Miyani kuchlanish tizimidagi surunkali opiat ta'siriga uchragan FosB / DFosB ifodasi glukokortikoidlarni tartibga solish (2012)

PLoS One. 2012;7(11):e50264. doi: 10.1371/journal.pone.0050264. EPub 2012 yil 21-noyabr.

Garsiya-Peres D, Laorden ML, Milanes MV, Núñez C.

manba

Uyali va molekulyar farmakologiya guruhi, Farmakologiya bo'limi, Universitet tibbiyot fakulteti, Mursiya, Ispaniya.

mavhum

Giyohvand moddalarni surunkali iste'mol qilish stressga javob beradigan tizimni tubdan o'zgartiradi. Morfinning takroriy ta'siri, ayniqsa, mukofot va stress bilan bog'liq bo'lgan miya hududlarida DFosB transkripsiya omilining to'planishiga olib keladi. DFosB ning maqsadli genlarga doimiy ta'siri giyohvand moddalarni suiiste'mol qilish natijasida yuzaga keladigan plastisiyada muhim rol o'ynashi mumkin. So'nggi dalillar shuni ko'rsatadiki, stress bilan bog'liq bo'lgan gormonlar (masalan, glyukokortikoidlar, GC) miya stress tizimida genlar ifodasi va transkripsiya omillarining o'zgarishiga olib kelishi mumkin bo'lgan moslashuvlarni keltirib chiqarishi mumkin. Ushbu tadqiqot morfinga bog'liqlik paytida gipotalamus va ekstragipotalamik miya stress tizimlarida FosB / DFosB ni tartibga solishda GC rolini o'rganib chiqdi. Buning uchun FosB/DFosB ifodasi o'n kunlik morfin bilan davolashdan so'ng opiatga bog'liq bo'lgan nazorat (soxta) va adrenalektomizatsiyalangan (ADX) kalamushlarda o'lchandi. Soxta ishlaydigan kalamushlarda FosB/DFosB surunkali morfin yuborilgandan so'ng miyaning barcha stress zonalarida o'rganilgan: yadro akumbenslari (qobiq) (NAc), stria terminalisning yotoq yadrosi (BNST), markaziy amigdala (CeA), gipotalamus paraventrikulyar yadrosi (PVN) va yadroviy hujayralar yo'q. (NTS-A(2)). Adrenalektomiya NAc, CeA va NTSda surunkali morfin ta'siridan keyin kuzatilgan FosB / DFosB ishlab chiqarishning ko'payishini susaytirdi. Bundan tashqari, ADX BNST, PVN va CeA ning CRH-musbat neyronlarida FosB/DFosB ifodasini kamaytirdi. Shunga o'xshash natijalar NTS-A (2) TH-musbat neyronlarda va NAc pro-dinorfin-musbat neyronlarda olingan. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, stress bilan bog'liq bo'lgan miya hududlarida opiatlarga neyroadaptatsiya (FosB / DFosB to'planishi sifatida baholanadi) GC tomonidan modulyatsiya qilinadi, bu miya stress gormonlari va giyohvandlik o'rtasidagi bog'liqlik dalillarini qo'llab-quvvatlaydi.

Kirish

Opiat preparatlari, masalan, morfin, o'tkir va surunkali og'riqlarning ko'p shakllarini davolashda ishlatiladigan samarali analjeziklardir. Biroq, tolerantlik va chekinish kabi jiddiy salbiy ta'sirlar opiatga qaramlikni keltirib chiqaradi va ulardan foydalanishni cheklaydi. Bundan tashqari, so'nggi bir necha yil ichida opiatlardan (geroin, morfin) tibbiy bo'lmagan foydalanish ko'paydi. Ko'payib borayotgan dalillar, giyohvand moddalarni suiiste'mol qilishning miyada olib keladigan o'zgarishlarida genlarni tartibga solishning turli mexanizmlarini (shu jumladan epigenetik, molekulyar, hujayrali va elektron darajadagi ta'sirlarni) nazarda tutadi, bu giyohvandlik terapiyasi uchun potentsial terapevtik strategiyani ko'rsatadi. [1]-[4].

Giyohvand moddalarni suiiste'mol qilish sohasidagi asosiy savol ushbu dorilarning o'tkir ta'siridan uzoq muddatli ta'siriga o'tishda vositachilik qiluvchi oqsillarni aniqlash edi. Giyohvandlikni o'rganishda Fos oilasining transkripsiya omillari alohida qiziqish uyg'otadi. Bu oilaga c-Fos, Fra-1 va Fra-2, FosB va DFosB kiradi, bu toʻliq uzunlikdagi FosB ning kesilgan qoʻshilish varianti. [5]. Fos oilasining boshqa a'zolaridan farqli o'laroq, DFB o'tkir dori qo'llashdan keyin miyada kamtarlik bilan induktsiya qilinadi, ammo o'zining g'ayrioddiy uzoq yarimparchalanish davri tufayli u giyohvand moddalarni iste'mol qilishni to'xtatgandan keyin haftalar, hatto oylar davomida saqlanib qoladi. Natijada, DFS darajalari dori-darmonlarni takroriy ta'sir qilish bilan asta-sekin to'planadi [6], [7], DFosB suiiste'mol qilingan dorilar dori bekor qilinganidan keyin uzoq vaqt davomida gen ekspressiyasida doimiy o'zgarishlarni keltirib chiqaradigan mexanizmni ko'rsatishi mumkinligini ko'rsatadi. [8].

Kokain, amfetamin, kannabinoidlar yoki morfin bilan qayta-qayta ta'sir qilish, yadro akkumbens (NAc), prefrontal korteks va dorsal striatum kabi dorilarning ijobiy kuchaytiruvchi ta'siri bilan bog'liq bo'lgan miya hududlarida DFosB ko'payishiga olib keladi. Ushbu o'sish giyohvand moddalarga nisbatan sezgirlikni oshirishga va giyohvandlikning xarakterli xatti-harakatlarini rivojlantirish uchun zaiflikka olib keladigan neyroadaptatsiya bo'lishi taklif qilindi. [9]-[13]. Biz buni yaqinda ko'rsatdikSurunkali morfinni qo'llashdan keyin FosB / DFosB darajasining oshishi nafaqat mukofot tizimi bilan cheklanib qolmaydi, balki miya stress tizimida ham sodir bo'ladi (bu dorilarning salbiy kuchaytiruvchi ta'siri bilan bog'liq), shuningdek, yakka yoʻlning yadrosida-A₂ noradrenergik hujayralar guruhi (NTS-A₂, stress neyrosirkulyatsiyasini innervatsiya qiluvchi asosiy noradrenergik tizim) [14]. Ushbu topilmalarga muvofiq, surunkali stressning bir nechta shakllari ham NAc va miyaning boshqa hududlarida DFosB ni keltirib chiqaradi. [15], [16].

Giyohvandlik murakkab kasallikdir, chunki ko'plab omillar bu nevrologik kasallikning rivojlanishi va saqlanib qolishiga yordam beradi. Bir omil - bu giyohvandlikning o'ziga xos jihatlari bilan bog'liq bo'lgan stress [17]-[21]. Gipotalamus-gipofiz-adrenal (HPA, asosiy endokrin stress yo'li) o'qi va ekstragipotalamik stress tizimi (kengaytirilgan amigdala va NTS-A ni o'z ichiga oladi)₂) qaramlik potentsialiga ega bo'lgan dorilarni surunkali qo'llash orqali tartibga solinmaydi [14], [22]. Bundan tashqari, HPA o'qining reaktsiyasi stressli ogohlantirishlardan keyin ham, giyohvand moddalarga o'tkir ta'sir qilishdan keyin ham o'xshashdir. [23], [24], yuqori kortikotropin chiqaradigan gormon (CRH), adrenokortikotropik gormon (ACTH) va glyukokortikoidlar (GC) ajralishi bilan. TUning javobi o'tkir atrof-muhit o'zgarishlariga moslashishni osonlashtiradi, shuningdek, giyohvandlik va depressiya kabi surunkali stress sharoitida xulq-atvor patologiyalariga olib kelishi mumkin. [25]. Tadqiqotlar miya stress tizimida GC va morfinga bog'liqlik tufayli kelib chiqqan FosB / DFosB induksiyasi o'rtasidagi munosabatni hali o'rganmagan. Shuning uchun biz miya stressi bilan bog'liq hududlarda morfinni uzluksiz qo'llashdan keyin GC ning FosB / DFosB ifodasiga ta'sirini baholadik. Ushbu savolni hal qilish uchun biz birinchi navbatda ikki tomonlama adrenalektomiya (ADX) ning morfinga bog'liq kalamushlarda stress tizimining asosiy yadrolarida FosB / DFosB immunoreaktivligiga (IR) ta'sirini ko'rib chiqdik.

