Fadok JP, Darvas M, Dikerson TMK, Palmiter RD
(2010). PLOS ONE 5 (9): e12751. doi: 10.1371 / journal.pone.0012751
Jonathan P. Fadok1,2, Martin Darvas2, Tavis MK Dikerson 2, Richard D. Palmiter2
1 Neyrobiologiya va xulq-atvorda magistr dasturi, Vashington universiteti, Sietl, Vashington, Amerika Qo'shma Shtatlari,
2 Biokimyo bo'limi va Xovard Xyuz tibbiyot instituti, Vashington universiteti, Sietl, Vashington, Amerika Qo'shma Shtatlari
Neyrotransmitter dopamin (DA) Pavlovning qo'rquvini o'rganish uchun juda muhimdir paradigma qo'rqinchli kuchlanish deb ataladi (FPS). ULARNING sintez qilish qobiliyatiga ega bo'lmagan sichqonchalar konditsioner stimulyator va qo'rquvni keltirib chiqaruvchi taglik o'rtasidagi munosabatni bilishmaydi. Ilgari biz ventral tegmental hududning (VTA) neyronlarga DA sintezini qayta tiklash FPSni tiklash uchun etarli ekanini ko'rsatdik. Bu erda VTA dan signal olishni oluvchi qaysi mezokortikolimbik miya mintaqalari FPS uchun DA ni talab qilishini aniqlash uchun maqsadli tanlangan virusli ta'mirlash usuli qo'llanildi. Biz FSning uzoq muddatli xotirasi uchun DA simptomatik ham amigdala (BLA) va nukleus akumbens (NAc) ga qayta tiklanishini talab qilamiz. Ushbu ma'lumotlar qo'rquv bilan bog'liq xotirani shakllantirishda ishtirok etadigan dopaminga bog'liq bo'lgan devredeki muhim ma'lumotni beradi.
Kirish
DA, miyadagi alohida nukleuslarda, jumladan, gipotalamus, xushbo'y lampochka va ventral midbren [1] bilan neyronlar tomonidan sintezlanadi. Bunday prefrontal korteks, hipokampus, amigdala sifatida qo'rquv havoni uchun muhim bo'lgan miyangiz miya joylari, uchun qorin o'rta miya loyihasining VTA va MAK [1], [2] yilda DA neyronlar, [3]. Qo'rqinchli vaziyatda DA ning roliga muvofiq, DA neyronlarning otish tezligi ogohlantiruvchi ogohlantiruvchi va [4], [5], [6] natijalari haqida ogohlantiruvchi ogohlantirishlarni o'zgartiradi. Bundan tashqari, qo'rqinchli ogohlantirishlarga yoki stressli holatlarga javoban, DA darajalari bir nechta limbik miya mintaqalarida oshadi [7], [8], [9], [10] va DA funktsiyasi iqtisodiyot va genetik manupulasyonlar [11], [12], [13], qo'rquv chiniqtirish paradigmalar [14] o'rganishni buzishi mumkin.
Pavlovyaning konditsionerlik sharoitida, nur kabi neytral shartli rag'batlantiruvchi, ayanchli kabi shafqatsiz mutlaqo rag'batlantiriladi. Treningdan so'ng, konditsioner stimulning taqdimoti qo'rquv javoblarni keltiradi [3]. FPS keng tarqalgan bo'lib ishlaydigan Pavlovian qo'rqinchli paradigma bo'lib, unda o'rganish akustik qo'zg'alishdagi javob [15] orqali belgilanadi. Biz ilgari VTAdagi DA neyronlari FPS paradigmida [12] o'rganish uchun etarli ekanligini namoyish qildik. Bundan tashqari, biz BLAda QQ qisqa muddatli xotira (STM) ishlab chiqarish uchun etarli ekanligini namoyish qildik. VTA DA neyronlarning qolgan maqsadlaridan NAc eng katta innervasyonu oladi va shuning uchun FPS [2] uchun LTM tashkil etish uchun asosiy nomzod sayt hisoblanadi.
Katta adabiyot, NAc doirasida, mukofotlashtirilgan paradigmalarda [16] assotsiativ ta'lim jarayonlari uchun rolni qo'llab-quvvatlaydi. Hozirgi vaqtda NAcdagi DA ning Pavlovianning qo'rquv sharoitida o'rganish uchun muhimligi aniq emas. Shunga qaramasdan, tadqiqotlar qo'rqinchli ogohlantiruvchi va prognostik signallarni [10] ga javoban NAc da DA darajasini oshirdi. Bundan tashqari, NAc [16], [17], kuchli xuruj uchun muhim bo'lgan yadro hisoblanadi va DA ham NAc va BLA [18], [19], [20], [21 ]. Shu sababli, Pavlovning qo'rqinchli hodisasi uchun BLA va NAc o'rtasidagi ulanish va ushbu hududlarning har ikkalasida ham signal signalizatsiyasi talab qilinishi mumkin.
