Inson substansiyalaridagi yangilik-sezgir dopaminerjik neyronlar Nigra deklarativ xotira shakllanishining muvaffaqiyati (2018)

Shakl 1

Vazifa, xatti-harakatlar va ro'yxatga olish joylari

(A) Lisman-Greys modelining soddalashtirilgan xulosasi.

(B) vazifa. Top: namunali sinov davomida sub'ektlarga taqdim etilgan ekranlar. Pastki: har bir ekranning ko'rsatilgan uzunligi.

(C) Davolanish. Barcha seanslarning tan olinishi aniqligi, buyurtma darajalari ko'rsatiladi. Yashil novdalar sessiyalarni tasodifiy aniqlikda ko'rsatadi; sariq chiziqlar SN tashqarisida joylashgan yozuvlar bilan seanslarni ko'rsatadi.

(D va E) Talairach kosmosida mikroelektrodlarni ro'yxatga olish joylarining Y = -16 (D) va Y = -17.2 (E). Konturlar atlasdan olingan SN va STN chegaralarini bildiradi [21]. Eng kamida bitta xotira tanlangan neyron bo'lsa, kontakt rang qizil rangda (qarang SN neyronlari yangi va taniqli stimulyatorlar orasidagi farqni ko'rsatadi va Hujayra turi tahlil qilish) bu joyda saqlangan va ko'k bo'lsa, aks holda.

(F) Kortikal yozuvlarning joylashishi. Ichki operatsiya qilingan rentgen tasviri mavjud bo'lgan oltita ro'yxatga olish seanslari davomida qayd etilgan ECoG kontaktlarining medial joylashuvi Star uslublari). Qarang Shakl S2D alohida mavzudagi misol uchun. Qayta tiklangan miya shablon miya [22].

Katta tasvirni ko'rsating | Hi-Res tasvirini ko'rish | PowerPoint slaydini yuklab oling

Highlights

• Inson aqliy nigra (SN) neyronlari ogohlantiruvchi yangilik bilan modullanadi

• Eski nigrada xotira-tanlaydigan neyronlar dopaminerjik ta'sirga ega

• SN neuronlarini frontal salınımlara o'zgarishlar qulflash, xotira hosil bo'lishini taxmin qiladi

• Lisman va Grace ning VTA / SN-hippocampus pastadir modelini odamlarda tekshiradi.

xulosa

Axborotni uzoq muddatli deklarativ xotiraga kodlashda dopamin yordam beradi. Ushbu jarayon hipokampal yangilik signallariga bog'liq, ammo o'rta miya dopaminerjik neyronlari deklarativ-xotiraga asoslangan ma'lumotlar bilan qanday modulyatsiya qilinganligi noma'lum bo'lib qolmoqda. Biz taniqli xotira vazifasini bajaradigan bemorlarda individual substratia nigra (SN) neyronlari va kortikal maydon potentsiallarini qayd etdik. Biz SN neyronlarining 25 foizini rag'batlantiruvchi yangilik bilan modulyatsiya qilinganligini aniqladik. Hujayradan tashqari to'lqin shaklining shakli va anatomik joylashuvi ushbu xotirani tanlaydigan neyronlarning taxminiy ravishda dopaminerjik ekanligini ko'rsatdi. Xotirani tanlaydigan neyronlarning reaktsiyalari stimul boshlangandan so'ng 527 msda paydo bo'ldi, bitta sinovdan so'ng o'zgardi va tanib olish aniqligini ko'rsatdi. Frontal kortikal teta chastotali tebranishlarga qulflangan SN neyronlari fazasi va bu koordinatsiya darajasi xotirani muvaffaqiyatli shakllanishini bashorat qildi. Ushbu ma'lumotlar odamning SN-dagi dopaminerjik neyronlarning xotira signallari bilan modulyatsiyalanganligini va xotirani kodlash uchun hipokampal-bazal ganglion-frontal korteks tsiklida ma'lumot oqimining rivojlanishini namoyish etadi.

Kirish

Deklarativ xotiralarning shakllanishi hipokampal sinapslarning uzoq muddatli kuchlanish va depressiya orqali kuchini tezda o'zgartirishi qobiliyatiga asoslangan [1]. Sinaptik plastisitenin kuch va davomiyligi, hujayra tashqari dopamin darajalariga bog'liq [2, 3], asosan nigrada (SN) va ventral tegmental sohada (VTA) dopaminerjik neyronlardan yasalgan aksonal terminallardan hippokampusda chiqarilgan neyromodulyator [4]. Hipokampal deklarativ xotiralarning kuchi dopaminning chiqarilishi bilan modulyatsiya qilinadi: SN / VTA faollashuvi darajasi [5, 6] va hipokampus ichidagi dopamin darajalari [2, 7] kodlash muvaffaqiyatini modulyatsiya qiladi. Hayvonlar yangi muhitga duch kelganida, dopamin darajalari ko'tariladi va hipokampada uzoq muddatli kuchlanishni engillashtiradi. Biroq, yangi muhitlar uchun ishlab chiqilgan xotira, hipokampal dopamin retseptorlari blokirovka qilinganida yo'qoladi [8]. Ushbu va boshqa kuzatishlar SN / VTA neyronlari tomonidan deklarativ xotirada chiqarilgan dopamin uchun muhim rol o'ynashiga qaramay [9, 10, 11], ushbu javobni tartibga soluvchi asosiy mexanizmlar yomon tushuniladi.

SN / VTA dopaminerjik neuronlarini mukofot va mukofot kutish xatolarining qanday o'rganilishini o'rganish [12, 13, 14] klassik shamollatish va mustahkamlashni o'rganishda SN / VTA rolini mexanantik tushunish [15]. Bundan tashqari, odamlarda SN neuronlari ham g'alati tovushlarga o'xshamaydi.16] va qaror natijalarini kodlash [17]. Bunga javoban, SN / VTA ning deklarativ xotiralarni sotib olishdagi o'rni haqida kam narsa ma'lum. SN dopaminergik neuronlar kondensatsiya vaqtida yangi ogohlantirishlarga javob berishi bilan birga [13, 18, 19, 20deklarativ xotira vazifalari paytida SN neuronlari mavjud emas. Shu sababli SN neuronlari yangi ogohlantirishlardan xabardor bo'ladimi yoki bunday faollashtirish xotirani kodlash muvaffaqiyatiga bog'liqligini bilmasligi noma'lum.

