...

ΔcJun ekspressioni, shuningdek, kannabinoid agonist tomonidan NAc tarkibidagi adenilil siklaza inhibisyoniga sezilarli ta'sir ko'rsatmadi. WIN55,212-2 kontsentratsiyasi egri chiziqlarining ikki tomonlama ANOVAsi WIN55,212-2 kontsentratsiyasining asosiy ta'sirini ko'rsatdi (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), lekin genotip emas (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) va sezilarli o'zaro ta'sir bo'lmagan (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Xuddi shunday, WIN55,212-2 E da sezilarli farqlar mavjud emas edimax qiymatlari (13.0 ± 2.3% va XJNUMX ± 13.6% djJun-da sichqonlarga nisbatan mos ravishda, p = 0.9) yoki EC50 qiymatlari (208 ± 120 nM va 417 ± 130 nM ning DJJun-da sichqonlarga qarshi, navbati bilan, p = 0.270). Shunday qilib, DjJunni ifodalovchi sichqonlarda WIN55,212-2 ning kuchliligini pasaytirishga qaramay, transgen adenilil siklaza kannabinoid inhibitatsiyasini sezilarli darajada o'zgartirib yubormadi. Bundan tashqari, djJun holatining bazal yoki forkolin bilan ogohlantiruvchi adenilil tsiklaza faolligiga ta'siri yo'q edi. Bazal adenilil siklaza faolligi, navbati bilan, DjJun bilan sichqonlarda 1095 ± 71 pmol / mg / min va 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) edi. 1 μM forskolin bilan rag'batlantirilgan adenilil siklaza faolligi, navbati bilan, DjJun bilan sichqonlarda 4185 ± 293 pmol / mg / min (p = 4032) ga nisbatan 273 ± 0.706 pmol / mg / min edi.

3.4. Munozara

Tadqiqot natijalari shundan iboratki, MOR-mediatsiyalangan G-proteinin faollashishi va dynorphin / D ning DFosB ning indüklenebilen transgenik ekspresyonu bilan sichqonchani NAc ichida adenilil siklazı inhibisyonu saptanmıştır1R neyronlarni o'z ichiga oladi. KOR-vositachiligida adenilil siklaza faolligini inhibe qilish DFFQ sichqonlarini ifodalovchi NAc da kuchaytirildi, bu esa DF ning NAc ichidagi endogen opioid tizimini tartibga solib turishini ko'rsatdi. DAMGO Emax qiymati MOR-ogohlantiruvchi [35S] GTPyS ulanishi va uning EC kodlari50 Adenilil siklaz inhibisyonu uchun qiymat, nazorat farelerinin solishtirganda, DFOSB ustida haddan tashqari ifodalangan sichqonlarda. Ushbu topilmalar efektiv modulyatsiya uchun retseptor rezervatining imkoniyatini nazarda tutadi, ammo tahlil shartlari bo'yicha G-proteini faollashtirilmaydi. KOR agonisti tomonidan adenilil siklazning maksimal inhibatsiyasi DFF ekspresyonidan ta'sirlanganligi KOR orqali javob beradigan retseptorlarning past retseptorlari zaxirasini ko'rsatadi, bu sichqonchaning miyasida KOR ulanishining past darajalari bilan mos keladi (Unterwald va boshq., 1991). Aksincha, CB1R-mediatsiyaviy G-oqsilli faolligi va adenilil siklaz inhibisyonu DFF ekspresyonu ta'sir qilmagan, bu NAc neyronlarida DFOSga javoban opioid va kannabinoid tizimlarining farqlanishini ko'rsatmoqda.

DFOSB ning opioid retseptorlari bilan bog'liq signalizatsiya ta'siri bizning oldingi hisobotimiz bilan mos keladi, albatta, striatumda DFosB ifodasi morfinning o'tkir va surunkali ta'sirini (Zachariou va boshq., 2006). Ushbu tadqiqotning natijasi shundaki, dynorphin / D ning DFOSB ning transjenik ifodalangan sichqonlari1R striatal neyronlar tekshiruvdan ko'ra morfinga sezgir edi. Bundan tashqari, bu ta'sir NAc ichiga saytga maxsus in'ektsiya yo'li bilan DFosBning virusli vositachilik bilan ifodalanganligi bilan taqqoslandi. Ushbu kuzatishlar NAc ning rivojlangan Mor signallarini ko'rsatadigan joriy natijalar bilan mos keladi.