Pavlovning konditsionerlik sharoitida LTM uchun NAc va BLA uchun DA ning zarurligini aniqlash uchun biz loxP-qavatli transkripsiyal / translatsion stopni kiritish sababli DAni sintez qilish qobiliyatidan mahrum bo'lgan dopaminning etishmasligi (DD) sichqon modelidan foydalanganmiz tirozin gidroksilaz (Thfs) genida [22] kassetasi. Cre rekombinatsiyasining mavjudligida, DA signalizatsiyasi to'xtatish kasetini olib tashlash orqali Thfs alelinin qayta faollashuvi orqali aniq maqsadli hududlarga qay tarzda tiklanishi mumkin. Biz qaytib rekombinatsiyani ekspluatatsiya qilish yo'li bilan DA ni yoki faqat NAc va BLA ni tanlab qayta tiklash uchun ekspluatatsiya qilingan virusni ishlatganmiz. Bizning natijalarimiz NAC va BLA da DA FPS uchun LTM yaratish uchun etarli ekanligini ko'rsatib turibdi.
natijalar
Virusdan qutqargan DD sichqonlarida THni qayta tiklash
FPS uchun LTM ning shakllanishida miya DA ning qaerda kerakligini aniqlash uchun DA funktsiyasi CWX sichqonlarida CAV2-Cre rekombinatsiyasini inyeksiyasi orqali tiklandi. Ushbu virus sinchkovlik bilan selektiv ravishda infektsiyalanadi va retrograd orqali [23] inyeksiya joyidan ko'chiriladi. DD sichqonlarida DA neyronlarning maqsad yadroiga AOK yuborilsa, bu virus ventral midbrenaning DA neyronlariga qaytariladi, bu erda floxed stop kasetini chiqaradi, ug genini qayta yoqadi, TH ishlab chiqarishni qayta tiklaydi va DA ishlab chiqarilishi faqatgina tanlangan maqsadlar [22]. Biz bu usulni ikkita alohida sichqonchani kogortasida qo'lladik. NAc VTA [2] ning DA neyronlarining eng katta maqsadi bo'lgani uchun biz ushbu yadro FPS uchun LTM shakllanishi uchun juda muhim bo'lishi mumkinligini taxmin qildik; shuning uchun CAV2-Crening ikki tomonlama in'ektsiyalari NACga bitta kogortada kiritildi. Shuningdek, VTT uchun VTAning bir nechta maqsadlarida AI talab qilinishi mumkinligi haqidagi farazni sinab ko'rdik. Buni sinash uchun ikki tomonlama in'ektsiya DD sichqonlarining NAc va BLA-ga kiritildi.
Immunohistokimyo virus infektsiyasini DD sichqonlarida TH funktsiyasini tiklashni tasdiqlash uchun ishlatilgan (shakl 1). Kutilganidek, DA transport vositasi (DAT) bilan birgalikda nazorat sichqonlari NAc da TH uchun kuchli signal bor edi (shakl 1A-D). TH shuningdek, nazorat sichqonlarining BLA (shakl 1E) da aniqlandi; Biroq, DAT immunoreaktivitesi BLA'da juda past edi va shuning uchun gösterilmemiştir. Immunohistokimyo, shuningdek AOK qilinmagan DD sichqonlaridan miya to'qimasi bo'yicha o'tkazildi (shakl 1 F-J). NAc (1F, G) shaklida aniqlanadigan TH signali mavjud emas edi, ammo DAT binoni mavjud edi (shakl 1H, I). DD sichqonlarining BLA ko'pincha TH boyitishi bilan chegaralanmagan (shakl 1J).
Shakl 1
Virusdan qutqargan DD sichqonlarida THning tanlangan restavratsiyasi.
NAc tomonidan kiritilgan DD sichqonlarining immunohistokimyosi TH ning katta miqdordagi NAc (1K-N) ga qayta tiklanganligini ko'rsatdi. NAc-AOK qilingan DD sichqonlarining BLA (S-1O) aniqlanishi mumkin emas edi. NAc va BLA ga ikki marta qutqarish NAc (Fig. 1P-S) da TH uchun mustahkam signal va BLA (Fig. 1T) da kuchli TH signaliga sabab bo'ldi. Ushbu ma'lumotlar CAV2-Crening virusli in'ektsiyasini AOK qilingan miya hududlariga xos bo'lgan TH ekspresyonini tiklashda juda samarali ekanligini ko'rsatadi.