Dopaminerjik tizim va hipokampus SN / VTA dopaminerjik neyronlarni vaqtincha harakatga keltiradigan, hippokampali dopamin retseptorlari faollashishi natijasida hipokamp bosimining kuchayishiga olib keladigan hipokampali yangilik signallari bilan boshlangan multisynaptic loopni taklif qiladi (Shakl 1A)9, 23]. Asl gipoteza SN va VTA ga taalluqli bo'lsa-da, bizning diqqatimiz bu erda faqat SNda bo'ladi va shuning uchun SNga tegishli prognozlarga quyidagi bahslarni cheklab qo'yamiz. Bundan tashqari, biz munozarani dopaminerjik SN nöronlarına cheklamaymiz, chunki GABarerjik nöronlar dopaminerjik (DA) nöronları inhibe qiladi [24], ularning javoblarini gipoteza bilan ham tenglashtiradilar. Hipokampus-SN / VTA loop farazlari [9, 23] deklarativ xotiralarga nisbatan uchta aniq bashorat qiladi: birinchi navbatda, SN neyronlarining faoliyati deklarativ xotira vazifalari paytida stimulyatorning yangilanishi bilan modulyatsiya qilinishini taxmin qiladi. Ikkinchidan, bu modulyatsiya stimulning boshlanishiga nisbatan paydo bo'lishini taxmin qiladi, avval hipokampusta, keyin SN. Uchinchidan, agar deklarativ xotira uchun zarur bo'lsa, yangi stimullar paytida SN faoliyati keyingi xatti-harakatlar bilan baholanganidek, xotirani shakllantirishning muvaffaqiyati yoki muvaffaqiyatsizligini taxmin qilishi kerak. Bu erda biz ushbu uchta bashoratni odamlarda to'g'ridan-to'g'ri SN neyronlarining faolligini qayd etish va ularning faoliyatini xulq-atvorda baholangan xotira kuchi bilan bog'lash orqali sinab ko'ramiz.

Bizning sub'ektlarimiz va biz boshqalar inson hipokampusundaki yangilik signalizatsiya neyronlarini ta'riflagan xotira xotirasi vazifasini bajarishdi [25]. Ushbu xotira-tanlaydigan neyronlarning davomiy tebranish tebranishlari bilan modulyatsiya qilinganligi, xotira shakllanishining muvaffaqiyatli yoki muvaffaqiyatsizligini prognoz qiladi [26]. Dopamin ushbu vazifada xotira shakllanishining muvaffaqiyati uchun muhim hisoblanadi, chunki SN neuronlarining faoliyati davom etayotgan tota tebranishlari bilan qo'shimcha ravishda muvofiqlashtirilganmi yoki yo'qmi degan savolni ko'taradi. Theta-frekans va boshqa past frekanslı salınımlar kortikal va subkortikal joylar orasidagi axborot oqimini muvofiqlashtirishda juda muhimdir [27, 28, 29SN / VTA, hipokampus va korteksni o'z ichiga oladi. Biroq, SN neyronlari va korteks o'rtasidagi neytral faoliyatni muvofiqlashtirish ham deklarativ xotira shakllanishida muhim rol o'ynash-olmasligidan xabardordir. Bu erda biz bir vaqtning o'zida SN neuronlarning faolligini kortikal faoliyat bilan muvofiqlashtirilgan yoki yo'qligini aniqlash uchun frontal lobdan kortikal maydon potensiali bilan birga SN neuronlarining faolligini va bu koordinatsiyalashning xotira hosil bo'lishining yutug'idir.

natijalar

Vazifa va xatti-harakatlar

23 ta mavzu (28 sessiyalari; Jadval S1) yoki Parkinson kasalligi (PD) ni davolash uchun subtalamik yadroda (STN) chuqur miyani stimulyatsiya qilish vositasi (DBS) implantatsiyasini o'tkazishda davom etsa yoki doimiy titroq vazifasini bajaradigan bo'lsa, doimiy xotira vazifasini bajaradi. Ikkita ro'yxatga olish sessiyalari chiqarib tashlandi, chunki sub'ektlar tasodifiy darajada bajarildi va SN tashqarisida yozuvlar qilinganligi sababli uch sessiya chiqarib tashlandi Raqamlar 1D va 1E). Shunday qilib, tahlil uchun 23 sessiya qoldi.

Mavzularga bir qator tasvirlarni ko'rish va har bir tasvirni yangi yoki tanishShakl 1B) Mavzular o'zlarining javoblarini ko'rsatish uchun "yangi" yoki "eski" tugmachani bosishdi (tajriba o'rtasida tugma identifikatori o'zgartirildi). Har bir rasm uch martagacha taqdim etildi. Birinchi taqdimot "roman", qolgan ikkita taqdimot esa "tanish" deb nomlanadi. Mavzular yaxshi natijalarga erishdi, o'rtacha tanib olish aniqligi 82% (± 8%, ± SD; Shakl 1C) Shuningdek, sub'ektlar o'rganishni davom ettirdilar, chunki ikkinchi tanish taqdimot paytida (87% ± 13%) birinchisiga nisbatan (74% ± 12%, t [22] = 5.62, p = 0.0005, almashtirish t sinov). Agar boshqacha ko'rsatilmagan bo'lsa, tahlil qilish uchun faqat to'g'ri sinovlardan foydalanilgan. Savol ekranining boshlanishi va tugmachani bosish o'rtasidagi o'rtacha vaqt 0.69 ± 0.99 s ni tashkil etdi, yangi (1.12 ± 1.06 s) va tanish javoblar (1.05 ± 0.90 s, t [22] = 1.17, p o'rtasida reaktsiya vaqtida sezilarli farq yo'q edi). = 0.26, permutatsiya juftlashgan t test). Har birimiz foydalangan tasvirlar uchta turli xil vizual toifalarga (hayvonlar, landshaftlar va mevalar) tegishli edi. Vizual kategoriya funktsiyasi sifatida reaktsiya vaqtida sezilarli farqlar mavjud emas edi (ANOVA bir tomonlama permütasyon: F [2,44] = 2, p = 0.13). Ushbu xulq-atvor ma'lumotlari birgalikda bemorlarning vazifani aniq bajarganligini ko'rsatadi. Operatsiyadan oldingi neyropsixologik baholash testi ushbu kuzatuvga mos keldi (qarang Jadval S1).

