印度J Pharmacol。 2016 Jan-Feb; 48（1）：53-58。
PMCID：PMC4778208
抽象
目的：
伏隔核（NAcc）在成瘾和摄入行为中起作用。 为了评估与此有关的orexinergic系统，我们输注了Orexin A拮抗剂，并评估了Wistar大鼠对食物摄入液体摄入量和酒精偏好的影响。
材料和方法：
近交Wistar大鼠（n = 54）分为对照组和实验组（低剂量和高剂量）。 使用立体定位方法，将导管插入双侧以达到NAcc。 输注低剂量（3 ng）和高剂量（6 ng）的食欲素A拮抗剂（SB-334867），食物消耗，饮水量和酒精摄入量，以及两次无酒精选择偏好酒精测试。实验组。 对照组接受盐水输注，其余方法相同。 在输注后立即在1 h，2 h，4 h和整天进行测量，并在图和表中表示。
结果：
在1中输注后立即观察到水摄入减少st H （P <0.05）和2nd H （P <0.01），与低剂量和对照组相比，高剂量组的这一比例更高。 酒精摄入也遵循相同的模式。 在没有两瓶选择的情况下，大鼠对酒精没有表现出任何特定的偏好。
总结
在治疗的大鼠中，食物和液体的摄入量呈剂量依赖性减少。 这表明orexinergic系统可能在摄入行为中起作用。 然而，Orexin A可能无法通过奖励中心NAcc调节酒精成瘾。
介绍
已知伏隔核（NAcc）会影响物质的摄入行为和成瘾。[1,2]它也与奖励和动机有关。[3]在NAcc中描述了两个不同的子区域，这两个区域的功能出现了很多重叠。[4向NAcc微量注射成瘾药物显示多巴胺水平呈剂量依赖性增加。 多巴胺是参与奖赏回路的神经化学物质。 安非他明的核内自我给药显示出增加的奖励感。[5皮质下区域的其他部分也会影响摄入行为，这可能与伏隔核密切相关。 显示食物摄入量和水摄入量受到基底脑的几个部分的影响，例如外侧下丘脑[6室旁核，透明隔，[7]和基底外侧杏仁核。[8]在摄入行为的调节方面存在广泛的神经网络。 NAcc已被证明与主要的皮质下中心有良好的联系，例如腹侧被盖区（VTA）; [9]基底外侧杏仁核和其他中心。[10参与调节酒精摄入量，奖励和食物摄入量的主要神经递质来自该地区的神经回路。[11]
最近，已经从下丘脑，hypocretin 1和2（Orexin A和B），分别具有32 aa和29 aa的肽中鉴定了一组异源肽hypocretins。12]最初，这些物质与睡眠觉醒周期的调节有关，正如在清醒的活跃期中下丘脑中发现的食欲素A增加所证明的。13]在我们的实验室中，我们发现当注入NAcc时，Orexin A会增加食物和液体的摄入量。[14]中枢给予的食欲素抗体在24 h禁食大鼠中剂量依赖性地抑制食物摄入，并且腹膜内给予食欲素抗体未能抑制食物消耗，表示食欲素抗体在中枢神经系统中起作用而在外周组织中不起作用。15此外，他们证实内源性食欲素对摄食行为有生理作用。 虽然最初Orexins被认为会影响摄食行为，但Orexin A在摄食行为和饮酒摄入以及酒精偏好方面的作用的证据都是粗略的。 在我们之前的研究中，我们已经证明Orexin A可以增加禁食大鼠的食物和液体摄入量。[14为了明确阐明食欲素A在摄取活动中的作用，我们通过将食欲素A拮抗剂SB-334867注入NAcc，在禁食过夜的雄性Wistar大鼠中进行了这组实验。16我们还测试了治疗大鼠的酒精偏好，以阐明食欲素A拮抗剂对酒精摄入的影响。 这里讨论了食物，水和酒精摄入以及酒精偏好的实验结果。
材料和方法