THning virusli qutqaruvi AOK qilingan DD sichqonlarida DAni qayta tiklashga olib kelganini tasdiqlash uchun yuqori samarali suyuqlik kromatografiyasini (HPLC, Table 1) ishlatib, DA, DA metabolitlari va norepinefrinni aniqladik. Ushbu tajriba uchun biz NAc yoki amigdalada qutqaruvni amalga oshirdik. Bundan tashqari, DA prognozlarining bir maqsadida qutqarish boshqa darajadagi AOK sathidan ta'sir qilmaydi. Dopaminning yo'qolgan DD sichqonlarining nazorat ostida DA darajalarining NAc va 0.51% da amigdaladagi nazorat darajalariga ega ekanligini aniqladik. NAc-qutqargan DD sichqonlari NAc ning 1.39% nazorat guruhi bo'lgan DA darajalariga ega edi; ammo amigdalda AOK darajasi AOK bo'lmagan DD darajasiga teng bo'lgan (34.0%). Amigdala qutqargan DD sichqonlari amigdala darajasida 1.57% nazorat ostida bo'lgan DA darajalariga ega edi, ammo NAcdagi DA darajalari saqlanmagan DD darajalari (38.4%) bilan bir xil edi. Ushbu natijalar TH-ning virus yordamida vositachiligini qutqarish DD sichqonlarining AOK qilingan maqsadli hududlarida ALARA darajasini ko'tarilishiga olib keladi.
Bundan tashqari, NAc yoki amigdalanga virusni kiritilishi boshqa maqsadda DA darajasining ko'tarilishiga olib kelmadi. Nihoyat, TH DD sichqonlarida [24], [25] noradrenergik nöronlarda ifoda etilganligi sababli, DD sichqonlarida BLA ning IHCda ko'rilgan kichik miqdorini noradrenergik aksonlarga yuborganmiz. Qutqarilmagan DD sichqonlarining BLA-da norepinefrin mavjudligi HPLC bilan tasdiqlangan (Jadval 1).
1 stol
ULARNING, SH va DA metabolitlarining HPLC miqdori.
Dopamin uzoq muddatli xotira uchun NAc va BLA talab qilinadi
Qo'rquv kuchaygan qo'rquv - bu Pavlov konditsiyasining bir shakli bo'lib, unda shartli qo'zg'atuvchi akustik qo'zg'alish reaktsiyasini kuchaytiradi [15]. DA ning faqat NAc yoki faqat NAc va BLA ga tanlab qayta tiklanishi akustik qo'zg'alish reaktsiyasining o'zini buzmasligini ta'minlash uchun boshqaruv elementlari va qutqarilgan DD sichqonlari uchun hayratlanarli javob egri chiziqlari yaratildi (2A-rasm). Ikki tomonlama takroriy o'lchovlar tahlili (RM ANOVA) tovush intensivligining sezilarli ta'sirini aniqladi (F (4,172) = 37.1, p<0.01), ammo davolash o'zaro ta'siri bo'yicha hech qanday guruh yo'q. DA funktsiyasining buzilishi, shuningdek, FPSni buzishi mumkin bo'lgan sensorimotor eshiklardagi farqlarga olib kelishi mumkin [15], [26]. Sensomotor eshikni tahlil qilish uchun barcha sichqonlar impulsdan oldingi inhibisyon (PPI) paradigmasida bir necha darajalarda sinovdan o'tkazildi (2B-rasm). Prepulse intensivligining sezilarli ta'siri bor edi (RM ANOVA F (2,86) = 57.79, p <0.01), ammo davolanishning o'zaro ta'siri bo'yicha hech qanday guruh yo'q. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, bizning eksperimental manipulyatsiyalarimiz natijasida DA signalining NAC yoki NAc va BLA ga tanlab qutqarilishi akustik qo'zg'alish reaktsiyasini yoki sensorimotor eshikni o'zgartirmagan. 2-rasm DA ning NAc va BLA ga qayta tiklanishi LTM uchun etarli. FPS uchun. Sichqonlar qo'rquvni tartibga soluvchi paradigmaga duchor bo'lishdi (2C-rasm). Trening davomida sichqonlarga 30 ta sinov o'tkazildi, unda 10 soniyalik yorug'lik belgisi engil oyoq zarbasi (0.5 sek, 0.2 mA) bilan birlashtirildi. Qisqa muddatli xotira (STM) mashg'ulotdan 10 daqiqadan so'ng sinovdan o'tkazildi va LTM 24 soatdan keyin sinovdan o'tkazildi. Konditsionerdan oldin guruhlar o'rtasida sezilarli farqlar yo'q edi. Treningdan so'ng, STM NAc va BLA ni qayta tiklash bilan DD sichqonlarida to'liq tiklandi. NAc-in'ektsiya qilingan DD sichqonlarida STM buzilgan, ammo bu ta'sir ahamiyatli bo'lmagan; ammo, ular nazorat sichqonlariga qaraganda sezilarli darajada kamroq LTMga ega (p<0.05; Bonferroni posttest). LTM NAc va BLA ga ikki tomonlama kiritilgan DD sichqonlarida nazorat darajasiga to'liq tiklandi. Oyoq zarbasiga xatti-harakatlar reaktsiyasida guruhlar o'rtasida sezilarli farqlar yo'q edi (2D-rasm). Ushbu ma'lumotlar NAc va BLAdagi DA FPS uchun LTMni osonlashtirish uchun etarli ekanligini ko'rsatadi.