Miyaning stress tizimining faoliyati bir qator neyrotransmitterlar / neyromodulyatorlar tomonidan amalga oshiriladi. CRH stress tizimining faoliyatini tartibga soluvchi asosiy neyropeptid bo'lib, uning giyohvand moddalarni o'ziga qaramlikka olib kelishi uchun oldindan mavjud bo'lgan zaiflikda ham, keyinchalik qaytalanish zaifligida ham hissasi borligi taxmin qilingan. [26]. menBundan tashqari, mo'l-ko'l ish NTS-A ning ahamiyatini qo'llab-quvvatlaydi₂ giyohvandlikdagi miya stress tizimini innervatsiya qilish va noradrenalinning (NA) ushbu neyrosirkulyatsiyani modulyatsiya qiluvchi neyrotransmitter sifatidagi asosiy roli [27]. Nihoyat, muhim dalillar shuni ko'rsatadiki, o'tkir va surunkali preparatni qo'llash paytida striatum va amigdalada dinorfin ekspressiyasi faollashadi. [28]. Ushbu faktlarni hisobga olgan holda, ushbu tadqiqotning quyidagi maqsadi morfinga qaramlik davrida miya stress tizimining o'ziga xos populyatsiyalarida FosB / DFosB ifodasida GC rolini aniqlash edi.

natijalar

Morfinga bog'liq kalamushlarda adrenalektomiyaning tana vaznining oshishiga va plazmadagi ACTH va kortikosteron kontsentratsiyasiga ta'siri

Immunitetni aniqlash tahlillarini o'tkazishdan oldin biz morfin bilan surunkali davolashning samaradorligini baholadik. Shu maqsadda hayvonlarning vazni granulalarni ekish kunida va o'ldirilgan kunida (10-kun) qayd etilgan. Ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiya uchun tana vaznining oshishiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi [F (1,47)=13.24, p=0.0007), morfin bilan davolash [F(1,47)=281.05, p<0.0001] va ADX va morfin bilan davolash o'rtasidagi o'zaro ta'sir [F (1,47)=4.13, p=0.0479]. Oldingi topilmalarga muvofiq [29], [30], post hoc Tahlil shuni ko'rsatdiki, morfinga bog'liq bo'lgan soxta va ADX guruhlari sezilarli darajada (p)<0.001) kam vazn ortishi (-13.75±5.0 g, n=12; 3.84±2.45 g, n=13, mos ravishda) platsebo granulalarini olgan soxta va ADX hayvonlarida kuzatilganidan (44.58±1.7 g, n)=12; 49.57±2.4 g, n=12, mos ravishda), bu hayvonlarda kuzatilgan oziq-ovqat iste'molining kamayishi bilan bog'liq [29].

Adrenalektomiya samaradorligini tekshirish uchun plazmadagi gormonlar kontsentratsiyasi o'lchanadi. Adrenalektomiya va morfinning ACTH va plazmadagi kortikosteron kontsentratsiyasiga ta'sirini o'rganuvchi ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning muhim asosiy ta'sirini ko'rsatdi [ACTH: F (1,18)=68.12, p<0.0001; kortikosteron: F (1,45)=10.42, p=0.0023). Kutilganidek, Nyuman post hoc test ko'rsatdi (Shakl S1) platseboda (n=6)- va morfin (n=4) - ADX kalamushlarida ACTH ning plazma kontsentratsiyasi yuqori edi (p<0.001) baholangan ikkita davolash uchun soxta hayvonlar bilan solishtirganda (platsebo, n)=6; va morfin, n=6). Plazma kortikosteron kontsentratsiyasida ADX-platsebo (n=14) va ADX-morfin (n=13) davolash qilingan kalamushlar. ADX-morfin bilan davolash qilingan kalamushlarda kortikosteron kontsentratsiyasi sezilarli darajada edi (p<0.01) sham-morfindagidan past (n=10) davolash qilingan kalamushlar. Sham-morfin guruhida sham-platsebo bilan solishtirganda sezilarli o'zgarishlar kuzatilmadi (n=12).

Adrenalektomiya miya stress tizimining pastki hududlarida morfinga bog'liqlikdan kelib chiqqan FosB/DFosB-ni differentsial ravishda susaytiradi.

Nazorat hayvonlarida (platsebo-implantatsiya qilingan kalamushlar) stress bilan bog'liq miya tizimining barcha sohalarida FosB / DFosB-IR ning zaif konstitutsiyaviy ifodasi aniqlandi. Surunkali morfin bilan davolash miyaning barcha tekshirilgan sohalarida FosB/DFosB paydo bo'lishiga olib keldi. NAc (qobiq) da ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning muhim asosiy ta'sirini ko'rsatdi [F (1,16)=6.44, p=0.0220] va surunkali morfin bilan davolash [F(1,16)=19.98, p=0.0004]. Nyuman-Keulsning post hoc testi ko'rsatdi (2A-E-rasm) morfin bilan davolash qilingan kalamushlarda FosB/DFosB ifodasida sezilarli (p<0.01) o'sish kuzatilgan. Morfinga bog'liq bo'lgan ADX kalamushlarida NAcda FosB/DFosB oqsili ifodasida sezilarli (p<0.05) pasayish kuzatildi. BNST uchun ikki tomonlama ANOVA surunkali morfin bilan davolashning muhim asosiy ta'sirini ko'rsatdi [F (1,16)=48.92, p<0.0001]. Post hoc tahlili o'sishni aniqladi (p<0.001) FosB/DFosB da sham- va ADX-morfinga bog'liq hayvonlarda, bu FosB/DFosB ning regulyatsiyasi GC kontsentratsiyasidan qat'i nazar, surunkali morfin ta'siri bilan bog'liqligini ko'rsatadi (2F–J-rasm). CeAdagi FosB/DFosB uchun ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning muhim ta'sirini ko'rsatdi [F (1,15)=20.51, p=0.0004] va morfin bilan oldindan ishlov berish [F(1,15)=27.52, p<0.0001]. Post hoc test sham-morfinli kalamushlarda sham-platsebo kalamushlarga nisbatan FosB/DFosB darajasining sezilarli o'sishini (p<0.01) ko'rsatdi, bu ADX morfinga bog'liq guruhda zaiflashgan (p<0.01) (p<XNUMX).2K–O-rasm). Bundan tashqari, ADX platsebo-pelletli kalamushlar soxta platsebo guruhiga qaraganda FosB/DFosB ning past darajasini (p<0.01) ko'rsatdi.

Adrenalektomiya miya stress tizimlarida FosB / DFosB protein ifodasini differentsial tartibga soladi.

Adrenalektomiya va morfinning PVN (parvocellular bo'linma)dagi FosB / DFosB ifodasiga ta'sirini o'rganuvchi ikki tomonlama ANOVA morfin bilan davolashning muhim ta'sirini aniqladi [F (1,16)=16.31, p<0.0001]. Post hoc tahlil muhim ko'rsatdi (3A-E-rasm) oshirish (s<0.05) FosB/DFosB-IR da sham- va ADX-morfin bilan ishlov berilgan kalamushlardan PVN da. NTS-A da₂ katexolaminergik hujayralar guruhi, ikki tomonlama ANOVA morfin bilan davolashning asosiy ta'sirini aniqladi [F (1,11)=76.33, p<0.0001]. Post hoc tahlil muhim ko'rsatdi (3F–J-rasm) sham-morfinli kalamushlarda sham-platsebo guruhiga nisbatan FosB/DFosB-IR ning oshishi (p)<0.001), bu ADX morfinga bog'liq guruhda zaiflashgan (p<0.05).

Adrenalektomiyaning PVN va NTS-A da FosB/DFosB oqsili ifodasiga ta'siri₂ morfinga bog'liq kalamushlardan.

