Sci Rep. 2018; 8: 2766.
2018 Fevral 9-da chop etildi. doi: 10.1038/s41598-018-21046-0
PMCID: PMC5807356
mavhum
Oziq-ovqatlarning mavjudligini ko'rsatuvchi iplar oziq-ovqat qidirish va iste'mol qilishni kuchaytirish qobiliyatiga ega. Ushbu izlanish Pavlovning diqqatni kuchaytiruvchi oziqlantirishda rag'batlantiruvchi rag'batlantiruvchi rolini aniqlash uchun qiziqarli, farmakologik va analitik metodlarning kombinatsiyasini qo'lladi. Biz sukroz eritmasi (CS +) bilan bog'langan bir belgining yangi rezervuarda sukroz iste'molini rag'batlantirish uchun oziqlantirish bo'yicha o'z nazoratini topshira olishi va bu ta'sir D1 dopamin retseptorlari aktivatsiyasiga bog'liq ekanligini ko'rsatib turibmiz. xulq-atvori, ammo ta'mga emas. Sukrozni yallig'lanish xatti-harakatlarining mikroyapı tahlillari CS +, kalamushlar, sukroz lezzetiyle bilan bog'liq bo'lgan, bu yalang'och atakların davomiyligi ustidan ishonchli ta'sir qilmasdan, yalamak harakatlarining aktiv johillik bilan shug'ullanadigan chastotani ziyoda qildi. Shu bilan birga, CS + da juftlikdagi chastotada oshib boruvchi individual farqlar testda umumiy sükroz qabul qilish bilan bog'liq bo'lib, bu jarayonning ovqatlanish xatti-harakatlarini mazmunli tarzda buzilishi bilan bog'liq degan fikrni qo'llab-quvvatladi. Shuning uchun (1) dopaminga qaram bo'lgan Pavlovning rag'batlantiruvchi motivatsion jarayoni replikatsiya potensiatsiyalangan ovqatlanishga vositachilik qilishi mumkinligini va (2) bu xatti-harakatni tahlil qilish uchun eksperimental va analitik yondashuvni namoyish etadi.
Kirish
Oziq-ovqatlarning mavjudligini ko'rsatuvchi atrof-muhitning talablari kuchli oziq-ovqat iste'molini tetiklashi mumkin1-3 va ochlik bo'lmasligi bilan ovqatlanishni rag'batlantirish, kemiruvchilarda kuzatiladigan ta'sir4,5 va odamlar6-9. Ortiqcha ovlash va semirishda muhim rol o'ynashi kerak bo'lgan bu xatti-harakatlar ta'siri10-13(CFP) vazifasidan foydalangan holda tekshirilishi mumkin. Odatda, bir CPF tadqiqotida, och hayvonlarni kosillashgan stimulyator (CS +, masalan, eshitish tovushlari) va oz miqdorda mazali taom yoki suyuqlik, masalan, sucroz eritmasi tajriba xonasida sobit holatidadir joylashgan. Keyinchalik, testdan oldin ularni to'liq to'ldirishni ta'minlash uchun ularga parvarish qilish uchun cheklovsiz foydalanish huquqi berilgan. Keyin xayvonlar hujayradan qaytib, kosani sakkarozni erkin ravishda iste'mol qiladilar, CS + esa vaqti-vaqti bilan noaniq tarzda taqdim etiladi. Bunday sharoitlarda hayvonlarni oziq-ovqat mahsulotlarini iste'mol qilishda CS + bilan takrorlanmas stimulyator (CS-) bilan mashg'ulotlarga nisbatan oshadi.
Bunday topilmalar tashqi ko'rsatmalarning oziqlantirishni yaxshilash uchun fiziologik ochlikdan qat'i nazar harakat qilishi mumkinligini ko'rsatmoqda, ammo bu ta'sir ostida bo'lgan psixologik jarayonlar qat'iy belgilangan emas. Do'zax oziq-ovqat iste'mol qilish bilan bog'liq bo'lgan narsalar oziqlantirishga (ya'ni rag'batlantirishga javob berishga asoslangan) refleksli yoki odatiy nazorat olib borishi mumkin. Agar bu CPF vositachiligining asosiy mexanizmi bo'lsa, CS + Pavlov konditsionerligi davrida tashkil etilgan o'ziga xos oziqlantirish xatti-harakatlari bilan iste'molni rag'batlantirishi kerak. Bu javobni o'rganish yuqorida keltirilgan misolda bo'lgani kabi, oziq-ovqat manbai mashq qilish va sinovdan o'tkazilsa, manzarani ko'rish mumkin. Ushbu stsenariy CPFning aksariyat ko'rsatuvlari uchun qo'llanilishi mumkin bo'lsa-da, oziq-ovqat bilan bog'liq bo'lgan maslahatlar yangi joylarda ovqatlanishni boshlashi mumkin14-16, ular bilvosita ovqatlantirishni nazorat qilish mumkinligini ko'rsatmoqda. Buning mumkin bo'lgan tushuntirishlaridan biri shundaki, bunday takliflar bir xil Pavlovning rag'batlantiruvchi motivatsion jarayonidan oziqlanishni kuchaytiradi, bu esa ularga asbob-uskunalar bilan oziq-ovqatni qidirish harakatlarini17,18. bu motivasion ko'rinish CS + mahsulotini qidirishni talab qiladi, bu esa oziq-ovqat mahsuloti tayyor bo'lganda oziqlantirishga olib keladi. Shu bilan bir qatorda, mazali taomlar uchun signallar lazzat stimulyatsiyasining hedonik baholashini kuchaytirishi mumkin bo'lgan dalillar mavjud19-21, ovqatlanishlarni qisman oziqlantirishni qisqartirish orqali oziqlantirishni kuchaytirish mumkin. Ushbu hedonik nuqtai nazar motivatsion nuqtai nazardan mexanik jihatdan farqli bo'lsa-da, bu hisoblar bir-biridan farq qilmaydi va CPFning turli jihatlarini tushuntirishi mumkin10,22.
CPFning motivatsion va hedonik hisoblarini ajratishning bir usuli oziq-ovqat bilan bog'langan so'rovlarni ovqatlanishning mikroyapısına qanday ta'sir qilishini aniqlashdan iborat. Kemiruvchilar sukroz eritmasini yoki boshqa mazali suyuqliklarni erkin iste'mol qilishlariga ruxsat berilganda, ular harakatsizlik davrlari bilan ajralib turadigan turli xil muddatlarda yiringlashadi. Yalang'och yugurishning o'rtacha davomiyligi ishonchli va qay darajada suyuqlikning mazasi borligini ta'minlaydi23,24, bu kurashning chastotasi motivatsion jarayonlarga bog'liq deb hisoblashadi25-28. Shunday qilib, agar CS + sukrozning mazasini yaxshilash orqali ovqatlantirishni rag'batlantirsa, u holda bu belgining uzunligi, ammo chastotani emas, balki chayqalishni yengish kerak. Buning aksincha, motivatsion nuqtai nazar CS + ning boshqa faoliyati bilan mashg'ul bo'lgan bo'lsa ham, sukroz izlash va iste'mol qilishni boshlashini taxmin qiladi.
Hozirgi ishda sakkarozni har doim bir xil joyda (Experiment 1) har doim mavjud bo'lgan va ikkita manba va treninglar davomida o'zgargan (Experiments 2 va 3), ikkita CPF protokoli yordamida sukroz yalanma mikroyapısında CS + XNUMX), bizga CS + ning bilvosita ta'sirini baholash imkonini beradi. Oziq-ovqat mahsulotlariga bog'langan oziq-ovqat mahsulotlarining oziq-ovqat mahsulotlariga bo'lgan ta'sirini baholashning ushbu yondashuvini baholash uchun bizning yondashuvimiz, PUL-ning vazifa-topshirig'i (PIT) vazifasidan so'ng modellandir, bu esa mukofotga asoslangan juftlikning qiziqishini rag'batlantirishning motivatsion ta'sirini o'rganish uchun keng qo'llaniladi. mukofotni qidirish18,29,30. Bundan tashqari, ushbu adabiyot bilan taqqoslashni engillashtirish uchun PIT ishlarida keng qo'llaniladigan Pavlovian shamollatish va sinov parametrlarini qabul qildik. Dopamin D1 retseptorlari faoliyatining PITning ifodasi va boshqa maqsadga yo'naltirilgan xatti-harakatlar uchun juda muhim ahamiyatga ega ekanligi e'tiborga olinadi31-33 lekin oziqlanish xatti-xarakatlarining hedonik tomonlari uchun nisbatan ahamiyatsiz25,28,34Shuningdek, D1 retseptorlari blokadasining replikatsiya potensiatsiyalangan sukroz yallig'iga ta'siri (Experiment 3) bu ta'sirida motivatsiya rolining yana bir probasi sifatida baholandi. Nihoyat, bu tajribalardan olingan sukroz yallig'lanish ma'lumotlarining mikror-strukturasini tahlil qildik, buning natijasi CPF ning navbati bilan CPFning motivatsion va hedonik ko'rinishlari bilan bashorat qilinganidek, sukroz yallig'lanishining chastotasi va davomiyligi bilan bog'liqligini tekshirish uchun mo'ljallangan.
natijalar
Oziq-ovqat manbasini ko'rsatadigan belgilar bilan ovqatlanishni kuchaytirish
Bizning birinchi tajribamizda biz sukrozni iste'mol qilish uchun zarur bo'lgan aniq javoblar o'quv va sinov bosqichlarida bir xil bo'lgan an'anaviy javobga javoban CPF dizaynini qo'lladik. Ochiq kalamushlarga X10 d Pavlov konditsionerligi bilan CS + ni kameraning bir tomonidagi sutkada mavjud bo'lgan oziq-ovqat idishida qo'llashi uchun belgilash uchun berildi. Konditsionerlarning so'nggi kunida kassetalar (+ SEM-sub-fanlar) CS + (23.72 ± 2.79 daqiqada) davomida sinovlar oralig'ida [18.27 ± 3.25-daqiqada; juftlangan namunalar t-test, t(15) = 3.13, p = 0.007]. CS− paytida kubok yozuvlari (daqiqada 8.60 ± 1.91) sinovlar oralig'idan sezilarli darajada farq qilmadi [daqiqada 10.69 ± 2.00; juftlangan namunalar t-test, t(15) = -1.60, p = 0.130].