muhokama
DA, amigdala, NAc va hippocampus [27], [28], [29] kabi birlamchi limbik miya mintaqalarida LTM ning birlashuviga va shakllanishiga yordam beradi deb hisoblaydi va avvalgi tadqiqotlar, 13]. Bundan oldin, biz FS paradigmasida xotira izini barqarorlashtirish uchun DA muhimligini ko'rsatdik [12]. Bundan tashqari VTA funktsiyasini VTA dan kelib chiqqan mezokortikolimbik devorga tiklash FPS uchun STM va LTMni tiklash uchun kifoya edi, ammo faqat BLA-ni tiklash uchun faqat STM [12] qayta tiklandi. Shu bilan birga, ushbu turdagi ta'limda LTMni shakllantirish uchun zarur bo'lgan DA harakati maydonchalari noma'lum edi. Bu erda, NAC va BLA ga DA sintezini FPS uchun LTM uchun yetarli ekanligini ko'rsatishimiz mumkin. Bundan tashqari, NAcga prognoz qilingan THning DA neyronlarini restavratsiya qilish STMni BLAni tiklashda [12] yoki BLA va NAc uchun qayta tiklashda samarali emasligini aniqlaymiz. Bu NTM ni STMga qaraganda NAc ni yaratish uchun muhimroq bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.
Virusli qayta tiklash yondashuviga potensial ogohlantirish, DA neyronlarning kafolatli prognozlarni bir nechta maqsadga yuborishi mumkin. Shunday qilib, NAcga virusni AOK yuborish BLA ga TH, va shu bilan birga DAni tiklashi mumkin. Bizning immunohistokimyoviy natijalar NAc ni innervatsiya qilayotgan DA neyronlari BLAni innervatsiya qilishning aniq bir populyatsiyasi ekanligini ko'rsatadi, chunki virusni bir miya hududida in'ektsiya qilish bu hududdagi nafaqat TH boyitilishi. HPLC natijalari ushbu argümanni kuchaytiradi, chunki DQ darajalari NAc-qutqargan DD sichqonlari NAc da amigdala emas, balki ko'tariladi. Ushbu topilmalar prognozli maqsadga [30], [31], [32], [33] asosida DA neyronlarning heterojenitesini o'rgangan ko'plab tadqiqotlar bilan mos keladi.
Pavlovning xavf-xatarini oldini olish uchun NAc va BLA-da zarur bo'lgan asosiy mexanizm va mexanizmlar hal etilmagan. Qizig'i shundaki, BLA NAc [16], [34] -ga prognozlar yuboradi va bu sinapslar uzoq vaqt davomida potensiatsiyadan, [35] ta'lim va xotira asosiy hujayra korrelyatsiyasini boshdan kechirishlari mumkin. Bundan tashqari, DA, BLA va NAc [18], [21] da LTP ni osonlashtiradi. Shunday qilib, Pavlov qo'rquv havoni davomida, u bla yilda DA DA esa milliy aviakompaniyamiz yana osonlashtiradi yilda, MAK [19] qaysi loyiha shu hujayralar, jumladan, [20], [36], glutamaterjik piramidal Uyali faoliyatini [34] osonlashtiradi mumkin BLA ning LTP'si NAc sinapslariga yuboriladi va shu bilan LTM hosil bo'lishiga yordam beradi. FS uchun BLA va NAc da DA-ga bog'liq voqealarning aniq vaqtini aniqlash ushbu jarayonni tushunishimizni oshiradi.
Materiallar va usullari
Axloqiy bayonot
Barcha sichqonlarga Milliy Sog'liqni saqlash institutlari tomonidan belgilanadigan ko'rsatmalarga muvofiq va sichqoncha bilan protseduralar Vashingtondagi Institutsional Hayvon Qo'llash va Foydalanish Qo'mitasi (2183-02) tomonidan tasdiqlangan.
