使用荧光激活细胞分选（FACS）（2013）检测来自单个大鼠背侧纹状体的甲基苯丙胺激活的表达Fos的神经元的分子改变

甲基苯丙胺和其他药物激活大脑中所有神经元的一小部分。 我们以前开发了一种基于荧光激活细胞分选（FACS）的方法来表征在表达神经活动标记Fos的活化神经元中选择性诱导的分子改变。 然而，该方法需要汇集来自许多大鼠的样品。 我们现在描述一种改进的基于FACS的方法，以使用多重预扩增策略表征来自单个大鼠的表达Fos的背侧纹状体神经元的分子改变。

Fos和NeuN（神经元标记物）免疫组织化学表明，在急性甲基苯丙胺注射（5 mg / kg，ip）后，背侧纹状体神经元的6-90％被激活5 min，而通过盐水注射激活少于0.5％的神经元。

我们使用FACS将NeuN标记的神经元分离成Fos阳性和Fos阴性神经元，并使用来自少至5个Fos阳性神经元的RT-qPCR评估mRNA表达。 甲基苯丙胺诱导3-20倍增立即早期基因弧，本垒打-2，c-fos，fosB及其同种型（ΔfosB和新型同种型ΔfosB-2）在Fos阳性而非Fos阴性神经元中。 当在来自单个背侧纹状体匀浆的未分选样品中评估时，立即早期基因mRNA诱导10倍低或不存在。 我们的改进方法使得研究复杂成瘾模型中由药物或药物相关线索激活的神经元中的独特分子改变成为可能。

甲基苯丙胺和其他药物激活大脑中所有神经元的一小部分。 我们在这里报告了一种改进的方法来表征在表达神经活动标记Fos的活化神经元中选择性诱导的分子改变。 我们使用FACS以及靶向PCR预扩增来评估来自单个大鼠背侧纹状体的表达5 Fos的神经元的急性甲基苯丙胺诱导的基因表达。 甲基苯丙胺诱导Fos阳性而非Fos阴性神经元中立即早期基因（IEG）的3-20倍数增加。 靶向PCR预扩增使得研究复杂成瘾模型中由药物或药物相关线索激活的神经元中的独特分子改变成为可能。

发布2013。 本文是美国政府的一项工作，在美国属于公共领域。