So'ngra sakkaroz yallig'iga CS + ning ta'sirini tavsiflash uchun kalamushlarni oziq-ovqat bilan qoplangan holda ikkita CPF testi berilgan. Har bir testda, kalamushlar 2% yoki 20% sukroz eritmasidan erkin foydalanish imkoniyatiga ega edi, bu esa bizni sakkaroza dori-darmonlarining CPFga ta'sirini baholashga imkon berdi. Shakl 1a CS sinovlarida CS davri, CS turi va sukrozning kontsentratsiyasining funksiyasi sifatida kuzatilgan ko'p sonli yuraklarni ko'rsatadi. Ma'lumotlar umumlashtirilgan lineer aralashmalar effektlari yordamida tahlil qilindi (qo'shimcha jadval S1). Eng muhimi, sezilarli CS Daqti bor edi, t(116) = 12.70, p <0.001. Keyingi tahlillar (konsentratsiya bo'ylab qulab tushgan) CS + sinovlari uchun sezilarli o'sishni aniqladi, p <0.001, lekin CS− sinovlari emas, p = 0.118, bu CS + ning CS dan oldingi darajalariga nisbatan saxaroza yalishini ko'paytirishda CS− dan samaraliroq ekanligini ko'rsatadi. Bizning tahlilimiz shuni ko'rsatdiki, ushbu tanlov selektivligiga sukroz konsentratsiyasi (3 tomonlama o'zaro ta'sir, p <0.001). Xususan, CS + 2% va 20% sharoitida saxaroza yalishini ko'tarishda juda samarali bo'lgan bo'lsa ham, ps <0.001, CS− 2% testda yalang'ochlik stavkalariga sezilarli ta'sir ko'rsatmadi, p = 0.309, ammo 20% testning mo''tadil, ammo sezilarli o'sishiga olib keldi, p = 0.039. Shunday qilib, oziq-ovqat bilan bog'langan ko'rsatma, odatda, ovqatlanishni nazorat qilishda samaraliroq bo'lishiga qaramay, kalamushlarga sinov paytida juda mazali saxaroza eritmasini iste'mol qilishga ruxsat berilganda, juftlashtirilmagan ko'rsatma xuddi shunday ta'sir ko'rsatgandek edi.
Yangi oziq-ovqat manbaiga potentsial oziqlantirishni o'tkazish
Tajriba 1 da mashq qilish va sinovdan o'tish vaqtida sukroz bir xil manbada mavjud bo'lgani sababli kuzatilgan CPF effekti CS + ning (1) qobiliyatiga bog'liqligini aniqlanmagan. turtki berish sukrozni izlash va iste'mol qilish uchun yoki (2) bevosita o'ziga xos aniqlanadigan kalamushlar shartli refleksyoki odat. 2 eksperimenti sukrozani oziq-ovqat mahsulotiga aylantirish bilan bog'liq bo'lgan CS + ning testda kameraning qarama-qarshi tomonidagi suyukrozdan yallig'lanishini PITda kuzatilgan xatti-harakatlar bilan taqqoslanishi mumkinligini tekshirish orqali tekshirish orqali aniqlandi.
Sichqoncha tajriba 1da qo'llangan Pavlovning konditsionerlik tartib-qoidalari bilan tayyorlandi, natijada Pavlov konditsionerining so'nggi kuni tomonidan o'ziga xos o'ziga xos ta'sir o'tkazish harakati paydo bo'ldi. Tadqiqotlar oralig'idagi intervalgacha [18.71 ± 1.73 / daq. Uchun] CS + (12.49 ± 0.98 daqiqada) davomida oziq-ovqat idishining yondashuvlari (± SEM oralig'ida) ko'proq edi; juftlangan namunalar t-test, t(15) = 3.02, p = 0.009]. CS− (daqiqada 9.41 ± 0.98) va sinovlar oralig'i [minutiga 8.44 ± 0.88; juftlangan namunalar t-test, t(15) = 0.98, p = 0.341].
Sichqoncha 1% sukroz bilan sinov qilinganida, CS + ning Sekroz yalang'ochligi tajribasi 2da ta'sirini hisobga olsak, sukroz bilan dastlabki sinovdan yangi manbada mavjud (sput, shaffof panel bilan qoplangan oziq-ovqat idishasi - usullari) bu holatga e'tibor qaratdi. Biroq, ushbu testda sakkaros yallig'lanishi CS + (328.1 ± 84.8 licks) va CS-CS + davrlari orasida sezilarli darajada farq qilmadi [245.6 ± 45.9 licks; juftlangan namunalar t-test, t(15) = 1.07, p = 0.300]. Javob berish raqobatini to'xtatish va naychadan sukroz ichishni kuchaytirish uchun kalamushlarga 5 ta qo'shimcha mashg'ulotlar o'tkazildi, ular CSlar bo'lmagan taqdirda 20% sukrozni oziq-ovqatdan mahrum qilishdi. Keyin kalamushlar uy chowiga to'liq to'ydirildi va sakkaroza bilan metalga o'rnatilgan ikkita CPF testini o'tkazdi. Sinovlar paytida kalamushlar 2% yoki 20% saxaroza eritmasidan alohida testlarda doimiy foydalanish imkoniyatiga ega bo'lishdi (sub'ektlar ichida, buyurtma muvozanatli).
shakl 1b testning ushbu turida CS + yangi joyga sukrozni ichishning samarali bo'lishida samarali ekanligini ko'rsatdi, hatto bu ko'rsatgich hech qachon bevosita ushbu xatti-harakat bilan bog'liq emas edi. Aralash ta'sirli modellarni tahlil qilish (qo'shimcha jadval S2) muhim CS turi x CS Period interaktivligini topdi, t(120) = 15.16, p <0.001, bu CS + ning sukroz yalishini boshlang'ich darajalariga nisbatan ko'tarishda samaraliroq ekanligini ko'rsatmoqda (CS va CSgacha bo'lgan davr, p <0.001) CS-ga nisbatan (CS va CSgacha bo'lgan davr, p = 0.097), xuddi 1-tajribada bo'lgani kabi. Saxaroza konsentratsiyasi ushbu ta'sirning tanlab olinishiga sezilarli ta'sir ko'rsatmadi (3 tomonlama o'zaro ta'sir, p = 0.319). Muhimi, CS + dan oldingi davrlarga nisbatan lick stavkalari CS + dan oldingi davrlarga nisbatan ko'tarilgan bo'lsa-da, juft namunalar t-tests bu farqning 2% holatda statistik jihatdan ahamiyatli emasligini ko'rsatdi, t(15) = 1.66, p = 0.118 yoki 20% holatda, t(15) = 1.56, p = 0.139. O'qitish va sinov paytida ishlatilgan psevdo-tasodifiy sinov tuzilishini hisobga olgan holda kutish kerak, bu sistematik (sinovlararo) o'tkazuvchanlik ta'sirini oldini oladi va kelajakdagi sinov turini (yoki vaqtini) kutishni istisno qiladi. Shuni ham ta'kidlash joizki, xuddi shu hayvonlar CS + va CS + dan oldin yalang'ochlash tezligi ancha taqqoslaganda, 3-tajribada silashda o'xshash CS + o'ziga xos balandliklarni ko'rsatdilar (rasmga qarang). 1c, transport vositasi).
D1 turi dopaminli retseptorlarga qaramlik
2 Eksperimenti natijalari CS + Sukaroza iste'molini mustahkamlash qobiliyatiga ega bo'lib, u hech qanday to'g'ridan-to'g'ri PIT kabi motivatsion ta'sirga mos keladigan hech qanday bog'liqlik ko'rsatilmagan ovqatlanish xatti-harakatini ko'rsatdi. Pavlovning rag'batlantiruvchi motivasiyasida D1 turi dopamin retseptorlarining ahamiyatini hisobga olgan holda31-33, 3 eksperimenti ushbu retseptorlarda blokirovkalash harakati CPF ifodasini buzishi mumkinligini tekshirgan. Experiment 2da ishlatiladigan xuddi shu kalamushlarga SCH-20 (23390 mg / kg), selektiv D0.04 antagonisti yoki vositasi bilan oldingi davolanishdan keyin oxirgi CPF testlari (1% sukroz) berildi. Viktorina natijalari sek. 1c (Shuningdek, qo'shimcha jadval S3).