Hayvonlar va davolanish
DD sichqonlari [22] tavsiflangan tarzda ishlab chiqarilgan. Qisqacha aytganda, DD (Thfs / fs; DbhTh / +) sichqonlari Cre rekombinatsiyasi bilan shartli ravishda qayta faollashtirilishi mumkin bo'lgan ikkita faol bo'lmagan tirozin gidroksilaz (Th) allelini tashiydi. DD sichqonlarining bir dopaminli b-gidroksilaza (Dbh) allelasi va nukeinfrinning [24], [25] ning normal ishlab chiqarilishiga ruxsat berish uchun Th geni maqsadli kiritilishi bilan bir Dbh aleli bor. Tekshirish hayvonlari eng kamida bitta buzilmaydigan Th aleli va bitta buzilmagan Dbh allelini olib yuradilar. Erkak va ayol sichqonlar 2-6 oylik davrda qiziqishlariga qarab tekshirildi. Barcha sichqonchalar oziq-ovqat bilan birga (12LJ12; PMI Feeds, Sent-Luis, MO) va suv bilan ta'minlangan suv bilan harorat nazorati ostida bo'lgan muhitda 5 5 (yengil: qorong'u) tsikli ostida joylashtirildi. Barcha yurish-turish tajribalari yorug'lik davrida o'tkazildi. DD sichqonchani og'ir hypophagic Chunki, ular 3 bir hajmi ml / g, boshlang'ich taxminan post-Natal kun mg / kg kunlik (qorin ichidan) 4 da 50, 33-dihidroksi-L-fenilalanin (L-Dopa) AOK qilingan 10 [25]. Virusli in'ektsiyadan so'ng DD sichqonlari L-Dopaning kunlik dozalari bilan L-Dopaning qo'shimcha davolashini etarlicha ovqatlanmagunicha ushlab turildi.
Virusli infektsiyalar
Isofluran (1.5-5%) - anesteziyalangan sichqon stereotaksik vositaga (David Kopf Instruments, Tujunga, KA) joylashtirildi. yadrosida Th gen funksiyasini tiklash uchun yolg'iz accumbens, ikki tomonlama sanchiladi edi (2 × 2.1 zarralar / ml da titered) qayta birlashtiruvchi CAV1012-Cre virus (mm muvofiqlashtiradi: Bregma uchun 1.7 oldingi, 0.75 lateral, o'rta chiziq uchun 4.75 qorin Bregma qilish; 0.5 mL / yarim sharni) DD va nazorat sichqonlariga joylashtiring. MAK va bla uchun DA ikki tiklash uchun, CAV2-Cre virus sifatida yuqorida, MAK ichiga ikki tomonlama AOK qilindi va BLA (mm muvofiqlashtiradi: 1.5 posteriorunda Bregma, o'rta chiziq uchun 3.25 lateral, 5 qorin Bregma uchun; 0.5 ml / Yarimorfera) va sichqonchani nazorat qilish. Virusli vektorning batafsil tavsifi [22] chop etildi. Viruslar bir mikro infuzion nasosga (WPI, Sarasota, FL) biriktirilgan 10-gauge shprits ignasi (Hamilton, Reno, NV) yordamida 32-min davrida AOK qilingan. Faqat NAcdan va ikkilamchi qutqaruvchi guruhlardan nazorat sichqonlari bir guruhga bo'lingan va har qanday qiziqish parametrida farq qilmagan.
apparat
[12] tasvirlanganidek, prepulse inhibitsini, boshlang'ich javoblarni va xavf-xatarni kuchaytirgichni o'lchash uchun ovoz chiqaruvchi boshlovchi kameralar (SR-Lab, San-Diego Instruments, San-Diego, KA) ishlatilgan. Javobning tepadagi amplitudasi prepulse inhibisyonini, boshlang'ich javoblarni, qo'rquvni kuchaytirib yubordi va zarba reaktivligini hisoblash uchun ishlatildi. Ovoz darajalari ovoz balandligi o'quvchi (RadioShack, Fort-Uert, TX) yordamida tasdiqlangan. Kalitratsiya bloki (S-Diego Instruments, San-Diego, CA). Nishon sifatida foydalanish uchun boshlang'ich qutining orqa devoriga 8 vattli yorug'lik o'rnatilgan.
Ishga tushirish javob eğrileri
5-daqiqada ishlab chiqilgan vaqtdan keyin hayvonlarga 10 seriyali sinab ko'ringan ovozli puls darajalari: 105 db uchun 30 soniyali ITI bilan hech qanday tovush bo'lmagan null dan tortildi. Barcha ovoz pulslari 40 msec edi.
