CRF tizimini ishga tushirish kompulsiv ovqatlanishning qorong'u tomoniga (2009)

. 2009 Nov 24; 106 (47): 20016-20020.

2009 Nov 9-da chop etildi. doi:  10.1073 / pnas.0908789106

PMCID: PMC2785284

mavhum

Tana vaznini nazorat qilish uchun ovqatlanish mazali taomlardan mahrum bo'lish davrlarini o'z ichiga oladi. Tadqiqot shuni ko'rsatdiki, kalamushlar uzatiladigan oziq-ovqat mahsulotlaridan parvarish qilinadigan oziq-ovqat mahsulotlarining yangilanib turish imkoniyatini cheklab qo'yishi va kortikotropinni chiqaruvchi omil - 1 (CRF1) retseptorlari antagonist-reversiblli xatti-harakatlar, shu jumladan, gipofagiya, kamroq mazali taomlarni sotib olish uchun motivatsion kamchiliklar va anksiyogenik xulq-atvor. Chig'anoqqa chiqish CRFning oshishi va CRFning oshishi bilan birga o'tdi1 amigdala markaziy yadroidagi elektrofizyolojik javob. Biz CRF-CRF-dan ajralib chiqadigan ekstradigotomatik davolashni taklif qilamiz1 ovqatlangan ovqatlardan chiqarib yuborilgan tizimlar, suiiste'mol qilingan dori-darmonlardan voz kechishga o'xshash, mazali taomlarni majburiy tanlovi, sog'lom muqobillarni yo'qotish va salomatlik uchun ovqatni qabul qilishda salbiy his-tuyg'ularga barham berishi mumkin.

Kalit so'zlar: ovqatlanish kasalliklari, semirib ketish, ovqatlanish, mazali taomlarga qaramlik, tortib olish

Obaktsiya va yuqumli kasalliklarning shakli, giyohvandlikka o'xshashlik shakllari surunkali retsidiv holat sifatida qarama-qarshi turish davri (ya'ni, "taqiqlangan" taomlardan qochish uchun ovqatlanish) va relaps (ya'ni kompulsiv, tez-tez nazorat qilinadigan, salbiy oqibatlarga qaramasdan davom etadigan). Xushbo'y ovqatlarning ijobiy mustahkamlash xususiyatlari yaxshi ma'lum bo'lsa-da (, ), ularning salbiy mustahkamlash xususiyatlariga kamroq e'tibor berilgan (-(masalan, salbiy hissiy holatlarni bartaraf etish uchun mazali taomlarni iste'mol qilish) yordamida olib borilgan xatti-harakatlarning ehtimolligi ortadi. Favqulodda giyohvand moddalarni keng tarqalgan foydalanishning intervalgacha sikllari ilg'or "emotsional qaramlikka" olib kelishi mumkin, chunki preparatning yuqori va / yoki odatdagi miqdori ma'lum emotsional nuqtasini saqlab qolish uchun kerak, shuningdek, salbiy hissiy holatga qo'yiladi. dori sotib olish (, ). Bunday his-tuyg'ularni olib tashlash davom etadigan va qayta tiklanadigan giyohvand moddalarni iste'mol qilishning salbiy mustahkamlash xususiyatlari orqali relapsni ishlatish va uni rag'batlantirishga imkon beradi (, ).

Ekstradigotomatik kortikotropinni chiqaruvchi omil (CRF) miya qo'zg'atuvchi tizimlar giyohvand moddalardan foydalanishdan tortib, qaramlik darajasiga o'tishi bilan bog'liq bo'lib, bu jarayonda suiiste'mol qilingan dori-darmonlarni ijobiy, takomillashtirish mexanizmlari o'rniga bu salbiy ta'sirlar ortib boradi. CRF barcha asosiy suiiste'molliklarni, jumladan spirtli ichimliklar, nikotin, kokain, opiat, amfetamin va tetrahidrokannabinol (masalan,, ). Shunga o'xshash tarzda, yuqori darajada taomlanadigan oziq-ovqat mahsulotlari uchun takrorlangan, takrorlangan takrorlangan tsikllar, giyohvandlik modellashuv modellarida ko'rilganlarga o'xshash CRF tizimi neyroxodaptatsiyasini keltirib chiqaradi (, , ).

natijalar

Ajablanarlisi, keng tarqalgan oziq-ovqat mahsulotlari bilan ta'minlanganlik darajasi muntazam ravishda oziq-ovqat bilan ta'minlanmagan taomlarni yo'qotish va ovqatlanishning qayta tiklanganidan keyin taom pishirishga olib keladi-). XFFning farazini sinash uchun1 tizimlari, bu besleme adaptasyonlarını, erkak Wistar sıçanlarını (n = 20) har haftada bir kunlik choy dietasi (Chow / Chow) yoki 5 kun (C fazasi) uchun chow ad libitum, keyin 2 kun (P fazi) uchun juda yoqimli, shakarli dieta (Chow / Choy) ) (Qarang Shakl S1 va diet dasturi uchun Shakl S2 oziq-ovqat iste'mol qilish va tana vazniga parhez jadvali ta'siri uchun). 7 xafta parhezli velosipeddan so'ng, kalamushlar peptit bo'lmagan CRFni oldi1 Lotin-kvadrat konstruktsiyasida R121919 (0, 5, 10 va 20 mg / kg, sc) retseptorlari antagonisti). Ovqatlantiruvchi dietadan chow yoki chowdan rohat ovqatga o'tishdan oldin davolanish uchun 1 soat berilgan. R121919 dozasiga qaramlik bilan ovqatlanishning mazali ovqatlanishini kamaytirish va Chow / Palatable kalamushlarida ovqat pishirishni ko'paytirish (Diyet fazi x Diyet rejasi x Dori dozasi: F3,54 = 7.25, P Chow elementlarini iste'mol qilishni o'zgartirmasdan <0.001). R121919 mazali ovqatga qayta kirishda (P fazasi) yuqori darajada mazali dietani iste'mol qilishni kamaytirdi (Anjir. 1A). Mustaqil testlarda CRF1 retseptorlari antagonisti xushbo'y ovqatdan (C fazasi) olingan Chow / Palatable sichqonchasida kamroq mazali chovning iste'molini ko'paytirdiAnjir. 1B). Shunday qilib, ikkala chow gipofagiyasi va mazali ovqatlardan ortiqcha ovqatlanishni qisqartirish natijasida R121919 assimilyatsiya velosipedining amplitudasini zaiflashtirdi (dastlabki tanlangan P fazasi davomida dastlabki olish va dastlabki chekinish o'rtasidagi farq C fazasi: Diet Schedule → Dori dozasi: F3,54 = 7.25, P <0.001) (Anjir. 1C). CRF-CRF-ni progressiv ravishda jalb qilish1 R121919 xun dietasi ta'siri bilan emas, balki parhez tarixiga ko'ra tizimni, dietaga ta'sir qilishdan keyin mazali ovqat iste'molini kamaytirmadi yoki mazali taomlardan birinchi chiqarib yuborishda chov iste'molini oshirdiShakl S3).