Tahlillar shuni ko'rsatdiki, giyohvand moddalarni davolashda, t(120) = -2.15, p = 0.034, bunda saxaroza yalamasligi odatda SCH-23390 tomonidan tushkunlikka tushgan. Muhimi, biz Drug × CS Period × CS Type o'zaro ta'sirini topdik, t(120) = -20.91, p <0.001, bu SCH-23390 ning CPF ekspresiyasini maxsus ravishda buzganligini bildiradi. Darhaqiqat, keyingi tahlillar shuni ko'rsatdiki, CS + avtoulov testida CS + dan oldingi darajalarga nisbatan saxaroza yalishini sezilarli darajada oshirgan, p <0.001, SCH-23390 testida CS + ning ta'siri bo'lmagan, p = 0.982. 1-tajribada kuzatilgan signallarni umumlashtirishga o'xshab, CS ikkala dori sharoitida sukrozni yalab olishda sezilarli darajada o'sishni keltirib chiqardi, ps ≤ 0.049. Shunday qilib, SCH-1 orqali D23390 turi dopamin retseptorlari antagonizmi KS + ni oziqlantirishni uyg'unlashtirdi, bu CPFning rag'batlantiruvchi motivatsion hisobiga to'g'ri keldi.
Sukroz bilan bog'langan iplar va sukrozning kontsentratsiyasini oziqlantirishga ta'sirini mikrorstruktiv tahlil qilish
2 va 3 eksperimentlari natijalari shuni ko'rsatadiki, bu erda ishlatiladigan yangi PIT-protokoli CPFning rag'batlantiruvchi motivatsion shaklini qo'llab-quvvatlaydi, chunki bu nishonlar ko'rsatgich orqali ko'rsatiladigan oziq-ovqat manbaidan ajratib turadigan ovqatlanish xatti-harakatini rag'batlantirishga qodir. Ushbu hisobotni yanada sinab ko'rish uchun biz CS + ning sukroz ichishdagi eksitatori ta'siri mikroskopik yalang'och xatti-harakatlarni tashkil qilish bilan bog'liqligini tekshirib chiqdik. Yuqorida aytib o'tilganidek, bug'lanishning davomiyligi yaltiroq suyuqlik bilan farqlanadi23,24, kalamushlarning yalang'och yangi musobaqalar bilan shug'ullanadigan tezligi alohida motivatsion jarayonni aks ettiradi deb hisoblaydi25-28. Biz sakkaroz konsentratsiyasini, avvalgi ma'ruzalarda qayd etilganidek, uning ta'mini olishini o'zgartirishga muvaffaq bo'ldik23,35. Yuqori va kam sukroz konsentratsiyasi kaloriya tarkibida farq qilsa-da, keng qamrovli tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, uzunlik o'lchovi orosensor mukofotining sezgir va tanlangan o'lchovidir va iste'moldan keyin iste'mol qilinadigan kaloriyalarni qayta ishlashdan ajralib chiqadi35-38. Shunday qilib, rag'batlantirish motivatsiyasini kuchaytiradigan CS + tuxum chastotasini ko'paytirishi kerak, ammo sakkarozni yanada mazali qilish orqali suyuqlikni iste'mol qilishni ko'paytiradigan CS + uzoqroq bo'g'inlarni davom ettirishi kerak.
Kerakli statistik quvvatni ta'minlash39yuqorida tavsiflangan barcha noxomalalizatsiya sinovlaridan (2% va 20% sinovlari uchun Eksperiment 1 va Experiment 2 va Experiment 3 uchun avtomobilning holati) ma'lumotlarni qulab tushdik. Birgalikdagi ma'lumotlar shakl 4da ko'rsatilgan. 2(a), tugma chastotasi (b) va tugma davomiyligi (s) sifatida alohida ajratilgan. Shakl 2d test paytida 2% va 20% sukroz mavjud bo'lgan oldingi CS + va CS + davrlarida ikkita replikatsiya kalamushining yalang'och xarakteristikasining raster plitalari ko'rsatilgan. CPFning motivatsion talqiniga ko'ra, bu kalamushlar CS + da oldingi CS + davrida bo'lganlarga qaraganda ko'proq sukroz yallig'lanishi bilan mashg'ul bo'lishga intilgan. Buning aksincha, kaltaklar 20% sukroz eritmasini iste'mol qilishdan ko'ra ko'proq iste'mol qilganda, buqish davomiyligi ancha uzoqqa cho'zildi, bu 2% sukrozni iste'mol qilishdan ko'ra, CS-CS + va CS + davrlarida sezilarli ta'sir qildi. Shunday qilib, bout davomiyligi sukroz bilan bog'langan belgidan kuchli ta'sir ko'rsatmadi. Chindan ham, shakl. 2d birlashgan ma'lumotlar to'plamining umumlashtirilgan chiziqli aralash-ta'sir modellari bilan tasdiqlangan (Qarang: sek. 2a-c va qo'shimcha jadval S4). Ikkilamchi aralash effektlar tahlili shuni ko'rsatdiki, "Eksperimental" (1, 2, 3) ning kategoriyaviy omillari " ps ≥ 0.293, bu ma'lumotlarni keyingi tahlillar uchun birlashtirishga imkon beradi. Qizig'i shundaki, CS + ning yalang'och xatti-harakatni rag'batlantirish qobiliyati ham yalang'ochlashni boshlash uchun ancha tezroq kechikish bilan namoyon bo'ladi.40-42 CS + va boshqalar CS-boshdan keyin [umumlashtirilgan chiziqli aralash-effekt modeli (javob tarqatish = gamma, bog'lanish funktsiyasi = log); t(306) = -2.71, p = 0.007], garchi kechikish vaqtidagi xom farq nisbatan kam (CS +: 1.16 soniya ± 0.47; CS - 2.79 soniya ± 0.79).
CS davrining ta'sirini mediatsiyaviy tahlil qilish
Bunday natijalarga erishish uchun biz statistik vositachilik tahlilini o'tkazdik43 Birgalikdagi ma'lumotlar bo'yicha (shakl. 2CS + uyg'otadigan sukrozni ichish afzalliklari bilan atalish chastotasi yoki davomiyligi o'zgarishi bilan bog'liqligini aniqlash uchun mo'ljallangan. Shakl 3a bu tahlil uchun bir nechta vositachilik modelining tuzilishini ko'rsatadi (CS Period). Muhim umumiy ta'sir (Total; c) Jinsiy xatti- t(156) = 4.11, p <0.001, c = 5.22 [2.71, 7.73], chunki CS + davrida CS + dan oldingi davrga qaraganda ko'proq yalishlar bo'lgan. Keyin biz CS + xuddi shu tarzda yalab turadigan mikroyapıya ta'sir ko'rsatadimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik va jang chastotasida sezilarli darajada ko'tarilgan balandlikni topdik (M2), t(156) = 3.27, p = 0.001, a2 = 0.70 [0.28, 1.12], ammo jang davomiyligi emas (M1), t(141) = 1.89, p = 0.061, a1 = 0.34 [-0.02, 0.69]. Shunday qilib, guruh darajasida, CS + ning jangovar chastotaga ta'siri, ammo baxsning davomiyligi emas, umuman yalamoqqa ta'siriga o'xshaydi.
CS + ning yalang'ochlikka ta'siri avtoulovning chastotasiga ta'siri bilan bog'liq bo'lsa, (1) bu chora-tadbirlar o'zaro bog'liq bo'lishi kerak va (2) koeffitsient chastotadagi CS + effekti butun kvadrat o'lchovidagi CS + ta'sirini hisobga olish kerak. Dastlabki taxminning baholashi shuni ko'rsatdiki, CS davrini hisobga olmaganda, har ikkala chastotada ham, bo'g'inning davomiyligi ham umumiy yaltiroq, ps <0.001, bu ajablanarli emas, chunki ushbu mikroyapı o'lchovlari umumiy yalishlar bilan ichki aloqaga ega. Biroq, ikkinchi bashoratni baholashimiz yanada aniqroq edi. Ushbu mikroyapı choralari CS davri bilan bir qatorda jang chastotasi va jang davomiyligini sobit effektlar sifatida qo'shib, yalishning umumiy o'lchovidagi CS + bilan bog'liq bo'lgan farqni tushuntirganligini tekshirish uchun biz ko'plab vositachilik modelini yaratdik. Boshqacha qilib aytganda, biz ushbu yalang'och janglarda farqni nazorat qilish yuqorida tavsiflangan sodda (qisqartirilgan) modeldagi kuchiga nisbatan CS + ta'sirini zaiflashtiradimi, deb so'radik. Meditatsiyaga muvofiq, biz buni aniqladik to'g'ri CS davrining yalang'ochlikdagi ta'siri (c") muhim emas edi, t(139) = 0.90, p = 0.370, c'= 0.41 [-0.49, 1.30], tugma chastotasi va davomiyligini nazorat qilganda. Keyin CS + ning ushbu potentsial vositachilarning har birini yalang'och qilish ta'sirini taxmin qildik va shu bilan birga, a2b2 = 2.90 [1.18, 4.76], ammo jang davomiyligi emas, a1b1 = 1.71 [-0.09, 3.35]. Shunday qilib, ushbu ma'lumotlar CS + ning yalang'ochlanishiga ko'tarilish, birinchi navbatda, CPF-ning hedonik hisobiga emas, balki motivatsion asosga mos keladigan, jang davomiyligining o'sishidan farqli o'laroq, jang chastotasining oshishiga bog'liq.