Surunkali morfin ta'siri PVN, BNST va CeAdagi CRH neyronlariga FosB/DFosB ifodasini keltirib chiqaradi. Glyukokortikoidlarning ta'siri

BNSTdagi FosB/DFosB-musbat/CRH-musbat neyronlar uchun ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning asosiy ta'sirini ko'rsatdi [F(1,20)=64.43, p<0.0001] va adrenalektomiya va morfin bilan davolash o'rtasidagi muhim o'zaro ta'sir [F (1,20)=6.80, p=0.0169]. PVNda ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning muhim asosiy ta'sirini aniqladi [F (1,19)=11.35, p=0.0032]. CeAdagi FosB/DFosB-musbat/CRH-musbat neyronlar uchun ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning muhim asosiy ta'sirini ko'rsatdi [F (1,20)=106.85, p<0.0001], morfin bilan davolash [F(1,20)=7.33, p=0.0136] va adrenalektomiya va preparatni oldindan davolash o'rtasidagi muhim o'zaro ta'sir [F (1,20)=7.07, p=0.0151]. Raqamlar 4, , 5,5, ,66 Sham yoki ADX-nazorat va morfinga bog'liq kalamushlardan BNST, PVN va CeA bo'limlarining vakili tasvirlarini ko'rsatish. Post hoc Tahlil shuni ko'rsatdiki, ko'p sonli FosB / DFosB-musbat neyronlar BNSTda CRHni ifodalashi aniqlangan (p.<0.01; Shakl 4E), PVN (s<0.05; Shakl 6E) va CeA (p<0.01; Shakl 6E) sham-morfinli kalamushlarda sham-platsebo guruhi bilan solishtirganda. Bundan tashqari, ADX platsebo-pelletli kalamushlarda va morfinga bog'liq kalamushlarda CRH ni ifodalovchi FosB/DF-musbat neyronlar soni uchta yadroda soxta hayvonlarda mos keladigan davolash bilan solishtirganda sezilarli darajada past edi. Raqamlar 4, , 5,5, ,66 (BNST: p<Sham va platseboga nisbatan 0.01; p<Sham va morfinga nisbatan 0.001; PVN: p<Sham va platseboga nisbatan 0.05; p<Sham va morfinga nisbatan 0.001; CeA: p<0.001 va boshqalar sham plyus platsebo va boshqalar sham va morfin).

Adrenalektomiya BNST CRH-musbat neyronlarida FosB/DFosB oqsili ifodasini susaytirdi.

Adrenalektomiya PVN CRH-musbat neyronlarda FosB/DFosB oqsili ifodasini susaytirdi.

Adrenalektomiya CeA CRH-musbat neyronlarda FosB/DFosB oqsili ifodasini antagonizatsiya qildi.

BNST darajasida CRH-musbat neyronlar soni uchun ikki tomonlama ANOVA ADX ning asosiy ta'siri borligini ko'rsatdi [F (1,20)=103.92, p<0.0001], shuningdek surunkali morfin [F(1,20)=4.35, p<0.05]. Ko'rsatilgandek 1 stol, Nyuman-Kuls post hoc test ADX platsebo va morfin-pelletli kalamushlarda sham-platsebo yoki morfinga bog'liq bo'lgan guruhlarga qaraganda pastroq CRH neyronlarini (p<0.001) ko'rsatishini aniqladi. PVNda ikki tomonlama ANOVA adrenalektomiyaning sezilarli ta'sirini ko'rsatdi [F (1,19)=11.35, p=0.0032]. CeA darajasidagi umumiy CRH neyronlari uchun ikki tomonlama ANOVA ADX ning muhim ta'sirini aniqladi [F (1,20)=240.09, p<0.0001] va ADX va surunkali morfin o'rtasidagi asosiy o'zaro ta'sir [F (1,20)=4.49, p=0.0467]. 1 stol ADX platsebo yoki morfin bilan davolash qilingan kalamushlardan CeA da CRH neyronlarida sezilarli pasayish kuzatilganligini tasvirlaydi. 1 stol Shuningdek, surunkali morfin ta'siri BNST va CeA darajalarida CRH-musbat neyronlarning ko'tarilishini (p<0.05) keltirib chiqarishini ko'rsatadi.

Table 1. Adrenalektomiyaning BNST, PVN va CeAdagi CRH-musbat neyronlar soniga, NAcdagi pro-DYN-musbat neyronlar va NTSdagi TH-musbat neyronlar, platsebo yoki morfin-pelletli hayvonlarda ta'siri.

Adrenalektomiyaning NAc (Shell)dagi DYN-musbat neyronlarga FosB/DFosBga ta'siri

Surunkali morfin ta'siridan keyin NAc (qobig'i) da FosB/DFosBni birgalikda ifodalovchi pro-DYN-musbat hujayralar sonida sezilarli o'zgarishlar kuzatilmadi.Anjir. 7) platsebo guruhiga nisbatan. NAc(qobiq)dagi FosB/DFosB-musbat/pro-DYN-musbat neyronlar uchun ikki tomonlama ANOVA ADX ning asosiy ta'sirini ko'rsatdi [F(1,19)=10.11, p=0.0049]. Ko'rsatilgandek Shakl 7C, ADX morfinga bog'liq kalamushlarda pro-DYNni birgalikda ifodalovchi FosB/DFosB-musbat neyronlar soni sezilarli darajada edi (p).<0.05) soxta hayvonlarda tegishli davolashga nisbatan past. Ko'rsatilgandek 1 stol, ADX NAc (qobiq) dan umumiy pro-DYN hujayrasida hech qanday o'zgarishlarni keltirib chiqarmadi.

Adrenalektomiyaning NAc (qobiq) pro-DYN-musbat neyronlarida va morfinga bog'liq kalamushlardan NTS TH-musbat neyronlarida FosB/DFosB oqsili ifodasiga ta'siri.

Adrenalektomiya NTS-A dagi TH-musbat neyronlarga morfinga bog'liqlikdan kelib chiqqan FosB/DFosB-ni inhibe qiladi.₂ Noradrenergik hujayralar guruhi

NTS-Adagi FosB/DFosB-musbat/TH-musbat neyronlar uchun ikki tomonlama ANOVA₂ ADX ning asosiy ta'sirini ko'rsatdi [F(1,15)=64.86, p<0.0001], morfin bilan davolash [F(1,15)=29.62, p<0.0001] va adrenalektomiya va morfin bilan davolash o'rtasidagi muhim o'zaro ta'sir [F (1,15)=19.24, p=0.0005]. Nyuman-Kuls post hoc test shuni ko'rsatadiki, ko'p sonli FosB/DFosB-musbat neyronlar NTSda THni birgalikda ifodalashi aniqlangan (p).<0.001; Shakl 7F) sham-morfinli kalamushlarda. Bundan tashqari, ADX morfinga bog'liq kalamushlarda TH ni birgalikda ifodalovchi FosB / DFosB-musbat neyronlar soni sezilarli darajada past edi (p).<0.001) da ko'rsatilganidek, soxta hayvonlarda tegishli davolash bilan solishtirganda Shakl 7F. Boshqa tomondan, rasmda ko'rsatilganidek 1 stol, ADX NTSdagi umumiy TH-musbat neyronlarda hech qanday o'zgarishlarga olib kelmadi.

muhokama

Mavjud natijalar, birinchi marta, miyaning GC signalizatsiyasi mintaqaga xos tarzda miya stress tizimida surunkali morfin qo'llash natijasida kelib chiqqan FosB / DFosB ifodasini modulyatsiya qilganligini ko'rsatdi.

Birlashtirilgan dalillar shuni ko'rsatadiki, stress giyohvandlik xatti-harakatlari xavfini oshiradi [18]. Doimiy stressli stimullar stress bilan bog'liq yo'llarda sintez, ifoda va signalizatsiyani o'zgartiradi (masalan, CRH, GC, NA va boshqalar). Bundan tashqari, giyohvand moddalarni suiiste'mol qilish stress yo'llariga ta'sir qiladi, bu gen ekspressiyasining o'zgarishiga olib keladi, mukofot va stress bilan bog'liq molekulalarga signal ta'siri bilan. [31]. Stress va suiiste'mol qilingan dorilar markaziy asab tizimida neyron faollashuvining bir-biriga mos keladigan naqshlarini qo'zg'atish qobiliyatiga ega, bu esa darhol gen ekspressiyasini faollashtiradi.

Qo'shadi moddalar va surunkali stressli stimullar ularning ijobiy kuchaytiruvchi ta'sirida ishtirok etadigan asosiy yadrolarda DFosB transkripsiya faktorining ifodasini oshirishi keng ta'riflangan. [12], [13], [32], [33], va DFosB ning maqsadli genlarga doimiy ta'siri giyohvandlikni tavsiflovchi moslashuvlarni rivojlantirishda muhim rol o'ynashi mumkinligi taklif qilingan. [9], [34]. Biroq, giyohvand moddalarni surunkali suiiste'mol qilishdan keyin miya stress tizimida DFB ning namoyon bo'lishi yoki stress bilan bog'liq hududlarda morfin qo'zg'atuvchi DFosB to'planishining molekulyar mexanizmlari haqida kam narsa ma'lum.

Ushbu tadqiqotda biz PVNda CRH tomonidan boshqariladigan gormonal stress tizimida (HPA o'qi), shuningdek, ekstragipotalamik stress tizimlarida (ularga kengaytirilgan amigdala kiradi) morfin bilan bog'liq FosB / DFosB ifodasida GC ishtirokini tekshirdik; [35]), CRH va boshqa stress bilan bog'liq tizimlar (jumladan, NA va dinorfin) vositachiligida; [19]).