Shakl 1. 

CRF ta'siri1 (HNUMX, 121919, 1 va 0 mg / kg, SC) retseptorlari antagonisti R5 (10 sintezlash, 20 va 3 mg / kg)A) P fazi (ta'mli taomlarga qayta kirishga kirishish), (B) C fazasi (kalamushlar tuxumdan chiqarilgan edi) ...

Ajablanarlisi, uzoq vaqt davomida mazali taomlardan foydalanishni to'xtatish, xavotirga o'xshash xatti-). XFFning farazini sinash uchun1 retseptorlari R121919 (0, 20 mg / kg, SC, 1-pretreatment) qo'llanilgan salbiy hissiyot belgilariga jalb qilingan va kalamushlar yuqori plyus-maze (o'rtasida)), 5-9 h dan mazali ovqatlanishdan choyga o'tishdan so'ng. Mashinada ishlaydigan Chow / Palatable kalamushlari 7 xafta parhezli velosipeddan chiqarilish vaqtida anksiyojenik ta'sirni aks ettiradigan chow-fed nazoratdan ko'ra kamroq ochiq qo'l vaqtini namoyish qildi (Anjir. 2A), faqat ikkita tortishish davridan keyin ko'rilmagan ta'sirShakl S4). R121919 bilan davolash (20 mg / kg, xushbo'y ovqatlarning ortiqcha pishishi va chowning kamaytirilishi) dozasini kamaytirish Chow / Palatable kalamush tomonidan ochiqchalarni qo'lda tekshiruvning kamayib ketishiga to'siq bo'ldi. Diyet rejasi × ​​Doz: F1,43 = 7.25, P <0.02; Anjir. 2Chapdan). R121919 administratsiyasi yopiq qo'l yozuvi sifatida o'lchangan umumiy faoliyatni o'zgartirmadi. Shuning uchun, R121919 tekshiruvlarning xatti-harakatlarini o'zgartirib, intervalgacha, uzoq vaqt davomida mazali taomlardan foydalanishni to'xtatish bilan bog'liq bo'lgan anksiyete o'xshash harakatlarga to'sqinlik qildi va CRF1 Tizimlar.

Shakl 2. 

CRF ta'siri1 yuqori reaktsion antagonist R121919 (-1 sintezlash, 0, 20 mg / kg, sc) yuqori plyus-maze xulq-atvoridan = 47) va kamroq mazali taomlar uchun progressiv nisbatn = 17) erkak Wistar kalamushlarida mazali taomlardan olib tashlangan ...

Chunonchi oziq-ovqat mahsulotlarining uzluksiz va uzoq muddat foydalanish imkoniyatidan mahrum bo'lish, shuningdek kamroq afzal qilingan parhezni olish uchun motivatsion kamchiliklarga olib kelishi mumkin, bu hipohedonik xarakatning potentsial ko'rsatkichi (). Xuddi shunga o'xshash, kamroq afzal qilingan zaytun mantiqchilariga progresif-nisbiy mustahkamlash rejalari bo'yicha javob berish ilgari giyohvand moddalarni olib tashlash paytida ko'rilgan motivatsion kamchiliklarni). CRF ishtirokini aniqlash1 retseptorlari yordamida R121919 ning diet-siklli kalamushlarning ishlashiga ta'sirini sinovdan o'tkazdik. Oldingi ma'ruzalarni tasdiqlash (), mashina bilan ishlov berilgan Chow / Palatable sıçanları, Chow / Chow sichqonchani bilan solishtirganda, kamayib ketish nuqtasi va emissiya qilingan jami javoblar kamayganligi bilan kamroq mazali chow qo'lga olish uchun ishlaydigan azaltılmış turtki ko'rsatdi () (Shakl S5). R121919ni oldindan davolash (xNUMX mg / kg, chow gipofagiya o'sishida samarali dozani, mazali oziq-ovqat giperfajiyasini kamaytirish va anksiyogenik xulq-atvorini kamaytirish) ta'sirini kamaytirishga yordam berdi. (To'xtab turish nuqtasi: Diet rejasi × ​​Dori: F1,15 = 8.17, P <0.02; umumiy javoblar: Diyet jadvali × Preparat: F1,15 = 9.14, P <0.01; Anjir. 2B, chapda). R121919 Chow / Palatable kalamushlarida ishlashni osonlashtiradigan muqobil talqinga qarshi, R121919 sessiyadagi 5 mingacha bo'lgan davrda kamchiliklarni bartaraf etdi (Diet Schedule × Drug: F1,15 = 2.55, P <0.05) (Anjir. 2B o'ng). Shuning uchun, CRF1 retseptorlari antagonisti hayratlanarli darajadagi imtiyozli ta'mirlovchi vositalar uchun javob beradigan ilg'or-nisbatlardagi motivatsion kamchiliklarni puchga chiqardi.