Oldindan impuls inhibatsiyasi
PPI [12] ta'rifi bilan o'lchanadi. Qisqacha, bir odatlash davriga kelib, sichqonchani 5, 40-msec, 120-dB, pulse-o'zi sinovlari bilan taqdim etdi. Keyinchalik sichqonchani 50 sinovlari bilan yoki uchta prepulslik (5, 10 va 15-dB fondan yuqori) sinovlaridan biri bo'lgan boshlang'ich nafas olish jarayonining sinovlari yoki akustik stimulyator bo'lmagan null sinovda taqdim etildi. Prepulse inhibisyoni quyidagi formula yordamida har bir prepulse darajasi uchun hisoblandi:% inhibisyon = [(prepulse sinovida o'rtacha boshlang'ich javob / pulse-alohida sinovda o'rtacha boshlang'ich javob) × 100].
Qo'rquv kuchayib borayotgan boshmoq
Barcha sichqonchalar 3-kunlik FPS paradigmasını [12] bilan ta'riflanganidek sinovdan o'tkazildi. Qisqacha aytganda, dastlabki sichqonlarga 20 sinovlaridan bir-biriga o'xshash tasodifiy tartibda buyurtma berildi, bunga nuqta va nishon shartlari o'rtasida teng taqsimlandi. 2 kunida sichqonchani 30-mA, 2 s soniyasiga ega bo'lgan 10-soniya nishonchasi uchun 0.2 juftligini (0.5 min o'rtacha ITI) oldi. Sichqoncha qisqa muddatli xotirani sinashdan oldin 10 daqiqa davomida o'z uy qafaslariga joylashtirildi. 3 kunida LTM baholandi. Quyidagi formuladan qo'rqqan potentsial qo'zg'aluvchanlikni hisoblash uchun foydalanildi:% potentiation = [(sinovlar bo'yicha javoblarning o'rtacha soni / no nuktada ishlamasdan javoblar soni - 1) × 100].
Immunohistokimyo
Sichqoncha miya to'qimasi [12] ta'rif etilganidek, standart metodlarni qo'llash orqali histologik tahlil uchun tayyorlangan. Erkin yuruvchi koronali sektsiyalar (30 μm) quyon anti-TH (1 2000, Millipore) va anti-DAT (1 1000, Millipore) antikorlari bilan immunostained qilindi. Ikkinchi darajali antikorlar Cy2 yoki Cy3 konjugatlashgan (1 200, Jekson ImmunoResearch). Fotosuratlar vertikal nurli mikroskop (Nikon) bilan olingan.
Yuqori sifatli suyuqlik kromatografiyasi
Sichqoncha Beuthanasia (xNUMX mg / kg) bilan euthanized, so'ngra miyalar chiqarildi va muzli marmar plastinkaga joylashtirildi. Sichqoncha miya matritsasidan (Activation Systems, Warrren, MI) 250-mm kalinlikta NAc yoki amigdala orqali olingan. Keyinchalik to'qimalar (1-mm diametri) olingan, 1 ml mikrosantrifuj naychalariga joylashtirilgan va tezda suyuq azotda muzlatilgan. Namunalar 1.7 ° C da saqlanadi, ular quruq muzdan tahlil qilish uchun Neyroximiya yadro laboratoriyasiga (Venderbilt universiteti Molekulyar nevrologiya tadqiqotlari markazi) jo'natildi.
Statistik tahlil
Statistik tahlil GraphPad Prizma dasturi yordamida amalga oshirildi (La Jolla, Kaliforniya).
rahmat
Larri Zweifelga qo'lyozma, Glenda Froelick va Albert Kintanani gistologiya bo'yicha yordam berish uchun va Valerie Wallni sichqon koloniyasiga parvarish qilish uchun foydali ma'lumotlar uchun minnatdormiz. CAV2 uchun doktor Migel Chillon (CBATEG ning Vector Production Unit) Barselona Universitat Autonoma-da rahmat.
Izohlar
Raqobatchilarning qiziqishlari: Mualliflar hech qanday raqobatbardosh manfaatlar mavjud emasligini e'lon qildilar.
Moliyalashtirish: Ushbu tekshiruv qisman Xovard Xyuz Tibbiyot Instituti, Sog'liqni saqlash xizmati, Milliy tadqiqot xizmati mukofoti, T32 GM07270, Milliy tibbiyot fanlari milliy instituti va NIH milliy tibbiyot institutlarining Grant 4 R25 GM 058501- 05. Mablag'larni o'rganish, ma'lumotlarni yig'ish va tahlil qilish, nashr etish to'g'risida qaror yoki qo'lyozmani tayyorlashda hech qanday rol o'ynamagan.