五十四只雄性Wistar白化病大鼠（n = 54）称重（250±10 g），3-4月龄用于研究。 他们分为三组，即。 水组，酒精组和两瓶自由选择组（n = 18个）。 他们分为三个子组，即。 第一组-对照（盐水注入）； 第1组–低剂量的SB-2（334867 ng）； 第3组–高剂量的SB-3（334867 ng， n =每个6）。 向所有群体提供食物和液体 ad lib，除了提到隔夜禁食。
将所有动物单独圈养在聚丙烯笼中，使用适当的稻壳垫层并在温度受控的环境中保持12-h光/暗循环。 为了控制和监督动物实验以及印度政府使用实验动物的指导原则，根据委员会的指导方针维持动物。 机构动物伦理委员会已批准该研究方案。
药物和器具
将盐水0.9％，SB-334867（来自：Tocris bioscience）溶于无菌水中的2％环糊精中。 不使用时，溶液在4°C下储存至3周。 哈佛Pico plus（美国）输液泵用于输送药物。 在塑料饮用瓶中提供自来水，并提供大鼠食物颗粒（Hindustan Unilever Ltd.，）。 采购乙醇（Absolute）（Hayman Ltd.，Eastways Park，Witham，Essex，CM83YE，UK）并稀释以制备10％醇（该浓度基于对醇浓度的偏好的初步研究选择） 。 氯胺酮（NEON Laboratories limited，Thane，MS）和甲苯噻嗪（Indian immunological Ltd.，Hyderabad）用于麻醉。
外科手术
通过注射氯胺酮盐酸盐（60 mg / kg），盐酸甲苯噻嗪（6 mg / kg）的混合物麻醉雄性Wistar白化病大鼠，并将其固定在立体定位装置（Inco，India）上。 在头皮上切开一个切口，用手术精神彻底消毒。 该区域用棉花和过氧化氢清理干净。 在相应区域的头骨上标记坐标点以达到NAcc，参考Paxinos和Watson脑图谱[17]（来自前囟：前后+ 2.2 mm，横向±1 mm和垂直7.4 mm）。 制作毛刺孔，并根据立体定位坐标植入不锈钢导管（22纱布）。 一旦插管就位，就可以借助螺钉和牙科丙烯酸固定。 引导套管配有管心针，并且允许大鼠在实验之前恢复至少7天。 输液套管（内部套管）由30量规的Septoject不锈钢牙科针头制成，该针头具有轮毂，便于操作。18输注套管将1 mm延伸超过相应的引导插管。 在实验开始之前，所有大鼠接受两次训练，其中他们在24 h禁食，然后接受食物，水和10％酒精。 在这次会议期间，老鼠学会了禁食。
实验步骤
在334867 h禁食后，分别在不同组的大鼠中输注生理盐水和SB-24（两剂）。 未麻醉（自由移动）的大鼠通过固定的引导插管。 通过与聚乙烯管和内部套管连接的10μlHamilton注射器进行输注。 该注射器安装在哈佛泵上。 然后移除放置在引导插管中的管心针。 将内部插管插入导管并固定。 然后开始泵将溶液一个接一个地递送到NAcc的右侧和左侧，1μl/ min（在输注内部套管后留下大约10以允许药物扩散）。 在334867 ng（低剂量）和3 ng（高剂量）下输注两剂SB-6。 在输注结束时，移除内部套管，并将管心针放回原位并记录时间。 输注后，在各组中提供立即预先测定量的食物，水和10％酒精。 测量并记录SB-334867对消耗的影响，分别在输注时间间隔1，2，4和24 h时仔细记录。 除去颗粒，水和醇，并计算消耗量（消耗量=预测量 - 剩余量，例如在1 h结束时）。
在研究完成后，通过致死剂量的麻醉处死大鼠并解剖脑并保存用于组织学处理。 将7微米切片切片并用甲酚紫染色以确认输注部位[图1].