Oziqlantiruvchi oziq-ovqat mahsulotlaridan olib tashlanishi stres bilan bog'liq ekstradigrafotal CRF tizimini faollashtirishi mumkinligi haqidagi gipotezani sinab ko'rish uchun amigdala markaziy yadroidagi CRF mRNA va peptid darajalari, real vaqtda PCR va RIA miqdori bilan aniqlandi. Sichqoncha 7 haftada diet-cycled yoki doimiy ravishda qovurilgan chow edi. Anesteziya va dekapitasyondan so'ng, amigdala markaziy yadroidagi miya muskullari, rohatlanadigan parhezga kirishni qayta tiklashdan keyin va keyinchalik yig'ib olinadi. Chow / Palatable kalamushlarida mazali taomlarni olib tashlash amygdala markaziy yadrosi ichida ChF / Chow sichqonlari bilan taqqoslaganda CRF mRNA ifodasini besh marta oshirdiAnjir. 3A). Aksincha, CRF mRNA nazoratga o'xshash darajalariga qaytib taomlar bilan yangilanib turish imkonini berdi (F2,19 = 6.97, P <0.01). Chow / Yoqimli kalamushlar faqat bir marta aylantirilganda (Chow / Chow va Chow / Palatable: 5.5 ± 2.2 va 6.3 ± 1.7 ns), amigdalaning markaziy yadrosidagi CRF mRNA ekspresiyasi o'zgarmadi va CRF- CRF1 xunning o'tkir ta'siri bilan emas, balki parhez tarixi bilan bog'liq. Bunga qo'shimcha ravishda, CRF mRNA ifodasi yadrodagi akumbens, prefrontal korteks yoki insulin korteksida o'zgarmay qoldi va topilmalarning mintaqaviy o'ziga xosligini qo'llab-quvvatladiShakl S6). Qizig'i shundaki, hipotalamusning paraventrikulyar yadrosida yoki Chow / Palatable sıçanlarda bir xil chiqish nuqtasida aylanadi kortikosteronda CRF mRNA ekspresyonunda mazmunli o'zgarishlar gözlenmemiştir (Shakl. S6 va S7), hipotalamik emas, balki, amigdalarda o'zgarib turadigan gipotezani, CRF stress tizimlarini taxminan xatti-harakatlarning moslashuvini ta'minlaganligini ko'rsatmoqda. Bundan tashqari, xushbo'y oziq-ovqatdan olingan hayvonlarning amigdala markazidagi yadrodagi CRF peptid immunoreaktivligi chow-fed hayvonlarga nisbatan 70% ko'proq edi, lekin xushbo'y oziq-ovqat mahsulotlariga kirishni nazorat qilish darajalariga qaytardiF2,24 = 4.01, P <0.01) (Anjir. 3B). Shunday qilib, mazali oziq-ovqat mahsulotlarini olib tashlash amigdalaning markaziy yadroidagi stress bilan bog'liq CRF peptid tizimini faollashtirdi, natijada preparat va etanolni chiqarib tashlash modellarida (masalan,, ). Oziqlantiruvchi oziq-ovqat mahsulotlariga yangilanib turish amigdala markaziy yadroida ekstradigotomatik CRF tizimining faollashuvini kamayganligi sababli, CRF aktivatsiyasi tashvish (), mavjud natijalar, shuningdek, mazali taomning salbiy ta'sir kuchini olishlari mumkinligini ko'rsatmoqda).

Shakl 3. 

Ovqatlantiruvchi dietani almashinishning ta'siri (A) CRF mRNA va (B) Amigdala markaziy yadroidagi CRF peptid ifodasi. Sichqoncha (n = 45) 7 hafta davomida diet-siklli va amigdala zarralarining markaziy yadrosi to'plangan. CRF mRNA va peptidi ham ...

Oziq-ovqatlardan olingan so'rg'ichlarning XFFga nisbatan sezgirligini ko'rsatadigan farazni sinash uchun1 Amigdala markaziy yadrosida gamma-aminobutirik kislota (GABA) signalini antagonist modulyatsiya qilish,), biz R121919 ning amigdala neyronlarning markaziy yadrosi GABAergik uzatishga ta'sirini o'rganib chiqdik. Erkak Wistar kalamushlari (n = 14) 7 hafta davomida diet-cycled va kamroq mazali chowga o'tgandan keyin qurbonlik qilindi. Amigdala sinapslarining markaziy yadrosi bo'yicha Bazal GABAerjik uzatish parhez tarixiga nisbatan farq qilmadi (n = 23 xujayralari) GABA-inhibitory postsinaptik potentsiallarni (IPSP) uyg'otish uchun ishlatiladigan barcha stimullarning intensivligida. Biroq, R20 (121919 μM) bilan 1 dyumli superfuziya uyarilgan GABAAChow / Palatable kalamushlarning amigdala neyronlari markaziy yadrosi (M ± SEM: 30 ± 6% n = 9 hujayralari) chow-fed boshqaruvlari (M ± SEM: 12 ± 6%, P <0.05, n = 11 hujayra) (Anjir. 4). 30 min tozalash davridan so'ng, har ikki guruhning IPSPsi shunga o'xshash, boshlang'ich darajaga qaytdi. Shuning uchun, amygdala CRF-CRF ni haddan tashqari faollashtirish bilan mos keladi1 o'rganish jarayonida ko'rilgan tizim va ta'sirlar), diet-siklli kalamushlar CRF ning inhibitoryal ta'siriga nisbatan sezgirlikni oshirdi1 Amigdala GABAergik uzatish markazining yadrosida retseptorlari antagonisti.

Shakl 4. 