Manbalar
1. Bjorklund A, Dunnett SB. Miyada dopamin neyron tizimi: yangilanish. Trends Neurosci. 2007; 30: 194-202. [PubMed]
2. Maydonlar HL, Hjelmstad Go, Margolis EB, Nikola SM. Tushkunlikka tushgan xulq-atvorda ventral tegmental hudud neyronlari va ijobiy mustahkamlash. Annu Rev Neurosci. 2007; 30: 289-316. [PubMed]
3. Maren shahri Rabva mahallasi Pavloviyning nevrologiya xavfi. Annu Rev Neurosci. 2001; 24: 897-931. [PubMed]
4. Brischoux F, Chakraborty S, Brierley DI, Ungless MA. Ventral VTA dopamin neyronlarini zararli stimulyatsiyalar orqali fasik uyg'otish. Proc Natl Acad Sci AQSh A. 2009; 106: 4894-4899. [PMC bepul maqola] [PubMed]
5. Guarraci FA, Kapp BS. Uyqudali quyonda differentsial pavlitsion qo'rqinchli sharoitda ventral tegmental soha dopaminerjik neyronlarning elektrofizyologik xarakteristikasi. Behav Brain Res. 1999; 99: 169-179. [PubMed]
6. Joshua M, Adler A, Mitelman R, Vaadia E, Bergman H. Midbrain dopaminergik neyronlar va striatal kolinergik internoronlar turli xil mumtoz konditsionerlik sinovlari turli davrlarida mukofot va hodisalar o'rtasidagi farqni aniqlaydi. J Neurosci. 2008; 28: 11673-11684. [PubMed]
7. Abercrombie ED, Keefe KA, DiFrischia DS, Zigmond MJ. Striatumda in vivo dopaminning tarqalishi, stressning differensial ta'siri, nukleus akumbenslari va medial frontal korteks. J Neurochem. 1989; 52: 1655-1658. [PubMed]
8. Inglis FM, Mogaddam B. Amigdala dopaminerjik innervatsiyasi stressga katta ta'sir ko'rsatadi. J Neurochem. 1999; 72: 1088-1094. [PubMed]
9. Kalivas PW, Duffy P. Dopamin transmissiyasini stress bilan yadro aksumbensining qobig'ida selektiv faollashuvi. Brain Res. 1995; 675: 325-328. [PubMed]
10. Pezze MA, Heidbreder CA, Feldon J, Murphy K. Nukleus akumbens yadrosi va qobiq dopaminini selektiv javob beradigan kontekstual va diskret stimullarga javob berish. Neuroscience. 2001; 108: 91-102. [PubMed]
11. de Oliveira AR, Reimer AE, Brandao ml. Dopamin D2 retseptorlari mexanizmlari shartli qo'rquv ifodalangan. Farmakol Biochem Behav. 2006; 84: 102-111. [PubMed]
12. Fadok JP, Dickerson TM, Palmiter RD. Dopamin qo'rg'oshinga bog'liq bo'lgan qo'rquvni nazorat qilish uchun kerak. J Neurosci. 2009; 29: 11089-11097. [PMC bepul maqola] [PubMed]
13. Pezze MA, Feldon J. Mesolimbikning qo'rquv sharoitida dopaminerjik yo'llar. Prog Neurobiol. 2004; 74: 301-320. [PubMed]
14. Ponnusamy R, Nissim HA, Barad M. D2-kabi dopamin retseptorlarining tizimli himoyasi sichqonlarda konditsioner qo'rquvni yo'qqa chiqarishga yordam beradi. Mem. 2005; 12: 399-406. [PMC bepul maqola] [PubMed]
15. Ko`ch M. Qiziqishning neyrobiologiyasi. Prog Neurobiol. 1999; 59: 107-128. [PubMed]
16. Sesack SR, Greys AA. Cortico-Bazal Ganglia mukofoti tarmog'i: mikrosxemalar. Neyropopsikofarmakologiya. 2010; 35: 27-47. [PMC bepul maqola] [PubMed]
17. McGaugh JL. Amigdala hissiyotni uyg'otadigan voqealar xotiralarini mustahkamlashni modulli qiladi. Annu Rev Neurosci. 2004; 27: 1-28. [PubMed]
18. Bissiere S, Humeau Y, Luthi A. Dopamin bachadon inhibatsiyasini bostirish yo'li bilan lateral amigdalada LTP induksiyasini boshlaydi. Nat Neurosci. 2003; 6: 587-592. [PubMed]
19. Kroner S, Rosenkranz JA, Greys A.A., Barrionuevo G. Dopamin in vitro bazolateral amigdala neyronlarning eksitabilitesini modulyatsiya qiladi. J Neurophysiol. 2005; 93: 1598-1610. [PubMed]
20. Marowsky A, Yanagava Y, Obata K, Vogt KE. Interneuronlarning ixtisoslashtirilgan sindromi amigdala funktsiyasining dopaminerjik yordamini yaxshilaydi. Neyron. 2005; 48: 1025-1037. [PubMed]