elektrofizyolojisi

Biz 66ning YNdan qayd etilgan yaxshi ajratilgan yagona neyronlarni aniqladik. Raqamlar 1D va 1E stereotaktik koordinatalardan aniqlanganidek, Talairax kosmosidagi barcha ro'yxatga olingan joylarning joylarini ko'rsatadi (shuningdek, Star uslublari va Raqamlar S2E va S2F). Neyronlar sifat jihatidan spektrning saralash sifatini o'lchash metodikalari yordamida kantitativ tarzda baholandi.Shakl S1). Qo'lyozma davomida biz neyron, birlik va hujayra atamalarini birma-bir neyron degan ma'noni anglatadi. Har bir mikroelektroddan, shuningdek, mikroelektrod uchidan 3 mm yuqorida joylashgan past impedansli elektrod aloqasi yordamida maydon potentsialini qayd etdik (Shakl S2A). Bundan tashqari, dorsal fronto-parietal miya yuzasi bo'ylab joylashtirilgan, markaziy sirkkaga oldinga va orqaga cho'zilgan subdural strip elektrod yordamida kortikal sirt (elektrokortikografiya [ECoG]) signallari qayd etildiRaqamlar S2B-S2D). Biz EKG elektrodlari va ular bilan bog'liq kortikal joylarini operatsiyadan keyingi tomografiya va medial nervlarni uyg'unlashtiruvchi kombinatsiya yordamida joylashtirdik (qarang. Star uslublari va Raqamlar S2C va S2D). Barcha ECoG yozuvlarining medial joylashuvi Shakl 1F.

SN neyronlari Vizual stimuliga javob beradi

Neyronlarning yangilik / tanishlikka qaramasdan, barcha sinovlarni birgalikda ko'rib chiqishda tasvirning boshlanishiga javob sifatida o'zlarining otish tezligini o'zgartirganligini birinchi marta sinovdan o'tkazdik. Star uslublari). 14/66 (21.2%, p = 0.002, null taqsimot bilan taqqoslaganda); Shakl 2A) neyronlar tasvirning paydo bo'lishiga javoban o'zlarining otish tezligini o'zgartirdilar (qo'zg'alish boshlanishidan 0-1.5 soniya o'tgach oynadagi tirgaklarni stimul boshlanishidan oldingi -0.5-0 soniya bilan taqqoslash). Ushbu "tasvirga javob beradigan" neyronlarning beshtasi otish tezligini boshlang'ich darajasiga nisbatan oshirdi (ko'rsatilgan neyronning namunasi Shakl 2C) va 9 ularning otish tezligini pasaytirdi (misol neyron Shakl 2D) Yong'in tezligini oshirgan neyronlar, ularning otish tezligini pasaytirganlarga qaraganda sezilarli darajada tezroq javob berishdi (224.8 ± 138.5 ms ga nisbatan 426 ± 141.9 ms, t [12] = 2.58, p = 0.03, permute t test; qarang Shakl 2B).

Ko'pchilik inson miya hududlarida neyronlar ingl. Toifalar orasida farq qiladi [30]. Shuning uchun biz SN neyronlarining javoblari tasvirlarning uch xil vizual toifalari (hayvonlar, landshaftlar va mevalar) o'rtasida farq qiladimi, deb so'radik. Biz SN toifasidagi neyronlar uchun dalillarni topa olmadik: ANOVA bir tomonlama permutatsiyasida vizual toifaga moslashtirilgan neyronlarning ko'pligi aniqlanmadi (N = 6, 9.1%, p = 0.16; Shakl 2A). Medial temporal lobdan (MTL) farqli o'laroq [30], SNda ingl. toifadagi signalni topmadik.

SN neyronlari yangi va taniqli stimulyatorlar orasidagi farqni ko'rsatadi

Keyin SN neyronlari bir ogohlantiruvchi roman (birinchi marta ko'rsatilgan) yoki tanish (ikkinchi yoki uchinchi marta ko'rsatilgan) ekanligini tasdiqladik. Bu erda biz bunday neyronlarni xotira-tanlaydigan (MS) nöronlar deb ataymiz [25]. SN neyronlarning javoblari yangi va tanish tajribalar o'rtasidagi stimulning paydo bo'lishidan so'ng neyronlarning javoblarini taqqoslash yo'li bilan ushbu naqshni namoyish qiladimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik. Biz birinchi navbatda taniqli ogohlantiruvchilardan ko'ra yangi otishni o'rganish nisbati bo'lgan kichik guruhga e'tibor qaratdik (qarang Star uslublari). 11 bunday neyronlarni aniqladik (Raqamlar 3A-3C; Nol taqsimot bilan taqqoslaganda 16.6%, p = 0.002; Shuningdek qarang Shakl S3A). Milodiy neuronlari bu kichik guruhga "yangilik" neuronlari deb qaraymiz. Yangi va tanish ogohlantiruvchilar o'rtasidagi javobning bu farqi, tasvir ikkinchi marta ko'rinsa, allaqachon ravshan edi (Shakl 3D, o'rtada). Javob qoldi, ammo xuddi shu rasmning ikkinchi va uchinchi taqdimotini taqqoslaganda yanada kuchaymadi (t [10] = 1.36, p = 0.21, permute paired t test; qarang Shakl 3D, o'ng). Bundan tashqari, yangi va tanish stimullar o'rtasidagi javob farqi bir xil tasvirning ketma-ket ikkita namoyishi orasidagi kechikishga bog'liq emas edi (F [3,30] = 0.22, p = 0.88, ANOVA bir tomonlama permütasyon; qarang Shakl 3E).

Keyin biz boshqa SN neyronlari tanish tasvirlarga javoban ularning otish tezligini oshiradimi yoki yo'qligini tekshirdik. Biz 6 neyronni (9%, p = 0.01, null taqsimot bilan taqqoslaganda; shuningdek qarang.) Shakl S3B) yangi obrazlar bilan taqqoslaganda tanishlarning sezilarli o'sishini ko'rsatdi. Yangilik neyronlari singari, bunday "tanish" neyronlarning javobi xuddi shu tasvirning ikkinchi va uchinchi taqdimoti o'rtasida o'zgarmadi (t [5] = 0.7, p = 0.06; Shakl 3D) va bir xil tasvirning ketma-ket taqdimotlari orasidagi kechikish davomiyligi bilan modulyatsiya qilinmagan (F [3,15] = 2.12, p = 0.14; Shakl 3E). Birgalikda bu ma'lumotlar SN neyronlarning sezilarli ulushining (16.6% va 9.0%; Shakl 3A) deklarativ xotira vazifasida tasvirlar yoki yangiliklarni tanishligi bilan modulyatsiya qilingan. Eng muhimi, ushbu o'zgarish bitta o'qitishdan so'ng paydo bo'ldi (Shakl 3D) yangiligi va tanish neyronlari uchun.