CRF ta'siri1 GABA bo'yicha R121919 retseptorlari antagonistiA- erkak jinsli kalamushlarda (Wistar) kalamushlarida o'zgaruvchan parhezlar bilan almashinuv tarixidan so'ng amigdala markaziy yadroidagin = 14) ovqatlanishning mazali taomlaridan olib qo'yildi. (A) R121919 sezilarli darajada kamaydi ...

muhokama

Kollektiv natijalar stressli ekstradigrafotamal CRF-CRF (favqulodda vaziyatlarda) bilan og'rigan oziq-ovqat mahsulotlarining keng tarqalib borishi tarixiy,1 tizimlar. Xususan, selektiv CRF1 retseptorlari antagonisti R121919 turli xil va selektiv ta'sirga ega, diet-siklli kalamushlarda ovqatlantirish, muntazam chov iste'molini ko'paytirish va yangilanib turadigan kirishlarda juda yoqimli taomlarni iste'mol qilishni kamaytirish. CRF1 retseptorlari antagonisti ham xushbo'y dietadan olib tashlash paytida ko'rilgan kamroq afzal qilingan chov uchun javob berishda yuqori darajada anksiyete o'xshash xatti-harakatlarini va motivasion kamchiliklarni tanlagan holda blokladi. Xushbo'y oziq-ovqatdan foydalanishni bekor qilish amygdala markaziy yadroidagi CRF geni va peptid ifodasini oshirdi, yangilangan kirish bilan bartaraf etildi. Bundan tashqari, diet-siklli kalamushlar CRF ning inhibitiv ta'siriga nisbatan sezgirlikni oshirdi1 Amigdala markaziy yadroidagi GABAerjik uzatish bo'yicha retseptorlari antagonisti, shuningdek, amigdala CRF-CRF1 tizimi. Yangilangan oziq-ovqat mahsulotlarini qayta tiklashda ortiqcha ovqatlanishni qisqartirish, CRF tizimini faollashtirilishi natijasida, CRFga nisbatan oshib borishi va CRFga elektrofizyolojik sezuvchanlik sifatida qaralishi mumkin1 amigdala markaziy yadroidagi retseptor blokirovkasi. CRF1 antagonistlarni oldindan davolashni, chunonchi oziq-ovqat mahsulotlaridan foydalanishga kirishishdan avval, hozirgi vaqtda mavjud bo'lgan CRF-CRF1 tizimni bekor qilish. Ovqatlanishga yaroqli ovqatlarning qisqacha muddati, ishlov berilmagan hayvonlarda ko'rinadi), ushbu tadqiqotda ko'rinib turganidek, mazmunli oziq-ovqat mahsulotlariga kirishdan keyin, CRF peptidining ifodalanishi, chiqarilishi va ta'sirini normalashtiradigan vaqt kursini aks ettirishi mumkin. Shunday qilib, vaqti-vaqti bilan ovqatlanish rohatli dietalar miya mukofot tizimlarida allostatik o'zgarishlarga olib kelishi mumkin, bu esa CRF-CRF1 Amigdala markaziy yadroidagi tizimlar.

Ushbu natijalar nafaqat majburiy ovqatlanish uchun, balki umuman motivatsiyaga ham taalluqlidir. Hedonik tizimlarning takror faollashishi miyada raqibga o'xshash jarayonlarni (ya'ni, CRFni jalb qilish) paydo qildi1 davriy tizimda) vazifalarni yo'qotishdan farqli bo'lgan. Bunday tizimlar orasida neyrokodotatlar (), shuningdek, barcha asosiy giyohvandlik moddalariga (masalan,, ). Ushbu tadkikotda giyohvand moddalarga ta'sir etmaslikning umumlashtirilishi, vaqt o'tishi bilan geyonik stimullarning intensivligida takroran takrorlashni boshdan kechiradigan shaxslarda motivatsion jarayonlarning shikastlanishiga olib keladi (). Adaptiv ravishda, bunday jarayonlar oziq-ovqat izlash va iste'mol qilish xatti-harakatlarini energiya zichligi yuqori, yuqori mukofotli oziq-ovqat mahsulotlariga yo'naltirishi mumkin, shu bilan birga kamroq energiyaga boy, kam mukofotlanadigan oziq-ovqat mahsulotlarini (yoki nooziq-ovqat mahsulotlarini) olish uchun sa'y-harakatlarni qadrsizlantirish, mavjud bo'lganda evolyutsiy jihatdan foydali moslashish. em-xashak uchun sarflanadigan xarajatlar (masalan, yirtqich hayvonlarning ta'siri, cheklangan vaqt va energiya manbalari). Ammo hozirgi sharoitda, xuddi shu jarayonlar semirishni ko'paytiradigan oziq-ovqat mahsulotlarini unchalik mazali bo'lmagan, ammo ehtimol ko'proq to'yimli alternativalar evaziga iste'mol qilishi mumkin.

Shunday qilib, CRF-da giyohvandlikka o'xshash o'zgarishlar1 tizimlar haydovchiga yordam berishi mumkin (i) energiyani iste'mol qiladigan oziq-ovqat mahsulotlarini iste'mol qilish, (ii) sog'lom alternativlarni kam iste'mol qilish vaiii) taomlanadigan taomlardan foydalanishni to'xtatib turganda paydo bo'ladigan salbiy hissiy holat, , -, ). Inson holatiga tarjima qilingan CRF tizimining faollashuvi obezlikda ovqatlanishni va ovqatlanish bilan bog'liq kasalliklarni qayta tiklashni, shuningdek, mazali taomlardan tsiklik qochishning boshqa salbiy motivatsion sekelini rivojlanishiga yordam beradi.

Materiallar va usullari

Mavzular.