Sukrozning kontsentratsiyali ta'sirini mediatsion tahlil qilish
Birgalikdagi ma'lumotlar bo'yicha ikkinchi ommaviy tahlilni amalga oshirdik (2-rasm). 2) sukrozning xushbo'yligi (konsentratsiyasi) bug'lanishning davomiyligini tanlash bilan bog'liqligini tasdiqlash uchun (shakl. 3b, Diqqat). Soddalashtirilgan model (bug'lanish chastotasi yoki davomiyligi uchun qat'iy ta'sirlar yo'q) kontsentratsiyasining jami yaltiroqlarga ta'siri sezilarli emasligini aniqladi, t(156) = 0.42, p = 0.678, c = 0.57 [-2.13, 3.27], bu sinovda saxaroza yalab o'tishning umumiy darajasi sukroz konsentratsiyasiga bog'liq emasligini bildiradi. Bu kutish kerak, chunki yalang'ochlashda saxaroza yoqimli ta'siri iste'molning dastlabki 2-3 daqiqasida aniq ko'rinadi44, bizning sinov sessiyalarida dastlabki dastlabki davrgacha bo'lgan davr. Shunga qaramay, sükrozun konsantrasyonu, buzish muddati uchun muhim ta'sir qildi (M1), t(141) = 5.20, p <0.001, a1 = 0.88 [0.54, 1.21], 20% saxaroza 2% saxarozaga qaraganda uzoqroq ichishni qo'llab-quvvatlaydi. Qizig'i shundaki, sukrozning kontsentratsiyasi jangovar chastotada sezilarli bostiruvchi ta'sir ko'rsatdi (M2), t(156) = -3.84, p <0.001, a2 = -0.83 [-1.26, -0.40], bu kalamushlar yanada mazali eritma ichganda kamroq urishishga moyil edi. Shunday qilib, jang davomiyligining kontsentratsiyaga bog'liq o'sishi, jang chastotasining pasayishi bilan qoplandi. Bunga muvofiq, bizning davomiyligi va chastotasi uchun aniq ta'sirlarni o'z ichiga olgan to'liq vositachilik modelimiz kontsentratsiyaning yalang'och ta'siriga bevosita ta'sir ko'rsatmadi, t(139) = 0.45, p = 0.650, c'= 0.23 [-0.76, 1.22]. Shu bilan birga, sezilarli, ammo qarama-qarshilik sezilarli darajada, a2b2 = -3.49 [-5.50, -1.58] va jang davomiyligi, a1b1 = 4.46 [2.96, 5.95], yalishning umumiy harakati bo'yicha.
CS davrining ta'siri va kontsentratsiyasini yalang'och mikro tuzilishga bog'liq individual farqlar
Mediatorlik modellari shuni ko'rsatdiki, shoshilinch chastotalar va davomiylik CS + va sukroz konsentratsiyasining guruh darajasida yalang'ochlashiga vositachilik qilishda turli rol o'ynaydi, ammo bu ta'sirlar birma-bir insonlarni tushunish uchun muhim bo'lishi mumkin bo'lgan ayrim kalamushlarda qanday ta'sir ko'rsata olmaydi. ortiqcha ovlashning zaifliklari. Mediatsiya tahlilining natijalarini hisobga olgan holda, individual kalamushlarda CS + davrida chastota chastotasida aniq o'sish kuzatiladi, ammo bu vaqt davomida har qanday barqaror yoki ishonchli o'zgarishlarni ko'rsatmaydi. Bundan tashqari, 20% testiga nisbatan 2% sukrozni iste'mol qilishda alohida kalamushlarni uzoq vaqt, ammo kamroq tez-tez yutmoqchi bo'lishlari taxmin qilingan. Anjir. 3c va d CS davri (CS + - oldingi CS +) va saxaroza kontsentratsiyasining (20% -2%) ta'sirlanish chastotasi va davomiyligiga mos ravishda individual farqlarini ko'rsating (rasmdagi birlashtirilgan ma'lumotlarning tahlili). 2). CS + + 67% lardagi kalamush chastotani oshirdi (Fig. 3c), bu kalamushlarning taxminan teng miqdori, shuningdek, buqaning davomiyligi (34%) yoki (33%) ko'payishini ko'rsatmoqda. To'rt kvadrantda bir xil taqsimlangan ma'lumotlar punktlarini hisobga olgan holda, kvadratik kvadratik sog'lomlik testi muhim distributional assimetriyani aniqladi, x2(3) = 10.91, p = 0.012. Darhaqiqat, $ \ phi $ ning o'rtacha qiymatiFrequency tarqatish 0dan sezilarli darajada ko'p edi, t(66) = 4.80, p O'rtacha, bo'lsa, <0.001Duration tarqatish 0dan sezilarli farq qilmadi, t(66) = 1.80, p = 0.076. Konsentratsiyali effektga kelsak (XNUMX-rasm). 3d), kalamushlarning ko'pchiligi (58%) ko'proq namoyish etildi va 20% sukrozga nisbatan 2% bilan kamroq tez-tez uchragan va kvadratchalar bilan moslashtirilgan testning yaxshigina ko'rsatkichlari kvadrantlar bo'yicha bir xil tarzda taqsimlanmaganligini tasdiqladi.2(3) = 31.85, p <0.001. Darhaqiqat, biz $ \ phi $ ning o'rtacha qiymatini aniqladikFrequency tarqatish 0dan sezilarli darajada kamroq edi, t(51) = -4.22, p <0.001, Δ ning o'rtacha qiymati esaDuration tarqatish 0dan sezilarli darajada ko'p edi, t(51) = 4.18, p <0.001.
Sukroz iste'molining mikroyapı usuli
Shakl. 3c CS + ning tuxum chastotasiga ta'siri sezilarli darajada o'zgaruvchanligini va ba'zi bir kalamushlarning bu motivatsion ta'sirga nisbatan sezgirligini ko'rsatdi. Garchi, bu kalamushlar CS + ning yo'qligida kamroq ichish orqali umumiy sukrozni iste'mol qilishini nazorat qila olsalar ham, birlashtirilgan ma'lumotlar to'plamini keyinroq tahlil qilish mumkin edi (Fig. 2) ushbu CS + tetiklantiruvchi teshiklarning chastotada oshishi oshishi bilan bog'liqligini tasdiqladi. Ayniqsa, biz ijobiy D bo'lgan sichqonchani topdikFrequency CS + trialsida skorlar (Freq ↑, Dur ↓ va Freq ↑ guruhlari, sek. 3C) sezilarli darajada sukroz iste'mol qilmadi (guruhlar Freq ↓, Dur ↓ va Freq ↓, Dur ↑) t(63) = 2.27, p = 0.026 (rasm. 4a). Ushbu munosabatlar DFrequency uzluksiz o'zgarmaydigan sifatida baholandi, t(63) = 2.19, p = 0.032 (rasm. 4b) va sukroz kontsentratsiyasiga, konsentratsiya × D ga bog'liq emas ediChastotani, t(63) = 0.64, p = 0.528.
muhokama
Sakkaroza mavjudligini ko'rsatuvchi signalning sukrozni qabul qilishni sukrozni (1 va 2 eksperimentlari) sakkrozni olish uchun zarur bo'lgan aniq harakatlarni ko'rsatishi yoki qilmasligiga qaramay, kalamushlarda sukroz iste'molini kuchaytirishi mumkinligini aniqladik. Bu oxirgi topilma ayniqsa qiziqish uyg'otadi, chunki oldindan mavjud bo'lgan shartli oziqlantirish javoblarini bajarishga bog'liq emas (yoki rag'batlantirish choralari) va buning o'rniga bunday belgilar ularni moslashuvchan ravishda o'tkazishga imkon beruvchi ta'sirchan va / ularni oziqlantirish harakatlarida nazorat qilish. Oziq-ovqat iste'mol qilinishini rag'batlantirishga qaratilgan atrof-muhitni rag'batlantirishga qaratilgan ushbu tendentsiya oziq-ovqat mahsulotlarini iste'mol qilish tartib-qoidalari mavjud bo'lmaganda ham mavjud emas, shuning uchun insonlarni oziq-ovqat iste'mol qilishni va pishirishni qo'llab-quvvatlovchi Pavlov jarayonining foydali va selektiv hayvon modelini taqdim etadi1-3. Oldingi ma'lumotlarga qaraganda, oziq-ovqat bilan bog'langan stimullar oziqlantirishni mustaqil ravishda javob berishga yordam berishi mumkin14-16, ko'pincha CPF eksperimentlari o'quv va sinov bosqichlari davomida aniqlangan oziq-ovqat manbasini saqlab turadi va shu sababli ushbu ta'sirga asoslangan psixologik jarayonlarning tabiati haqida faqat cheklangan ma'lumotlarni taqdim etadi. Tadqiqot oziq-ovqat mahsulotlarini bog'laydigan ip-kalava mahsulotlarini ovqatlanish xatti-harakatlariga umumiy ta'sir ko'rsatuvchi eksitatori ta'sirini namoyish qiladi. Bu oziq-ovqat mahsulotlarini qidirishda oziq-ovqat bilan bog'liq bo'lgan narsalarning umumiy yondashuvini o'rganish uchun keng qo'llaniladigan PIT vazifasidan keyin modellashtirish usulini qo'llaydi. Misol uchun, PIT da bo'lgani kabi, joriy vazifa yangi joylashuvga umumlashtiradigan motivatsion xususiyatlarni sotib olish istagini baholash uchun ishlatilishi mumkin. Shuningdek, biz PIT uchun keng qo'llaniladigan ta'lim va test parametrlarini (masalan, replikatsiya davomiyligini, intervalgacha intervallarni va takomillashtirish jadvalini) olganmiz va tadqiqotlar bo'yicha taqqoslashni osonlashtirdik. Shunday yondashuv Pavlovning instrumental va boshqalar bilan bog'liq xulq-atvori ustidan nazorat ostiga olingan psixologik va / yoki biologik jarayonlardagi mumkin bo'lgan farqlarni kelajakda tekshirishlari uchun ko'proq tajribaviy nazoratni ta'minlaydi.