Biz yaqinda biz etti kun davomida surunkali morfinni qo'llash kengaytirilgan amigdala, PVN va NTS-Ada FosB / DFosB ifodasini oshirganligini ko'rsatdik.₂ [14]. Ushbu ma'lumotlarga muvofiq, mavjud natijalar shuni ko'rsatadiki, surunkali morfin qo'llanilishi CeA, BNST va NAc (qobiq), shuningdek PVN va NTS-A da FosB / DFosB ko'payishiga olib keldi.₂. Kengaytirilgan amigdala dori mukofoti bilan bog'liq. Aslida, suiiste'mol qilishning barcha asosiy dorilari VTA dan NAc (qobiq) va CeA ga dopaminerjik uzatishni faollashtiradi. Suiiste'mol qiluvchi moddalarning bu faollashuvi va natijada ijobiy mustahkamlovchi ta'siri VTAda joylashgan GR ustidagi GC harakatlari bilan bog'liqligi ko'rsatilgan. [28]. Ushbu gipotezani qo'llab-quvvatlagan holda, bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, NAc (qobiq) va CeAdagi FosB / DFosB-IR ADX hayvonlarida zaiflashgan, bu morfinga bog'liqlik paytida AP-1 transkripsiya omillari va GR o'rtasidagi o'zaro suhbatni ko'rsatishi mumkin. [36]. ADX ning NAc va CeA dagi FosB ifodasiga kuzatilgan ta'siridan farqli o'laroq, mavjud natijalar surunkali morfin PVN va BNSTda GC-mustaqil tarzda Fos/DFosB ifodasini oshirganligini ko'rsatadi.

CRH, NA va DYN kabi miya stress tizimining bir nechta neyrotransmitterlari giyohvandlik jarayoniga xos bo'lgan qo'rqinchli holatlar bilan bog'liq. [35], [37]-[39]. Mavjud topilmalar shuni ko'rsatdiki, surunkali morfin ta'siri BNST, CeA va PVNda CRH o'z ichiga olgan neyronlarda Fos / DFosB ifodasining sezilarli darajada oshishiga olib keldi. Fos transkripsiya omillari oilasi siklik AMP-javob elementi (CRE) saytlarida harakat qilishi mumkin. [40]. Muhim dalillar shuni ko'rsatadiki, DFosB transkripsiya repressor yoki aktivator sifatida harakat qilishi mumkin. [40], [41]. GCRH geni promotorlar ketma-ketligida CRE motiviga ega bo'lsa, CRH neyronlarida FosB / DFosB to'planishi kokain ta'siri haqida xabar berilganidek, CRH darajasidagi morfin bilan bog'liq o'zgarishlarga vositachilik qilishi mumkin. [42], ayniqsa CeA va BNSTda, biz birinchi marta morfinga qaramlik davrida CRH-musbat neyronlar sonining ko'payishi haqida xabar berdik. Ushbu gipotezani qo'llab-quvvatlagan holda, morfinni surunkali qo'llashdan keyin CeAda CRH mRNK darajasining oshishi tasvirlangan. [43]. Biroq, surunkali morfin bilan davolashdan keyin PVNda CRH-musbat neyronlar soni o'zgarmadi. Ushbu natijalar surunkali morfin ta'siri PVN CRH hnRNKda o'zgarishlarga olib kelmasligini ko'rsatadigan oldingi topilmalarga mos keladi. [44]. PVN CRH ifodasi GC tomonidan pastga tartibga solinganligi sababli [45], va hozirgi ish va boshqalarni hisobga olgan holda [29], [44] Surunkali opiat ta'siri kortikosteronning chiqarilishini o'zgartirmaganligini ko'rsatdi, surunkali morfin qo'llanilishi CRH hujayralari sonini o'zgartirmaganligi mantiqiy ko'rinadi.

Kortikosteronni periferik yuborish CeA va BNSTda CRH mRNK ifodasini oshiradi. [46], [47]. Bundan tashqari, ADX CeAda CRH ifodasini kamaytirdi [48], [49]. Shunga ko'ra, biz morfinga qaramlik davrida BNST va CeAdagi CRH neyronlari sonining ko'payishi adrenalektomiyadan keyin bekor qilinganligini kuzatdik. Morfinga bog'liqlik paytida CRH neyronlari ichida Fos / DFosB ning ko'payishi ADX hayvonlarida zaiflashganligini hisobga olsak, kengaytirilgan amigdalada GC tomonidan CRH ifodasini tartibga solishda Fos / DFosB rolini taklif qilish mumkin. Boshqa tomondan, ma'lumki, GC PVNda CRH genining ifodasini salbiy tartibga soladi. [45]. Mavjud ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, adrenalektomiya ushbu yadrodagi morfinga bog'liqlik paytida CRH o'z ichiga olgan neyronlarda Fos / DFB-IR ko'payishini bekor qildi.

Ushbu tadqiqotda immunokimyoviy ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, surunkali morfin bilan davolash NTS-A da Fos / DFosB uchun bo'yashni sezilarli darajada oshirdi.₂, bu ADX dan keyin kamaydi. FosB/DFosB ni ifodalovchi maxsus neyron populyatsiyalarini tekshirganimizda, TH (katexolamin sintezidagi tezlikni cheklovchi ferment)-musbat neyronlar ichida Fos/DFosB-IRning kuchli o'sishini topdik. NA giyohvandlikda asosiy rol o'ynashi ko'rsatilgan [50]. Oldingi ishda surunkali morfin ta'siri NTS-A da TH darajasining oshishiga olib keldi.₂ [14], [29]. Ma'lumki, TH geni promouterida AP-1 joyiga ega [51]. Natijalarimiz FosB/DFosB NTS-A da opiat ta'sirida TH darajasini oshirishda ishtirok etishini ko'rsatishi mumkin.₂. Miya sopi noradrenerjik hujayralar guruhi yuqori darajadagi GC retseptorlarini (GR) ifodalaydi. GC noradrenergik neyrotransmissiyada ruxsat beruvchi rolga ega ekanligi ko'rsatilgan [29], [30], [52]. Shunga ko'ra, GR antagonistlarini qo'llash NA faolligining bir qancha jihatlariga, shu jumladan TH faollashuvi va neyronal faollikka ta'sir ko'rsatdi. [30]. Mavjud natijalar shuni ko'rsatdiki, ADXdan keyin NTS-A da FosB/DFosB ifodalovchi TH-musbat hujayralar kamaygan.₂. Adrenalektomiya NTS-A dagi TH oqsil darajasining ko'payishini bloklaganligi hisobga olindi₂ morfinga qaramlik davrida [29]TH gen promouterida GRE/AP-1 sayti tasvirlangan [53], bizning ma'lumotlarimiz DFOSB ni NTS-Adagi noradrenerjik faollikka GC ta'sirida vositachi sifatida ko'rsatishi mumkin.₂ opiatga qaramlik davrida.

DYN DFosB ning mumkin bo'lgan maqsadli geni sifatida qabul qilingan [54], [55]. Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, surunkali morfin ta'siri NAc (qobiq)dagi pro-DYN ifodalovchi neyronlarda FosB/DFosB ifodasini sezilarli darajada o'zgartirmagan.). DYN ifodasining DFosB regulyatsiyasiga kelsak, Zachariou va boshqalar [33] DFosB haddan tashqari ifoda etuvchi sichqonlardan NAcda DYN mRNK darajasining kichik, ammo sezilarli darajada pasayishi haqida xabar berdi, bu esa bu transkripsiya omili DYN ifodasini inhibe qilishini taxmin qildi. Bizning ma'lumotlarimizdan, bizning natijalarimiz oqsil darajasida olinganligini hisobga olsak, surunkali morfin FosB / DFosB faolligi orqali DYN ifodasini o'zgartiradi degan xulosaga kelish mumkin emas.

DYN/kappa opioid tizimi nafratlanish elementlarini o'z ichiga olgan pro-depressiv holatlarni keltirib chiqaradi, deb taxmin qilingan. Ushbu nojo'ya javob NAc, DA va ekstragipotalamik CRH tizimi bilan o'zaro ta'sirlarni o'z ichiga olishi mumkin. [35]. Biroq, NAcda DYN ifodasining mumkin bo'lgan GC regulyatsiyasi haqida kam narsa ma'lum. NAcdagi DFosB qisman DYN ifodasini bostirish orqali morfin va kokainning foydali ta'siriga nisbatan sezgirlikni oshiradi va stressga chidamlilikka olib keladi. [9], [33]. Bizning ma'lumotlarimiz NAcda FosB/DFosB/pro-DYN-musbat neyronlarning soni ADX kalamushlaridan kamayganligini hisobga olib, mezokortikolimbik DA tizimi vositachiligida morfinning ijobiy kuchaytiruvchi ta'sirini tartibga solishda GC rolini qo'llab-quvvatlaydi. Ushbu ta'sirlar to'g'ridan-to'g'ri mezolimbik mukofot yo'lida mavjud bo'lgan GR tomonidan yoki bilvosita CeA va / yoki BNST dan VTA va NAc ga kelib chiqadigan CRH proektsiyalari orqali vositachilik qilishi mumkin, ular ADX kalamushlarida morfinga bog'liqlik paytida faollashtirilmaydi.