Erkak Wistar kalamushlari (n = 155, 180-230 g, 45 kunlik) Charlz daryosidan olingan va 19-soatda simli, plastmassa hujayralarga (10.5 × 8 × 12 dyuym) etib borganida bir xonada joylashgan: 12 h orqaga qaytish chastotasi (10 : 00 h chiroqlari o'chirilgan), namlik - (60%) va harorat nazorati ostida (22 ° C) vivariy. Sichqoncha Misrga asoslangan kemirgen chowga ega bo'lgan [Harlan Teklad LM-485 Diet 7012: 65% (kkal) karbongidrat, 13% yog ', 21% protein, metabolizatsiya mumkin energiya 341 kal / 100 g] va 1 hafta oldin tajribalar boshlanishi. Eksperimental protsedura laboratoriya hayvonlarini saqlash va ulardan foydalanish bo'yicha milliy qo'llanmalar (NIH Publication number 85-23, revised 1996) va "Laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish tamoyillari" (http://www.nap.edu/readingroom / bookslabrats) va Scripps Tadqiqot Instituti Institutional Hayvonlarni Qo'llab-quvvatlash va Foydalanish Qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

Preparatlar.

R121919, Chen va uning hamkorlari tomonidan ta'rif etilganidek, sentezlenmiştir. (). R121919 - yuqori yaqinlik (Ki = 3.5 nM) selektiv CRF1 boshqa bir qancha CRFdan yuqori fizik-kimyoviy xususiyatlarga ega bo'lgan antagonist1 antagonistlar (masalan, logP va logD ni kamaytirish, suvda eruvchanlikni oshirish) (). Sinov uchun, R121919 avval 1 M HCl (yakuniy hajmning 10%) ichida eritilib, so'ngra 20% (wt / vol) 2-gidroksipropil-b-siklodekstrin (Sigma-Aldrich) yakuniy vositasiga suyultiriladi, PH 4.5 ga NaOH. R121919 eritmasi xNUMX ml / kg hajmida sc (sc) qo'llanildi.

Ad Libitum Diet Alternation.

Uyqusizlikdan so'ng, kalamushlar avvalgi 3-4 kundan oziq-ovqat iste'mol qilish, tana og'irligi va ozuqaning samaradorligi uchun mos keladigan ikkita guruhga bo'lingan. Bir guruhga haftada 7 kunlik (Chow / Chow) chow diet ("Chow") taqdim etildi va ikkinchi guruhga har hafta 5 kunlik chow ad libitum taqdim etildi, keyin 2 kun davomida juda yoqimli , shokolad aromali, yuqori sarkrozli xun ("xushbo'y", "chow / Palatable"). Oziqlantiruvchi parhez - ozuqaviy jihatdan to'liq, shokoladli, yuqori sarkroz (50% kkal), AIN-76A asosidagi diet, bu makaronutrient nisbatlarda va choy dietasiga energiya zichligi bilan taqqoslanadi [TestDiet; shokoladli aromatik Formula 5TUL: 66.8% (kkal) karbongidrat, 12.7% yog ', 20.5% oqsil, metabolizatsiya qilinadi energiya 3.48 kkal / g; 45-mg aniq oziq-ovqat pelletlari sifatida shakllantirildi., )]. Qisqartirish uchun har haftaning birinchi 5 kunlari (faqat chow) va oxirgi 2 kunlar (tajriba guruhi bo'yicha chow yoki mazali) barcha tajribalarda C va P bosqichlari deb nomlanadi. Diyetalar bir vaqtning o'zida mavjud emas edi. 485-dan 7012-g ekstrudirovka qilingan granulalar [65 (13)), 21 (341% (kkal) karbongidrat, 100% yog ', 5% protein, metabolizatsiya mumkin energiya 4 kal / 5 g] % (kkal) karbongidrat, 65.5% yog ', 10.4% oqsil, metabollash mumkin energiya 24.1 kal / 330 g; TestDiet]. Ilgari tadqiqotlarga o'xshab, Harlan Teklad LM-100 chow oziqlantirish va yuqori plyus-labirint tajribalarida (), TestDiet 5TUM chow (), progressiv nisbat, CRF mRNA, CRF peptid tarkibi, kortikosteron RIA va elektrofizyologik tajribalarda qo'llanilgan.

Avval chop etilgan (), ikkinchi dietaga nisbatan birinchi dietaning kundalik iste'mol qilish miqdori (kkal) sifatida hisoblangan nisbatan parhezlik afzalliklari quyidagilar edi: 5TUL shokoladli diet (shakarli xirmonli diet) va boshqalar. Harlan LM-485 chow (M ± SEM 90.7 + 3.6%) va 5TUL shokoladli diet (shakarli pishgan xun) va boshqalar. 5TUM chow diet (M ± SEM afzalligi 91.2 ± 3.7%).

Elevated Plus-Maze.

Yuqoridagi ortiqcha labirinti testi Cottone va boshq. (). Chow / Palatable sichqonchani kamida 7 hafta davomida dietazaldirilgan va undan keyin har ikki avtomobil yoki 20 mg / kg R121919 (-1 h, sc) bilan pretreedan va xushbo'y oziq-ovqatdan chow (P → C bosqichi). Chow / Chow nazoratidagi kalamushlar bir-birining orasidagi konstruktsiyalardan = 47). Choy dietasi test sinovigacha bo'lgan vaqtdan boshlab mavjud edi. Qo'shimcha ma'lumot uchun qarang Si Matn.

Oziq-ovqat mahsulotlarini takomillashtirish jadvali.

Oziq-ovqat mahsulotlarini mustahkamlashning progressiv nisbat jadvali Cottone va boshq. (). Turli xil ko'rsatilmagan bo'lsa, jonivorlar jonivorlarning A / I chow (5 g ekstrudirovka qilingan granulalar) ni o'zlarining uydagi hujayralarida tekshirib chiqdilar. Oziq-ovqat inspektorlari 45-mg chow-nozik pelletlar bo'lib, ekstrudalangan uy qafasi chow dietiga o'xshash. Sinovlar sub'ektlar 14 min uchun raqamni to'ldirmasdan tugatildi va oxirgi to'ldirilgan raqam kesish nuqtasi deb belgilandi. Chow / Palatable sichqonchani kamida 7 haftada diet-cycled bo'lib, keyin RoxNUMX (-121919 h, sc) bilan xushbo'yli dietadan (P → C bosqichi) o'tish uchun oldindan davolandi. Chow / Chow nazoratidagi kalamushlar bir-birining orasidagi konstruktsiyalardan = 17). R121919 dozalari (0, 20 mg / kg tana vazn, sc) ikki subtitrlar ichida muvozanatlashtirilgan dizaynda berilgan. Qo'shimcha ma'lumot uchun qarang Si Matn.