Hozirgi tadqiqot D1 dopamin retseptorlarining faollashuvi CPFning ushbu javobga qaram mustaqil shaklini ifodalash uchun juda muhimdir, bu esa dopamin signalingning ahamiyatini hisobga olgan holda rag'batlantirish motivasion talqinini qo'llab-quvvatlashga yordam beradi va D1 retseptorlari faolligini, ayniqsa, Pavlov- instrumental o'tkazish18,29-32,45,46. Dopamindan oziq-ovqatning ogohlantiruvchi xususiyatlarini qayta ishlash uchun nisbatan ahamiyatsiz bo'lgan dalillar berilgan25,28,34, D1 antagonisti CS + ning sakkarozning mazasini sinovdan o'tkazishga qobiliyatini buzishi oqibatida ta'sir ko'rsata olmaydi. Ushbu turtki tariqati bizning mikroyaproq yalang'och tahlilimiz bilan ham qo'llab-quvvatlanadi. Bu tahlillar shuni ko'rsatdiki, bu urg'ular, birinchi navbatda, bu kurashlarning davomiyligini cho'zishdan ko'ra, ko'proq yalang'och ishtiyoqlarni keltirib chiqardi. Buning o'rniga, sutkada sakkarozni iste'mol qilish qulayligi bilan ajralib turadi23,24,26,27. Qizig'i shundaki, bizning statistik vositachilik tahlilimiz shuni ko'rsatdiki, kalamushlar 20% ni 2% sukrozga qarshi yutarkan uzoq davom etgan musobaqalarda ishtirok etgan bo'lsa-da, ular tez-tez chastotada kompensatsion pasayish ko'rsatdi. Shuning uchun, taomlanishning manipulyatsiyasi sichqonlarning sukrozni iste'mol qilishini umumiy ovqatlantirish darajasiga ta'sir qilmasdan shakllantirishga ta'sir qilgan ko'rinardi. Boshqa tomondan, CS + bilan sinovlarda bunday kompensatsiya ta'siri aniqlanmagan, bu esa sinovlarda kuzatilgan yalinish xatti-harakatlarining aniq o'sishini hisobga oladi. Bundan tashqari, CS + sinovlari davomida tish chastotasida ortish ko'rsatgan sichqonlarning ham umumiy sukroz iste'moli darajasining yuqori ekanligini ko'rsatdi. Bunday topilmalar oziq-ovqat bilan bog'langan iplar (1) oziqlantirish xatti-harakatlarini tartibga solishi mumkinligini va (2) hech bo'lmaganda, bu erda sinov qilingan sharoitlarda sukroz ovqatlanishini manipulyatsiya qilishdan ortiq ovlash qilishda samaraliroq ekanligini ko'rsatadi.
Amaldagi natijalar, oziq-ovqat mahsulotlarini juftlashtirilgan aniq ko'rsatmalar bo'lmasa, oziqlanish tartibini tartibga solishda dopaminning rolini ham yoritib beradi. Avvalgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki D1 dopamin antagonistining tizimli tatbiqi SCH23390 bosim o'tkazadi ochilgan bout vaqtini o'zgartirmasdan turib, chastotani kamaytirish orqali sukroz iste'moli25,26, bu dopamin etishmayotgan sichqonlar tomonidan ko'rsatiladigan yaltiroq naqshga o'xshashdir47. Bunday hollarda chastota chastotasini nazorat qiluvchi psixologik mexanizmlar aniq bo'lmasa-da, oziqlanish bilan bog'liq bo'lgan kontekstual va / yoki interoseptiv narsalar oziq-ovqatni qidirish va iste'mol qilishning yangi g'ayrati25,26. Bizning natijalarimiz bu ta'vilni to'g'ri tushunish uchun bir necha qo'llab-quvvatlashni ta'minlaydi, bu esa yangi yengil tuyg'ularini oziq-ovqat mahsulotlarini juftlashgan juftlik belgilari bilan belgilash mumkinligini va bu ta'sir D1 dopamin retseptorlari faollashuviga bog'liqligini ko'rsatib beradi.
Boshqa joyda qayd etilganidek5,10CPFda dopaminning roli haqida ilgari izlanishlar nisbatan kamroq bo'lgan. Ammo, bir dastlabki ishda o'ziga xos bo'lmagan dopamin retseptorlari antagonisti a-flupentiksolning administratsiyasi CS + ni kamaytiradigan oziq-ovqat mahsulotlarini iste'mol qilishni kuchaytirdi, ammo oziq-ovqat iste'molini48, bu bizning D1 antagonizmasining igna bilan bog'liq sukroz yalang'ochini buzishini bilishimizga o'xshamaydi. Ushbu aniq farqni tushuntiradigan ikkita ishda ko'plab protsessual farqlar mavjud. Misol uchun, D1 dopamin transmissiyasini selektiv manipulyatsiyasi CS + ning oziq-ovqat mahsulotlariga ta'sirini kamaytirishda samaraliroq bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, bu avvalgi ishda48oziq-ovqatsiz kalamushlarni o'qitish va sinovdan o'tkazildi, bu esa o'z navbatida Pavlovning o'ziga xos parvarishlash usuli yordamida sinovdan o'tkazildi, unda kunduzgi muddatda taqsimlanadigan ovqatlanish seanslarini ko'rsatish uchun marka ishlatildi. Keyinchalik, bu belgining farqi, kalamushlarni nondeprived holatida sinovdan o'tgan bo'lsa ham, oziqlantirishni yaxshilashda samarali ekanligi ko'rsatildi. Ushbu treningning tabiati va darajasi va talab qilinadigan ovqatlanish javoblari o'quv va test bosqichlari bo'yicha o'zgarmaganligi bu CPF protokoli sinov paytida odatiy (stimul-javob) ovqatlanish javobini qo'llashni rag'batlantirgan bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. Ovqatdan tashqari mashq qilish dopamin signallarini manipulyatsiya qilishga beparvos qiluvchi oziq-ovqat mahsulotlarini ishlab chiqarishi mumkinligini hisobga olsak49, bu mumkin bo'lgan odatiy tarzda CPF shakli bu erda tavsiflangan motivasion shakldan ko'ra dopaminga kamroq bog'liq.
CPFda dopaminning ahamiyati haqida aniq ma'lumotga ega bo'lishiga qaramasdan, ushbu xulq-atvorli hodisa gri'linga50-52 va melanin-konsentratsiyali gormon53 nevropeptid tizimlari, ular asosan oziqlantirish ishlarini boshqarishda ishtirok etadi10 va dopamin signalizatsiyasi54-56. Qizig'i shundaki, griflinning ishtahani kuchaytiruvchi ta'siri ushbu gormonning mezolimbik dopamin signallarini modulyatsiya qilish qobiliyatiga bog'liq.57-60. Misol uchun, grelinning oziq-ovqatni iste'mol qilish va iste'mol qilishni yaxshilashga intilish tendentsiyasi D1 dopaminli retseptorlari antagonistini SCH-2339060. Bunday natijalarga asoslanib, grifin va dopamin o'rtasidagi o'xshash shovqin oziq-ovqat bilan bog'liq juftlarni oziqlantirish bo'yicha motivatsion ta'sirga asoslangan bo'lishi mumkin.
Mavjud topilmalar oziq-ovqat bilan bog'langan iplar oziqlanishning yangi usullarini rag'batlantirish orqali ortiqcha ovqatlanishni rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatib turibdi, shunga o'xshash maslahatlar ham boshqa jarayonlar orqali oziqlantirishga ta'sir qiladi. Tekshirishni nazorat qilish yondashuvimizda aniq ifodalar bo'lib, oziq-ovqat mahsulotlarini iste'mol qilishni to'g'ridan-to'g'ri muayyan oziqlantirish xatti-harakatlarini keltirib chiqarishi mumkin. Bundan tashqari, CS + ushbu tadqiqotda bug 'vaqtlarini ishonchli tarzda o'zgartirmasa ham, yaqinda o'tkazilgan bir tadqiqot, qattiq oziq-ovqat manbalariga ega bo'lgan an'anaviy CPF protokoli bilan ishlaydigan, yugurish musobaqalarini uzaytirishi mumkinligini ko'rsatadigan dalillar topdi53. Shunga ko'ra, mazali taomlar bilan bog'liq bo'lgan narsalar ta'mli ogohlantirgichlarga tuyadi orofaciyal reaktsiyalarni ifodalashi mumkin bo'lgan oldingi xabarlar mavjud19-21, boshqa ta'mli hedonika yoki "sevish" o'lchovidir. Shunday qilib, oziq-ovqat mahsulotlarini ishlab chiqarish ko'plab marshrutlar orqali ovqatlanishni talab qiladi, bu esa o'z navbatida iste'molchini o'ziga xos ovqatlantiruvchi javoblarni tetiklash va / yoki oziq-ovqat ta'mini yaxshilash10. Ushbu jarayonlar replikatsiya potensiatsiyalangan overeatlashning turli zaifliklariga asoslanishi mumkin, ehtimol ushbu ta'sirga nisbatan sezuvchanlikdagi individual farqlarni tushuntirib berishi mumkin1,61,62. Mavjud topilmalar kalamushlarda CPFning motivatsion komponentini tanlab tahlil qilish uchun samarali yondashuvni namoyish etadi.
usullari
Mavzular va apparatlar
Long Evans kattalar kalamushlari (N = 32 ta umumiy kalamush; 16-tajriba uchun n = 1 va 16 va 2-tajribalar uchun n = 3), vazni 370–400 g., Shaffof plastik qafaslarga harorat va namlikda - boshqariladigan vivarium. Sichqonlar edi ad libitum eksperiment davomida o'z uyidagi hujayralardagi suvga kirish. Tajribaning ba'zi bosqichlarida, quyida ko'rsatilganidek, kalamushlar oziq-ovqat taqiqlash jadvaliga joylashtirildi. Xo'jalik yuritish va eksperimental protseduralar UC Irvine Institutional Hayvonlarni Qo'llab-quvvatlash va Foydalanish Qo'mitasi (IACUC) tomonidan tasdiqlangan va laboratoriya hayvonlarini saqlash va ulardan foydalanish bo'yicha milliy tadqiqotlar bo'yicha kengashning tavsiyasiga muvofiq bo'lgan.