Xulosa qilib aytganda, ushbu tadqiqot GC surunkali morfin ta'siridan so'ng miya stress tizimlarida FosB/DFosB to'planishida muhim rol o'ynashini isbotlaydi, bu stress bilan bog'liq hududlarda gen ekspressiyasining doimiy o'zgarishiga olib kelishi mumkin. Mavjud topilmalar, shuningdek, FosB / DFosB opiatga qaramlik davrida miya stress tizimining plastisiyasidagi GCga bog'liq o'zgarishlarga hissa qo'shishi mumkinligini ko'rsatadi. Surunkali opiatlar stress bilan bog'liq bo'lgan tanlangan hududlarda FosB / DFosB ni qo'zg'atadigan hujayra ichidagi mexanizmlarni, shuningdek, GC tomonidan morfin bilan qo'zg'atilgan FosB / DFosB ifodasini bostirish uchun mas'ul bo'lgan mexanizmni aniqlash uchun keyingi tadqiqotlar zarur.

usullari

Materiallar

Kortikosteron va xolesterin Sigma Chemical Co. (Sent-Luis, MO, AQSh) dan sotib olingan. Kortikosteron granulalari doktor Márton Vajna tomonidan ishlab chiqarilgan (Farmatsiya universiteti, Semmelweis universiteti, Budapesht, Vengriya farmatsiya ma'muriyati bo'limi). Morfin asosining granulalari (Alcaliber Laboratories, Madrid, Ispaniya) yoki laktoza (nazorat) Farmatsevtika va farmatsevtika texnologiyasi bo'limida (Farmatsiya maktabi, Granada, Ispaniya) tayyorlangan. Pentobarbital Hospira (Hoofddorp, Niderlandiya) dan sotib olingan. Ketamin xlorgidrat va ksilazin laboratoriyalardan sotib olindi. Merial (Lion, Frantsiya) va laboratoriyalar. Mos ravishda Calier (Barselona, Ispaniya).

Hayvonlar

Erkak Sprague-Dawley kalamushlari (tajriba boshida 220-240 g; Xarlan, Barselona, Ispaniya) nazorat ostida haroratli (45±24°C) xonaga kelganida (uzunligi, 20 sm; kengligi, 22 sm; balandligi, 2 sm) juft boʻlib qafaslarga joylashtirildi. standart kemiruvchi chow Harlan Interfauna Iberica, Barselona, Ispaniya). Hayvonlar tajribalar boshlanishidan 50 kun oldin standart 10 soatlik yorug'lik-qorong'u tsiklga (chiroqlar yoqilgan: 12 soat 08 min - 00 soat 20 min) moslashtirildi. Barcha jarrohlik va eksperimental muolajalar Yevropa hamjamiyatlari kengashining 00-yil 7-noyabrdagi direktivasiga (24/1986/EEC) muvofiq amalga oshirildi va hayvonlarni oʻrganish boʻyicha mahalliy qoʻmitalar tomonidan tasdiqlangan (REGA ES86). Tadqiqot Murcia universiteti bioetika qo'mitasi (RD 609/300305440012) va Naziriio de Ciencia y Tecnología (SAF/FEDER 1201-2005), Ispaniya tomonidan tasdiqlangan.

Adrenalektomiya

Kalamushlar ikki tomonlama adrenalektomizatsiya qilindi va GC ning past, ammo barqaror darajasini ta'minlash uchun kortikosteron pelleti implantatsiya qilindi. [29]. Kalamushlar ikki tomonlama adrenalektomizatsiya qilindi (ADX) dorsal yondashuvda 90 mg / kg ketamin xlorgidrat va 8 mg / kg ksilazin (ip) behushlik ostida va jarrohlik paytida sekin chiqariladigan kortikosteron pelletlari bilan teri ostiga (sc) implantatsiya qilindi. Ukol granulalarining tarkibi (25 mg kortikosteron va 75 mg xolesterin) implantatsiyadan keyin 20 kungacha sirkadiyalik minimal darajaga to'g'ri keladigan barqaror kortikosteron kontsentratsiyasini ta'minlash uchun tanlangan. [56]. Kortikosteron almashtirilgan ADX kalamushlari (ADX plyus kortikosteron) plazma kortikosteronining qiyinchilik tufayli ko'payishiga olib kelmaydi. [56]. Jarrohlikdan so'ng, ADX plyus kortikosteron kalamushlari adrenalektomiya tufayli aldosteronni yo'qotish natijasida ikkilamchi bo'lgan natriyni almashtirish uchun izotonik sho'r suvni (0.9% NaCl) ichish uchun erkin tanlovga ega edi. Nazorat qiluvchi kalamushlar buyrak usti bezlari ekstirpatsiyasisiz bir xil jarrohlik muolajasidan (sham) o'tkazildi. Sham va ADX plus kortikosteron kalamushlariga morfinga bog'liqlik protsedurasidan oldin 5 kun davomida operatsiyadan keyin tiklanishiga ruxsat berildi. Muvaffaqiyatli ikki tomonlama adrenalektomiya kortikosteron va ACTH plazma kontsentratsiyasi va ADX hayvonlarining o'limdan keyingi tekshiruvi bilan tasdiqlangan.

Dori bilan davolash va eksperimental jarayon

Operatsiyadan besh kun o'tgach, kalamushlarga engil efir behushligi ostida ikkita 75 mg morfin pelletlari qo'shildi. Nazorat qiluvchi kalamushlar tarkibida laktoza bo'lgan platsebo granulalarini oldi. Ushbu protsedura pelletlar implantatsiyasidan bir necha soat o'tgach va opioid antagonistlarining o'tkir in'ektsiyasidan keyin to'liq olib tashlash sindromidan keyin plazma morfinining barqaror konsentratsiyasini ishlab chiqarishi ko'rsatilgan. [57]. Morfinga bog'liqlik pelletlar implantatsiyasidan 24 soat o'tgach erishiladi va 15 kun davomida doimiy bo'lib qoladi. [58]. Morfin yoki platsebo pelletlari implantatsiyasidan o'n kun o'tgach, kalamushlar qurbon qilindi. HPA o'qi faolligi (kortikosteron va ACTH plazma kontsentratsiyasi), FosB / DFosB ifodasi, CRH ifodasi, DYN ifodasi, TH ifodasi va CRH-, DYN- va TH-musbat neyronlarga FosB / DFosB ifodasi uchun tekshirilgan to'rtta eksperimental shartlar: (i) sham-platsebo; (ii) sham-morfin; (iii) ADX-platsebo; (iv) ADX-morfin. Davolanish jarayonida kalamushlarning vazn ortishi morfinning granulalardan toʻgʻri ajralishini taʼminlash uchun tekshirildi, chunki maʼlumki, morfin bilan uzoq muddatli davolash tana vaznining kamayishi natijasida tana vaznining oshishiga olib keladi. [29].

Miya perfuziyasi va bo'linishi

Kalamushlar pentobarbitalning haddan tashqari dozasi (100 mg/kg ip) bilan chuqur behushlik qilindi va paraformaldegidni o'z ichiga olgan fiksator (4 M borat tamponidagi 0.1% paraformaldegid, pH 9.5) bilan fiziologik eritma bilan transkardial perfuziya qilindi. Perfuziyalangan miyalar olib tashlangandan so'ng, ular 3 soat davomida bir xil fiksatorda o'rnatildi va 4 ° C da 10% saxaroza o'z ichiga olgan PBS da saqlangan toj qismlari (qalinligi 30 mkm) muzlatish mikrotomida rostrokaudal ravishda kesilguncha (Leika, Nussloch, Germaniya). Paxinos va Watson atlasi (2007) [59] kalamushlarning turli miya hududlarini aniqlash uchun ishlatilgan: NAc (qobiq), BNST, PVN, CeA va NTS-A₂ (Shakl 1). Bo'limlar kriyoprotektsiyalangan va ishlatilgunga qadar -20 ° C da saqlangan.

NAc(qobiq), BNST, CeA, PVN va NTS da FosB/DFosB musbat yadrolari hisoblangan miya maydonlarini (to'rtburchaklar) ko'rsatuvchi koronal bo'limlarning sxematik chizmalari. [59].