Raqamli real vaqtda PCR.

Sichqoncha (n = 20) 7 xafta davomida parhez tsikli bilan o'tkazildi, behushlik qilindi va ikki xun sharoitida (har haftalik tsiklning 5 va 7 kunlari) boshi kesildi. Miyalar tezda chiqarilib, miya matritsasida koronal tarzda kesilgan va amigdalaning markaziy yadrosi, akumbens yadrosi, insula qobig'i va prefrontal korteks mushtlari muzdek bosqichda to'plangan. Umumiy RNK har bir miya mushtidan hayvon to'qimalaridan RNK ajratib olish uchun standart protokol yordamida tayyorlangan. Umumiy RNK (1 mkg) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga binoan Oligo (dT) 20 ishtirokida teskari transkripsiyadan o'tkazildi. Kantitativ RT-PCR reaktsiyalari 20 mkL hajmda 0.5 mM astar va 4 mM MgCl yordamida amalga oshirildi.2. Natijalar ikkinchi turdagi usullar bilan tahlil qilingan va tasodifiy birliklarda ifodalangan. Ma'lum bir ketma-ketlik uchun barcha RT-PCR reaktsiyalari bir xil jarayonda amalga oshirildi. Qo'shimcha ma'lumot uchun qarang Si Matn.

Peptid kislota ekstrakti va CRF RIA.

Sichqoncha (n = 25) kamida 7 hafta davomida diet-sikli qilingan, ikkita xun shartlari (har haftaning xNUMX va 5 kunlari) davomida behushlik va dekapitatsiya qilingan. Brainlar tezda olib tashlandi va miya matritsasida tirnoq bilan kesilgan, amigdala zambillarining markaziy yadrosi esa muzqaymoqli bosqichda to'plangan. Peptid kislota ekstrakti, allaqachon o'rnatilgan protsedura (). ZFrF kabi immunoreaktivlik to'qimasi Zorrilla va boshq. Dan moslangan nozik va o'ziga xos qattiq-fazali RIA bilan aniqlandi. (). Qo'shimcha ma'lumot uchun qarang Si Matn.

Corticosterone RIA.

Sichqoncha (n = 12) kamida 7 hafta davomida parhez tsikli bilan ishladilar va quyruq qonidan ikki diet sharoitida (har haftalik tsiklning 5 va 7-kunlari) olingan. Plazmadagi kortikosteronga o'xshash immunoreaktivlik darajasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga binoan sotiladigan RIA to'plami bilan aniqlandi (MP Biomedicals, Inc.) (). Qo'shimcha ma'lumot uchun qarang Si Matn.

Elektrofizyologik tadqiqotlar

Tilim tayyorlash.

Amigdala tilimning markaziy yadrosi ilgari tasvirlangan, ) kalamushlardan (n = 7 / gurux) kamida 7 xaftada dietazalga aylangan, xushbo'y oziq-ovqatlardan olib tashlanganidan keyin behushlik va dekapitatsiya qilingan 2-3 soat. Miyalari tezda olib tashlandi va 95% O bilan gazlangan muz kabi sovuq sun'iy serebrospinal suyuqlikka (aSFS) tushirildi2 va 5% CO2. Quvurlar qisqartirildi, taxminan 30 min uchun interfeys konfigürasyonunda inkübe qilindi va butunlay suv ostida va doimo issiq, gazli aCSF bilan superfuslandı. Supero'tkazuvchi ichida ma'lum kontsentratsiyalarni olish uchun aktsioner eritmalaridan aCSFga preparatlar qo'shildi. 2-4 ml / daq sirt supero'tkazish stavkalarida ishlatiladigan dori konsentratsiyasi 90 daqiqada NNUMX% ga boradi.

Elektrofizyologiya.

Biz amigdala neyronlarning markaziy yadroini keskin mikropipetlar bilan uzluksiz kuchlanish yoki oqim qisqichi rejimi yordamida qayd etishdi. Ko'p neyronlarni ularning membranaviy potentsiali yaqinida o'tkazdik. Ma'lumotlar, preamplifier bilan olingan va pClamp dasturi yordamida keyingi tahlil qilish uchun saqlangan. Farmakologik izolyatsiya qilingan GABAA retseptorlari vositasida inhibitor postsinaptik potentsial (GABAA-IPSP'lar) amygdala markaziy yadrosi ichida bipolyar stimulyatorli elektrod orqali mahalliy ravishda ogohlantirilib, glutamat retseptorlari blokirovkalarini CNQX, APV va GABAB retseptorlari blokirovkasi CGP 55845A. Har bir hujayra uchun javob parametrlarini aniqlash uchun kirish-chiqish protokoli bajarildi. Maksimal amplitudani ochish uchun zarur bo'lgan kuchlanishgacha bir IPSPni olish uchun zarur bo'lgan oqim oqimidan boshlab bir qator oqim qo'llanildi. Biz 1-3 × sifatida teng qadamlar (pol, yarm maksimum va maksimal) uchun uchta ogohlantiruvchi intensivlikni normallashtirdik. Bundan tashqari, kuchlanish-oqim (VI) chiziqlarini hosil qilish uchun hiperpolarizatsion va depolarizatsion oqim bosqichlari (200-pA increments, 750-ms davomiyligi) ham qo'llanildi. Clampfit dasturidan foydalanib, uyg'otilgan IPSP amplitudalari va VI javoblarini aniqladik. Barcha chora-tadbirlar selektiv CRF bilan superfuzsiyadan oldin o'tkazilgan1 retseptorlari antagonisti R121919 (1 μM), uning superfusi (20 min) davomida va keyin yuvish (30 min). Qo'shimcha ma'lumot uchun qarang Si Matn.