Ilgari gen kodlashni aniqladik DFORning maqsadi sifatida dynorphin va Dynorphinning kamaytirilishi DFFB bitransgen sichqonlarida morfinning takomillashtiruvchi foydali xususiyatlariga muvofiq bo'lishini taklif qildi (Zachariou va boshq., 2006). Hozirgi natijalar KCV orqali NAcdagi adenilil siklazning KOR orqali vositachiligini inhibe qilish DFF eksprese qilgan sichqonlarda kuchayganligini ko'rsatadi, bu esa kichraytirishi mumkin bo'lgan dynorphindan so'ng KOR sezuvchanligidagi kompensatsiyani oshirishni aks ettirishi mumkin. Ilgari ishlar KOR ning prodynorphin knockout sichqonlarining ma'lum miya hududlarida yangilanganligini ko'rsatdi, shu jumladan NAc (Clarke va boshq., 2003).

DFJBning DFosB dan farqli ravishda DJJunning indulgentsion transgenik ifodasi farqli o'laroq, DFosB ulanish hamkori cJunning dominant salbiy kesilgan mutanti MOR yoki KOR agonistlari tomonidan adenilil siklaza to'sqinlik qilmadi. Ushbu natijalar nisbatan kam bo'lgan DFosB ekspresyonunun bazal darajalari NAc'de ushbu signal uzatish darajasida opioid retseptorlari sinyalinin himoya qilishda muhim rol o'ynamaydi. Oldingi ishimizda morfinning konditsionerlashtiruvchi ta'sirini DjJun ifodasi kamayganligi (Zachariou va boshq., 2006), yoki DFOSB ning konditsionerlik jarayonida morfin indüksiyonu, dori qiziqishlariga javob berishni tartibga solish yoki opioid retseptorlari tomonidan proksimal signalizatsiyaga ta'sir qiladigan boshqa DF-ning transkripsiyona ta'sirlari opioid mukofotiga ta'sir qilishi mumkinligini ko'rsatadi. Har qanday holatda, ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, DFosB ifodasi striatal dynorfin / D ning bazal darajasidan yuqori bo'lsa1R-ifodalangan neyronlar MOR va KOR ning NAc ichida adenilil siklaz inhibitirilishiga kuchli ta'sir ko'rsatadi.

MOR- va KOR vositachiligida signalizatsiya qilishning DFF eksperkspresiyasi bilan kuchaytirilishi mexanizmlari aniq emas, ammo ilgari biz [3H] nalokson ulanadi, DFOSB ning NAc'sindeki sichqonchalarga nisbatan farq bo'lmaydi (Zachariou va boshq., 2006). Xuddi shu ishda Ga ni topdii1 va 2 protein darajalari DFOSB ifodasi orqali ushbu mintaqada ta'sirlanmagan. Ammo, avvalgi gen ekspression seriallarining tahlillari Ga ni ko'rsatdio mRNA, DFF ning NAc'sinde sichqonchani ustidaMcClung va Nestler, 2003). Transgenik DFosB ekspresyonunun protein darajasidagi G-protein subunit ifodasi va ko'plab G-protein modifikatsion oqsillarni ifodalashiga ta'sirini har tomonlama o'rganish uchun kelajakdagi ishlarga qiziqish uyg'otadi.

Qizig'i shundaki, DFOSB ifodasi CBni mustahkamlamagan1NAcdagi R-mediatsiyaviy signalizatsiya. CBda o'zgarishlar bo'lishi mumkin1R sinyalizatsiyasi, NAc preparatida umuman bo'lmagan, neyronlarning alohida-alohida populyatsiyasida uchraydi. Misol uchun, D9- THC DFOSB ni yadroga sezilarli darajada ta'sir qildi, ammo qobiq emas, NAc (Perrotti va boshq., 2008). MenNatijada, D bilan kurashish ko'rsatilgan9- takroriy D ilovasini takrorlagan9- NAC yadrosida dopaminning tarqalishini kuchaytirdi, ammo qobiqdagi relefni kamaytiradi (Cadoni va boshq., 2008). Shuni ham ta'kidlash joizki, 11A bitransgenik sichqonlari DFOSB ni faqat dynorphin / D1R positiv o'rta striatumning shovqinli neyronlari, lekin CB1R ham dynorphin / D da ifodalanadi1R va enkephalin / D.2R musbat striatal neyronlar (Hohmann va Herkenham, 2000), shuningdek, kortikal eferentsiya terminali (Robbe va boshq., 2001). DF-mediali transkripsiyadan, DjJun dan ustunlik qiluvchi salbiy regulyatorning ekspressioni, shuningdek, kanabinoid retseptorlari signalizatsiyasi uchun ham sezilarli ta'sir ko'rsatmadi, ammo Djjun D1 va D2- bu sichqonlardagi o'rta tirnoqli neyronlarning populyatsiyalariPeakman va boshq., 2003). Shu bilan birga, bazal DFB ekspresyoni, DOR va KOR natijalari bo'yicha taklif qilinganidek, DjJunning retseptorlari signalizatsiyasiga ta'sir etmasligi mumkin. CB ham mumkin1R sinyalizasyonu, bazal DFB ekspresyonu bilan kam darajada kuchaytirildi, shunday qilib DFosB ekspresyonunu yanada kengaytirish yoki DJJun bilan harakatlarni blokirovka qilish statistik ahamiyatga ega bo'lmagan darajaga yetmagan engil ta'sirlarga ega edi. Ushbu sharh uchun bevosita qo'llab-quvvatlash WIN55,212-2 ECni taqqoslash orqali ko'rish mumkin50 Djjunga nisbatan DFOSBga qarshi sichqon ko'rsatgan sichqonchalar orasidagi qiymatlar. WIN55,212-2 EC nisbati50 DjJunni ECga indikatsiyalangan eksperiment bilan sichqonlarda adenilil siklaz inhibisyonu uchun qiymati50 DFOSB indüktiv ekspresyoni bilan G-protein faollashuvi uchun 4.0 edi, shuning uchun transgenning indüksiyasiz sichqonlarda bir xil nisbat 1.2 edi.