Behuda protseduralari bir xil xonalarda (ENV-007, Med Associates, St Albans, VT, AQSH) o'tkazilib, tovushli va engil zichlangan xonalarda joylashgan. Sükroz eritmasi shpin pompasi orqali har bir xonaning bir uchi devorida, zanglamas po'latdan yasalgan grid taglikdan 2.5 sm balandlikda joylashgan, chuqurlikdagi plastik chashka ichiga berilishi mumkin. Oziq-ovqat idishni kirish joyida joylashgan fotobu detektori sukroz iste'moli bilan bog'liq bo'lgan bosh tomoshalarini kuzatish uchun hamda Pavlov kondensatsiya seanslari davomida shartli yondashuvlarga javob berish uchun ishlatilgan. Ba'zi test mashg'ulotlarida (2 va 3 eksperimentlari) sukroz eritmasi oziq-ovqat idishining qarama-qarshi tomonida joylashgan oxirgi devorda joylashgan 0.5 sm teshikka ~ 1.3 sm joyga qo'yilgan gravitatsiyaviy oziqlangan metall ichimlik chig'anoqini yalab olish orqali erishish mumkin edi. Oziq-ovqat idishidan va metall burchakdan individual yallig'lanish test lyometr qurilmasi (ENV-250B, Med Associates, St Albans, VT, AQSH) yordamida sinov sessiyalari davomida doimiy ravishda qayd etildi. Sekrozni metall burchakdan olish mumkin bo'lganda, barcha seanslar vaqtida oziq-ovqat idishini ushlab turgan so'nggi devor oldida oq shaffof pleksiglas paneli joylashtirilgan. Houselight (3 W, 24 V) yoritishni ta'minladi va foniy shamollatish va fon shovqinini ta'minladi.
Pavlovian shamollatish
Sichqoncha 85 d jurnal o'qitishidan oldin o'zlarining erkin oziqlanadigan tanasi vaznining taxminan 2% gacha bo'lgan vazndagi vaznini o'z vaznini saqlash uchun oziq-ovqat taqiqlash jadvaliga joylashtirildi, ular har birida 60 mahsulotini 20% sukroz eritmasini (0.1 ml) oldi kunlik sessiya (1 soat). Keyinchalik sichqonchani 10 d Pavlov konditsionasini qabul qildi. Har kunlik kassatsiya sessiyasi 6-min oralig'idagi (2-80 oralig'i) o'zgarmaydigan 10-min intervalli (3-2 oralig'i) bilan ajralib turadigan sinovlar bilan birga 4-min audio nishoni (CS +; 0.1-dB oq shovqin yoki 2- . Har bir CS + sinovida 20% sukroz eritmasi (A / V) bo'lgan 30 ml alikuotlari (XNUMX soniya orqali etkazilgan) XNUMX-soniya tasodifiy vaqt jadvaliga muvofiq oziq-ovqat kassasiga etkazildi va natijada sinov uchun o'rtacha to'rt sakkaroz etkazib berish . Konditsionerlarning so'nggi kunida sichqonlarga muqobil iz (CS-, muqobil eshitish ruxsati) CS + bilan bir xil tarzda taqdim etilgan, ammo sukroz eritmasi bilan bog'lanmagan ikkinchi seans berilgan. Kutilmagan xulq-atvor, CS boshlanishi bilan birinchi sükrozni etkazib berish (konditsiz oziqlantirish xatti-harakatini aniqlashga yo'l qo'ymaslik uchun) davomida chashka yondashuvlarining nisbatlarini (fotobomali tanaffuslar) taqqoslash yo'li bilan o'lchandi, sinov oralig'i. Keyin barcha kalamushlar besh kundan keyin berildi ad libitum qo'shimcha sinov o'tkazilgunga qadar Pavlovning so'nggi shartnoma muddati tugagandan so'ng ularning parvarish qilinishiga ruxsat berilgan.
Cue-potensiatsiyalangan oziqlantirish testi
Sinov 1
Ushbu tajriba CS + ning sukroz eritmasi iste'mol qilishda ishlatiladigan bir xil oziq-ovqat idishidan iste'mol qilishiga ta'sirini baholadi, shunda kuyikishning shartli javob (ya'ni chashka yaqinlashishi) sinovda sukrozni olish uchun zarur bo'lgan xatti-harakatlarga mos edi. Pavlov konditsionerligi paytida yo'qotilgan vazndan so'ng, kalamushlar 48-dan ajratilgan bir juft CPF testini olganlar, bu vaqtda kalamushlar o'z uylarida saqlanib qolgan. Har bir CPF seansi davomida (86 daqiqa umumiy davomiylikda) 2% yoki 20% sukroz eritmasi doimo sichqonchani kubokni 0.1 ml sukroz bilan to'ldirib, oziq-ovqat idishida tayyorlangan. Shu bilan birga, kubokni to'ldirishni oldini olish uchun sukrozni etkazib berish faqat oxirgi sukrozni etkazib berishdan keyin kamida 4 s o'tgandan keyin va agar sichqonchaning aralashish davri mobaynida kamida besh marta bajarilgan bo'lsa qo'llaniladi. Ushbu mashg'ulot davomida 2-min eshitish stimullarining har biri 4 marta noto'g'ri tasodifiy tartibda taqdim etilgan (ABBABAAB), qattiq 8-min interval bilan ajralib turardi. Dastlabki sinov sessiyani boshlashdan keyin 8 min boshlandi. Masalan, maslahatlarning qiziqishlariga ta'sirini baholashdan oldin to'yishni boshlash imkonini berdi. Sinov tartibi Pavlovning mashq qilish shartlari bilan taqqoslandi, shuning uchun birinchi sub'ekt sub'ektlarning yarmi va CS - sub'ektlarning qolgan yarmini CS uchun taqdim etdi. Sukroz konsentratsiyasini sinash tartibi ham 2% sinovdan oldin va 20% sinovdan ikkinchi, va qarama-qarshi tartibni oladigan (ya'ni, barcha hayvonlar har ikki kontsentratsiyani alohida testlarda oldi) har bir shartning yarmi bilan muvozanatli.
Sinov 2
Ushbu tajribada biz CS + ning sukroz eritmasini iste'mol qilishiga Pavlovning konditsionerligi davrida ishlatilgan idishdan ko'ra boshqa manbadan foydalanishini tekshirdik, shuning uchun bu belgiga shartli javob sinovda sukroz iste'mol qilish uchun zarur bo'lgan xatti-harakatlarga mos kelmas edi. Biz o'tkazgan dastlabki test faqat 2% sukroz holini o'z ichiga olgan. Sichqonlarga Pavlov konditsionasi vaqtida yo'qotilgan vaznni qayta tiklashga ruxsat berilganidan so'ng, ularga ikki kunlik sessiyalar (86 min vaqt) berildi, unda 2% sukroz eritmasiga kichik bir tuynuk ichida joylashgan metall burchakdan (gravity-fed shisha) oziq-ovqat kosasining qarama-qarshisidagi devor. Hayvonlarni bu joydan sukrozni izlashga to'sqinlik qilish maqsadida, chiqindilar kirishida (keyingi CPF testlari bilan birga) seanslar vaqtida oziq-ovqat idishlarini joylashtirib devor oldida oq plexiglas paneli joylashtirilgan. Ushbu mashg'ulotlar sichqonchani sakkrozni ichishni eshitish belgilari bo'lmagan holda yangi manbadan ichish tajribasiga ega bo'lish uchun yaratilgan. Ertasi kuni kalamushlarda 1% sukroz kassaga emas, balki metall chig'anoqda doimo mavjud bo'lgan holda Experiment 2 da aytilganidek, bitta CPF sinov sessiyasini oldi.
Ushbu dastlabki testda CPFning kichik dalillari bo'lgani uchun ehtimol CS + bilan oziq-ovqat idishini chaqirganligi va og'riyotgan yondoshuv munosabati tufayli, biz kalamush sukroz izlanishini mustahkamlash va siqilishni kuchaytirish uchun kalamushlarni qo'shimcha jarrohlik mashg'ulotlarini (CS + yo'qligi) berdi chashma mavjud bo'lganda oziq-ovqat idishining yondashuvi (u panel bilan qoplanganligi sababli). Shuning uchun 5 sintez suyukrozasi eritmasiga 10 daqiqadan kam bo'lgan 20 d to'plamidan tashqari, sichqonlar ham ovqat taqsimlash jadvaliga (Pavlovning konditsion bosqichida bo'lgani kabi) qaytarib berildi. Keyin sichqonchani 4 d dan keyin berildi ad libitum bu bosqichda yo'qotilgan vaznni qayta tiklashga ruxsat berish uchun uy choyiga kirish. Keyinchalik, dastlabki tayyorgarlikning so'nggi kuni (masalan, CS + sinovlarida 20% sukroz oziq-ovqat idishiga etkazilgan) bo'lgani kabi, kalamushlar CS + va CS- bilan Pavlovianni qayta tayyorlash mashg'ulotlarini olishdan oldin (20 s) o'tkir oziq-ovqatdan mahrum qilindi. E'tibor beringki, bu va boshqa barcha Pavloviyani qayta tayyorlash mashg'ulotlari chog'ida kameradan chiqarilgan. Keyin sichqonchani ~ 20 soat berildi ad libitum birinchi sinash bilan bir xil bo'lgan metall burchakdan foydalanib, ikkita CPF testini o'tkazmasdan oldin uy choviga kirish uchun ruxsat berilgan. Faqat ikkita alohida testda 2% yoki 20% ga ruxsat berilgan (Experiment 1 da bo'lgani kabi).