Statistika.

Talabalarnikidan foydalanilgan guruhlarni taqqoslash tOddiy asosiy effektli tahlil yoki Newman-Keulsning muhim omnibus effektlaridan so'ng taqqoslashlari (ikki guruhli taqqoslashlar) yoki varyans tahlillari (ANOVA) (kamida uch guruhli taqqoslashlar)P <0.05). Oziqlantirish tajribasidan olingan ma'lumotlar uch tomonlama aralash ANOVAlar bilan Diet jadvali bilan sub'ektlar o'rtasidagi omil sifatida va Doza va Diet fazasini sub'ektlar omili sifatida tahlil qilindi. Ko'tarilgan plyus-labirint eksperimentidan olingan ma'lumotlar ikki tomonlama ANOVAlar tomonidan Diet jadvali va dozasi bilan sub'ektlar o'rtasida tahlil qilindi. Kuchaytiruvchi eksperimentning progressiv nisbati jadvali uchun tanaffus va umumiy javoblar ikki tomonlama aralash ANOVAlar bilan Diet jadvali bilan sub'ektlar o'rtasidagi omil va Dozani sub'ektlar ichidagi omil sifatida tahlil qilindi. Dastlabki 5 daqiqada javob berish vaqti, uch tomonlama aralash ANOVAlar bilan diet rejasi bilan sub'ektlar o'rtasidagi omil va dozalar va vaqtni sub'ektlararo omillar sifatida tahlil qilindi. Elektrofizyologik tadqiqotlar ma'lumotlari ANOVA sub'ektlari orasida yoki tegishli sub'ektlar orasida ANOVA bilan takroriy choralar bilan tahlil qilindi. Kortikosteron RIA ma'lumotlari, bu erda ikki tomonlama aralash ANOVA tomonidan Diet jadvali bilan sub'ekt o'rtasidagi omil va Diyet fazasi sifatida ichki omil sifatida. Instat 3.0, Prism 4.0 (GraphPad), Systat 11.0 va SPSS 11.5 (SPSS) ishlatilgan statistik paketlar.

 

Qo'shimcha materiallar

Qo'llab-quvvatlovchi ma'lumot: 

Rahmatlar.

Texnik yordam uchun Mayk Arendsga muharrirlik yordami, ma'muriy yordam uchun Meri Gichuhi va Bob Lintz, Jeanette Helfers, Stefani Dela Cruz va Molly Brennanga minnatdormiz. Ushbu ishni milliy diabet va oshqozon-ichak kasalliklari granti DK70118, DK26741 va P30DK56336 milliy institutlari qo'llab-quvvatladi; Narkotiklarni suiiste'mol qilish bo'yicha milliy institut Grant DA023680; Spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish va alkogolizmga qarshi milliy institutlar AA016731 va AA015566; Nörolojik kasalliklar milliy instituti va inqiroz granti IT32NS061847-01A2; AG028040 Aging grantining milliy instituti; Milliy yurak, o'pka va qon instituti Grant HL088083; Ellison Medical Foundation; va Pirsning spirtli va giyohvandlik tadqiqotlari markazi. Ushbu asarning bir qismi Milliy giyohvand moddalar bilan bog'liq muassasa va Alkogolizm va ichkilikbozlik milliy institutining "Intramural Research" dasturi tomonidan qo'llab-quvvatlandi. Bu Scripps Tadqiqot Institutidagi 19807 qo'lyozma raqami.

Izohlar

 

Mualliflar hech qanday manfaatlar to'qnashuvini e'lon qilmaydi.

 

 

Ushbu maqola PNAS To'g'ridan-to'g'ri yuborilgan.

 

 

Ushbu maqola onlaynda qo'llab-quvvatlovchi ma'lumotlarni o'z ichiga oladi www.pnas.org/cgi/content/full/0908789106/DCSupplemental.

 