17 yangiliklari va tanish neyronlari MS neyronlari (masalan,Shakl 3A). 4 MS neyronlari, shuningdek, tasvirga javob beruvchi neyronlar sifatida baholandi (ya'ni, ular birgalikda ko'rib chiqilgan barcha sinovlar uchun otishni o'rganish tezligining o'zgarishini ko'rsatdilar). Shakl 2). Ushbu kichik uyg'unlikning sababi, imtiyozli bo'lmagan rag'batlantiruvchi toifaga javobning yo'qligi. Buni ko'rsatish uchun biz faqat yangi yoki tanish bo'lgan sinovlarning otishni o'rganish tezligini (neyronning qaysi sinov turiga sezgir bo'lganiga qarab) dastlabki otishni o'rganish tezligi bilan taqqosladik. Bu shuni ko'rsatdiki, MS hujayralari tasvirni namoyish qilish paytida (0-1.5 s, 7.23 ± 17.9 Hz) tortishish tezligi dastlabki darajaga nisbatan (-0.5-0 s, 6.2 ± 20.9 Hz, t [16] = 1.38, p = 0.042) , permuted paired t test), lekin faqat ularning afzal ko'rilgan sinov turi uchun (yangi yoki tanish; bu MS neyronlarni tanlashda boshlang'ich otish tezligi hisobga olinmasligi sababli tanlov bilan emasligini unutmang).

Biz ushbu xotira signalining elektrodning chayqalishi yoki sekin harakatlanish darajasining o'zgarishi kabi boshqa omillarga bog'liq emasligini tekshirish uchun qo'shimcha tekshiruvlar o'tkazdik. Birinchidan, dastlabki davrda shunga o'xshash farqlar mavjud emasligini tasdiqladik: na yangilik, na tanish turdagi MS neuronlari bunday farqni ko'rsatmadi (Shakl 3D, chap; yangilik neyronlari [t [0] = 10, p = 0.07] va tanish neyronlar uchun 0.94 ga nisbatan sezilarli darajada farq qilmaydi [t [5] = 0.58; p = 0.54]). Shuningdek, biz tanlov uchun stimuldan keyingi boshlanish davri emas, balki boshlang'ich davridan (-0.5-0 s) foydalansak, qancha MS neyronlari tanlanishini sinab ko'rdik. Ushbu tahlil 1 ta birlikdan atigi 1.5 tasini (66%) yangi va tanish obrazlar o'rtasida sezilarli farq bilan aniqladi. Va nihoyat, biz MS neyronlarining otish tezligidagi farqni tushuntiradigan omillarni aniqlash uchun aralash effektli regressiya modelidan foydalandik. Bashoratchilar sifatida biz rasm tanishligi va sinov raqamini ishlatdik (tasodifiy effekt sifatida neyron klaster identifikatori ishlatilgan). Ushbu tahlil shuni ko'rsatdiki, tasvirni tanish regressori sinov sonining ta'sirini hisobga olgandan keyin ham ahamiyatli bo'lib, har ikkala MS neyron turi uchun sinov raqami regressoridan ancha kuchliroq edi (yangilik neyronlari: t [864] = 8.95, p <1e-30 yangi uchun / eski regressorga qarshi t [864] = 1.67; sinov raqami regressor uchun p = 0.09; tanish neyronlar: t [501] = 7.24, p / 1e-12 yangi / eski regressor uchun t [501] = 3.67, p = 0.0002 sinov raqami regressori uchun). Va nihoyat, biz tajriba davomida yangi va tanish stimullarni tasodifiy aralashtirib yuborganimizni unutmang. Ushbu nazorat tahlillari birgalikda javoblardagi farqni elektrodlarning harakatlanishiga bog'lab bo'lmasligini tasdiqlaydi.

SN MS neuronlari xulq-atvorini kuzatish

Keyinchalik, MS neyronlarining javoblari (yangilik va tanishishni afzal ko'rgan neyronlar uchun alohida sinovdan o'tgan) ularning javoblari sub'ektning xatti-harakatlari bilan xilma-xilligini baholash orqali xotira bilan bog'liqligini tekshirdik. Xususan, biz bemorlarning to'g'ri eslab qolishgan ("eski" javob) bilan noto'g'ri ogohlantirgan ("yangi" javob) bilan tanish bo'lgan ogohlantirishlarga (ilgari kamida bir marta ko'rsatilgan) asabiy reaktsiyalarini taqqosladik. Xulq-atvorda bemorlar yaxshi ishlashni namoyish etdilar: ular birinchi takrorlash paytida ("tanish 74") rasmlarning 1 foizini va ikkinchi takrorlashdan keyin 87 foizini ("tanish 2") esladilar (haqiqiy ijobiy ko'rsatkich). Biz tanish bo'lgan rasmlarni noto'g'ri tanish bo'lgan vaqtga nisbatan yangitdan yangi deb baholagan sinovlar paytida yangilik hujayralarining reaktsiyasi sezilarli darajada susayganligini aniqladik, otish tezligi farqi 0.36 ± 0.36 Hz, noto'g'ri va 0.60 ± 0.24 Hz. to'g'ri sinovlar uchun (qarang Shakl 3F; t [11] = 2.72, p = 0.02, permute juftlashgan t testi; ishlatilgan o'lchov, tasvir yangi bo'lganida va boshlang'ich otishni o'rganish tezligi bilan normallashganida otish tezligining farqi edi). Ushbu taqqoslash uchun biz dastlabki yangi taqdimot noto'g'ri (noto'g'ri ijobiy) bo'lgan sinovlarni chiqarib tashladik, shuning uchun kuzatilgan farq faqat unutilgan rasmlarga (yolg'on salbiy) tegishli bo'lishi mumkin. Biroq, kichikroq bo'lsa ham, unutilgan tanish stimullarga javob hali ham noldan sezilarli darajada farq qiladi (Shakl 3F; t [11] = 3.98, p = 0.002, permute t test). Birgalikda, ushbu tahlil shuni ko'rsatadiki, yangilik neyronlarining javobi tanish stimulni eslab qolish yoki unutish to'g'risida dalolat beradi. O'zlarining otish tezligini (n = 6) tanish tasvirlarga oshiradigan neyronlar uchun bu xatti-neyronlarning faolligi o'zaro bog'liqligi miqdor jihatidan o'xshash, ammo ahamiyatli bo'lmagan (Shakl 3F; t [5] = 2.31, p = 0.056).