Shu bilan bir qatorda, kanabinoidlar CB ustida to'g'ridan-to'g'ri ta'sir qilmasdan DFosB ifodasini keltirib chiqarishi mumkin1R signalizatsiyasi. Ushbu stsenariyda kannabinoidlar boshqa dorilarning psixologik effektiga DFF bilan bog'liq transkripsiyona tartibga solish orqali javob berishi mumkin. Menn haqiqat, D ilovasi9-THC opioidlarga va amfetaminga qarshi o'zaro sezgirlikni keltirib chiqaradi (Cadoni va boshq., 2001, Lamarque va boshq., 2001), bu farazga muvofiq. Bundan tashqari, kannabinoid agonist CP55,940 ning takroriy kiritilishi NACda MOR orqali mediatsiya qilingan G-proteinin faollashuvini, shu bilan birga, ushbu ishda DF (FosB)Vigano va boshq., 2005). DFOSB ifodasini D ga ta'siri9- ATning vositachilik qilgan xatti-harakatlari baholanmagan, ammo hozirgi natijalar o'zaro ta'sirni cheklamaydi. Bu va avvalgi o'rganishlarimiz natijalari (Zachariou va boshq., 2006) striatumda MOR va KOR / dynorphin da DFOSB indikatorli o'zgarishlar ko'rsatiladi. D ning foydali samaralari9-TC, joy tanlovi bilan o'lchanadigan bo'lsa, MOR null sichqonlarida o'chirildi, KOR o'chirildi A9- bu yerdan yuz o'girish va D paydo bo'ldi9- bu yerdagi afzalliklar (Ghozland va boshq., 2002). Xuddi shunday, shartli joy Dga qarshi9- yovvoyi turdagi sichqonlarga nisbatan pro-dynorphin knockout'ta yo'q (Zimmer va boshq., 2001). Ushbu ma'lumotlar D9- DFF ning indüksiyonu va undan keyin dynorphin ekspresyonundaki pasaytirish bilan MOR signallarining indüksiyonu so'ng yanada samarali bo'lishi mumkin.

So'zday, ushbu ish natijalari D ning DFF ning ifodasini ko'rsatdi1R / dynorphin musbat striatal neyronlar NAcdagi G-protein vositachiligida adenilil tsiklaza faolligi darajasida MOR- va KOR orqali mediatlashtirilgan signalizatsiyani kuchaytirdi. Ushbu topilma, endojen opioid tizimini mukofotga rozi bo'lganTrigo va boshq., 2010), va mukofot uchun FOSB vositachiligida ta'sir o'tkazish uchun potentsial mexanizmni taqdim etadi. Aksincha, CB1NAc ichidagi R-mediatsiyaviy signalizatsiya tekshirilayotgan sharoitda striatal DFB ekspresifikatsiyasidan sezilarli darajada ta'sir ko'rsata olmadi, ammo keyingi tadkikotlar endosanabinoid tizimida DFOSB indüksiyonunun ta'sirini aniqlash uchun kafolatlangan.