FosB/DFosB immunohistokimyosi

Bo'limlar Núñez va boshqalar tomonidan ta'riflanganidek, immunohistokimyo uchun ishlangan [29]. Qisqacha aytganda, 0.3% H bilan blokirovka qilinganidan keyin₂O₂ va 2% oddiy echki zardobi (Sigma, AQSH) toʻqimalarining boʻlaklari birlamchi anti-FosB/DFosB antiserumida (quyon poliklonal, #sc-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, AQSH; 1) inkubatsiya qilindi. [nisbat] 1000). Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan asosiy antikor FosB va uning barqaror qo'shilish varianti DFosB o'rtasida farq qilmaydi. FosB qo'zg'atuvchi stimullarga takroriy ta'sir qilish o'tkir FosB induktivligini desensitizatsiyalashi ko'rsatilgan. [15], [40], [60]. Shuning uchun, morfin bilan oldindan ishlangan va oldindan ishlov berilmagan kalamushlarda FosB / DFosB bo'yalishi o'rtasidagi farqlar, birinchi navbatda, DFB to'planishidagi farqlarni aks ettiruvchi sifatida talqin qilinishi mumkin. Antijenler an'anaviy avidin-biotin-immunoperoksidaza protokoli (Vectastain ABC Elite Kit; Vector Laboratories, Burlingame, CA, AQSH) orqali ko'rsatildi. 3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB; Sigma, AQSh) reaktsiyasi nikel-ammiak sulfat bilan kuchaytirildi. Bo'limlar xrom-alyum jelatin bilan qoplangan slaydlarga o'rnatilgan, suvsizlangan va qoplangan.

FosB/DFosB-immunoreaktiv yadrolari va CRH-, TH- va DYN-musbat neyronlarning ikki tomonlama yorliqli immunogistokimyosi

FosB/DFosB-TH ikkilamchi yorlig'i uchun har bir davolash guruhidagi har bir kalamushning to'qimalari bo'limlari DAB nikel kuchayishidan foydalangan holda FosB/DFosB immunoreaktivligi uchun qayta ishlandi va keyin TH faqat DAB xromogen yordamida aniqlandi. FosB/DFosB immuno-bo'yash yuqorida aytib o'tilganidek amalga oshirildi. FosB/DFosB bo'yalganidan so'ng, bo'laklar PBSda yuvildi, 2% oddiy echki zardobi bilan ishlov berildi va keyin quyon poliklonal anti-TH antikori bilan bir kechada inkubatsiya qilindi (AB152, Chemicon, AQSh; 1; XNUMX). [nisbat] 6000) xona haroratida. Yuqorida tavsiflangan bir xil immunohistokimyoviy protseduralar bajarildi. DABda TH antikor-peroksidaza kompleksi ishlab chiqilgan. Bo'limlar xrom-alyum jelatin bilan qoplangan slaydlarga o'rnatildi va yopildi.

FosB/DFosB-CRH va FosB/DFosB-pro-DYN ikkilamchi yorliqlari uchun jarayon avval FosB/DFosB-TH uchun tavsiflanganidek edi. NAcda DYNni ifodalovchi neyronlarni aniqlash uchun blokirovka qilishdan 10 daqiqa oldin miya bo'limlarini sitrat tamponida (0.05 mM limon kislotasi, 20% Tween 6.0, pH 60) 20°C da inkubatsiya qilish yo'li bilan antigen olish jarayoni qo'llanildi. Birlamchi anti-CRH quyon antiserum mehribonlik bilan Wylie V. Vale (The Salk Institute, La Jolla, CA, AQSH) tomonidan taqdim etilgan va 1 da ishlatilgan. [nisbat] 500°C da 72 soat davomida 4 suyultirish. Pro-DYN asosiy antikori Neuromics (# GP10110, Neuromics, Edina, MN, AQSH) dan sotib olindi va 1 marta suyultirildi.2000 yil (72 soat, 4°C).

Rasmni tahlil qilish

Tasvirlar videokameraga (DFC4000, Leica) ulangan Leica mikroskopi (DM 290B; Leica) yordamida olingan. FosB/DFosB-musbat hujayra yadrolari kompyuter yordamida tasvirni tahlil qilish tizimi (QWIN, Leica) yordamida hisoblangan. NTS-A chegaralari₂, BNST, CeA, NAc (qobiq) va PVN ning parvocellular bo'linmasi tasvirlangan va ijobiy profillar soni qayd etilgan. Qiziqarli hujayra guruhlari doirasidagi FosB/DFosB yadro profillarining soni har bir kalamushdan to'rt-beshta bo'limda ikki tomonlama hisoblab chiqilgan va har bir kalamush uchun bitta qiymat olish uchun o'rtacha hisoblangan. Kuzatuvchilar tarafkashligiga yo'l qo'ymaslik uchun barcha bo'limlar ko'r-ko'rona tergovchi tomonidan hisoblangan. Turli xil miya hududlari uchun umumiy hisoblar o'rtacha ± SEM sifatida ifodalanadi.

TH-, CRH- va DYN-musbat hujayralar va FosB/DFosB ikkilangan bo'yalgan profillarning miqdorini aniqlash

FosB/DFosB immunoreaktivligi uchun ijobiy yadrolar yuqorida tavsiflangan bir xil an'anaviy yorug'lik mikroskopi yordamida aniqlangan va x40 kattalashtirishda hisoblangan. FosB/DFosB-musbat CRH, TH yoki DYN hujayralari CRH-musbat, TH-musbat va DYN-musbat binoni va FosB/DFosB uchun ko'k/qora yadroviy bo'yash uchun jigarrang sitozolik cho'kindi bo'lgan hujayralar sifatida aniqlandi. Malumot maydoni sifatida foydalanish uchun olingan tasvir ustiga kvadrat maydon (195 mkm) qo'yildi. Ikki tomonlama kuzatilgan ikki tomonlama yorliqli neyronlar soni PVN, BNST va CRH neyronlari uchun CeA, TH neyronlari uchun NTS va DYN neyronlari uchun NAcdagi har bir hayvondan to'rt-besh qismga bo'lingan. Ko'rinadigan yadrosiz CRH, TH va DYN musbat hujayralar (FosB/DFosB-salbiy CRH, TH yoki DYN hujayralari) ham tahlilga kiritilgan.

Radioimmunoassay

Qon 5% EDTA bo'lgan muz bilan sovutilgan naychalarga to'plangan va keyin santrifüj qilingan (500 g; 4°C; 15 min). Plazma ajratildi, ikki qismga bo'lindi va kortikosteron yoki ACTH uchun tahlil qilinmaguncha -80 ° C da saqlanadi. Kortikosteron va ACTHning plazma kontsentratsiyasi kalamushlar uchun maxsus kortikosteron va ACTH antikorlari yordamida aniqlangan ([¹²⁵I]-CORT va [¹²⁵I]-ACTH RIA; MP Biomedicals, Orangeburg, NY, AQSh). Tahlilning sezgirligi kortikosteron uchun 7.7 ng / ml va ACTH uchun 5.7 pg / ml ni tashkil etdi.

Statistik tahlil

Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etilgan va GraphPad Prism statistik paketi (San-Diego, CA, AQSh) yordamida tahlil qilingan. Ma'lumotlar mustaqil o'zgaruvchilar sifatida davolash (platsebo, morfin) va jarrohlik (sham, ADX) bilan ikki tomonlama dispersiya (ANOVA) tahlili orqali tahlil qilindi. Nyuman-Kullar post hoc test individual guruhlarni taqqoslash uchun ishlatilgan. Ap<0.05 bilan farqlar muhim deb hisoblandi.

Axborotni qo'llab-quvvatlash

Shakl S1

Adrenalektomiya (ADX) ning plazmadagi ACTH (A) va kortikosteron (B) kontsentratsiyasiga nazorat va morfin bilan davolash qilingan hayvonlarda ta'siri. Jarrohlik ADX platsebo va morfin bilan davolash qilingan kalamushlarda ACTH darajasini oshirdi, morfin bilan davolash qilingan kalamushlarda plazma kortikosteron kontsentratsiyasini kamaytirdi. Ma'lumotlar 10 kun davomida platsebo yoki morfin bilan oldindan davolangan kalamushlarda plazma ACTH va kortikosteron darajalarining o'rtacha ± SEM ko'rsatkichlarini aks ettiradi. *** p<Sham-platseboga nisbatan 0.001; ⁺⁺p<0.01, ⁺⁺⁺p<Sham-morfinga nisbatan 0.001.

(TIF)

Qo'shimcha ma'lumot olish uchun shu yerni bosing.^{(734K, tif)}

rahmat

Semmelweis universitetidan (Budapesht, Vengriya) doktor Marton Vajna va Anna Földesga kortikosteron granulalarini tayyorlash uchun minnatdorchilik bildiramiz.