Javobni kechiktirish

Ruhlantiruvchi boshlang'ichdan so'ng MS SN neuronlarining yangi va taniqli tasvirlar o'rtasidagi farq qanchalik tez paydo bo'ldi? Bu savolga javob berish uchun javoblarni yangi va taniqli tasvirlar orasidagi farqni o'z vaqtida birinchi bor baholagan edik. Yuqori aniqlikdagi neyronning differentsial kechikishini taxmin qiladigan uskuna bo'lib,31]. O'rtacha differentsial kechikish tasvir paydo bo'lgandan keyin 527 ms bo'lganligini aniqladik (Shakl 3G). Biz ushbu kechikishni boshqa bemor populyatsiyasida shunga o'xshash yangi / eski tanib olish vazifasi paytida MTLda qayd etilgan MS neyronlarining kechikishi (n = 122) bilan taqqosladik [32, 33]. MTLdagi MS neyronlarining o'rtacha differentsial kechikishi 311 ms ni tashkil etdi, bu SN bilan taqqoslaganda sezilarli darajada tezroq edi (p = 0.013, bu maydon yorliqlari tasodifiy qayta tayinlangan empirik ravishda taxmin qilingan null taqsimot asosida baholangan). Ushbu natija, ularning otish tezligini yangilik va tanish stimullarga oshirgan MS neyronlarni ko'rib chiqishda ham to'g'ri keldi (p = 0.002 va p = 0.002, neyronlar, mos ravishda n = 64 yangilik va MT = n = 58 tanish neyronlarga nisbatan). Javoblarning bunday tartibi hipokampus va VTA / SN o'rtasidagi o'zaro ta'sirning Lisman va Greys modeli bilan mos keladi [9].

Hujayra turi tahlil qilish

SN neyronlarning ikkita asosiy turini o'z ichiga oladi: GABAerjik neyronlar va dopaminerjik neyronlar, masalan, striatum, amigdala va hippokamp [4, 34, 35, 36]. Ekstrasellular qayddan foydalangan holda, hujayralardagi turli hujayralar hujayradan ortiqcha oriqqa to'lqin shaklining kengligi va o'rtacha otishni o'rganish tezligi kombinatsiyasi asosida ajratilishi mumkin [37]. Ayniqsa, SN'de dopaminerjik nöronların GABAerjik nöronlarla bilan solishtirganda yanada keng to'lqin shakllari va undan kam olov oranlarına ega bo'lgan ma'lum [38, 39], bu esa barcha neyronlar bo'ylab to'lqin shakli kengligining bimodal taqsimlanishiga olib keladi. Biz aniqlangan barcha neyronlarda (N = 66) boshoq kengliklarining tarqalishi ikki modali (Xartiganning tushish statistikasi: 0.0717, p = 0.006 [40]; qarang Raqamlar 3H va 3I). Shunday qilib, biz MS neyronlari ma'lum bir hujayra turiga mansubligini tekshirdik. MS neyronlari o'rtacha bo'lmagan MS neyronlariga nisbatan uzunroq to'lqin shakllari bilan xarakterlanganligini aniqladik (1.15 ± 0.23 ms ga nisbatan 0.96 ± 0.32 ms; to'lqin shaklining uzunligi ikki ijobiy tepalik o'rtasida o'tgan vaqt sifatida o'lchandi [14] to'lqin shaklining; t [65] = 2.65, p = 0.012, almashtirish t testi; Raqamlar 3H va 3I). Bundan tashqari, MS neyronlari avvalgi ishda belgilangan DA neyronlari mezonlarini qondirdilar: 15/17 MS neyronlari to'lqin shakllari 0.8 ms dan yuqori va otish tezligi 15 Hz dan past [14, 41]. MS neyronlari aniqlangan ro'yxatga olingan joylar, asosan, SN ning dorsal qismlaridaRaqamlar 1D va 1E). Ushbu natijalar, dopaminerjik neyronlarning aksariyat qismi joylashgan pars kompaktaning joylashuviga mos keladi [42, 43]. Birgalikda, ushbu tahlillar biz aniqlagan MS neyronlari taxminiy ravishda dopaminerjik bo'lgan degan fikrni qo'llab-quvvatlaydi.

SN-Korteks shovqinlari

SN neyronlarning bazaviy ganglionlardan va / yoki kortikal sirtdan daladagi potensial faoliyat bilan bog'liq faoliyati xisoblanganmi? Biz ushbu savolga javob berish uchun o'lchov sifatida shpal maydon koherensiyasini (SFK) qo'llagan holda shpak-maydon ta'sirini aniqladik. Birinchidan, SN neyronlari va bazal ganglionlarda (STN) qayd etilgan yarim himoyachi potentsiali orasidagi SFC, tok-chastota diapazonidaShakl 4A, chap panel; p = 0.05 da 2-5 Hz da barcha N = 56 neyronlari bo'ylab etarli boshoqli). Shuni esda tutingki, bu erda maydon potentsiali, ehtimol mikroelektrod uchidan 3 mm balandlikda yozuv kontakti joylashganligi sababli SN emas, balki STN dan qayd etilgan (qarang. Star uslublari va Shakl S2A) Ikkinchidan, SN neyronlarining faolligi kortikal maydon potentsiali bilan ham muvofiqlashtirilgan edi: SN neyronlari kortikal yuzasidan qayd etilgan teta va ECoG signallarining alfa chastota diapazonining ba'zi bosqichlarida ko'proq otishni afzal ko'rgan (SFC 6 the12 Hz da sezilarli darajada farq qilgan) chastota diapazoni, N = 61, p <0.05; Shakl 4A, o'ng panel; statistika ma'lumotlariga qarang; Shuningdek qarang Shakl S4 barcha elektrodlar uchun). Bu faqat markaziy sulkusning old tomonida joylashgan bir juft ECoG kontaktlari uchun to'g'ri keldi (+2 deb belgilangan; boshqa kontaktlar ahamiyatsiz edi; qarang Shakl S4). +2 ECoG kontaktlari Brodmann sohasidagi 6-chi frontal girusda joylashgan (premotor korteks). Ushbu topilma SN neyronal faolligi funktsional ravishda frontal lobning ushbu mintaqasi bilan bog'liqligini ko'rsatadi (qarang muhokama). Keyinchalik, ushbu funktsional ulanishning keyinchalik unutilgan yangi sinovlar bilan eslab o'tilgan yangi sinovlar orasidagi kuchini taqqoslab, xatti-harakati bilan bog'liqligini tekshirdik.