Sinov 3
Eksperiment 2 dan olingan kalamushlarni D1 dopamin retseptorlarida dopamin signalizatsiya qilishiga ta'sirini baholash uchun qo'shimcha sinovlar o'tkazildi. Sichqoncha birinchi navbatda 10-min oralig'ida qayta ishlanib, 20% sukroz eritmasiga ruxsat berildi. Chunki, kalamushlar tez qaytgach normal og'irlik darajasiga qaytdi ad libitum o'tkir 20-g oziq-ovqat mahrumligidan so'ng uyda chov hosil bo'lganida, ushbu protseduradan foydalanib, biz bu mushakni qayta tayyorlash sessiyasi davomida kalamushlarni ochlik bilan ta'minlashga va keyingi Pavloviyani qayta tayyorlashda (oldingi CS + va CS-sessiyalarda) oxirgi ikkita CPF testi. Sichqoncha kamida 20 soatda berildi ad libitum har bir test seansi oldidan uyga chow kirish. CPF testining ushbu yakuniy bosqichida kalamushlar test sinovlari davomida xo'ppozdan 20% sukrozaga doimo kirish imkoniyatiga ega edi. Har bir testdan o'n besh daqiqa oldin sichqonchani sukroz iste'molini bostirish uchun yetarli miqdorda ma'lum dozani (1 mg / kg) foydalanib, yoki steril sho'r yoki ip-23390 (selektiv D1 dopamin retseptorlari antagonisti) dan ipni (0.04 ml / kg)25,34,63. Sichqoncha har ikkala dori sharoitida sinovdan o'tkazildi, test uchun buyurtmalarni muvozanatlashdi.
Ma'lumotlarni tahlil qilish
Birlamchi bog'liq o'lchov individual yalishlar bo'lib, ular barcha CPF seanslari davomida kontakt likometr yordamida 10 milodiy aniqlikda qayd etilgan. Likometr o'lchovlarida juda kamdan-kam hollarda biz sichqon (panja yoki og'iz) va saxaroza (yoki metall naycha) o'rtasidagi doimiy aloqadan kelib chiqqan asarlar topdik. Ushbu artefaktlar yuqori chastotali likometrning javoblari (> 20 Hz) shaklida bo'lgan. Sichqonlar maksimal yalash tezligini <10 Hz ga teng ekanligini hisobga olsak640.05-Hz kesish chastotiga mos keladigan so'nggi (eskiradigan) yalanglikning 20 soniyasida sodir bo'lgan barcha potensial yalang'och javoblarni chiqarib tashladik. Ushbu mezonni hisobga olgan holda yalanglikdagi javoblarning kamida 20% tashqarisiga chiqarilgan sessiyalar to'liq tahlildan chiqarildi (1 1 dan 1 sinovidan XNUMXda).
Yaling harakati
Har bir seans uchun biz davrlarning barcha turlarida (Pre-CS +, CS +, Pre-CS-, CS-) umumiy sonlarni aniqladik. Bizning boshlang'ich qaramlik o'lchovlari (total licks) bir tayanch o'zgaruvchisi bo'lgani uchun, bu ma'lumotlar Poissonning javob taqsimotiga ega bo'lgan umumlashtiruvchi lineer aralash effektlar modellari va log bog'lanish funksiyasi 65-68. Ushbu statistik yondashuv parametrlarni baholashning shartli funktsiyasi (qattiq ta'sirlar) va individual (tasodifiy effektlar) sifatida foydalanish imkonini beradi. 1 va 2dagi eksperimentlarda barqaror ta'sir strukturasi CS Period (Pre, CS) CS tipidagi (CS-, CS +) x konsentratsiyalari (2%, 20%) va uch past darajadagi asosiy effektlar va o'zaro ta'sirlar. 3 eksperimenti uchun eksperimental konstruktsiyadagi o'zgarishlarni joylashtirish uchun dori (transport vositalari, SCH) zichligi bilan almashtirildi. Ushbu o'zgaruvchilar barcha sub'ektlar o'zgaruvchilari bo'lib, kategorik yondashuv sifatida baholandi va ta'sirlar kodli edi. Tasodifiy effektlarni tanlab olish modeli Akaike axborot mezonini minimallashtiradigan modelni aniqlashga yordam berdi 69, shuningdek parametr uchun ma'lumot nuqtalarining sonini 10 ostiga tushmasligini ta'minlaydi 70,71. Ushbu mezonlardan foydalanib, eksperimentlar bo'yicha eng yaxshi tasodifiy ta'sir strukturasi CS Period, CS turi va konsentratsiyali (yoki Giyohvand)72. Barcha statistik tahlillar MATLAB (Matematika ishlari, Natick, MA) da o'tkazildi. Barcha testlar uchun alfa darajasi 0.05 edi. Barcha predictors kategorik bo'lganligi sababli, ta'sir o'lchami standart bo'lmagan regressiya koeffitsienti bilan ifodalanadi 73, deb xabar beradi b matnda va model chiqdi jadvallarida. O'zaro aloqalarning post hoc tahlillari post-hoc yordamida o'tkazildi F- omnibus analizidagi oddiy effektlar CoefTest MATLABda ishlash.
Yalang'och harakatlarning mikroyapı tahlil qilish
Individual yalang'ochlar yalang'och jangni boshlash yoki davom ettirish deb tasniflangan. Bo'sh bir nechta ketma-ketlik bilan taqsimlandi, unda interli oraliq intervallari (ILI) 1-dan oshmadi74. So'nggi yalang'ochlikdan kamida 1-dan o'tgandan keyin, keyingi yiv yangi baqaning boshlanishi sifatida belgilandi. Chastotani va davomiyligi birinchi navbatda sessiyalarni yuqoridan olingan tahlillarda jamlangan lickslar uchun bajarilganidek, oldingi CS va CS davrlariga bo'linib hisoblab chiqilgan. O'sha davrlarda hech bo'lmaganda 1 s davridan oldin o'tgan har bir yiv bir urush deb baholandi. Har bir juftlikning davomiyligi bu kurashda birinchi va oxirgi yiv o'rtasida vaqt oralig'i sifatida hisoblangan. Yakkama-yakka bo'lib qolgan individual yaltiroq janglarning bir qismi hisoblanmadi. Keyinchalik mediatsiya tahlillari uchun namuna kattaligini maksimal darajada oshirish39, CS davrining umumiy ta'sirini, CS turini va ushbu mikro strukturaviy tadbirlarning kontsentratsiyasini baholash uchun tajribalar bo'ylab jismoniy zo'ravonlik va tugma vaqtlari ma'lumotlari tushib ketdi. Ekspert 23390 da SCH-3 shartidan olingan ma'lumotlar ushbu tahlillarga kiritilmagan.
Ushbu ma'lumotlar CS Periodi sobit-ta'sir strukturasini o'z ichiga olgan umumlashtirilgan chiziqli aralashmalar effektlari bilan tahlil qilingan va CS Periodi uchun moslashtiriluvchi sub'ektlarning shov-shuvsiz aralashmalari bilan xarsa (xamda pastki darajadagi barcha ta'sirlar va asosiy effektlar) , CS turi va xamda. Umumiy yalang'och xulq-atvorini tahlil qilishda bo'lgani kabi, 1 Eksperimentidan bitta ratning bir seansi tahlildan chiqarildi. Chastotani tahlil qilish chastota ma'lumotlarining hisob-kitob turi tufayli Poissonning javob taqsimotini log-bog'lanish funktsiyasi yordamida amalga oshirdi. Bout davomiyligi tahlilining xamma davomiyligi 0 va + ∞ orasida chegaralangan doimiy o'lchov bo'lib, kundalik bog'lanish funktsiyasi bilan gamma javob taqsimotini qo'lladi. Taqqoslash uchun, xuddi shunday tahlil eksperimentlar davomida yiqilgan jami lyuklar ustida olib borildi, unda tahlillar, birma-bir tajriba jami yalang tahlillari kabi, log aloqasi funktsiyasi bilan Poissonning javob taqsimotini qabul qilgan. Kuchli CS Periodi CS tipi shovqinni har bir ratning qaysi tajribaga bog'liqligiga bog'liq bo'lmaslik uchun, yuqorida keltirilgan tahlilga o'xshash, ammo qo'shimcha sobit effekt predictor bilan o'xshashlik bilan juft chastotada va tugma vaqtida ikkinchi ketma-ket modellar ishlatilgan Eksperimental jarayonlar CS CS Periodi. Tajriba keskin omil bo'ldi. Va nihoyat, maqsadi yalang'och tasdiqlovchi tadbir sifatida40-42biz gamma javob taqsimotiga ega bo'lgan umumlashtirilgan chiziqli aralashma modelini va log bilan bog'lanish funktsiyasidan foydalanib (CS) boshlang'ichdan keyingi birinchi yivga kechikishni tahlil qildikn = 310). Ushbu model CS Type × Konsentratsiyasining aniq effektli tuzilishini (va barcha quyi tartibdagi o'zaro ta'sirlar va asosiy effektlarni) va CS turi, Konsentratsiya va CS turi × Konsentratsiyasi uchun moslashtirilgan sub-substruktsiyalarning tasodifiy ta'sir tuzilishini o'z ichiga olgan.