Moliyaviy hisobot

Ushbu ish quyidagi grantlar tomonidan qo'llab-quvvatlandi: Nazirio de Ciencia e Imnovacion (SAF/FEDER 2009-07178 va SAF/FEDER 2010-17907), Ispaniya; Red de Trastornos Adictivos (RD06/0001/1006 va RD06/0001/1001), Ispaniya; Fundación Séneca, Agencia Regional de Ciencia y Tecnología Región de Murcia (15405/PI10), Ispaniya. DG-P Nazirio de Ciencia e Innovacion (AP2009-2379) stipendiyasi tomonidan qo'llab-quvvatlanadi. Tadqiqot loyihasi, ma'lumotlarni to'plash va tahlil qilish, nashr etish to'g'risida qaror qabul qilish yoki qo'lyozmani tayyorlashda moliyachilarning roli yo'q edi.

Manbalar

1. Volkow ND, Skolnik P (2012) Giyohvand moddalarni iste'mol qilish kasalliklari uchun yangi dorilar: qiyinchiliklar va imkoniyatlar. Nöropsikofarmakologiya 37: 290-292. [PMC bepul maqola] [PubMed]

2. Robison AJ, Nestler EJ (2011) Narkomaniyaning transkripsiya va epigenetik mexanizmlari. Nat Rev Neurosci 12: 623-637. [PMC bepul maqola] [PubMed]

3. Hutchison ER, Okun E, Mattson MP (2009) Asab tizimining shikastlanishi, degeneratsiyasi va tiklanishidagi mikroRNKlarning terapevtik salohiyati. Neyromolekulyar med 11: 153-161. [PMC bepul maqola] [PubMed]

4. Li MD, van der Vaart AD (2011) Giyohvandlikdagi mikroRNKlar: moslashish vositachilari? Mol psixiatriyasi 16: 1159-1168. [PubMed]

5. Mumberg D, Lucibello FC, Shuermann M, Myuller R (1991) Fosb transkriptlarining muqobil biriktirilishi funktsional antagonistik oqsillarni kodlovchi differentsial tarzda ifodalangan mRNAlarga olib keladi. Genlar Dev 5: 1212-1223. [PubMed]

6. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Surunkali fos bilan bog'liq antijenler: Surunkali davolanish natijasida miyada qo'zg'atilgan DFosB ning barqaror variantlari. J Neurosci 17: 4933-4941. [PubMed]

7. Moratalla R, Elibol B, Valyexo M, Graybiel AM (1996) Surunkali kokain bilan davolash va olib tashlash paytida striatumda induktiv Fos-Jun oqsillarini ifodalashda tarmoq darajasidagi o'zgarishlar. Neyron 17: 147-156. [PubMed]

8. Chao J, Nestler EJ (2004) Giyohvandlikning molekulyar neyrobiologiyasi. Tibbiyot bo'yicha yillik tahlil 55: 113-132.

9. Muschamp JW, Nemeth CL, Robison AJ, Nestler EJ, Carlezon J (2012) DFosB Kappa-opioid retseptorlari agonisti U50488 ning pro-depressiv ta'sirini kamaytirish bilan birga kokainning foydali ta'sirini kuchaytiradi.. Biologik psixiatriya 71: 44-50. [PMC bepul maqola] [PubMed]

10. Gago B, Suárez-Boomgaard D, Fuxe K, Brené S, Reina-Sánches MD va boshqalar. (2011) O'tkir va uzluksiz morfin bilan davolashning kalamush kaudat putamen submintaqalarida transkripsiya omili ifodasiga ta'siri. D4 retseptorlarini faollashtirish orqali belgilangan modulyatsiya. Brain Res 1407: 47-61. [PubMed]

11. Kaplan GB, Leite-Morris KA, Fan WY, Young AJ, Guy MD (2011) Opiat sezuvchanligi miyaning prefrontal kortikal, striatal va amigdala hududlarida FosB/DFosB ifodasini keltirib chiqaradi.. PLOS ONE 6: e23574. [PMC bepul maqola] [PubMed]

12. Nye HE, Nestler EJ (1996) Surunkali morfinni qo'llash orqali kalamush miyasida surunkali fos bilan bog'liq antijenlarning induktsiyasi. Mol Pharmacol 49: 636-645. [PubMed]

13. McClung CA, Nestler EJ, Zachariou V (2005) Locus Ceruleus va Ventral Tegmental sohada surunkali morfin va morfinni olib tashlash orqali gen ekspressiyasini tartibga solish. J Neurosci 25: 6005-6015. [PubMed]

14. Núñez C, Martin F, Földes A, Laorden ML, Kovács KJ va boshqalar. (2010) Morfinga bog'liqlik va chikib ketish vaqtida miya shikastlanishiga asoslangan tizimlarga FosB / DFB ning indulatsiyasi. Neyroximiya jurnali 114: 475-487. [PubMed]

15. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L va boshqalar. (2004) Surunkali stressdan so'ng mukofot bilan bog'liq miya tuzilmalarida DFB ning paydo bo'lishi. J Neurosci 24: 10594-10602. [PubMed]

16. Vialou V, Robison AJ, LaPlant QC, Covington HE, Dietz DM va boshqalar. (2010) MF mukofotlari davrida DFOSB stress va antidepressantlarga nisbatan chidamlilikka yordam beradi. Nat Neurosci 13: 745-752. [PMC bepul maqola] [PubMed]

17. Ambroggi FC, Turiault M, Milet A, Deroche-Gamonet V, Parnaudeau S va boshqalar. (2009) Stress va giyohvandlik: dopaminoseptiv neyronlardagi glyukokortikoid retseptorlari kokain izlashni osonlashtiradi. Nat Neurosci 12: 247-249. [PubMed]

18. Sinha R (2008) Surunkali stress, giyohvand moddalarni iste'mol qilish va giyohvandlikka qarshi zaiflik. Ann NY Acad Sci 1141: 105-130. [PMC bepul maqola] [PubMed]

19. Koob GF, Volkow ND (2010) Narkomaniyani asabiylashish. Nöropsikofarmakologiya 35: 217-238. [PMC bepul maqola] [PubMed]

20. Koob G, Kreek MJ (2007) Stress, giyohvand moddalarni mukofotlash yo'llarining buzilishi va giyohvandlikka o'tish. Am J Psixiatriya 164: 1149-1159. [PMC bepul maqola] [PubMed]

21. Koob GF, Le Moal M (2008) Narkomaniyadagi qarama-qarshi motivatsion jarayonlar uchun neyrobiologik mexanizmlar. Fil Trans R Soc B 363: 3113-3123. [PMC bepul maqola] [PubMed]

22. Koob GF (2006) Narkomaniyaning asabiylashuvi: tashxis uchun zarur bo'lgan neyrokatalogiyalash. berilganlik 101: 23-30. [PubMed]

23. Carrasco GA, Van de Kar LD (2003) Stressning neyroendokrin farmakologiyasi. Evropa farmakologiya jurnali 463: 235-272. [PubMed]

24. Piazza PV, Le Moal M (1997) Glukokortikoidlar biologik substrat sifatida: fiziologik va patofizyologik ta'sirlar. Miya Tadqiqotlari 25: 359-372. [PubMed]

25. Cleck JN, Blendy JA (2008) Yomon narsani yomonlashtirish: stressning giyohvandlikka salbiy ta'siri. J Clin Invest 118: 454-461. [PMC bepul maqola] [PubMed]

26. Gudman A (2008) Giyohvandlikning neyrobiologiyasi. Integratsiyalashgan ko'rib chiqish. Biochem Pharmacol 75: 266-322. [PubMed]

27. Dunn AJ, Swiergiel AH (2008) Stress bilan bog'liq javoblarda kortikotropinni chiqaruvchi omil va noradrenalinning roli va ikkala tizim o'rtasidagi o'zaro bog'liqlik. Evropa farmakologiya jurnali 583: 186-193. [PMC bepul maqola] [PubMed]

28. Koob GF, Le Moal M (2008) Qo'shnichilik va miya antireprint tizimi. Ann Rev Fiziol 59: 29-53.

29. Núñez C, Földes A, Peres-Flores D, García-Borrón JC, Laorden ML va boshqalar. (2009) Ko'tarilgan glyukokortikoid darajalari morfinni olib tashlash paytida tirozin gidroksilaza (TH) mRNK ekspresyonini, fosforlanishni va yakka yo'lning yadrosida (NTS-A2) ferment faolligini induktsiya qilish uchun javobgardir.. Endokrinologiya 150: 3118-3127. [PMC bepul maqola] [PubMed]

30. Navarro-Saragoza J, Hidalgo JM, Laorden ML, Milanes MV (2012) Glyukokortikoid retseptorlari kalamushlarning NTS noradrenerjik faolligi va morfinni olib qo'yishning somatik belgilarida opiat olib tashlanishi bilan bog'liq stimulyatsiyada ishtirok etadi. Br J Pharmacol DOI: 10.1111/j.1476–5381.2012.01918.x .