Ilgari izlanishlar va modelni kiritish asosida [26], biz yangi obrazlarni kodlash jarayonida boshoqli maydonlarning muvofiqligi darajasi sub'ektlar yangi xotirani muvaffaqiyatli kodlash-qilmasligini bashorat qiladi deb taxmin qildik. Ushbu gipotezani sinab ko'rish uchun biz SFC-ni yangi obrazlarni ko'rish paytida, keyinchalik to'g'ri eslab qolgan sinovlar bilan keyinchalik unutilgan (ya'ni yangi deb belgilangan) sinovlar o'rtasida taqqosladik. Xotirani taqqoslash bilan bog'liq bo'lgan ushbu farq shuni ko'rsatdiki, keyinchalik eslab qolgan tasvirlar kodlash paytida markaziy sulkus oldidan o'lchangan ECoGlar uchun teta chastota diapazonida yuqori SFC bilan birga kelgan (N = 58 neyron, 3-9 Hz, p <0.05; Shakl 4B, o'ng panel; statistika uchun afsonani ko'ring). E'tibor bering, ushbu hisoblash faqat tasvir birinchi marta ko'rilgan (roman) va mavzu "yangi" deb to'g'ri belgilangan sinovlarni o'z ichiga oladi. Shu sababli, javob har doim bir xil edi ("yangi"), bu farq motorni rejalashtirishdagi farqlarga bog'liqligini istisno qildi. SFC-ga o'xshash barcha sinovlarni hisobga olgan holda, bu farq faqat old motorik korteksda joylashgan markaziy +2 kontaktidan (markaziy sulkus +2) qayd etilgan maydon potentsiali uchun muhimdir. Shakl 4B; Raqamlar 4C va 4D misolida neyronning SFK va o'rtacha o'simtani tetiklasa). Biz bazal gangliyadan daladagi potensial yozuvlar bilan o'xshash munosabatni ko'rmadik (STN; Shakl 4B, chap panel; barchasi p> 0.05). Tekshirish sifatida biz ECoG quvvatini ikkala shart o'rtasida taqqosladik, ammo sezilarli farqlarni topmadik (Shakl 4E; barchasi p> 0.05). Birgalikda, bu shuni ko'rsatadiki, SN neyronal faolligi va frontal kortikal maydon potentsial faolligi o'rtasida prekotor korteksdan qayd etilgan SFC darajasi muvaffaqiyatli xotirani shakllantirishni bashorat qilgan.

Qanday qilib bu uzoq masofali boshoq / maydonlarni muvofiqlashtirishga erishish mumkin edi? Ushbu savolga javob berish uchun biz keyingi bosqichda bemorlar yangi suratlarni tomosha qilayotganda olingan bazal ganglionlardagi (STN) va korteksdan olingan ECoG yozuvlari orasidagi bosqich-muvofiqlik tahlilini o'tkazdik; Star uslublari). Ushbu tahlil shuni ko'rsatdiki, yangi xotiralarni muvaffaqiyatli kodlash teta chastota diapazonida (5-10 Hz) sezilarli darajada yuqori darajadagi uyg'unlik bilan bog'liq. Shakl 4F; p <0.05; statistika uchun afsonani ko'ring). SFC topilishiga o'xshab, bu ta'sir faqat markaziy sulkus +2 elektrodida kuzatildi (Shakl 4G). Markaziy sulkus +2 elektrodidan yozilgan ECoG signallarining kuchi, stimul boshlangandan keyin taxminan 500 ms dan boshlangan, beta-tasma kuchining sezilarli pasayishini ko'rsatdi, bu ehtimol harakatni tayyorlash bilan bog'liq edi (Shakl 4H). Ushbu beta-pasayish avval tota chastotasi kuchini oshiradi (Shakl 4H), stimulning boshlanishiga qisqa vaqt ichida boshlangan. Ushbu naqsh tasvirlangan ishni frontal korteksdagi tota tebranish kuchini oshiradi, bu SN neuronlari ularning faoliyati va frontal kortikal tetalar o'rtasidagi muvofiqlashtirish darajasini modulyatsiya qilishi mumkin bo'lgan mexanizmni ta'minlaydi. Bu erda biz bunday faza qulflash darajasini xotira kodlash muvaffaqiyatining prognozi ekanligini ko'rsatamiz, bu esa toto chastota diapazoni oralig'i xotira kodlash paytida joylar o'rtasida ma'lumotlarni uzatishni muvofiqlashtiradi.

muhokama

Biz inson nixoyatidagi neyronlardagi individual neyronlarning faoliyati hipokampga bog'liq deklarativ xotira vazifasida yangi va taniqli tasvirlar o'rtasidagi farqni aniqladik. Bundan tashqari, frontal tetra frekans salınımlı SN nöronlarının faoliyati muvofiqlashtirish darajasi muvaffaqiyatli xotira oluşumunun öngörüsüdür. Qadimgi ishda inson SN nöronlarının mukofot tahminindeki xatolarga javob berishiga qaramay [14] va g'alati paradigmada juda kam ovozlar [16], bizning ma'lumotlarimiz, bizning ma'lumotimizga ko'ra, odamlarda deklarativ xotirani shakllantirish paytida SN neyronal faolligini tavsiflovchi birinchi tadqiqotdir.