Tadqiqotlar

  • MOR signalizatsiyasi DFOSB-ni ifodalovchi sichqonlarning yadroli akumbenslarida kuchaytirilgan
  • Adenilil siklaz in KOR inhibisyonu, shuningdek, DFB eksprese qilgan sichqonchani ham kuchaydi
  • DFOSB ning ifodasi CBni o'zgartirmaydi1R yadroidagi akumbenslardagi signalizatsiya
O'tish:

Qo'shimcha materiallar

O'tish:

Rahmatlar

Yozuvchilar, Hengjun He, Jordan Cox va Aaron Tomarchio'ya texnik qo'llab-quvvatlash uchun rahmat [35S] GTP3S ulanish tahlillari. Ushbu tadqiqot USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) va P01 DA08227 (EJN) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

O'tish:

Izohlar

Nashriyotdan voz kechish: Bu nashrga qabul qilingan qabul qilinmagan qo'lyozma faylining PDF-fayli. Mijozlarimizga xizmat sifatida biz qo'lyozmaning ushbu dastlabki versiyasini taqdim etmoqdamiz. Qo'lyozma nusxa ko'chirish, nusxa olish va uning yakuniy shaklida nashr etilishidan oldin tasdiqlangan hujjatlarni ko'rib chiqadi. Iltimos, ishlab chiqarish jarayonida kontentga ta'sir qilishi mumkin bo'lgan xatolar aniqlanishi mumkin va jurnalga tegishli bo'lgan barcha qonuniy ogohlantirishlar tegishlidir.

O'tish:

Manbalar

  • Bozarth MA, Wise RA. Anatomik jihatdan farqli opiat retseptorlari joylari mukofot va jismoniy qaramlikka yordam beradi. Ilmiy. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. Protein-bo'yoqqa ulanish printsipidan foydalanadigan mikrogram miqdori miqdorini aniqlash uchun tez va sezgir usul. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Surunkali delta9-tetrahidrokannabinolli davolash miyaga bevosita kannabinoid retseptorlari bilan ishlaydigan G-oqsillarini vaqtga bog'liq ravishda yo'qotadi. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Kannabinoid retseptorlari agonistini ogohlantirish uchun samaradorlik [35Sichqoncha serebellar membranalariga bog`lanadigan GTP`Slar GSYHga yaqin bo`lgan agonistlarning kamayishi bilan bog`liq. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Deloni 9-tetrahidrokannabinolga ta'sir qilish va morfin bilan keskin sezgirlikdan so'ng takrorlanadigan Behavioral Sensitization (Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G.). Psixofarmakologiya (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Delta 9-tetrahidrokannabinolga nisbatan xulq-atvori va morfin bilan o'zaro xuruj qilish: akkumal qobiqdagi differentsial o'zgarishlar va yadro dopamin transmissiyasi. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Miyaning bevosita, maqsadli gen ekspozitsiyasi bilan transgenik hayvonlar. Mol. Farmakol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Opioid retseptorlari ikkinchi ulamolar bilan bog'langan. Hayot sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childler SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Miya ichida adenilil siklazning opioid va kanabinoid retseptorlari inhibatsiyasi. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid retseptorlari stimulyatsiyasi [35S] Gviney cho'chqa miyaidagi GTP'S ulanishi: Kappa uchun dalilning etishmasligi2G-oqsillarni maxsus faollashtirish. Biochem. Farmakol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Klark S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, oshxona I mintaqasi. Mikro, delta va kappa-opioid retseptorlari selektiv regulyatsiyasi, lekin enkepalin va dynorphin knockout sichqonlarining miyasida opioid retseptorlari kabi 1 retseptorlari emas. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. DeltaFosBning striatal hujayra tipidagi maxsus ekspressionlari kokain uchun rag'batlanishni kuchaytiradi. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Endokannabinoid signalizatsiya tizimi va miya mukofotlari: dopaminga e'tibor. Farmakol. Biokimyo. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Kannabinoidlarning motivatsion ta'siri muopioid va kappa-opioid retseptorlari tomonidan mediatsiya qilinadi. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Jonson MR, Melvin LS, ham Kostaning BR, Rays KC. Sichqon miyaidagi kannabinoid retseptorlarining xarakterlashi va lokalizatsiyasi: in vitro otoradyografik tadqiq. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Sichqoncha striatumining neyronal pastki populyatsiyalarida kannabinoid CB (1) retseptorlari mRNA'sining lokalizatsiyasi: er-xotin yorlig'i in situ hibridizatsiyasini o'rganish. Sinaps. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Xalllett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Xalqaro farmakologiya uyushmasi. XXVII. Kanabinoid retseptorlari tasnifi. Farmakologik tahlil. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. CB1-selektiv kanabinoid retseptorlari antagonisti SR141716 tomonidan chekilgan marixuana ta'sirining blokadasi. Arch. Umumiy psixiatriya. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon VV, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen S, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Miya ichidagi transkripsiyon faktor deltaFosB ning ifodasi kokainga sezgirlikni nazorat qiladi. Tabiat. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Narkomaniyani asabiylashish. Nöropsikofarmakologiya. 2010;35: 217-238. [PMC bepul maqola] [PubMed]
  • Lamark S, Taghzouti K, Simon X. Delta (9) -tetrahidrokannabinol bilan surunkali davolash amfetamin va geroin uchun lokomotor javobni kuchaytiradi. Giyohvandlikka qarshi zaiflikning oqibatlari. Neyrofarmakologiya. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Giyohvandlikda endokannabinoid tizimining ishtiroki. Trends Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Tompson RC, Akil H, Watson SJ. Sichqon MSSda mu-Opioid retseptorlari mRNA ifodasi: mu-retseptorlarni ulash bilan taqqoslash. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, oshxona I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. M-opioid retseptorlari geniga ega bo'lmagan sichqonlarda morfin bilan indikatsiyalangan analjeziya, mukofot effekti va siqilish belgilari yo'qolishi. Tabiat. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. CREB va DeltaFosB tomonidan gen ekspression va kokain mukofotini tartibga solish. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: miyada uzoq muddatli moslashish uchun molekulyar kalit. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald Em. D1 dopamin retseptorlari intervalgacha morfin qo'llanilganda keyin rat striatumida deltaFosB indüksiyasini modulyatsiya qiladi. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Ko'rib chiqish. Narkomaniyaning transkripsiya mexanizmlari: DeltaFosB ning ahamiyati. Filos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC bepul maqola] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: uzoq muddatli neyral va xulq-atvorli plastisitning molekulyar vositachisi. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Striatum va nukleus akumbenslaridagi kokain tomonidan FOSga bog'liq surunkali antijenni induksiyalash to'g'risidagi farmakologik tadqiqotlar. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Uliya R, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Transgenik sichqonlardagi c-Jun ning dominant mutatsion mutatsiyasiga moslashgan, miya mintaqasiga xos ekspresiyasi kokainga sezuvchanlikni pasaytiradi. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal V, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. DeltaFosBning turli xil nayranglari miyadagi suiiste'mollik bilan bog'liq. Sinaps. 2008;62: 358-369. [PMC bepul maqola] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Sichqoncha yadrosi akumbenslarining glutamatergik sinapslarida kannabinoid retseptorlari lokalizatsiyasi va ta'sir qilish mexanizmlari. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomon Y. Adenilat siklaza assotsiatsiyasi. Adv. Dumaloq nukleotid quduq sohiblari. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley, ShU, SIM LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid retseptorlari bilan ogohlantiruvchi [35S rat thalamus va madaniy hujayra chiziqlarida GTPsS ulanishi: agonist samaradorligi ostida signalizatsiya transdüksiyon mexanizmlari. Mol. Farmakol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo R, Maldonado R. Ichki endogen opioid tizimi: giyohvandlikda umumiy substrat. Giyohvand moddalarga qaramlik. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp S, Zukin RS. Sichqon va guinea cho'chqa miyasida k1 va k2 opioid retseptorlarining neyroanatomik lokalizatsiyasi. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Yadro akumbens opiat retseptorlari blokadasi sichqonchani ichidagi tomir ichidagi geroin mukofotini oshiradi. Psixofarmakologiya (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Kannabinoid va opioid tizimlari o'rtasidagi assimetrik shovqinni o'z ichiga olgan molekulyar mexanizmlar. Psixofarmakologiya (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton U, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. DeltaFosB uchun morfin ta'siridagi yadrodagi akumbenslar uchun muhim rol. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Kanabinoid mukofoti uchun ikki miya sayt. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen S, Liu-Chen LY. Klonlangan inson kappa opioid retseptorlarining agonistlar tomonidan faollashishi [35S] GTP3Sni membranalarga bog'lashni kuchaytiradi: ligandlarning potentsial va samaradorligini aniqlash. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo R, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Dynorphin-deficiency sichqonchasida Delta-9-tetrahidrokannabinol disforat ta'sirining yo'qligi. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Xoxman AG, Herkenham M, Bonner TI. Kannabinoid CB1 retseptorlari nokaut sichqonlarida o'lim darajasi, gipoaktivlik va hipoaljeziya. Proc. Natl. Akad. Sci. AQSH 1999;96: 5780-5785. [PMC bepul maqola] [PubMed]