21. Wolf ME, Sun X, Mangiavacchi S, Chao SZ. Psikomotor stimulyator va nöronal plastisite. Neyrofarmakologiya. 2004; 47 (Suppl 1): 61-79. [PubMed]
22. Hnasko vagon, Perez FA, Scouras nom, Stoll EA, Gale SD, va boshq. Dopamin etishmaydigan sichqonlardagi nigrostriatal dopaminning rekombinatsiyali vositasini qayta tiklash hipofagiya va bradikiniyni o'zgartiradi. Proc Natl Acad Sci AQSh A. 2006; 103: 8858-8863. [PMC bepul maqola] [PubMed]
23. Soudais C, Laplace-Builhe C, Kissa K, Kremer EJ. Jonivorlarning adenovirus vektorlari orqali neyronlarning transferentsial o'tkazilishi va ularni in vivo jonli retrogradlash. FASEB J. 2001; 15: 2283-2285. [PubMed]
24. Szczypka MS, Rainey MA, Kim DS, Alaynick VV, Marck BT, va boshq. Dopamin etishmayotgan sichqonlarda ovqatlanish harakati. Proc Natl Acad Sci AQSh A. 1999; 96: 12138-12143. [PMC bepul maqola] [PubMed]
25. Zhou QY, Palmiter RD. Dopaminning etishmaydigan sichqonlari gipoaktiv, adiptik va aphagicdir. Hujayra. 1995; 83: 1197-1209. [PubMed]
26. Sverdlov NR, Braff DL, Geyer Ma. Noma'lum sensorimotor gating hayvonlari modellari: biz bilgan narsalar, biz bilgan narsalar va yaqinda bilishimiz mumkin bo'lgan narsalar. Behav Farmakol. 2000; 11: 185-204. [PubMed]
27. LaLumiere RT, Nawar EM, McGaugh JL. Bazolyar amigdala yoki yadro akumbens qobig'i tomonidan xotira konsolidatsiyasining modulatsiyasi miya hududlarida bir vaqtda dopamin retseptorlari faolligini talab qiladi. Mem. 2005; 12: 296-301. [PMC bepul maqola] [PubMed]
28. Manago F, Castellano C, Oliverio A, Mele A, De Leonibus E. Dopamin retseptorlari subtiplerinin roli, D1-shunga o'xshash va D2 shunga o'xshash, yadrodagi akumbens sub-hududlari, yadro va qobiq ichida, bir martalik inhibitorlikning oldini olish vazifa. Mem. 2009; 16: 46-52. [PubMed]
29. Rossato JI, Bevilaqua LR, Izquierdo I, Medina JH, Cammarota M. Dopamin uzoq muddatli xotira saqlashni davom ettiradi. Ilmiy. 2009; 325: 1017-1020. [PubMed]
30. Lammel S, Hetzel A, Hackel O, Jones I, Liss B va boshq. Ikkala mezokortikolimbik dopamin tizimidagi mezoprefrontal neyronlarning o'ziga xos xususiyatlari. Neyron. 2008; 57: 760-773. [PubMed]
31. Ford CP, Mark GP, Uilyams JT. Mesolimbik dopamin neyronlarining xususiyatlari va opiyol inhibatsiyasi maqsadli joylashuvga qarab o'zgaradi. J Neurosci. 2006; 26: 2788-2797. [PubMed]
32. Margolis EB, Lock H, Chefer VI, Shippenberg TS, Hjelmstad Go va boshq. Kappa opioidlari prefrontal korteksga proportsional bo'lgan dopaminerjik neyronlarni qay tarzda nazorat qilishadi. Proc Natl Acad Sci AQSh A. 2006; 103: 2938-2942. [PMC bepul maqola] [PubMed]
33. Margolis EB, Mitchell JM, Ishikava J, Hjelmstad GO, Fields HL. Midbrain dopamin neyronlari: prognozli maqsad potentsial potentsialining davomiyligini va dopamin D (2) retseptorlari inhibishini aniqlaydi. J Neurosci. 2008; 28: 8908-8913. [PubMed]
34. McGaugh JL, McIntyre CK, Power AE. Xotiralarni konsolidatsiyalash bo'yicha Amigdala modulatsiyasi: boshqa miya tizimlari bilan o'zaro aloqalar. Neurobiol Learn Mem. 2002; 78: 539-552. [PubMed]
35. Popescu AT, Sagyan AA, Pare D. Amigdala tomonidan kortikostriatal plastisitaning NMDA-ga bog'liqligi. Proc Natl Acad Sci AQSh A. 2007; 104: 341-346. [PMC bepul maqola] [PubMed]
36. Rosenkranz JA, Greys AA. Povlion sharoitida odatda uyg'otuvchi amigdala potentsialining dopamin vositachiligini modulyatsiyasi. Tabiat. 2002; 417: 282-287. [PubMed]
;