Biz tasvirlagan xotira selektiv hujayralarining elektrofizyologik xususiyatlari bu kameralar ehtimol dopaminergik ekanligini ko'rsatadi. Bu xulosa ikkita ma'lumotga asoslangan: to'lqin shakllarining kengligi va anatomik joylashuv. Dopaminergik neuronlar SNda joylashgan GABAerjik neyronlarga qaraganda ancha keng tarqalgan hujayra to'lqin shakllariga ega [38, 39, 44]. Bundan tashqari, SN davomida dopaminergik neuron mavjud bo'lsa-da, aksariyat qismi SN ning chasti kichik qismida joylashgan [42, 43]. Ko'pgina dopaminerjik neyronlar MS neyronlarning aksariyatini topib olgan SN ning dorsal medial qismida joylashgan bo'lishi kerak. Birgalikda, bu mezonlar, elektrofizyolojik xususiyatlarga asoslangan SN'de dopaminerjik va GABarerjik nöronları ishonchli ravishda ajratib ko'rsatilgan [38, 39, 44, 45, 46]. Ushbu tasdiqning qat'iy tasdig'i yoki histologik tahlil [47] yoki genetik maqsadlar [38]. Bu neyronlarni, bu natija faqatgina hujayradan tashqari yozuvlarga asoslanganligini ko'rsatish uchun, bu neyronlarni dopaminergik deb ataymiz.

Ikkinchi fikr - bu davom etayotgan neyrodejeneratsiyaning bizning natijalarimizga ta'siri. Tadqiqotda qatnashganlarning aksariyati PDga ega edi va shuning uchun SN tarkibidagi dopaminerjik hujayralarni sezilarli darajada yo'qotishidan aziyat chekdilar. Biroq, bizning yozuvlarimiz dopaminerjik neyronlarning etarlicha populyatsiyasi PD da hamon ishlaydigan anatomik sohaga kirdi. PDdagi dopaminerjik yo'qotish tengsiz rivojlanadi [48, 49], ayrim joylarga boshqalardan ko'ra ko'proq jiddiy e'tibor qaratilgan. PD kasalliklarida o'pka to'qimasini tahlil qilish odatda SN ning kaudal qismida katta miqdorda dopaminerjik neyronlarning yo'qolishini ko'rsatadi va taxminan 90% hujayralar yo'qoladi. Aksincha, dorsal sohalarda hujayra yo'qotilishi o'rtacha darajadagi (50% yoki undan kam) normal qarish paytida kuzatilishi mumkin bo'lgan daraja bilan taqqoslanadigan darajada bo'ladi [49]. Haqiqatan ham, STN DBS jarrohlik amaliyotiga o'tadigan bemorlarda bir nechta tadqiqotlar natijali dopaminerjik neyronlardan qayd etishga muvaffaq bo'ldi [14, 41]. STNdagi jarrohlik maqsad bilan SN yozuvlarini asosan SN ning dorsal joyida joylashishini kutish o'rinli. Ushbu taxmin elektrod pozitsiyalarini tahlil qilish bilan tasdiqlandi, bu SN dorsal qismida joylashgan ko'plab yozuvlarni ko'rsatdi, bu erda kasallikning ta'siri nisbatan past bo'lishi kerak [49]. Shunga qaramasdan, PD biz yozgan qolgan DA neyronlarning to'lqin shakllariga ta'sir ko'rsatishi mumkinligi noma'lum. Biz to'lqin shaklining davomiyligi bilan kasallik zo'ravonligining korrelyatsiyasini aniqlamagan bo'lsak-da (qarang Star uslublari), bu masala ochiq savol bo'lib qolmoqda. Nihoyat, bizning tadqiqotimizga kiritilgan bemorlar post-mortem analizidan kattaroq bo'lgan PD bosqichlarida edi [48, 49Shuning uchun SN ning dorsal joylarida yuqori dopaminergik hujayralarni saqlab qoling.

Hipokampal xotira jarayonlarining dopaminerjik modulyatsiyasining o'rni, muhim narsalar uchun sinaptik plastisitani kuchaytirish, masalan, foydali narsalar, maqsadga mos keladigan yoki diqqatni o'ziga qaratadigan,9, 23]. SN / VTA ga erishish uchun ushbu signal uchun tavsiya etilgan yo'ldir, motivatsiya va e'tiborli jarayonlarga vositachilik qiladigan ikkala tuzilma bo'lgan yadro akumbens (NA) va pedunculopontin tegmental nukleusdan (PPTg)50, 51]. NA va PPTg, o'z navbatida, prefrontal korteks (PFC) va hipokampusdan olingan ma'lumotlarni qabul qilib, ularni mavjud maqsadlar va ogohlantiruvchi yangilik haqidagi signallarni birlashtiradi [23, 50, 51]. Gipokampal yangilik signallari gipokampus ichida ushbu multisinaptik yo'l orqali dopamin ajralishini keltirib chiqaradi deb taxmin qilingan [9, 23]. Bu erda SN ichidagi proportsional dopaminerjik neyronlarni ushbu gipotezaga mos keladigan, chunki ular yangi ogohlantiruvchi kuchga aylanish tezligi bilan javob berishgan. Qizig'i shundaki, innovatsion neuronlardan tashqari, biz ham ma'lum dozaga ega bo'lgan dopaminerjik neyronlarni aniqlagan edik. Neyronlarning ushbu guruhidagi javob xarakteristikalari yangidan neyronlarga o'xshash edi (Raqamlar 3D, 3E va 3H), bundan mustasno, agar ular taniqli stimulni eslab qolish yoki esdan chiqarishni sezilarli darajada ko'rsatmasa (lekin bu, ehtimol, statistik kuchning etishmasligi bilan bog'liq). Garchi bu neyronlar Lisman va Greysning nazariy modeli tomonidan to'g'ridan-to'g'ri taxmin qilinmasa ham, ehtimol ular o'rganishda ham rol o'ynaydi. Masalan, DA ning turli konsentratsiyalari sinaptik depressiyaga yoki kuchayishga olib kelishi mumkin [52] va DQ darajalari uzoq muddatli kuchlanish (LTP) / uzoq muddatli depressiya (MM)53]. Bu shuni ko'rsatadiki, tanish stimullar uchun DA darajasini oshiradigan neyronlar ushbu gomeostazni saqlashda ishtirok etishi mumkin. Bundan tashqari, har xil turdagi dopamin retseptorlari har xil sezuvchanlik va faollashish chegaralariga ega va plastisitning turli jihatlari, jumladan, xotiralarni konsolidatsiya qilish bilan birga kodlashda vositachilik qiladi [54, 55]. Birgalikda, bu adabiyot bizning topilganimiz bilan birgalikda tanish neyronlarning allaqachon kodlangan xotiralarni mustahkamlash uchun xizmat qiladigan plastisitik mexanizmlarda rol o'ynagan farazini qo'llab-quvvatlaydi. Ushbu farazni bevosita sinab ko'rish uchun kelgusi ish kerak.