31. Renthal W, Nestler EJ (2008) Giyohvandlikda epigenetik mexanizmlar. Molekulyar tibbiyotdagi o'zgarishlar 14: 341-350. [PMC bepul maqola] [PubMed]

32. Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ va boshqalar. (2011) DFOSBning ortiqcha ekspluatatsiyasini yadrodagi akumbensdagi opioid va kannabinoid retseptorlari bilan bog'liq signalizatsiya ta'siri. Neyrofarmakologiya 61: 1470-1476. [PMC bepul maqola] [PubMed]

33. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP va boshqalar. (2006) Yadrodagi DFB ning muhim roli morfin ta'sirida. Nat Neurosci 9: 205-211. [PubMed]

34. Hyman SE, Malenka RC (2001) Giyohvandlik va miya: majburlashning neyrobiologiyasi va uning barqarorligi. Nat Rev Neurosci 2: 695-703. [PubMed]

35. Koob GF (2008) Giyohvandlikdagi miya stress tizimining roli. Neyron 59: 11-34. [PMC bepul maqola] [PubMed]

36. Deroche-Gamonet V, Silllaber I, Aouizerate B, Izawa R, Jaber M va boshqalar. (2003) Glyukokortikoid retseptorlari kokainni suiiste'mol qilishni kamaytirish uchun potentsial maqsad sifatida. J Neurosci 23: 4785-4790. [PubMed]

37. Nestler EJ (2001) Narkomaniyaga asoslangan uzoq muddatli plastisiyaning molekulyar asoslari. Nat Rev Neurosci 2: 119-128. [PubMed]

38. Laorden ML, Ferenczi S, Pintér-Kübler B, Gonsales-Martín LL, Lasheras MC va boshqalar. (2012) Gipotalamus orexin-A neyronlari miya stress tizimining morfin chiqarilishiga javob berishda ishtirok etadi.. PLOS ONE 7: e36871. [PMC bepul maqola] [PubMed]

39. Navarro-Saragosa J, Núñez C, Ruiz-Medina J, Laorden ML, Valverde O va boshqalar. (2011) CRF (2) gipotalamus paraventrikulyar yadrosida noradrenergik faollikning oshishiga va kalamushlarda morfinni olib tashlashning salbiy holatiga vositachilik qiladi.. Br J Pharmacol 162: 851-862. [PMC bepul maqola] [PubMed]

40. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O va boshqalar. (2004) DFosB: miyada uzoq muddatli moslashish uchun molekulyar kalit. Molekulyar miya tadqiqotlari 132: 146-154. [PubMed]

41. Nestler EJ (2008) Giyohvandlikning transkripsiya mexanizmlari: DFosB ning roli. Fil Trans R Soc B 363: 3245-3255. [PMC bepul maqola] [PubMed]

42. Crespo JA, Manzanares J, Oliva JM, Corchero J, Garcia-Lecumberri C va boshqalar. (2003) Kokainni o'z-o'zini boshqarishning yo'q bo'lib ketishi gipotalamusning paraventrikulyar yadrosida kortikotropinni chiqaradigan omil gen ifodasida o'zgarishlarga olib keladi.. Molekulyar miya tadqiqotlari 117: 160-167. [PubMed]

43. Mayor M, Turchan J, Smialowska M, Prjewlocka B (2003) Amigdalaning kalamush markaziy yadrosida CRF biosinteziga morfin va kokain ta'siri. Neyropeptidlar 37: 105-110. [PubMed]

44. Núñez C, Foldes A, Laorden ML, Milanes MV, Kovacs KJ (2007) Morfinni olib tashlash paytida stress bilan bog'liq bo'lgan gipotalamus neyropeptid gen ekspressiyasini faollashtirish. J Neurochem 101: 1060-1071. [PubMed]

45. Swanson LW, Simmons DM (1989) Differensial steroid gormoni va paraventrikulyar yadroning CRH hujayralarida peptid mRNK darajasiga nerv ta'siri: kalamushda gibridizatsiya gistokimyoviy tadqiqoti. J Comp neurol 285: 413-435. [PubMed]

46. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Kortikosteronning CRH mRNKga va stria terminalisning yotoq yadrosi tarkibiga ta'siri; amigdalaning markaziy yadrosi va gipotalamusning paraventrikulyar yadrosidagi ta'sirlar bilan taqqoslash. Brain Res 657: 141-149. [PubMed]

47. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Kortikosteronning amigdala markaziy yadrosi va gipotalamusning paraventrikulyar yadrosining parvocellular mintaqasidagi kortikotropin chiqaradigan gormon mRNKga ta'siri. Brain Res 640: 105-112. [PubMed]

48. Viau V, Soriano L, Dallman MF (2001) Androgenlar gipotalamus-gipofiz-buyrak usti bezi o'qidagi faollikni tartibga solish bilan ma'lum bo'lgan old miya joylarida kortikotropinni chiqaradigan gormon va arginin vazopressin mRNKni o'zgartiradi.. Neyroendokrinologiya jurnali 13: 442-452. [PubMed]

49. Palkovits M, Young WS, Kovács K, Tóth Z, Makara GB (1998) Uzoq muddatli paraventrikulyar lezyonlar va adrenalektomiyadan so'ng markaziy amigdaloid neyronlarning kortikotropinni chiqaradigan gormon gen ekspressiyasidagi o'zgarishlar. Neuroscience 85: 135-147. [PubMed]

50. Smit RJ, Aston-Jons G (2008) Uzoq muddatli amigdalada Noradrenergik uzatish: uzoq muddatli giyohvand moddalarni iste'mol qilmaslik vaqtida giyohvand moddalarni izlash va nüks etishning ahamiyati. Brain strukturasi funktsiyasi 213: 43-61. [PubMed]

51. Sabban EL, Xiremagalur B, Nankova B, Kvetnanskiy R (1995) Katexolamin biosintetik fermentlarining stressdan kelib chiqqan induksiyasining molekulyar biologiyasi. Ann NY Acad Sci 771: 327-338. [PubMed]

52. Roozendaal B, Okuda S, de Quervain DJF, McGaugh JL (2006) Glyukokortikoidlar turli xil xotira funktsiyalariga ta'sir qilishda his-tuyg'ularni keltirib chiqaradigan noradrenergik faollashuv bilan o'zaro ta'sir qiladi.. Neuroscience 138: 901-910. [PubMed]

53. Rani CSS, Elango N, Vang SS, Kobayashi K, Strong R (2009) Sichqoncha tirozin gidroksilaza genidagi glyukokortikoid javob elementi sifatida faollashtiruvchi oqsil-1-ga o'xshash ketma-ketlikni aniqlash. Mol Pharmacol 75: 589-598. [PMC bepul maqola] [PubMed]

54. Xyuz P, Dragunow M (1995) Darhol erta genlarning induksiyasi va asab tizimida neyrotransmitter tomonidan boshqariladigan gen ekspressiyasini nazorat qilish. Pharmacol Rev 47: 133-178. [PubMed]

55. Kovacs GL, Telegdy G (1988) Gipotalamo-neyrohipofiz neyropeptidlari va eksperimental giyohvandlik. Brain Res Bull 20: 893-895. [PubMed]

56. Kovács KJ, Földes A, Sawchenko PE (2000) Glyukokortikoid salbiy teskari aloqa parvosellular neyrosekretor neyronlarda vazopressin transkripsiyasini tanlab maqsad qilib oladi.. J Neurosci 20: 3843-3852. [PubMed]

57. Frenois F, Cador M, Caille S, Stinus L, Le Moine C (2002) Nalokson bilan cho'ktirilgan morfinni olib tashlashning motivatsion va somatik tarkibiy qismlarining asabiy korrelyatsiyasi. Eur J Neurosci 16: 1377-1389. [PubMed]

58. Gold LH, Stinus L, Inturrisi CE, Koob GF (1994) Sichqonga teri ostiga morfin pelletlari implantatsiyasidan keyin uzoq muddatli bag'rikenglik, qaramlik va abstinentlik. Eur J Pharmacol 253: 45-51. [PubMed]

59. Paxinos G. va Watson C (2007) Stereotaksik koordinatalarda kalamush miyasi. Amsterdam: Akademik matbuot.

60. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I va boshqalar. (2008) Giyohvand moddalarni suiiste'mol qilish orqali miyada FosB induksiyasining aniq shakllari. Sinaps 62: 358-369. [PMC bepul maqola] [PubMed]