Manbalar

1. Volkow ND, donishmand RA. Giyohvandlik bizni semirishni qanday tushunishimizga yordam beradi? Nat Neurosci. 2005; 8: 555-560. [PubMed]
2. Corwin RL. Bingeing sichqonlari: intervalgacha ortiqcha harakatlarning modeli? Tuyadi. 2006; 46: 11-15. [PMC bepul maqola] [PubMed]
3. Boggiano MM va boshq. Ovqatni yuqori darajada iste'mol qilish obezlikka nisbatan sezgir bo'lishdan qat'i nazar, ovqatni eyishdan oldindan aytib beradi: yalang'och va obzisli binge ovqatlanish va semiz ovqatlanishsiz semizishning hayvon modeli. Int J Obes. 2007; 31: 1357-1367. [PubMed]
4. Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Qand iste'mol qilish uchun dalillar: intervalgacha, ortiqcha shakarning iste'mol qilishning qiziqish va neyrokimyoviy ta'siri. Neurosci Biobehav Rev. 2007; 32: 20-39. [PMC bepul maqola] [PubMed]
5. Teegarden SL, Bale sh.b.. Xun tanlovida pasayish hissiylikning oshishi va xun parchalanishi uchun xavf tug'diradi. Biol psixiatriyasi. 2007; 61: 1021-1029. [PubMed]
6. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla E.P. Opioidlarga qaramli oldindan salbiy kontrast va yuqori darajada iste'mol qilinadigan oziq-ovqat mahsulotlari bilan cheklangan kalamushlarda ovqat eyish kabi. Neyropopsikofarmakologiya. 2008; 33: 524-535. [PubMed]
7. Koob GF. Narkomaniyadagi miya shikastlanishi tizimining ahamiyati. Neyron. 2008; 59: 11-34. [PMC bepul maqola] [PubMed]
8. Koob GF, Le Moal M. Giyohvand moddalarni iste'mol qilish: Hedonik homeostatik drenajlash. Ilmiy. 1997; 278: 52-58. [PubMed]
9. Ghitza UE, Gray SM, Epstein DH, Rays KC, Shaxam Y. Anxiogen dori yohimbine rat retsessor modelida rohat ovqatlanishni tiklaydi: CRF1 retseptorlarining roli. Neyropopsikofarmakologiya. 2006; 31: 2188-2196. [PMC bepul maqola] [PubMed]
10. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla E.P. Intervalgacha imtiyozli oziq-ovqat bilan ta'minlanganlik, kalamushlarda chovning mustahkamlash samaradorligini pasaytiradi. Am J Physiol. 2008; 295: R1066-1076. [PMC bepul maqola] [PubMed]
11. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla E.P. Ovqatlantiruvchi, tashvishli va metabolik uyg'unlashuvlar, ayolning kalamushlarida afzal oziq-ovqatga muqobil yo'l bilan o'tish. Psikoneuroendokrinologiya. 2008; 34: 38-49. [PMC bepul maqola] [PubMed]
12. Berner LA, Avena NM, Hoebel BG. Sichqoncha bilan bingeing, o'zini cheklash va tana vaznining ortishi. Semirib ketish. 2008; 16: 1998-2002. [PubMed]
13. Zorrilla E.P., Koob GF. Anksiyete uchun CRF1 antagonistlarining terapevtik salohiyati. Ekspert Opin Investig Dori vositalari. 2004; 13: 799-828. [PubMed]
14. Carobrez AP, Bertoglio LJ. Xavotirga o'xshash xatti-harakatlarning ettita va vaqtinchalik tahlili: 20 yil yuqori plyus-maze modeli. Neurosci Biobehav Rev. 2005; 29: 1193-1205. [PubMed]
15. Markou A va boshq. Hayvonlarning giyohvand iste'mol qilish modellari. Psixofarmakologiya. 1993; 112: 163-182. [PubMed]
16. Jorj O va boshq. CRF-CRF1 tizimining faollashuvi nikotinlarga bog'liq bo'lgan kalamushlarda nikotinning o'z-o'zini boshqarishini kamaytirishga olib keladi. Proc Natl Acad Sci AQSh. 2007; 104: 17198-17203. [PMC bepul maqola] [PubMed]
17. Wells AS, NW, Laugharne JD, Ahluwalia NS o'qing. Past yog'li xunga almashtirilganidan keyin kayfiyat o'zgarishi. Br J Nutr. 1998; 79: 23-30. [PubMed]
18. Cruz MT, va boshq. CRF1 retseptorlari antagonistlari in vitro va in vivo jonzotlarning markaziy amigdalida GABA ning etanol bilan indikatsiyasini blokirovka qiladi. Spirtli ichimliklar klinikasi 2008; 32: 6s1 P27A.
19. Koob GF, Bloom FE. Preparatning giyohvandlik va molekulyar mexanizmlari. Ilmiy. 1988; 242: 715-723. [PubMed]
20. Flaherty CF, Grigson PS. Kuchaytirishdan farqli o'laroq: kutilmagan kontrastdagi reaktsiya davomiyligining ahamiyati. J Exp Psychol. 1988; 14: 165-176. [PubMed]
21. Chen S va boshq. 2,5-dimetil-3- (6-dimetil-4-metilpiridin-3-yl) -7-dipropilaminopirazolo [1, 5-a] pirimidin (NBI 30775 / R121919) va kuchli va Oraliq faol kortikotropinni chiqaruvchi omil retseptorlari antagonistlari. J Med Chem. 2004; 47: 4787-4798. [PubMed]
22. Cooper SJ, Francis RL. Issiqda ikki oziq-ovqat to'qimasini qo'llash orqali chloridazepoksidni oziqlantirish parametrlariga o'tkir yoki surunkali qo'llanilishining ta'siri. J Pharm Pharmacol. 1979; 31: 743-746. [PubMed]
23. Laboure H, Saux S, Nicolaidis S. Oziq-ovqat to'qimalarining o'zgarishini metabolik parametrlarga ta'siri: Qisqa va uzoq muddatli oziqlantirish modellari va tana og'irligi. Am J Physiol. 2001; 280: R780-R789. [PubMed]
24. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla E.P. FG 7142, ayolning kalamushlarida ovqatlanish hajmini va doimiy oziqlantirishning tezligi va muntazamligini qisqartiradi: Benzodiazepinning teskari agonistlari oziq-ovqatning sifatini pasaytiradi. Neyropopsikofarmakologiya. 2007; 32: 1069-1081. [PubMed]
25. Lahmame A, Grigoriadis DE, De Souza EB, Armario A. Brain kortikotropini chiqaradigan omil immünoreaktivligi va beshta kalamush shilinidagi retseptorlari: majburiy suzishga nisbatan munosabat. Brain Res. 1997; 750: 285-292. [PubMed]
26. Zorrilla E.P., Valdez GR, Veyiss F. Viloyatdagi CRF kabi immunoreaktivlik va plazma kortikosteron darajasida o'zgaruvchan giyohvand moddalarni sindirib tashlashda o'zgaradi. Psixofarmakologiya. 2001; 158: 374-381. [PubMed]
27. Roberto M, Madamba SG, Mur SD, Tallent MK, Siggins GR. Etanol sichqonchani markaziy amigdala neyronlarning oldingi va postsinaptik qismlarida GABAerjik uzatishni oshiradi. Proc Natl Acad Sci AQSh. 2003; 100: 2053-2058. [PMC bepul maqola] [PubMed]
28. Roberto M, Madamba SG, Stouffer DG, Parsons LH, Siggins GR. Etanolga bog'liq kalamushlarning markaziy amigdalanida GABA chiqarilishi oshdi. J Neurosci. 2004; 24: 10159-10166. [PubMed]