统计分析
数据分析使用统计软件SPSS – 16（用于Windows的SPSS，版本16.0。Chicago，SPSS Inc. USA）进行； 进行了单向方差分析，以比较两组之间的消费行为。 相互比较是由 事后 Tukey检验（小时消耗量单独比较，例如1小时对照食物摄入量与1小时SB-334867处理食物摄入量对比）。 数据表示为平均值±平均值标准误 P <0.05，被认为是显着的。
成果
实验I
测量食物和水的消耗量（n = 18）在该组中，NAcc插管动物（n = 18），分为亚组，组1（0.9％盐水输注），组2（SB-334867-3 ng），组3（SB-334867-6 ng）。 将药物双侧注射到NAcc [数据显示于 表1 图 Figure1a，1a, ，BB].
食物的摄入量
与1对照相比，SB-334867处理后显示出显着下降（F [2，15] = 9.171 p 食物摄入量= 0.003组（即1组与3组， p <0.002）; 而在2 h时没有发现明显变化（F [2，15] = 0.190 p = 0.829）; 4 h（F [2，15] = 0.160 p = 0.854）; 24 h输注后时间间隔（F [2，15] = 4.873 p = 0.023）（组1与组3， p <0.028; 第2组与第3组， p <0.05）。
水的摄入量
SB-334867处理对1 h的水摄入没有影响（F [2，15] = 0.957 p = 0.406）; 2 h（水2 h F [2，15] = 0.773 p = 0.479）; 4 h（F [2，15] = 0.288 p = 0.753）输注后时间间隔; 但总24 h水摄入量减少（F [2，15] = 10.688 p = 0.001）与对照组相比（组1与组3， p <0.002; 第2组与第3组， p <0.006）。
实验二
测量酒精（10％）和食物消耗量[n = 18，数据在 表2 和 图2].
将NAcc插管的大鼠分成三个亚组，组1（0.9％盐水 n = 6），2组（SB-334867-3 ng， n = 6）和Group 3（SB-334867-6 ng， n 6）。
10％酒精摄入量结果
在1 h和2 h SB-334867处理显着减弱了1的饮酒量st h（F [2，15] = 4.457 p = 0.030），（1组与3组， p <0.004），2nd h（F [2，15] = 11.122 p = 0.001）（组1与组3， p <0.001; 第2组与第3组， p <0.038）。 但是，4小时的酒精消耗量没有明显变化（F [2，15] = 0.709 p = 0.508）和24 h（F [2，15] = 2.631 p = 0.105）间隔。
食物的摄入量
在1 h和2 h SB-334867处理显着（F [2，15] = 4.230 p = 0.035）减少食物摄入量（1组与3组， p <0.03）； （F [2，15] = 16.558 p = 0.000）（组1与组2， p <0.000; 第2组与第3组， p <0.021），分别与对照进行比较。 4 h时未发现明显变化（F [2，15] = 0.070 p = 0.933）。 然而，总食物摄入量减少（0-24 h）（F [2，15] = 4.457 p = 0.030）（组1与组3， p <0.025）。
实验三
食物，10％酒精和水[两瓶优惠， 表2测量消费量。 将NAcc插管的大鼠分组为1组（0.9％生理盐水， n = 6），2组（SB-334867-3 ng， n = 6）和Group 3（SB-334867-6 ng， n 注入了6）。
食物的摄入量
在334867处进行SB-1处理h（F [2，15] = 5.111， p = 0.02）减少食物摄入量（1组与3组， p <0.011），但在2 h，4 h时未观察到显着差异（F [2，15] = 0.093 p = 0.911），（F [2，15] = 0.797 p = 0.469），在24时，两剂拮抗剂均显示食物摄入量减少（F [2，15] = 12.698） p = 0.001）（组1与组2和组3， p <0.039， p 与对照组相比，分别<0.000）。
水的摄入量