Chastotani va urishning davomiyligini mediatsion tahlil qilish
Ikki xil vositachilik modellari43,75,76 CPF bo'yicha CS davri (Pre, CS) va kontsentratsiyasining (2%, 20%) ta'sirlari (yoki etishmasligi) jismoniy mashqlar chastotasi va / yoki tugma davomiyligi bilan bog'liqligini aniqlash uchun o'tkazildi. CS davr modeli, o'zgaruvchan X CS davri (Pre, CS), yakuniy o'zgaruvchan edi Y o'sha davrdagi umumiy miqdordagi moyaklar edi va mediatorlar chastotaM1) va bout davomiyligi (M2). Konsentratsion modeldagi o'zgaruvchi X sukroz kontsentratsiyasi bo'lgan. Cheklangan uyg'unlashgan yalang'ochlik, birinchi navbatda, CS + (masalan natijalar), faqat CS + sinovlari tahlil qilindi. Har bir ion uchun va har bir test seansi uchun, oldingi CS + va CS + davrlari uchun har bir jangning o'rtacha davomiyligi va yuraklarning o'rtacha soni aniqlandi. Ushbu tahlillar 1 va 2 (16 tajribalari uchun 2 tajribalari × 2 konsentratsiyasi × 2 CS davrlari = 128 ma'lumotlar nuqtalari) va 3 (16 faralari × 2 CS davrlari = 32 ma'lumotlar nuqtalari) . Jami yalang'och xulq tahlilida bo'lgani kabi, 1dan Experiment 158 dan bitta rat uchun bir sessiya olib tashlandi va jami 9 ma'lumotlar nuqtalarini qoldirdi. Kamdan kam hollarda, kalamushlar sessiya vaqtida (CSV / 158; 9.5%) oldingi CS + yoki CS + davrlarida yaltiratmadi. Bunday hollarda o'rtacha soniya va soniyalar soni "0" deb kodlangan va o'rtacha tugma davomiyligi uchun bo'sh xujayra bo'lib qoladi. Xuddi shu modellar ro'yxatlar bo'yicha o'chirib tashlashni amalga oshirilganda (ya'ni, bu vaqtning bo'sh bo'lgan hujayra bo'lgan satrlarni olib tashlash) o'xshash naqshlar saqlanadi. Ushbu tahlillar umumiy chiziqli modellarni (ya'ni, oddiy yoki ko'p sonli chiziqli regressiya) o'z ichiga olganligi sababli, tugma chastotasi va umumiy yalli ma'lumotlar kvadrat ildizga aylantirildi va avtoulovning davomiyligi ma'lumotlari ijobiy chayqalish uchun tuzatish uchun jurnalga aylantirildi. Bilvosita ta'sirning ahamiyati 95% perpendikulyator bilan 10,000 yinelemalari bilan yuklashni aniqladi. Regressiya koeffitsientlari an'anaviy mediatsion tahlil hisobotlari (masalan, c'= To'g'ridan-to'g'ri ta'sir X on Y)43,75.
Chastotani va vaqtni o'zgartirishning o'zgaruvchan o'zgarishidagi individual farqlar
Yuqorida aytib o'tilgan tahlillar CS + ning guruhlarni mikrotuzilmasiga ta'sirini baholashga imkon berdi. Ushbu effektni ifodalashdagi individual farqlarni ham tavsifladik. Har bir rat uchun jang chastotasi va jang davomiyligi o'lchovlari bo'yicha ikkita farq ballari hisoblab chiqilgan. CS Period Modeliga parallel ravishda, CS + davridagi tortishish chastotasi CS + davridagi (masalan, CS + - CS-dan oldingi +) davrdan tortib olingan; Konsentratsiya modeli uchun 2% saxaroza sinovi paytida tortishish chastotasi 20% sinov paytida tegishli qiymatdan chiqarildi (ya'ni 20% -2%). Ushbu hisob-kitoblar bout chastotasining o'zgarishini tavsiflovchi choralarni ishlab chiqardi (ΔFrequency). Xuddi shu hisob-kitoblar bout davomiyligi uchun qilingan (ya'ni, DDuration). Shunday qilib, Pre-CS + / CS + va 2% / 20% ma'lumotlar nuqtalarining har bir jufti uchun aylanish chastotasi va tugma davomiyligidagi o'zgarishlar aniqlandi. Ushbu taqsimotlarning vositasi 0 bilan bir xil namuna bilan solishtirilgan tDistribyutiv shovqinlarni umumiy o'zgarishlardan uzoqroq baholash uchun -test (a = 0.05). Ushbu ma'lumotlar punktlarining har biri beshtalik chastotasi va davomiyligi davomida ortishi va / yoki kamayishi va ikki tomonlama chayqalish uchastkasi bilan ifodalangan (masalan, CS + boshlang'ichi bo'yicha tugma chastotasi / kechikish vaqtining oshishi) va ma'lumotlar ulushini aniqlashga imkon beradi har bir 2 × 2 kvadrantida nuqta (chastota / vaqt × o'sish / pasayish). Farq balining nolga teng bo'lgan ma'lumotlar punktlari pasayish (ya'ni o'sish emas) deb tasniflandi. Chi-kvadrat (ch2) va CS davri va konsentratsiya ma'lumotlariga muvofiq testlarning yaxshi natijalari ushbu ma'lumot nuqtalarining taqsimlanishi to'rtta toifadagi (a = 0.05) bir xil tarqalgan ma'lumotlardan farq qiladimi-yo'qmi aniqlandi. Ushbu ma'lumotlarning har bir tajriba uchun to'rtta kvadrant bo'yicha taxminan teng taqsimlanganligini aniqlash uchun, har bir eksperimentda har bir kvadrantdagi ma'lumotlar punktlari soni o'rtasidagi munosabatni baholash uchun CS Periodi va xamda ma'lumotlar uchun oddiy korrelyatsion tahlillar o'tkazildi va har bir kvadrantda umumiy nisbatlar bo'yicha hisoblab chiqilgan ma'lumotlar bloklarining kutilayotgan soni.
Sukroz iste'molining mikroyapı usuli
Barcha test seanslari davomida iste'mol qilinadigan sukroz eritmasi umumiy hajmining oldingi CS + dan CS + davrlariga qadar chastotani va davomiyligi o'zgarishi bilan belgilanishi uchun umumiy yakuniy chiziqli aralash effektlar tahlillari o'tkazildi. Tahlillarga ko'ra, barcha giyohvand bo'lmagan sharoitlardan olingan ma'lumotlar (masalan, 2% va 20% 1 va 2 eksperimentlari uchun 3% sukroz sinovlari va Experiment 2 dan olingan avtomobil holati). Tahlillar kundalik bog'lanish funktsiyasi bilan gamma javob taqsimotini qabul qildi. Birinchi tahlil yuqorida ta'riflanganidek, chuqurlikda / davomiylikdagi 2 × XNUMX kategorik guruhdagi ketma-ketliklarning ortishi va kamayishi o'rtasidagi asosiy ta'sirlar bo'yicha (ml) iste'mol qilingan jami sukroz eritmasi tushirildi. Ikkinchi tahlil, D ning doimiy qiymatining asosiy ta'siri va o'zaro ta'sirida umumiy sukroz iste'molini kamaytirdiFrequency va sukroz konsentratsiyasi.
Ma'lumotlar mavjudligi
Mavjud tajribalar davomida tahlil qilingan ma'lumotlar to'plamlari mos keladigan so'rov bo'yicha tegishli muallifdan olinishi mumkin.
Elektron qo'shimcha material
Rahmatlar
Ushbu tadqiqot NIH granti AG045380, DK098709, DA029035 va MH106972 tomonidan SBO tomonidan qo'llab-quvvatlandi. Tadqiqotchilar loyihani tayyorlashda, ma'lumotlar to'plashda va tahlil qilishda, nashr qilish yoki maqolani tayyorlashda moliyachilarning ahamiyati yo'q edi.
Mualliflar hissasi
SBO eksperimentlarni ishlab chiqdi va ishlab chiqdi; BiH va ATL eksperimentlarni amalga oshirdi; ATM va SBO ma'lumotlari tahlil qilindi. Barcha mualliflar maqolani yozib, maqolani ko'rib chiqdilar.
Eslatmalar
Raqobatbardosh qiziqishlar
Mualliflar hech qanday raqobatbardosh manfaatlar bildirmaydi.
Izohlar
Elektron qo'shimcha material
Qo'shimcha ma'lumotlar Ushbu yozuvni 10.1038 / s41598-018-21046-0da kuzatib boradi.
Nashriyotchining eshi: Springer Nature, nashr etilgan xaritalar va korporativ aloqalarda yurisdiktsial talablarga nisbatan betaraf qoladi.
Ishtirokchi ma'lumotlari
Endryu T. Marshall, Email: ude.icu@1aahsram.
Sean B. Ostlund, Email: ude.icu@dnultsos.
Manbalar
;