SN javoblarining kechikishi, shuningdek, Lisman va Grace modellariga mos edi, ya'ni SN MS javoblari MTLda kuzatilganlarga nisbatan ancha keyin paydo bo'ldi [33]. Bu erda biz SN reaktsiyalari birinchi marta stimul boshlangandan so'ng 527 ms ni ko'rishganini aniqladik, bu vaqt MTLda kuzatilgan 311 ms oralig'idan kattaroq edi [.32]. Bu taqqoslashning ikkitasi turli kasal populyatsiyalaridan (PD va epilepsiya) olingan. Birgalikda bizning natijalarimiz SNda kuzatilgan ogohlantirish yangiliklari haqidagi ma'lumotlar MTLda paydo bo'lishi haqidagi fikrni qo'llab-quvvatlaydi. Eng muhimi, SN hujayralarining modulyatsiyasining darajasi sub'ekt ma'lum bir ogohlantirishni to'g'ri tan oladimi yoki yo'qligini ko'rsatadi. Ushbu natija, SN hujayralarining javoblari bizning sub'ektlarimiz bajaradigan deklarativ xotira vazifasi uchun qiziqish bilan bog'liqligini ko'rsatadi. Ushbu topilma, shuningdek, insoniy tadqiqotlar asosida, SN fMRI-qon kislorod darajasiga bog'liq (BOLD) faoliyati muvaffaqiyatli xotira hosil bo'lishini taxmin qiladi [5, 6]. Biroq, SN va BOLD signalidagi turli hujayra turlarining faoliyati o'rtasidagi munosabatlarning nima ekanligini noma'lumligicha qolmoqda (ammo qarang [56]). Buning aksincha, biz bu erda maxsus SN hujayra turlarini elektrofizyolojik sifatida tanladik va ogohlantiruvchi boshlanishidan ko'p vaqt o'tmay, prognozli DA neyronlarning fasik faoliyati ekanligini ko'rsatdik, bu esa xotira shakllanishining prognozidir.

SN neuronlarning faoliyati frontal korteksdagi (prematüre korteksinde o'lchagan) tota salınımlarının fazıyla muntazam ravishda bog'liq ekanligini ko'rdik. Ushbu muvofiqlashtirish xatti-harakatga bog'liq edi, chunki o'zgarishlar qulflash darajasi xotira shakllanishi muvaffaqiyatining tasavvuridir. Teta chastota diapazonidagi tebranishlarning MTL, bazal ganglionlar va frontal korteks o'rtasidagi axborot oqimini muvofiqlashtirish [27, 28, 29]. Bu erda, hozirgi kunda, odamlarda, SN nöronal otishni o'rganish, kortikal teta frekanslı salınımlarla bilan bog'liq ekanligini va bunday muvofiqlashtirish xotira shakllanishi uchun qiziqishlariga bog'liq ekanligini ko'rsatadi. Bazal ganglion va frontal korteks o'rtasidagi tetaker sinxronlashning ahamiyati avvalgi kognitiv vazifalarni bajaradigan bemorlardagi avvalgi yozuvlar bilan belgilanadi [57, 58]. Qizig'i shundaki, 4 Hz sekin STN stimulyatsiyasi kognitiv vazifalarni bajarilishini yaxshilaydi [58]. Asosiy noma'lum narsa shundaki, biz aniqlangan teta salınımları hipokampal teta bilan bog'liq yoki sinxronlashtirilgan [27, 28, 29].

STN ning antidromik stimulyatsiyasi odamlarda "hiperdirect" yo'l bilan mos keladigan prematüre kortekste qisqa latans ta'sirini ko'rsatadi [59]. Shunday qilib, MTL ma'lumotidan NA va PPTg orqali SN ga (1) erishish mumkin bo'lgan kamida uchta yo'l bor; (2) hiperdirect yo'nalishi orqali; va (3) striatum orqali, frontal korteksning ko'pchiligi bilan bog'langan [60]. Bunday boy innervatsiya SN va frontal korteksning funktsional qaramligini BOLD-fMRI [61, 62]. Bundan tashqari, BOLD faoliyatida frontal korteksda yangi xotira muvaffaqiyatli kodlashni taxmin qiladi [63], maqsadli ma'lumotni kodlashni osonlashtirish va ko'plab ma'lumotlarning birma-bir xotiraga o'tkazilishida frontal korteks rolini (premotoriya maydonlarini o'z ichiga olgan) aks ettiruvchi signaldir [63]. Hozir biz ushbu ma'lumotni dopaminerjik SN faolligini modulyatsiya qilish orqali xotira kodlash kuchiga ta'sir qilishi mumkin bo'lgan mexanizmni namoyish etamiz. SN neyron faolligi hipokampal teta tebranishlari bilan ham muvofiqlashtirilganligini va bu teta tebranishlari bu erda o'lchangan frontal kortikal teta tebranishlari bilan qanday bog'liqligini aniqlash uchun kelajakdagi asosiy tajriba bo'ladi.

rahmat

Biz bemorlarning ushbu ishda ishtirok etishiga tayyor ekanligimizni minnatdorchilik bilan qabul qilamiz. Cedars-Sinay operatsiya xonasi xodimlariga yordam uchun Robert Zelaya va Lori Scheinostga texnik neurofiziologiya yordami uchun va Jeffrey Vertxaymga bemorlarni nöropsikologik baholash uchun minnatdormiz. Ralph Adolphs va Rutishauser laboratoriyasining barcha a'zolariga munozara uchun minnatdormiz. Ushbu tadqiqot Pfeiffer fondi tomonidan urug'lik mablag'lari hisobidan amalga oshirildi va NIH NINDS (U01NS098961), NSF CAREER mukofoti (BCS-1554105) va Norvegiya uchun McKnight fondi fondi (barcha UR) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

Mualliflar hissasi

UR va JK eksperimentni ishlab chiqdi. JK, UR, KB va CPM eksperimentlarni amalga oshirdi. JK va UR tahlil qildilar. ANM va KB operatsiya qildi. MT bemorni parvarishlashni ta'minladi. JK, ANM va UR qog'ozni yozdi. Barcha mualliflar loyihaning barcha bosqichlarida natijalarni muhokama qildilar.

Qimmatli qog'ozlar deklaratsiyasi

Mualliflar hech qanday raqobatbardosh manfaatlar bildirmaydi.

Qo'shimcha ma'lumot

Hujjat S1. Raqamlar S1-S4 va Jadval S1