SB-334867处理在任何组中的水摄入量没有变化，时间间隔为1 h（F [2，15] = 0.584 p = 0.578），2 h（F [2，15] = 0.662 p = 0.530），4 h（F [2，15] = 1.655 P = 0.224）和24 h（F [2，15] = 0.513 p 0.609）。
酒精摄入量（10％）
SB-334867治疗在1 h时减少酒精摄入量（F [2，15] = 9.098 p = 0.003），（组1与组2和组3， p <0.004， p 分别<0.008）。 任何组在2 h时均无显着变化（F [2，15] = 0.854 p = 0.446），4 h（F [2，15] = 0.931 p = 0.416）和24 h（F [2，15] = 0.349 p = 0.711）。
总液体摄入量
在1，任何组别都没有重大变化st h（F [2，15] = 2.064 p = 0.161），2nd h（F [2，15] = 1.023 p = 0.383），4th h（F [2，15] = 1.205 p = 0.327）和24 h（F [2，15] = 0.484， p 0.626）。
讨论
各种神经化学物质对食物和水摄入的调节一直受到严格审查。 在几种已被证明会影响摄食行为的候选分子中，包括酒精摄入，也会引起食欲素。[19最初认为食欲素是食物摄入和调节摄食活动的兴奋剂; 后来发现它们会影响睡眠和清醒状态。[20] Dube 等。 已经证明，Orexins的中枢给药在摄取行为方面具有调节作用，主要集中在下丘脑。21]在我们目前的实验中，我们测试了Orexin A拮抗剂（SB-334867）对NAcc的作用。 NAcc在成瘾和与喂养有关的活动中被赋予了关键作用。[22Orexins也与NAcc的这种行为有关。[4]然而，NAcc显示了两个组织学上截然不同的区域，[23]可能有功能差异[24]并且它们的功能似乎显着重叠。[25]在我们之前的实验中，我们发现使用显微注射技术将Orexin A输注到NAcc中可以在输注后立即增加食物和水的摄入量，但是当通过两次无瓶选择测试时，没有特别偏好酒精。14因此，我们尝试将Orexin A拮抗剂注射到NAcc中，并分析了禁食过夜的大鼠的食物摄入量，水摄入量和酒精摄入量。
1中的消耗量st 在orexin拮抗剂处理的动物中h显着下降。 我们的研究进一步证明了Orexin A在摄食行为中的作用。 食欲素受体型1（OX1R）拮抗剂SB-334867输注减弱了进食和饮水。 Orexin A始终显示对喂养和饮酒的刺激作用。 OX1R拮抗剂对Orexin A的亲和力比B的10倍高。26,27]
Orexinergic神经元投射到AccSh，并且两种食欲素受体（OX1R和OX2R）都存在于NAcc中，OX2R在更大程度上表达。28,29] Orexin A在孤立的伏隔核神经元中增加GABA能电流并降低N-甲基-D-天冬氨酸电流[30此外，orexins激发多巴胺能VTA神经元。[31由于多巴胺能VTA神经元神经支配并激发AccSh GABA能（抑制）神经元，因此食欲素信号传导可通过增加VTA中的神经元活动进一步增加Acc中的局部抑制，从而进一步增强完成行为。 但这与Baldo和Kelley相矛盾，[32]发现内部AccSh Orexin A对喂养或运动活动没有影响。
我们测试了Orexin A作为饮酒调节剂的可能性[表2]和食物一起。 从我们之前的研究中，我们确定大鼠更喜欢在10％溶液中饮用酒精，这已在我们之前的研究中得到证实。[33因此，在本研究中，在将药物输注到NAcc后，我们在这种稀释液中提供了酒精。 我们发现在输注食欲素A拮抗剂后的几小时内酒精摄入量显着减少。 低剂量（3 ng）输注组的食物和水摄入量下降较低，而高剂量（6 ng）组则较高。 为了测试酒精偏好，我们为大鼠提供了两种瓶子选择条件，其中同时提供一瓶水和另一瓶含有10％醇。 注入Orexin A拮抗剂后，食物摄入量和酒精摄入量显着下降。 在低剂量和高剂量下都发现了这种类型的下降，但仅限于1st 输液后h。 然而，与水或酒精相比，食物摄入量的下降更为明显。 该证据支持食欲素A参与食物摄入的调节，但不支持食欲素A参与偏好酒精的可能性。
财务支持和赞助
生物技术系，DBT资助项目的一部分，参考：参考：BT / PR14012 / MED / 30 / 315 / 2010日期为印度30.09.2010政府。
利益冲突
没有利益上的冲突。
参考资料
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